JP2002529051A - ヘルペスウイルス侵入メディエーター関連タンパク質ファミリーの新規分子およびその使用 - Google Patents

ヘルペスウイルス侵入メディエーター関連タンパク質ファミリーの新規分子およびその使用

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JP2002529051A JP2000568973A JP2000568973A JP2002529051A JP 2002529051 A JP2002529051 A JP 2002529051A JP 2000568973 A JP2000568973 A JP 2000568973A JP 2000568973 A JP2000568973 A JP 2000568973A JP 2002529051 A JP2002529051 A JP 2002529051A
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    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

(57)【要約】 新規なＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのポリペプチド、タンパク質、および核酸分子が開示される、単離された全長ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質に加えて、本発明はさらに、単離されたＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの融合タンパク質、抗原性ペプチドおよび抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体を提供する。本発明はまた、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸分子、本発明の核酸分子を含む組換え発現ベクター、この発現ベクターが導入されている宿主細胞ならびにＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子が導入または破壊された非ヒトトランスジェニック動物を提供する。本発明の組成物を利用する診断法、スクリーニング法および診断法もまた、提供される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （関連出願） 本願は、１９９８年９月３日に出願した米国特許出願番号第０９／１４６，９
５０号の一部継続出願であり、この米国出願の内容は、この参照の言及によって
、本明細書により本明細書中に援用される。
【０００２】 （発明の背景） 腫瘍壊死因子レセプター（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーは、細胞
増殖、プログラム細胞死および免疫応答を含む、種々の範囲の細胞プロセスを調
節する。特徴的なことには、これらのレセプターは、その細胞外リガンド結合ド
メイン中にシステインリッチなサブドメインを有する、膜貫通（１型）糖タンパ
ク質である（Ｇｒｕｓｓ（１９９６）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｒｅｓ．
２６：１４３〜１５９）。
【０００３】 ＴＮＦＲスーパーファミリーの最近同定されたメンバーは、ヘルペスウイルス
侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）である（Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙら（１９９６）
Ｃｅｌｌ ８７：４２７〜４３６）。ＨＶＥＭは、細胞への単純ヘルペスウイル
ス（ＨＳＶ）の多くの株の侵入を媒介する。研究によって、ＨＳＶは細胞表面グ
リコサミノグリカンに結合することによって感染を開始することが明らかになっ
た。実際に細胞に侵入するために、このウイルスはメディエーター活性を必要と
し、この活性は、ＨＶＥＭにより提供される。ＨＶＥＭは、エンベロープ糖タン
パク質Ｄ（ｇＤ）に結合することおよび膜融合を誘発することによって、このウ
イルスと相互作用する（Ｗｈｉｔｂｅｃｋら（１９９７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１
：６０８３〜６０９３；Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙら、前出）。
【０００４】 現在までに、ＨＶＥＭの２つのリガンドである、ＬＩＧＨＴおよびリンホトキ
シンａ（ＬＴａ）が同定されている（Ｍａｕｒｉら（１９９８）Ｉｍｍｕｎｉｔ
ｙ ８：２１〜３０）。ＬＩＧＨＴは、新規なサイトカインであり、そしてリン
ホトキシン（Ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ）に対して相同性を示し、誘導性（Ｉｎｄ
ｕｃｉｂｌｅ）発現を示し、そしてＨＳＶの糖タンパク質（Ｇｒｙｃｏｐｒｏｔ
ｅｉｎ）ＤとＨＶＥＭ（Ｔリンパ球により発現されるレセプター）について競合
するので、ＬＩＧＨＴと名付けられている。ＨＶＥＭの２番目に同定されたリガ
ンドであるＬＴａは、Ｔ細胞によりもっぱら発現され、ＴＮＦに対して３０％の
配列同一性を有し、そしてＴＮＦ１レセプターへの結合についてＴＮＦと競合す
る。ＬＴａにより発揮される生物学的効果は、ＴＮＦの効果と類似している。し
かし、ＴＮＦと異なり、ＬＴａは通常、局所的パラクリン因子として作用する。
ＬＴａは、好中球の強力なアクチベーターであることが示されている。従って、
ＬＴａは、急性期炎症反応のレギュレーターであると考えられる。さらに、ＬＴ
ａは、白血球接着およびサイトカイン産生を増加させることにより、白血球の血
管外遊出を容易にする。
【０００５】 最近の証拠により、ＨＶＥＭはまた免疫応答を調節する際に役割を果たし得る
ことが示唆される。研究により、ＨＶＥＭはいくつかのＴＮＦレセプター結合因
子（ＴＲＡＦ）に結合し得ることが明らかにされた。ＴＲＡＦは、ストレス活性
化タンパク質キナーゼ−１／ｃ−Ｊｕｎ Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ／ＳＡＰＫ）
、ならびに転写因子、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）および転写因子アクチベーター
タンパク質−１（ＡＰ−１）を活性化する。これらの転写因子は、次に、複数の
免疫遺伝子、炎症遺伝子、および急性期遺伝子の発現を制御する（Ｍａｒｓｔｅ
ｒｓら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１４０２９〜１４０３２
）。
【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、少なくとも一部、膜結合ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ｍ
ＨＶＥＭ）（ＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバー）の可溶性形態をコードす
る３つのｃＤＮＡ分子、およびその第２の膜結合形態をコードする１つのｃＤＮ
Ａ分子の発見に基く。第１の可溶性形態である可溶性ヘルペスウイルス侵入メデ
ィエーター−１（ｓＨＶＥＭ１）についてのｃＤＮＡ（配列番号１）、第２の可
溶性形態である可溶性ヘルペスウイルス侵入メディエーター−２（ｓＨＶＥＭ２
）についてのｃＤＮＡ（配列番号１７）、第３の可溶性形態である可溶性ヘルペ
スウイルス侵入メディエーター−３（ｓＨＶＥＭ３）についてのｃＤＮＡ（配列
番号２９）、および第２の膜結合形態である膜結合ヘルペスウイルス侵入メディ
エーター−２（ｍＨＶＥＭ２）についてのｃＤＮＡ（配列番号４１）が、以下に
記載される。
【０００７】 図９Ａ〜９Ｄおよび図１０は、ｓＨＶＥＭ１、ｓＨＶＥＭ２、ｓＨＶＥＭ３、
ｍＨＶＥＭ、およびｍＨＶＥＭ２の核酸およびアミノ酸レベルでの多重配列整列
を示す。ｓＨＶＥＭ１ ｃＤＮＡ（配列番号１）は、１９３アミノ酸のタンパク
質（配列番号２）をコードする５７９ヌクレオチドのオープンリーディングフレ
ーム（配列番号１のヌクレオチド２９７〜８７５である、配列番号３）を有する
。このタンパク質は、約３６アミノ酸のシグナル配列（配列番号２のアミノ酸１
〜およそアミノ酸３６である、配列番号５；配列番号１のヌクレオチド２９７〜
４１０である、配列番号６にコードされる）を含む。ｓＨＶＥＭ１は、約１５７
アミノ酸の推定成熟タンパク質長を有する（配列番号２のおよそアミノ酸３７〜
アミノ酸１９３である、配列番号４）。ｓＨＶＥＭ１タンパク質は、ＴＮＦＲフ
ァミリーのメンバーの特徴である、４つのシステインリッチ反復／ドメインのう
ち３つを保有する。第１のシステインリッチドメインは、３４アミノ酸長である
（配列番号２のアミノ酸４２〜およそアミノ酸７５である、配列番号７）。第２
のシステインリッチドメインは、４２アミノ酸長である（配列番号２のアミノ酸
７８〜およそアミノ酸１１９である、配列番号８）。第３のシステインリッチド
メインは、４２アミノ酸長である（配列番号２のアミノ酸１２１〜およそアミノ
酸１６２である、配列番号９）。ｓＨＶＥＭ１は、配列番号２のアミノ酸１１０
および１７３に、２つの潜在的Ｎ結合グリコシル化部位を有すると推定される。
【０００８】 ｓＨＶＥＭ２ ｃＤＮＡ（配列番号１７）は、１９７アミノ酸のタンパク質（
配列番号１８）をコードする５９１ヌクレオチドのオープンリーディングフレー
ム（配列番号１７のヌクレオチド１０７〜６９７である、配列番号１９）を有す
る。このタンパク質は、約３８アミノ酸の推定シグナル配列（配列番号１８のア
ミノ酸１〜およそアミノ酸３８である、配列番号２１；配列番号１７のヌクレオ
チド１０７〜配列番号２２０である、配列番号２２にコードされる）を含む。ｓ
ＨＶＥＭ２は、約１５９アミノ酸の推定成熟タンパク質長を有する（配列番号１
８のおよそアミノ酸３９〜アミノ酸１９７である、配列番号２０）。ｓＨＶＥＭ
２タンパク質は、ＴＮＦＲファミリーのメンバーの特徴である、４つのシステイ
ンリッチ反復／ドメインのうち３つを保有する。第１のシステインリッチドメイ
ンは、３４アミノ酸長である（配列番号１８のアミノ酸７８〜およそアミノ酸１
１９である、配列番号２３）。第２のシステインリッチドメインは、４２アミノ
酸長である（配列番号１８のアミノ酸７８〜およそアミノ酸１１９である、配列
番号２４）。第３のシステインリッチドメインは、４２アミノ酸長である（配列
番号１８のアミノ酸１２１〜およそアミノ酸１６２である、配列番号２５）。ｓ
ＨＶＥＭ２は、配列番号１８のアミノ酸１１０および１７３に、２つの潜在的Ｎ
結合グリコシル化部位を有すると推定される。
【０００９】 ｓＨＶＥＭ３ ｃＤＮＡ（配列番号２９）は、１８６アミノ酸のタンパク質（
配列番号３０）をコードする５５８ヌクレオチドのオープンリーディングフレー
ム（配列番号２９のヌクレオチド８５〜６４２である、配列番号３１）を有する
。このタンパク質は、約３８アミノ酸の推定シグナル配列（配列番号３０のアミ
ノ酸１〜およそアミノ酸３８である、配列番号３３；配列番号２９のヌクレオチ
ド８５〜配列番号１９８である、配列番号３４にコードされる）を含む。ｓＨＶ
ＥＭ３は、約１４８アミノ酸の推定成熟タンパク質長を有する（配列番号３０の
およそアミノ酸３９〜アミノ酸１８６である、配列番号３２）。ｓＨＶＥＭ３タ
ンパク質は、ＴＮＦＲファミリーのメンバーの特徴である、４つのシステインリ
ッチ反復／ドメインのうち３つを保有する。第１のシステインリッチドメインは
、３４アミノ酸長である（配列番号３０のアミノ酸４２〜およそアミノ酸７５で
ある、配列番号３５）。第２のシステインリッチドメインは、４２アミノ酸長で
ある（配列番号３０のアミノ酸７８〜およそアミノ酸１１９である、配列番号３
６）。第３のシステインリッチドメインは、４２アミノ酸長である（配列番号３
０のアミノ酸１２１〜およそアミノ酸１６２である、配列番号３７）。ｓＨＶＥ
Ｍ３は、配列番号３０のアミノ酸１１０および１７３に、２つの潜在的Ｎ結合グ
リコシル化部位を有すると推定される。
【００１０】 ｍＨＶＥＭ２ ｃＤＮＡ（配列番号４１）は、２７７アミノ酸のタンパク質（
配列番号４２）をコードする８３１ヌクレオチドのオープンリーディングフレー
ム（配列番号４１のヌクレオチド１０３〜９３３である、配列番号４３）を有す
る。このタンパク質は、約３８アミノ酸の推定シグナル配列（配列番号４２のア
ミノ酸１〜およそアミノ酸３８である、配列番号４５；配列番号４１のヌクレオ
チド１０３〜配列番号２１６である、配列番号４６にコードされる）を含む。ｍ
ＨＶＥＭ２は、約２３９アミノ酸の推定成熟タンパク質長を有する（配列番号４
２のおよそアミノ酸３９〜アミノ酸２７７である、配列番号４４）。ｍＨＶＥＭ
２タンパク質は、ＴＮＦＲファミリーのメンバーの特徴である、４つのシステイ
ンリッチ反復／ドメインを保有する。この反復／ドメインの最後のものは、部分
的ドメイン配列である。第１のシステインリッチドメインは、３４アミノ酸長で
ある（配列番号４２のアミノ酸４２〜およそアミノ酸７５である、配列番号４７
）。第２のシステインリッチドメインは、４２アミノ酸長である（配列番号４２
のアミノ酸７８〜およそアミノ酸１１９である、配列番号４８）。第３のシステ
インリッチドメインは、４２アミノ酸長である（配列番号４２のアミノ酸１２１
〜およそアミノ酸１６２である、配列番号４９）。第４の（部分的）システイン
リッチドメインは、２３アミノ酸長である（配列番号４２のアミノ酸１６５〜お
よそアミノ酸１８６である、配列番号５０）。ｍＨＶＥＭ２タンパク質はまた、
２３アミノ酸長である膜貫通ドメイン（配列番号４２のアミノ酸２０１〜およそ
アミノ酸２２５である、配列番号５１）を保有する。ｍＨＶＥＭ２は、配列番号
４２のアミノ酸１１０および１７３に、２つの潜在的Ｎ結合グリコシル化部位を
有すると推定される。
【００１１】 図９Ａ〜９Ｄは、ｓＨＶＥＭ１、ｓＨＶＥＭ２、ｓＨＶＥＭ３、ｍＨＶＥＭ、
およびｍＨＶＥＭ２の多重配列整列を示す。この整列は、ＡＬＩＧＮ整列プログ
ラムを使用して、ＰＡＭ２５０スコアリングマトリクス、ｏｐｅｎ ｇａｐ ｐ
ｅｎａｌｔｙが１０、およびｅｘｔｅｎｄ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙが０．０５
を用いて実施された。ｓＨＶＥＭ１は、ｓＨＶＥＭ３よりも７アミノ酸長い。全
体で、ｓＨＶＥＭ１とｓＨＶＥＭ３は、高い程度の配列同一性を共有し、全長ヌ
クレオチドレベルで６２．７％の配列同一性およびアミノ酸レベルで９４．８％
の配列同一性を示す。この２つのタンパク質は、アミノ酸１〜アミノ酸１８３が
同一である。これらそれぞれの配列が異なるのは、各タンパク質のまさにＣ末端
（アミノ酸１８４〜アミノ酸１８５およびアミノ酸１８７〜Ｃ末端）でのみであ
る（アミノ酸１８４からＣ末端までのｓＨＶＥＭ１とｓＨＶＥＭ３との間で共有
される、１つのＣ末端アミノ酸（アミノ酸１８６）が存在する）。さもなくば、
このｓＨＶＥＭ１のＣ末端の１０個のアミノ酸（配列番号２のアミノ酸１８４〜
１９３）が、ｓＨＶＥＭ３のＣ末端の３アミノ酸（配列番号３０のアミノ酸１８
４〜１８６）と異なる。
【００１２】 ｓＨＶＥＭ２は、ｓＨＶＥＭ１よりも４アミノ酸長い。全体で、ｓＨＶＥＭ２
とｓＨＶＥＭ１は、高い程度の配列同一性を共有し、全長ヌクレオチドレベルで
７９．４％の配列同一性およびアミノ酸レベルで９３．９％の配列同一性を示す
。この２つのタンパク質は、アミノ酸１〜アミノ酸１８４が同一である。これら
それぞれの配列が異なるのは、各タンパク質のまさにＣ末端（アミノ酸１８５〜
Ｃ末端）でのみである。ｓＨＶＥＭ２は、ｓＨＶＥＭ１のＣ末端の９個のアミノ
酸（配列番号２のアミノ酸１８５〜１９４）と異なる、１３個のＣ末端アミノ酸
（配列番号１８のアミノ酸１８５〜１９７）を有する。
【００１３】 ｓＨＶＥＭ２は、ｓＨＶＥＭ３よりも１１アミノ酸長い。全体で、ｓＨＶＥＭ
２とｓＨＶＥＭ３は、高い程度の配列同一性を共有し、全長ヌクレオチドレベル
で５８．６％の配列同一性およびアミノ酸レベルで９２．９％の配列同一性を示
す。この２つのタンパク質は、アミノ酸１〜アミノ酸１８３が同一である。これ
らそれぞれの配列が異なるのは、各タンパク質のまさにＣ末端（アミノ酸１８４
〜Ｃ末端）でのみである。ｓＨＶＥＭ２は、ｓＨＶＥＭ３のＣ末端の３個のアミ
ノ酸（配列番号３０のアミノ酸１８４〜１８６）と異なる、１４個のＣ末端アミ
ノ酸（配列番号１８のアミノ酸１８４〜１９７）を有する。
【００１４】 ｍＨＶＥＭ２は、ｓＨＶＥＭ１よりも８４アミノ酸長い。全体で、ｍＨＶＥＭ
２とｓＨＶＥＭ１は、高い程度の配列同一性を共有し、全長ヌクレオチドレベル
で７７．７％の配列同一性およびアミノ酸レベルで６７．５％の配列同一性を示
す。この２つのタンパク質は、アミノ酸１〜アミノ酸１８３が同一である。これ
らそれぞれの配列が異なるのは、各タンパク質のまさにＣ末端（アミノ酸１８４
〜Ｃ末端）でのみである。ｍＨＶＥＭ２は、ｓＨＶＥＭ１のＣ末端の１０個のア
ミノ酸（配列番号２のアミノ酸１８４〜１９３）と異なる、９４個のＣ末端アミ
ノ酸（配列番号４２のアミノ酸１８４〜２７７）を有する。
【００１５】 ｍＨＶＥＭ２は、ｓＨＶＥＭ２よりも８０アミノ酸長い。全体で、ｍＨＶＥＭ
２とｓＨＶＥＭ２は、高い程度の配列同一性を共有し、全長ヌクレオチドレベル
で８３．５％の配列同一性およびアミノ酸レベルで６８．２％の配列同一性を示
す。この２つのタンパク質は、アミノ酸１〜アミノ酸１８３が同一である。これ
らそれぞれの配列が異なるのは、各タンパク質のまさにＣ末端（アミノ酸１８４
〜Ｃ末端）でのみである。ｍＨＶＥＭ２は、ｓＨＶＥＭ２のＣ末端の１４個のア
ミノ酸（配列番号４２のアミノ酸１８４〜１９７）と異なる、９４個のＣ末端ア
ミノ酸（配列番号４２のアミノ酸１８４〜２７７）を有する。
【００１６】 ｍＨＶＥＭ２は、ｓＨＶＥＭ３よりも９１アミノ酸長い。全体で、ｍＨＶＥＭ
２とｓＨＶＥＭ３は、高い程度の配列同一性を共有し、全長ヌクレオチドレベル
で６３．８％の配列同一性およびアミノ酸レベルで６６．８％の配列同一性を示
す。この２つのタンパク質は、アミノ酸１〜アミノ酸１８４が同一である。これ
らそれぞれの配列が異なるのは、各タンパク質のまさにＣ末端（アミノ酸１８５
〜Ｃ末端）でのみである。ｍＨＶＥＭ２は、ｓＨＶＥＭ３のＣ末端の２個のアミ
ノ酸（配列番号３０のアミノ酸１８５〜１８６）と異なる、９３個のＣ末端アミ
ノ酸（配列番号４２のアミノ酸１８５〜２７７）を有する。
【００１７】 ヌクレオチド配列分析およびアミノ酸配列分析はまた、ｓＨＶＥＭ１、ｓＨＶ
ＥＭ２、およびｓＨＶＥＭ３が、膜結合型ヘルペスウイルス侵入メディエーター
（ｍＨＶＥＭ）（ＴＮＦレセプター（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバー
）と特に高い配列同一性を有することを示した。例えば、ｓＨＶＥＭ１は、ｍＨ
ＶＥＭと８８．５％の全長ヌクレオチド配列同一性および６５．７％のアミノ酸
配列同一性を示し、ｓＨＶＥＭ２は、ｍＨＶＥＭと６６．８％の全長ヌクレオチ
ド配列同一性および８２．１％のアミノ酸配列同一性を示し、そしてｓＨＶＥＭ
３は、ｍＨＶＥＭと６５．４％の全長ヌクレオチド配列同一性および５６．７％
のアミノ酸配列同一性を示す。しかし、ｓＨＶＥＭ１、ｓＨＶＥＭ２、およびｓ
ＨＶＥＭ３の配列は、２つの重要な様式でｍＨＶＥＭ配列とは異なる。第１に、
ｓＨＶＥＭ１、ｓＨＶＥＭ２、およびｓＨＶＥＭ３は、ｍＨＶＥＭのＣ末端（配
列番号１３のアミノ酸１８５〜２８３）を欠く。この末端は、ｍＨＶＥＭの膜貫
通ドメイン（配列番号１３のアミノ酸２０１〜２２５）を含む。ｓＨＶＥＭ１、
ｓＨＶＥＭ２、およびｓＨＶＥＭ３における膜貫通ドメインの不在は、ｓＨＶＥ
Ｍ１、ｓＨＶＥＭ２、およびｓＨＶＥＭ３が可溶性レセプターとして作用するこ
とを示唆する。第２に、ｓＨＶＥＭ１、ｓＨＶＥＭ２、およびｓＨＶＥＭ３は、
ｍＨＶＥＭのＣ末端においては見出されない、さらなるアミノ酸をそのＣ末端に
有する。例えば、ｓＨＶＥＭ１は、そのＣ末端にさらなる１０アミノ酸（配列番
号２のアミノ酸１８４〜１９３）を含み、ｓＨＶＥＭ２は、そのＣ末端にさらな
る１４アミノ酸（配列番号１８のアミノ酸１８４〜１９３）を含み、およびｓＨ
ＶＥＭ３は、そのＣ末端にさらなる２アミノ酸（配列番号３０のアミノ酸１８５
〜１８６）を含む。さらに、これらのアミノ酸配列は、他のいかなる既知の配列
とも有意な配列同一性を有さないようである。
【００１８】 ヌクレオチド配列分析およびアミノ酸配列分析はまた、ｍＨＶＥＭ２が、膜結
合型ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ｍＨＶＥＭ）（ＴＮＦレセプター（
ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバー）と特に高い配列同一性を有すること
を示した。例えば、ｍＨＶＥＭ２は、ｍＨＶＥＭと８６．７％のヌクレオチド配
列同一性および７５．４％のアミノ酸配列同一性を示す。しかし、ｍＨＶＥＭ２
はｍＨＶＥＭ膜貫通ドメインを含むが（ｍＨＶＥＭについて、配列番号１３のア
ミノ酸２０１〜２２５；ｍＨＶＥＭ２について、配列番号４２のアミノ酸２０３
〜２２５）、ｍＨＶＥＭとｍＨＶＥＭ２は、配列番号４２のアミノ酸２４２の後
のそれらのＣ末端で異なる。アミノ酸２４２の後では、ｍＨＶＥＭとｍＨＶＥＭ
２はわずか１残基（２６１位）のみを共有し、他の点では、ｍＨＶＥＭ２（配列
番号４２）のアミノ酸２４３〜２７７、およびｍＨＶＥＭ（配列番号１３）の２
７３〜２８３とは異なる。
【００１９】 （ＨＶＥＭファミリータンパク質の構造） ＨＶＥＭファミリーメンバー間のアミノ酸相同性およびヌクレオチド相同性は
、以下の表１、２、および３の通りである。
【００２０】 表１：ＰＡＭ２５０スコアリングマトリックス、ｏｐｅｎ ｇａｐ ｐｅｎａ
ｌｔｙ１０、およびｅｘｔｅｎｄ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ０．０５を用いるＡ
ＬＩＧＮ整列プログラムを使用して決定された全長核酸の同一性。
【００２１】
【表１】 表２：ＰＡＭ２５０スコアリングマトリックス、ｏｐｅｎ ｇａｐ ｐｅｎａ
ｌｔｙ１０、およびｅｘｔｅｎｄ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ０．０５を用いるＡ
ＬＩＧＮ整列プログラムを使用して決定されたオープンリーディングフレーム核
酸の同一性。
【００２２】
【表２】 表３：ＰＡＭ２５０スコアリングマトリックス、ｏｐｅｎ ｇａｐ ｐｅｎａ
ｌｔｙ１０、およびｅｘｔｅｎｄ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ０．０５を用いるＡ
ＬＩＧＮ整列プログラムを使用して決定されたアミノ酸の同一性。
【００２３】
【表３】 ｍＨＶＥＭは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）の細胞への侵入を媒介するそ
の能力によって最初に同定された（Ｍｏｎｔｏｇｏｍｅｒｙら、前出）。ｍＨＶ
ＥＭについての２つのリガンド、ＬＩＧＨＴ（ＴＡＮＧＯ−６９とも呼ばれる、
米国出願番号０９／１４６，９５１、９７／３／９出願、本明細書によって参考
として援用される）およびＬＴａ（Ｍａｕｒｉら、前出）が同定された。ＬＩＧ
ＨＴ／ＴＡＮＧＯ−６９が、ｍＨＶＥＭへの結合についてＨＳＶと競合し得るこ
とは公知である（Ｍａｕｒｉら、前出）。
【００２４】 本明細書中で使用される場合、用語ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターとは、ｓＨ
ＶＥＭ１（配列番号１）のヌクレオチド配列、ｓＨＶＥＭ２（配列番号１７）の
ヌクレオチド配列、ｓＨＶＥＭ３（配列番号２９）のヌクレオチド配列、および
ｍＨＶＥＭ２（配列番号４１）のヌクレオチド配列、これらのヌクレオチド配列
の遺伝子産物（およびその一部またはフラグメント）、ならびに本明細書中に記
載されるようなこれらのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の変異体の、全て
または一部をいう。
【００２５】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、ＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーと
して分類され、そしてｓＨＶＥＭ１、ｓＨＶＥＭ２、およびｓＨＶＥＭ３は、ｍ
ＨＶＥＭの可溶性形態であることが予測される。ｍＨＶＥＭ２は、ｍＥＶＥＭの
膜結合形態であることが予測される。大部分のＴＮＦＲメンバーについての可溶
性型は記載されており、そしてタンパク質分解性切断（例えば、ＴＮＦＲ ｐ６
０、ＴＮＰＲ ｐ８０、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、およびＣＤ９５）また
は選択的ｍＲＮＡスプライシング（例えば、４−１ＢＢおよびＣＤ９５）を通し
て生じると考えられている（Ａｌｄｅｒｓｏｎら、（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍ
ｅｄ １８１：７１−７７；Ｌａｎｔｚら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（１
９９０）８６：１３９６−１４０２）。ＴＮＦＲファミリーメンバーの可溶性レ
セプター型は、膜結合レセプターリガンドの活性を妨害することによって負の調
節的メカニズムを提供すると考えられている。
【００２６】 ｓＨＶＥＭ１、ｓＨＶＥＭ２、およびｓＨＶＥＭ３は、ＬＩＧＨＴ／ＴＡＮＧ
Ｏ−６９およびＬＴａの、ｍＨＶＥＭと結合する能力を妨害することによって、
ＴＮＦＲスーパーファミリーの他の可溶性メンバーと類似の役割を果たす。さら
に、ＴＡＮＧＯ−６９レセプターは、ｍＨＶＥＭの活性を調節することによって
ＨＳＶの侵入において役割を果たす。例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは
、ｍＨＶＥＭと直接結合し得る。この相互作用は、ＨＳＶの侵入を増強し得るか
、または代替的に、ｍＨＶＥＭへのＨＳＶの結合をブロックすることにより、Ｈ
ＳＶの侵入を阻害し得る。さらに、ＬＩＧＨＴ（ＴＡＮＧＯ−６９とも呼ばれる
）もまたＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのリガンドであるらしいので、ＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプターは、ＬＩＧＨＴ／ＴＡＮＧＯ−６９の活性を調節し得る。
例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、ＬＩＧＨＴ／ＴＡＮＧＯ−６９のｍ
ＨＶＥＭへの結合を妨害し得る。このような相互作用の結果は、細胞へのＨＳＶ
侵入の増強であり得る。あるいは、ＴＡＮＧＯ−６９レセプターは、ＨＳＶと直
接相互作用し得、それによってｍＨＶＥＭに結合するその能力、および結果的に
細胞に感染するその能力をブロックし得る。従って、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ターは、ＨＳＶの病因を調節することに関与する。
【００２７】 リガンドによるＴＮＦＲの活性化は、異なる膜結合ＴＮＦレセプター（例えば
、ＴＮＦ−レセプターｐ８０、ＴＮＦ−レセプターｐ６０、およびＴＮＦ−レセ
プター−Ｒ）ならびにそれらのリガンド（例えば、ＴＮＦ、ＬＴａ、およびＬＴ
−β）のクラスター化または架橋を生じ得る。これらのリガンドおよびレセプタ
ーは、交差連結の複雑なパターンを有し、そして三量体／多量体複合体を形成し
得る（Ｎａｓｉｓｍｉｔｈら（１９９８）ＴＩＢＳ ２３：７４−７９；Ａｒｍ
ｉｔａｇｅら（１９９４）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６：４０７−
１３）；Ｇｒｕｓｓら（１９９５）Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２：７５−８９）。このような架橋は、所定のリガン
ドの機能的レパートリーが拡張され得るメカニズムを提供する。例えば、リガン
ドは、別のシグナル伝達経路を活性化し得、そして細胞死、細胞の生存、または
細胞の分化の調節に関与し得る。ＬＴａはＴＡＮＧＯ−６９−レセプターについ
てのリガンドであるらしいので、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、ＬＴａの活
性を調節し得る。例えば、ＬＴａは炎症の調節に関与し、そして表面で発現され
るＬＴ−βとのヘテロ三量体複合体を形成する。ＬＴ−βは、ＩＩＩ型ＴＮＦ−
レセプターを特異的レセプターとして使用する（Ｂｒｏｗｎｉｎｇら、（１９９
３）Ｃｅｌｌ ７３：４４７−５６）。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのＬＴａ
への結合は、ＬＴ−βに結合するその能力に影響を与え得る。次には、ＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプター−ＬＴａ複合体は、別のシグナル伝達経路（例えば、アポ
トーシスシグナル伝達経路）を活性化し得る。ＬＩＧＨＴ／ＴＡＮＧＯ−６９は
また、リンフォトキシン（ＬＴ）／ＴＮＦサイトカイン−レセプター系の肝要な
成分であると考えられ、そしてＬＴ−βレセプターについての膜に固定されたリ
ガンドとして機能する（Ｍａｕｒｉら、前出）。ＬＴ／ＴＮＦサイトカインレセ
プター系は、免疫応答の調節に関与する。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、Ｌ
ＩＧＨＴ／ＴＡＮＧＯ−６９と結合するようなので、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ターは、ＬＴ／ＴＮＦサイトカインレセプター系においてＬＩＧＨＴ／ＴＡＮＧ
Ｏ−６９の活性および生物学的効果の調節に関与する。
【００２８】 さらに、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、ＴＮＦＲスーパーファミリーのメ
ンバーであるので、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、ＴＮＦＲスーパーファミ
リーの他のメンバーと同じ様式で機能し得る。例えば、ＴＮＦＲファミリーメン
バーは、プログラムされた細胞死、細胞増殖、炎症、および細胞毒性に関与する
（Ｂａｋｅｒら、（１９９６）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １２：１−９；Ｙｕａｎ（１
９９７）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ９：２４７−２５１）。最
近の証拠は、ｍＨＶＥＭが、種々の細胞プロセスに関与し得る（例えば、ｍＨＶ
ＥＭは、ＴＲＡＦスーパーファミリーのメンバーと結合し得、そしてＪＮＫ／Ｓ
ＡＰＫ、ＮＦ−κＢ、およびＡＰ−１を活性化し得る）（Ｍａｒｓｔｅｒｓら、
前出）ことを示唆する。ＪＮＫ／ＳＡＰＫ、ＮＦ−κＢ、およびＡＰ−１は、免
疫、炎症、および急性期応答のメディエーターとして公知である。ＴＡＮＧＯ−
６９−レセプターのｍＨＶＥＭリガンド（例えば、ＬＩＧＨＴ／ＴＡＮＧＯ−６
９またはＬＴａ）またはｍＨＶＥＭに結合する能力は、ｍＨＶＥＭシグナル伝達
経路における変化を生じ得る。従って、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、ｍＨ
ＶＥＭによって発揮される生物学的活性を調節し得、従って、炎症性腸疾患、敗
血症、ＡＩＤＳ、または慢性関節リウマチのような障害を調節するために使用さ
れ得る。
【００２９】 ノーザンブロット分析は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターが刺激されたマスト
細胞および刺激されていないマスト細胞の両方において発現されることを示した
（実施例２を参照のこと）。この発現パターンは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ーが、マスト細胞の活性の調節に関与することを示唆する。例えば、ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターは、Ｔ細胞機能に影響を与えるマスト細胞の能力を調節し得
る（Ｐａｔｅｒ−Ｈｕｉｊｓｅｎら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔ
ｔｅｒｓ ５７：４７−５１）。マスト細胞は、いくつかの疾患のプロセスにお
いて生理学的役割を果たす。これらの疾患プロセスには：遅延型過敏症、皮膚炎
、寄生生物感染、喘息、炎症性慢性関節リウマチ、線維症、および炎症性腸疾患
が挙げられる。従って、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、これらの疾患プロセ
スの調節に関与し、そしてＴＡＮＧＯ−６９−レセプター発現またはその活性の
モジュレーターが、これらの障害を処置するために使用され得る。
【００３０】 ノーザンブロット分析はまた、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターがＴＮＦ刺激さ
れた内皮細胞において発現されることを示した。従って、ＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプターリガンドであるＬＩＧＨＴ／ＴＡＮＧＯ−６９は、内皮細胞における炎
症性応答を調節し得る。例えば、ＬＩＧＨＴ／ＴＡＮＧＯ−６９は、内皮細胞か
らケモカインの分泌を調節する能力を有し、そして接着分子であるＥ−セレクチ
ンおよびＶＣＡＭの発現をアップレギュレートする能力を有する。ＬＩＧＨＴ／
ＴＡＮＧＯ−６９はまた、内皮への血小板の結合を調節する能力を有し、そして
凝血の調節において役割を果たす（米国出願番号０９／１４６，９５１、９／３
／９７出願、本明細書によって参考として援用される）。従って、ＴＡＮＧＯ−
６９−レセプターは、内皮において抗炎症性の役割を果たし得る。例えば、ＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプターのＬＩＧＨＴ／ＴＡＮＧＯ−６９への結合は、内皮性
の炎症を調節し得る。従って、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、血管の梗塞形
成、アテローム性動脈硬化症の病変、および血管形成のような内皮性の病因を調
節し得る。
【００３１】 他のＴＮＦＲファミリーメンバーと同様に、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは
、そのＣ末端にシステインリッチ反復を有する。これらの反復は、リガンド結合
において役割を果たすことが予想される。上記で議論したように、ｍＨＶＥＭの
リガンドはまた、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのリガンドとして機能すること
が予想される。しかし、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、本明細書に記載され
るように、そのＣ末端に異なるアミノ酸配列を含むことによって、ｍＨＶＥＭと
異なる。例えば、ｓＨＶＥＭ１は、そのＣ末端に、ｍＨＶＥＭとは異なる１０ア
ミノ酸を含む。従って、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、ｍＨＶＥＭに結合し
ないリガンドに結合する能力を有し得る。このことは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プターがｍＨＶＥＭによって保有されない活性を保有し得ることを示唆する。
【００３２】 従って、１つの局面において、本発明は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータン
パク質またはその生物学的に活性な部分をコードする、単離された核酸分子、な
らびに、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターをコードする核酸の検出のためのプライ
マーまたはハイブリダイゼーションプローブとして適切な核酸フラグメントを提
供する。
【００３３】 本発明は、配列番号１、配列番号７、受託番号９８８２１としてＡＴＣＣに寄
託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列（ｓＨＶＥＭ１；
「ＡＴＣＣ９８８２１のｃＤＮＡ」）、受託番号２０７１７３としてＡＴＣＣに
寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列（ｓＨＶＥＭ２
；「ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ」）、またはそれらの相補体に示される、
ヌクレオチド配列に少なくとも８９．５％、９０％、９２．５％、９５％、９７
．５％、９８％、９８．５％、または９９％同一である、核酸分子を特徴とする
。好ましくは、その核酸分子は、膜貫通ドメインを欠きかつ細胞質ドメインを欠
く、可溶性タンパク質をコードする。
【００３４】 本発明は、配列番号２９に示されるヌクレオチド配列、受託番号２０７１７２
としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配
列（ｓＨＶＥＭ３；「ＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡ」）、またはそれらの相
補体に示されるヌクレオチド配列に、少なくとも５８％、６０％、６５％、７０
％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２．５％、９５％、９７．５％、９８
％、または９９％同一である、核酸分子を特徴とする。好ましくは、その核酸分
子は、膜貫通ドメインを欠きかつ細胞質ドメインを欠く、可溶性タンパク質をコ
ードする。
【００３５】 本発明は、配列番号４１に示されるヌクレオチド配列、受託番号２０７１７１
としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配
列（ｍＨＶＥＭ２；「ＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡ」）、またはそれらの相
補体に示されるヌクレオチド配列に、少なくとも７６％、７８％、８０％、８５
％、８７．５％、９０％、９２．５％、９５％、９７．５％、９８％、または９
９％同一である、核酸分子を特徴とする。好ましくは、その核酸分子は、膜貫通
ドメインを有しかつ細胞質ドメインを欠く、タンパク質をコードする。
【００３６】 本発明は、配列番号１に示されるヌクレオチド配列ＡＴＣＣ９８８２１のｃＤ
ＮＡのヌクレオチド配列、またはそれらの相補体の少なくとも６５５（６７５、
７００、８００、１０００、１２００、１４００、１５００、１６００、１７０
０、１８００、１９００、または１９２９）ヌクレオチドのフラグメントを含む
、核酸分子を特徴とする。
【００３７】 本発明は、配列番号１７に示されるヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ２０７１７３
のｃＤＮＡのヌクレオチド配列、またはそれらの相補体の少なくとも７３０（７
４０、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、１０００、
１０５０、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１３５０、１
４００、１４５０、１５００、１５５０、１５７５、１５９０、または１５９６
）ヌクレオチドのフラグメントを含む、核酸分子を特徴とする。
【００３８】 本発明は、配列番号２９に示されるヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ２０７１７２
のｃＤＮＡのヌクレオチド配列、またはそれらの相補体の少なくとも７８５（７
９０、８００、８５０、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１
５００、１７００、１９００、２０００、２０５０、２１００、２１５０、２２
００、２２５０、２３００、２３１０、または２３１３）ヌクレオチドのフラグ
メントを含む、核酸分子を特徴とする。
【００３９】 本発明は、配列番号４１に示されるヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ２０７１７１
のｃＤＮＡのヌクレオチド配列、またはその相補体の少なくとも６２５（６３０
、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、１０００、１１００、１
２００、１３００、１４００、１４５０、１５００、１５５０、１６００、１６
５０、１７００、１７５０、１８００、１８２５、１８３０、または１８３４）
ヌクレオチドのフラグメントを含む、核酸分子を特徴とする。
【００４０】 本発明はまた、配列番号２、配列番号１８、配列番号３０のアミノ酸配列、ま
たはＡＴＣＣ９８８２１、ＡＴＣＣ２０７１７３、もしくはＡＴＣＣ２０７１７
２のｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列に、少なくとも６７％、７０％
、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、９８％、９８．５％
、または９９％同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質または天然に存在す
るポリペプチドの対立遺伝子改変体をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸
分子を特徴とする。
【００４１】 本発明はまた、配列番号４２のアミノ酸配列、またはＡＴＣＣ２０７１７１の
ｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列に、少なくとも８７％、８９％、９
０％、９２．５％、９５％、９７．５％、９８％、９８．５％、または９９％同
一であるアミノ酸配列を有するタンパク質または天然に存在するポリペプチドの
対立遺伝子改変体をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子を特徴とする
。
【００４２】 好ましい実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸分子は、配列
番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２９、配列番号３
１、配列番号４１、配列番号４３、ＡＴＣＣ９８８２１のｃＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡのヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ２０７
１７２のｃＤＮＡのヌクレオチド配列、またはＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡ
のヌクレオチド配列に示されるヌクレオチド配列を有する。
【００４３】 配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプチドのフラグメント、配列番号２
の少なくとも１８０（１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、または１９３
）個連続するアミノ酸を含むフラグメント、またはＡＴＣＣ９８８２１のｃＤＮ
Ａによってコードされるポリペプチドを、コードする核酸分子もまた、本発明に
含まれる。
【００４４】 配列番号１８のアミノ酸配列を有するポリペプチドのフラグメント、配列番号
１８の少なくとも１８５（１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、または１
９７）個連続するアミノ酸を含むフラグメント、またはＡＴＣＣ２０７１７３の
ｃＤＮＡによってコードされるポリペプチドを、コードする核酸分子もまた、本
発明に含まれる。
【００４５】 配列番号３０のアミノ酸配列を有するポリペプチドのフラグメント、配列番号
３０の少なくとも１８５（または１８６）個連続するアミノ酸を含むフラグメン
ト、またはＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡによってコードされるポリペプチド
を、コードする核酸分子もまた、本発明に含まれる。
【００４６】 配列番号４２のアミノ酸配列を有するポリペプチドのフラグメント、配列番号
４２の少なくとも２４０（２４５、２５０、２５５、２６０、２７０、２７５、
または２７７）個連続するアミノ酸を含むフラグメント、またはＡＴＣＣ２０７
１７１のｃＤＮＡによってコードされるポリペプチドを、コードする核酸分子も
また、本発明に含まれる。
【００４７】 配列番号２、配列番号１８、もしくは配列番号３０のアミノ酸配列、またはＡ
ＴＣＣ９８８２１、ＡＴＣＣ２０７１７３、またはＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤ
ＮＡによってコードされるアミノ酸配列に、少なくとも約６７％、好ましくは７
０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、９８％、または
９９％同一であるアミノ酸配列を有する単離されたポリペプチドもしくはタンパ
ク質、またはポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体もまた、本発明に
含まれる。
【００４８】 配列番号４２のアミノ酸配列、またはＡＴＣＣ２０７１７１によってコードさ
れるアミノ酸配列に、少なくとも約８７％、好ましくは８９％、９０％、９２．
５％、９５％、９７．５％、９８％、９８．５％、または９９％同一であるアミ
ノ酸配列を有する単離されたポリペプチドもしくはタンパク質、またはポリペプ
チドの天然に存在する対立遺伝子改変体もまた、本発明に含まれる。
【００４９】 配列番号３、配列番号１９、もしくは配列番号３１に、少なくとも約７０％、
好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９２．５％、９５％、９７．５％
、９８％、９８．５％または９９％同一であるヌクレオチド配列を有する核酸分
子によってコードされる単離されたポリペプチドもしくはタンパク質、またはポ
リペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体、ならびに、ストリンジェントな
ハイブリダイゼーション条件下で、以下：配列番号１もしくは３、配列番号１７
もしくは１９、配列番号２９もしくは３１、それらの相補体、またはＡＴＣＣ９
８８２１のｃＤＮＡの非コード鎖、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡの非コード
鎖、またはＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡの非コード鎖の、ヌクレオチド配列
を有する核酸分子にハイブリダイズするヌクレオチド配列を有する核酸分子によ
ってコードされる単離されたポリペプチドまたはタンパク質もまた、本発明に含
まれる。
【００５０】 配列番号４３に少なくとも約９２％、好ましくは９３％、９４％、９５％、９
６％、９５％、９６％、９７％、９８％、９８％または９９％同一であるヌクレ
オチド配列を有する核酸分子によってコードされる単離されたポリペプチドもし
くはタンパク質、またはポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体、なら
びに、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、以下：配列番号４
１もしくは４３、それらの相補体、またはＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡの非
コード鎖の、ヌクレオチド配列を有する核酸分子にハイブリダイズするヌクレオ
チド配列を有する核酸分子によってコードされる単離されたポリペプチドまたは
タンパク質もまた、本発明に含まれる。
【００５１】 本発明はまた、ストリンジェントな条件下で、配列番号１もしくは３、ＡＴＣ
Ｃ９８８２１のｃＤＮＡ、またはそれらの相補体のヌクレオチド配列を有する核
酸分子にハイブリダイズする核酸分子を特徴とする。他の実施態様において、そ
の核酸分子は、少なくとも６５５（６７５、７００、８００、１０００、１２０
０、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、または１
９２９）ヌクレオチド長であり、そしてストリンジェントな条件下で、配列番号
１もしくは３、ＡＴＣＣ９８８２１のｃＤＮＡ、またはそれらの相補体の、ヌク
レオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズする。
【００５２】 本発明はまた、ストリンジェントな条件下で、配列番号１７もしくは１９、Ａ
ＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、またはそれらの相補体のヌクレオチド配列を有
する核酸分子にハイブリダイズする核酸分子を特徴とする。他の実施態様におい
て、その核酸分子は、少なくとも７３０（７４０、７５０、７７５、８００、８
２５、８５０、８７５、９００、９５０、１０００、１０５０、１１５０、１２
００、１２５０、１３００、１３５０、１４００、１４５０、１５００、１５５
０、１５７５、１５９０、または１５９６）ヌクレオチド長であり、そしてスト
リンジェントな条件下で、配列番号１７もしくは１９、ＡＴＣＣ２０７１７３の
ｃＤＮＡ、またはそれらの相補体の、ヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブ
リダイズする。
【００５３】 本発明はまた、ストリンジェントな条件下で、配列番号２９もしくは３１、Ａ
ＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡ、またはそれらの相補体のヌクレオチド配列を有
する核酸分子にハイブリダイズする核酸分子を特徴とする。他の実施態様におい
て、その核酸分子は、少なくとも７８５（７９０、８００、８５０、９００、１
０００、１１００、１２００、１３００、１５００、１７００、１９００、２０
００、２０５０、２１００、２１５０、２２００、２２５０、２３００、２３１
０、または２３１３）ヌクレオチド長であり、そしてストリンジェントな条件下
で、配列番号２９もしくは３１、ＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡ、またはそれ
らの相補体の、ヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズする。
【００５４】 本発明はまた、ストリンジェントな条件下で、配列番号１もしくは３、ＡＴＣ
Ｃ９８８２１のｃＤＮＡ、またはそれらの相補体のヌクレオチド配列を有する核
酸分子にハイブリダイズする核酸分子を特徴とする。他の実施態様において、そ
の核酸分子は、少なくとも６２５（６３０、６５０、７００、７５０、８００、
８５０、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１４５
０、１５００、１５５０、１６００、１６５０、１７００、１７５０、１８００
、１８２５、１８３０、または１８３４）ヌクレオチド長であり、そしてストリ
ンジェントな条件下で、配列番号４１もしくは４３、ＡＴＣＣ９８８２１のｃＤ
ＮＡ、またはそれらの相補体の、ヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダ
イズする。
【００５５】 １つの実施態様において、本発明は、本発明の核酸分子のコード鎖に対するア
ンチセンスである、単離された核酸分子を提供する。
【００５６】 本発明の別の局面は、ベクター（例えば、組換え発現ベクター）を提供し、こ
れには、本発明のＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸分子が含まれる。別の実施
態様において、本発明は、本発明の核酸分子または本明細書中に記載されるベク
ター（例えば、本発明の核酸分子を含むベクター）を含む、宿主細胞を提供する
。本発明はまた、適切な培地中で組換え発現ベクターを含む本発明の宿主細胞を
培養して、その結果ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質が産生されること
によって、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターを産生するための方法を提供する。
【００５７】 本発明の別の局面は、単離されたかまたは組換えの、ＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プタータンパク質およびポリペプチドを特徴とする。好ましいＴＡＮＧＯ−６９
−レセプタータンパク質およびポリペプチドは、天然に存在するヒトＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターが有する少なくとも１つの生物学的活性（例えば、（１）Ｔ
ＡＮＧＯ−６９−レセプターシグナル伝達経路におけるタンパク質とのタンパク
質：タンパク質相互作用を形成する能力；（２）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
リガンドを結合する能力（例えば、ＬＩＧＨＴ／ＴＡＮＧＯ−６９またはＬＴａ
を結合する能力）；および（３）ｍＥＶＥＭと相互作用する能力）を有する。他
の活性には、以下が含まれる：（１）細胞増殖（例えば、免疫系の細胞（例えば
、マスト細胞、Ｔ細胞、および血管系の細胞（例えば、内皮細胞））の増殖）を
調節する能力；（２）細胞分化を調節する能力（例えば、免疫系の細胞および血
管系の細胞（例えば、内皮細胞）の分化）；（３）炎症（例えば、全身的な炎症
または局所的な炎症）を調節する能力；（４）マスト細胞活性を調節する能力（
例えば、過敏症を調節する能力）；（５）ＨＳＶ感染および／または増殖を調節
する能力（例えば、ＨＳＶの細胞への侵入を調節する能力）；（６）細胞−細胞
相互作用を調節する能力（例えば、細胞接着を調節する能力）、ならびに（７）
凝固を調節する能力（例えば、内皮への血小板の結合を調節する能力）。
【００５８】 本発明のＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質、またはその生物学的に活
性な部分は、非ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターポリペプチド（例えば、異種アミ
ノ酸配列）と作動可能に連結されて、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター融合タンパ
ク質を形成し得る。本発明はさらに、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質
に特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗
体）を特徴とする。さらに、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質またはそ
の生物学的に活性な部分は、必要に応じて薬学的に受容可能なキャリアを含む、
薬学的組成物中に組み込まれ得る。
【００５９】 別の局面において、本発明は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性の指標を検
出し得る薬剤を生物学的サンプルと接触させて、その結果ＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプター活性の存在を生物学的サンプル中で検出する、ＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プター活性または発現の存在を生物学的サンプル中で検出するための方法を提供
する。
【００６０】 別の局面において、本発明は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性を調節す
るための方法を提供し、この方法は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの活性また
は発現を調節（阻害または刺激）する薬剤に細胞を接触させ、その結果、細胞に
おけるＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの活性または発現が調節される工程を包含
する。１つの実施態様において、この薬剤は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータ
ンパク質に特異的に結合する抗体である。別の実施態様において、この薬剤は、
ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子の転写、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｍ
ＲＮＡのスプライシング、またはＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｍＲＮＡの翻訳
を調節することにより、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの発現を調節する。なお
別の実施態様において、この薬剤は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｍＲＮＡま
たはＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子のコード鎖に対するアンチセンスであ
るヌクレオチド配列を有する核酸分子である。
【００６１】 １つの実施態様において、本発明の方法を使用し、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ターモジュレーターである薬剤を被験体に投与することにより、異常なＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプタータンパク質の活性または核酸発現により特徴付けられる障
害を有する被験体を処置する。１つの実施態様において、このＴＡＮＧＯ−６９
−レセプターモジュレーターは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質であ
る。別の実施態様において、このＴＡＮＧＯ−６９−レセプターモジュレーター
は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸分子である。なお別の実施態様において
、このＴＡＮＧＯ−６９−レセプターモジュレーターは抗体である。他の実施態
様において、このＴＡＮＧＯ−６９−レセプターモジュレーターは、ペプチド、
擬ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）、または他の低分子である。
【００６２】 本発明はまた、以下：（ｉ）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質をコー
ドする遺伝子の異常な修飾または変異；（ｉｉ）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
タンパク質をコードする遺伝子の誤った調節；および（ｉｉｉ）ＴＡＮＧＯ−６
９−レセプタータンパク質の異常な翻訳後修飾の少なくとも１つにより特徴づけ
られる遺伝子傷害または変異の存在または非存在を同定するための診断アッセイ
を提供し、ここで、この遺伝子の野生型形態は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
活性を有するタンパク質をコードする。
【００６３】 別の局面において、本発明は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質に結
合するか、またはその活性を調節する化合物を同定するための方法を提供する。
一般的に、そのような方法は、試験化合物の存在および非存在下でＴＡＮＧＯ−
６９−レセプタータンパク質の生物学的活性を測定する工程およびＴＡＮＧＯ−
６９−レセプタータンパク質の活性を変化させる化合物を同定する工程を必然的
に伴う。
【００６４】 本発明はまた、化合物の存在および非存在下でＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
の発現を測定することにより、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの発現を調節する
化合物を同定する方法を特徴とする。
【００６５】 本発明の他の特徴および利点が、以下の詳細な記載および特許請求の範囲から
明らかになる。
【００６６】 （発明の詳細な発明） ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質および核酸分子は特定の保存された
構造的および機能的特徴を有する分子のファミリーを含む。本明細書中で使用さ
れる場合、用語「ファミリー」は、共通の構造ドメインならびに本明細書中で定
義されるようなアミノ酸配列およびヌクレオチド配列の十分な同一性を有する２
つ以上のタンパク質または核酸分子を意味することが意図される。ファミリーメ
ンバーは、同種ファミリーまたは異種ファミリーのいずれかを形成し得る。例え
ば、ファミリーは、２つ以上のヒト起源のタンパク質を含み得るか、または１つ
以上のヒト起源のタンパク質および１つ以上の非ヒト起源タンパク質を含み得る
。同じファミリーのメンバーはまた、共通の構造ドメインを有し得る。
【００６７】 例えば、本発明のＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質は、シグナル配列
を有する。本明細書中で使用される場合、「シグナル配列」は、分泌タンパク質
および膜結合タンパク質のＮ末端で生じる少なくとも約１５または２０のアミノ
酸残基長のペプチドを含み、そしてこれは、少なくとも約７０％の疎水性アミノ
酸残基（例えば、アラニン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、プロ
リン、チロシン、トリプトファン、またはバリン）を含む。好ましい実施態様に
おいて、シグナル配列は、少なくとも約２０〜５０のアミノ酸残基、好ましくは
、約３０〜４５のアミノ酸残基、より好ましくは約３８アミノ酸残基を含み、な
らびに少なくとも約６０〜８０％の疎水性残基、より好ましくは、６５〜７５％
の疎水性残基、そしてより好ましくは少なくとも約７０％の疎水性残基を含む。
シグナル配列は、そのような配列を含むタンパク質を脂質二重層へ方向づけるの
に役立つ。シグナル配列は、成熟タンパク質のプロセシングの間に切断される。
【００６８】 シグナルペプチド予測プログラムＳＩＧＮＡＬＰ（Ｎｉｅｌｓｅｎら（１９９
７）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １０：１〜６）は、ヒトｓＨＶ
ＥＭ１が成熟ｓＨＶＥＭ１タンパク質（配列番号２のおよそアミノ酸３９〜アミ
ノ酸１９３に対応する）（配列番号４）の先に３８アミノ酸のシグナルペプチド
（配列番号２のアミノ酸１〜およそアミノ酸３８）（配列番号５）を含むことを
予測した。シグナルペプチドの切断前のｓＨＶＥＭ１タンパク質の分子量は２０
．７ｋＤａであり、シグナルペプチドの切断後のｓＨＶＥＭ１タンパク質の分子
量は１６．５ｋＤａである。
【００６９】 シグナルペプチド予測プログラムＳＩＧＮＡＬＰ（Ｎｉｅｌｓｅｎら（１９９
７）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １０：１〜６）は、ヒトｓＨＶ
ＥＭ２が成熟ｓＨＶＥＭ２タンパク質（配列番号１８のおよそアミノ酸３９〜お
よそアミノ酸１９７に対応する）（配列番号２０）の先に３８アミノ酸のシグナ
ルペプチド（配列番号１８のアミノ酸１〜およそアミノ酸３８）（配列番号２１
）を含むことを予測した。シグナルペプチドの切断前のｓＨＶＥＭ１タンパク質
の分子量は２１．２ｋＤａであり、シグナルペプチドの切断後のｓＨＶＥＭ１タ
ンパク質の分子量は１７．０ｋＤａである。
【００７０】 シグナルペプチド推定プログラムＳＩＧＮＡＬＰ（Ｎｉｅｌｓｅｎら（１９９
７）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １０：１〜６）は、ヒトｓＨＶ
ＥＭ３が成熟ｓＨＶＥＭ３タンパク質（配列番号３０のアミノ酸３９〜およそア
ミノ酸１８６に対応する）（配列番号３２）の先に３８アミノ酸のシグナルペプ
チド（配列番号３０のアミノ酸１〜およそアミノ酸３８）（配列番号３３）を含
むことを推定した。シグナルペプチドの切断前のｓＨＶＥＭ３タンパク質の分子
量は１９．９ｋＤａであり、シグナルペプチドの切断後のｓＨＶＥＭ１タンパク
質の分子量は１５．７ｋＤａである。
【００７１】 シグナルペプチド推定プログラムＳＩＧＮＡＬＰ（Ｎｉｅｌｓｅｎら（１９９
７）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １０：１〜６）は、ヒトｍＨＶ
ＥＭ２が成熟ｍＨＶＥＭ２タンパク質（配列番号４２のアミノ酸３９〜およそア
ミノ酸２７７に対応する）（配列番号４４）の先に３８アミノ酸のシグナルペプ
チド（配列番号４２のアミノ酸１〜およそアミノ酸３８）（配列番号４５）を含
むことを推定した。シグナルペプチドの切断前のｓＨＶＥＭ１タンパク質の分子
量は２９．９ｋＤａであり、シグナルペプチドの切断後のｓＨＶＥＭ１タンパク
質の分子量は２５．７ｋＤａである。
【００７２】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバーはまた、ＴＮＦＲファミリ
ーのメンバーの特徴である１つ以上のシステインリッチドメインを含み得る。シ
ステインリッチドメインは、約２０アミノ酸残基〜６０アミノ酸残基、好ましく
は、約２５アミノ酸残基〜５５アミノ酸残基、より好ましくは、約３０アミノ酸
残基〜５０アミノ酸残基、および最も好ましくは、約３５アミノ酸残基〜４２ア
ミノ酸残基を含み、そして約２システイン残基〜８システイン残基、より好まし
くは、約３システイン残基〜７システイン残基、および最も好ましくは、約５シ
ステイン残基〜６システイン残基を含む。
【００７３】 代表的に、システインリッチドメインは、下記のコンセンサス配列（このドメ
インのＮ末端より始まる）：Ｃ−Ｘａａ（ｎ１）−Ｃ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｃ−Ｘ
ａａ（ｎ２）−Ｇ−Ｘａａ（１４）−Ｃを有し、ここで、Ｃはシステインであり
、Ｘａａは任意のアミノ酸であり、ｎ１は約５アミノ酸残基〜２０アミノ酸残基
、好ましくは、約１０アミノ酸残基〜１５アミノ酸残基、より好ましくは、約１
１アミノ酸残基〜１４アミノ酸残基であり、ｎ２は約１アミノ酸残基〜１５アミ
ノ酸残基、好ましくは、約２アミノ酸残基〜１０アミノ酸残基、より好ましくは
、約２アミノ酸残基〜８アミノ酸残基であり、そしてＧはグリシンである。
【００７４】 一つの実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバー
は、配列番号２、１８、３０、または４２のアミノ酸４２位〜７５位、またはア
ミノ酸７８位〜１１９位、またはアミノ酸１２１位〜１６２位と少なくとも約５
５％同一、好ましくは少なくとも約６５％同一、より好ましくは少なくとも約７
５％同一、なおより好ましくは少なくとも約８５％同一、そして最も好ましくは
少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する１つ以上のシステインリッ
チドメインを含み、これはＴＡＮＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバーの
システインリッチドメインであり（これらのシステインリッチドメインはまた、
それぞれ配列番号７、８、９、２３、２４、２５、３５、３６、３７、４７、４
８、および４９として表される）、そして本明細書中に記載されるようなシステ
インリッチドメインコンセンサス配列を有する。別の実施態様において、ＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバーは、配列番号２、１８、３０、また
は４２のアミノ酸４２〜７５、またはアミノ酸７８〜１１９、またはアミノ酸１
２１〜１６２と少なくとも約５５％同一、好ましくは少なくとも約６５％同一、
より好ましくは少なくとも約７５％同一、なおより好ましくは少なくとも約８５
％同一、最も好ましくは少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する１
つ以上のシステインリッチドメインを含み、これはＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ーファミリーメンバーのシステインリッチドメインであり（これらのシステイン
リッチドメインはまた、それぞれ配列番号７、８、９、２３、２４、２５、３５
、３６、３７、４７、４８、および４９として表される）、本明細書中に記載さ
れるようなシステインリッチドメインコンセンサス配列を有し、そして本明細書
中に記載されるような少なくとも一つのＴＡＮＧＯ−６９−レセプター生物学的
活性を有する。なお別の実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターファ
ミリーメンバーは、配列番号２、１８、または３０のアミノ酸４２〜７５、また
はアミノ酸７８〜１１９、またはアミノ酸１２１〜１６２と少なくとも約５５％
同一、好ましくは少なくとも約６５％同一、より好ましくは少なくとも約７５％
同一、なおより好ましくは少なくとも約８５％同一、最も好ましくは少なくとも
約９５％同一であるアミノ酸配列を有する１つ以上のシステインリッチドメイン
を含み、これは可溶性ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバーのシス
テインリッチドメインであり（これらのシステインリッチドメインはまた、それ
ぞれ配列番号７、８、９、２３、２４、２５、３５、３６、および３７として表
される）、本明細書中に記載されるようなシステインリッチドメインコンセンサ
ス配列を有し、本明細書中に記載されるような少なくとも一つのＴＡＮＧＯ−６
９−レセプター生物学的活性を有し、そして可溶性である。
【００７５】 好ましい実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバ
ーは、配列番号２、１８、３０、または４２のアミノ酸配列を有し、ここでシス
テインリッチコンセンサス配列は、アミノ酸４２〜７５（第１システインリッチ
ドメイン（配列番号７、２３、３５、４７））、アミノ酸７８〜１１９（第２シ
ステインリッチドメイン（配列番号８、２４、３６、４８））、およびアミノ酸
１２１〜１６２（第３システインリッチドメイン（配列番号９、２５、３７、４
９））に位置付けされる。
【００７６】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバーはまた、ＴＮＦＲファミリ
ーのメンバーの特徴である部分的なシステインリッチドメインを含む。部分的な
システインリッチドメインは、約１０アミノ酸残基〜３０アミノ酸残基、好まし
くは、約１２アミノ酸残基〜２８アミノ酸残基、より好ましくは、約１５アミノ
酸残基〜２５アミノ酸残基、および最も好ましくは、約２２アミノ酸残基を含み
、そして約１システイン残基〜５システイン残基、より好ましくは、約２システ
イン残基〜４システイン残基、および最も好ましくは約３システイン残基を含む
。
【００７７】 代表的に、部分的なシステインリッチドメインは、下記のコンセンサス配列（
このドメインのＮ末端より始まる）：Ｃ−Ｘａａ（ｎ１）−Ｃ−Ｘａａ（ｎ２）
−Ｃを有し、ここで、Ｃはシステインであり、Ｘａａは任意のアミノ酸であり、
ｎ１は約５アミノ酸残基〜２０アミノ酸残基、好ましくは、約１０アミノ酸残基
〜１５アミノ酸残基、より好ましくは、約１３アミノ酸残基であり、そしてｎ２
は約１アミノ酸残基〜１５アミノ酸残基、好ましくは、約２アミノ酸残基〜１０
アミノ酸残基、より好ましくは、約５アミノ酸残基である。
【００７８】 一つの実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバー
は、配列番号４２のアミノ酸１６５〜１８６と少なくとも約５５％同一、好まし
くは少なくとも約６５％同一、より好ましくは少なくとも約７５％同一、なおよ
り好ましくは少なくとも約８５％同一、そして最も好ましくは少なくとも約９５
％同一であるアミノ酸配列を有する１つ以上の部分的なシステインリッチドメイ
ンを含み、これはＴＡＮＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバーの部分的な
システインリッチドメインであり（この部分的なシステインリッチドメインはま
た、配列番号５０として表される）、そして本明細書中に記載されるような部分
的なシステインリッチドメインコンセンサス配列を有する。別の実施態様におい
て、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバーは、配列番号４２のアミ
ノ酸１６５〜１８６と少なくとも約５５％同一、好ましくは少なくとも約６５％
同一、より好ましくは少なくとも約７５％同一、なおより好ましくは少なくとも
約８５％同一、そして最も好ましくは少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配
列を有する１つ以上のシステインリッチドメインを含み、これはＴＡＮＧＯ−６
９−レセプターファミリーメンバーの部分的なシステインリッチドメインであり
（この部分的なシステインリッチドメインはまた、配列番号５０として表される
）、本明細書中に記載されるような部分的なシステインリッチドメインコンセン
サス配列を有し、そして本明細書中に記載されるような少なくとも一つのＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプター生物学的活性を有する。また別の実施態様において、Ｔ
ＡＮＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバーは、配列番号４２のアミノ酸１
６５〜１８６と少なくとも約５５％同一、好ましくは少なくとも約６５％同一、
より好ましくは少なくとも約７５％同一、なおより好ましくは少なくとも約８５
％同一、そして最も好ましくは少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有
する１つ以上のシステインリッチドメインを含み、これはＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプターファミリーメンバーの部分的なシステインリッチドメインであり（この
部分的なシステインリッチドメインはまた、配列番号５０として表される）、本
明細書中に記載されるような部分的なシステインリッチドメインコンセンサス配
列を有し、そして本明細書中に記載されるような少なくとも一つのＴＡＮＧＯ−
６９−レセプター生物学的活性を有し、そして膜結合性である。
【００７９】 好ましい実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターファミリーメンバ
ーは、配列番号４２のアミノ酸配列を有し、ここで部分的なシステインリッチコ
ンセンサス配列は、アミノ酸１６５〜１８６（配列番号５０）に位置付けされる
。
【００８０】 本発明の好ましいＴＡＮＧＯ−６９−レセプターポリペプチドは可溶性であり
、そして配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号２３、配列番号２４、
配列番号２５、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４７、配
列番号４８、および配列番号４９のシステインリッチドメインと十分に同一であ
るアミノ酸配列を有する。または、本発明の好ましいＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ターポリペプチドは膜結合性であり、配列番号５０の部分的なシステインリッチ
ドメインと十分に同一であるアミノ酸配列を有し、そしてこのタンパク質のＣ末
端近くに４プロリン残基のストレッチを含む。本明細書中で使用される場合、用
語「十分に同一」とは、第２のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に対して、
十分な、または最小限の数の同一または同等の（例えば、類似した側鎖を有する
）アミノ酸残基あるいはヌクレオチド配列を含む第１のアミノ酸配列またはヌク
レオチド配列をいい、その結果、第１および第２のアミノ酸配列またはヌクレオ
チド配列が共通の構造ドメインおよび／または共通の機能的活性を有する。例え
ば、約８５％の同一性、好ましくは９０％の同一性、より好ましくは９５％、９
７．５％の同一性または９８％の同一性を有する共通の構造ドメインを含むアミ
ノ酸配列またはヌクレオチド配列が、十分に同一であるとして、本明細書中で定
義される。例えば、同一性パーセントは、本明細書中に記載されるアルゴリズム
を使用して計算され得る。
【００８１】 本明細書中で交換可能に使用されるように、「ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
活性」、「ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの生物学的活性」または「ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターの機能的活性」とは、標準的な技術に従ってインビボまたは
インビトロで決定されるＴＡＮＧＯ−６９−レセプター応答細胞上のＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターのタンパク質、ポリペプチド、または核酸分子によって発揮
される活性をいう。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性は、直接的な活性（例え
ば、第２のタンパク質との会合または第２のタンパク質上の酵素活性のような）
であり得るか、または間接的な活性（例えば、第２のタンパク質とＴＡＮＧＯ−
６９−レセプタータンパク質との相互作用によって媒介される細胞シグナル伝達
活性のような）であり得る。好ましい実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプター活性は、本明細書中に記載される少なくとも１つ以上の以下の活性を含
む。
【００８２】 従って、本発明の別の実施態様は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性を有す
る単離されたＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質およびＴＡＮＧＯ−６９
−レセプターポリペプチドを特徴とする。
【００８３】 ノーザンブロット分析は、刺激されたマスト細胞および刺激されていないマス
ト細胞において、２ＫｂｓＨＶＥＭ１のｍＲＮＡの転写物が同様レベルで存在す
ることを明らかにした。ノーザンブロット分析はまた、刺激されたヒト臍静脈内
皮細胞（ＨＵＶＥＣ）におけるｓＨＶＥＭ１のｍＲＮＡ（２Ｋｂ）の存在を明ら
かにした。刺激されていないＨＵＶＥＣでは、ｓＨＶＥＭ１のｍＲＮＡは観察さ
れなかった。ｓＨＶＥＭ１の発現パターンは、ｓＨＶＥＭ１が、アレルギー反応
において役割を果たし得、そして内皮において抗炎症的な役割を果たし得ること
を示唆する。クローンＥｐｈｄｃ４ｃ１０（これはヒトｓＨＶＥＭ１をコードす
る）が、１９９８年７月１７日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａ
ｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ ２０１１０〜２２０９）に寄託され、そして登
録番号９９８８２１を付与された。この寄託は、特許手続きの目的のための微生
物の寄託の国際承認に関するブタペスト条約の条件の下で維持される。この寄託
は、単に、当業者に対して便利なものとしてなされ、そして寄託が、米国特許法
第１１２条下で要求される承認ではない。
【００８４】 クローンＥｐｔｈｄｃ０８９ｇ０２（これはヒトｓＨＶＥＭ２をコードする）
が、１９９９年３月１９日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃ
ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ
、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ ２０１１０〜２２０９）に寄託され、そして登録番
号２０７１７３を付与された。この寄託は、特許手続きの目的のための微生物の
寄託の国際承認に関するブタペスト条約の条件の下で維持される。この寄託は、
単に、当業者に対して便利なものとしてなされ、そして寄託が、米国特許法第１
１２条下で要求される承認ではない。
【００８５】 クローンＥｐｔｈＬａ０５９ｇ０４（これはヒトｓＨＶＥＭ３をコードする）
が、１９９９年３月１９日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃ
ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ
、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ ２０１１０〜２２０９）に寄託され、そして登録番
号２０７１７２を付与された。この寄託は、特許手続きの目的のための微生物の
寄託の国際承認に関するブタペスト条約の条件の下で維持される。この寄託は、
単に、当業者に対して便利なものとしてなされ、そして寄託が、米国特許法第１
１２条下で要求される承認ではない。
【００８６】 クローンＥｐｔｈＬａ０５４ｃ０７（これはヒトｍＨＶＥＭ２をコードする）
が、１９９９年３月１９日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃ
ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ
、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ ２０１１０〜２２０９）に寄託され、そして登録番
号２０７１７１を付与された。この寄託は、特許手続きの目的のための微生物の
寄託の国際承認に関するブタペスト条約の条件の下で維持される。この寄託は、
単に、当業者に対して便利なものとしてなされ、そして寄託が、米国特許法第１
１２条下で要求される承認ではない。
【００８７】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターとそのリガンド（ＬＩＧＨＴ）の両方は、それ
ぞれマウス染色体４および１７上のＳＪＬマウスにおいて見られる免疫グロブリ
ンＥ（ＩｇＥ）欠損応答についての遺伝子座に近接する遺伝子座にマッピングし
た。ＳＪＬマウスは、ＩｇＥとインターロイキン４（ＩＬ−４）の両方の乏しい
生産体であり、これらは通常、アレルギー性炎症反応（例えば、喘息または乾癬
で苦しむ患者により体験される反応）の間、Ｔ細胞により産生される（Ｙｏｓｈ
ｉｍｏｔｏら、（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
９２：１１９３１〜１１９３４）。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターをヒト染色体
１の領域ｐ３６．２〜ｐ３６．３（マウス染色体４のＩｇＥ欠損応答遺伝子座に
近接する領域に対して推定上シンテニーであるエリア）に位置付けるマッピング
データと組み合わせると、このマッピングデータは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ターおよびＬＩＧＨＴがＳＪＬマウスにて観察される免疫グロブリンＥ欠損応答
において役割を果たすことを示唆する（Ｋｗｏｎら、（１９９７）Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２、２２：１４２７２〜１４２７６）。
【００８８】 本発明の種々の局面が、下記のサブセクションにおいてさらに詳細に記載され
る。
【００８９】 （Ｉ．単離された核酸分子） 本発明の１つの局面は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質またはその
生物学的に活性な部分をコードする単離された核酸分子、ならびにＴＡＮＧＯ−
６９−レセプターコード核酸（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｍＲＮＡ
）を同定するためのハイブリダイゼーションプローブとしての使用に十分な核酸
分子およびＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸分子の増幅または変異のためのＰ
ＣＲプライマーとしての使用のためのフラグメントに関する。本明細書中で使用
される場合、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノム
ＤＮＡ）およびＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ならびにヌクレオチドアナロ
グを使用して生成されたＤＮＡまたはＲＮＡのアナログを含むことを意図される
。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得るが、好ましくは、二本鎖ＤＮＡで
ある。
【００９０】 「単離された」核酸分子は、その核酸の天然の供給源に存在する他の核酸分子
と分離されている核酸分子である。好ましくは、「単離された」核酸分子は、そ
の核酸が由来する生物体のゲノムＤＮＡ中のその核酸に天然で隣接する配列（す
なわち、その核酸の５’末端および３’末端に位置する配列）（好ましくは、タ
ンパク質コード配列）を含まない。例えば、種々の実施態様において、単離され
たＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸分子は、その核酸が由来する細胞のゲノム
ＤＮＡ中のその核酸分子に天然に隣接する、約５ｋｂ未満、約４ｋｂ未満、約３
ｋｂ未満、約２ｋｂ未満、約１ｋｂ未満、約０．５ｋｂ未満または約０．１ｋｂ
未満のヌクレオチド配列を含み得る。さらに、「単離された」核酸分子（例えば
、ｃＤＮＡ分子）は、組換え技術によって生成された場合、他の細胞性物質また
は培養培地を実質的に含まなくあり得るか、または化学合成された場合、化学的
前駆物質または他の化学物質を実質的に含まなくあり得る。本明細書中に使用さ
れる場合、用語「単離された」とは、核酸分子に対して言及する場合、単離され
た染色体を含まない。
【００９１】 本発明の核酸分子（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号６、配列番号
１７、配列番号１９、配列番号２２、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３
４、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４６、ＡＴＣＣ９８８１２のｃＤＮ
Ａ、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡ、また
はＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡの核酸配列、またはこれらのヌクレオチド配
列のいずれかの相補体のヌクレオチド配列を有する核酸分子）は、標準的な分子
生物学的技術および本明細書中に提供される配列情報を使用して単離され得る。
配列番号１、配列番号３、配列番号６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号
２２、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号４１、配列番号４
３、配列番号４６、ＡＴＣＣ９８８１２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃ
ＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡの
ヌクレオチド配列の全てあるいは一部をハイブリダイゼーションプローブとして
使用して、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸分子を、標準的なハイブリダイゼ
ーションおよびクローニング技術（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら編、Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版
、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９に記載されるような）を使用して
単離され得る。
【００９２】 本発明の核酸は、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを、テンプレートお
よび適切なオリゴヌクレオチドプライマーとして使用して、標準的なＰＣＲ増幅
技術に従って増幅され得る。このように増幅された核酸は、適切なベクター内に
クローン化され得、そしてＤＮＡ配列分析によって特徴付けられ得る。さらに、
ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターヌクレオチド配列に対応するオリゴヌクレオチド
は、標準的な合成技術（例えば、自動ＤＮＡ合成機を使用する）によって調製さ
れ得る。
【００９３】 別の好ましい実施態様において、本発明の単離された核酸分子は、配列番号１
、配列番号３、配列番号６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２２、配列
番号２９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号４１、配列番号４３、配列番
号４６、ＡＴＣＣ９８８１２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、Ａ
ＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡまたはその一
部に示されるヌクレオチド配列の相補体である核酸分子を含む。所定のヌクレオ
チド配列に相補的である核酸分子は、それが、所定のヌクレオチド配列にハイブ
リダイズして、それによって安定な二重鎖を形成し得るのに十分に、その所定の
ヌクレオチド配列に相補的である核酸分子である。
【００９４】 さらに、本発明の核酸分子は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターをコードする核
酸配列の一部（例えば、プローブまたはプライマーとして使用され得るフラグメ
ント、あるいはＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの生物学的に活性な部分をコード
するフラグメント）のみを含み得る。ヒトＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子
のクローニングから決定されたヌクレオチド配列は、他の細胞型（例えば、他の
組織由来）中のＴＡＮＧＯ−６９−レセプターホモログ、ならびに他の哺乳動物
由来のＴＡＮＧＯ−６９−レセプターホモログの同定ならびに／またはクローニ
ングにおける使用のために設計される、プローブおよびプライマーの生成を可能
にする。代表的に、このプローブ／プライマーは、実質的に精製されたオリゴヌ
クレオチドを含む。代表的に、このオリゴヌクレオチドは、配列番号１、配列番
号３、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２９、配列番号３１、配列番号４
１、配列番号４３、ＡＴＣＣ９８８１２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃ
ＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡの
センス配列またはアンチセンス配列、あるいは配列番号１、配列番号３、配列番
号１７、配列番号１９、配列番号２９、配列番号３１、配列番号４１、配列番号
４３、ＡＴＣＣ９８８１２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、ＡＴ
ＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡまたはＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡの天然に存
在する変異体の少なくとも約１２、好ましくは、約２５、より好ましくは、約５
０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０
または４００個連続するヌクレオチドに、ストリンジェント条件下でハイブリダ
イズするヌクレオチド配列の領域を含む。
【００９５】 ヒトＴＡＮＧＯ−６９−レセプターヌクレオチド配列に基づくプローブは、転
写物、あるいはこの転写物または同一のタンパク質をコードするゲノム配列を検
出するために使用され得る。プローブは、このプローブに結合する標識群（例え
ば、放射性同位体、蛍光化合物、酵素または酵素補因子）を含む。このようなプ
ローブは、例えば、被験体由来の細胞のサンプル中のＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ターコード核酸のレベルを測定すること（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ーｍＲＮＡレベルを検出するか、またはゲノムＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺
伝子が、変異または欠失されているか否かを決定すること）によって、ＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプタータンパク質を誤発現（ｍｉｓ−ｅｘｐｒｅｓｓ）する細胞
または組織を同定するための診断試験キットの一部として使用され得る。
【００９６】 「ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの生物学的に活性な部分」をコードする核酸
フラグメントは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの生物学的活性を有するポリペ
プチドをコードする配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９、配
列番号２９、配列番号３１、配列番号４１、配列番号４３、ＡＴＣＣ９８８１２
のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮ
Ａ、ＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡの一部を単離して、ＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプタータンパク質のそのコードされる部分を発現して（例えば、インビトロで
の組換え発現によって）、そしてＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのそのコードさ
れる部分の活性を評価することによって調製され得る。例えば、ＴＡＮＧＯ−６
９−レセプターの生物学的に活性な部分をコードする核酸フラグメントは、シス
テインリッチドメイン（例えば、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番
号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号３５、配列番号３６、配列番号
３７、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、および配列番号５０）を含
む。
【００９７】 本発明はさらに、配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９、配
列番号２９、配列番号３１、配列番号４１、配列番号４３、ＡＴＣＣ９８８１２
のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮ
Ａ、ＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡのヌクレオチド配列とは、遺伝コードの縮
重に起因して異なり、従って、配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番
号１９、配列番号２９、配列番号３１、配列番号４１、配列番号４３、ＡＴＣＣ
９８８１２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７
２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡに示されるヌクレオチド配列に
よってコードされるＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質と同じＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターをコードする、核酸分子を包含する。
【００９８】 配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２９、配列
番号３１、配列番号４１、配列番号４３、ＡＴＣＣ９８８１２のｃＤＮＡ、ＡＴ
ＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０
７１７１のｃＤＮＡに示される、ヒトＴＡＮＧＯ−６９−レセプターヌクレオチ
ド配列に加えて、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのアミノ酸配列における変化を
導くＤＮＡ配列多型が、集団（例えば、ヒト集団）内に存在し得ることを、当業
者は理解する。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子におけるこのような遺伝子
多型は、天然の対立遺伝子バリエーションに起因する集団内の個々の間に存在し
得る。対立遺伝子は、所定の遺伝子座に代替的に存在する遺伝子の群の１つであ
る。本明細書中で使用される場合、句「対立遺伝子改変体」とは、ＴＡＮＧＯ−
６９−レセプター遺伝子座に存在するヌクレオチド配列か、またはこのヌクレオ
チド配列にコードされるポリペプチドをいう。本明細書中で使用される場合、用
語「遺伝子」および「組換え遺伝子」とは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータン
パク質、好ましくは、哺乳動物ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質をコー
ドする、オープンリーディングフレームを含む核酸分子をいう。代表的に、この
ような天然の対立遺伝子バリエーションは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝
子のヌクレオチド配列において、１〜５％の変異を生じ得る。代替的な対立遺伝
子は、多くの異なる個体において目的の遺伝子を配列決定することによって同定
され得る。これは、種々の個体における同じゲノム遺伝子座を同定するためのハ
イブリダイゼーションプローブを使用することによって、容易に行われ得る。天
然の対立遺伝子バリエーションの結果であり、そしてＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ターの機能活性を変更しない、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターにおける、このよ
うなヌクレオチドバリエーション、および生じるアミノ酸多型もしくはアミノ酸
バリエーションのいずれか、および全ては、本発明の範囲内にあることが意図さ
れる。
【００９９】 さらに、ヒトＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのヌクレオチド配列と異なるヌク
レオチド配列を有する、他の種由来のＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質
（ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターホモログ）をコードする核酸分子は、本発明の
範囲内にあることが意図される。本発明のＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｃＤＮ
Ａの天然の対立遺伝子改変体およびホモログに対応する核酸分子は、本明細書中
に開示されるヒトＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸に対するそれらの同一性に
基づいて、そのヒトｃＤＮＡまたはその一部を標準的なハイブリダイゼーション
技術に従うハイブリダイゼーションプローブとして、ストリンジェントなハイブ
リダイゼーション条件下で使用して、単離され得る。
【０１００】 従って、別の実施態様において、本発明の単離された核酸分子は、少なくとも
３００（３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、５００、５５０、
６００、６５０、７００、８００、９００、１０００、または１２９０）ヌクレ
オチド長であり、そして配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９
、配列番号２９、配列番号３１、配列番号４１、配列番号４３、ＡＴＣＣ９８８
１２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７２のｃ
ＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡ、またはこれらの相補体の、ヌクレオ
チド配列（好ましくは、コード配列）を含む核酸分子にストリンジェントな条件
下でハイブリダイズする。
【０１０１】 本明細書中で使用される場合、用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズする」は、その下で、互いに少なくとも６０％（６５％、７０％、好ましく
は７５％）同一のヌクレオチド配列が、代表的には互いにハイブリダイズされた
ままである、ハイブリダイゼーションおよび洗浄についての条件を記載すること
が意図される。このようなストリンジェントな条件は、当業者に公知であり、そ
してＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）、６．
３．１−６．３．６に見出され得る。好ましい、限定されないストリンジェント
なハイブリダイゼーション条件の例は、６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウ
ム（ＳＳＣ）中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後の、０．２×Ｓ
ＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５０〜６５℃での１回以上の洗浄である。好ましくは
、配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２９、配列
番号３１、配列番号４１、配列番号４３、ＡＴＣＣ９８８１２のｃＤＮＡ、ＡＴ
ＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０
７１７１のｃＤＮＡ、またはこれらの相補体の配列にストリンジェントな条件下
でハイブリダイズする本発明の単離された核酸分子は、天然に存在する核酸分子
に対応する。本明細書中で使用される場合、「天然に存在する」核酸分子とは、
天然に存在する（例えば、天然のタンパク質をコードする）ヌクレオチド配列を
有する、ＲＮＡまたはＤＮＡ分子をいう。
【０１０２】 集団に存在し得るＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列の天然に存在する対立遺
伝子改変体に加え、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の生物学的活性を
変更することなく、配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９、配
列番号２９、配列番号３１、配列番号４１、配列番号４３、ＡＴＣＣ９８８１２
のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮ
Ａ、ＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡのヌクレオチド内への変異によって変化が
導入され得、これによってコードされるＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク
質のアミノ酸配列に変化を導き得ることを、当業者はさらに理解する。例えば、
当業者は、「非必須」アミノ酸残基でアミノ酸置換を導く、ヌクレオチド置換を
作製し得る。「非必須」アミノ酸残基は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの野生
型配列（例えば、配列番号２または配列番号１８の配列）から、その生物学的活
性を変更することなく、変更され得る残基であり、一方、「必須」アミノ酸残基
は、生物学的活性に必要とされる。例えば、種々の種のＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プター間で保存されていないか、または単に準保存的な（ｓｅｍｉ−ｃｏｎｓｅ
ｒｖｅｄ）だけであるアミノ酸残基は、活性に非必須であり得、従って、変更の
適当な標的である。あるいは、種々の種のＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパ
ク質間で保存されているアミノ酸残基は、活性に必須であり得、従って、変更の
適当な標的ではない。
【０１０３】 例えば、本発明の好ましいＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質は、それ
らのリガンド結合ドメイン中に少なくとも１つのシステインリッチドメインを含
む。システインリッチドメインの保存は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性に
おそらく必須である。
【０１０４】 従って、本発明の別の局面は、活性に必須ではないアミノ酸残基における変化
を含むＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質をコードする核酸分子に関する
。このようなＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質は、配列番号２、配列番
号４、配列番号１８、配列番号２０、配列番号３０、配列番号３２、配列番号４
２、配列番号４４由来のアミノ酸配列とは異なり、なお生物学的活性を維持する
。１つの実施態様において、単離された核酸分子は、配列番号２、配列番号１８
、配列番号３０のアミノ酸配列に、少なくとも約６７％同一、７０％、７５％、
８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、９８％、９８．５％または９９
％同一であるか、配列番号４２のアミノ酸配列に少なくとも約８７％同一、８９
％、９０％、９２．５％、９５％、９７．５％、９８％、９８．５％または９９
％同一である、アミノ酸配列を含むタンパク質をコードするヌクレオチド配列を
含む。
【０１０５】 配列番号２、配列番号１８、配列番号３０または配列番号４２の配列とは異な
る配列を有するＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質をコードする単離され
た核酸分子は、配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９、配列番
号２９、配列番号３１、配列番号４１、配列番号４３、ＡＴＣＣ９８８１２のｃ
ＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７３のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ２０７１７２のｃＤＮＡ、
ＡＴＣＣ２０７１７１のｃＤＮＡのヌクレオチド配列内に１以上のヌクレオチド
置換、付加または欠失を導入することによって作製され得、この結果、１以上の
アミノ酸置換、付加または欠失が、そのコードタンパク質に導入される。変異は
、標準的な技術（例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発）によ
って導入される。好ましくは、保存的アミノ酸置換が、１以上の推定非必須アミ
ノ酸残基で作製され得る。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の
側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換である。類似の側鎖を有するア
ミノ酸残基のファミリーは、当該分野で定義されている。これらのファミリーは
、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、
酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電
極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セ
リン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例
えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニ
ン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、ス
レオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば
、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。従って
、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターにおける推定非必須アミノ酸残基は、好ましく
は、同じ側鎖のファミリーからの別のアミノ酸残基と置換される。あるいは、変
異は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターコード配列の全てまたは一部に沿って無作
為に導入され得（例えば、飽和変異誘発（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｍｕｔａｇｅ
ｎｅｓｉｓ））、そして生じた変異体は、活性を維持する変異体を同定するため
にＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの生物学的活性についてスクリーニングされ得
る。変異誘発後、コードタンパク質は、組換え発現され得、そしてこのタンパク
質の活性が、測定され得る。
【０１０６】 好ましい実施態様において、変異体ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質
は、以下についてアッセイされ得る：（１）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターシグ
ナル伝達経路における、タンパク質とのタンパク質：タンパク質相互作用を形成
する能力；（２）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターリガンドを結合する能力（例え
ば、ＬＩＧＨＴ／ＴＡＮＧＯ−６９、すなわちＬＴａを結合する能力）；および
（３）ｍＨＶＥＭと相互作用する能力。なお別の好ましい実施態様において、変
異体ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、細胞増殖、細胞分化、炎症、ウイルス感
染および／またはウイルス増殖、細胞死、新脈管形成および凝固を調節する能力
についてアッセイされ得る。
【０１０７】 本発明は、アンチセンス核酸分子（すなわち、タンパク質をコードするセンス
核酸に相補的（例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補的）またはｍＲＮ
Ａ配列に相補的である分子）を包含する。従って、アンチセンス核酸は、センス
核酸に水素結合し得る。アンチセンス核酸は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターコ
ード鎖全体に相補的であり得るか、その一部（例えば、タンパク質コード領域（
すなわちオープンリーディングフレーム）の全体またはその一部）にのみ相補的
であり得る。アンチセンス核酸分子は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターをコード
するヌクレオチド配列のコード鎖の非コード領域に対してアンチセンスであり得
る。非コード領域（「５’および３’の非翻訳領域」）は、アミノ酸に翻訳され
ない、コード領域に隣接する５’および３’の配列である。
【０１０８】 本明細書中に開示されるＴＡＮＧＯ−６９−レセプターをコードするコード鎖
配列（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９、配列番
号２９、配列番号３１、配列番号４１または配列番号４３）が与えられると、本
発明のアンチセンス核酸は、ワトソン−クリック塩基対形成の法則に従って設計
され得る。このアンチセンス核酸分子は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｍＲＮ
Ａのコード領域全体に対して相補的であり得るが、より好ましくは、ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターｍＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部のみに対し
てアンチセンスであるオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴ
ヌクレオチドは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｍＲＮＡの翻訳開始部位周辺の
領域に相補的であり得る（例えば、配列ＡＣＴＣＧＧＡＣＴＣＣＧＴＡＣＣＴＣ
（配列番号１５）またはＣＧＧＡＣＴＣＣＧＴＡＣＣＴＣＧＧＡＧＧＡ（配列番
号１６）を有するオリゴヌクレオチド）。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、
例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０の
ヌクレオチド長であり得る。本発明のアンチセンス核酸は、当該分野で公知の手
順を使用する、化学合成および酵素連結反応を使用して構築され得る。例えば、
アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在
するヌクレオチド、あるいは分子の生物学的安定性を増加するように、またはア
ンチセンス核酸とセンス核酸との間で形成される二重鎖の物理的安定性を増加さ
せるように（例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオ
チドが使用され得る）設計された種々の改変ヌクレオチドを使用して、化学的に
合成され得る。アンチセンス核酸を生成するために使用され得る改変ヌクレオチ
ドの例としては、以下が挙げられる：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシ
ル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、
４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−
カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミ
ノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン（ｇ
ａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデ
ニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、
２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシ
トシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシ
ル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキュー
オシン（ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’−メトキシカルボキシメチ
ルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルア
デニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘ
ｏｓｉｎｅ）、シュードウラシル、キューオシン、２−チオシトシン、５−メチ
ル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラ
シル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（
ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボ
キシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリン。あ
るいは、アンチセンス核酸は、発現ベクターを使用して生物学的に生成され得、
ここで、この核酸は発現ベクター内に、アンチセンス方向でサブクローニングさ
れている（すなわち、挿入された核酸から転写されたＲＮＡは、目的の標的核酸
に対してアンチセンス方向のＲＮＡであり、これは、以下の小節でさらに記載さ
れる）。
【０１０９】 代表的に、本発明のアンチセンス核酸分子は、被験体に投与されるか、または
インサイチュで生成され、その結果これらは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータ
ンパク質をコードする細胞性のｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリ
ダイズするか、またはこれらに結合し、それによって、タンパク質の発現を阻害
する（例えば、転写および／または翻訳を阻害することによって）。ハイブリダ
イゼーションは、安定な二重鎖を形成するための従来のヌクレオチド相補性によ
り得るか、または例えば、ＤＮＡ二重鎖に結合するアンチセンス核酸分子の場合
においては、その二重らせんの大きい方の溝における特異的相互作用を介し得る
。本発明のアンチセンス核酸分子の投与経路の例はとしては、組織部位での直接
注射が挙げられる。あるいは、アンチセンス核酸分子は、選択された細胞を標的
するように改変され得、次いで全身的に投与され得る。例えば、全身投与のため
に、アンチセンス分子は、それらが、選択された細胞表面上で発現されるレセプ
ターまたは抗原に特異的に結合するように、例えば、細胞表面のレセプターまた
は抗原に結合するペプチドまたは抗体に、このアンチセンス核酸分子を結合する
ことによって、改変され得る。アンチセンス核酸分子はまた、本明細書中に記載
されるベクターを使用して細胞に送達され得る。アンチセンス分子の十分な細胞
内濃度を達成するために、強力なｐｏｌ ＩＩまたはｐｏｌ ＩＩＩプロモータ
ーの制御下に、このアンチセンス核酸を配置したベクター構築物が、好ましい。
【０１１０】 本発明のアンチセンス核酸分子は、ａ−アノマー核酸分子であり得る。ａ−ア
ノマー核酸分子は、相補的ＲＮＡと特異的二本鎖ハイブリッドを形成し、ここで
、通常のβユニットとは対照的に、この鎖は、互いに平行に走る（Ｇａｕｌｔｉ
ｅｒら（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：６６２５−６
６４１）。このアンチセンス核酸分子はまた、２’−ｏ−メチルリボヌクレオチ
ド（Ｉｎｏｕｅら（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：６
１３１−６１４８）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナログ（Ｉｎｏｕｅら（１９
８７）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１５：３２７−３３０）を含み得る。
【０１１１】 本発明はまた、リボザイムを包含する。リボザイムは、一本鎖核酸（例えば、
ｍＲＮＡ）（これに対して、リボザイムは相補的領域を有する）を切断し得るリ
ボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡである。従って、リボザイム（例えば
、ハンマーヘッド（ｈａｍｍｅｒｈｅａｄ）リボザイム（Ｈａｓｅｌｈｏｆｆお
よびＧｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５〜５９１）に記
載される）を使用して、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｍＲＮＡ転写物を触媒的
に切断して、それにより、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｍＲＮＡの翻訳を阻害
し得る。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターをコードする核酸に対する特異性を有す
るリボザイムは、本明細書に開示されるＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｃＤＮＡ
のヌクレオチド配列（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番
号１９、配列番号２９、配列番号３１、配列番号４１または配列番号４３）に基
づいて設計され得る。例えば、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ Ｌ−１９ ＩＶＳ Ｒ
ＮＡの誘導体は、活性部位のヌクレオチド配列がＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
をコードするｍＲＮＡに切断されるべきヌクレオチド配列に相補的であるように
構築され得る。例えば、Ｃｅｃｈら、米国特許第４，９８７，０７１号；および
Ｃｅｃｈら、米国特許第５，１１６，７４２号を参照のこと。あるいは、ＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプターｍＲＮＡを使用して、ＲＮＡ分子のプールから特異的リ
ボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡを選択し得る。例えば、Ｂａｒｔｅｌ
およびＳｚｏｓｔａｋ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１４１１〜１４１
８を参照のこと。
【０１１２】 本発明はまた、三重らせん構造を形成する核酸分子を包含する。例えば、ＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子発現は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの調節
領域（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタープロモーターおよび／またはＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプターエンハンサー）に相補的なヌクレオチド配列を標的化
し、標的細胞中のＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子の転写を妨害する三重ら
せん構造を形成することによって阻害され得る。一般に、Ｈｅｌｅｎｅ（１９９
１）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６（６）：５６９〜８４；Ｈｅ
ｌｅｎｅ（１９９２） Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７〜３
６；およびＭａｈｅｒ（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １４（１２）：８０７
〜１５を参照のこと。
【０１１３】 好ましい実施態様において、本発明の核酸分子は、塩基部分、糖部分またはリ
ン酸骨格において改変されて、例えば、分子の安定性、ハイブリダイゼーション
または溶解度を改良し得る。例えば、核酸のデオキシリボースリン酸骨格は、ペ
プチド核酸を生成するように改変され得る（Ｈｙｒｕｐら（１９９６）Ｂｉｏｏ
ｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４（１）：５〜
２３を参照のこと）。本明細書で使用される場合、用語「ペプチド核酸」または
「ＰＮＡ」は、核酸模倣物（例えば、ＤＮＡ模倣物）をいい、これは、デオキシ
リボースリン酸骨格が、偽ペプチド（ｐｓｅｕｄｏｐｅｐｔｉｄｅ）骨格に置換
され、そして４つの天然核酸塩基のみが保持されている。ＰＮＡの中性骨格は、
低イオン強度の条件下でＤＮＡおよびＲＮＡに対する特異的ハイブリダイゼーシ
ョンを可能にすることが示されている。ＰＮＡオリゴマーの合成は、Ｈｙｒｕｐ
ら（１９９６）、前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら（１９９６）Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：１４６７０〜６７５に記載される
ような標準的な固相ペプチド合成プロトコルを使用して実施され得る。
【０１１４】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのＰＮＡは、治療的適用および診断的適用にお
いて使用され得る。例えば、ＰＮＡは、例えば、転写阻止もしくは翻訳阻止を誘
導することまたは複製を阻害することによって、遺伝子発現の配列特異的調節の
ためのアンチセンスまたは抗遺伝子（ａｎｔｉｇｅｎｅ）薬剤として使用され得
る。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのＰＮＡはまた、例えば、ＰＮＡ指向型ＰＣ
Ｒクランピング（ｃｌａｍｐｉｎｇ）によって；他の酵素（例えば、Ｓ１ヌクレ
アーゼ）と組み合わせて使用される場合に人工制限酵素として（Ｈｙｒｕｐ（１
９９６），前出）；あるいはＤＮＡ配列決定およびハイブリダイゼーションのた
めのプローブまたはプライマーとして（Ｈｙｒｕｐ（１９９６）、前出；Ｐｅｒ
ｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ９３：１４６７０〜６７５）、例えば、遺伝子における１つの塩基対変
異の分析において使用され得る。
【０１１５】 別の実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのＰＮＡは、ＰＮＡに
対する脂肪親和性基または他のヘルパー基を付着することによって、ＰＮＡ−Ｄ
ＮＡキメラの形成によって、あるいはリポソームまたは当該分野で公知の薬物送
達の他の技術の使用によって、例えば、それらの安定性または細胞性取り込みを
増強するために改変され得る。例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのＰＮＡ
−ＤＮＡキメラが生成され得、これは、ＰＮＡおよびＤＮＡの有利な特性を合わ
せ得る。このようなキメラは、ＤＮＡ認識酵素（例えば、ＲＮＡｓｅ Ｈおよび
ＤＮＡポリメラーゼ）がＤＮＡ部分と相互作用することを可能にし、一方ＰＮＡ
部分は、高い結合親和性および特異性を提供する。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは、塩
基スタッキング、核酸塩基間の結合数、および方向の点において選択される適切
な長さのリンカーを使用して連結され得る（Ｈｙｒｕｐ（１９９６）、前出）。
ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成は、Ｈｙｒｕｐ（１９９６）、前出、およびＦｉｎ
ｎら（１９９６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２４（１７）：３３５
７〜６３に記載されるように実施され得る。例えば、ＤＮＡ鎖は、標準的なホス
ホロアミダイト結合化学および改変されたヌクレオシドアナログを使用して固体
支持体上で合成され得る。５’−（４−メトキシトリチル）アミノ−５’−デオ
キシ−チミジンホスホロアミダイトのような化合物は、ＰＮＡとＤＮＡの５’末
端との間の連結として使用され得る（Ｍａｇら（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１７：５９７３〜８８）。次いで、ＰＮＡモノマーは、段階
的な様式で結合されて、５’ＰＮＡセグメントおよび３’ＤＮＡセグメントを有
するキメラ分子を生成する（Ｆｉｎｎら（１９９６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ．２４（１７）：３３５７〜６３）。あるいは、キメラ分子は、５’
ＤＮＡセグメントおよび３’ＰＮＡセグメントを用いて合成され得る（Ｐｅｔｅ
ｒｓｅｒら（１９７５）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．
５：１１１９〜１１１２４）。
【０１１６】 他の実施態様において、オリゴヌクレオチドは、ペプチドのような他の付属基
（例えば、インビボにおいて宿主細胞レセプターを標的化するため）、または細
胞膜（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：６５５３〜６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら（１９８
７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：６４８〜６５２；
ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０を参照のこと）もしくは血液脳関門（例え
ば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４を参照のこと）を横切る輸送を容易に
する薬剤を含み得る。さらに、オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイゼーション
誘発（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ）切断剤（例えば、Ｋ
ｒｏｌら（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：９５８〜９７６を参
照のこと）または插入剤（例えば、Ｚｏｎ（１９８８）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５
：５３９〜５４９）を用いて改変され得る。この目的のために、オリゴヌクレオ
チドは、別の分子（例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーション誘発架橋剤、輸
送剤、ハイブリダイゼーション誘発切断剤など）に結合体化され得る。
【０１１７】 （ＩＩ．単離されたＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質および抗ＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプター抗体） 本発明の１つの局面は、単離されたＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質
、およびその生物学的に活性な部分、ならびに抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
抗体を惹起するための免疫原としての使用に適切なポリペプチドフラグメントに
関する。１つの実施態様において、ネイティブＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータ
ンパク質は、標準的なタンパク質精製技術を使用する適切な精製スキームによっ
て細胞または組織供給源から単離され得る。別の実施態様において、ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプタータンパク質は、組換えＤＮＡ技術によって生成される。組換
え発現に代えて、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質またはポリペプチド
は、標準的なペプチド合成技術を使用して化学的に合成され得る。
【０１１８】 「単離された」タンパク質もしくはその生物学的に活性な部分または「精製さ
れた」タンパク質もしくはその生物学的に活性な部分は、ＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプターが誘導される細胞または組織供給源からの細胞性物質または他の夾雑タ
ンパク質を実質的に含有しないか、あるいは、化学的に合成される場合に化学的
前駆体または他の化学物質を実質的に含有しない。語「細胞性物質を実質的に含
有しない」は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質が単離されるかまたは
組替え的に生成される細胞の細胞性成分からこのタンパク質が分離されている、
ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の調製物を含む。従って、細胞性物質
を実質的に含有しないＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質は、約３０％、
２０％、１０％または５％（乾燥重量で）未満の非ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ータンパク質（本明細書において「夾雑タンパク質」ともいわれる）を有するＴ
ＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の調製物を含む。ＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプタータンパク質またはその生物学的に活性な部分が組換え的に生成される場
合、これはまた、好ましくは実質的に培養培地を含有しない（すなわち、培養培
地が、タンパク質調製物の容量の約２０％、１０％または５％未満を示す）。Ｔ
ＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質が化学合成によって生成される場合、こ
れは、好ましくは実質的に化学的前駆体または他の化学物質を含有しない（すな
わち、このタンパク質は、このタンパク質の合成に関与する化学的前駆体、また
は他の化学物質から分離される）。従って、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータン
パク質のこのような調製物は、約３０％、２０％、１０％または５％（乾燥重量
で）未満の化学的前駆体または非ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター化学部質を有す
る。
【０１１９】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の生物学的に活性な部分は、ＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプタータンパク質のアミノ酸配列（例えば、以下に示されるア
ミノ酸配列：配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１８、配列番号２
０、配列番号２１、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号４２
、配列番号４４または配列番号４５）と実質的に同一であるかまたはこのアミノ
酸配列に由来するアミノ酸配列を含むペプチドを含み、このペプチドは、全長Ｔ
ＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質よりも少ないアミノ酸を含み、そしてＴ
ＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の少なくとも１つの活性を示す。代表的
に、生物学的に活性な部分は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の少な
くとも１つの活性を有するドメインまたはモチーフを含む。ＴＡＮＧＯ−６９−
レセプタータンパク質の生物学的に活性な部分は、例えば、１０、２５、５０、
１００、１５０、１７５またはそれ以上のアミノ酸長であるポリペプチドであり
得る。好ましい生物学的に活性なポリペプチドは、１つ以上の同定されたＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプター構造ドメイン（例えば、システイン−リッチドメイン）
（配列番号７；配列番号８；配列番号９；配列番号２３、配列番号２４、配列番
号２５、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４７、配列番号
４８、配列番号４９または配列番号５０）を含む。
【０１２０】 さらに、他の生物学的に活性な部分（ここで、タンパク質の他の領域が欠失さ
れている）は、組換え技術によって調製され得、そしてネイティブＴＡＮＧＯ−
６９−レセプタータンパク質の１つ以上の機能的活性について評価され得る。
【０１２１】 好ましいＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質は、配列番号２、配列番号
１８、配列番号３０または配列番号４２に示されるアミノ酸配列を有する。他の
有用なＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質は、配列番号２、配列番号１８
、配列番号３０または配列番号４２と実質的に同一であり、そして天然の対立遺
伝子改変または変異誘発に起因してアミノ酸配列が異なってもなお、配列番号２
、配列番号１８、配列番号３０または配列番号４２のタンパク質の機能的活性を
保持する。従って、有用なＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質は、配列番
号２、配列番号１８または配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも約６７％同
一、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、好ましく
は９８％、９８．５％または９９％同一であるアミノ酸配列、あるいは配列番号
４２のアミノ酸配列と少なくとも約８７％同一、８９％、９０％、９２．５％、
９５％、９７．５％、好ましくは９８％、９８．５％または９９％同一であるア
ミノ酸配列を含むタンパク質であり、そして配列番号２、配列番号１８、配列番
号３０または配列番号４２のＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の機能的
活性を保持する。好ましい実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータ
ンパク質は、配列番号２、配列番号１８、配列番号３０または配列番号４２のＴ
ＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の機能的活性を保持する。
【０１２２】 ２つのアミノ酸配列のパーセント同一性または２つの核酸のパーセント同一性
を決定するために、配列は、最適比較目的のために整列される（例えば、ギャッ
プは、第１のアミノ酸配列または核酸配列中に、第２のアミノ酸配列または核酸
配列との最適なアラインメントのために、導入され得る）。次いで、対応するア
ミノ酸位置またはヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基またはヌクレオチドが
、比較される。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同じアミ
ノ酸残基またはヌクレオチドによって占められる場合、分子は、その位置で同一
である。２つの配列間のパーセント同一性は、それらの配列によって共有される
同一位置の数の関数である（すなわち、％同一性＝同一位置の数／位置の総数（
例えば、重複する位置）×１００）。１つの実施態様において、この２つの配列
は、同じ長さである。
【０１２３】 ２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達
成され得る。２つの配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの好まし
い非限定的な例は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４〜２２６８のアルゴリ
ズムであり、これは、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３〜５８７７のように
改変される。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．
Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴ
プログラムに組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプロ
グラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実施されて、本発明のＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプター核酸分子に対するヌクレオチド配列相同性を獲得し得る
。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワー
ド長＝３を用いて実施されて、本発明のＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク
質分子に対するアミノ酸配列相同性を獲得し得る。比較目的のためのギャップ化
アラインメントを獲得するために、ギャップ化ＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ
ら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９〜３４０
２に記載されるように利用され得る。あるいは、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴを使用して
、分子間の距離の関係を検出する繰り返し検索を実施し得る。ＢＬＡＳＴ、ギャ
ップ化ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それ
ぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパ
ラメーターが、使用され得る。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉ
ｈ．ｇｏｖを参照のこと。
【０１２４】 配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、
ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズムであ
る。このようなアルゴリズムは、ＣＧＣ配列アラインメントソフトウェアパッケ
ージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。
アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１
２０重み付き残差表（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ）、ｇａｐ
ｌｅｎｇｔｈ ｐｅｎａｌｔｙ １２、およびｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ ４が、
使用され得る。配列分析のためのさらなるアルゴリズムは、当該分野で公知であ
り、そして、ＴｏｒｅｌｌｉｓおよびＲｏｂｏｔｔｉ（１９９４）Ｃｏｍｐｕｔ
．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，１０：３〜５に記載されるようなＡＤＶＡＮＣＥ
およびＡＤＡＭ；ならびにＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）ＰＮ
ＡＳ，８５：２４４４〜８に記載されるようなＦＡＳＴＡを含む。
【０１２５】 ＦＡＳＴＡは、配列ライブラリー中の項目の全てに対してタンパク質またはＤ
ＮＡ配列を比較するために使用される。例えば、ＦＡＳＴＡは、ＮＢＲＦ ＰＩ
Ｒタンパク質配列データベース中の配列の全てに対してタンパク質配列を比較し
得る。ＦＡＳＴＡは、問い合わせ配列がタンパク質としてこの問い合わせ配列を
読み取ることによってＤＮＡであるかタンパク質であるかを自動的に決定し、そ
そして「アミノ酸組成」が８５％ Ａ＋Ｃ＋Ｇ＋Ｔより多いか否かを決定する。
ＦＡＳＴＡは、ＬｉｐｍａｎおよびＰｅａｒｓｏｎ（Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５
）２２７：１４２７）によって記載される迅速な配列比較アルゴリズムの改良さ
れたバージョンを使用し、これはＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８８）８５：２４４４に記載され
る。プログラムは、コマンドライン引数または相互作用様式のいずれかにおいて
呼び出され得る。最適な第３の引数であるｋｔｕｐは、検索の感度および速度を
設定する。ｋｔｕｐ＝２である場合、比較される２つの配列中の類似の領域は、
整列された残基の対で調べることによって見出される；ｋｔｕｐ＝１である場合
、１つの整列されたアミノ酸が試験される。ｋｔｕｐは、タンパク質配列につい
て２または１に設定され得るか、またはＤＮＡ配列について１〜６に設定され得
る。ｋｔｕｐが特定されない場合、デフォルトは、タンパク質について２であり
、そしてＤＮＡ配列について６である。
【０１２６】 ２つの配列間のパーセント同一性は、ギャップを可能にしてかまたは可能にす
ることなく、上記と類似の技術を使用して決定され得る。パーセント同一性の決
定において、正確な一致のみが計数される。
【０１２７】 本発明はまた、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターキメラまたはＴＡＮＧＯ−６９
−レセプター融合タンパク質を提供する。本明細書で使用される場合、ＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプターの「キメラタンパク質」または「融合タンパク質」は、非
ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターポリペプチドに作動可能に連結されるＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターポリペプチドを含む。「ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターポリ
ペプチド」は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターに対応するアミノ酸配列を有する
ポリペプチドをいい、一方、「非ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターポリペプチド」
は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質に実質的に同一でないタンパク質
（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質と異なり、そして同じまた
は異なる生物に由来するＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質）に対応する
アミノ酸配列を有するポリペプチドをいう。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター融合
タンパク質において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターポリペプチドは、ＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプタータンパク質の全てまたは一部、好ましくはＴＡＮＧＯ−６
９−レセプタータンパク質の少なくとも１つの生物学的に活性な部分に対応し得
る。融合タンパク質において、用語「作動可能に連結される」は、ＴＡＮＧＯ−
６９−レセプターポリペプチドおよび非ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターポリペプ
チドがインフレームで互いに融合されることを示すことが意図される。非ＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプターポリペプチドは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターポリペ
プチドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。
【０１２８】 １つの有用な融合タンパク質は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列がＧＳＴ
配列のＣ末端に融合された、ＧＳＴ−ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター融合タンパ
ク質である。このような融合タンパク質は、組換えＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ーの精製を容易にし得る。
【０１２９】 別の実施態様において、融合タンパク質は、そのＮ末端で異種シグナル配列を
含むＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質である。例えば、ネイティブＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプターシグナル配列（すなわち、配列番号２のおよそアミノ
酸１〜３８である、配列番号５、配列番号１８のおよそアミノ酸１〜３８である
、配列番号２１、配列番号３０のおよそアミノ酸１〜３８である、配列番号３３
、または配列番号２２のおよそアミノ酸１〜３８である、配列番号４５）は、取
り除かれ得、そして別のタンパク質由来のシグナル配列と置換され得る。特定の
宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ーの発現および／または分泌は、異種シグナル配列の使用を通じて増加され得る
。例えば、バキュロウイルスエンベローブタンパク質のｇｐ６７分泌配列は、異
種シグナル配列として使用され得る（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉ
ｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ Ｗ
ｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９２）。真核生物異種シグナル配列の他の例には
、メリチンおよびヒト胎盤アルカリホスファターゼの分泌配列が挙げられる（Ｓ
ｔｒａｔａｇｅｎｅ；Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）。なお別の例
において、有用な原核生物異種シグナル配列には、ｐｈｏＡ分泌シグナル（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋら、前出）およびプロテインＡ分泌シグナル（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）が挙げられ
る。
【０１３０】 なお別の実施態様において、融合タンパク質は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ー−イムノグロブリン融合タンパク質であり、これは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プターの全てまたは一部がイムノグロブリンタンパク質ファミリーのメンバーに
由来する配列に融合される。本発明のＴＡＮＧＯ−６９−レセプター−イムノグ
ロブリン融合タンパク質は、薬学的組成物に組み込まれ得、そして細胞の表面上
でＴＡＮＧＯ−６９−レセプターリガンド（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９、ＬＩＧ
ＨＴ、またはＬＴａ）とＴＡＮＧＯ−６９−レセプターとの間の相互作用を阻害
するために被験体に投与され得て、それによりインビボでＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプター媒介シグナル伝達を抑制する。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター−イムノ
グロブリン融合タンパク質は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター同属体リガンドの
バイオアベイラビリティーに影響を及ぼすために使用され得る。ＴＡＮＧＯ−６
９−レセプターリガンド／ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター相互作用の阻害は、ウ
イルス増殖、炎症および凝固の処置について、治療的に有用であり得る。さらに
、本発明のＴＡＮＧＯ−６９−レセプターイムノグロブリン融合タンパク質は、
被験体において抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体を生成するための免疫原と
して、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターリガンドを精製するため、そしてＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプターのＴＡＮＧＯ−６９−レセプターリガンドとの相互作用を
阻害する分子を同定するためのスクリーニングアッセイにおいて、使用され得る
。
【０１３１】 好ましくは、本発明のＴＡＮＧＯ−６９−レセプターキメラタンパク質または
ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター融合タンパク質は、標準的なＤＮＡ組換え技術に
よって生成される。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラグ
メントは、従来の技術に従って（例えば、連結のために平滑末端または付着末端
（ｓｔａｇｇｅｒｅｄ−ｅｎｄ）を使用すること、適切な末端を提供するための
制限酵素消化、望ましくない結合を避けるための適切なアルカリホスファターゼ
処理のような付着末端（ｃｏｈｅｓｉｖｅ ｅｎｄ）の埋まり（ｆｉｌｌｉｎｇ
−ｉｎ）、および酵素的連結によって）インフレームでともに連結される。別の
実施態様において、融合遺伝子は、自動化ＤＮＡ合成機を含む従来の技術によっ
て合成され得る。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅は、引き続いてキ
メラ遺伝子配列を生成するためにアニール化され、そして再増幅され得る２つの
連続する遺伝子間の相補的オーバーハング（ｏｖｅｒｈａｎｇ）を生じるアンカ
ープライマーを使用して実施され得る（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、前出を参照
のこと）。さらに、多くの発現ベクターは、すでに融合部分（例えば、ＧＳＴポ
リペプチド）をコードして市販されている。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターをコ
ードする核酸は、このような発現ベクターへクローン化され得、その結果、融合
部分は、インフレームでＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質に連結される
。
【０１３２】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターシグナル配列（配列番号５、配列番号２１、配
列番号３３または配列番号４５）それ自体を使用して、目的の分泌タンパク質ま
たは他のタンパク質の分泌および単離を容易にし得る。シグナル配列は、代表的
に、１つ以上の切断事象において、分泌の間に成熟タンパク質から一般に切断さ
れる疎水性アミノ酸のコアによって特徴付けられる。このようなシグナルペプチ
ドは、成熟タンパク質が分泌経路を通過するように、成熟タンパク質由来のシグ
ナル配列の切断を可能にするプロセシング部位を含む。従って、本発明は、シグ
ナル配列を有する記載されるポリペプチド、ならびにシグナル配列自体およびシ
グナル配列の非存在下におけるポリペプチド（すなわち、切断生成物）に関する
。１つの実施態様において、本発明のシグナル配列をコードする核酸配列は、通
常分泌されない（例えば、分泌タンパク質のフラグメントを含む非シグナル配列
）タンパク質か、またはそうでなければ単離が困難であるタンパク質のような目
的のタンパク質に対する発現ベクターに作動可能に連結され得る。シグナル配列
は、例えば、発現ベクターが形質転換される真核生物物宿主から、タンパク質の
分泌を指向し、そしてシグナル配列は、引き続いてか、または同時に切断される
。次いで、タンパク質は、当該分野で認識される方法によって細胞外培地から容
易に精製され得る。あるいは、シグナル配列は、精製を容易にする配列を使用し
て（例えば、ＧＳＴドメインを用いて）目的のタンパク質に連結され得る。
【０１３３】 別の実施態様において、本発明のシグナル配列を使用して、調節配列（例えば
、プロモーター、エンハンサー、リプレッサー）を同定し得る。シグナル配列は
ペプチドの最もアミノ末端側の配列であるので、そのアミノ末端側に対してシグ
ナル配列が隣接する核酸は、転写に影響を及ぼす調節配列であると予測される。
従って、シグナル配列の全てまたは一部をコードするヌクレオチド配列は、プロ
ーブとして使用されて、シグナル配列およびそれらの隣接領域を同定および単離
し得、そしてこれらの隣接領域を研究して、そこにある調節エレメントを同定し
得る。
【０１３４】 本発明はまた、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質（すなわち、ＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプターアミノ酸配列のものとは、異なる配列を有するタンパク
質）の改変体に関する。このような改変体は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターア
ゴニスト（模倣物）またはＴＡＮＧＯ−６９−レセプターアンタゴニストのいず
れかとして機能し得る。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の改変体は、
変異誘発（例えば、別々の点変異またはＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク
質の短縮化）により生成され得る。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の
アゴニストは、天然に存在する形態のＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質
の生物学的活性と実質的に同じ活性を保持し得るか、またはそのサブセットを保
持し得る。ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質のアンタゴニストは、例えば
、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質を含む細胞シグナルカスケードの下
流または上流のメンバーに競合的に結合することによって、１つ以上の天然に存
在する形態のＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の活性を阻害し得る。従
って、特定の生物学的効果は、制限された機能の改変体での処置により誘発され
得る。被験体を天然に存在する形態のタンパク質の生物学的活性のサブセットを
有する改変体で処置することは、天然に存在する形態のＴＡＮＧＯ−６９レセプ
タータンパク質での処置と比較して、被験体における副作用がより少なくあり得
る。
【０１３５】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターアゴニスト（模倣物）として、またはＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプターアンタゴニストとしてのいずれとして機能するＴＡＮＧＯ
−６９−レセプタータンパク質の改変体は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータン
パク質のアゴニストもしくはアンタゴニスト活性についてのＴＡＮＧＯ−６９−
レセプタータンパク質の変異体（例えば、短縮化変異体）のコンビナトリアルラ
イブラリーをスクリーニングすることによって同定され得る。１つの実施態様に
おいて、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター改変体の変化を与えた（ｖａｒｉｅｇａ
ｔｅｄ）ライブラリーは、核酸レベルでコンビナトリアルな変異誘発により生成
され、そして変化を与えられた遺伝子ライブラリーによりコードされる。ＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプター改変体の変化を与えられたライブラリーは、潜在的なＴ
ＡＮＧＯ−６９−レセプター配列の縮重セットが、個々のポリペプチドとして、
あるいはそこにあるＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列のセット（例えば、ファ
ージディスプレイのための）を含むより大きな融合タンパク質のセットとして発
現可能であるように、例えば、遺伝子配列に合成オリゴヌクレオチドの混合物を
酵素的に連結することにより生成され得る。縮重オリゴヌクレオチド配列から潜
在的なＴＡＮＧＯ−６９−レセプター改変体のライブラリーを生成するために使
用され得る種々の方法が存在する。縮重遺伝子配列の化学合成は、自動化ＤＮＡ
合成機で行われ得、次いで、合成遺伝子が適切な発現ベクターに連結され得る。
遺伝子の縮重セットの使用は、１つの混合物において、潜在的なＴＡＮＧＯ−６
９−レセプター配列の所望のセットをコードする配列の全ての供給を可能にする
。縮重オリゴヌクレオチドを合成する方法は、当該分野で公知である（例えば、
Ｎａｒａｎｇ（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３９：３；Ｉｔａｋｕｒａ
ら（１９８４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３；Ｉｔａｋｕ
ｒａら（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８：１０５６；Ｉｋｅら（１９８３）
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１１：４７７を参照のこと）。
【０１３６】 さらに、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質コード配列のフラグメント
のライブラリーを使用して、スクリーニングおよび引き続いてＴＡＮＧＯ−６９
−レセプタータンパク質の改変体の選択のための、変化を与えたＴＡＮＧＯ−６
９−レセプターフラグメントの集団を生成し得る。１つの実施態様において、コ
ード配列フラグメントのライブラリーは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターコード
配列の二本鎖ＰＣＲフラグメントを、ニックが１分子につき約１回だけ生じる条
件下でヌクレアーゼで処理し、二本鎖ＤＮＡを変性させ、ＤＮＡを異なるニック
化産物由来のセンス／アンチセンス対を含み得る二本鎖ＤＮＡを形成するように
再生し、Ｓ１ヌクレアーゼでの処理によって再形成された二重鎖から一本鎖部分
を除去し、そして得られたフラグメントライブラリーを発現ベクター中に連結す
ることにより生成され得る。この方法によって、この発現ライブラリーが誘導さ
れ得、このライブラリーは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の種々の
サイズのＮ末端フラグメントおよび内部フラグメントをコードする。
【０１３７】 点変異または短縮化により作製されるコンビナトリアルライブラリーの遺伝子
産物をスクリーニングし、そして選択された特性を有する遺伝子産物についての
ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするためのいくつかの技術は、当該分野
で公知である。このような技術は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の
コンビナトリアル変異誘発により生成された遺伝子ライブラリーの迅速なスクリ
ーニングのために適合される。大きな遺伝子ライブラリーをスクリーニングする
ために最も広範に使用される技術（これは、高スループット分析になじみやすい
）としては、代表的には、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクターにクロ
ーニングし、適切な細胞を得られるベクターのライブラリーで形質転換し、そし
て所望の活性の検出が、その産物が検出される遺伝子をコードするベクターの単
離を容易にする条件下でコンビナトリアル遺伝子を発現することが挙げられる。
ライブラリーにおける機能的変異体の頻度を増強する技術である反復的な全体変
異誘発（ｒｅｃｕｒｓｉｖｅ ｅｎｓｅｍｂｌｅ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）（
ＲＥＭ）をスクリーニングアッセイとの組み合わせで使用して、ＴＡＮＧＯ−６
９−レセプター改変体を同定し得る（ＡｒｋｉｎおよびＹｏｕｒｖａｎ（１９９
２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７８１１−７８１
５；Ｄｅｌｇｒａｖｅら（１９９３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
６（３）：３２７−３３１）。
【０１３８】 単離されたＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質、またはその一部もしく
はフラグメントを免疫原として使用して、ポリクローナル抗体およびモノクロー
ナル抗体を調製するための標準的な技術を用いて、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ーを結合する抗体を精製し得る。全長ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質
が使用され得、あるいは、本発明は、免疫原として使用するためのＴＡＮＧＯ−
６９−レセプターの抗原性ペプチドフラグメントを提供する。ＴＡＮＧＯ−６９
−レセプターの抗原性ペプチドは、配列番号２または配列番号１８に示されるア
ミノ酸配列の少なくとも７つ（好ましくは、１０、１５、２０、または３０）の
アミノ酸残基を含み、そしてペプチドに対して惹起される抗体がＴＡＮＧＯ−６
９−レセプターと特定の免疫複合体を形成するように、ＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プターのエピトープを包含する。
【０１３９】 抗原性ペプチドにより含まれる好ましいエピトープは、タンパク質の表面に位
置するＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの領域（例えば、親水性領域）である。例
えば、ヒトＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質配列ｓＨＶＥＭ１のヒドロ
パシー分析（図２を参照のこと）は、特に親水性である領域（例えば、配列番号
２の残基１〜残基２２；配列番号２の残基１０５〜残基１２０；および配列番号
２の残基１７７〜残基１９４）を示し、従って、この分析は、抗体生成を標的化
するために有用な表面残基をコードするようである。
【０１４０】 抗原性ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター免疫原を使用して、代表的には、適切な
被験体（例えば、ウサギ、ヤギ、マウスまたは他の哺乳動物）に免疫原を免疫す
ることにより抗体を調製する。適切な免疫原性調製物は、例えば、抗原である組
換え発現されたＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質または化学合成された
ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターポリペプチドを含み得る。この調製物は、アジュ
バント（例えば、フロイント完全アジュバントまたはフロイント不完全アジュバ
ント、または同様な免疫刺激剤）をさらに含み得る。適切な被験体を抗原性ＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプター調製物で免疫することにより、ポリクローナル抗ＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプター抗体応答が惹起される。
【０１４１】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの抗原性ペプチドは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プター（配列番号２、配列番号１８、配列番号３０、および配列番号４２）の少
なくとも７つ（好ましくは、１０、１５、２０、３０、またはそれ以上）のアミ
ノ酸残基を含み、そして少なくとも１つのＴＡＮＧＯ−６９−レセプターを含む
。その結果、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターと特定の免疫複合体を形成するペプ
チドに対して抗体が惹起される。他の好ましい免疫原としては、成熟ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターの以下の全てまたは一部分（例えば、少なくとも７つのアミ
ノ酸残基を含む部分）：（配列番号２のアミノ酸３９〜１９３；配列番号４、配
列番号１８のアミノ酸３９〜１９７；配列番号２０、配列番号３０のアミノ酸３
９〜１８６；配列番号３２、または配列番号４２の３９〜２７７；配列番号４４
）；例えば、ｍＨＶＥＭ２（配列番号４２）のアミノ酸３９〜４５、４０〜４６
、４１〜４７、４２〜４８、４３〜４９、４４〜５０、４５〜５１、４６〜５２
、４７〜５３、４８〜５４、４９〜５５、５０〜５６、５１〜５７、５２〜５８
、５３〜５９、５４〜６０、５５〜６１、５６〜６２、５７〜６３、５８〜６４
、５９〜６５、６０〜６６、６１〜６７、６２〜６８、６３〜６９、６４〜７０
、６５〜７１、６６〜７２、６７〜７３、６８〜７４、６９〜７５、７０〜７６
、７１〜７７、７２〜７８、７３〜７９、７４〜８０、７５〜８１、７６〜８２
、７７〜８３、７８〜８４、７９〜８５、８０〜８６、８１〜８７、８２〜８８
、８３〜８９、８４〜９０、８５〜９１、８６〜９２、８７〜９３、８８〜９４
、８９〜９５、９０〜９６、９１〜９７、９２〜９８、９３〜９９、９４〜１０
０、９５〜１０１、９６〜１０２、９７〜１０３、９８〜１０４、９９〜１０５
、１００〜１０６、１０１〜１０７、１０２〜１０８、１０３〜１０９、１０４
〜１１０、１０５〜１１１、１０６〜１１２、１０７〜１１３、１０８〜１１４
、１０９〜１１５、１１０〜１１６、１１１〜１１７、１１２〜１１８、１１３
〜１１９、１１４〜１２０、１１５〜１２１、１１６〜１２２、１１７〜１２３
、１１８〜１２４、１１９〜１２５、１２０〜１２６、１２１〜１２７、１２２
〜１２８、１２３〜１２９、１２４〜１３０、１２５〜１３１、１２６〜１３２
、１２７〜１３３、１２８〜１３４、１２９〜１３５、１３０〜１３６、１３１
〜１３７、１３２〜１３８、１３３〜１３９、１３４〜１４０、１３５〜１４１
、１３６〜１４２、１３７〜１４３、１３８〜１４４、１３９〜１４５、１４０
〜１４６、１４１〜１４７、１４２〜１４８、１４３〜１４９、１４４〜１５０
、１４５〜１５１、１４６〜１５２、１４７〜１５３、１４８〜１５４、１４９
〜１５５、１５０〜１５６、１５１〜１５７、１５２〜１５８、１５３〜１５９
、１５４〜１６０、１５５〜１６１、１５６〜１６２、１５７〜１６３、１５８
〜１６４、１５９〜１６５、１６０〜１６６、１６１〜１６７、１６２〜１６８
、１６３〜１６９、１６４〜１７０、１６５〜１７１、１６６〜１７２、１６７
〜１７３、１６８〜１７４、１６９〜１７５、１７０〜１７６、１７１〜１７７
、１７２〜１７８、１７３〜１７９、１７４〜１８０、１７５〜１８１、１７６
〜１８２、１７７〜１８３、１７８〜１８４、１７９〜１８５、１８０〜１８６
、１８１〜１８７、１８２〜１８８、１８３〜１８９、１８４〜１９０、１８５
〜１９１、１８６〜１９２、１８７〜１９３、１８８〜１９４、１８９〜１９５
、１９０〜１９６、１９１〜１９７、１９２〜１９８、１９３〜１９９、１９４
〜２００、１９５〜２０１、１９６〜２０２、１９７〜２０３、１９８〜２０４
、１９９〜２０５、２００〜２０６、２０１〜２０７、２０２〜２０８、２０３
〜２０９、２０４〜２１０、２０５〜２１１、２０６〜２１２、２０７〜２１３
、２０８〜２１４、２０９〜２１５、２１０〜２１６、２１１〜２１７、２１２
〜２１８、２１３〜２１９、２１４〜２２０、２１５〜２２１、２１６〜２２２
、２１７〜２２３、２１８〜２２４、２１９〜２２５、２２０〜２２６、２２１
〜２２７、２２２〜２２８、２２３〜２２９、２２４〜２３０、２２５〜２３１
、２２６〜２３２、２２７〜２３３、２２８〜２３４、２２９〜２３５、２３０
〜２３６、２３１〜２３７、２３２〜２３８、２３３〜２３９、２３４〜２４０
、２３５〜２４１、２３６〜２４２、２３７〜２４３、２３８〜２４４、２３９
〜２４５、２４０〜２４６、２４１〜２４７、２４２〜２４８、２４３〜２４９
、２４４〜２５０、２４５〜２５１、２４６〜２５２、２４７〜２５３、２４８
〜２５４、２４９〜２５５、２５０〜２５６、２５１〜２５７、２５２〜２５８
、２５３〜２５９、２５４〜２６０、２５５〜２６１、２５６〜２６２、２５７
〜２６３、２５８〜２６４、２５９〜２６５、２６０〜２６６、２６１〜２６７
、２６２〜２６８、２６３〜２６９、２６４〜２７０、２６５〜２７１、２６６
〜２７２、２６７〜２７３、２６８〜２７４、２６９〜２７５、２７０〜２７６
、２７１〜２７７が挙げられる。
【０１４２】 従って、本発明の別の局面は、抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体に関する
。用語「抗体」とは、本明細書中で用いられる場合、免疫グロブリン分子および
免疫学的に活性な免疫グロブリン分子の一部（すなわち、抗原を特異的に結合す
る抗原結合部位を含む分子（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター））をいう
。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターに特異的に結合する分子は、ＴＡＮＧＯ−６９
−レセプターを結合する分子であるが、天然にＴＡＮＧＯ−６９−レセプターを
含むサンプル（例えば、生物学的サンプル）中の他の分子とは実質的に結合しな
い。免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分の例としては、酵素（例えば、
ペプシン）で抗体を処理することにより生成され得るＦ（ａｂ）フラグメントお
よびＦ（ａｂ’）2フラグメントが挙げられる。本発明は、ＴＡＮＧＯ−６９−
レセプターを結合するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を提供する
。用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」とは、本明
細書中で使用される場合、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの特定のエピトープと
免疫反応し得る抗原結合部位の１種のみを含む抗体分子の集団をいう。従って、
モノクローナル抗体組成物は、代表的には、これが免疫反応する特定のＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプタータンパク質に対する単一の結合親和性を提示する。
【０１４３】 ポリクローナル抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体は、適切な被験体にＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプター免疫原を免疫することにより、上記のように調製され
得る。免疫した被験体における抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体力価は、標
準的技術により（例えば、固定化したＴＡＮＧＯ−６９−レセプターを用いる酵
素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて）経時的にモニターされ得る。
所望であれば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターに対する抗体分子は、哺乳動物か
ら（例えば、血液から）単離され得、そしてさらに周知の技術（例えば、ＩｇＧ
画分を得るためのタンパク質のクロマトグラフィー）により精製され得る。免疫
後、適切な時間に、例えば、抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体の力価が最も
高いときに、抗体生成細胞を被験体から獲得し得、そしてこれを使用して、標準
的技術（例えば、初めは、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎ
ａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７により記載されたハイブリドーマ技術、ヒ
トＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔ
ｏｄａｙ ４：７２）、ＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら（１９８５）、
Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅ
ｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，７７−９６頁）またはトリオー
マ（ｔｒｉｏｍａ）技術）によりモノクローナル抗体を調製し得る。ハイブリド
ーマを生成する技術は、周知である（一般には、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃ
ｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９４）Ｃｏｌｉｇａｎら（編）、Ｊ
ｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこ
と）。簡潔には、不死化細胞株（代表的には骨髄腫細胞）を、上記のようにＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプター免疫原で哺乳動物由来の免疫したリンパ球（代表的に
は、脾臓細胞）と融合し、そして得られたハイブリドーマ細胞の培養上清をスク
リーニングして、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターを結合するモノクローナル抗体
を生成するハイブリドーマを同定する。
【０１４４】 リンパ球と不死化細胞株とを融合するために使用される任意の多くの周知のプ
ロトコルは、抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターモノクローナル抗体を生成する目
的で適用され得る（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ、前出；Ｇａｌｆｒｅら（１９７７）Ｎａｔｕｒｅ ２６６：
５５０−５２；Ｒ．Ｈ．Ｋｅｎｎｅｔｈ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ Ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａ
ｎａｌｙｓｅｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｒｐ．，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８０）；およびＬｅｒｎｅｒ（１９８１）Ｙ
ａｌｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，５４：３８７−４０２を参照のこと）。さら
に、当業者は、このような方法の多くのバリエーションが存在することを理解し
、これらは、やはり有用である。代表的には、不死化細胞株（例えば、骨髄腫細
胞株）はリンパ球と同じ哺乳動物種に由来する。例えば、マウスハイブリドーマ
は、本発明の免疫原性調製物を免疫したマウス由来のリンパ球と不死化マウス細
胞株（例えば、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含む培養培地
（「ＨＡＴ培地」）に感受性である骨髄腫細胞株）とを融合することにより作製
され得る。任意の多くの骨髄腫細胞株は、標準的技術に従う融合パートナーとし
て使用され得る（例えば、Ｐ３−ＮＳ１／１−Ａｇ４−１、Ｐ３−ｘ６３−Ａｇ
８．６５３またはＳｐ２／Ｏ−Ａｇ１４骨髄腫株）。これらの骨髄腫株は、ＡＴ
ＣＣから入手可能である。代表的には、ＨＡＴ感受性マウス骨髄腫細胞を、ポリ
エチレングリコール（「ＰＥＧ」）を使用してマウス脾臓細胞に融合する。次い
で、融合から得られたハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地を用いて選択する（こ
のことにより、融合していない細胞および生成性でない融合骨髄腫細胞は死ぬ（
融合していない脾臓細胞は、形質転換していないので数日後に死ぬ））。本発明
のモノクローナル抗体を生成するハイブリドーマ細胞は、ＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプターを結合する抗体について、ハイブリドーマ培養上清をスクリーニングす
ることにより（例えば、標準的ＥＬＩＳＡアッセイを使用して）検出される。
【０１４５】 モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマを調製するかわりに、モノクローナル
抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体を同定し得、そして組換えコンビナトリア
ル免疫グロブリンライブラリー（例えば、抗体ファージディスプレイライブラリ
ー）をＴＡＮＧＯ−６９−レセプターを用いてスクリーニングすることにより単
離し得、それによってＴＡＮＧＯ−６９−レセプターを結合する免疫グロブリン
ライブラリーメンバーを単離し得る。ファージディスプレイライブラリーを生成
し、そしてスクリーニングするためのキットは、市販されている（例えば、ｔｈ
ｅ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｈａｇｅ Ａｎｔｉｂｏ
ｄｙ Ｓｙｓｔｅｍ，カタログ番号２７−９４００−０１；およびｔｈｅ Ｓｔ
ｒａｔａｇｅｎｅ ＳｕｒｆＺＡＰTM Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ Ｋｉｔ，
カタログ番号２４０６１２）。さらに、抗体ディスプレイライブラリーを生成し
、そしてスクリーニングする際の使用に特になじみやすい方法および試薬の例は
、例えば、米国特許第５，２２３，４０９号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１８６
１９；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１７２７１；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２０７
９１；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１５６７９；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０１２
８８；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０１０４７；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０９６
９０；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９０／０２８０９；Ｆｕｃｈｓら（１９９１）Ｂｉｏ
／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙら（１９９２）Ｈｕ
ｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３：８１−８５；Ｈｕｓｅら（１
９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら
（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５−７３４に見出され得る。
【０１４６】 さらに、ヒトおよび非ヒト部分の両方を含む組換え抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プター抗体（例えば、キメラおよびヒト化モノクローナル抗体）は、本発明の技
術範囲内であり、これは、標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて作製され得る。こ
のようなキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、当該分野で公知の組換えＤ
ＮＡ技術により（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８７／０２６７１；欧州特許出願
１８４，１８７号；欧州特許出願１７１，４９６号；欧州特許出願１７３，４９
４号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８６／０１５３３；米国特許第４，８１６，５６７号
；欧州特許出願１２５，０２３号；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４０：１０４１−１０４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉ
ｍｕｒａら（１９８７）Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄ
ら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６−４４９；およびＳｈａｗら（１
９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９；
Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−１２０７；
Ｏｉら（１９８６）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；米国特許第５
，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２
−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３
４；およびＢｅｉｄｌｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５
３−４０６０に記載される方法を使用して）生成され得る。
【０１４７】 完全に、ヒト抗体は、ヒト患者の治療的処置のために特に望ましい。このよう
な抗体は、内因性免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現できないが、ヒト
重鎖および軽鎖遺伝子を発現し得るトランスジェニックマウスを用いて生成され
得る。このトランスジェニックマウスは、選択された抗原（例えば、ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターの全てまたは一部分）を用いて通常の様式で免疫される。こ
の抗原に対するモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を用いて得ら
れ得る。トランスジェニックマウスにより保有されるこのヒト免疫グロブリン導
入遺伝子は、Ｂ細胞分化の間に再配置され、そして続いてクラススイッチおよび
体細胞変異を受ける。従って、このような技術を用いて、治療的に有用なＩｇＧ
、ＩｇＡおよびＩｇＥ抗体を生成することは可能である。ヒト抗体を精製するた
めのこの技術の外観については、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ（１９９５
，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３）を参照のこと。ヒト抗
体およびヒトモノクローナル抗体を生成することに関するこの技術についての詳
細な議論については、例えば、米国特許第５，６２５，１２６号；米国特許第５
，６３３，４２５号；米国特許第５，５６９，８２５号；米国特許第５，６６１
，０１６号；および米国特許第５，５４５，８０６号を参照のこと。さらに、Ａ
ｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）のような会社は、上記に記
載の技術に類似の技術を使用する選択された抗体に対するヒト抗体を提供するこ
とを保証し得る。
【０１４８】 完全に、選択されたエピトープを認識するヒト抗体は、「導かれた選択」とし
て言及される技術を用いて生成され得る。このアプローチにおいて、選択された
非ヒトモノクローナル抗体（例えば、マウス抗体）を使用して、完全に、同じエ
ピトープを認識するヒト抗体の選択を導く。
【０１４９】 第１に、選択された抗原（エピトープ）を結合する非ヒトモノクローナル抗体
（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性を阻害する抗体）が同定される。
非ヒト抗体の重鎖および軽鎖はクローニングされ、そしてこれを使用してファー
ジディスプレイＦａｂフラグメントを作製する。例えば、重鎖遺伝子は、重鎖が
細菌から分泌され得るように、プラスミドベクターへクローニングされ得る。軽
鎖遺伝子は、軽鎖がファージの表面上に発現され得るように、ファージコートタ
ンパク質遺伝子にクローニングされ得る。ファージに融合したヒト軽鎖レパート
リー（無作為収集物）を使用して、非ヒト重鎖を発現する細菌に感染させる。得
られる子孫ファージは、ハイブリッド抗体（ヒト軽鎖／非ヒト重鎖）を提示する
。選択された抗原をパニングスクリーニングにおいて使用して、選択された抗原
に結合するファージを選択する。このようなファージを同定するために、数回の
選択が必要であり得る。次いで、ヒト軽鎖遺伝子は、選択された抗原を結合する
選択されたファージから単離される。次いで、これらの選択されたヒト軽鎖遺伝
子を使用して、以下のとおり、ヒト重鎖遺伝子の選択を導く。選択されたヒト軽
鎖遺伝子は、細菌による発現のためにベクターに挿入される。選択されたヒト軽
鎖を発現する細菌を、ファージに融合されたヒト重鎖のレパートリーで感染させ
る。得られる子孫ファージは、ヒト抗体（ヒト軽鎖／ヒト重鎖）を提示する。
【０１５０】 次いで、選択された抗原をパニングスクリーニングにおいて使用して、選択さ
れた抗原を結合するファージを選択する。この工程で選択されたファージは、完
全に、最初に選択された非ヒトモノクローナル抗体により認識される同じエピト
ープを認識するヒト抗体を提示する。重鎖および軽鎖の両方をコードする遺伝子
は、容易に単離され、そしてヒト抗体を生成するためにさらに操作され得る。こ
の技術は、Ｊｅｓｐｅｒｓら（１９９４，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２
：８９９−９０３）に記載される。
【０１５１】 抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体（例えば、モノクローナル抗体）を使用
して、標準的技術（例えば、アフィニティークロマトグラフィーもしくは免疫沈
降）によりＴＡＮＧＯ−６９−レセプターを単離し得る。抗ＴＡＮＧＯ−６９−
レセプター抗体は、細胞からの天然のＴＡＮＧＯ−６９−レセプターおよび宿主
細胞中で発現される、組換え生成されたＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの生成を
容易にし得る。さらに、抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体を使用して、ＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の発現量および発現パターンを評価するた
めに、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質（例えば、細胞溶解物または細
胞上清において）を検出し得る。抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体を、例え
ば、診断的に使用して、（例えば、所定の処置レジメンの有効性を決定するため
に）臨床試験手順の一部として、組織中のタンパク質レベルをモニターし得る。
検出可能な物質に抗体を結合することにより、検出は容易になり得る。検出可能
な物質の例としては、種々の酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光物質、生物発光
物質、および放射活性物質が挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビ
ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはア
セチルコリンエステラーゼが挙げられ；適切な補欠分子団の例としては、ストレ
プトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ；適切な蛍光物質
の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシ
アネート、ローダミン、ジクロロトリアジニラミン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉａ
ｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）、フルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリ
トリンが挙げられ；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ；生物発光物
質としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンが挙げられ、そ
して適切な放射活性物質の例としては、125Ｉ、131Ｉ、35Ｓまたは3Ｈが挙げら
れる。
【０１５２】 （ＩＩＩ．組換え発現ベクターおよび宿主細胞） 本発明の別の局面は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターをコードする核酸（また
はその一部）を含む、ベクター、好ましくは発現ベクターに関する。本明細書中
で用いられる場合、用語「ベクター」とは、それに連結された別の核酸を輸送し
得る核酸分子をいう。１つの型のベクターは、「プラスミド」であり、これはさ
らなるＤＮＡセグメントを連結し得る環状二本鎖ＤＮＡループをいう。別の型の
ベクターは、ウイルスベクターであり、ここで、さらなるＤＮＡセグメントが、
ウイルスゲノムに連結され得る。特定のベクターは、それらが導入される宿主細
胞中で自発的に複製し得る（例えば、細菌の複製起点を有するウイルスベクター
またはエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺
乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際に、宿主細胞のゲノムへと組み込ま
れ、それにより宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターである発
現ベクターは、それらに作動可能に連結される遺伝子の発現を指向し得る。一般
に、発現ベクターの組換えＤＮＡ技術における有用性は、しばしばプラスミド（
ベクター）の形態である。しかし、本発明は、このような他の形態の発現ベクタ
ー（例えば、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイ
ルスおよびアデノ随伴ウイルス）、これらは等価な機能に貢献する）を含むよう
に意図される。
【０１５３】 本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における核酸の発現に適した形態の
本発明の核酸を含む。このことは、発現のために用いられるべき宿主細胞に基づ
き選択されて、組換え発現ベクターが、１以上の調節配列を含むことを意味し、
これは発現されるべき核酸配列に作動可能に連結される。組換え発現ベクター内
で、「作動可能に連結した」とは、目的のヌクレオチド配列が、調節配列にヌク
レオチド配列の発現を可能にする様式（例えば、インビトロでの転写／翻訳系に
おいて、またはベクターが宿主細胞に導入される場合に宿主細胞において）で連
結されるという意味を意図する。用語「調節配列」とは、プロモーター、エンハ
ンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含
むことを意図される。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎ
ｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅ
ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ，ＣＡ（１９９０）に記載される。調節配列は、多くの型の宿主細胞におい
てヌクレオチド配列の構成的発現を指向するもの、ならびに特定の宿主細胞にお
いてのみヌクレオチド配列の発現を指向するもの（例えば、組織特異的調節配列
）を含む。発現ベクターの設計は、形質転換されるべき宿主細胞の選択、所望の
タンパク質の発現のレベルなどのような要素に依存し得ることは当業者に理解さ
れる。本発明の発現ベクターは、宿主細胞に導入され得、それによって本明細書
中に記載されるような核酸によってコードされるタンパク質またはペプチド（融
合タンパク質もしくはペプチドを含む）（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ータンパク質、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの変異形態、融合タンパク質など
）を産生する。
【０１５４】 本発明の組換え発現ベクターは、原核生物細胞または真核生物細胞（例えば、
Ｅ．ｃｏｌｉのような細菌細胞、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを用
いる）、酵母細胞または哺乳動物細胞）においてＴＮＡＧＯ−６９−レセプター
を発現するために設計され得る。適切な宿主細胞は、Ｇｏｅｄｄｅｌ（前出）に
おいてさらに議論される。あるいは、組換え発現ベクターは、インビトロで、例
えば、Ｔ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリメラーゼを用いて転写および翻
訳され得る。
【０１５５】 原核生物細胞におけるタンパク質の発現は、融合タンパク質もしくは非融合タ
ンパク質のいずれかの発現を指向する構成的プロモーターまたは誘導性プロモー
ターを含むベクターを用いてＥ．ｃｏｌｉにおいて、最もよく行われ得る。 融合ベクターは、多くのアミノ酸を、そこにコードされるタンパク質に、通常組
換えタンパク質のアミノ酸末端に付加する。このような融合ベクターは、代表的
には、以下の３つの目的に貢献する：１）組換えタンパク質の発現の増大；２）
組換えタンパク質の溶解性の増大；および３）アフィニティー精製においてリガ
ンドとして作用することによる組換えタンパク質の精製の援助。しばしば、融合
発現ベクターにおいて、タンパク分解切断部位は、融合部分由来の組換えタンパ
ク質の分離を可能にし、次いで融合タンパク質を精製するために、融合部分およ
び組換えタンパク質の接合部に導入される。このような酵素、およびそれらの同
族の認識配列としては、Ｘａ因子、トロンビンおよびエンテロキナーゼが挙げら
れる。代表的な融合発現ベクターとしては、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ；ＳｍｉｔｈおよびＪｈｏｎｓｏｎ（１９８８）Ｇｅｎｅ
６７：３１−４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，
Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔ
ａｗａｙ，ＮＪ）（これらは、それぞれ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ
（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡを標的組換えタ
ンパク質に融合する）が挙げられる。
【０１５６】 適切な誘導性非融合Ｅ．ｃｏｌｉの例としては、ｐＴｒｃ（Ａｍａｎｎら、（
１９８８）Ｇｅｎｅ ６９：３０１−３１５）およびｐＥＴ １１ｄ（Ｓｔｕｄ
ｉｅｒら、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈ
ｏｄ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，
Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（１９９０）６０−８９）が挙げら
れる。ｐＴｒｃベクターからの標的遺伝子の発現は、ハイブリットｔｒｐ−ｌａ
ｃ融合プロモーターからの宿主ＲＮＡポリメラーゼ転写に依存する。ｐＥＴ １
１ｄベクターからの標的遺伝子の発現は、同時発現したウイルスＲＮＡポリメラ
ーゼ（Ｔ７ ｇｎｌ）によって媒介されるＴ７ｇｎ１０−ｌａｃ融合プロモータ
ーからの転写に依存する。このウイルスポリメラーゼは、ｌａｃＵＶ５プロモー
ターの転写制御下のＴ７ ｇｎ１遺伝子を有する常在性（ｒｅｓｉｄｅｎｔ）？
プロファージ由来の宿主株ＢＬ２１（ＤＥ３）またはＨＭＳ１７４（ＤＥ３）に
よって供給される。
【０１５７】 Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換えタンパク質の発現を最大にするための１つのスト
ラテジーは、組換えタンパク質をタンパク分解的に切断するのに障害のある能力
を有する宿主細菌においてタンパク質を発現することである（Ｇｏｔｔｅｓｍａ
ｎ，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａ
ｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（１９９０）１１９−１２８）。別のス
トラテジーは、発現ベクターに挿入されるべき核酸の核酸配列を変化させて、各
アミノ酸についての個々のコドンをＥ．ｃｏｌｉにおいて優先的に利用させるこ
とである（Ｗａｄａら、（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２
０：２１１１−２１１８）。本発明の核酸配列のこのような変化は、標準的なＤ
ＮＡ合成技術によって行われ得る。
【０１５８】 別の実施態様において、ＴＮＧＯ−６９−レセプター発現ベクターは、酵母発
現ベクターである。酵母Ｓ．ｃｅｒｉｖｉｓａｅにおける発現のためのベクター
の例としては、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら、（１９８７）ＥＭＢＯ
Ｊ．６：２２９−２３４）、ｐＭＦａ（ＫｕｒｊａｎおよびＨｅｒｓｋｏｗｉｔ
ｚ，（１９８２）Ｃｅｌｌ ３０：９３３−９４３）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕ
ｌｔｚら、（１９８７）Ｇｅｎｅ ５４：１１３−１２３）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）およ
びｐＰｉｃＺ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）
が挙げられる。
【０１５９】 あるいは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターは、バキュロウイルス発現ベクター
を用いて昆虫細胞で発現され得る。培養された昆虫細胞（例えば、Ｓｆ ９細胞
）におけるタンパク質の発現に利用可能なバキュロウイルスとしては、ｐＡｃシ
リーズ（Ｓｍｉｔｈら、（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３：２１５
６−２１６５）およびｐＶＬシリーズ（ＬｕｃｋｌｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（
１９８９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９）が挙げられる。
【０１６０】 なお別の実施態様では、本発明の核酸は、哺乳動物発現ベクターを用いて哺乳
動物細胞において発現される。哺乳動物発現ベクターの例としては、ｐＣＤＭ８
（Ｓｅｅｄ（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ３２９：８４０およびｐＭＴ２ＰＣ（Ｋａ
ｕｆｍａｎら、（１９８７）ＥＭＢＯ Ｊ．６：１８７−１９５）が挙げられる
。 哺乳動物細胞で用いられる場合、発現ベクターの制御機能は、ウイルス調節エレ
メントによって、しばしば提供される。例えば、一般に用いられるプロモーター
は、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス、およびシミアンウ
イルス４０に由来する。原核生物細胞および真核生物細胞の両方に適切な他の発
現系については、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出の１６章および１７章を参照のこと
。
【０１６１】 別の実施態様では、組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞型において優
先的な核酸の発現を指向し得る（例えば、組織特異的調節エレメントが核酸の発
現に用いられる）。組織特異的調節エレメントは、当該分野で公知である。適切
な組織特異的プロモーターの非制限的な例としては、アルブミンプロモーター（
肝臓特異的；Ｐｉｎｋｅｒｔら、（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｄｅｖ．１：２６８−
２７７）、リンパ節特異的プロモーター（ＣａｌａｍｅおよびＥａｔｏｎ（１９
８８）Ａｄｖ．Ｉｍｕｎｏｌ．４３：２３５−２７５）、特にＴ細胞レセプター
のプロモーター（ＷｉｎｏｔｏおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８９）ＥＭＢＯ
Ｊ．８：７２９−７３３）および免疫グロブリン（Ｂａｎｅｒｊｉら、（１９
８３）Ｃｅｌｌ ３３：７２９−７４０；ＱｕｅｅｎおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ
（１９８３）Ｃｅｌｌ ３３：７４１−７４８）、ニューロン特異的プロモータ
ー（例えば、神経フィラメントプロモーター；ＢｙｒｎｅおよびＲｕｄｄｌｅ（
１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：５４７２−
５４７７）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄら、（１９８５）Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２３０：９１２−９１６）、ならびに乳腺特異的プロモーター（例えば
、乳清プロモーター；米国特許第４，８７３，３１６号および欧州出願公開第２
６４，１６６号が挙げられる。発達を調節するプロモーターもまた含まれる（例
えば、マウスｈｏｘプロモーター（ＫｅｓｓｅｌおよびＧｒｕｓｓ（１９９０）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３７４−３７９）およびα−フェトプロテインプロモ
ーター（ＣａｍｐｅｓおよびＴｉｌｇｈｍａｎ（１９８９）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ
．３：５３７−５４６）。
【０１６２】 本発明はさらに、アンチセンス配向で発現ベクターへとクローン化された本発
明のＤＮＡ分子を含む組換え発現ベクターを提供する。すなわち、ＤＮＡ分子は
、ＴＮＡＧＯ−６９−レセプターｍＲＮＡに対するアンチセンスであるＲＮＡ分
子の（ＤＮＡ分子の転写による）発現を可能にする様式で、調節配列に作動可能
に連結される。アンチセンス配向でクローン化された核酸に作動可能に連結した
調節配列は、種々の細胞型においてアンチセンスＲＮＡ分子の連続発現を指向す
るように選択され得る（例えば、ウイルスプロモーターおよび／またはエンハン
サー、あるいは調節配列は、アンチセンスＲＮＡの構成的な組織特異的発現また
は細胞型特異的発現を指向するように選択され得る）。アンチセンス発現ベクタ
ーは、組換えプラスミド、ファージミド、または弱毒化ウイルスの形態であり得
る。ここで、アンチセンス核酸は、高効率調節領域の制御下で生成され、これら
の活性は、ベクターが導入される細胞型によって決定され得る。アンチセンス遺
伝子を用いる遺伝子発現の調節の議論については、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂら（Ｒｅ
ｖｉｅｗｓ−Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，第１（１）巻１９８６）
を参照のこと。
【０１６３】 本発明の別の局面は、本発明の組換え発現ベクターが導入された宿主細胞に関
する。用語「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本明細書中で交換可能に
用いられる。このような用語は、特定の対象細胞のことをいうのみならず、この
ような細胞の子孫または潜在的子孫のこともいうことが理解される。特定の改変
は、変異または環境的影響のいずれかのために、次の連続する世代で生じ得ので
、このような子孫は、実際、親細胞と同一でないかもしれないが、本明細書中で
用いられる場合、この用語の範囲内になおも含まれる。
【０１６４】 宿主細胞は、原核生物細胞または真核生物細胞のいずれかであり得る。例えば
、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌ
ｉ）、昆虫細胞、酵母細胞、または哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムス
ター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＣＯＳ細胞）において発現され得る。他の適切な
宿主細胞は、当業者に公知である。
【０１６５】 ベクターＤＮＡは、従来の形質転換またはトランスフェクション技術を介して
原核生物細胞または真核生物細胞へと導入され得る。本明細書中で用いられる場
合、用語「トランスジェニック」および「トランスフェクション」とは、宿主細
胞に外因性核酸（例えば、ＤＮＡ）を導入するための種々の当該分野で認識され
る技術（リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラ
ン−媒介トランスフェクション、リポフェクチン、またはエレクトロポレーショ
ンを含む）をいうことが意図される。宿主細胞を形質転換またはトランスフェク
トする適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（前出）、および他の実験マニュア
ルにおいて見出され得る。
【０１６６】 哺乳動物細胞の安定なトランスフェクションのために、発現ベクターおよび用
いられるトランスフェクション技術に依存して、細胞の小さな画分のみが、それ
らのゲノムへと外因性ＤＮＡを組み込み得ることが公知である。これらの成分を
同定および選択するために、選択可能なマーカー（例えば、抗生物質に対する耐
性について）をコードする遺伝子は、一般に目的の遺伝子と共に宿主細胞へと導
入される。好ましい選択可能なマーカーとしては、薬物に対する耐性を与えるも
の（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、およびメトトレキセート）が挙げら
れる。選択可能なマーカーをコードする核酸は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
をコードするベクターと同じベクターで宿主細胞に導入され得るか、または別々
のベクターを導入され得る。導入された核酸を用いて安定にトランスフェクトさ
れた細胞は、薬物選択（例えば、選択可能なマーカーが組み込まれた細胞は生存
するが、他の細胞は死ぬ）によって同定され得る。
【０１６７】 本発明の宿主細胞（例えば、培養中の原核生物宿主細胞または真核生物宿主細
胞）は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質を産生する（すなわち、発現
する）ために用いられ得る。従って、本発明は、さらに本発明の宿主細胞を用い
てＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質を産生するための方法を提供する。
１つの実施態様では、この方法は、本発明の宿主細胞（ＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プターをコードする組換え発現ベクターが導入された）を、ＴＡＮＧＯ−６９−
レセプタータンパク質が産生されるような適切な培地において培養する工程を包
含する。別の実施態様では、本方法は、培地または宿主細胞からＴＡＮＧＯ−６
９−レセプターを単離する工程をさらに包含する。
【０１６８】 本発明の宿主細胞はまた、非ヒトトランスジェニック動物を産生するために用
いられ得る。例えば、１つの実施態様では、本発明の宿主細胞は、ＴＡＮＧＯ−
６９−レセプターコード配列が導入された受精卵母細胞または胚性幹細胞である
。次いで、このような宿主細胞は、外因性のＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列
が動物のゲノムに導入された非ヒトトランスジェニック動物、または外因性のＴ
ＡＮＧＯ−６９−レセプター配列が変化された相同組換え動物を作製するために
用いられ得る。このような動物は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの機能および
／または活性を研究するため、ならびにＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性のモ
ジュレーターを同定するおよび／または評価するために有用である。本明細書中
で用いられる場合、「トランスジェニック動物」は、非ヒト動物、好ましくは哺
乳動物、より好ましくは、ラットまたはマウスのようなげっ歯類動物であり、こ
こでこれらの動物の１つ以上の細胞が、導入遺伝子を含む。トランスジェニック
動物の他の例としては、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ヤギ、ニワトリ、
両生類などが挙げられる。導入遺伝子は、外因性ＤＮＡであり、これは、トラン
スジェニック動物が発生しかつ成熟した動物のゲノムに残存する細胞のゲノムへ
と組み込まれ、それによってトランスジェニック動物の１つ以上の細胞型または
組織においてコードされた遺伝子産物の発現を指向する。本明細書中で用いられ
る場合、「相同組換え動物」とは、非ヒト動物、好ましくは哺乳動物、より好ま
しくはマウスであり、ここで内因性のＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子は、
内因性の遺伝子と、動物の発生の前に、動物の細胞（例えば、動物の胚細胞）へ
と導入された外因性のＤＮＡ分子との間での相同組換えによって改変されている
。
【０１６９】 本発明のトランスジェニック動物は、例えば、マイクロインジェクション、レ
トロウイルス感染、および卵母細胞を偽妊娠雌性里親動物において発生させるこ
とによって、受精卵母細胞の雄性前核へとＴＡＮＧＯ−６９−レセプターコード
核酸を導入することによって作製され得る。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｃＤ
ＮＡ配列（例えば、（配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９、
配列番号２９、配列番号３１、配列番号４１、配列番号４３、ＡＴＣＣ ９８８
２１のｃＤＮＡのヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ ２０７１７３のｃＤＮＡのヌク
レオチド配列、またはＡＴＣＣ ２０７１７２のｃＤＮＡのヌクレオチド配列、
ＡＴＣＣ ２０７１７１のｃＤＮＡのヌクレオチド配列）の配列）は、非ヒト動
物のゲノムに導入遺伝子として導入され得る。あるいは、ヒトＴＡＮＧＯ−６９
−レセプター遺伝子の非ヒトホモログ（例えば、マウスＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プター遺伝子）は、ヒトＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｃＤＮＡへのハイブリダ
イゼーションに基づいて単離され得、そして導入遺伝子として用いられ得る。イ
ントロン配列およびポリアデニル化シグナルはまた、導入遺伝子の発現の効率を
増加させるために導入遺伝子中に含まれ得る。組織特異的調節配列は、特定の細
胞に対してＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の発現を指向するために、
ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター導入遺伝子に作動可能に連結され得る。胚操作お
よびマイクロインジェクションを介してトランスジェニック動物（特にマウスの
ような動物）を生成するための方法は、当該分野において慣習的になっており、
そして例えば、米国特許第４，７３６，８６６号、米国特許第４，８７０，００
９号、米国特許第４，８７３，１９１号、およびＨｏｇａｎ，Ｍａｎｉｐｕｌａ
ｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８６）に記載される。類似の方法は、他のトランス
ジェニック動物の産生のために用いられる。トランスジェニック創始動物は、そ
のゲノムにおけるＴＡＮＧＯ−６９−レセプター導入遺伝子の存在および／また
はこの動物の組織もしくは細胞におけるＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｍＲＮＡ
の発現に基づいて同定され得る。次いで、トランスジェニック創始動物は、導入
遺伝子を有するさらなる動物を育種するために用いられる。さらにＴＡＮＧＯ−
６９−レセプターをコードする導入遺伝子を有するトランスジェニック動物は、
さらに、他の導入遺伝子を有する他のトランスジェニック動物と交配され得る。
【０１７０】 相同組換え動物を作製するために、ベクターが調製され、これは、ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプター遺伝子（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子のヒ
トまたは非ヒトホモログ、例えば、マウスＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子
）の少なくとも一部を含み、ここに、欠失、付加、または置換が導入されて、そ
れによってＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子を変化させる（例えば、機能的
に破壊する）。好ましい実施態様では、このベクターは、相同組換えの際に、内
因性ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子が機能的に破壊される（すなわち、も
はや、機能的タンパク質をコードしない；「ノックアウト」ベクターともいわれ
る）ように設計される。あるいは、このベクターは、相同組換えの際に、内因性
ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子が変異されるかそうでなければ変化される
が、まだ機能的タンパク質をコードする（例えば、上流の調節領域が、変化され
て、それによって内因性ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の発現が変化
され得る）ように設計される。相同組換えベクターにおいて、ＴＡＮＧＯ−６９
−レセプター遺伝子の変化した部分は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子の
さらなる核酸によって、その５’および３’末端に隣接されて、相同組換えを、
ベクターによって運ばれる外因性ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子と、胚性
幹細胞中の内因性ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子との間で生じさせる。さ
らなる隣接ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸は、内因性遺伝子との首尾良い相
同組換えのために十分な長さのものである。代表的には、隣接ＤＮＡ（５’およ
び３’両末端）の数キロ塩基が、ベクター中に含まれる（例えば、相同組換えベ
クターの記載については、ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ（１９８７）Ｃ
ｅｌｌ ５１：５０３を参照のこと）。このベクターは、胚性幹細胞株に（例え
ば、エレクトロポレーションによって）導入され、そして導入されたＴＡＮＧＯ
−６９−レセプター遺伝子が内因性ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子と相同
組換えされた細胞が選択される（例えば、Ｌｉら、（１９９２）Ｃｅｌｌ ６９
：９１５を参照のこと）。次いで、選択される細胞は、動物（例えば、マウス）
の胚盤胞へ注入されて、凝集キメラを形成する（例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ，Ｔｅ
ｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅ
ｌｌｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編、
（ＩＲＬ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８７）１１３−１５２頁を参照のこと）。次いで
、キメラ胚は、適切な偽妊娠雌性里親動物へと移植され得、そしてこの胚は出産
予定日をむかえる。それらの生殖細胞において相同組換えされたＤＮＡを保有す
る子孫は、動物の全ての細胞が導入遺伝子の生殖細胞系伝達によって相同組換え
されたＤＮＡを含む動物を交配するために用いられ得る。相同組換えベクターお
よび相同組換え動物を構築するための方法は、Ｂｒａｄｌｅｙ（１９９１）Ｃｕ
ｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２：８２
３−８２９、ならびにＰＣＴ公報番号ＷＯ ９０／１１３５４、ＷＯ ９１／０
０１１４０、ＷＯ ９２／０９６８、およびＷＯ ９３／０４１６９にさらに記
載される。
【０１７１】 別の実施態様では、トランスジェニック非ヒト動物が産生されて、この動物は
導入遺伝子の調節された発現を可能にする選択された系を含む。このような系の
１つの例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系であ
る。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系の記載については、例えば、Ｌａｋｓｏ
ら、（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：６２
３２−６２３６を参照のこと。リコンビナーゼ系の別の例は、Ｓａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコンビナーゼ系である（Ｏ’Ｇｏ
ｒｍａｎら、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３５１−１３５５）。ｃ
ｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系が、導入遺伝子の発現を調節するために用いら
れる場合、Ｃｒｅリコンビナーゼおよび選択されたタンパク質の両方をコードす
る導入遺伝子を含む動物が、必要とされる。このような動物は、２つのトランス
ジェニック動物（一方は、選択されるタンパク質をコードする導入遺伝子を含み
、そして他方は、リコンビナーゼをコードする導入遺伝子を含む）を交配するこ
とによる「二重」導入遺伝子動物の構築を通じて提供され得る。
【０１７２】 本明細書中に記載される非ヒトトランスジェニック動物のクローンはまた、Ｗ
ｉｌｍｕｔら、（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８１０−８１３およびＰＣ
Ｔ公報番号ＷＯ ９７／０７６６８およびＷＯ ９７／０７６６９に記載される
方法に従って産生され得る。
【０１７３】 （ＩＶ．薬学的組成物） 本発明のＴＡＮＧＯ−６９レセプター核酸分子、ＴＡＮＧＯ−６９レセプター
タンパク質、および抗ＴＡＮＧＯ−６９レセプター抗体（本明細書中で「活性化
合物」ともいわれる）は、投与に適切な薬学的組成物中に取り込まれる。このよ
うな組成物は、代表的には、核酸分子、タンパク質、または抗体および薬学的に
受容可能なキャリアを含む。本明細書中で使用される場合、言語「薬学的に受容
可能なキャリア」は、薬学的投与に適合性の任意および全ての溶媒、分散媒体、
コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤ならびに吸収遅延剤などを含むこ
とが意図される。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用
は、当該分野において周知である。任意の従来の媒体または薬剤がこの活性化合
物と非適合性である範囲を除いて、この組成物におけるそれらの使用が意図され
る。補助的な活性化合物はまた、この組成物中に取り込まれ得る。
【０１７４】 本発明の薬学的組成物は、投与のその意図された経路と適合性であるように処
方される。投与の経路の例には、非経口投与（例えば、静脈内投与）、皮内投与
、皮下投与、経口投与（例えば、吸入投与）、経皮投与（局所投与）、経粘膜投
与、および直腸投与が挙げられる。非経口適用、皮内適用または皮下適用に使用
される溶液および懸濁液には、以下の成分が挙げられ得る：滅菌希釈剤（例えば
、注射用水、生理食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、
プロピレングリコールまたは他の合成溶媒）；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコ
ールまたはメチルパラベン）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または亜硫酸
水素ナトリウム）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）；緩衝液（
例えば、アセテート、シトレート、またはホスフェート）、および張度を調整す
るための薬剤（例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース）。ｐＨは、酸ま
たは塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）で調節され得る。非経口調製
物は、ガラスまたはプラスチックから作製されるアンプル、使い捨てシリンジ、
または複数容量のバイアル中に含まれ得る。
【０１７５】 注射用の使用に適切な薬学的組成物は、滅菌注射溶液または分散液の即時調製
物のための滅菌水溶液（ここでは水溶性）または分散液、および滅菌粉末を含む
。静脈内注射については、適切なキャリアには、生理学的な生理食塩水、静菌水
、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬTM（ＢＡＳＦ；Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）また
はリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合では、この組成
物は、滅菌されなければならず、そして容易なシリンジ能力（ｓｙｒｉｎｇａｂ
ｉｌｉｔｙ）が存在する程度にまで流動的にされるべきである。これは製造およ
び貯蔵の条件下で安定でなければならず、そして微生物（例えば、細菌および真
菌）の汚染作用に対して保存されなければならない。このキャリアは、溶媒また
は分散培地（例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プ
ロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなどを含む）、ならび
にそれらの安定な混合物であり得る。適切な流動性は、例えば、コーティングの
使用（例えば、レシチン）によって、分散の場合に必要とされる粒子サイズの維
持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の予
防は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フ
ェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）によって達成され得る。多くの
場合、等張剤（例えば、糖、ポリアルコール（例えば、マンニトール）、ソルビ
トール、塩化ナトリウム）をこの組成物中に含むことが好ましい。注射用組成物
の延長した吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニ
ウムおよびゼラチン）をこの組成物中に含むことによって、もたらされ得る。
【０１７６】 滅菌注射用溶液は、活性化合物（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパ
ク質または抗ＴＡＮＧＯ−６９レセプター抗体）を、上記で列挙した成分の１以
上の組合せで、必要とされる量において適切な溶媒中に取り込ませ、必要とされ
る場合、続いて濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散剤は、活
性化合物を、基本的な分散媒体および上記に列挙された成分のうちの必要とされ
る他の成分を含む滅菌ビヒクル中に取り込むことによって調製される。滅菌注射
用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、減圧乾燥および
凍結乾燥であり、これらは、活性成分の粉末およびその以前に滅菌濾過された溶
液からの任意のさらなる所望の成分を生じる。
【０１７７】 経口組成物は、一般に、不活性な希釈剤または食用キャリアを含む。それらは
、ゼラチンカプセル中に含まれるか、または錠剤へと圧縮される。経口治療投与
の目的については、この活性化合物は、賦形剤とともに取り込まれ、そして錠剤
、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用される。経口組成物はまた、口内
洗浄としての使用のための流体キャリアを使用して調製され、ここでこの流体キ
ャリア中の化合物は、経口で適用され、そして口内洗浄され（ｓｗｉｓｈ）、吐
き出されるかまたは飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤、および／またはア
ジュバント物質は、組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、
トローチ剤などは、以下の成分、または同様の性質の化合物のいずれかを含み得
る：結合剤（例えば、結晶セルロース、トラガカントゴム、またはゼラチン）；
賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）、崩壊剤（例えば、アルギン酸、
Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはトウモロコシデンプン）；滑沢剤（例えば、ステアリ
ン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓ）；滑動剤（ｇｌｉｄａｎｔ）（例え
ば、コロイド二酸化珪素）；甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）；
あるいは香料剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香
料）。吸入による投与については、これらの化合物は、適切な噴霧剤（例えば、
二酸化炭素のようなガスまたはネブライザ）を含む加圧した容器またはディスペ
ンサーからエアロゾルスプレの形態で送達される。
【０１７８】 全身投与はまた、経粘膜手段または経皮手段によってであり得る。経粘膜投与
または経皮投与については、浸透されるべき障壁に適切な浸透剤（ｐｅｎｅｔｒ
ａｎｔ）が、この処方物中にて使用され得る。このような浸透剤は、一般に、当
該分野において公知であり、そして例えば、経粘膜投与、界面活性剤、胆汁塩、
およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻腔スプレーまたは坐剤
の使用を通じて達成され得る。経皮投与については、これらの活性化合物は、当
該分野において一般に公知である、軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌ
ｖｅ）、ゲル剤、またはクリーム剤に処方される。
【０１７９】 これらの化合物はまた、直腸送達のために、坐剤の形態（例えば、ココアバタ
ーおよび他のグリセリドのような従来の坐剤基剤とともに）または貯留注腸の形
態で調製され得る。
【０１８０】 １つの実施態様において、これらの活性化合物は、身体からの化合物の迅速な
除去に対してこの化合物を保護するキャリアとともに調製される（例えば、制御
放出処方物（移植片およびマイクロカプセル化送達系を含む））。生分解性の生
体適合性ポリマー（例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリ
コール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸）が使用され得る
。このような処方物の調製の方法は、当業者に明らかである。この物質はまた、
Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ
ａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販されている。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対す
るモノクローナル抗体で感染細胞に標的化されたリポソームを含む）もまた、薬
学的に受容可能なキャリアとして使用され得る。これらは、当業者に公知の方法
（例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載される）に従って調製され得
る。
【０１８１】 投薬の投与の容易さおよび均一性のために、投薬単位形態で経口組成物または
非経口組成物を処方することは、特に有利である。本明細書中で使用される場合
、投薬単位形態は、処置される被検体に対して単回投薬として適切な物理的に分
離した単位をいう；各々の単位は、必要とされる薬学的キャリアと一緒に所望の
治療効果を生じるように算定された所定量の活性化合物を含む。本発明の投薬単
位形態についての詳細は、活性化合物の独特な特徴および達成される特定の治療
効果、ならびに個体の処置のための活性化合物を合成する当該分野に固有の制限
によって示され、そして直接的に依存する。
【０１８２】 治療適用では、他の治療抗体のように抗ＴＡＮＧＯ−６９レセプター抗体は、
非経口的に、好ましくは静脈内または筋肉内で、毎日、毎月、二週間に一回、一
週間に一回、またはより頻繁に投与される。好ましい投薬量は、０．１ｍｇ／ｋ
ｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１０〜２０ｍｇ／ｋｇ体重である。
５０ｍｇ／ｋｇ以上の投薬量は、この抗体が脳内で効果的である場合に好ましい
。特定の障害の処置のために好ましい投薬量は、他の治療抗体で観察される結果
に基づくか、またはこれは、動物モデルにおける試験に基づいて当業者によって
決定され得る。所定の状況における抗体の適切な投薬は、処置されている疾患、
この疾患の重篤度、この抗体が治療理由または予防理由のために投与されている
か否か、投与された以前の治療、および患者の病歴に依存する。処置は、一般に
、所望の治療または予防効果が観察されるまで継続される。本発明の方法に採用
され得る型の投薬レジメンは、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／０４１８８に見出され
る。一般に、部分的ヒト抗体および完全ヒト抗体は、他の抗体よりもヒトの身体
内でより長い半減期を有する。従って、より低い投薬量およびより少ない頻度の
投与が、しばしば可能である。改変（例えば、脂質化）が、抗体を安定化し、か
つとり込みおよび組織浸透（例えば、脳内に）を増強するために使用され得る。
脂質化のための方法は、Ｃｒｕｉｋａｈａｎｋら（（１９９７）Ｊ．Ａｃｑｕｉ
ｒｅｄ Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｅｆｉｃ．Ｓｙｎｄｒ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏ
ｌ．、１４：１９３〜２０３）に記載される。
【０１８３】 本発明の核酸分子は、ベクター中に挿入され得、そして遺伝子治療ベクターと
して使用され得る。遺伝子治療ベクターは、例えば、静脈内注射、局所投与（米
国特許第５，３２８，４７０号）によってか、または定位注射（例えば、Ｃｈｅ
ｎら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３０
５４〜３０５７）によって被検体に送達され得る。遺伝子治療ベクターの薬学的
調製物は、受容可能な希釈剤中に遺伝子治療ベクターを含み得るか、または遺伝
子送達ビヒクルが埋め込まれている緩徐な放出マトリクスを含み得る。あるいは
、完全な遺伝子送達ベクターが、組換え細胞（レトロウイルスベクター）からイ
ンタクトで産生され得る場合、この薬学的調製物は、遺伝子送達系を産生する１
以上の細胞を含み得る。
【０１８４】 薬学的組成物は、容器、パック、またはディスペンサー内に、投与のための使
用説明書と一緒に含まれ得る。
【０１８５】 （Ｖ．本発明の使用および方法） 本明細書中に記載される核酸分子、タンパク質、タンパク質ホモログ、および
抗体は、１以上の以下の方法に使用され得る：ａ）スクリーニングアッセイ；ｂ
）検出アッセイ（例えば、染色体マッピング、組織タイピング、法医学標本）；
ｃ）予測的な医薬品（例えば、診断アッセイ、予後アッセイ、臨床試験のモニタ
リング、および薬理遺伝学）；ならびにｄ）処置方法（例えば、治療および予防
）。ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質は、他の細胞タンパク質と相互作用
し、従って以下のために使用され得る：（１）細胞増殖の調節；（ｉｉ）細胞分
化の調節；（ｉｉｉ）細胞生存の調節、（ｉｖ）炎症の調節、（ｖ）肥満細胞活
性の調節、（ｖｉ）ＨＳＶ感染および／または増殖の調節、ならびに／あるいは
（ｖｉｉ）凝固の調節。本発明の単離された核酸分子は、ＴＡＮＧＯ−６９レセ
プタータンパク質を（例えば、遺伝子治療適用における宿主細胞中での組換え発
現ベクターを通じて）発現するため、（例えば、生物学的サンプル中の）ＴＡＮ
ＧＯ−６９レセプターｍＲＮＡまたはＴＡＮＧＯ−６９レセプター遺伝子におけ
る遺伝的損傷を検出するために、ならびにＴＡＮＧＯ−６９レセプター活性を調
節するために使用され得る。さらに、ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質は
、ＴＡＮＧＯ−６９レセプター活性または発現を調節するために薬物または化合
物をスクリーニングするため、ならびにＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質
の不十分または過剰な発現、あるいはＴＡＮＧＯ−６９レセプター野生型タンパ
ク質と比較して減少したかまたは異常な活性を有するＴＡＮＧＯ−６９レセプタ
ータンパク質形態の産生によって特徴付けられる障害を処置する使用され得る。
さらに、本発明の抗ＴＡＮＧＯ−６９レセプター抗体は、ＴＡＮＧＯ−６９レセ
プタータンパク質を検出かつ単離するために、かつＴＡＮＧＯ−６９レセプター
活性を調節するために使用され得る。
【０１８６】 本発明はさらに、上記のスクリーニングアッセイにより同定される新規な薬剤
および本明細書中に記載されるような処置のためのその使用に関する。
【０１８７】 （Ａ．スクリーニングアッセイ） 本発明は、ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質に結合するか、または例え
ば、ＴＡＮＧＯ−６９レセプター発現もしくはＴＡＮＧＯ−６９レセプター活性
に対する刺激効果もしくは阻害効果を有するモジュレーター、すなわち候補また
は試験化合物または因子（例えば、ペプチド、ペプチド模倣物、低分子または他
の薬物）を同定するための方法（本明細書中で「スクリーニングアッセイ」とも
いわれる）を提供する。
【０１８８】 １つの実施態様において、本発明は、ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質
またはそのポリペプチドもしくは生物学的に活性な部分に結合するか、あるいは
その活性を調節する候補化合物または試験化合物をスクリーニングするためのア
ッセイを提供する。本発明の試験化合物は、当該分野において公知のコンビナト
リアルライブラリー方法（生物学的ライブラリー；空間的に接近可能な対応する
固相または溶液相ライブラリー；デコンボルーション（ｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔｉ
ｏｎ）を必要とする合成ライブラリー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法
；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を使用する合成ライブラリー方
法を含む）における任意の多くのアプローチを使用して得られ得る。生物学的ラ
イブラリーアプローチは、ペプチドライブラリーに限定されず、一方、他のアプ
ローチは、ペプチド、非ペプチドオリゴマーまたは化合物の低分子ライブラリー
に適用可能である（Ｌａｍ（１９９７）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅ
ｓ．１２：１４５）。分子ライブラリーの合成のための方法の例は、例えば、以
下において、当該分野で見出され得る：ＤｅＷｉｔｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２；Ｚｕｃｋ
ｅｒｍａｎｎら（１９９４）、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏ
ら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら（１９９
４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒ
ｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：
２０６１；およびＧａｌｌｏｐら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７１２
３４３。
【０１８９】 化合物のライブラリーは、溶液中に存在し得るか（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ
（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２〜４２１）、ビーズ
上（Ｌａｍ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２〜８４）、チップ上（Ｆｏ
ｄｏｒ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６４：５５５〜５５６）、細菌上（米国特
許第５，２２３，４０９号）、芽胞上（特許第５，５７１，６９８号；同第５，
４０３，４８４号；および同第５，２２３，４０９号）、プラスミド上（Ｃｕｌ
ｌら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１８
６５〜１８６９）またはファージ上（ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ（１９９０）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６〜３９０；Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０）Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２４９：４０４〜４０６；Ｃｗｉｒｌａら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６３８７〜６３８２；ならびにＦｅｌ
ｉｃｉ（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１〜３１０）であり得
る。
【０１９０】 １つの実施態様では、アッセイは、細胞ベースのアッセイであり、ここでＴＡ
ＮＧＯ−６９レセプタータンパク質、またはその生物学的に活性な部分をその細
胞表面上に発現する細胞は、試験化合物と接触され、そしてＴＡＮＧＯ−６９レ
セプタータンパク質に結合する試験化合物の能力が決定される。例えば、細胞は
、酵母細胞または哺乳動物起源の細胞であり得る。試験化合物がＴＡＮＧＯ−６
９レセプタータンパク質に結合する能力の決定は、例えば、試験化合物を放射性
同位体または酵素標識とカップリングさせ、その結果、ＴＡＮＧＯ−６９レセプ
タータンパク質またはその生物学的に活性な部分に対する試験化合物の結合が、
複合体における標識化合物を検出することによって決定され得ることによって達
成され得る。例えば、試験化合物は、125Ｉ、35Ｓ、14Ｃ、または3Ｈで、直接的
または間接的のいずれかで標識され得、そしてこの放射性同位体が、放射線放射
の直接的な計数によってか、またはシンチレーション計数によってかで検出され
得る。あるいは、試験化合物は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカ
リホスファターゼ、またはルシフェラーゼで酵素的に標識され得、そしてこの酵
素標識は、適切な基質の産物への変換を決定することによって検出され得る。好
ましい実施態様では、このアッセイは、ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質
の膜会合形態、またはその生物学的に活性な部分を細胞表面上に発現する細胞と
、ＴＡＮＧＯ−６９レセプターを結合する既知の化合物（例えば、ＬＩＧＨＴま
たはＬＴα）とを接触させて、アッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混
合物を試験化合物と接触させる工程、およびこの試験化合物がＴＡＮＧＯ−６９
レセプタータンパク質と相互作用する能力を決定する工程であって、ここでこの
試験化合物がＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質と相互作用する能力を決定
する工程が、既知の化合物と比較した場合、試験化合物がＴＡＮＧＯ−６９レセ
プターまたはその生物学的に活性な部分に優先的に結合する能力を決定する工程
を包含する、工程を包含する。
【０１９１】 別の実施態様では、アッセイは、細胞ベースのアッセイであり、ＴＡＮＧＯ−
６９レセプタータンパク質、または生物学的に活性なその部分を細胞表面上に発
現している細胞と、試験化合物とを接触させる工程、ならびにこの試験化合物が
ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質または生物学的に活性なその部分の活性
を調節する（例えば、刺激するかまたは阻害する）ことを決定する工程を包含す
る。試験化合物がＴＡＮＧＯ−６９レセプターまたは生物学的に活性なその部分
の活性を調節する能力を決定する工程は、例えば、ＴＡＮＧＯ−６９レセプター
タンパク質がＴＡＮＧＯ−６９レセプター標的分子に結合するかまたはそれと相
互作用する能力を決定することによって達成され得る。本明細書中で使用され得
る場合、「標的分子」は、ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質が天然で結合
するかまたは相互作用する分子（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク
質を発現する細胞の表面上の分子、第２の細胞の表面上の分子、細胞外環境の分
子、細胞膜または細胞質膜の内部表面に会合している分子）である。ＴＡＮＧＯ
−６９レセプター標的分子は、非ＴＡＮＧＯ−６９レセプター分子、または本発
明のＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質もしくはポリペプチドであり得る。
１つの実施態様では、ＴＡＮＧＯ−６９レセプター標的分子は、細胞膜を通じる
シグナル伝達の細胞中への伝達を容易にするシグナル伝達経路の成分である。例
えば、この標的は、触媒活性を有する第２の細胞内タンパク質または下流のシグ
ナル伝達分子のＴＡＮＧＯ−６９レセプターとの会合を容易にするタンパク質で
あり得る。
【０１９２】 ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質がＴＡＮＧＯ−６９レセプター標的分
子に結合するかまたはそれと相互作用する能力を決定する工程は、直接的な結合
を決定するための、上記の方法のうちの１つによって達成され得る。好ましい実
施態様では、このＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質がＴＡＮＧＯ−６９レ
セプター標的分子に結合するかまたはそれと相互作用する能力を決定する工程は
、この標的分子の活性を決定することによって達成され得る。例えば、この標的
分子の活性は、この標的の細胞セカンドメッセンジャー（例えば、細胞内Ｃａ２
＋、ジアシルグリセロール、ＩＰ３など）の誘導を検出すること、適切な基質に
対するこの標的の触媒／酵素活性を検出すること、レセプター遺伝子（例えば、
検出可能なマーカー（例えば、ルシフェラーゼ）をコードする核酸に作動可能に
連結されたＴＡＮＧＯ−６９レセプター応答性調節エレメント）の誘導を検出す
ること、あるいは細胞応答（例えば、細胞分化、または細胞増殖）を検出するこ
とによって決定され得る。
【０１９３】 なお別の実施態様では、本発明のアッセイは、細胞を含まないアッセイであり
、これは、ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質または生物学的に活性なその
部分と、試験化合物とを接触させる工程、ならびにこの試験化合物がＴＡＮＧＯ
−６９レセプタータンパク質または生物学的に活性なその部分に結合する能力を
決定する工程を包含する。試験化合物がＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質
に結合することは、上記のように直接的または間接的のいずれかで決定され得る
。好ましい実施態様では、このアッセイは、ＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパ
ク質または生物学的に活性なその部分と、ＴＡＮＧＯ−６９レセプターに結合す
る既知の化合物とを接触させ、アッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混
合物と試験サンプルとを接触させる工程、ならびにこの試験化合物がＴＡＮＧＯ
−６９レセプタータンパク質と相互作用する能力を決定する工程であって、この
試験化合物がＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質と相互作用する能力を決定
する工程が、この試験化合物が既知の化合物と比較した場合にＴＡＮＧＯ−６９
レセプターまたは生物学的に活性なその部分に優先的に結合する能力を決定する
、工程、を包含する。
【０１９４】 別の実施態様では、アッセイは、細胞を含まないアッセイであり、これは、Ｔ
ＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質または生物学的に活性なその部分と、試験
化合物とを接触させる工程、およびこの試験化合物がＴＡＮＧＯ−６９レセプタ
ータンパク質または生物学的に活性なその部分の活性を調節する（例えば、刺激
するかまたは阻害する）能力を決定する工程を包含する。この試験化合物がＴＡ
ＮＧＯ−６９レセプターの活性を調節する能力を決定することは、例えば、ＴＡ
ＮＧＯ−６９レセプタータンパク質がＴＡＮＧＯ−６９レセプター標的分子に結
合する能力を、直接的な結合を決定するための、上記の方法のうちの１つによっ
て決定することによって達成され得る。別の実施態様では、この試験化合物がＴ
ＡＮＧＯ−６９レセプターの活性を調節する能力を決定することは，ＴＡＮＧＯ
−６９レセプタータンパク質がＴＡＮＧＯ−６９レセプター標的分子をさらに調
節する能力を決定することによって達成され得る。例えば、適切な基質に対する
この標的分子の触媒／酵素活性は、上記のように決定され得る。
【０１９５】 なお別の実施態様では、細胞を含まないアッセイは、ＴＡＮＧＯ−６９レセプ
タータンパク質または生物学的に活性なその部分と、ＴＡＮＧＯ−６９レセプタ
ーに結合する既知の化合物とを接触させてアッセイ混合物を形成する工程、この
アッセイ混合物と試験化合物とを接触させる工程、およびこの試験化合物がＴＡ
ＮＧＯ−６９レセプタータンパク質と相互作用する能力を決定する工程であって
、ここでこの試験化合物がＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質と相互作用す
る能力を決定する工程が、このＴＡＮＧＯ−６９レセプタータンパク質がＴＡＮ
ＧＯ−６９レセプター標的分子に優先的に結合するか、またはその活性を調節す
る能力を決定する工程を包含する、工程、を包含する。本発明の細胞を含まない
アッセイは、ＴＡＮＧＯ−６９レセプターの可溶性形態または膜会合形態の両方
の使用に受け入れられる。
【０１９６】 本発明の上記アッセイ方法の１つより多い実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６
９−レセプターまたはその標的分子のいずれかを固定し、このタンパク質の１つ
または両方の複合体化されていない形態からの複合体化された形態の分離を促進
すること、およびアッセイの自動化に適応することが所望され得る。ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターに対する標的化合物の結合、または候補化合物の存在下およ
び非存在下でのＴＡＮＧＯ−６９−レセプターと標的分子との相互作用は、反応
物質を含むために適切な任意の容器において達成され得る。このような容器の例
としてはマイクロタイタープレート、試験管および微量遠心管が挙げられる。１
つの実施態様において、このタンパク質の１つまたは両方をマトリックスに結合
させるドメインを付加する融合タンパク質が提供され得る。例えば、グルタチオ
ン−Ｓ−トランスフェラーゼ／ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター融合タンパク質ま
たはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ／標的融合タンパク質は、グルタチ
オンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，
ＭＯ）またはグルタチオン誘導化マイクロタイタープレート上に吸着され得、次
にこれらは、試験化合物または試験化合物および非吸着標的タンパク質またはＴ
ＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質のいずれかと組み合わされ、そしてこの
混合物は、複合体形成を誘導する条件（例えば、塩およびｐＨについての生理学
的条件下で）下でインキュベートされる。インキュベーション後、ビーズまたは
マイクロタイタープレートウェルは任意の非結合成分を除去するために洗浄され
、そして複合体形成は、例えば、上記のように直接または間接的にのいずれかで
測定される。あるいは、その複合体は、マトリックスから解離され得、そしてＴ
ＡＮＧＯ−６９−レセプター結合または活性のレベルは、標準的技術を用いて決
定される。
【０１９７】 マトリックス上にタンパク質を固定するための他の技術はまた、本発明のスク
リーニングアッセイにおいて用いられ得る。例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ターまたはその標的分子のいずれかは、ビオチンおよびストレプトアビジンの結
合体化を利用して固定され得る。ビオチン化ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターまた
は標的分子は、当該分野で周知の技術（例えば、ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃ
ｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ；Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いてビオチン−ＮＨＳ
（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）から調製され得、そしてストレプトアビジン
被膜９６−ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のウェルにおい
て固定され得る。あるいは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターまたは標的分子と反
応性だが、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質のその標的分子への結合を
妨害しない抗体は、プレートのウェル、および抗体結合体化によりこのウェル中
に閉じ込められた非結合の標的またはＴＡＮＧＯ−６９−レセプターに誘導体化
され得る。このような複合体を検出するための方法は、ＧＳＴ−固定複合体につ
いて上記された方法に加えて、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターまたは標的分子と
反応性の抗体を用いる複合体の免疫検出、ならびにＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ーまたは標的分子に伴う酵素活性を検出することに依存する酵素結合アッセイを
含む。
【０１９８】 別の実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター発現の修飾因子は、細
胞が候補化合物と接触される方法において同定され、そして細胞中のＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターのｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が決定される。候補化合
物の存在下におけるＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｍＲＮＡまたはタンパク質の
発現のレベルが、候補化合物の非存在下におけるＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
のｍＲＮＡまたはタンパク質の発現のレベルと比較される。次いで、この候補化
合物は、この比較に基づき、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター発現の修飾因子とし
て同定され得る。例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのｍＲＮＡまたはタン
パク質の発現が候補化合物の存在下において非存在下よりも大きい（統計学的に
有意に大きい）場合、この候補化合物は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのｍＲ
ＮＡまたはタンパク質発現の刺激因子と決定される。あるいは、ＴＡＮＧＯ−６
９−レセプターのｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が候補化合物の存在下におい
て非存在下よりも少ない（統計学的に有意に少ない）場合、この候補化合物は、
ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのｍＲＮＡまたはタンパク質発現のインヒビター
と決定される。細胞におけるＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのｍＲＮＡまたはタ
ンパク質の発現のレベルは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのｍＲＮＡまたはタ
ンパク質を検出するために本明細書において記載された方法により決定され得る
。
【０１９９】 本発明のなお別の局面において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質は
、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターに結合するかまたは相互作用し（「ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプター結合タンパク質」すなわち「ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
−ｂｐ」）かつＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性を調節する他のタンパク質を
同定するため、２ハイブリッドアッセイまたは３ハイブリッドアッセイにおいて
「ベイトタンパク質」として用いられ得る（例えば、米国特許番号第５，２８３
，３１７号；Ｚｅｒｏｖｏｓら（１９９３）Ｃｅｌｌ ７２：２２３〜２３２；
Ｍａｄｕｒａら（１９９３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２０４６〜１
２０５４；Ｂａｒｔｅｌら（１９９３）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４：
９２０〜９２４；Ｉｗａｂｕｃｈｉら（１９９３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：１６
９３〜１６９６；およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／１０３００を参照のこと）。
このようなＴＡＮＧＯ−６９−レセプターー結合タンパク質はまた、ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプタータンパク質によるシグナルの伝達（例えば、ＴＡＮＧＯ−６
９−レセプター経路の上流エレメントまたは下流エレメント）に関与するようで
ある。
【０２００】 本発明は、本明細書に記載される処置について上記のスクリーニングアッセイ
およびその使用により同定される新規の因子にさらに関する。
【０２０１】 （Ｂ．検出アッセイ） 本明細書において同定されたｃＤＮＡ配列（および対応する完全遺伝子配列）
の部分またはフラグメントは、ポリヌクレオチド試薬として多くの方法で用いら
れ得る。例えば、これらの配列は以下のために用いられ得る：（ｉ）染色体上の
それぞれの遺伝子をマッピングし、それにより遺伝病に関連する遺伝子領域の位
置付けをするため；（ｉｉ）わずかな生物学的サンプルから個体を同定する（組
織タイピング）ため；および（ｉｉｉ）生物学的サンプルの法医学的な同定を補
助するため。これらの適用は以下の小節において記載される。
【０２０２】 （１．染色体マッピング） 一旦、遺伝子の配列（または配列の一部）が単離されると、この配列は、染色
体上の遺伝子の位置をマッピングするために用いられ得る。従って、本明細書に
おいて記載されるＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸分子またはそのフラグメン
トは、染色体上のＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子の位置をマッピングする
ために用いられ得る。染色体に対するＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列のマッ
ピングは、これらの配列と疾患に関連する遺伝子とを関連づける際の重要な最初
の工程である。
【０２０３】 簡略にいえば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子は、ＴＡＮＧＯ−６９−
レセプター配列から、ＰＣＲプライマー（好ましくは１５〜２５ｂｐの長さ）を
調製することにより染色体にマッピングされ得る。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ー配列のコンピューター分析が、ゲノムＤＮＡにおいて１つのエキソン（従って
増幅プロセスを複雑にする）より多くにわたらないプライマーを迅速に選択する
ために用いられ得る。次いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む
体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために用いられ得る。ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプター配列に対応するヒト遺伝子を含有するハイブリッドのみが増
幅したフラグメントを産生する。
【０２０４】 体細胞ハイブリッドは、種々の哺乳動物由来の体細胞（例えば、ヒトおよびマ
ウスの細胞）を融合することにより調製され得る。ヒトおよびマウスの細胞のハ
イブリッドが増殖し分裂するにつれ、それらは徐々に順不同にヒト染色体を消失
するが、マウス染色体は保持する。マウス細胞が増殖し得ない（それが特定の酵
素を欠失することによる）が、ヒト細胞が増殖し得る培地を用いることにより、
必要な酵素をコードする遺伝子を含むヒト染色体の１つが保持される。種々の培
地を用いることにより、ハイブリッド細胞株のパネルが確立され得る。パネルに
おけるそれぞれの細胞株は、単一のヒト染色体または少数のヒト染色体のいずれ
か、および完全なセットのマウス染色体を含み、これにより特定のヒト染色体に
対する個々の遺伝子の容易なマッピングを可能にする。（Ｄ’Ｅｕｓｔａｃｈｉ
ｏら（１９８３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２０：９１９〜９２４）。ヒト染色体のフ
ラグメントのみを含む体細胞ハイブリッドはまた、転座および欠失を有するヒト
染色体を用いることにより生成され得る。
【０２０５】 体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定の染色体に対して特定の配列
を割当てるための迅速な手順である。３つ以上の配列が、一台のサーマルサイク
ラーを用いて１日あたり割当てされ得る。オリゴヌクレオチドプライマーを設計
するためＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列を用いて、特定の染色体由来のフラ
グメントのパネルで準局在化（ｓｕｂｌｏｃａｒｉｚａｔｉｏｎ）が達成され得
る。ＴＮＡＧＯ−６９−レセプター染色体へＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列
をマッピングするために同様に用いられ得る他のマッピングストラテジーとして
は、インサイチュハイブリダイゼーション（Ｆａｎら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６２２３〜２７に記載される）、標
識したフローソート化染色体でのプレスクリーニング、および染色体特異的ｃＤ
ＮＡライブラリーへのハイブリダイゼーションによるプレ選択が挙げられる。
【０２０６】 中期染色体展開に対するＤＮＡ配列の蛍光インサイチュハイブリダイゼーショ
ン（ＦＩＳＨ）はさらに、１つの工程で正確な染色体位置を提供するために用い
られ得る。染色体展開は、化学物質（例えば、紡錘体を分裂させるコルセミド（
ｃｏｌｃｅｍｉｄ））により分裂が中期でブロックされた細胞を用いてなされ得
る。染色体は、トリプシンで簡潔に処理され得、次いでギムザ染色される。明帯
および暗帯のパターンがそれぞれの染色体上で発生し、これにより染色体は個々
に同定され得る。ＦＩＳＨ技術は、５００または６００塩基程度の短さのＤＮＡ
配列で用いられ得る。しかし、１，０００塩基より大きいクローンは、特定の染
色体位置に対してより高い結合確率を有し、単純な検出のために十分なシグナル
強度を有する。合理的な時間で良好な結果を得るためには、好ましくは、１，０
００塩基、そしてより好ましくは２，０００塩基が十分である。この技術の概説
については、Ｖｅｒｍａら（Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎ
ｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８８））を参照のこと。
【０２０７】 染色体マッピングのための試薬は、その染色体上の単一の染色体または単一の
部位を個々にマーキングするために用いられ得る。または試薬のパネルは、複数
の部位および／または複数の染色体をマーキングするために用いられ得る。この
遺伝子の非コード領域に対応する試薬はマッピングの目的のため実際に好ましい
。コード配列は、遺伝子ファミリー内で保存される確率がより高く、これにより
染色体マッピングの間の交差ハイブリダイゼーションの機会を増加する。
【０２０８】 一旦、配列が正確な染色体位置にマッピングされると、染色体上の配列の物理
的位置は遺伝子マップデータと相関され得る。（このようなデータは、例えば、
Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ、Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ
Ｍａｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃｈ Ｍ
ｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを通じてオンラインで利用可能）において見出さ
れる）。次いで、同じ染色体領域にマッピングされる遺伝子と疾患との間の関係
は、例えば、Ｅｇｅｌａｎｄら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ ３２５：７８３〜７
８７に記載される、連鎖解析（物理的に近接する遺伝子の同時遺伝）を通じて同
定され得る。
【０２０９】 さらに、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子と関連する、疾患に罹患した個
体と罹患していない個体との間のＤＮＡ配列の差異が、決定され得る。もし変異
が、罹患した個体のいくつかまたは全てにおいて観察されるが、いずれの罹患し
てない個体でも観察されないならば、その変異は、その特定の疾患の原因因子で
ある可能性がある。罹患した個体および罹患してない個体の比較は、一般に、ま
ず染色体における構造変化（例えば、染色体展開から可視であるかまたはそのＤ
ＮＡ配列に基づきＰＣＲを用いて検出可能な欠失または転座）を探す工程を含む
。最終的には、いくつかの個体由来の遺伝子の完全な配列決定は、変異の存在を
確認するために、そして多型から変異を識別するために実行され得る。
【０２１０】 ２．組織タイピング 本発明のＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列はまた、わずかな生物学的サンプ
ルから個体を同定するために用いられ得る。例えば、合衆国軍は、その職員の同
定のために制限フラグメント長多型性（ＲＦＬＰ）の使用を検討している。この
技術では、個体のゲノムＤＮＡが１つ以上の制限酵素で消化され、そしてサザン
ブロット上にプローブされ、同定のための特有のバンドを生じる。この方法であ
れば、失われ、入れ替えられまたは盗まれ得、ポジティブな同定を困難にする「
ドッグタグ（Ｄｏｇ Ｔａｇ）」の現在の制限をうけない。本発明の配列はＲＦ
ＬＰ（米国特許第５，２７２，０５７号に記載）のためのさらなるＤＮＡマーカ
ーとして有用である。
【０２１１】 さらに、本発明の配列は、個体のゲノムの選択した部分の実際の塩基ごとのＤ
ＮＡ配列を決定する代替技術を提供するために用いられ得る。従って、本明細書
において記載されるＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列は、その配列の５’末端
および３’末端から２つのＰＣＲプライマーを調製するために用いられ得る。次
いで、これらのプライマーは、個体のＤＮＡを増幅し、続いてそれを配列決定す
るために用いられ得る。
【０２１２】 この様式で調製された、個体由来の対応するＤＮＡ配列のパネルは、特有の個
体の同定を提供し得る。なぜなら、それぞれの個体は対立遺伝子の差異に起因す
るこのようなＤＮＡ配列の特有のセットを有するからである。本発明の配列は、
個体由来、および組織由来のこのような同定配列を得るために用いられ得る。本
発明のＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列は、ヒトゲノムの部分を特有に示す。
対立遺伝子改変は、これらの配列のコード領域においてある程度まで生じ、そし
て非コード領域においてより大きい程度まで生じる。個々のヒトの間の対立遺伝
子改変は、５００塩基あたりおよそ１個の頻度で生じると推定される。本明細書
において記載される配列のそれぞれは、同定目的のために比較され得る個体由来
のＤＮＡに対して、ある程度まで、標準物として用いられ得る。非コード領域に
おいては、より多数の多型性が生じるので、個体を区別するのに必要な配列はよ
り少なくなる。配列番号１、配列番号１７、配列番号２９、または配列番号４１
の非コード配列は、１００塩基の非コードの増幅された配列をそれぞれ生じる、
おそらく１０〜１，０００のプライマーのパネルを用いて、ポジティブ個体同定
を十分に提供する。推定コード配列（例えば、配列番号３、配列番号１９、配列
番号３１または配列番号４３）が用いられる場合、ポジティブ個体同定のための
プライマーのより適切な数は５００〜２，０００である。
【０２１３】 本明細書において記載されるＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列からの試薬の
パネルが個体のための特異的な同定データベースを生成するために用いられる場
合、これらの同じ試薬は、その個体由来の組織を同定するために後に用いられ得
る。特異的な同定データベースを用いて、個体（生存または死亡している）のポ
ジティブ同定は、非常にわずかな組織サンプルからなされ得る。
【０２１４】 （３．法医生物学における部分ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列の使用） ＤＮＡに基づく同定技術はまた、法医生物学において用いられ得る。法医生物
学は、例えば犯罪の加害者をポジティブに同定するための手段として、事件現場
でみられた生物学的証拠の遺伝子タイピングを使用する科学分野である。このよ
うな同定を行うため、ＰＣＲ技術が、犯罪現場で見出された、組織（例えば、毛
髪または皮膚）または体液（例えば、血液、唾液または精液）のような非常に少
量の生物学的サンプルから取り出されたＤＮＡ配列を増幅するために用いられ得
る。次いで、増幅した配列は、標準物と比較され得、これにより、生物学的サン
プルの起源の同定が可能になる。
【０２１５】 本発明の配列は、ヒトゲノム中の特定の遺伝子座に標的化される、ポリヌクレ
オチド試薬（例えば、ＰＣＲプライマー）を提供するために用いられ得、これは
例えば、別の「同定マーカー」（すなわち、特定の個体に特有の別のＤＮＡ配列
）を提供することによりＤＮＡに基づく法医同定の信頼性を増強し得る。上記の
ように、実際の塩基配列情報は、制限酵素が生成したフラグメントにより形成さ
れたパターンに対する正確な代替物として同定のために用いられ得る。配列番号
１、配列番号１７、配列番号２９、または配列番号４１の非コード領域に対して
標的された配列は、この非コード領域でより多数の多型性が生じる場合、この用
途のために特に適切である。このことは、この技術を用いて個体を区別すること
を容易にする。ポリヌクレオチド試薬の例としては、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ター配列またはその部分（例えば、少なくとも２０または３０塩基の長さを有す
る、配列番号１、配列番号１７、配列番号２９または配列番号４１の非コード領
域由来のフラグメント）が挙げられる。
【０２１６】 本明細書において記載されるＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列は、さらにポ
リヌクレオチド試薬、例えば、標識プローブまたは標識可能プローブ（これは、
例えば、インサイチュハイブリダイゼーション技術において、特定の組織（例え
ば脳組織）を同定するために用いられ得る）を提供するために用いられ得る。こ
れは、法医病理学者が未知の起源の組織を提示される場合に非常に有用であり売
る。このようなＴＡＮＧＯ−６９−レセプタープローブのパネルは、種のタイプ
および／または器官の型により組織を同定するために用いられ得る。
【０２１７】 類似の様式で、これらの試薬（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのプラ
イマーまたはプローブ）は、混入物について組織培養物をスクリーニング（すな
わち、培養中の異なる型の細胞の混合物の存在についてスクリーニング）するた
めに用いられ得る。
【０２１８】 （Ｃ．予測医学） 本発明はまた、診断アッセイ、予後アッセイ、薬理ゲノム学および臨床試験モ
ニタリングが予後（予測的）目的のために用いられる予測医学の分野に関し、そ
れにより個体を予防的に処置する。従って、本発明の１つの局面は、生物学的サ
ンプル（例えば、血液、血清、細胞、組織）の状況で、ＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プタータンパク質および／または核酸の発現ならびにＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ター活性を決定するための診断アッセイに関し、これにより、個体が、異常なＴ
ＡＮＧ−６９−レセプター発現または活性に関連する、疾患または障害に罹患し
ているか、または障害を発生する危険性があるか否かを決定する。本発明はまた
、個体がＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質、核酸発現または活性に関連
する障害を発症する危険性があるか否かを決定するための予後（すなわち予測的
）アッセイを提供する。例えば、ＴＡＮＧＯ−レセプター遺伝子における変異は
、生物学的サンプル中でアッセイされ得る。このようなアッセイは、予後目的ま
たは診断目的のために用いられ得、これによりＴＡＮＧＯ−６９レセプター、核
酸発現または活性と関連するかまたはそれにより特徴づけられる障害の発現の前
に個体を予防的に処置する。
【０２１９】 本発明の別の局面は、個体におけるＴＡＮＧＯ−レセプタータンパク質、核酸
発現またはＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性を決定し、これにより、その個体
について適切な診断的または予防的因子を選択するための方法（本明細書におい
て「薬理遺伝学とよぶ」）を提供する。薬理遺伝学は、個体の遺伝子型（例えば
、個体が特定の因子に応答する能力を決定するために試験された個体の遺伝子型
）に基づく個体の治療的処置または予防的処置のための因子（例えば、薬物）の
選択を可能にする。
【０２２０】 本明細書のなお別の局面は、臨床試験におけるＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
の発現または活性に対する、因子（例えば、薬物または他の化合物）の影響のモ
ニタリングに関する。
【０２２１】 これらおよび他の因子は、以下の節でさらに詳細に記載される。
【０２２２】 （１．診断アッセイ） 生物学的サンプル中におけるＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの存在または非存
在を検出するための例示的方法は、試験被験体由来の生物学的サンプルを入手す
る工程、および生物学的サンプルを、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのタンパク
質または核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）（ＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
タータンパク質をコードする）を検出し得る化合物または因子と接触させ、これ
により生物学的サンプル中でＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの存在が検出される
工程を含む。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを検出
するための好ましい因子は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのｍＲＮＡまたはゲ
ノムＤＮＡにハイブリダイズし得る標識された核酸プローブである。核酸プロー
ブは、例えば、全長ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸（例えば、配列番号１ま
たは３の核酸）またはその部分（例えば、少なくとも１５、３０、５０、１００
、２５０または５００ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチド、そしてＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡにストリンジェントな条件下
で特異的にハイブリダイズするのに十分なオリゴヌクレオチド）であり得る。本
明細書の診断アッセイにおける使用に適切な他のプローブが、本明細書に記載さ
れる。
【０２２３】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質を検出するための好ましい因子は、
ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質に結合し得る抗体（好ましくは検出可
能標識を有する抗体）である。抗体は、ポリクローナル抗体、またはより好まし
くはモノクローナル抗体であり得る。インタクトな抗体またはそのフラグメント
（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）2）が用いられ得る。プローブまたは抗体
に関して、用語「標識された」は、プローブまたは抗体への検出可能な物質の結
合（すなわち、物理的連結）によるプローブまたは抗体の直接標識、ならびに直
接標識されている別の試薬との反応によるプローブまたは抗体の間接的標識を含
むことを意図する。間接的標識化の例としては、蛍光的に標識した二次抗体を用
いる一次抗体の検出、およびビオチンを用いるＤＮＡプローブの末端標識化（こ
れにより、これは蛍光的に標識されたストレプトアビジンで検出され得る）が挙
げられる。用語「生物学的サンプル」は、被験体から単離された組織、細胞およ
び生物学的流体、ならびに被験体に存在する組織、細胞および流体を含むことを
意図する。すなわち、本発明の検出方法は、インビトロおよびインビボにおいて
生物学的サンプル中のＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのｍＲＮＡ、タンパク質ま
たはゲノムＤＮＡを検出するために用いられ得る。例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−
レセプターのｍＲＮＡの検出のためのインビトロ技術としては、ノーザンハイブ
リダイゼーションおよびインサイチュハイブリダイゼーションが挙げられる。Ｔ
ＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の検出のためのインビトロ技術としては
、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降お
よび免疫蛍光法が挙げられる。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターゲノムＤＮＡの検
出のためのインビトロ技術としては、サザンハイブリダイゼーションが挙げられ
る。さらに、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の検出のためのインビボ
技術は、標識した抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体を被験体に導入する工程
を含む。例えば、抗体は、被験体における存在および位置が標準的画像化技術に
より検出され得る放射性マーカーで標識され得る。
【０２２４】 １つの実施態様において、生物学的サンプルは、試験被験体からのタンパク質
分子を含む。あるいは、この生物学的サンプルは、試験被験体からのｍＲＮＡ分
子または試験被験体からのゲノムＤＮＡ分子を含み得る。好ましい生物学的サン
プルは、被験体から従来の手段により単離された末梢血白血球サンプルである。
【０２２５】 別の実施態様において、この方法はさらに、以下の工程を包含する：コントロ
ール被験体からコントロール生物学的サンプルを得る工程、このコントロールサ
ンプルを、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノム
ＤＮＡを検出し得る化合物または薬剤と接触させ、その結果、ＴＡＮＧＯ−６９
−レセプタータンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡがこの生物学的サンプ
ルにおいて検出される工程、およびこのコントロールサンプル中のＴＡＮＧＯ−
６９−レセプタータンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在を、試験サ
ンプル中のＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノム
ＤＮＡの存在と比較する工程。
【０２２６】 本発明はまた、生物学的サンプル（試験サンプル）中のＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプターの存在を検出するためのキットを包含する。このようなキットを使用し
て、被験体がＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの異常な発現と関連する障害（例え
ば、免疫学的障害）を罹患しているか、またはこのような障害を発症する危険性
が増加しているか否かを検出し得る。例えば、このキットは、生物学的サンプル
中のＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質またはｍＲＮＡを検出し得るため
の標識された化合物または薬剤、およびこのサンプル中のＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプターの量を決定するための手段（例えば、抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
抗体、またはＴＡＮＧＯ−６９−レセプターをコードするＤＮＡ（例えば、配列
番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２９、配列番号３
１、配列番号４１、または配列番号４３）に結合するオリゴヌクレオチドプロー
ブ）を含み得る。キットはまた、試験される被験体が、ＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プタータンパク質またはｍＲＮＡの量が正常レベル以上または未満の場合に、Ｔ
ＡＮＧＯ−６９−レセプターの異常な発現と関連する障害に罹患しているか、ま
たはそのような障害を発症する危険性にあるかを観察するための指示書を含み得
る。
【０２２７】 抗体に基づくキットについて、このキットは、例えば、以下を含む：（１）Ｔ
ＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質に結合する第１抗体（例えば、固体支持
体に付着される）；および必要に応じて、（２）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
タンパク質または第１抗体に結合し、かつ検出可能な薬剤に結合体化される、第
２の異なる抗体。
【０２２８】 オリゴヌクレオチドに基づくキットについて、このキットは、例えば、以下を
含む：（１）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸配列にハイブリダイズするオリ
ゴヌクレオチド（例えば、検出可能に標識されたオリゴヌクレオチド）、または
（２）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸分子を増幅するために有用な一対のプ
ライマー。
【０２２９】 このキットはまた、例えば、緩衝化剤、保存剤、またはタンパク質安定化剤を
含み得る。このキットはまた、検出可能な薬剤を検出するために必要な成分（例
えば、酵素または基質）を含み得る。このキットはまた、アッセイされそして含
まれる試験サンプルと比較され得るコントロールサンプルまたは一連のコントロ
ールサンプルを含み得る。このキットの各成分は、通常、個別の容器内に包含さ
れ、そして様々な容器の全ては、試験される被験体がＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ターの異常な発現に関連する障害に罹患しているかまたはそのような障害を発症
する危険性にあるか否かを観察するための指示書とともに、単一のパッケージ内
にある。
【０２３０】 （２．予後アッセイ） 本明細書中に記載される方法はさらに、異常なＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
発現または活性に関連する疾患または障害を有するか、またはそれを発症する危
険性のある被験体を同定するための診断または予後アッセイとして利用され得る
。例えば、本明細書中に記載されるアッセイ（例えば、前述の診断アッセイまた
は以下のアッセイ）は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質、核酸発現も
しくは活性に関連する障害（例えば、ＨＳＶ感染、ぜん息、遅延型過敏症、線維
症、炎症性慢性関節リウマチ、または炎症性腸疾患）を有するか、またはそれを
発症する危険性にある被験体を同定するために利用され得る。あるいは、予後ア
ッセイは、このような疾患または障害を有するか、またはそれを発症する危険性
にある被験体を同定するために利用され得る。従って、本発明は、試験サンプル
が被験体から得られ、そしてＴＡＮＧＯ−６９−レセプターレセプタータンパク
質または核酸（例えば、ｍＲＮＡ，ゲノムＤＮＡ）が検出される方法を提供し、
ここでＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質または核酸の存在は、異常なＴ
ＡＮＧＯ−６９−レセプター発現または活性と関連する疾患または障害を有する
か、またはそれを発症する危険性にある被験体についての診断である。本明細書
中使用される場合、「試験サンプル」とは、目的の被験体から得られる生物学的
サンプルをいう。例えば、試験サンプルは、生物学的流体（例えば、血清）細胞
サンプル、または組織であり得る。
【０２３１】 さらに、本明細書中に使用される予後アッセイは、被験体が異常なＴＡＮＧＯ
−６９−レセプター発現または活性と関連する疾患または障害を処置するために
薬剤（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模倣物、タンパク質、ペ
プチド、核酸、低分子、または他の薬物候補体）を投与され得るか否かを決定す
るために使用され得る。例えば、このような方法は、被験体が、特定の薬剤また
は薬剤のクラス（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性を減少する型の薬
剤）を用いて効果的に処置され得るか否かを決定するために使用され得る。従っ
て、本発明は、被験体が、異常なＴＡＮＧＯ−６９−レセプター発現または活性
と関連する障害を、薬剤を用いて効果的に処置され得るか否かを決定するための
方法を提供し、ここで、試験サンプルが得られ、そしてＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プタータンパク質または核酸が検出される（例えば，ここで、ＴＡＮＧＯ−６９
−レセプタータンパク質または核酸の存在は、異常なＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ター発現または活性と関連する障害を処置するために薬剤を投与され得る被験体
についての診断である）。
【０２３２】 本発明の方法はまた、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子における遺伝子損
傷または変異を検出するために使用され得、それにより、損傷した遺伝子を有す
る被験体が、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター関連障害（例えば、異常な細胞増殖
および／または分化によって特徴付けられる傷害）についての危険性にあるか否
かを決定する。好ましい実施態様において、この方法は、被験体由来の細胞のサ
ンプルにおける、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターをコードする遺伝子の完全性ま
たはＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子の誤った発現に影響する少なくとも１
つの変更によって特徴付けられる遺伝子損傷または変異の存在または非存在を検
出する工程を包含する。例えば、このような遺伝子損傷または変異は、以下の少
なくとも１つの存在を確認することによって検出され得る：１）ＴＡＮＧＯ−６
９−レセプター遺伝子からの１つ以上のヌクレオチドの欠失；２）ＴＡＮＧＯ−
６９−レセプター遺伝子への１つ以上のヌクレオチドの付加；３）ＴＡＮＧＯ−
６９−レセプター遺伝子の１つ以上のヌクレオチドの置換；４）ＴＡＮＧＯ−６
９−レセプター遺伝子の染色体再配列；５）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝
子のメッセンジャーＲＮＡ転写物のレベルにおける変更；６）ゲノムＤＮＡのメ
チル化パターンのような、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子の異常な修飾；
７）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物の非野
生型スプライシングパターンの存在；８）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパ
ク質の非野生型レベル；９）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子の対立遺伝子
欠損；および１０）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の不適切な翻訳後
修飾。本明細書中に記載されるように、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子に
おける損傷を検出するために使用され得る当該分野で公知の多数のアッセイ技術
が存在する。好ましい生物学的サンプルは、被験体から従来の手段によって単離
された、末梢血白血球サンプルである。
【０２３３】 特定の実施態様において、この損傷の検出は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ
）（例えば、米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号
を参照のこと）（例えば、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥ ＰＣＲ）における、
あるいは、連結鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌａｎｄｅｇｒａｎら、（１９９８
）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：１０７７−１０８０；およびＮａｋａｚａｗａら、
（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３６０−
３６４を参照のこと）における、プローブ／プライマーの使用を含み、この後者
は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子における点変異を検出するのに特に有
用であり得る（例えば、Ａｂｒａｖａｙａら、（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：６７５−６８２を参照のこと）。この方法は、以下の
工程を包含する：細胞のサンプルを患者から収集する工程、核酸（例えば、ゲノ
ム、ｍＲＮＡ、またはその両方）をこのサンプルの細胞から単離する工程、ＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子（もしあれば）のハイブリダイゼーションおよ
び増幅が生じるような条件下でＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子に特異的に
ハイブリダイズする１つ以上のプライマーとこの核酸サンプルを接触させる工程
、ならびに増幅産物の存在または非存在を検出するかまたはこの増幅産物のサイ
ズを検出し、そしてその長さをコントロールサンプルと比較する工程。ＰＣＲお
よび／またはＬＣＲが、本明細書中に記載される変異を検出するために使用され
る任意の技術と組み合わせて一次増幅工程として使用することが所望され得るこ
とが予想される。
【０２３４】 代替の増幅方法としては以下が挙げられる：自己持続配列複製（ｓｅｌｆ ｓ
ｕｓｔａｉｎｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）（Ｇｕａｔｅ
ｌｌｉら、（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７
：１８７４−１８７８）、転写増幅系（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｍ
ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｋｗｏｈら、（１９８９）Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１１７３−１１７７）、Ｑ−β
レプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉら、（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
６：１１９７）、または任意の他の核酸増幅方法（その後の増幅した分子の検
出は、当業者に周知の技術を使用する）。これらの検出スキームは、核酸分子が
非常に少数しか存在しない場合に、この核酸分子の検出に特に有用である。
【０２３５】 代替の実施態様において、サンプル細胞からのＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
遺伝子の変異は、制限酵素切断パターンにおける変更によって同定され得る。例
えば、サンプルＤＮＡおよびコントロールＤＮＡが単離され、増幅され（必要に
応じて）、１つ以上の制限エンドヌクレアーゼを用いて消化され、そしてフラグ
メントの長さのサイズは、ゲル電気泳動によって決定され、そして比較される。
サンプルＤＮＡとコントロールＤＮＡとの間のフラグメントの長さのサイズにお
ける差異は、サンプルＤＮＡにおける変異を示す。さらに、配列特異的リボザイ
ムの使用（例えば、米国特許第５，４９８，５３１号を参照のこと）が使用され
て、リボザイム切断部位の発達または損失により特定の変異の存在について計数
され得る。
【０２３６】 他の実施態様において、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターにおける遺伝子変異は
、サンプル核酸およびコントロール核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を、何
百または何千ものオリゴヌクレオチドプローブを含む高密度アレイにハイブリダ
イズさせることによって同定され得る（Ｃｒｏｎｉｎら、（１９９６）Ｈｕｍａ
ｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ７：２４４−２５５；Ｋｏｚａｌら、（１９９６）Ｎａ
ｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２：７５３−７５９）。例えば、ＴＡＮＧＯ−６
９−レセプターにおける遺伝子変異は、Ｃｒｏｎｉｎら（前出）によって記載さ
れるような光生成ＤＮＡプローブを含む二次元アレイにおいて同定され得る。簡
潔には、プローブの第１ハイブリダイゼーションアレイが使用されて、サンプル
およびコントロールにおけるＤＮＡの長いストレッチを通して走査して、連続重
複プローブの直線アレイを作製することにより配列間の塩基変化を同定し得る。
この工程は、点変異の同定を可能にする。この工程に続いて、検出される全ての
改変または変異に相補的な、小さな特定化されたプローブアレイを使用すること
によって、特定の変異の特徴づけを可能にする第２のハイブリダイゼーションア
レイが行われる。各変異アレイは、平行プローブセット（一方は野生型遺伝子に
対して相補的であり、もう一方は変異遺伝子に相補的である）から構成される。
【０２３７】 なお別の実施態様において、当業者に公知の任意の種々の配列決定反応が使用
されて、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子を直接的に配列決定し、そしてこ
のサンプルＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの配列を対応する野生型（コントロー
ル）配列と比較することによって変異を検出し得る。配列決定反応の例としては
、ＭａｘｉｍおよびＧｉｌｂｅｒｔ（（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：５６０）またはＳａｎｇｅｒ（（１９７７）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：５４６３）によって開発され
た技術に基づく反応が挙げられる。任意の種々の自動化配列決定手順は、質量分
析による配列決定（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１６１０１号；Ｃｈｏｓｅ
ｎら（１９９６）Ａｄｖ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．３６：１２７−１６２；およ
びＧｒｉｆｆｉｎら、（１９９３）Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌ．３８：１４７−１５９を参照のこと）を含む、診断アッセイ（１９９５
）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９：４４８）を行う場合に利用され得るこ
とを考慮される。
【０２３８】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子における変異を検出するための他の方法
としては、切断薬剤からの保護がＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡヘテロ二
重鎖におけるミスマッチ塩基を検出するために使用される方法が挙げられる（Ｍ
ｙｅｒｓら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１２４２）。一般的には、「
ミスマッチ切断」の技術は、組織サンプルから得られた潜在的に変異のＲＮＡま
たはＤＮＡとともに野生型ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター配列を含む、（標識し
た）ＲＮＡまたはＤＮＡをハイブリダイズさせることによって形成されるヘテロ
二重鎖を提供する工程を伴う。二本鎖二重鎖は、コントロール鎖とサンプル鎖と
の間の塩基対ミスマッチに起因して存在するような二重鎖の一本鎖領域を切断す
る薬剤で処理される。ＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖は、ミスマッチ領域を消化するＲＮ
ａｓｅを用いて処理され得、そして、ＤＮＡ／ＤＮＡハイブリッドは、ミスマッ
チ領域を消化するＳ１ヌクレアーゼを用いて処理され得る。他の実施態様におい
て、ＤＮＡ／ＤＮＡ二重鎖またはＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖のいずれかが、ミスマッ
チ領域を消化するために、ヒドロキシルアミンまたは四酸化オスミウムおよびピ
ペリジンを用いて処理され得る。ミスマッチ領域の消化後、得られた物質を、変
性ポリアクリルアミドゲル上でサイズによって分離して、変異の部位を決定する
。例えば、Ｃｏｔｔｏｎら、（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８５：４３９７；Ｓａｌｅｅｂａら、（１９９２）Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：２８６−２９５を参照のこと。好ましい実施態様に
おいて、コントロールＤＮＡまたはＲＮＡは、検出のために標識され得る。
【０２３９】 なお別の実施態様において、このミスマッチ切断反応は、細胞のサンプルから
得られたＴＡＮＧＯ−６９−レセプターｃＤＮＡにおける点変異を検出およびマ
ッピングするための規定されたシステムにおいて、二本鎖ＤＮＡ（いわゆる、「
ＤＮＡミスマッチ修復」酵素）におけるミスマッチ塩基対を認識する１つ以上の
タンパク質を使用する。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのｍｕｔＹ酵素は、Ｇ／Ａミスマ
ッチでＡを切断し、そしてＨｅＬａ細胞からのチミジンＤＮＡグリコシラーゼは
、Ｇ／ＴミスマッチでＴを切断する（Ｈｓｕら、（１９９４）Ｃａｒｃｉｎｏｇ
ｅｎｅｓｉｓ １５：１６５７−１６６２）。例示的な実施態様に従って、ＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプター配列（例えば、野生型ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
配列）に基づくプローブは、試験細胞からのｃＤＮＡまたは他のＤＮＡ産物にハ
イブリダイズされる。この二重鎖は、ＤＮＡミスマッチ修復酵素を用いて処理さ
れ、そして切断産物は、あるとすれば、電気泳動プロトコルなどから検出され得
る。例えば、米国特許第５，４５９，０３９号を参照のこと）。
【０２４０】 他の実施態様において、電気泳動移動度における変化が使用されて、ＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプター遺伝子における変異が同定される。例えば、一本鎖コンフ
ォメーション多型（ＳＳＣＰ）が使用されて、変異体と野生型核酸との間の電気
泳動移動度における差異を検出し得る（Ｏｒｉｔａら、（１９８９）Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：２７６６；Ｃｏｔｔｏｎ（１９９
３）Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓ．２８５：１２５−１４４；Ｈａｙａｓｈｉ（１９９２
）Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．９：７３−７９もまた参照のこ
と）。サンプルおよびコントロールＴＡＮＧＯ−６９−レセプター核酸の一本鎖
ＤＮＡフラグメントは変成され、そして再生が可能である。一本鎖核酸の二次構
造は、配列に従って変動し、そして電気泳動度において得られた変化は、単一の
塩基変化さえ検出することが可能である。ＤＮＡフラグメントは、標識され得る
か、または標識したプローブを用いて検出され得る。アッセイの感度は、（ＤＮ
Ａよりはむしろ）ＲＮＡを用いることによって増強され得、ここで二次構造は、
配列における変化に対してより感受性である。好ましい実施態様において、本発
明の方法は、ヘテロ二重鎖分析を利用して、電気泳動移動度における変化に基づ
いて二本鎖ヘテロ二重鎖分子を分離する（Ｋｅｅｎら、（１９９１）Ｔｒｅｎｄ
ｓ Ｇｅｎｅｔ．７：５）。
【０２４１】 なお別の実施態様において、変性剤の勾配を含むポリアクリルアミドにおける
変異体または野生型フラグメントの動きは、変性勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）
を使用してアッセイされる（Ｍｙｅｒｓら、（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１３
：４９５）。ＤＧＧＥが分析の方法として使用される場合、ＤＮＡは、例えば、
ＰＣＲによって約４０ｂｐの高融解ＧＣリッチＤＮＡのＧＣクランプを付加する
ことによって、完全には変成しないことを保証するように、改変される。さらな
る実施態様において、温度勾配は、コントロールＤＮＡおよびサンプルＤＮＡの
移動度における差異を同定するための変性勾配の変わりに使用される（Ｒｏｓｅ
ｎｂａｕｍおよびＲｅｉｓｓｎｅｒ（１９８７）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．２
６５：１２７５３）。
【０２４２】 点変異を検出するための他の技術の例としては、選択的オリゴヌクレオチドハ
イブリダイゼーション、選択的増幅、または選択的プライマー伸張が挙げられる
がこれらに限定されない。例えば、オリゴヌクレオチドプライマーが調製され得
、ここで、公知の変異が中心的におきかえられ、次いで完全な一致が見出される
場合のみハイブリダイゼーションが可能となる条件下で標的ＤＮＡにハイブリダ
イズされる（Ｓａｉｋｉら、（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２４：１６３；Ｓａ
ｉｋｉら、（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６
：６２３０）。このような対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、このオリゴ
ヌクレオチドがハイブリダイズメンブレンに付着され、標識された標的ＤＮＡと
ハイブリダイズされる場合に、ＰＣＲ増幅した標的ＤＮＡまたは多数の異なる変
異にハイブリダイズされる。
【０２４３】 あるいは、選択的ＰＣＲ増幅に依存する対立遺伝子特異的増幅技術は、本発明
と組み合わせて使用され得る。特異的増幅のためのプライマーとして使用される
オリゴヌクレオチドは、分子の中心において（Ｇｉｂｂｓら、（１９８９）Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１７：２４３７−２４４８）、または適切な
条件下でミスマッチがポリメラーゼ伸張を防ぐかまたは減少し得る１つのプライ
マーの３’末端にて（Ｐｒｏｓｓｎｅｒ（１９９３）Ｔｉｂｔｅｃｈ １１：２
３８）目的の変異をもたらし得る（その結果、増幅は示差的ハイブリダイゼーシ
ョンに依存する）。さらに、変異の領域における新規な制限部位を導入して、切
断に基づく検出を作製することが望まれ得る（Ｇａｓｐａｒｉｎｉら、（１９９
２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ６：１)。特定の実施態様において、増
幅はまた、増幅のためのＴａｑリガーゼを使用して行われることが予期される（
Ｂｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８
：１８９）。このような場合において、連結は、増幅の存在または非存在につい
て探索することによって特定の部位にて公知の変異の存在を検出し得るように作
製した５’配列の３’末端にて、完全な一致が存在する場合にのみ生じる。
【０２４４】 本明細書中に記載される方法は、例えば、本明細書中に記載される少なくとも
１つのプローブ核酸または抗体試薬を含む予めパッケージされた診断キットを利
用することによって行われ得る、これは、例えば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ー遺伝子に関与する疾患または疾病の徴候または家族歴を示す患者を診断するた
めの臨床設定において、都合よく用いられ得る。
【０２４５】 さらに、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターが発現される任意の細胞型または組織
、好ましくは末梢血リンパ球は、本明細書中に記載される予後アッセイにおいて
利用され得る。
【０２４６】 （３．薬理遺伝学） 因子、すなわち、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同
定されるようなＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性（例えば、ＴＡＮＧＯ−６９
−レセプター遺伝子発現）に対する刺激効果または阻害効果を有する刺激因子は
、個体に投与されて、異常なＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性に関連する障害
（例えば、炎症、凝固、新脈管形成、ＨＳＶ感染および／または増殖、ぜん息、
皮膚炎（ｄｅｒｍｉｔｉｔｓ）、線維症、炎症性腸疾患、寄生性感染、およびウ
イルス感染）が処置され得る（予防的または治療的に）。このような処置と組み
合わせて、個体の薬理遺伝学（すなわち、個体の遺伝子型と、外来化合物または
薬物に対する個体応答との間の関係の研究）が考慮され得る。治療薬の代謝にお
ける差異は、薬理学的に活性な薬物の容量と血中濃度との間の関係を変化させる
ことによって、重篤な毒性または治療の失敗を導き得る。従って、個体の薬理遺
伝学は、個体の遺伝子型の考慮に基づく予防的または治療的処置のために有効な
薬剤（例えば、薬物）の選択を可能にする。このような薬理遺伝学はさらに、適
切な投薬量および治療レジメを決定するために使用され得る。従って、個体にお
ける、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の活性、ＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプター核酸の発現、またはＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子の変異含量が
決定され、それにより、個体の治療的処置または予防的処置のための適切な薬剤
を選択し得る。
【０２４７】 薬理遺伝学は、罹患した個人における変更した薬物堆積および異常な作用に起
因して、薬物に対する応答における臨床的に有意な遺伝性のバリエーションに対
処する。例えば、Ｌｉｎｄｅｒ（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４３（２）：
２５４−２６６を参照のこと。一般的には、２つの型の薬理遺伝学的条件が区別
され得る。身体に対する薬物作用方法を変更する単一の要因として伝達される遺
伝的条件は、「変更された薬物作用」といわれる。薬物に対する身体作用を変更
する単一の要因として伝達される遺伝的条件は、「変更された薬物代謝」といわ
れる。これらの薬理遺伝学的条件は、稀な欠損または多型性のいずれかとして生
じ得る。例えば、グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ不全（Ｇ６Ｐ
Ｄ）は、主な臨床合併症が酸化薬物（抗−マラリア、スルホンアミド、鎮痛薬、
ニトロフラン）の摂取およびソラマメの消費の後の溶血である通常の遺伝酵素病
である。
【０２４８】 例示的な実施態様として、薬物代謝酵素の活性は、薬物作用の強度および期間
の両方の主な決定因子である。薬物代謝酵素（例えば、Ｎ−アセチルトランスフ
ェラーゼ２（ＮＡＴ ２）ならびにシトクロムＰ４５０酵素であるＣＹＰ２Ｄ６
およびＣＹＰ２Ｃ１９）の遺伝的多型の発見は、なぜ何人かの患者は、標準的か
つ安全な用量の薬物を摂取した後に、予測した薬物効果を得られないか、または
誇張された薬物応答および重篤な毒性を示すかに対する説明を提供した。これら
の多型性は、集団（迅速代謝型（ＥＭ）および乏しい代謝型（ＰＭ）における２
つの表現型において発現される。ＰＭの罹患率は、異なる集団の間では異なる。
例えば、ＣＹＰ２Ｄ６をコードする遺伝子は、高度に多型性であり、そしていく
つかの変異がＰＭにおいて同定されており、これは全て、機能的ＣＹＰ２Ｄ６の
非存在を導く。ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９の乏しい代謝型は、標準的な
用量を受けた場合、きわめて頻繁に、誇張された薬物応答および副作用を経験す
る。代謝物が活性な治療的部分である場合、ＰＭは、そのＣＹＰ２Ｄ６に形成さ
れた代謝物であるモルヒネによって媒介されるコデインの鎮痛薬効果について実
証されたように、治療的応答を示さない。他の極端な例は、標準的な用量に対し
て応答しないいわゆる超迅速代謝型である。近年では、超迅速代謝型に基づく分
子は、ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子増幅に起因することが同定されている。
【０２４９】 従って、個体におけるＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の活性、ＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプター核酸の発現、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター遺伝子の
変異含量が決定され、それにより個体の治療的または予防的処置のために適切な
薬剤を選択し得る。さらに、薬理遺伝学的研究が使用されて、薬物代謝酵素をコ
ードする多型性対立遺伝子の遺伝子型を個体の薬物応答性表現型の同定に適用し
得る。この知見は、投薬または薬物選択に適用される場合、有害な反応または治
療不全を回避し得、従って、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターモジュレーター（例
えば、本明細書中に記載される例示的なスクリーニングアッセイの１つによって
同定されるモジュレーター）を用いて被験体を処置する場合に、治療効果または
予防効果を増強する。
【０２５０】 （４．臨床試験の間の効果のモニタリング） ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの発現または活性（例えば、異常な細胞増殖お
よび／または細胞分化を調節する能力）に対する薬剤（例えば、薬物、化合物）
の影響のモニタリングを、基本的な薬物スクリーニングにおいてだけでなく、臨
床試験においても適用し得る。例えば、本明細書中に記載のスクリーニングアッ
セイによって決定されるような、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの遺伝子発現、
タンパク質レベル、またはタンパク質活性を増加させるための薬剤の有効性を、
ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの遺伝子発現、タンパク質レベル、またはタンパ
ク質活性の減少を示す被験体の臨床試験においてモニタリングし得る。あるいは
、スクリーニングアッセイによって決定されるような、ＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プターの遺伝子発現、タンパク質レベル、またはタンパク質活性を減少させるた
めの薬剤の有効性を、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの遺伝子発現、タンパク質
レベル、またはタンパク質活性の増加を示す被験体の臨床試験においてモニタリ
ングし得る。このような臨床試験では、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの発現ま
たは活性、そして好ましくは、例えば、細胞増殖障害に関連している他の遺伝子
の発現または活性を、特定の細胞の免疫応答性のマーカーとして使用し得る。
【０２５１】 例えば、限定するつもりはないが、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性を調節
する（例えば、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイで同定されるような
）薬剤（例えば、化合物、薬物、または低分子）で処理することによって、細胞
において調節される遺伝子（ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターを含む）を同定し得
る。従って、例えば、臨床試験において細胞増殖障害に対する薬剤の効果を研究
するために、細胞を単離し得、そしてＲＮＡを調製し得、ならびにＴＡＮＧＯ−
６９−レセプターおよび障害に関与する他の遺伝子の発現のレベルについて分析
し得る。遺伝子発現のレベル（すなわち、遺伝子発現パターン）を、本明細書中
に記載のようなノーザンブロット分析またはＲＴ−ＰＣＲによって、あるいは産
生されるタンパク質の量を測定することによって、本明細書中に記載の方法のう
ちの１つによって、またはＴＡＮＧＯ−６９−レセプターもしくは他の遺伝子の
活性レベルを測定することによって、定量し得る。このように、遺伝子発現パタ
ーンは、薬剤に対する細胞の生理的応答の指標となるマーカーとして作用し得る
。従って、薬剤での個体の処置前、および処置の間の種々の時点で、この応答状
態を測定し得る。
【０２５２】 好ましい実施態様では、本発明は、薬剤（例えば、本明細書中に記載のスクリ
ーニングアッセイによって同定されるアゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模
倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）、タンパク質、ペプチド、核酸、低分子
、または他の薬物候補体）での被験体の処置の有効性をモニタリングするための
方法を提供する。この方法は、以下の工程を包含する：（ｉ）この薬剤の投与前
に、被験体から投与前サンプルを得る工程；（ｉｉ）この投与前サンプルにおけ
るＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡ
の発現のレベルを検出する工程；（ｉｉｉ）１つ以上の投与後サンプルをこの被
験体から得る工程；（ｉｖ）この投与後サンプルにおけるＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプターのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベ
ルを検出する工程；（ｖ）この投与前サンプルにおけるＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プターのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベル
を、この投与後サンプル（１つまたは複数）におけるＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ターのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡと比較する工程；および（ｖ
ｉ）それに応じて、この被験体へのこの薬剤の投与を変更する工程。例えば、検
出されたよりも高いレベルにＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの発現または活性を
増加させるために（すなわち、薬剤の有効性を増加させるために）、薬剤の投与
を増加させることが所望され得る。あるいは、検出されたよりも低いレベルにＴ
ＡＮＧＯ−６９−レセプターの発現または活性を減少させるために（すなわち、
薬剤の有効性を減少させるために）、薬剤の投与を減少させることが所望され得
る。
【０２５３】 （Ｃ．処置の方法） 本発明は、異常なＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの発現または活性に関連した
障害の危険性がある（すなわち、それが疑わしい）か、またはその関連した障害
を有する被験体を処置する予防方法および治療方法の両方を提供する。
【０２５４】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターアゴニストが処置のために使用され得るＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプター活性の減少に関連した障害としては、増殖障害（例えば
、癌腫、リンパ腫（例えば、濾胞性リンパ腫））および病原体感染（例えば、細
菌（例えば、クラミジア）感染、寄生生物感染、およびウイルス感染（例えば、
ＨＳＶ感染））に関連した障害が挙げられる。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活
性の増加に関連した障害としてはまた、免疫障害（例えば、免疫不全障害（例え
ば、ＨＩＶ）およびウイルス性障害（例えば、ＨＳＶによる感染）が挙げられる
。
【０２５５】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターアンタゴニストが処置のために使用され得るＴ
ＡＮＧＯ−６９−レセプター活性の増加に関連した障害としては、免疫障害、例
えば、自己免疫障害（例えば、関節炎、移植片拒絶（例えば、同種移植片拒絶）
、Ｔ細胞障害（例えば、ＡＩＤＳ））および炎症障害（例えば、細菌感染、乾癬
、敗血症、大脳マラリア、炎症性腸疾患、関節炎（例えば、慢性関節リウマチ、
変形性関節症）およびアレルギー性炎症障害（例えば、喘息、乾癬））が挙げら
れる。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性の減少と関連した障害としてはまた、
アポトーシス障害（例えば、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、イン
スリン依存性糖尿病）、細胞傷害性障害、敗血症性ショック、悪液質、および増
殖障害（例えば、ＴＮＦによって刺激されるＢ細胞癌）が挙げられる。
【０２５６】 他のＴＡＮＧＯ−６９−レセプター関連の障害としては、ＴＮＦ関連障害（例
えば、急性心筋炎、心筋梗塞、うっ血性心不全、Ｔ細胞障害（例えば、皮膚炎、
線維症））、分化の障害およびアポトーシス障害、ならびに新脈管形成に関連し
た障害（例えば、腫瘍形成および／または転移、癌）が挙げられる。ＴＡＮＧＯ
−６９−レセプターの発現および／または活性の調節を使用して、このような障
害を処置し得る。
【０２５７】 （１．予防方法） １つの局面では、本発明は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの発現または少な
くとも１つのＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの活性を調節する薬剤を被験体に投
与することによって、この被験体において、異常なＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ーの発現または活性に関連した疾患または状態を予防するための方法を提供する
。異常なＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの発現または活性により引き起こされる
かまたはこれに起因する疾患の危険性にある被験体を、例えば、本明細書中に記
載の診断アッセイまたは予後アッセイのいずれかまたはその組み合わせにより同
定し得る。予防薬の投与は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター異常に特徴的な症状
が現れる前に起こり得、その結果、疾患または障害が予防されるか、あるいはそ
の進行が遅延される。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター異常の型に依存して、例え
ば、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターアゴニスト剤またはＴＡＮＧＯ−６９−レセ
プターアンタゴニスト剤を、被験体を処置するために使用し得る。適切な薬剤を
、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイに基づいて決定し得る。
【０２５８】 （２．治療方法） 本発明の別の局面は、治療目的のために、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの発
現または活性を調節する方法に関する。本発明の調節方法は、細胞を、その細胞
に関連するＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質活性の１つ以上の活性を調
節する薬剤と接触させる工程を包含する。ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパ
ク質活性を調節する薬剤は、本明細書中に記載の薬剤、例えば、核酸またはタン
パク質、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の天然に存在する同属のリガ
ンド、ペプチド、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターペプチド模倣物、または他の低
分子、であり得る。１つの実施態様では、薬剤が、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ータンパク質の１つ以上の生物学的活性を刺激する。このような刺激剤の例とし
ては、活性なＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質、および細胞内に導入さ
れたＴＡＮＧＯ−６９−レセプターをコードする核酸分子が挙げられる。別の実
施態様では、薬剤は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタータンパク質の１つ以上の生
物学的活性を阻害する。このような阻害性薬剤の例としては、アンチセンスＴＡ
ＮＧＯ−６９−レセプター核酸分子および抗ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター抗体
が挙げられる。これらの調節方法は、インビトロで（例えば、薬剤と共に細胞を
培養することによって）、あるいはインビボで（例えば、被験体に薬剤を投与す
ることによって）実施され得る。このように、本発明は、ＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプターのタンパク質または核酸分子の異常な発現または活性によって特徴付け
られる疾患または障害に罹患した個体を処置する方法を提供する。１つの実施態
様では、この方法は、薬剤（例えば、本明細書中に記載のスクリーニングアッセ
イによって同定される薬剤）、またはＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの発現また
は活性を調節する（例えば、アップレギュレートまたはダウンレギュレートする
）薬剤の組み合わせを投与する工程を包含する。別の実施態様では、この方法は
、低減されているかまたは異常なＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの発現または活
性を補うための治療として、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターのタンパク質または
核酸分子を投与する工程を包含する。
【０２５９】 ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性の刺激は、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
が異常にダウンレギュレートされている状況および／またはＴＡＮＧＯ−６９−
レセプター活性の増加が有益な効果を有する可能性がある状況において所望され
る。逆に、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター活性の阻害は、ＴＡＮＧＯ−６９−レ
セプターが異常にアップレギュレートされている状況および／またはＴＡＮＧＯ
−６９−レセプター活性の減少が有益な効果を有する可能性がある状況において
所望される。
【０２６０】 本発明をさらに、限定として構成されるべきではない以下の実施例によって説
明する。本願を通して引用される、すべての参考文献、特許および公開された特
許出願の内容は、本明細書中で参考として援用される。
【０２６１】 （実施例） （実施例１：ヒトのｓＨＶＥＭ１、ｓＨＶＥＭ２、ｓＨＶＥＭ３、およびｍＨ
ＶＥＭ２ ｃＤＮＡの単離および特徴付け） ｓＨＶＥＭ１およびｓＨＶＥＭ２をコードするｃＤＮＡを、ヒト大動脈内皮細
胞のｃＤＮＡライブラリーにおいて同定した。ヒト大動脈内皮細胞（Ｃｌｏｎｅ
ｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を、供給業者
の推奨に従って、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｍｅｄｉ
ａ（ＥＧＭ；Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）での培養において
拡大させた。細胞が約８０〜９０％コンフルエンスに到達した時に、その細胞を
ＴＮＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）およびシクロヘキシミド（ＣＨＩ；４０μｇ／ｍｌ）
で４時間刺激した。総ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｄｉキット（Ｑｉａｇｅｎ
，Ｉｎｃ．；Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）を用いて単離し、そして総ＲＮＡの
ポリＡ＋画分を、Ｏｌｉｇｏｔｅｘビーズ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．）を用いて
さらに精製した。３μｇのポリＡ＋ＲＮＡを用い、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ｃ
ＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓキット（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ，Ｉｎｃ．；Ｇａｉｔ
ｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を使用して、ｃＤＮＡライブラリーを合成した。プラ
スミドライブラリーを構築するために、ポリリンカー中のＳａｌＩ部位およびＮ
ｏｔＩ部位を使用して、発現プラスミドｐＭＥＴ７中に相補性ＤＮＡを直接的に
クローン化した。形質転換体を無作為に拾い、そして単回通過（ｓｉｎｇｌｅ
ｐａｓｓ）配列決定のために増殖させた。このクローン中の１つの完全な配列決
定は、新規の１９３アミノ酸のタンパク質（ｓＨＶＥＭ１）をコードすると予想
される５７９塩基対のオープンリーディングフレームを有する約１．９ｋｂのｃ
ＤＮＡ挿入物を明らかにした。別のクローンの完全な配列決定は、新規の１９７
アミノ酸のタンパク質（ｓＨＶＥＭ２）をコードすると予想される５９１塩基対
の読み取り枠を有する約１．６ｋｂのｃＤＮＡ挿入物であるｃＤＮＡを明らかに
した。
【０２６２】 ｓＨＶＥＭ３およびｍＨＶＥＭ２をコードするｃＤＮＡを、ヒト混合リンパ球
反応ライブラリーにおいて同定した。このライブラリーを、以下の通りに調製し
た；５０ｍｌの末梢血を、２２個体のボランティアのドナーからヘパリン化した
チューブに回収し、そしてＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７（Ｓｉｇｍａ）を製
造業者の指示に従って使用して、単核細胞を単離した。細胞をプールし、そして
ＭＡＣＳビーズおよびＶＳ＋分離カラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ｇ
ｅｒｍａｎｙ）を製造業者の指示に従って用いて、陽性選択によりＣＤ１９＋
Ｂ細胞を取り出した。ＣＤ１９−細胞を、抗生物質およびＬ−グルタミンを補充
したＲＰＭＩ １０％ＦＢＳ中に、１０×１０6細胞／ｍｌで再懸濁した。細胞
を、加湿インキュベーター内で３７℃にてインキュベートし、そして４、１４、
および２４時間で収集した。総ＲＮＡを、グアニジニウムイソチオシアネート／
β−メルカプトエタノール溶解および塩化セシウム勾配遠心分離法を使用して単
離した。ＤＮａｓｅ処理の後、総ＲＮＡのポリＡ＋画分を、Ｏｌｉｇｏｔｅｘビ
ーズ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．）を用いてさらに精製した。４．４μｇのポリＡ
＋ＲＮＡを用い、Ｓｕｐｅｒｓｒｉｐｔ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓキット
（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ，Ｉｎｃ．；Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を使用し
てｃＤＮＡライブラリーを合成した。プラスミドライブラリーを構築するために
、ポリリンカー中のＳａｌＩ部位およびＮｏｔＩ部位を使用して、発現プラスミ
ドｐＭＥＴ７中に相補性ＤＮＡを直接的にクローン化した。形質転換体を無作為
に拾い、そして単回通過配列決定のために増殖させた。これらのクローンのうち
の２つの完全な配列決定は、ｓＨＶＥＭ３およびｍＨＶＥＭ２を明らかにした。
【０２６３】 （実施例２：ヒト組織におけるｓＨＶＥＭ１ ｍＲＮＡの分布） ｓＨＶＥＭ１遺伝子の発現を、ノーザンブロットハイブリダイゼーションを使
用して分析した。ｓＨＶＥＭ１およびｓＨＶＥＭ２は高い配列同一性を示したの
で、ｓＨＶＥＭ１ヌクレオチドプローブの使用はまた、ｓＨＶＥＭ２の発現のパ
ターンを明らかにすると予測される。
【０２６４】 ｓＨＶＥＭ１をコードする完全な遺伝子を、プローブとして用いた。このプロ
ーブを、全長ｓＨＶＥＭ２ ｃＤＮＡを切り出すためにｐＭＥＴ７−ｓＨＶＥＭ
１プラスミドを消化することによって調製した。このフラグメントを、ｓＨＶＥ
Ｍ１プローブを作製するために、製造業者の指示に従ってＰｒｉｍｅ−Ｉｔキッ
ト（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ；Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いて、32Ｐ−ｄＣＴ
Ｐで放射性標識した。ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）、ＴＮＦ刺激Ｈ
ＵＶＥＣ細胞（１００ｎｇ／ｍｌ ＴＮＦでの４時間の刺激）、ＨＭＣ細胞（ヒ
ト肥満細胞株）、およびＴＮＦ刺激ＨＭＣ細胞由来の総ＲＮＡを含むフィルター
に、ｓＨＶＥＭ１プローブを添加した。このフィルターを、ＥｘｐｒｅｓｓＨｙ
ｂハイブリダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ；Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ
）中でインキュベートし、そして製造業者の推奨に従って、高ストリンジェンシ
ーで洗浄した。
【０２６５】 これらの研究により、ｓＨＶＥＭ１が、ＴＮＦ刺激ＨＭＣ細胞および非刺激Ｎ
ＨＣ細胞、ならびにＴＭＦ刺激ＨＵＶＥＣにおいて、約２ｋｂの転写物として発
現されることが明らかとなった。３ｋｂおよび４ｋｂの二次的転写物もまた、Ｔ
ＮＦ刺激ＨＭＣ細胞および非刺激ＨＭＣ細胞において観察された。非刺激ＨＵＶ
ＥＣにおいて、ｓＨＶＥＭ１ ｍＲＮＡ転写物は全く観察されなかった。
【０２６６】 （実施例３：ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターによるｍＨＶＥＭへのＬＩＧＨＴ
結合の調節） Ｆｒａｎｋｉｅら（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５０：１２３−１３５に記
載のアッセイのような結合アッセイを実施して、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
タンパク質が、ｍＨＶＥＭへのＬＩＧＨＴの結合を調節するか否かを決定する。
結合アッセイでは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの存在下または非存在下にお
いて、放射標識したＬＩＧＨＴを、膜結合ｍＨＶＥＭを発現する細胞に添加する
。標識したＬＩＧＨＴがｍＨＶＥＭを結合する程度を評価する。簡潔には、実験
を実施するために、ＣＨＯ−Ｋ１細胞のような細胞を、ｍＨＶＥＭ発現プラスミ
ドでトランスフェクトする。放射標識したＬＩＧＨＴを、まず、ＴＡＮＧＯ−６
９−レセプターと共にインキュベートし、次いで、この混合物をｍＨＶＥＭ発現
細胞と共にインキュベートする。予め決定された時間の後、細胞を洗浄し、そし
て結合していない放射標識ＬＩＧＨＴを取り除く。放射標識されたＬＩＧＨＴが
細胞を結合する程度を、直接計数またはシンチレーション計数によって評価し、
そしてＴＡＮＧＯ−６９−レセプターの非存在下でＬＩＧＨＴが細胞を結合する
程度と比較する。
【０２６７】 結合研究をまた使用して、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターがｍＨＶＥＭへのＬ
Ｔａの結合をブロックする能力を有するか否かを試験し得る。
【０２６８】 （実施例４：ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター細胞によるヘルペスウイルス侵入
の調節） Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙら（Ｃｅｌｌ ８７：４２７−４３６、１９９６）に記
載のアッセイのような感染性アッセイを使用して、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプタ
ーがＨＳＶの感染性に影響するか否かを決定し得る。この感染性アッセイでは、
細胞内へのＨＳＶ−１の侵入を、ＨＳＶ−１ ＩＣＰ４プロモーターの制御下で
Ｅ．ｃｏｌｉのｌａｃＺ遺伝子を有する組換えＨＳＶを用いて評価する。一旦、
ＨＳＶが細胞に侵入すると、β−ガラクトシダーゼの発現が誘導される。そして
、β−ガラクトシダーゼ活性の量は、細胞に侵入しているウイルスの量に比例す
る。この実験を実施するために、ＣＨＯ−Ｋ１細胞のような細胞を、ｍＨＶＥＭ
発現プラスミドでトランスフェクトする。次いで、細胞を、ＴＡＮＧＯ−６９−
レセプターおよび組換えＨＳＶの混合物に暴露する。予め決められた期間（例え
ば、２時間）の後、β−ガラクトシダーゼ活性を定量する。β−ガラクトシダー
ゼの定量を、β−ガラクトシダーゼ基質（例えば、ｏ−ニトロフェニルβ−Ｄ−
グルコピラニド（ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｉｄｅ）（ＯＮＰＧ、３ｍｇ／ｍｌ）を
用いて測定し得る。この反応を、ＯＮＰＧの添加後にいくつかの時点で分光法に
よってモニターして、時間と共に生成物の産生が直線的になる区間を規定する（
Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＥＬＩＳＡリーダー）。あるいは、β−ガラクトシダーゼ基
質であるＸ−ｇａｌを用いる。Ｘ−ｇａｌは、不溶性の青色反応産物を産生する
。この場合、感染後に、細胞を固定し、透過化し、そしてＸ−ｇａｌと共にイン
キュベートする。
【０２６９】 （実施例５：ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター融合タンパク質の調製） ヒトＴＡＮＧＯ−６９−レセプター（ｓＨＶＥＭ１）／ｈＩｇＧ１Ｆｃ融合タ
ンパク質ベクターを、ＰＣＲによって構築した。分泌ＴＡＮＧＯ−６９−レセプ
ターの全長オープンリーディングフレームを、第一メチオニンの前のＫｏｚａｋ
配列から終止コドンの前のアミノ酸残基まで、ＰＣＲプライマーＸおよびＹを用
いてＰＣＲ増幅した。これは、タンパク質配列の開始ＭＥＰＰＧＤ．．．．から
．．．．．．．ＳＱＴＤＬ終止に対応する（５’プライマー配列は以下の通りで
あった：（Ｘ）５’ＴＴＴＴＴＣＴＣＧＡＧＧＣＣＡＴＧＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧ
ＧＡＧＡＣ ３’（配列番号５７）。３’ＰＣＲプライマー（３アラニンリンカ
ーを含む）は以下の通りであった：（Ｙ）５’ＴＴＴＴＴＧＧＡＴＣＣＧＣＴＧ
ＣＴＧＣＧＡＧＧＴＣＴＧＴＣＴＧＡＣＴＴＴＴＣＣ ３’（配列番号５８））
。３’ＰＣＲプライマーは、ＴＡＮＧＯ−６９−レセプターとヒトＩｇＧ１ Ｆ
ｃドメインの接合部に３アラニンリンカーを含み、これは残基：ＤＰＥで開始す
る。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインのゲノム配列を、一過性発現のためにｐＣＤＭ
８ベクター中にこのＰＣＲ産物と共に連結した。配列決定したＤＮＡ構築物を、
製造業者のプロトコールに従ってＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（ＧＩＢＣＯ／Ｂ
ＲＬ）を用いて、１５０ｍＭプレート内でＨＥＫ２９３Ｔ細胞内に一過的にトラ
ンスフェクトした。トランスフェクションの７２時間後、血清を含まない馴化培
地（ＯｐｔｉＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）を収集し、スピンし、そして濾過し
た。抗ヒトＩｇＧ Ｆｃポリクローナル抗体を用いるウェスタンブロットでの上
清の分析によって、上清中に有意な量のＴＡＮＧＯ−６９−レセプター：Ｆｃ融
合タンパク質が示された。これは、ネイティブなシグナルペプチドによって媒介
された分泌を実証する。
【０２７０】 この融合タンパク質の単離を、プロテインＡに対するヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメ
インの親和性を利用する一工程精製スキームで実施した。馴化培地をＰＯＲＯＳ
Ａカラム（４．６×１００ｍｍ、ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ
ｓ）に通過させ；次いで、このカラムを、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いて洗浄し
、そして２００ｍＭグリシン（ｐＨ３．０）を用いて溶出した。この手順全体を
通して、一定流速の７ｍＬ／分を維持した。次いで、バックグラウンドよりも高
い２８０ｎｍ吸光度を有する溶出画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分析した。
ヒトＴ１９８：Ｆｃを含む画分をプールし、そして８０００ＭＷＣＯ透析チュー
ビング中で４Ｌ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）の２変化に対して、４℃にて一定の攪拌
を伴って透析した。次いで、緩衝化された交換物質を滅菌濾過し（０．２μｍ、
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、そして−８０℃で凍結させた。
【０２７１】 ＰＶＤＦ膜に結合した精製タンパク質を、Ｎ末端アミノ酸分析のために、エド
マンに基づく化学のタンパク質配列決定を用いるＰＥ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓ Ｍｏｄｅｌ ４９４ Ｐｒｏｃｉｓｅ装置で配列決定した。ア
ミノ酸残基をＨＰＬＣ（ＳｐｈｅｒｏｇｅｌマイクロＰＴＨ ３ミクロンカラム
）により分析し、そして基準と比較した分離およびピーク高によって決定した。
成熟ヒトＴＡＮＧＯ−６９−レセプター：Ｆｃタンパク質のＮ末端の最初の１０
残基は、ＰＡＬＰＳＣＫＥＤＥである。
【０２７２】 精製物質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ／クマシー染色分析は、ＮｏｖｅｘからのＭｕｌ
ｔｉＭａｒｋ分子量基準カクテルにおける６０ｋＤａマーカーよりも遅く移動し
、次いで、１４８ｋＤａマーカーよりも早く移動する分子を示す。ヒトＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプター：Ｆｃ融合タンパク質を、この同じマーカーセットによっ
て規定される検量線と相対的に約６５〜７０ｋＤａで泳動する。このＦｃ部分の
相対的分子量は、約３７ｋＤａである。従って、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによるＴＡＮ
ＧＯ−６９−レセプター：ＦｃとＦｃのサイズの差異は約２８〜３３ｋＤａであ
り、これは、シグナルペプチド切断後の分泌ヒトＴＡＮＧＯ−６９−レセプター
ポリペプチド（１５７アミノ酸）の推定サイズよりも大きい。従って、ＴＡＮＧ
Ｏ−６９−レセプター：Ｆｃの相対的分子量は、２つのコンセンサスなＮ連結グ
リコシル化部位のいずれかまたはその両方でのグリコシル化でつじつまが合う。
【０２７３】 （等価物） 当業者は、本明細書中に記載の本発明の特定の実施態様に対する多くの等価物
を認識するか、またはわずかな慣用的実験を使用して確認し得る。このような等
価物は、特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、ｃＤＮＡ配列（配列番号１）およびヒト可溶性ヘルペスウイルス侵入
メディエーター（ｓＨＶＥＭ１）の推定アミノ酸配列（配列番号２）を示す。配
列番号１のオープンリーディングフレームは、ヌクレオチド２９７からヌクレオ
チド８７５まで伸長する（配列番号３）。
【図２】 図２は、ヒトｓＨＶＥＭ１のヒドロパシープロットを示す。このタンパク質の
相対的疎水性領域は点横線の上方にあり、そしてこのタンパク質の相対的親水性
領域は点横線の下方にある。システイン残基（Ｃｙｓ）および潜在的なＮグリコ
シル化部位（Ｎｇｌｙ）が、ヒドロパシートレースのすぐ下に、短い縦線により
示される。点縦線が左側のシグナル配列（配列番号２のアミノ酸１〜３８；配列
番号５）を右側の成熟タンパク質（配列番号２のアミノ酸３９〜１９３；配列番
号４）から分離する。点横線の下側のより太い灰色の横棒は、この分子の細胞外
（「ｏｕｔ」）領域、膜貫通（「ＴＭ」）領域、および細胞内（「ｉｎ」）領域
を示す。
【図３】 図３は、ｃＤＮＡ配列（配列番号１７）およびヒト可溶性ヘルペスウイルス侵
入メディエーター−２（ｓＨＶＥＭ２）の推定アミノ酸配列（配列番号１８）を
示す。配列番号１７のオープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１０７か
らヌクレオチド６９７まで伸長する（配列番号１９）。
【図４】 図４は、ヒトｓＨＶＥＭ２のヒドロパシープロットを示す。このタンパク質の
相対的疎水性領域は点横線の上方にあり、そしてこのタンパク質の相対的親水性
領域は点横線の下方にある。システイン残基（Ｃｙｓ）および潜在的なＮグリコ
シル化部位（Ｎｇｌｙ）が、ヒドロパシートレースのすぐ下に、短い縦線により
示される。点縦線が左側のシグナル配列（配列番号１８のアミノ酸１〜３８；配
列番号２１）を右側の成熟タンパク質（配列番号１８のアミノ酸３９〜１９７；
配列番号２０）から分離する。点線の下側のより太い灰色の横棒は、この分子の
細胞外（「ｏｕｔ」）領域、膜貫通（「ＴＭ」）領域、および細胞内（「ｉｎ」
）領域を示す。
【図５】 図５は、ｃＤＮＡ配列（配列番号２９）およびヒト可溶性ヘルペスウイルス侵
入メディエーター−３（ｓＨＶＥＭ３）の推定アミノ酸配列（配列番号３０）を
示す。配列番号２９のオープンリーディングフレームは、ヌクレオチド８５から
ヌクレオチド６４２まで伸長する（配列番号３１）。
【図６】 図６は、ヒトｓＨＶＥＭ３のヒドロパシープロットを示す。このタンパク質の
相対的疎水性領域は点横線の上方にあり、そしてこのタンパク質の相対的親水性
領域は点横線の下方にある。システイン残基（Ｃｙｓ）および潜在的なＮグリコ
シル化部位（Ｎｇｌｙ）が、ヒドロパシートレースのすぐ下に、短い縦線により
示される。点縦線が左側のシグナル配列（配列番号３０のアミノ酸１〜３８；配
列番号３３）を右側の成熟タンパク質（配列番号３０のアミノ酸３９〜１８６；
配列番号３２）から分離する。点横線の下側のより太い灰色の横棒は、この分子
の細胞外（「ｏｕｔ」）領域、膜貫通（「ＴＭ」）領域、および細胞内（「ｉｎ
」）領域を示す。
【図７】 図７は、ｃＤＮＡ配列（配列番号４１）およびヒト膜結合ヘルペスウイルス侵
入メディエーター−２（ｍＨＶＥＭ２）の推定アミノ酸配列（配列番号４２）を
示す。配列番号４１のオープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１０３か
らヌクレオチド９３３まで伸長する（配列番号４３）。
【図８】 図８は、ヒトｍＨＶＥＭ３のヒドロパシープロットを示す。このタンパク質の
相対的疎水性領域は点横線の上方にあり、そしてこのタンパク質の相対的親水性
領域は点横線の下方にある。システイン残基（Ｃｙｓ）および潜在的なＮグリコ
シル化部位（Ｎｇｌｙ）が、ヒドロパシートレースのすぐ下に、短い縦線により
示される。点縦線が左側のシグナル配列（配列番号４２のアミノ酸１位〜３８位
；配列番号４５）を右側の成熟タンパク質（配列番号４２のアミノ酸３９位〜２
７７位；配列番号４４）から分離する。点横線の下側のより太い灰色の横棒は、
この分子の細胞外（「ｏｕｔ」）領域、膜貫通（「ＴＭ」）領域、および細胞内
（「ｉｎ」）領域を示す。
【図９】 図９Ａ〜９Ｄは、ｓＨＶＥＭ１のヌクレオチド配列（配列番号１）、ｓＨＶＥ
Ｍ２のヌクレオチド配列（配列番号１７）、ｓＨＶＥＭ３のヌクレオチド配列（
配列番号２９）、ｍＨＶＥＭ２のヌクレオチド配列（配列番号４１）とヒト膜結
合ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ｍＨＶＥＭ）（配列番号１４）との間
の多重配列アラインメトを示す。このアラインメントは、ＰＡＭ２５０スコアリ
ングマトリクス（ｏｐｅｎ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙは１０、およびｅｘｔｅｎ
ｄ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙは．０５）のＡＬＩＧＮ整列プログラムを使用して
、実施された。
【図１０】 図１０は、ｓＨＶＥＭ１のアミノ酸配列（配列番号２）、ｓＨＶＥＭ２のアミ
ノ酸配列（配列番号１８）、ｓＨＶＥＭ３のアミノ酸配列（配列番号３０）、ｍ
ＨＶＥＭ２のアミノ酸配列（配列番号４２）とヒト膜結合ヘルペスウイルス侵入
メディエーター（ｍＨＶＥＭ）（配列番号１３）との間の多重配列アラインメト
を示す。このアラインメントは、ＰＡＭ２５０スコアリングマトリクス（ｏｐｅ
ｎ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙは１０、およびｅｘｔｅｎｄ ｇａｐ ｐｅｎａｌ
ｔｙは．０５）のＡＬＩＧＮ整列プログラムを使用して、実施された。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/12 Ａ６１Ｐ 35/00 ４Ｃ０８４ 35/00 37/02 ４Ｈ０４５ 37/02 37/08 37/08 Ｃ０７Ｋ 14/715 Ｃ０７Ｋ 14/715 16/28 16/28 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 1/68 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｄ 33/50 33/566 33/53 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 33/566 Ｃ１２Ｒ 1:91） //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） 5/00 Ｂ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ， ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ Ｂ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ， ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，Ｍ Ｇ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ， ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，Ｙ Ｕ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 AA40 BB20 CB01 CB21 DA36 DA77 FB02 FB03 4B024 AA11 AA14 BA63 CA04 CA09 CA11 CA12 DA02 DA03 EA04 GA13 GA18 HA14 HA15 4B063 QA01 QA18 QQ61 QQ79 QR48 QR60 QR77 QR80 QS05 QS36 QX07 4B064 AG20 AG27 CA10 CA19 CA20 CC24 CE06 CE12 DA13 DA15 4B065 AA90X AA93X AA94Y AB01 BA05 BD17 CA24 CA46 4C084 AA07 AA13 BA01 BA08 BA22 BA35 MA55 NA14 ZA962 ZB072 ZB112 ZB132 ZB152 ZB262 ZB332 ZB352 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 BA41 CA40 DA51 DA76 EA50 FA74 GA10 GA26

Claims (22)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 単離された核酸分子であって、該分子は、以下からなる群よ
    り選択される： ａ）配列番号１のヌクレオチド配列、配列番号１７のヌクレオチド配列、ＡＴ
    ＣＣに受託番号９８８２１として寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートの
    ヌクレオチド配列、ＡＴＣＣに受託番号２０７１７３として寄託されたプラスミ
    ドのｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列、またはそれらの相補体のヌクレオ
    チド配列に対して、少なくとも８９．５％同一であるヌクレオチド配列を含む、
    核酸分子； ｂ）配列番号２９のヌクレオチド配列、ＡＴＣＣに受託番号２０７１７２とし
    て寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列、またはそれ
    らの相補体のヌクレオチド配列に対して、少なくとも５８％同一であるヌクレオ
    チド配列を含む、核酸分子； ｃ）配列番号４１のヌクレオチド配列、ＡＴＣＣに受託番号２０７１７１とし
    て寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列、またはそれ
    らの相補体のヌクレオチド配列に対して、少なくとも７６％同一であるヌクレオ
    チド配列を含む、核酸分子； ｄ）配列番号３のヌクレオチド配列、配列番号１９のヌクレオチド配列、配列
    番号３１のヌクレオチド配列、またはそれらの相補体のヌクレオチド配列に対し
    て、少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む、核酸分子； ｅ）配列番号４３のヌクレオチド配列、またはそれらの相補体のヌクレオチド
    配列に対して、少なくとも９２％同一であるヌクレオチド配列を含む、核酸分子
    ；および ｆ）以下を含むポリペプチドをコードする、核酸分子： 配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号１８のア
    ミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、ＡＴＣＣに受託番号９８８２１とし
    て寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列
    、ＡＴＣＣに受託番号２０７１７３として寄託されたプラスミドのｃＤＮＡイン
    サートによりコードされるアミノ酸配列、ＡＴＣＣに受託番号２０７１７２とし
    て寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列
    、またはＡＴＣＣに受託番号２０７１７１として寄託されたプラスミドのｃＤＮ
    Ａインサートによりコードされるアミノ酸配列。
  2. 【請求項２】 請求項１に記載の単離された核酸分子であって、該分子は、
    以下からなる群より選択される： ａ）以下を含む、核酸： 配列番号１のヌクレオチド配列、配列番号３のヌクレオチド配列、配列番号
    １７のヌクレオチド配列、配列番号１９のヌクレオチド配列、配列番号２９のヌ
    クレオチド配列、配列番号３１のヌクレオチド配列、配列番号４１のヌクレオチ
    ド配列、配列番号４３のヌクレオチド配列、ＡＴＣＣに受託番号９８８２１とし
    て寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列、ＡＴＣＣに
    受託番号２０７１７３として寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートのヌク
    レオチド配列、ＡＴＣＣに受託番号２０７１７２として寄託されたプラスミドの
    ｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列、ＡＴＣＣに受託番号２０７１７１とし
    て寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列、またはそれ
    らの相補体のヌクレオチド配列；ならびに ｂ）以下を含むポリペプチドをコードする、核酸分子： 配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号１８のア
    ミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号３０のアミノ酸配列、配列
    番号３２のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ
    酸配列、ＡＴＣＣに受託番号９８８２１として寄託されたプラスミドのｃＤＮＡ
    インサートによりコードされるアミノ酸配列、ＡＴＣＣに受託番号２０７１７３
    として寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸
    配列、ＡＴＣＣに受託番号２０７１７２として寄託されたプラスミドのｃＤＮＡ
    インサートによりコードされるアミノ酸配列、またはＡＴＣＣに受託番号２０７
    １７１として寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされるア
    ミノ酸配列。
  3. 【請求項３】 ベクター核酸配列をさらに含む、請求項１に記載の核酸分子
    。
  4. 【請求項４】 異種ポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、請求
    項１に記載の核酸分子。
  5. 【請求項５】 請求項１に記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
  6. 【請求項６】 哺乳動物宿主細胞である、請求項５に記載の宿主細胞。
  7. 【請求項７】 請求項１に記載の核酸分子を含む、非ヒト哺乳動物宿主細胞
    。
  8. 【請求項８】 単離されたポリペプチドであって、以下からなる群より選択
    される、ポリペプチド： ａ）以下を含む核酸に対して少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を
    含む核酸分子によりコードされる、ポリペプチド： 配列番号３のヌクレオチド配列、配列番号１９のヌクレオチド配列、配列番
    号３１のヌクレオチド配列、またはそれらの相補体のヌクレオチド配列； ｂ）以下を含む核酸に対して少なくとも９２％同一であるヌクレオチド配列を
    含む核酸分子によりコードされる、ポリペプチド： 配列番号４３のヌクレオチド配列、またはその相補体のヌクレオチド配列、
    および ｃ）以下を含む、ポリペプチド： 配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号１８のア
    ミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号３０のアミノ酸配列、配列
    番号３２のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、または配列番号４４の
    アミノ酸配列。
  9. 【請求項９】 以下を含む、請求項８に記載の単離されたポリペプチド： 配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号１８のア
    ミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号３０のアミノ酸配列、配列
    番号３２のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、または配列番号４４の
    アミノ酸配列、ＡＴＣＣに受託番号９８８２１として寄託されたプラスミドのｃ
    ＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列、ＡＴＣＣに受託番号２０７
    １７３として寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされるア
    ミノ酸配列、ＡＴＣＣに受託番号２０７１７２として寄託されたプラスミドのｃ
    ＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列、またはＡＴＣＣに受託番号
    ２０７１７１として寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードさ
    れるアミノ酸配列。
  10. 【請求項１０】 異種アミノ酸配列をさらに含む、請求項８に記載のポリペ
    プチド。
  11. 【請求項１１】 請求項８に記載のポリペプチドに選択的に結合する、抗体
    。
  12. 【請求項１２】 ポリペプチドを産生するための方法であって、請求項５に
    記載の宿主細胞を、前記核酸分子が発現される条件下で培養する工程を包含する
    、方法。
  13. 【請求項１３】 請求項８に記載のポリペプチドのサンプル中における存在
    を検出する方法であって、以下： ａ）該サンプルを請求項８に記載のポリペプチドに選択的に結合する化合物と
    接触させる工程；および ｂ）該化合物が該サンプル中の該ポリペプチドに結合するか否かを決定する工
    程、 を包含する、方法。
  14. 【請求項１４】 請求項１３に記載の方法であって、前記ポリペプチドに結
    合する前記化合物が抗体である、方法。
  15. 【請求項１５】 以下を含む、キット：請求項８に記載のポリペプチドに選
    択的に結合する化合物および使用のための指示書。
  16. 【請求項１６】 請求項１に記載の核酸分子のサンプル中における存在を検
    出するための方法であって、以下の工程； ａ）該核酸分子に選択的にハイブリダイズする核酸プローブまたはプライマー
    と該サンプルを接触させる工程；および ｂ）該核酸プローブまたはプライマーが、該サンプル中の核酸分子に結合する
    か否かを決定する工程、 を包含する、方法。
  17. 【請求項１７】 請求項１６に記載の方法であって、前記サンプルがｍＲＮ
    Ａ分子を含み、かつ核酸プローブと接触される、方法。
  18. 【請求項１８】 以下を含む、キット：請求項１に記載の核酸分子に選択的
    にハイブリダイズする化合物および使用のための指示書。
  19. 【請求項１９】 請求項８に記載のポリペプチドに結合する化合物を同定す
    るための方法であって、以下の工程： ａ）請求項８に記載のポリペプチド、または請求項８に記載のポリペプチドを
    発現する細胞を、試験化合物と接触させる工程；および ｂ）該ポリペプチドが該試験化合物に結合するか否かを決定する工程、 を包含する、方法。
  20. 【請求項２０】 請求項１９に記載の方法であって、前記ポリペプチドへの
    前記試験化合物の結合が以下からなる群より選択される方法によって検出される
    、方法： ａ）試験化合物／ポリペプチド結合の直接検出による、結合の検出； ｂ）競合的結合アッセイを使用する、結合の検出；および ｃ）ＴＡＮＧＯ−６９−レセプター媒介シグナル伝達についてのアッセイを使
    用する、結合の検出。
  21. 【請求項２１】 請求項８に記載のポリペプチドの活性を調節する方法であ
    って、請求項８に記載のポリペプチド、または請求項８に記載のポリペプチドを
    発現する細胞を、該ポリペプチドの活性を調節するに十分な濃度で、該ポリペプ
    チドに結合する化合物と接触させる工程を包含する、方法。
  22. 【請求項２２】 請求項８に記載のポリペプチドの活性を調節する化合物を
    同定するための方法であって、以下： ａ）請求項８に記載のポリペプチドを試験化合物と接触させる工程；および ｂ）該ポリペプチドの活性に対する該試験化合物の効果を決定し、それにより
    該ポリペプチドの該活性を調節する化合物を同定する工程、 を包含する、方法。
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