JP2002517167A - 呼吸器ウイルスの感染を予防するための製品及び方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 呼吸器合胞体ウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルスまたはインフルエンザウイルスを原因とする肺炎または他の呼吸器疾患の治療方法であって、ウイルス中和抗体を含有する液体、好ましくは乳児用調合乳を経口投与する方法。

Description

【発明の詳細な説明】 呼吸器ウイルスの感染を予防するための製品及び方法 発明の背景発明の分野 本発明は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、アデノウイルス、パラインフル エンザウイルスまたはインフルエンザウイルスの中和活性を有する経口投与抗体 、及び、上下の気道のＲＳＶ感染症または他のウイルス感染症の発病率または重 篤度を軽減するためのその使用に関する。従来技術の説明 呼吸器合胞体ウイルスは小児の肺炎及び気管支炎の主因である。生後２〜５カ 月の嬰児では症状が最も重篤で入院が必要になることもある。生後１年以内にす べての小児の半数以上がＲＳＶに感染し、生後２年目以後はほぼ全員が感染して いる。託児所に通う児童はより早い時期により重篤な感染症に罹り易い。 ＲＳＶ感染症が繰返して罹患する病気であることは知られているが、繰返して発 病したときにはその経過（ｅｐｉｓｏｄｅ）が軽減する傾向がある。 流行期には殆どの幼児、児童及び成人に感染または再感染の 危険がある。健康な幼児及び児童にも感染の危険があるが、これに加えて、重篤 なＲＳＶ感染の危険がある別のグループとしては、未熟児、入院児童、心臓障害 または肺障害のある幼児及び児童、免疫力の弱い易感染性の児童及び成人、並び に高齢者がある。 ＲＳＶ感染の症状は、軽い風邪から重い気管支炎及び肺炎まで多岐にわたって いる。呼吸器合胞体ウイルスは、急性の中耳炎にも関連し、中耳流体からＲＳＶ が検出される。 呼吸器合胞体ウイルスは、組織培養物中で細胞融合（合胞体）を形成し得るＲ ＮＡウイルスである。このウイルスは、パラミクソウイルス科のニューモウイル スとして分類されている。ＲＮＡゲノムは、ウイルスエンベロープ内の２つのマ トリックスタンパク質を含む少なくとも１０個のタンパク質をコードしている（ Ｒｙａｎ，Ｓｈｅｒｒｉｓ’Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，３ｄ ｅｄ．，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，ｐ．４５８，１９９４）。 １つのマトリックスタンパク質はウイルスエンベロープの内層を形成している。 エンベロープの表面の抗原は、宿主細胞レセプターへの結合部位であると推測さ れるＧ糖タンパク質、及び、融合を誘発するＦ 糖タンパク質である。Ｇ糖タンパク質抗体はウイルスをｉｎ ｖｉｔｒｏで中和 し得る。 ウイルス感染によってＩｇＧ及びＩｇＡの体液性及び分泌型の抗体応答が生じ る。免疫は終生免疫でなく、感染症が繰返すことは知られているが、疾病の重篤 度は加齢及び感染の繰返しに伴って軽減する。ＲＳＶに対する防御効果を示した ワクチンは存在せず、これまでは抗ウイルス薬の有効性も僅かでしかなかった。 授乳はＲＳＶ感染に対してある程度の防御効果を与える。ヒトの母乳中及び初乳 中にはＲＳＶ特異的なＩｇＡ抗体及びＩｇＧ抗体が検出され、ヒトの母乳中の免 疫グロブリン成分及び非免疫グロブリン成分の双方と共に細胞培養したときにＲ ＳＶの中和が達成された（Ｌａｅｇｒｅｉｄら，“呼吸器合胞体ウイルスに対す るヒトの母乳画分中の中和抗体（Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｍｉｌｋ Ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｒｅｓ ｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ Ｖｉｒｕｓ），Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉ ａｔｒｉｃａ Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ，７５：６９６−７０１，１９８６） 。 Ｏｋａｍｏｔｏら（Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃａ Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ，３５１：１３７−１４３， １９８９）は、小児が胎盤または授乳から獲得した免疫は下気道疾患の危険性を 軽減すると報告している。Ｏｋａｍｏｔｏらの報告の目的は、授乳によって母体 から伝達される抗体の役割、及び、ＲＳＶに対する小児の免疫応答を変調するた めに母乳が果たすと推測される役割を証明することである。本発明の目的は、経 口摂取される製品に中和抗体を添加することによって受動免疫を獲得させる方法 である。本明細書中で使用される経口摂取なる用語は、宿主によって嚥下される 物質を意味する。 ＲＳＶ感染に対する従来の治療は、モノクローナル抗体のような薬剤またはリ バビリンのような抗ウイルス薬の非経口投与またはエアゾール投与に依存してい た。本発明は、ＲＳＶ中和活性を有する抗体の経口投与を開示する。 Ｐｒｉｎｃｅら（米国特許第４，８００，０７８号）は、好ましくは免疫グロ ブリンを小粒子エアゾールとして投与する下気道への抗ＲＳＶ抗体の局所投与方 法を教示している。免疫グロブリンを静脈内経路で投与することも可能である。 米国特許第５，２９０，５４０号においてＰｒｉｎｃｅらは、 細菌またはＲＳＶなどのウイルスを原因とする肺炎を治療するために抗炎症薬と 抗感染薬との双方を小粒子エアゾールの形態で局所投与することを開示している 。 Ｙｏｕｎｇらのカナダ特許第２，０４０，７７０号は、ＲＳＶの融合タンパク 質（Ｆ糖タンパク質）に対する中和モノクローナル抗体または非中和モノクロー ナル抗体を投与することによってＲＳＶなどの呼吸器ウイルスを治療する方法を 開示している。Ｙｏｕｎｇらの方法を用いるモノクローナル抗体治療は、鼻孔内 投与もしくはエアゾール吸入による局所治療方法、または、筋肉内投与による全 身性治療方法である。対照的に、本発明は、経口投与治療を開示する。 ＷＯ９２／０１４７３は、特異的ウイルス表面抗原部位に中和用及び／または 治療用モノクローナル抗体をデリバリーするために小粒子エアゾールを用いる下 気道のウイルス疾患の治療方法を開示している。 ＷＯ９２／１９２４４は、小粒子エアゾールの形態で気道にデリバリーするた めに、ヒト免疫グロブリンＧのような抗感染薬または抗生物質と抗炎症薬または コルチコステロイドとを併用することを教示している。 ＷＯ９４／１７１０５は、ＲＳＶ、好ましくはＲＳＶのＦ抗原に対して高度に 特異的な中和活性を有するヒト−ネズミキメラ抗体を開示している。 従来技術の文献は、小粒子エアゾールの吸入による局所投与によるかまたは静 脈内もしくは筋肉内注入による非経口投与によるウイルス中和化合物のデリバリ ーを開示している。ＲＳＶ感染の予防またはその発病率及び重篤度を軽減するた めに、非吸収型（non-absorbed）ＲＳＶ中和化合物を摂取させることが従来技術 の文献で開示または証明されたことはない。本発明で証明されたこの構想は、Ｒ ＳＶ中和抗体が、上咽頭、中咽頭、下咽頭の粘膜表面へのウイルス付着を抑制し 、これによって、抗体を嚥下したときに感染性ウイルスが鼻から肺に伝播するこ とを防止または抑制する能力を有することに依存する。液体製品の形態でＲＳＶ 中和抗体をデリバリーすることは投与し易いという面からも特に有利である。発明の説明 本発明は、呼吸器ウイルス中和化合物を含有する経口投与型液体製品である。 本発明の１つの実施態様において、ウイルス中和化合物はＲＳＶ中和抗体であり 、これが栄養製品に添加さ れている。本発明はまた、呼吸器ウイルス中和抗体を液体製品に添加することに よって有効濃度の該抗体をデリバリーする方法である。本明細中及び請求の範囲 で使用される呼吸器ウイルス中和抗体なる用語は、ヒトまたはウシなどの任意の 哺乳類ソースに由来し呼吸器ウイルスを中和し得る抗体を意味すると理解された い。本発明の１つの実施態様では、呼吸器ウイルス中和抗体が、乳児用調合乳の ような小児用栄養製品に添加され、生後１年目の乳児に与えられる。小児用調合 製品は、水で復元させる粉末、そのまま与えられる液体または濃縮液体のいずれ でもよい。本発明を適用できる呼吸器ウイルスは、呼吸器合胞体ウイルス、アデ ノウイルス、パラインフルエンザウイルス及びインフルエンザウイルスである。実験プロトコル 動物の肺感染症を誘発したヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＨＲＳＶ）に対する中 和抗体摂取の効果を判定する実験を実施する。実験の目的は、ＨＲＳＶ肺感染症 に対する規定食摂取の効果を判定するために、ＨＲＳＶによって鼻孔攻撃する動 物モデルを同定し、ＨＲＳＶ中和抗体及び／または他の中和化合物がＨＲＳＶに よる鼻孔攻撃後に動物体内の肺感染を予防または軽減で きるか否かを判断することにある。動物モデルの陽性結果によってＨＲＳＶ中和 化合物で強化した液体製品の臨床効果を最終的に評価し得る。 動物及び規定食：ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＨＲＳＶ）に対する血清中和抗 体をもたない３０日齢の近交系コットンラット（Ｓｉｇｍｏｄｏｎ ｆｕｌｖｉ ｖｅｎｔｅｒ）を使用する。実験開始前に、乳児用調合乳から成る液体基礎食を ラットに２日間摂取させる。鼻孔内ウイルス接種の１日前に、実験用規定食を準 備する。摂食量及び体重変化を毎日モニターする。実験の終了後、二酸化炭素で 窒息させて全部のラットを殺し、鼻孔及び肺の組織を摘出して分析する。 ウイルス：使用されるウイルスはヒト呼吸器合胞体ウイルスサブグループＡ２ （ＨＲＳＶ／Ｌｏｎｇ）である。ＨＥｐ−２細胞の単層を感染させ、単層が約９ ％の合胞体形成を示すまで細胞を増殖させることによってウイルスを調製する。 単層から培地を収集し、プールし、４５０×ｇで遠心することによって清澄化す る。清澄化した上清流体を０．４５μＭのフィルターに通す。プラークアッセイ によって測定すると、この上清は１０⁶ＰＦＵ／ｍｌのヒト呼吸器合胞体ウイル ス（ＨＲＳＶ） を含有する。 抗体：市販（Ｓａｎｄｏｚ，Ｅａｓｔ Ｈａｎｏｖｅｒ，ＮＪ）のポリクロー ナルＨＲＳＶ抗体（ＨＲＳＶＩＧ）を種々の濃度で液体規定食に混入し、ＨＲＳ ＶＩＧを補充した実験用規定食のｉｎ ｖｉｔｒｏ中和活性をプラーク減少アッ セイによって測定する。 ウイルス力価測定：ウイルス接種の翌日から実験終了日まで毎日午前８時前に 中咽頭スワブを採取する。全部のスワブのＨＲＳＶ抗原を測定する。剖検では、 鼻孔及び肺の組織を、０．２１８Ｍのショ糖、４．４ｍＭのグルタメート、３． ８ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄及び３．２ｍＭのＫ₂ＨＰＯ₄を補充した１０部（重量／容量 ）のハンクスの平衡塩類溶液でホモジェナイズする。得られた懸濁液を使用して 、Ｈｅｐ−２細胞単層上のプラークアッセイによってウイルス力価を測定する。 組織病理学的試験：ホルマリン固定した鼻孔組織及び肺をパラフィンに封入し 、冠状断面に沿った切片に切断し、過ヨウ素酸−シッフ（パス）を含むヘマトキ シリン−エオジンで染色し、光学顕微鏡で観察する。顕微鏡観察中のサンプル番 号を知らない病理学者がスライドを作製する。パス染色した肺の組織病理 学を、Ｐｉｅｄｒａら（“ホルマリン失活呼吸器合胞体ウイルスで免疫感作した コットンラットの肺傷害のメカニズム（Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ ｒａｔｓ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｆｏｒｍａｌｉｎ−ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙ ｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）”，Ｖａｃｃｉｎｅ ７：３４−３８，１９８９ ）によって定義された採点法で０−２．０、２．１−６．０、６．１−１０．０ 、１０．１−１２のスコアで評価する。 統計的分析：個々のグループ間の測定値の割合を比較するためにシングルテー ルＸ²を使用する。ウイルス力価及び肺傷害の重篤度を比較するために分散分析 を使用する。実施例 ：規定食として摂取されたヒト呼吸器ウイルス免疫グロブリン（ＨＲＳＶ ＩＧ）とヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＨＲＳＶ）感染との間の用量−応答関係を 検査する試験 Ｐｉａｚｚａら（“小粒子エアゾール中のＩｇＧを用いるコットンラット（Ｓ ｉｇｍｏｄｏｎ ｆｕｌｖｉｖｅｎｔｅｒ）の呼吸器合胞体ウイルス感染症の免 疫治療（Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎ ｃｙｔｉ ａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ ｒａｔｓ（Ｓｉ ｇｍｏｄｏｎ ｆｕｌｖｉｖｅｎｔｅｒ）ｕｓｉｎｇ ＩｇＧ ｉｎ ａｌ ｓ ｍａｌｌ−ｐａｒｔｉｃｌｅ ａｅｒｏｓｏｌ）”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉ ｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ １６６：１４２２−１４２４，１９９２ ）は、コットンラットに対するＨＲＳＶ接種の３日後に小粒子エアゾールの形態 で１５分間投与した５ｍｇ／１００ｍｌ溶液のＨＲＳＶＩＧがウイルス力価を１ ／５０に減少させることを示した。この実験は、ＨＲＳＶＩＧの経口投与が肺感 染症を同様に軽減し得るか否かを判断するように設計する。このためには、液体 規定食に種々の濃度の抗ＲＳＶ ＩｇＧを混入後、実験用規定食のｉｎ ｖｉｔ ｒｏ中和活性をＰｒｉｎｃｅら（“コットンラットの呼吸器合胞体ウイルス感染 の病理発生（Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒ ｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｔｔｏ ｎ ｒａｔｓ）”，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏ ｇｙ ９３：７７１−７９２，１９７８）によって記載されたプラーク減少アッ セイによって測定する。 試験のために、７０匹のラットを７つの処理グループに分割する。処理グルー プ１は１０匹のラットからなる陰性対照である。これらのラットには液体基礎食 を摂取させ、細胞またはＨＲＳＶの欠如したＨＥｐ−２細胞培養培地の上清を０ ．１ｍｌ接種する。処理グループ２、３、４及び５の各々の各１０匹のラットに は、ＨＲＳＶＩＧを夫々０、０．５、５及び１０ｍｇ／１００ｍｌの濃度で補充 した液体基礎食を摂取させる。各ラットが１００ｍｌの液体規定食を消費したと 想定すると、各グループのラットの１日あたりのＨＲＳＶＩＧの投与量は０、０ ．５、５及び１０ｍｇであると予測できる。処理グループ６及び７のラットには 、抗呼吸器ウイルス特性を有している他の試験薬を補充した液体基礎食を摂取さ せる。実験用規定食摂取の１日後に、ＨＲＳＶを１０³ＰＦＵ／ｍｌ（プラーク 形成単位）で含有する０．１ｍｌのウイルス懸濁液を用いて処理グループ２−７ のラットの鼻孔内にＨＲＳＶ／Ｌｏｎｇを接種する。実験が終了するまで全部の ラットに夫々に割りあてた規定食の摂取を続けさせる。ウイルスによる攻撃の４ 日後に、全部のラットを殺し、鼻孔組織及び肺を摘出して引き続き分析する。 有効濃度の呼吸器ウイルス中和抗体を液体製品に添加し得る。 本発明の特定実施態様では、液体製品は、ＲＳＶに最も感染し易い時期である生 後１年間に乳児に与えられる調合乳である。小児用調合栄養製品は、水で復元さ れる粉末の形態でもよく、そのままで与えられる液体でもよくまたは濃縮液体で もよい。しかしながら、本発明の範囲がこれらの特定実施態様に限定されないこ とは理解されよう。本発明は、請求の範囲に記載の範囲に包含される限り、詳細 に記載した方法以外の方法でも実施できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/16 Ａ６１Ｐ 31/16 31/20 31/20 (72)発明者 シエイラー，ジヨージフ・ポール アメリカ合衆国、オハイオ・43232、コロ ンバス、ニー・ビクスビイ・ロード・1547 (72)発明者 リウ，ジン−ズー アメリカ合衆国、オハイオ・43230、ガハ ナ、ランドーバー・ロード・179

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．呼吸器合胞体ウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルス及び インフルエンザウイルスから成るグループから選択されたウイルスを原因とする 上気道及び／または下気道の呼吸器ウイルス感染症の予防または治療方法であっ て、方法が、 ａ．呼吸器ウイルス中和活性を崩する抗体を治療有効量で液体に添加する段階と 、 ｂ．液体を動物に経口投与する段階とから成る方法。 ２．抗体がＩｇＧであることを特徴とする請求項１に記載の呼吸器ウイルス感染 症の予防または治療方法。 ３．抗体がＩｇＡであることを特徴とする請求項１に記載の呼吸器ウイルス感染 症の予防または治療方法。 ４．液体が乳児用調合乳であることを特徴とする請求項１に記載の呼吸器ウイル ス感染症の予防または治療方法。 ５．哺乳類が小児であることを特徴とする請求項１に記載の呼吸器ウイルス感染 症の予防または治療方法。 ６．上気道及び／または下気道の呼吸器合胞体ウイルス感染症 の予防または治療方法であって、方法が、 ａ．呼吸器合胞体ウイルス中和活性を有する抗体を治療有効量で液体に添加する 段階と、 ｂ．液体を動物に経口投与する段階とから成る方法。 ７．治療有効量の呼吸器ウイルス中和抗体を含む哺乳動物の呼吸器ウイルス感染 症の予防または治療用液体。 ８．治療有効量の呼吸器ウイルス中和抗体を含む乳児用調合乳。