JP2002530675A - 重症の急性膵臓炎の診断試験キットおよび方法 - Google Patents
重症の急性膵臓炎の診断試験キットおよび方法Info
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
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- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- G—PHYSICS
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Abstract
(57)【要約】
重症の急性膵臓炎のイン・ビトロ診断法、配列番号１（アミノ酸１〜８１）を有するカルボキシペプチダーゼＢ活性化ペプチド（ＣＡＰＡＰ）またはそのフラグメント、および試験キット、好ましくはディップスティックが開示されている。その方法は、Ａ）体液の試料を、ａ）配列番号１のＣＡＰＡＰに結合する第一の抗体、および、ｂ）ａ）における部位を除く配列番号１のＣＡＰＡＰに結合する第二の抗体、または、ｃ）配列番号１の固相に結合したＣＡＰＡＰまたはその断片であって、ａ）およびｂ）の一方の抗体またはｃ）のペプチドが非放射性標識で標識されており、ａ）およびｂ）の抗体の少なくとも一方がＣＡＰＡＰに単一特異性であるものと接触させ、Ｂ）形成された抗体−抗原−抗体複合体の濃度または競合する抗原−抗体反応における過剰成分の濃度を測定し、C）測定した濃度を用いて、試料中のＣＡＰＡＰの量を推定し、患者における重症の急性膵臓炎を診断する段階を含む。
Description
【０００１】
本発明は、それぞれカルボキシペプチダーゼＢ活性化ペプチドＣＡＰＡＰ上の
異なる部位に結合する少なくとも二種類の抗体、またはＣＡＰＡＰおよびＣＡＰ
ＡＰの固相に結合したエピトープ含有ペプチドに特異的に結合する一種類の抗体
を用いて重症の急性膵臓炎をイン・ビトロで診断する試験キットおよび方法に関
する。更に、本発明は、ＣＡＰＡＰ上の抗原性部位に結合するモノクローナル抗
体に関する。
異なる部位に結合する少なくとも二種類の抗体、またはＣＡＰＡＰおよびＣＡＰ
ＡＰの固相に結合したエピトープ含有ペプチドに特異的に結合する一種類の抗体
を用いて重症の急性膵臓炎をイン・ビトロで診断する試験キットおよび方法に関
する。更に、本発明は、ＣＡＰＡＰ上の抗原性部位に結合するモノクローナル抗
体に関する。
【０００２】
背景 急性膵臓炎の発病の重症度を評価するための臨床的合理性は、更に特異的治療
が現れてきた最近まで明らかになっていない。アンチサイトカイン、抗生物質お
よび内視鏡括約筋切開は、苦痛開始の２４〜４８時間以内に治療を始めたときに
のみ有望な結果を示した。更に、急性膵臓炎の５例のうち４例は軽度のものであ
り、どのような特殊な治療も効果がない。
が現れてきた最近まで明らかになっていない。アンチサイトカイン、抗生物質お
よび内視鏡括約筋切開は、苦痛開始の２４〜４８時間以内に治療を始めたときに
のみ有望な結果を示した。更に、急性膵臓炎の５例のうち４例は軽度のものであ
り、どのような特殊な治療も効果がない。
【０００３】 ここ数年、多数の新たな実験変数が、急性膵臓炎の重症度を予想するための早
期の画一試験として提案されてきた。
期の画一試験として提案されてきた。
【０００４】 トリプシノゲン活性化ペプチドＴＡＰ、カルボキシペプチダーゼＢ活性化ペプ
チドＣＡＰＡＰおよびトリプシン−α１−アンチトリプシン複合体のようなトリ
プシノゲンの活性化を反映する物質を測定することによって、急性膵臓炎の徴候
の２４時間以内に既に重症度を予想することができると思われる。インターロイ
キン−６およびＰＮＭ−エラスターゼのような炎症伝達物質も、有用である。
チドＣＡＰＡＰおよびトリプシン−α１−アンチトリプシン複合体のようなトリ
プシノゲンの活性化を反映する物質を測定することによって、急性膵臓炎の徴候
の２４時間以内に既に重症度を予想することができると思われる。インターロイ
キン−６およびＰＮＭ−エラスターゼのような炎症伝達物質も、有用である。
【０００５】 カルボキシペプチダーゼＢ活性化ペプチド（ＣＡＰＡＰ）は、任意の膵臓プロ
酵素から放出される最大の活性化ペプチド（分子量９４００）である。活性化は
、通常は食物の消化中に腸で起こる。血清と尿は、通常免疫反応性ＣＡＰＡＰを
全くまたは極く微量しか含まない。急性膵臓炎の初期相中に、この活性化が膵臓
内および周囲で早めに起こる。次いで、ＣＡＰＡＰが循環に漏出し、これから糸
球体濾過によって除去されて、尿中に排泄される。これまでは、１つの小さな臨
床的研究しか公表されていない[Appelros S, Thim L, Borgstoem A, 血清および
尿中のカルボキシペプチダーゼＢの活性化ペプチド(The activation peptide of
carboxypeptidase B in serum and urine), Gut 1998; 42:97-102]。
酵素から放出される最大の活性化ペプチド（分子量９４００）である。活性化は
、通常は食物の消化中に腸で起こる。血清と尿は、通常免疫反応性ＣＡＰＡＰを
全くまたは極く微量しか含まない。急性膵臓炎の初期相中に、この活性化が膵臓
内および周囲で早めに起こる。次いで、ＣＡＰＡＰが循環に漏出し、これから糸
球体濾過によって除去されて、尿中に排泄される。これまでは、１つの小さな臨
床的研究しか公表されていない[Appelros S, Thim L, Borgstoem A, 血清および
尿中のカルボキシペプチダーゼＢの活性化ペプチド(The activation peptide of
carboxypeptidase B in serum and urine), Gut 1998; 42:97-102]。
【０００６】 ＣＡＰＡＰは血清および尿中で極めて安定であり、このタンパク質はEuroDiag
nostica AB, Malmoe, Swedenから発売されているCAPAP RIAキットによって測定
することができる。しかしながら、放射性標識を含んでなる試薬の取扱いには、
専門の実験室と訓練された人員が必要である。試験を行う試料が実験室に到着す
れば、試験は約２時間で行うことができる。
nostica AB, Malmoe, Swedenから発売されているCAPAP RIAキットによって測定
することができる。しかしながら、放射性標識を含んでなる試薬の取扱いには、
専門の実験室と訓練された人員が必要である。試験を行う試料が実験室に到着す
れば、試験は約２時間で行うことができる。
【０００７】 米国特許第５，３５６，７８１号明細書には、膵臓疾患の進行を診断しまたは
観察するための膵臓チモーゲンの活性化を検出するための免疫学的方法が開示さ
れている。この方法は、膵臓チモーゲンの活性化ペプチドと同じカルボキシ末端
ペンタペプチド配列を有するペプチドが試料中に存在しないかまたは存在するか
を検出することを含んでなる。これらの中では、プロカルボキシペプチダーゼＡ
およびＢが挙げられる。しかしながら、プロカルボキシペプチダーゼに結合する
抗体は開示されていない。
観察するための膵臓チモーゲンの活性化を検出するための免疫学的方法が開示さ
れている。この方法は、膵臓チモーゲンの活性化ペプチドと同じカルボキシ末端
ペンタペプチド配列を有するペプチドが試料中に存在しないかまたは存在するか
を検出することを含んでなる。これらの中では、プロカルボキシペプチダーゼＡ
およびＢが挙げられる。しかしながら、プロカルボキシペプチダーゼに結合する
抗体は開示されていない。
【０００８】
急性膵臓炎における重症度の早期評価は、軽度であり、自己制限的経過を有し
、かつ一般的支持および非経口液以外の治療を必要としない発病の大多数を予測
することができるので、十分な理由がある。従って、緊急治療室に入院した時点
で既に急性膵臓炎の重症発作に襲われている患者を特定するための迅速な方法が
必要である。標準的な臨床的実施における重症度を測定する完全な方法はまだな
く、急性膵臓炎の重症度を予測する目的で用いることができる簡単で信頼性のあ
る試験が望まれる。
、かつ一般的支持および非経口液以外の治療を必要としない発病の大多数を予測
することができるので、十分な理由がある。従って、緊急治療室に入院した時点
で既に急性膵臓炎の重症発作に襲われている患者を特定するための迅速な方法が
必要である。標準的な臨床的実施における重症度を測定する完全な方法はまだな
く、急性膵臓炎の重症度を予測する目的で用いることができる簡単で信頼性のあ
る試験が望まれる。
【０００９】
発明の具体的説明 本発明は、重症の急性膵臓炎の診断法、試験キット、およびＣＡＰＡＰに結合
するモノクローナル抗体を提供する。
するモノクローナル抗体を提供する。
【００１０】 本発明に用いられるＣＡＰＡＰは８１アミノ酸のヒトカルボキシペプチダーゼ
Ｂ活性化ペプチドであり、活性カルボキシペプチダーゼＢおよびトリプシンの二
重作用によってＣ末端を更に分解した後にＮ末端の９５アミノ酸活性化ペプチド
から生じる。この８１アミノ酸ＣＡＰＡＰのアミノ酸配列は本説明の配列表の部
分に開示されており、配列番号１と呼ばれる。
Ｂ活性化ペプチドであり、活性カルボキシペプチダーゼＢおよびトリプシンの二
重作用によってＣ末端を更に分解した後にＮ末端の９５アミノ酸活性化ペプチド
から生じる。この８１アミノ酸ＣＡＰＡＰのアミノ酸配列は本説明の配列表の部
分に開示されており、配列番号１と呼ばれる。
【００１１】 更に正確には、本発明は、患者における重症の急性膵臓炎のイン・ビトロでの
診断法であって、 Ａ）患者由来の体液の試料を ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するカルボキシペプチダーゼＢ活性化ペプ
チド（ＣＡＰＡＰ）上の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第一の抗体、お
よび ｂ）ａ）における部位を除く配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＡＰＡＰ上
の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第二の抗体、または ｃ）配列番号１のアミノ酸配列を有する固相に結合したＣＡＰＡＰまたはエピ
トープを含むそのペプチド断片 であって、ａ）およびｂ）の少なくとも一方の抗体またはｃ）のペプチドが非放
射性標識で標識されており、 第一および第二の抗体の少なくとも一方がＣＡＰＡＰに単一特異性である ものの十分な量と接触させ、 Ｂ）形成された抗体ａ）−ＣＡＰＡＰ−抗体ｂ）複合体の濃度、または抗体ａ）
−ＣＡＰＡＰおよび抗体ａ）−ペプチドｃ）の競合反応における過剰成分の濃度
を、使用した標識によって測定し、 Ｃ）測定した濃度を用いて、試料中のＣＡＰＡＰの量を推計し、患者における重
症の急性膵臓炎を診断する 段階を含む、方法を提供する。
診断法であって、 Ａ）患者由来の体液の試料を ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するカルボキシペプチダーゼＢ活性化ペプ
チド（ＣＡＰＡＰ）上の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第一の抗体、お
よび ｂ）ａ）における部位を除く配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＡＰＡＰ上
の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第二の抗体、または ｃ）配列番号１のアミノ酸配列を有する固相に結合したＣＡＰＡＰまたはエピ
トープを含むそのペプチド断片 であって、ａ）およびｂ）の少なくとも一方の抗体またはｃ）のペプチドが非放
射性標識で標識されており、 第一および第二の抗体の少なくとも一方がＣＡＰＡＰに単一特異性である ものの十分な量と接触させ、 Ｂ）形成された抗体ａ）−ＣＡＰＡＰ−抗体ｂ）複合体の濃度、または抗体ａ）
−ＣＡＰＡＰおよび抗体ａ）−ペプチドｃ）の競合反応における過剰成分の濃度
を、使用した標識によって測定し、 Ｃ）測定した濃度を用いて、試料中のＣＡＰＡＰの量を推計し、患者における重
症の急性膵臓炎を診断する 段階を含む、方法を提供する。
【００１２】 重症の急性膵臓炎のカットオフ濃度と考えられる体液試料中のＣＡＰＡＰの量
はそれぞれの特定の分析設定について経験的に決定されるが、通常は尿試料につ
いては６０〜１００nmol／Ｌの範囲であり、例えば８０nmol／Ｌであり、血液ま
たは血清試料については６〜１０nmol／Ｌの範囲であり、例えば８nmol／Ｌであ
る。
はそれぞれの特定の分析設定について経験的に決定されるが、通常は尿試料につ
いては６０〜１００nmol／Ｌの範囲であり、例えば８０nmol／Ｌであり、血液ま
たは血清試料については６〜１０nmol／Ｌの範囲であり、例えば８nmol／Ｌであ
る。
【００１３】 「少なくとも一種類の第一の抗体」という用語は、第二の抗体とタンパク質上
の同じ部位には結合しない数種類の異なる抗体があってもよいことを画定するの
に用いる。「少なくとも一種類の第二の抗体」という用語は、第一の抗体とタン
パク質上の同じ部位には結合しない数種類の異なる抗体があってもよいことを画
定するのに用いる。
の同じ部位には結合しない数種類の異なる抗体があってもよいことを画定するの
に用いる。「少なくとも一種類の第二の抗体」という用語は、第一の抗体とタン
パク質上の同じ部位には結合しない数種類の異なる抗体があってもよいことを画
定するのに用いる。
【００１４】 「ＣＡＰＡＰに単一特性である抗体」という用語は、抗体がＣＡＰＡＰ上の唯
一の特異的部位に結合することを画定するのに用い、単一特異性抗体の例はモノ
クローナル抗体、単一特異性ポリクローナル抗体、およびタンパク質に対する特
異結合を有する組換え修飾抗体である。
一の特異的部位に結合することを画定するのに用い、単一特異性抗体の例はモノ
クローナル抗体、単一特異性ポリクローナル抗体、およびタンパク質に対する特
異結合を有する組換え修飾抗体である。
【００１５】 本発明の好ましい態様では、第一および第二の抗体はモノクローナル抗体であ
る。
る。
【００１６】 配列番号１のアミノ酸配列を有する固相に結合したＣＡＰＡＰまたはエピトー
プを含むそのペプチド断片に用いる固相とは、セルロース粒子、ガラス表面、プ
ラスチック表面、磁性ビーズなどのようなイムノアッセイの技術分野で用いられ
る任意の固相でよい。
プを含むそのペプチド断片に用いる固相とは、セルロース粒子、ガラス表面、プ
ラスチック表面、磁性ビーズなどのようなイムノアッセイの技術分野で用いられ
る任意の固相でよい。
【００１７】 本発明の一つの態様では、測定Ｂ）が、二重サンドイッチ酵素結合イムノソル
ベント検定法（ＥＬＩＳＡ）または競合イムノソルベント検定法によって行われ
る。
ベント検定法（ＥＬＩＳＡ）または競合イムノソルベント検定法によって行われ
る。
【００１８】 もう一つの態様では、ｂ）の標識は、金、炭素およびラテックス粒子、および
酵素からなる群から選択される。
酵素からなる群から選択される。
【００１９】 更にもう一つの態様では、Ａ）における体液の試料は尿試料であり、Ｃ）にお
けるＣＡＰＡＰの推計量が尿１L当たり＞６０〜１００nmolであるとき、患者が
重症の急性膵臓炎陽性であると診断される。
けるＣＡＰＡＰの推計量が尿１L当たり＞６０〜１００nmolであるとき、患者が
重症の急性膵臓炎陽性であると診断される。
【００２０】 更にもう一つの態様では、Ａ）における体液の試料が血液試料であり、Ｃ）に
おけるＣＡＰＡＰの推計量が血液１L当たり＞６〜１０nmolであるとき、患者が
重症の急性膵臓炎陽性であると診断される。
おけるＣＡＰＡＰの推計量が血液１L当たり＞６〜１０nmolであるとき、患者が
重症の急性膵臓炎陽性であると診断される。
【００２１】 本発明は、更に配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＡＰＡＰまたはエピトー
プを含むそのペプチド断片上の抗原部位に結合するモノクローナル抗体を提供す
る。
プを含むそのペプチド断片上の抗原部位に結合するモノクローナル抗体を提供す
る。
【００２２】 本発明者の知る限り、ＣＡＰＡＰに対するモノクローナル抗体はこれまで報告
されていない。しかしながら、今や配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＡＰＡ
Ｐに対する数種類の異なる抗体がＣＡＰＡＰ上の異なる部位に結合する少なくと
も二種類の抗体を選択する目的で生産される。次に、これらは、本発明の方法お
よび試験キットに用いることができる。
されていない。しかしながら、今や配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＡＰＡ
Ｐに対する数種類の異なる抗体がＣＡＰＡＰ上の異なる部位に結合する少なくと
も二種類の抗体を選択する目的で生産される。次に、これらは、本発明の方法お
よび試験キットに用いることができる。
【００２３】 本発明は、 ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するカルボキシペプチダーゼＢ活性化ペプ
チド（ＣＡＰＡＰ）上の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第一の抗体、お
よび ｂ）ａ）における部位を除く配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＡＰＡＰ上
の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第二の抗体、または ｃ）配列番号１のアミノ酸配列を有する固相に結合したＣＡＰＡＰまたはエピ
トープを含むそのペプチド断片 であって、ａ）およびｂ）の少なくとも一方の抗体またはｃ）のペプチドが非放
射性標識で標識されており、 第一および第二の抗体の少なくとも一方がＣＡＰＡＰに単一特異性である ものを含んでなる、急性膵臓炎の試験キットも提供する。
チド（ＣＡＰＡＰ）上の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第一の抗体、お
よび ｂ）ａ）における部位を除く配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＡＰＡＰ上
の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第二の抗体、または ｃ）配列番号１のアミノ酸配列を有する固相に結合したＣＡＰＡＰまたはエピ
トープを含むそのペプチド断片 であって、ａ）およびｂ）の少なくとも一方の抗体またはｃ）のペプチドが非放
射性標識で標識されており、 第一および第二の抗体の少なくとも一方がＣＡＰＡＰに単一特異性である ものを含んでなる、急性膵臓炎の試験キットも提供する。
【００２４】 一つの態様では、標識は、金、炭素およびラテックス粒子、および酵素からな
る群から選択される。
る群から選択される。
【００２５】 好ましい態様では、試験キットはディップスティックである。
【００２６】モノクローナル抗体の調製 免疫化 Balb/cマウスに、配列番号１のアミノ酸配列を有し、ＢＳＡに共有結合したＣ
ＡＰＡＰ精製タンパク質を接種した。総ての注射は、ＲＩＢＩアジュバント（Ｍ
ＰＬ＋ＴＤＭ）と混合した抗原で行った。それぞれのマウスに１０μgの複合体
を注射し、１および２週間後にマウス当たり１μgを注射した後、７週間の静止
期を置いた。マウスに、マウス当たり１μgのブースター用量を投与し、１０日
後に血液試料を集め、ＣＡＰＡＰに対する抗体についてＥＬＩＳＡで分析した。
純粋なＣＡＰＡＰを、MaxisorpＥＬＩＳＡプレートでウェル当たり６０μlを１
μg／ml炭酸緩衝液ｐＨ９．０の濃度で一晩室温でコーティングした。
ＡＰＡＰ精製タンパク質を接種した。総ての注射は、ＲＩＢＩアジュバント（Ｍ
ＰＬ＋ＴＤＭ）と混合した抗原で行った。それぞれのマウスに１０μgの複合体
を注射し、１および２週間後にマウス当たり１μgを注射した後、７週間の静止
期を置いた。マウスに、マウス当たり１μgのブースター用量を投与し、１０日
後に血液試料を集め、ＣＡＰＡＰに対する抗体についてＥＬＩＳＡで分析した。
純粋なＣＡＰＡＰを、MaxisorpＥＬＩＳＡプレートでウェル当たり６０μlを１
μg／ml炭酸緩衝液ｐＨ９．０の濃度で一晩室温でコーティングした。
【００２７】 融合 血清中の抗体濃度が最高のマウスに、配列番号１のアミノ酸配列を有しＲＩＢ
Ｉアジュバント中のＢＳＡに結合したＣＡＰＡＰの１μgを腹腔内注射した。３
日後にマウスを頸部脱臼により屠殺し、脾臓を取り出した。脾臓細胞を単一細胞
懸濁液として回収し、血清不含培地で３回洗浄し、計量した。脾臓細胞を血清不
含培地で同様に洗浄したSP 2/0マウス骨髄腫細胞の半数と混合し、２５０×ｇで
遠心分離することによってペレット化し、総ての液体を慎重に除去した後、３７
℃水浴に入れた。融合操作はこの温度で、３７℃に予め加温した試薬を加えて行
う。細胞ペレットをピペットの先端で徐々に崩し、１分間緩やかに混合しながら
５０％ポリエチレングリコール１５００溶液(PEG 1500, Boehringer Mannheim)
１mlを徐々に加える。反応混合物を１分間緩やかに混合する。連続的に緩やかに
混合しながら、血清不含培地１mlを１分間で加え、２mlを第二の１分間で、４ml
を第三の１分間で、８mlを第四の１分間で加える。細胞を２００×ｇで７分間遠
心分離し、上清を除き、細胞ペレットをできるだけ掻き混ぜずに１７％ＦＣＳお
よびハイブリドーマ選択用のＨＡＴを補足した予備加熱した培地１００mlに移す
。細胞を、１０個の９６穴プレートであって前日にウェル当たり３０００個の腹
腔内洗浄細胞をフィーダー細胞として播種したものに分配した。細胞が底部面積
の約５０％を被覆したとき、増殖ハイブリドーマを含むウェルからの上清を上記
と同様にしてＥＬＩＳＡで試験した。
Ｉアジュバント中のＢＳＡに結合したＣＡＰＡＰの１μgを腹腔内注射した。３
日後にマウスを頸部脱臼により屠殺し、脾臓を取り出した。脾臓細胞を単一細胞
懸濁液として回収し、血清不含培地で３回洗浄し、計量した。脾臓細胞を血清不
含培地で同様に洗浄したSP 2/0マウス骨髄腫細胞の半数と混合し、２５０×ｇで
遠心分離することによってペレット化し、総ての液体を慎重に除去した後、３７
℃水浴に入れた。融合操作はこの温度で、３７℃に予め加温した試薬を加えて行
う。細胞ペレットをピペットの先端で徐々に崩し、１分間緩やかに混合しながら
５０％ポリエチレングリコール１５００溶液(PEG 1500, Boehringer Mannheim)
１mlを徐々に加える。反応混合物を１分間緩やかに混合する。連続的に緩やかに
混合しながら、血清不含培地１mlを１分間で加え、２mlを第二の１分間で、４ml
を第三の１分間で、８mlを第四の１分間で加える。細胞を２００×ｇで７分間遠
心分離し、上清を除き、細胞ペレットをできるだけ掻き混ぜずに１７％ＦＣＳお
よびハイブリドーマ選択用のＨＡＴを補足した予備加熱した培地１００mlに移す
。細胞を、１０個の９６穴プレートであって前日にウェル当たり３０００個の腹
腔内洗浄細胞をフィーダー細胞として播種したものに分配した。細胞が底部面積
の約５０％を被覆したとき、増殖ハイブリドーマを含むウェルからの上清を上記
と同様にしてＥＬＩＳＡで試験した。
【００２８】モノクローナル抗体の選択 陽性および陰性スクリーニング操作を２０個の可能なハイブリドーマ細胞ライ
ンで行い、ＣＡＰＡＰタンパク質上の異なる部位に結合するモノクローナル抗体
を選択する。
ンで行い、ＣＡＰＡＰタンパク質上の異なる部位に結合するモノクローナル抗体
を選択する。
【００２９】一段階迅速試験 配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＡＰＡＰ上の異なる部位に結合する産生
されたモノクローナル抗体の少なくとも２種類を、ディップスティックに用いる
。これに関して、市販の試験構成、例えばJohnson & Johnson製のClear View、
またはABBOTT製のTest Pacを、製造業者の推奨に準じて用いることができる。こ
れらの試験系はいずれも、数秒から数分以内に目に見える読みが得られる。
されたモノクローナル抗体の少なくとも２種類を、ディップスティックに用いる
。これに関して、市販の試験構成、例えばJohnson & Johnson製のClear View、
またはABBOTT製のTest Pacを、製造業者の推奨に準じて用いることができる。こ
れらの試験系はいずれも、数秒から数分以内に目に見える読みが得られる。
【００３０】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｂ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA13 4H045 AA11 AA30 BA21 CA40 DA76 DA86 EA50 FA72
Claims (9)
- 【請求項１】 患者の重症急性膵臓炎のイン・ビトロでの診断法であって、 Ａ）患者由来の体液の試料を ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するカルボキシペプチダーゼＢ活性化ペプ
チド（ＣＡＰＡＰ）上の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第一の抗体、お
よび ｂ）ａ）における部位を除く配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＡＰＡＰ上
の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第二の抗体、または ｃ）配列番号１のアミノ酸配列を有する固相に結合したＣＡＰＡＰまたはエピ
トープを含むそのペプチド断片 であって、ａ）およびｂ）の少なくとも一方の抗体またはｃ）のペプチドが非放
射性標識で標識されており、 第一および第二の抗体の少なくとも一方がＣＡＰＡＰに単一特異性である ものの十分な量と接触させ、 Ｂ）形成された抗体ａ）−ＣＡＰＡＰ−抗体ｂ）複合体の濃度、または抗体ａ）
−ＣＡＰＡＰおよび抗体ａ）−ペプチドｃ）の競争反応における過剰成分の濃度
を、使用した標識によって測定し、 Ｃ）測定した濃度を用いて、試料中のＣＡＰＡＰの量を推定し、患者における重
症の急性膵臓炎を診断する 段階を含む、方法。 - 【請求項２】 測定Ｂ）を二重サンドイッチ酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）
または競合イムノソルベント検定法によって行う、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 ｂ）の標識が、金、炭素およびラテックス粒子、および酵素からなる群から選
択される、請求項１または２に記載の方法。 - 【請求項４】 Ａ）における体液の試料が血液試料であり、Ｃ）におけるＣＡＰＡＰの推定量
が尿１L当たり＞６〜１０nmolであるとき、患者が重症の急性膵臓炎陽性である
と診断される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項５】 Ａ）における体液の試料が尿試料であり、Ｃ）におけるＣＡＰＡＰの推定量が
血液１L当たり＞６０〜１００nmolであるとき、患者が重症の急性膵臓炎陽性で
あると診断される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項６】 配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＡＰＡＰまたはエピトープを含むそのペ
プチド断片上の抗原部位に結合するモノクローナル抗体。 - 【請求項７】 ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するカルボキシペプチダーゼＢ活性化ペプ
チド（ＣＡＰＡＰ）上の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第一の抗体、お
よび ｂ）ａ）における部位を除く配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＡＰＡＰ上
の抗原部位に結合する少なくとも一種類の第二の抗体、または ｃ）配列番号１のアミノ酸配列を有する固相に結合したＣＡＰＡＰまたはエピ
トープを含むそのペプチド断片 であって、ａ）およびｂ）の少なくとも一方の抗体またはｃ）のペプチドが非放
射性標識で標識されており、 第一および第二の抗体の少なくとも一方がＣＡＰＡＰに単一特異性である ものを含んでなる、重症の急性膵臓炎の試験キット。 - 【請求項８】 標識が、金、炭素およびラテックス粒子、および酵素からなる群から選択され
る、請求項７に記載の試験キット。 - 【請求項９】 キットがディップスティックである、請求項７または８に記載の試験キット。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9804069A SE9804069D0 (sv) | 1998-11-26 | 1998-11-26 | Test kit and method of diagnosing acute pancreatitis |
| SE9804069-4 | 1998-11-26 | ||
| PCT/SE1999/002094 WO2000031533A1 (en) | 1998-11-26 | 1999-11-16 | Test kit and method of diagnosing severe acute pancreatitis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002530675A true JP2002530675A (ja) | 2002-09-17 |
Family
ID=20413434
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000584296A Pending JP2002530675A (ja) | 1998-11-26 | 1999-11-16 | 重症の急性膵臓炎の診断試験キットおよび方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1133693A1 (ja) |
| JP (1) | JP2002530675A (ja) |
| AU (1) | AU2008500A (ja) |
| CA (1) | CA2351885A1 (ja) |
| SE (1) | SE9804069D0 (ja) |
| WO (1) | WO2000031533A1 (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5356781A (en) * | 1986-07-28 | 1994-10-18 | Bioscience International, Inc. | Zymogen activation peptides (ZAP) in the diagnosis of disease |
-
1998
- 1998-11-26 SE SE9804069A patent/SE9804069D0/xx unknown
-
1999
- 1999-11-16 CA CA002351885A patent/CA2351885A1/en not_active Abandoned
- 1999-11-16 JP JP2000584296A patent/JP2002530675A/ja active Pending
- 1999-11-16 EP EP99963710A patent/EP1133693A1/en not_active Withdrawn
- 1999-11-16 AU AU20085/00A patent/AU2008500A/en not_active Abandoned
- 1999-11-16 WO PCT/SE1999/002094 patent/WO2000031533A1/en not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE9804069D0 (sv) | 1998-11-26 |
| CA2351885A1 (en) | 2000-06-02 |
| AU2008500A (en) | 2000-06-13 |
| WO2000031533A1 (en) | 2000-06-02 |
| EP1133693A1 (en) | 2001-09-19 |
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