JP2002525631A - Diagnosis method - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】 疾病状態または症状を診断する方法であって、前記疾病状態に罹患していることが疑われる患者から採取した体液のサンプル中の前記疾病状態または症状のマーカーを検出するために、共振鏡システムなどのエバネッセント波検出装置を用いた前記方法。前記マーカー用の特異結合剤が前記検出表面に固定されているか、競合的な性質である場合、本方法は直接的でもよい。エバネッセントフィールドを監視すると、サンプル中に抗体／マーカー複合体の有無と量を判定することができる。本方法は特に、たとえば外傷の結果として炎症症状を示す、尿中のアルブミンレベルの上昇を検出するのに適している。 (57) Abstract: A method for diagnosing a disease state or condition, comprising detecting a marker for the disease state or condition in a sample of a body fluid collected from a patient suspected of suffering from the disease condition. And a method using an evanescent wave detecting device such as a resonant mirror system. The method may be direct if the specific binding agent for the marker is immobilized on the detection surface or is of a competitive nature. Monitoring the evanescent field can determine the presence and amount of the antibody / marker complex in the sample. The method is particularly suitable for detecting elevated levels of albumin in urine, eg, indicative of an inflammatory condition as a result of trauma.
Description
【０００１】 本発明は、体液における疾病および／または臨床的および／または医学的症状
のマーカーを検出するための診断方法と、そのような方法で使用される装置に関
する。The present invention relates to diagnostic methods for detecting markers of disease and / or clinical and / or medical conditions in bodily fluids and to devices used in such methods.
【０００２】 疾病状態または症状を示すタンパク質または他の構成要素などのマーカーは、
血液、血清または尿などの体液中に頻繁に存在する。たとえば、ミクロアルブミ
ン尿症またはＭＡＵ（尿中のアルブミンレベルの上昇）は、全身的な毛細血管漏
出のマーカーであり、外傷、手術、火傷または感染症の結果としての損傷を示す
。このことは、尿中のアルブミンレベルの上昇（＞３０μｇ／ｍｌ）によって特
徴付けられる。これは局部的および／または全身的な血管透過性の上昇を反映し
ている。血管透過性の上昇は、外傷または感染症に対する炎症および／または免
疫反応の結果として生じる。[0002] Markers such as proteins or other components that are indicative of a disease state or condition include:
Frequently present in body fluids such as blood, serum or urine. For example, microalbuminuria or MAU (elevated albumin levels in urine) is a marker of systemic capillary leakage and indicates damage as a result of trauma, surgery, burns or infection. This is characterized by elevated albumin levels in urine (> 30 μg / ml). This reflects increased local and / or systemic vascular permeability. Increased vascular permeability results from an inflammatory and / or immune response to trauma or infection.
【０００３】 ＭＡＵは次第に、外傷の一般的指標として認識されつつある（Ｇｏｓｌｉｎｇ
， Ｐ．， Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｍｅ
ｄｉｃｉｎｅ， １９９５， ５４， ｐ．２８５−２８９）。最近、ミクロア
ルブミン尿症は外傷患者の合併症発生の予測指標であると示唆されている。ミク
ロアルブミン尿症を臨床で迅速に判断することによって、深刻な病状の患者を回
復させるために、処置を客観的に使用できる。[0003] MAU is increasingly being recognized as a general indicator of trauma (Gosling).
, P .; , British Journal of Hospital Me
dicine, 1995, 54, p. 285-289). Recently, microalbuminuria has been suggested as a predictor of complications in trauma patients. By rapidly assessing microalbuminuria clinically, the treatment can be used objectively to ameliorate patients with serious medical conditions.
【０００４】 ミクロアルブミン尿症の分析は、たとえば大手術、大きな外傷、火傷による負
傷、急性膵炎、菌血症、急性心筋梗塞および呼吸／心臓停止後の治療などの結果
として生じる重篤な炎症症状を監視するための、商業的に普及した応用例である
。[0004] Analysis of microalbuminuria is a serious inflammatory condition resulting from, for example, major surgery, major trauma, burn injury, acute pancreatitis, bacteremia, acute myocardial infarction and treatment after respiratory / cardiac arrest. Is a commercially popular application for monitoring the
【０００５】 ＭＡＵ検出の抗体による沈殿方法は市販されている。これらはディプスティス
クから光散乱アッセイ（たとえばＢａｙｅｒ ＤＣＡ ２０００）まで多岐にわ
たる。熟練者を必要とする利用可能なシステムは、比較的時間がかかり、連続監
視には適していない。さらに、支持装置が必要な一部のアッセイは、半定量的に
すぎず、手作業でサンプルおよび／または試薬を添加する必要がある。[0005] Antibody precipitation methods for MAU detection are commercially available. These range from dipsticks to light scattering assays (eg, Bayer DCA 2000). Available systems requiring skilled personnel are relatively time consuming and are not suitable for continuous monitoring. Further, some assays that require a support device are only semi-quantitative and require manual addition of samples and / or reagents.
【０００６】 本発明は、疾病状態または症状を診断する方法を提供し、前記方法は、前記疾
病状態または症状への罹患が疑われる患者から採取した体液のサンプルを特異結
合剤に前記薬剤のために接触させることおよび、エバネッセント波検出装置を用
いて、前記結合剤と前記マーカーの複合体の有無についてアッセイを行うことを
含む。The present invention provides a method of diagnosing a disease state or condition, said method comprising: converting a sample of a body fluid collected from a patient suspected of having the disease state or condition into a specific binding agent for the agent. And performing an assay for the presence or absence of the complex of the binding agent and the marker using an evanescent wave detection device.
【０００７】 本方法によって、体液中のマーカーのレベルを迅速および／または連続的に監
視することができる。マーカーの性質によって、マーカーの存在または異常レベ
ルでの存在（上昇または低下のいずれか）によって、臨床上の問題が示される。[0007] The method allows the level of a marker in a body fluid to be monitored quickly and / or continuously. Depending on the nature of the marker, the presence of the marker or its presence at an abnormal level (either elevated or decreased) indicates a clinical problem.
【０００８】 アッセイは当分野で理解されるように、直接的にまたは競合的に実施できる。
好ましい直接アッセイでは、特異結合剤をエバネッセント波検出装置の検出表面
に固定化した後、サンプルをその表面に接触させる。すると、その上の結合マー
カーの有無または量を決定するために、エバネッセントフィールドを監視するこ
とができる。[0008] Assays can be performed directly or competitively, as understood in the art.
In a preferred direct assay, the specific binding agent is immobilized on the detection surface of an evanescent wave detector, and the sample is then contacted with that surface. The evanescent field can then be monitored to determine the presence or absence or amount of a binding marker thereon.
【０００９】 競合的アッセイでは、マーカーのない状態で、エバネッセント波検出装置の検
出表面の上に、特異結合剤を結合する抗体などの追加結合剤を固定化する。言い
換えれば、マーカーによって、特異結合剤の追加結合剤への結合がブロックされ
る。本方法では、特異結合剤をサンプルに加えて、存在するすべてのマーカーを
結合させる。検出表面との接触は、残存する未結合の特異結合剤のみが表面に結
合し、エバネッセントフィールドに影響を与えることを意味する。したがって、
結合剤の検出量が少なくなると、サンプル中に存在するマーカーの量が多く検出
される。In a competitive assay, an additional binding agent, such as an antibody that binds a specific binding agent, is immobilized on the detection surface of an evanescent wave detector in the absence of a marker. In other words, the marker blocks binding of the specific binding agent to the additional binding agent. In this method, a specific binding agent is added to the sample to bind any markers present. Contact with the detection surface means that only the remaining unbound specific binding agent binds to the surface and affects the evanescent field. Therefore,
When the detection amount of the binding agent decreases, the amount of the marker present in the sample increases.
【００１０】 エバネッセント波装置が高分子量部分に対してより高い検出効率を示すため、
このオプションは、マーカーが低分子量であり、特異結合剤が比較的高分子量で
ある場合に好ましい。Since the evanescent wave device shows higher detection efficiency for the high molecular weight portion,
This option is preferred when the marker is of low molecular weight and the specific binding agent is of relatively high molecular weight.
【００１１】 適切な特異結合剤としては、検出される特定のマーカーの性質によって、抗体
、受容体、酵素、オリゴヌクレオチドまたはその他の生体反応分子はもちろんの
こと、これらのいずれかの結合フラグメントが挙げられる。Suitable specific binding agents include antibodies, receptors, enzymes, oligonucleotides or other bioreactive molecules, as well as binding fragments of any of these, depending on the nature of the particular marker being detected. Can be
【００１２】 好ましい特異結合剤は、抗体、酵素または受容体、あるいは結合フラグメント
となる。一般に、特異結合剤は、抗体、またはＦ（ａｂ）およびＦ（ａｂ’）２
フラグメントなどのその結合フラグメントより成る。Preferred specific binding agents are antibodies, enzymes or receptors, or binding fragments. Generally, the specific binding agent is an antibody, or F (ab) and F (ab ') 2
Consisting of fragments thereof, such as fragments.
【００１３】 必要な場合は、これらは従来方法を用いて検出システムのセンサー上に固定化
される。適切な方法の例は、Ｄａｖｉｅｓ， Ｒ．Ｊ．ら（１９９４）によって
、サンディエゴのＡｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ発行のＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ｐ．２８５−２９２に記載され
ている。If necessary, these are immobilized on the sensors of the detection system using conventional methods. Examples of suitable methods are described in Davies, R .; J. (1994), Techniques, published by Academic Press in San Diego.
in Protein Chemistry, p. 285-292.
【００１４】 マーカーには、検出する疾病の状態または症状によって、タンパク質、糖類、
脂質、あるいはＤＮＡまたはＲＮＡでさえ含まれることがある。一般にマーカー
はタンパク質を含む。Markers include proteins, saccharides,
May contain lipids, or even DNA or RNA. Generally, markers include proteins.
【００１５】 直接アッセイの感度を良くするには、マーカーは、たとえば分子量が１０００
Ｄａを超えるマーカーなど、高分子量であることが好ましい。このようなマーカ
ーはエバネッセント波検出装置を用いて容易に検出される。このようなマーカー
の例は、上述したように、尿中の存在レベルが上昇した場合の炎症症状のマーカ
ーとなる、ヒト血清アルブミンである。このタンパク質に特異的な抗体は市販さ
れている。[0015] To increase the sensitivity of the direct assay, the marker may for example have a molecular weight of 1000
It is preferably of high molecular weight, such as a marker exceeding Da. Such markers are easily detected using an evanescent wave detector. An example of such a marker is human serum albumin, as described above, which is a marker for an inflammatory condition when the presence level in urine is increased. Antibodies specific for this protein are commercially available.
【００１６】 したがって本発明の検出方法は、たとえば手術、外傷、火傷による負傷、急性
膵炎、菌血症、急性心筋梗塞または呼吸／心臓停止後の治療の結果として生じる
炎症症状の指標として、ミクロアルブミン尿症を検出するのに使用できる。Thus, the detection method of the present invention may be used as an indicator of inflammatory conditions resulting from treatment following surgery, trauma, burn injury, acute pancreatitis, bacteremia, acute myocardial infarction or respiratory / cardiac arrest, for example. Can be used to detect urine.
【００１７】 この方法は、特に迅速な治療処置が不可欠な場合に外傷を認識するのに有用な
、迅速で信頼できる方法を提供する。This method provides a quick and reliable method that is useful for recognizing trauma, especially where rapid therapeutic treatment is essential.
【００１８】 本発明の方法は、局部的な屈折率の変化によるセンサーにおいて、たとえば抗
体−抗原結合を直接測定可能な、エバネッセンスによるあらゆる検出システムを
使用できる。本発明の方法に使用する適切なエバネッセント波検出装置としては
、共振鏡システム（ＲＭ）、平面光導波管装置、または表面プラズモン共振検出
器が挙げられる。しかし好ましいエバネッセント波検出装置は共振鏡システム（
ＲＭ）である。The method of the present invention can use any detection system by evanescence that can directly measure antibody-antigen binding in a sensor by local refractive index change, for example. Suitable evanescent wave detectors for use in the method of the present invention include a resonant mirror system (RM), a planar optical waveguide device, or a surface plasmon resonance detector. However, a preferred evanescent wave detector is a resonant mirror system (
RM).
【００１９】 ＲＭ装置はエバネッセントフィールドを使用して、センサー表面の屈折率の小
規模な変化を測定する。検出素子は、ガラスプリズム、薄い低屈折率シリカスペ
ーサー層およびさらに薄い高屈折率導波管層より成る一体型光チップである（図
１を参照）。単色光光線を臨界角を超えてプリズム／スペーサー境界に当てると
、完全な内面反射が起こる。定義（共振）角において、光はエバネッセントフィ
ールドによってスペーサー層を通じて光導波管で結合し、複数の内面反射によっ
て伝搬されてから、光導波管を通ってプリズムに戻る。ＲＭ装置は、共振光線と
入射光線が相から出る際の共振角を、πラジアンという因数で測定する。測定し
た共振角は、センサー表面から数百ナノメータ以内の屈折率の変化に非常に敏感
である。RM devices use evanescent fields to measure small changes in the refractive index of the sensor surface. The sensing element is an integrated optical chip consisting of a glass prism, a thin low refractive index silica spacer layer and a thinner high refractive index waveguide layer (see FIG. 1). Striking a monochromatic light beam beyond the critical angle to the prism / spacer boundary results in complete internal reflection. At a defined (resonant) angle, light is coupled in the optical waveguide by the evanescent field through the spacer layer and propagated by multiple internal reflections before returning to the prism through the optical waveguide. The RM device measures the resonance angle when the resonance light beam and the incident light beam go out of phase by a factor of π radian. The measured resonance angle is very sensitive to refractive index changes within a few hundred nanometers from the sensor surface.
【００２０】 リガンドまたはマーカーを、センサー表面に固定化された特異結合剤または認
識要素（抗体など）に結合させると、表面の屈折率が変化し、その結果、検出素
子の共振角が変化する。When a ligand or marker is bound to a specific binding agent or recognition element (such as an antibody) immobilized on the sensor surface, the surface refractive index changes, resulting in a change in the resonance angle of the detection element.
【００２１】 検出結果の特異性は、使用する結合剤の特異性によって制御する。The specificity of the detection result is controlled by the specificity of the binding agent used.
【００２２】 たとえば本発明による方法を使用するアッセイは、抗ヒト血清アルブミン（α
−ＨＳＡ）抗体をセンサー表面に固定化して、ヒトアルブミンに対して特異的に
することができる。モノクローナル（α−ＨＳＡ）抗体は市販されている。For example, an assay using the method according to the present invention may comprise an anti-human serum albumin (α
-HSA) antibodies can be immobilized on the sensor surface and made specific for human albumin. Monoclonal (α-HSA) antibodies are commercially available.
【００２３】 したがって本発明の方法の好ましい実施例において、モノクローナル（α−Ｈ
ＳＡ）抗体はＲＭシステム内のセンサーに固定化される。センサー表面に接触さ
せるサンプル中に存在するＨＳＡは、固定化α−ＨＳＡ抗体に結合し、その結果
としてセンサー表面の屈折率とセンサー素子の共振角に影響を与える。共振角の
変化は定量化され、サンプル中のＨＳＡの濃度を決定するのに使用できる。Therefore, in a preferred embodiment of the method of the present invention, the monoclonal (α-H
SA) Antibodies are immobilized on sensors in the RM system. The HSA present in the sample contacting the sensor surface binds to the immobilized α-HSA antibody, thereby affecting the refractive index of the sensor surface and the resonance angle of the sensor element. The change in resonance angle is quantified and can be used to determine the concentration of HSA in the sample.
【００２４】 生物疾病マーカー、たとえばアルブミンの特異結合剤を上に備えた共振鏡シス
テムのセンサーは、本発明の別の態様を成す。A sensor of a resonating mirror system provided with a biological disease marker, such as a specific binding agent for albumin, forms another aspect of the present invention.
【００２５】 本発明の方法を用いると、検出器のセンサー上に２種類以上の特異結合剤を適
切に構成させることによって、複数の検体またはマーカー、たとえば２〜１００
個のマーカーを同時に検出できる。このようにして、本発明の方法は、一連の医
学的症状または疾病のための迅速なスクリーニングシステムの基礎として使用で
きる。Using the method of the present invention, multiple analytes or markers, such as 2-100, can be provided by appropriately configuring two or more specific binding agents on the sensor of the detector.
Can be detected simultaneously. In this way, the method of the present invention can be used as a basis for a rapid screening system for a range of medical conditions or diseases.
【００２６】 本発明のアッセイを使用すれば、患者からの個々のサンプルを迅速に検査でき
る。たとえば、個人のグループが、たとえば爆発事件などの考えられる外傷源に
遭った場合、これらの個人からの尿サンプルを検査して、病的影響に苦しんでい
る人を判定できる。しかし本方法は、たとえば集中治療を行っている状況で、カ
テーテルを差し込まれた患者による尿流が装置を通過させることができる場合に
、患者の症状を連続的に監視し、迅速に対応するために、患者の経過を連続的に
監視する手段をさらに提供する。このような場合、液流を検出器表面に連続的に
通過させるために、検出装置にポンプを設けてもよい。Using the assays of the present invention, individual samples from a patient can be rapidly tested. For example, if a group of individuals encounters a possible source of trauma, such as an explosion, for example, urine samples from those individuals can be examined to determine who is suffering from the morbidity. However, the method is intended to provide continuous monitoring of the patient's symptoms and prompt response, for example, in intensive care settings, when urine flow from a catheterized patient can pass through the device. In addition, means are provided for continuously monitoring the progress of the patient. In such a case, the detection device may be provided with a pump in order to continuously pass the liquid flow over the detector surface.
【００２７】 ここで本発明を、以下の添付概略図を参照した実施例によって詳細に説明する
： 図１は、共振鏡システムの動作原理を図式的に示す。The invention will now be described in more detail by way of an example with reference to the following schematic diagrams, in which: FIG. 1 schematically shows the operating principle of a resonant mirror system.
【００２８】 実施例１ 使用した検出器は、連続フロー、多検体共振鏡（ＲＭ）システムであった。こ
れはＡｆｆｉｎｉｔｙ Ｓｅｎｓｏｒｓによって作成され、特許出願ＷＯ９２／
０３７２０で概説されている同社の市販の手動ダブルチャンネルＩＡｓｙシステ
ムをベースとしている。Example 1 The detector used was a continuous flow, multi-analyte resonant mirror (RM) system. It was created by Affinity Sensors and is described in patent application WO 92 /
It is based on the company's commercially available manual double channel IAsy system outlined in 03720.
【００２９】 連続フロー自動多検体装置を作成するために、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ Ａｆｆ
ｉｎｉｔｙ Ｓｅｎｓｏｒｓと協力して変更を行った。In order to create a continuous flow automatic multi-sample device, Labsystems Aff
Made changes in cooperation with inity Sensors.
【００３０】 センサー装置上で１６の検出ストリップを同時に測定可能なようにシステムを
変更することに決定した。これによって原則として、最大１５の各種検体と、機
器によるずれの影響、温度による影響および非特異結合を除去するための参照チ
ャンネルを同時に監視することができる。It was decided to modify the system so that 16 detection strips could be measured simultaneously on the sensor device. This makes it possible, in principle, to simultaneously monitor up to 15 different specimens and the reference channel for removing the effects of instrumental deviations, the effects of temperature and non-specific binding.
【００３１】 連続フローシステムを作成するために、簡単な流体配置を用いてサンプルセル
を取り付けた。これは、ステンレス鋼針状管の備えによって改良したＲＭキュベ
ットを使用した。これらは、センサー表面より上に固定されているが調整可能な
高さに、サンプルの連続流入と排水の連続吸引ができるように取り付けた。To create a continuous flow system, a sample cell was installed using a simple fluid configuration. This used an RM cuvette modified by the provision of a stainless steel needle. These were mounted at a fixed but adjustable height above the sensor surface to allow for continuous inflow of sample and continuous aspiration of drainage.
【００３２】 α−ＨＳＡ抗体（Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ、０２２０−０７０４）は１４ｎｇ／
ｍｍ２でデキストラン被覆センサー表面に固定し、ＨＳＡ濃度（μｇ／ｍｌ）に
対する初期反応速度（Ａｒｃ−２）の標準曲線を決定した。反応は、相関係数０
．９６の場合、０〜５００μｇ／ｍｌの範囲にわたって線形であった。The α-HSA antibody (Biogenesis, 0220-0704) was 14 ng /
The sample was immobilized on a dextran-coated sensor surface in mm 2 , and a standard curve of initial reaction rate (Arc −2 ) with respect to HSA concentration (μg / ml) was determined. The response has a correlation coefficient of 0
. In the case of 96, it was linear over the range of 0-500 μg / ml.
【００３３】 その後、尿サンプル中のＨＳＡレベルを決定し、従来のアッセイを用いて得ら
れた結果と比較した。尿サンプルは反応をアッセイしたＰＢＳで１：１０に希釈
し、標準曲線を用いて濃度を決定した（表２を参照）。Thereafter, the HSA levels in the urine samples were determined and compared with the results obtained using conventional assays. Urine samples were diluted 1:10 with PBS assayed for the reaction and the concentration was determined using a standard curve (see Table 2).
【００３４】[0034]
【表１】 [Table 1]
【００３５】 従来の方法とＲＭによる方法の間には、強い相関（０．９９７）が見られた。A strong correlation (0.997) was found between the conventional method and the RM method.
【００３６】 結果は−１０秒以内に得られ、ＨＳＡレベルの連続監視についてすることがで
きた。The results were obtained within -10 seconds and could be monitored for continuous monitoring of HSA levels.
【００３７】 さらに別の研究によって、高濃度（２９２＋／−２７μｇ／ｍｌ、平均＋／−
標準偏差）および低濃度（７．８＋／−１．４μｇ／ｍｌ、平均＋／−標準偏差
）において、アッセイに再現性があることが証明された。センサー表面は一度被
覆すると結果に影響を与えずに、再利用可能であり、少なくとも１ヶ月間は４℃
で保存できる。In yet another study, high concentrations (292 +/− 27 μg / ml, mean +/−
The assay proved to be reproducible at low concentrations (standard deviation) and at low concentrations (7.8 +/- 1.4 μg / ml, mean +/− standard deviation). Once coated, the sensor surface can be reused without affecting the results, at 4 ° C for at least one month
You can save with.
【図１】 共振鏡システムの動作原理を図式的に示す。FIG. 1 schematically illustrates the operating principle of a resonant mirror system.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｕ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ， ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，Ｌ Ｒ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ， ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，Ｔ Ｒ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ ，ＺＷ (72)発明者 ペイン，デイーン・ウイリアム イギリス国、ウイルトシヤー・エス・ピ ー・４・０・ジエイ・キユー、ソールズベ リ、シー・ビイ・デイ・ポートン・ダウン （番地なし) (72)発明者 マクダネル，マーテイン・バーナード イギリス国、ウイルトシヤー・エス・ピ ー・４・０・ジエイ・キユー、ソールズベ リ、シー・ビイ・デイ・ポートン・ダウン （番地なし) (72)発明者 フイツシヤー，マイケル・イアン イギリス国、ウイルトシヤー・エス・ピ ー・４・０・ジエイ・キユー、ソールズベ リ、シー・ビイ・デイ・ポートン・ダウン （番地なし) (72)発明者 ゴズリング，ピーター イギリス国、バーミンガム・ビイ・29・ ６・ジエイ・デイ、ラドルバーン・ロー ド、スクリイ・オーク・ホスピタル、エ ヌ・エイチ・エス・トラスト、ユニリーバ ー・ホスピタル・バーミンガム、デパート メント・オブ・クリニカル・バイオケミス トリー（番地なし) Ｆターム(参考） 2G059 AA05 AA06 BB12 BB13 CC16 DD04 EE02 FF08 MM03 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continuation of front page (81) Designated country EP (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE ), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (GH, GM, KE, LS, MW, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZW), EA (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), AE, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN , IS, JP, KE, KG, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZA, ZW (72) Inventor Payne, Dean William UK Wiltshire SP 4.0 JK, Salisbury, CV Day Porton Down (no address) (72) Inventor MacDonnell, Martin Barnard Wiltshire SP, UK -4.0 JK, Salisbury, Seabee Day Porton Down (no address) (72) Inventor Fuitsier, Michael Ian Wiltshire, UK・ Pee 4.0 JK, Salisbury, Seabee Day Porton Down (no address) (72) Inventor Gosling, Peter Birmingham Beek 29.6 Jday, UK , Ladleburn Road, SCREEN Oak Hospital, NHS Trust, Unilever Hospital Birmingham, Department of Clinical Biochemistry (no address) F-term (reference) 2G059 AA05 AA06 BB12 BB13 CC16 DD04 EE02 FF08 MM03
Claims (20)
または症状への罹患が疑われる患者から採取した体液のサンプルを特異結合剤に
前記薬剤のために接触させることおよび、エバネッセント波検出装置を用いて、
前記結合剤と前記マーカーの複合体の有無についてアッセイを行うことを含むこ
とを特徴とする方法。1. A method for diagnosing a disease state or condition, comprising contacting a sample of bodily fluid from a patient suspected of having the disease state or condition with a specific binding agent for the agent; Using an evanescent wave detection device,
Performing an assay for the presence or absence of the complex of the binding agent and the marker.
せた後に、サンプルをその表面に接触させることを特徴とする、請求項１に記載
の方法。2. The method according to claim 1, wherein after the specific binding agent is immobilized on the detection surface of the evanescent wave detection device, the sample is brought into contact with the surface.
、請求項１または２に記載の方法。3. The method according to claim 1, wherein the molecular weight of the marker exceeds 1000 Da.
に、特異結合剤と結合する追加結合剤を固定し、存在するすべてのマーカーと結
合させるために特異結合剤をサンプルに加えることを特徴とする、請求項１に記
載の方法。4. An immobilization of an additional binding agent that binds to the specific binding agent on the detection surface of the evanescent wave detection device in the absence of the marker, and adding the specific binding agent to the sample to bind to all the markers present. The method according to claim 1, characterized in that:
ずれかの結合フラグメントであることを特徴とする、先行する請求項のいずれか
１項に記載の方法。5. The method according to claim 1, wherein the specific binding agent is an antibody, an enzyme or a receptor, or a binding fragment of any of these.
特徴とする、請求項５に記載の方法。6. The method according to claim 5, wherein the specific binding agent is an antibody or a binding fragment thereof.
か１項に記載の方法。7. The method according to claim 1, wherein the bodily fluid is urine.
記載の方法。8. The method according to claim 7, wherein the marker is albumin.
求項８に記載の方法。9. The method of claim 8, wherein the diagnosed disease condition is an inflammatory condition.
症、急性心筋梗塞および呼吸／心臓停止後の治療の結果であることを特徴とする
、請求項９に記載の方法。10. The method according to claim 9, wherein the inflammatory condition is the result of treatment after surgery, trauma, burn injury, acute pancreatitis, bacteremia, acute myocardial infarction and respiratory / cardiac arrest. Method.
面光導波管装置、または表面プラズモン共振検出器であることを特徴とする、先
行する請求項のいずれか１項に記載の方法。12. The method according to claim 1, wherein the evanescent wave detector is a resonant mirror system (RM), a planar optical waveguide device, or a surface plasmon resonance detector. .
ることを特徴とする、請求項１２に記載の方法。13. The method according to claim 12, wherein the evanescent wave detector is a resonant mirror system (RM).
する、先行する請求項のいずれか１項に記載の方法。14. The method according to claim 1, wherein two or more binding agents are immobilized on the detector surface.
ステムの検出鏡。15. A detection mirror of a resonant mirror system, on which a specific binding agent for a biological disease marker is mounted.
、請求項１５に記載の鏡。16. The mirror according to claim 15, wherein the specific binding agent is specific for albumin.
使用。17. Use of an evanescent wave detection system in diagnosing a disease state.
が固定化されており、前記疾病状態または症状の診断において使用するためのエ
バネッセント波検出システム。18. An evanescent wave detection system, wherein a specific binding agent for a marker for a disease state or condition is immobilized on a detection surface, and the evanescent wave detection system is used for diagnosis of the disease state or condition.
特徴とする、請求項１８に記載のエバネッセント波検出システム。19. The evanescent wave detection system according to claim 18, comprising means for continuously flowing the sample to the detection surface.
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