JP2002514882A

JP2002514882A - グリシン輸送体をコードするｄｎａおよびその使用

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Publication number: JP2002514882A
Application number: JP50936393A
Authority: JP
Inventors: スミス、ケリー; ボーデン、ローレンス・エー; ブランチェック、テレサ; ハーティッグ、ポール・アール; ウエインシャンク、リチャード・エル
Original assignee: シナプティック・ファーマスーティカル・コーポレーション
Priority date: 1991-11-12
Filing date: 1992-11-12
Publication date: 2002-05-21
Also published as: EP0614487A4; AU3071392A; CA2123323A1; EP0614487A1; WO1993010228A1; US5756348A; AU679432B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体をコードする単離された核酸分子、該単離された核酸分子を具備するベクター、このようなベクターを具備する哺乳動物細胞、核酸プローブ、哺乳類グリシン輸送体をコードする核酸分子の配列に対して相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド、並びに正常もしくは突然変異の哺乳類グリシン輪送体をコードするＤＮＡを発現する非ヒトトランスジェニック動物を提供する。本発明はまた、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体タンパク、これらに対する抗体、並びにヒト・グリシン輸送体に関連する薬剤化合物を提供する。本発明は更に、リガンド結合の検出方法、発現の検出方法、薬物スクリーニングの方法、並びに哺乳類グリシン輸送体もしくはヒト・グリシン輸送体に関連した異常を緩和するための治療を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】グリシン輸送体をコードするＤＮＡおよびその使用〔発明の背景〕本発明は、1991年11月12日に出願された米国特許出願第791,927号の一部係属出願であり、該親出願の内容は参照として本出願の開示に組み込まれる。この出願の全体を通して、種々の刊行物が括弧内の略記された引用によって参照される。これら刊行物の完全な引用は、請求の範囲の直前の明細書末尾に列挙されている。これら刊行物の全開示が、本発明の属する技術の状態を完全に記述するために、全体としてこの出願に組み込まれる。シナップス伝達の本質的な性質は、神経伝達物質の放出に続く作用の迅速な終了である。カテコールアミン、セロトニンおよび或る種のアミノ酸（例えばγ− アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、グルタメート及びグリシン）を含む多くの神経伝達物質については、前シナプス末端および周囲のグリア細胞内へのこれら伝達物質の取り込みによって、シナップス作用の迅速な終結が達成される（Bennet et al., 1974;Horn，1990;Kanner and Schuldiner，1987）。神経伝達物質取り込みの阻害または刺激は、内因性伝達物質の利用可能レベルの調節による、シナップス作用の強度を調節するための手段を提供する。従って、選択的阻害剤を開発することは、神経障害の治療への新規な治療的アプローチを意味する。アミノ酸であるグリシンは、脊椎中枢神経系における重要な神経伝達物質であり、そこで二つの異なった機能を果たす。第一に、グリシンは周知の役割をもった、脊髄、脳幹および網膜における古典的な阻害性神経伝達物質である（Aprison，1990;Daly，1990;Cories and Palacios，1990）。グリシンの阻害作用はグリシン受容体、グリシンによって活性化されるリガンドゲート塩素イオンチャンネル(llgand-galed chloride channel）によって媒介され、ストリキニーネによって競争的に阻害される。ストリキニーネによるグリシン性伝達の阻害は、動物およびヒトにおける発作を起こす。従って、ＣＮＳにおけるグリシンの阻害的役割を増大する薬剤は、過剰な神経的および／または骨格筋的活性に伴う癲癇または他の神経症状を改善し得るであろう。この仮説は、グリシン受容体の欠失がマウス（Becker，1990）及びウシ（Gundlach，1990）の或る種の変異株に見られる遺伝性ミオクローヌスの基礎になっているという発見によって支持される。その阻害作用に加えて、グリシンは又、海馬等におけるＮＭＤＡでのグルタメートの作用を増強することによって、興奮的な神経伝達をも調節する（Johnson and Ascher，1987;概観のためにFletcher et al.,1990を参照されたい）。ＮＭＤＡクラスのグルタメート受容体は、長期増強(long-termpotentiation)、学習の細胞モデルにおいて重要な役割を果たすことが知られている（Collingridge a nd Bliss，1987）。最近の実験的証拠は、ＮＭＤＡ受容体におけるグリシン調節部位の活性化によって認識機能が増強されることを示唆している（Handelmann e t al.,1989）。従来、グリシン輸送の分子的性質（特に神経系におけるグリシンの二重の役割に関する性質）は研究されていない。シナップスグリシン輸送体の分子構造を解明することは、グリシン性の伝達および調節を理解する上で重要なステップである。特に我々の興味は、分離された輸送体ｍＲＮＡ類が、阻害性伝達を調節する取り込みタンパク類(uptaka protains)およびグルタメート性伝達を調節する取り込みタンパク類をコードするか否か、或いは一つの輸送体が両方の機能を媒介するか否かを探求することである。〔発明の概要〕本発明は、哺乳類グリシン輸送体をコードする単離された核酸分子を提供する。本発明の一実施例において、核酸分子は、ｐＳＶＬ−ｒＢ２０ａ（ＡＴＣＣ受付番号第75132号）と命名されたプラスミドを具備する。本発明の好ましい実施例は、ヒト・グリシン輸送体をコードする単離された核酸分子を提供する。本発明の一つの実施例において、核酸分子は、ｐ Bluescript−ｈＴＣ２７ａ（ＡＴＣＣ受付番号第号）と命名されたプラスミドを具備する。本発明は、哺乳類グリシン輸送体をコードする核酸分子の配列内に含まれる配列と特異的にハイブリダイズすることができる少なくとも１５ヌクレオチドの核酸分子を具備した核酸プローブを提供する。本発明は又、ヒト・グリシン輸送体をコードする核酸分子の配列内に含まれる配列と特異的にハイブリダイズすることができる少なくとも１５ヌクレオチドの核酸分子を具備した核酸プローブを提供する。本発明は、哺乳類グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに特異的に結合して、該ｍＲＮＡの翻訳を妨害できる配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。本発明は更に、ヒト・グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに特異的に結合して、該ｍＲＮＡの翻訳を妨害できる配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。哺乳類グリシン輸送体に向けられたモノクローナル抗体も又、本発明によって提供される。更に、ヒト・グリシン輸送体に向けられたモノクローナル抗体も、本発明によって提供される。本発明は、哺乳類グリシン輸送体の過剰発現に起因した異常を緩和するのに効果的な物質の有効量および薬剤的に許容可能なキャリアを含有する薬剤組成物、並びにグリシン輸送体の過少発現に起因した異常を緩和するのに効果的な物質の有効量および薬剤的に許容可能なキャリアを含有する薬剤組成物を提供する。本発明は更に、ヒト・グリシン輸送体の過剰発現に起因した異常を緩和するのに効果的な物質の有効量および薬剤的に許容可能なキャリアを含有する薬剤組成物、並びにグリシン輸送体の過少発現に起因した異常を緩和するのに効果的な物質の有効量および薬剤的に許容可能なキャリアを含有する薬剤組成物を提供する。本発明は、そのゲノムが哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡを具備したトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、前記ＤＮＡは前記グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに対して相補的なアンチセンスｍＲＮＡ中に転写されるように前記ゲノム中に配置されており、該相補的ｍＲＮＡは、前記グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡとハイブリダイズしたときにグリシン輸送体をコードするｍＲＮＡの翻訳を低下させる、トランスジニック哺乳動物を提供する。本発明は、そのゲノムがヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡを具備したトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、前記ＤＮＡは前記グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに対して相補的なアンチセンスｍＲＮＡ中に転写されるように前記ゲノム中に配置されており、該相補的ｍＲＮＡは、グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡとハイブリダイズしたときにグリシン輸送体をコードするｍＲＮＡの翻訳を低下させる、トランスジニック哺乳動物を提供する。本発明は又、そのゲノムが哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡを具備したトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、前記ＤＮＡは前記輸送体をコードするｍＲＮＡに対して相捕的なアンチセンスｍＲＮＡ中に転写されるように前記ゲノム中に配置されており、該アンチセンスｍＲＮＡは、該輸送体をコードするｍＲＮＡとハイブリダイズすることによって該輸送体をコードするｍＲＮＡの翻訳を防止するような、トランスジニック哺乳動物を提供する。本発明は又、そのゲノムがヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡを具備したトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、前記ＤＮＡは前記輸送体をコードするｍＲＮＡに対して相補的なアンチセンスｍＲＮＡ中に転写されるように前記ゲノム中に配置されており、該アンチセンスｍＲＮＡは、該輸送体をコードするｍＲＮＡとハイブリダイズすることによって該輸送体をコードするｍＲＮＡの翻訳を防止するような、トランスジニック哺乳動物を提供する。本発明は、細胞表面の哺乳類グリシン輸送体と特異的に相互作用し且つ結合する薬剤を同定するための薬剤スクリーニング方法であって、哺乳類グリシン輸送体をコードする単離されたＤＮＡ分子を含み、これによりコードされるタンパクが細胞表面に発現されている哺乳類細胞を複数の薬剤と接触させることと、前記哺乳類細胞に結合する薬剤を決定することにより、哺乳類グリシン輸送体と特異的に相互作用し且つ結合する薬剤を同定することとを具備した方法を提供する。本発明は、細胞表面のヒト・グリシン輸送体と特異的に相互作用し且つ結合する薬剤を同定するための薬剤スクリーニング方法であって、ヒト・グリシン輸送体をコードする単離されたＤＮＡ分子を含み、これによりコードされるタンパクが細胞表面に発現されている哺乳類細胞を複数の薬剤と接触させることと、前記哺乳類細胞に結合する薬剤を決定することにより、ヒト・グリシン輸送体と特異的に相互作用し且つ結合する薬剤を同定することとを具備した方法を提供する。本発明は又、哺乳類グリシン輸送体を種々のレベルで発現すること生理学的効果を決定する方法であって、哺乳類グリシン輸送体の発現を調節する誘導プロモータの使用により哺乳類グリシン輸送体発現のレベルが変化される、トランスジェニック非ヒト哺乳動物を製造することを具備した方法を提供する。本発明は又、ヒト・グリシン輸送体を種々のレベルで発現すること生理学的効果を決定する方法であって、ヒト・グリシン輸送体の発現を調節する誘導プロモータの使用によりヒト・グリシン輸送体発現のレベルが変化される、トランスジェニック非ヒト哺乳動物を製造することを具備した方法を提供する。本発明は更に、哺乳類グリシン輸送体を種々のレベルで発現することの生理学的効果を決定する方法であって、夫々が異なった量の哺乳類グリシン輸送体を発現する複数のトランスジェニック非ヒト哺乳動物からなるパネルを製造することを具備した方法を提供する。本発明は更に、ヒト・グリシン輸送体を種々のレベルで発現することの生理学的効果を決定する方法であって、夫々が異なった量のヒト・グリシン輸送体を発現する複数のトランスジェニック非ヒト哺乳動物からなるパネルを製造することを具備した方法を提供する。本発明は、特定の哺乳類グリシン輸送体対立遺伝子の発現に伴う疾患の疾病素因を診断するための方法であって、ａ）該疾患に履患している患者のＤＮＡを得ることと；ｂ）制限酵素のパネルで、該ＤＮＡの制限消化を行なうことと；ｃ）得られたＤＮＡフラグメントをサイジングゲル上で電気泳動的に分離することと；ｄ）この得られたゲルを、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡと特異的にハイブリダイズでき且つ検出マーカーでラベルされた核酸プローブに接触させることと；ｅ）検出マーカーでラベルされた哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡにハイブリダイズした標識バンドを検出し、該疾患に履患した患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンを形成することと；ｆ）ステップａ〜ｅによる診断のために得られた、ＤＮＡを調製することと；ｇ）ステップｅで得られた前記疾患に履患している患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンと、ステップｆで診断のために得られたＤＮＡのバンドパターンとを比較し、これらパターンが同一であるか又は異なっているかを決定することによって、パターンが同一であれば該疾患の疾病素因ありと診断することとを具備した方法を提供する。本発明は、特定のヒト・グリシン輸送体対立遺伝子の発現に伴う疾患の疾病素因を診断するための方法であって、ａ）該疾患に履患している患者のＤＮＡを得ることと；ｂ）制限酵素のパネルで、該ＤＮＡの制限消化を行なうことと；ｃ）得られたＤＮＡフラグメントをサイジングゲル上で電気泳動的に分離することと；ｄ）この得られたゲルを、ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡと特異的にハイブリダイズでき且つ検出マーカーでラベルされた核酸プローブに接触させることと；ｅ）検出マーカーでラベルされたヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡにハイブリダイズした標識バンドを検出し、該疾患に履患した患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンを形成することと；ｆ）ステップａ〜ｅによる診断のために得られた、ＤＮＡを調製することと；ｇ）ステップｅで得られた前記疾患に履患している患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンと、ステップｆで診断のために得られたＤＮＡのバンドパターンとを比較し、これらパターンが同一であるか又は異なっているかを決定することによって、パターンが同一であれば該疾患の疾病素因ありと診断することとを具備した方法を提供する。本発明は、哺乳類グリシン輸送体に結合できることが知られていない物質が、該哺乳類グリシン輸送体に結合できるか否かを決定するための方法であって、該哺乳類グリシン輸送体をコードする単離されたＤＮＡ分子を有する哺乳動物細胞と前記物質とを、輸送体に結合することが知られている物質が結合される条件下で接触させることと、該グリシン輸送体に結合した前記物質の存在を検出することと、これによって前記物質が該哺乳類グリシン輸送体に結合するか否かを決定することとを具備した方法を提供する。本発明は、ヒト・グリシン輸送体に結合できることが知られていない物質が、該ヒト・グリシン輸送体に結合できるか否かを決定するための方法であって、ヒト・グリシン輸送体をコードする単離されたＤＮＡ分子を有する哺乳動物細胞と前記物質とを、輸送体に結合することが知られている物質が結合される条件下で接触させることと、該グリシン輸送体に結合した前記物質の存在を検出することと、これによって前記物質がヒト・グリシン輸送体に結合するか否かを決定することとを具備した方法を提供する。〔図面の簡単な説明〕図１：ラット・グリシン輸送体のヌクレオチド配列、推定アミノ酸配列および推定膜トポロジー。（Ａ）；ヌクレオチドは５’から３’への向きに呈示されており、コード領域は推定開始メチオニンから出発し、終止コドンで終わる番号が付されている。ＤＮＡ配列は、シーケナーゼを用いた、変性二重鎖プラスミド鋳型上でのサンガーのチェインターミネーション法（1977）によって決定された。（Ｂ）；長いオープンリーディングフレームの翻訳による推定アミノ酸配列（一文字略記法による）が示されている。この輸送体は、先にクローン化されたＧＡＢＡ輸送体であるＧＡＴ−１（Guastella et al.,1990）と同様のトポロジーでモデル化されている。仮定されたＮ−リンクグリコシレーション部位が黒丸で示されている。図２：ラット・グリシン輸送体と、ヒト・ノルエピネフィリン輸送体およびラット・ＧＡＢＡ輸送体との比較。１２の推定α−ヘリカル膜スパンニングドメイン（Ｉ〜ＸII）がブラケットで示されている。同一の残基には陰影が付されている。グリシンは、ラット・グリシン輸送体である；Ｇａｂａは、ラットＧＡＢＡ輸送体（ＧＡＴ−１）である；Ｎｏｒｅｐｉは、ヒト・ノルエピネフィリン輸送体である。図３：クローンｒＢ２０ａで形質導入されたＣＯＳ細胞によるグリシン輸送。非形質導入ＣＯＳ細胞（対照）またはｒＢ２０ａで形質導入されたＣＯＳ細胞を、ＨＢＳ（150 mMのＮａＣｌを含む）中、或いはＮａ⁺を等モル量のＬｉで置換した同様の溶液（Ｎａ⁺フリー）またはＣｌをアセテートで置換した同様の溶液（グルコン酸カルシウムだけは塩化カルシウムで置換した；Ｃｌ^-フリー）中における50 nMの［³Ｈ］グリシン（sp．act.45Ci/mmole）と共に１０分間インキュベートした。データは、細胞タンパク１mg当たりのｃｐｍとして表されたグリシンの特異的取り込みを（平均値±３回測定のＳ．Ｄ．）示している。データは、同様の結果で繰り返された単一の実験から得られたものである。図４：クローン化されたグリシン輸送体の速度論的性質。（Ａ）；グリシン輸送のタイムコース。ｒＢ２０ａで形質導入されたＣＯＳ細胞を、50 nMの［³Ｈ］グリシンと共に指定した時間だけインキュベートし、累積放射活性を測定した。特異的取り込みは、細胞タンパク１mg当たりのｐモルとして表されている。データは、同じ結果で繰り返された単一の実験から得たものである。（Ｂ）；グリシン輸送の濃度依存性。ｒＢ２０ａで形質導入されたＣＯＳ細胞を、指定された濃度の［³Ｈ］グリシンと共に３０秒間インキュベートし、累積放射活性を測定した。［³Ｈ］グリシンの特異的活性は、非ラベル化グリシンで減少された。データは、細胞タンパク１mg当たりのｎモルとして表現された特異的輸送を表しており、該データは同じ結果で繰り返された単一の実験から得たものである。図５：グリシン輸送体ｍＲＮＡのノーザンブロット分析。種々のラット脳領域および抹消組織から単離された全ＲＮＡ（３０μｇ／レーン）を、ホルムアルデヒド／アガロースゲル上で分離し、³²Ｐラベルされたグリシン輸送体ｃＤＮＡとハイブリダイズさせた。６日間の露光後、そのオートラジオグラムを現像した。左側に、キロ塩基でのサイズ標準が示されている。ハイブリダイズ転写(hybridi zing transcript)は略3.8kbである。ＲＮＡレベルは、p1B15と命名されたシクロフィリンに対するｃＤＮＡプローブを用い、ブロットを再プロービングすることによって正規化された。β−アクチンに対するプローブを用いることによって、同様の結果が得られた。ＲＮＡブロットの定量は、デンシトメータ走査によって行なわれた。図６：ラット脳におけるグリシン輸送体ｍＲＮＡのｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーション。（Ａ）；ラット脳の冠状断面(coronal section)が、グリシン輸送体ｍＲＮＡの３’非翻訳領域に相補的な35S−ラベルされたオリゴヌクレオチドプローブとハイブリダイズされ、Ｘ−ＯＭＡＴフィルムに４日間露光された。なお、歯状回および海馬形成のＣＡ１，ＣＡ２およびＣＡ３領域が顕著にラベルされたことに注意。（Ｂ）；センスオリゴヌクリオチドとハイブリダイズされた平行断面は有意なラベリングを示さなかった。ＲＮアーゼＡで前処理された断面において、ラベリングは検出されなかった。図７：ヒト・グリシン輸送体のヌクレオチド配列および椎定アミノ酸配列。ヌクレオチドは、５’から３’への向きで示されており、またコーディング領域には推定開始メチオニンから始まる番号が付されている。ＤＮＡ配列は、シーケナーゼを用いた、変性二重鎖プラスミド鋳型上でのサンガーのチェインターミネーション法（1977）によって決定された。長いオープンリーディングフレームの翻訳による推定アミノ酸配列（一文字略記法による）が示されている。〔発明の詳細な説明〕本発明は、哺乳類グリシン輸送体をコードする単離された核酸分子を提供する。本発明は更に、ヒト・グリシン輸送体をコードする単離された核酸分子を提供する。ここで用いる「単離された核酸分子」の語は、天然には存在しない核酸分子、即ち、天然には生じない形の分子を意味する。このような単離された核酸分子の例は、哺乳類グリシン輸送体をコードするＲＮＡ、ｃＤＮＡまたは単離されたゲノムＤＮＡ分子、並びにヒト・グリシン輸送体をコードするＲＮＡ、ｃＤＮＡまたは単離されたゲノムＤＮＡ分子である。ここで用いる「グリシン輸送体」の語は、生理学的条件下において、神経伝達物質のグリシンに対して実質的に特異的であり、飽和され得、グリシンに対して高い親和性を有し（Ｋｍ＝100uM）、且つ時間およびイオン依存性である分子を意味する。本発明の一つの実施例は、哺乳類グリシン輸送体をコードする単離された核酸分子である。このような分子は、図１に示したコーディング配列（配列ＩＤ番号１）と実質的に同じコーディング配列を有し得る。図１のＤＮＡ分子は、哺乳類グリシン輸送体遺伝子の配列を暗号化している。好ましい他の実施例は、ヒト・グリシン輸送体をコードする単離された核酸分子である。このような分子は、図７に示したコーディング配列（配列ＩＤ番号５，６）と実質的に同じコーディング配列を有し得る。図７のＤＮＡ分子（配列ＩＤ番号５，６）は、ヒト・グリシン輸送体遺伝子の配列を暗号化している。哺乳類グリシン輸送体を単離する一つの手段は、当該技術分野において周知の方法を用いることにより、天然の又は人工的にデザインされたＤＮＡプローブで、哺乳類ゲノムＤＮＡライブラリーをブロービングすることである。哺乳類グリシン輸送体を単離する別の手段は、当該技術分野において周知の方法を用いることにより、哺乳類ｃＤＮＡライブラリーを天然の又は人工的にデザインされたＤＮＡプローブでプロービングすることである。本発明の好ましい実施例において、哺乳類グリシン輸送体はヒトタンパクであり、ヒト・グリシン輸送体をコードする核酸分子はヒトｃＤＮＡライブラリーから単離される。本発明の他の実施例において、ヒト・グリシン輸送体をコードする核酸分子はヒト・ゲノムＤＮＡライブラリーから単離される。ラット・グリシン輸送体遺伝子ｒＢ２０ａから誘導されたＤＮＡプローブ類は、この目的のための有用なプローブである。哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡおよびｃＤＮＡ分子は、ヒト、哺乳類または池の動物源から相補的ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはＲＮＡを得るために、或いは以下に詳細に説明する方法によって、ｃＤＮＡライブラリー又はゲノムライブラリーのスクリーニングにより関連ｃＤＮＡクローン又は関連ゲノムクローンを単離するために用いられる。これによって、単離されたクローンの５’ 非翻訳領域からの転写調節因子、並びに単離された遺伝子の３’および５’非翻訳領域からの他の安定性、プロセッシング、転写、翻訳および組織特異性決定領域が得られる。本発明は、一以上のヌクレオチドにおいてグリシン輸送体をコードする核酸分子の配列とは異なる核酸配列を有し、グリシン輸送体活性を有するタンパクをコードしない、単離された核酸分子を提供する。ここで用いる「グリシン輸送体活性」の語は、当該タンパクのグリシン輸送能力を意味する。このような核酸分子の一例は、転写されたＲＮＡがタンパクに翻訳されないようにコーディング配列中に挿入されたイン・フレーム終止コドンを有する単離された核酸分子である。本発明は、哺乳類グリシン輸送体をコードするｃＤＮＡ分子であって、図１に示すコーディング配列（配列ＩＤ番号１）と実質的に同じコーディング配列を有するｃＤＮＡ分子を提供する。本発明は、ヒト・グリシン輸送体をコードするｃＤＮＡ分子であって、図７に示すコーディング配列（配列ＩＤ番号５，６）と実質的に同じコーディング配列を有するｃＤＮＡ分子を提供する。これらの分子およびその等価物は、上記の手段によって得られた。本発明はまた、哺乳類グリシン輸送体である単離されたタンパクを提供する。本発明の一つの実施例において、該タンパクは、図１に示すアミノ酸配列（配列ＩＤ番号３，４）と実質的に同じアミノ酸配列を有する哺乳類グリシン輸送体タンパクである。本発明の好ましい実施例において、該タンパクは、図７に示すアミノ酸配列（配列ＩＤ番号５，６）と実質的に同じアミノ酸配列を有するヒト・グリシン輸送体タンパクである。ここで用いる「単離されたタンパク」の語は、他の細胞成分を含まないタンパク分子を包含することが意図されている。単離されたグリシン輸送体を得るための一つの手段は、該輸送体をコードするＤＮＡを、当業者に周知の方法を用いてバクテリア、酵母または哺乳動物細胞のような適切な宿主の中で発現させ、かかる宿主内で発現された後に、該輸送体タンパクを再び当業者に周知の方法を用いて回収することである。該輸送体はまた、それを発現する細胞（特に、以下で詳細に説明する発現ベクターで形質導入された細胞）から単離される。本発明はまた、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡ、ＲＮＡまたはｃＤＮＡのような単離された核酸分子を具備したベクターを提供する。本発明はまた、ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡ、ＲＮＡまたはｃＤＮＡのような単離された核酸分子を具備したベクターを提供する。ベクターの例は、バクテリオファージ（例えばラムダファージ）のようなウイルス類、コスミド類、プラスミド類（例えばニュージャジー州ピスキャタウエイのファルマシア社から入手できるｐＵＣ１８）および他の組換ベクター類である。核酸分子は、当業者に周知の方法によりベクターゲノム中に挿入される。このようなプラスミドの具体的な一例は、図１に示したコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有するｃＤＮＡを具備し、クローンｐＳＶＬ−ｒＢ２０ａと命名され、ＡＴＣＣ受付け番号第75132号として寄託されたプラスミドである。このようなプラスミドの他の一例は、ヒト・グリシン輸送体をコードするｃＤＮＡ（図７に示したコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有する）を具備したプラスミドである。或いは、これらのベクターを得るために、挿入ＤＮＡとベクターＤＮＡの両者を一つの制限酵素で処理することにより、両方の分子に塩基対が相互に相補的である末端を生成させ、次いでリガーゼで連結してもよい。或いは、ベクターＤＮＡの制限酵素部位に対応するリンカーを挿入ＤＮＡに連結し、次いで該部位で切断する制限酵素で消化してもよい。また、他の手段も利用可能である。本発明はまた、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子を具備した、バクテリア細胞、酵母細胞または哺乳動物細胞内での発現に適用されるベクターであって、更に、前記バクテリア、酵母細胞または哺乳動物細胞内での前記ＤＮＡの発現のために必要な、前記哺乳類グリシン輸送体の発現を許容するように該ＤＮＡに対して相対的に配置された調節要素を具備したベクターを提供する。図１に示したコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有するＤＮＡは、ベクターに挿入されて哺乳類グリシン輸送体を発現するために有用であり得る。本発明はまた、ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子を具備した、バクテリア細胞、酵母細胞または哺乳動物細胞内での発現に適用されるベクターであって、更に、前記バクテリア、酵母細胞または哺乳動物細胞内での前記ＤＮＡの発現のために必要な、前記ヒト・グリシン輸送体の発現を許容するように該ＤＮＡに対して相対的に配置された調節要素を具備したベクターを提供する。図７に示したコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有するＤＮＡは、ベクターに挿入されてヒト・グリシン輸送体を発現するために有用であり得る。発現のために必要とされる調節要素には、ＲＮＡポリメラーゼを結合するためのプロモータ配列およびリボゾーム結合のための転写開始配列が含まれる。例えばバクテリア発現ベクターには、ｌａｃプロモータのようなプロモータと、転写開始のためのシャインダルガノ配列および開始コドンＡＵＧとが含まれる（Maniatis,et al.,Molecular Cloning，Cold Spri ng Harbor Laboratory，1982）。同様に、真核細胞発現ベクターには、ＲＮＡポリメラーゼIIのための異種または同種プロモータ、下流のポリアデニル化シグナル、開始コドンＡＵＧおよびリボゾーム脱離のための終止コドンが含まれる。このようなベクターは商業的に入手し得るし、或いは当該技術において周知の方法、例えば一般にベクターを構築するための上記方法によって、記述された配列から組み立ててもよい。発現ベクターは、該輸送体を発現する細胞を製造するために有用である。このような細胞の一定の使用について、以下に詳細に説明する。本発明の一実施例において、プラスミドはバクテリア細胞、酵母細胞または特に哺乳動物細胞内での発現に適用されるが、この場合の該プラスミドは、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子と、前記バクテリア、酵母細胞または哺乳動物細胞内での前記ＤＮＡの発現のために必要な、前記哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡに対してその発現を可能とするように相対的に配置された調節要素とを具備する。本発明の他の実施例においても、プラスミドはバクテリア細胞、酵母細胞または特に哺乳動物細胞内での発現に適用されるが、この場合の該プラスミドは、ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子と、前記バクテリア、酵母細胞または哺乳動物細胞内での前記ＤＮＡの発現のために必要な、前記ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡに対してその発現を可能とするように相対的に配置された調節要素とを具備する。適切なプラスミドには、哺乳動物細胞内での発現に適用されるプラスミド（例えばｐＳＶＬ、ｐｃＥＸＶ−３）が含まれるが、これに限定されるものではない。哺乳動物細胞内での発現に適用されるこのようなプラスミドの具体例は、図１に示すコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有するｃＤＮＡと、哺乳動物細胞内での該ＤＮＡの発現のために必要な調節要素とを具備したプラスミドである。このプラスミドはｐＳＶＬ−ｒＢ２０ａと命名され、且つＡＴＣＣ受付番号第75132 号の下に寄託されている。哺乳動物細胞内での発現に適用されるこのようなプラスミドの好ましい実施例は、図７に示すコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有するｃＤＮＡと、哺乳動物細胞内での該ＤＮＡの発現のために必要な調節要素とを具備したプラスミドである。このプラスミドはｐBl uescript−ｈＴＣ２７ａと命名され、且つＡＴＣＣ受付番号第号の下に寄託されている。当業者であれば、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡ及びこのようなＤＮＡを哺乳動物細胞内で発現するために必要な調節要素を具備した哺乳動物細胞内での発現に適用される多くのプラスミが、現存するプラスミドを利用して、これに前記ＤＮＡの哺乳動物細胞内での発現に必要な調節要索を適切に含ませることによって構築され得ることを容易に認めるであろう。該プラスミドは、発現ベクターおよび一般のベクターについて説明した上記方法によって、並びに当該技術において周知の他の方法によって構築され得る。上記で述べた寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約に従い、これを満たすように、メリーランド州20852ロックウイル123 01パークローンドライブのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）に対して行なわれた。本発明は、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子を具備した哺乳動物細胞を提供する。このような細胞は、例えば、哺乳動物細胞内での発現に適用されるプラスミドであって、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子と、該哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡに対してその発現を可能とするように相対的に配置された、該ＤＮＡの哺乳動物細胞内での発現のために必要な調節要素とを有するプラスミドを具備した哺乳動物細胞である。本発明は、ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子を具備した哺乳動物細胞を提供する。このような細胞は、例えば、哺乳動物細胞内での発現に適用されるプラスミドであって、ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子と、該ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡに対してその発現を可能とするように相対的に配置された、該ＤＮＡの哺乳動物細胞内での発現のために必要な調節要索とを有するプラスミドを具備した哺乳動物細胞である。多くの哺乳動物細胞をホストとして用いることができ、その中にはマウス繊維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３、ＣＨＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｌｔｋ^-細胞、Ｃｏｓ細胞等が含まれるが、これらに限定されるものではない。上記のような発現ベクターは、リン酸カルシウム沈殿法のような当該技術において周知の方法によって、哺乳動物細胞に形質導入するために用いられ得る。或いは、これらグリシン輸送体をコードするＤＮＡは、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡ（例えばｃＤＮＡまたはプラスミド）を具備する哺乳動物細胞を得るために、例えばマイクロインジェクションまたは電気穿孔法によって哺乳動物細胞内に導入され得る。本発明は、哺乳類グリシン輸送体をコードする核酸分子の配列中に含まれる配列（例えば、図１に示す配列に含まれるコーディング配列）と特異的にハイブリダイズすることができる、少なくとも１５ヌクレオチドの核酸分子を具備した核酸プローブを提供する。本発明は更に、ヒト・グリシン輸送体をコードする核酸分子の配列中に含まれる配列（例えば、図７に示す配列に含まれるコーディング配列）と特異的にハイブリダイズすることができる、少なくとも１５ヌクレオチドの核酸分子を具備した核酸プローブを提供する。ここで用いる「特異的にハイブリダイズする」との語句は、核酸分子がそれ自身の配列に対して相補的なヌクレオチド配列を認識し、相補的な塩基対の間の水素結合を介して二重螺旋セグメントを形成する能力を意味する。核酸プローブ技術は当業者に周知であり、該当業者は、このようなプローブはその長さが大きく変化し得ること、及び該プローブの検出を容易にするために放射性アイソトープまたは蛍光色索のような検出ラベルで標識され得ることを容易に理解するであろう。哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体をコードする核酸の検出は、対応すグリシン輸送体の発現レベルが変化する何等かの疾患プロセスの診断試験として有用である。ＤＮＡプローブ分子は、全て当該技術において周知の方法を用いて、先ず哺乳類またはヒトのグリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子またはそのフラグメントをプラスミド若しくはバクテリオファージのような適切なベクターに挿入し、続いてこれを適切なバクテリアホスト細胞内に挿入し、当該該ＤＮＡプローブを複製および回収することによって製造される。例えば、該ＤＮＡはフェノール及びエタノールを用いて細胞溶解物から抽出され、既述したベクター中への該ＤＮＡの挿入部位に対応する制限酵素で消化され、電気泳動され、得られたゲルから切り出され得る。このようなＤＮＡ分子の一例が、図１および図７に示されている。該プローブは、「in situ」でのハイブリダイゼーション又はこの遺伝子ファミリーを発現する組織の位置を捜し出すために有用であり、或いは種々の生物学的組織におけるこれら遺伝子もしくはそのｍＲＮＡの存在を調べるための他のハイブリダイゼーションアッセイのために有用である。加えて、哺乳動物またはヒトのグリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子の配列に対して相補的な合成オリゴヌクレオチド（ＤＮＡ合成機で製造されたもの）は、これら遺伝子またはその関連ｍＲＮＡのプローブとして有用であり、或いはゲノム若しくはｃＤＮＡライブラリーの相同性スクリーニングによる関連遺伝子の単離またはポリメラーゼ・チェイン・リアクションのような増幅技術を用いることによる関連遺伝子の単離のために有用である。本発明はまた、グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡの存在を検出することにより、細胞表面でのグリシン輸送体の発現を検出する方法を提供する。この方法は、当該技術において周知の方法を用いて細胞から全ｍＲＮＡを得ることと、こうして得られたｍＲＮＡを、ハイブリダイズ条件下において、上記で説明した核酸プローブと接触させることと、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出することと、これにより前記細胞による前記グリシン輸送体の発現を検出することとを具備する。ｍＲＮＡ分子のような標的核酸分子に対するブローブのハイブリダイゼーションでは、当該技術において周知の技術が用いられる。しかし、本発明の一つの実施例においては、溶解細胞から沈殿によって核酸が抽出され、ｍＲＮＡ分子のポリＡ尾部を結合するカラムを用いて、該抽出物からｍＲＮＡが単離される（Maniatis,T．et al.，Molecular Clonong;Cold Spring Harb or Laboratory，pp．197-98(1982)）。次いで、該ｍＲＮＡはニトロセルロース膜上の放射能でラベルされたプローブに曝され、該プローブは相補的なｍＲＮＡ配列にハイブリダイズし、これをラベルする。結合は、オートラジオグラフィー又はシンチレーション計数によって検出され得る。しかし、これらのステップを実行するための他の方法が当業者に周知であり、上記の議論は単なる一例に過ぎない。本発明は、哺乳類グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡ分子の何れかの配列と特異的に結合することができる配列を有し、該ｍＲＮＡの哺乳類グリシン輸送体への翻訳を妨げることができるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。該アンチセンスオリゴヌクレオチドは、その配列が図１に示されているｃＤＮＡ分子の何れかの配列と特異的に結合できる配列を有し得る。本発明は更に、ヒト・グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡ分子の何れかの配列と特異的に結合することができる配列を有し、該ｍＲＮＡのヒト・グリシン輸送体への翻訳を妨げることができるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。該アンチセンスオリゴヌクレオチドは、その配列が図７に示されているｃＤＮＡ分子の何れかの配列と特異的に結合できる配列を有し得る。ここで用いる「特異的に結合する」との語句は、核酸配列がそれ自身の配列に対して相補的なヌクレオチド配列を認識し、相補的な塩基対間の水素結合を介して二重螺旋セグメントを形成する能力を意味する。アンチセンスオリゴヌクレオチドの特別の例は、ヌクレオチドの化学的類似体を具備するアンチセンスオリゴヌクレオチドである。本発明はまた、細胞膜を通過して細胞内で哺乳類グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡと特異的に結合し、その翻訳を阻害することにより哺乳類グリシン輸送体の発現を低下させるのに有効な量の上記オリゴヌクレオチドと、細胞膜を透過できる薬剤的に許容可能な疎水性キャリアとを含有する薬剤組成物を提供する。図１に示したコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有するＤＮＡ分子は、本発明の薬剤組成物のオリゴヌクレオチドとして使用され得る。本発明はまた、細胞膜を通過して細胞内でヒト・グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡと特異的に結合し、その翻訳を阻害することによりヒト・グリシン輸送体の発現を低下させるのに有効な量の上記オリゴヌクレオチドと、細胞膜を透過できる薬剤的に許容可能な疎水性キャリアとを含有する薬剤組成物を提供する。図７に示したコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有するＤＮＡ分子は、本発明の薬剤組成物のオリゴヌクレオチドとして使用され得る。ここで用いた「薬剤的に許容され得るキャリア」の語句は、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水およびエマルジョン（油／水もしくは水／油エマルジョン）、種々のタイプの湿潤化剤のような何れかの標準的な薬剤キャリアを包含する。該オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡを不活性化する物質（例えばリボザイム）に連結され得る。細胞膜を透過できる薬剤的に許容可能な疎水性キャリアはまた、選択された細胞タイプに特異的な輸送体に結合し、これによって選択された細胞タイプの細胞によって取り込まれる構造を具備し得る。該構造は、細胞タイプに特異的な輸送体に結合することが知られたタンパク（例えば膵臓細胞を標的とするインスリン分子）の一部であり得る。本発明はまた、グリシン輸送体の発現を低下させることにより緩和される異常を治療する方法に関する。この方法は、患者に対して、患者によるグリシン輸送体の発現を低下させるために有効な量の上記薬剤組成物を投与することを具備する。本発明は更に、グリシン輸送体活性に関連する異常症状を治療する方法であって、患者に対して、患者によるグリシン輸送体の発現を低下させるために有効な量の上記薬剤組成物を投与することを具備した方法を提供する。このような異常症状の幾つかの例は、癲癇、ミオクローヌス、痙攣性麻痺、筋肉痙攣、精神分裂病および認識障害である。アンチセンスオリゴヌクレオチド薬剤は、これら輸送体をコードするｍＲＮＡの翻訳を阻害する。合成オリゴヌクレオチドまたは他のアンチセンス化学構造は、グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに結合し、ｍＲＮＡの翻訳を阻害するように設計され、患者におけるグリシン輸送体遺伝子の発現を阻害する薬剤として有用である。本発明は、哺乳類グリシン輸送体の発現レベルを、これら輸送体をコードするｍＲＮＡの翻訳を阻害する合成アンチセンスオリゴヌクレオチド薬剤（ＳＡＯＤ）を使用することによって、治療的に変更するための手段を提供する。ｍＲＮＡを認識して特異的に結合するように設計された合成オリゴヌクレオチド又は他のアンチセンス化学構造は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは化学的に修飾された人工核酸の図１に示したヌクレオチド配列の一部に対して相補的であるように構築される。本発明は更に、ヒト・グリシン輸送体の発現レベルを、これら輸送体をコードするｍＲＮＡの翻訳を阻害する合成アンチセンスオリゴヌクレオチド薬剤（ＳＡＯＤ）を使用することによって、治療的に変更するための手段を提供する。ｍＲＮＡを認識して特異的に結合するように設計された合成オリゴヌクレオチド又は他のアンチセンス化学構造は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは化学的に修飾された人工核酸の図７に示したヌクレオチド配列の一部に対して相補的であるように構築される。このＳＡＯＤは、注射によって患者に投与するために、血流中で安定であるように設計される。或いは、患者から取り出した細胞に対して投与するために、実験室における細胞培養条件において安定であるように設計される。ＳＡＯＤは、細胞の細胞質内に入り込むことを目的として、細胞膜を透過できるように設計される。ＳＡＯＤの細胞質内への入り込みは、細胞膜透過を可能とする該ＳＡＯＤの物理的および化学的性質（例えば、小さい疎水性ＳＡＯＤ化学構造を設計することにより達成される）によって、或いは該ＳＡＯＤを認識してこれを細胞内に輸送する細胞内の特異的な輸送系によって可能になる。加えて、このＳＡＯＤは一定の選択された細胞ポピュレーションにだけ投与されるように設計され得る。これは、ＳＡＯＤを狙い撃ちする細胞の特異的な取り込みメカニズム、即ち、該ＳＡＯＤに結合してこれを一定の選択された細胞ポピュレーション内にのみ取り込むメカニズムが、該ＳＡＯＤを認識することによって達成される。例えば、ＳＡＯＤは、上記のように一定の細胞タイプにのみ見出される輸送体と結合するように設計され得る。ＳＡＯＤはまた、標的ｍＲＮＡ配列（図１または図７に示した配列内に含まれる配列に対応し得る）を認識し、該ｍＲＮＡに対する相補的な塩基対形成によってこれに選択的に結合するように設計される。結局のところ、このＳＡＯＤは次の三つのメカニズムの何れかによって、標的ｍＲＮＡ配列を不活性化するように設計される：１）標的ｍＲＮＡに結合して、ＲＮＡseＩ消化のような固有の細胞メカニズムにより該ｍＲＮＡの分解を誘発させる；2）翻訳調節因子またはリボゾームの結合を妨害することにより、標的ｍＲＮＡの翻訳を阻害する；3 ）リボザイム配列または反応性化学基のような、標的ｍＲＮＡを分解しまたは化学的に修飾する他の化学構造を含める。合成アンチセンスオリゴヌクレオチド薬剤は、ｍＲＮＡ標的に向けられたとき、上記の特性を発揮できることが示されている（J．S．Cohen，Trends in Pharm．Sci．10，435（1989）；H．M．Weintrau b，Sci．Am．January(1990)p.40）。加えて、リボザイムをアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合させることは、標的ｍＲＮＡを不活性化するための有望な戦略である（N．Sarver et al.，Science 247,1222(1990)）。注射によって患者に投与されるように設計されれば、或いは患者の標的細胞を取り出し、実験室でＳＡＯＤで処理して患者に移植されれば、ＳＡＯＤは効果的な治療剤として働く。この方法において、ＳＡＯＤは、グリシン輸送体の発現低下によって利益を受ける如何なる臨床的症状においても、患者の特定の標的細胞における輸送体の発現を低下させるための治療として役立つ。本発明は、哺乳類グリシン輸送体に向けられた抗体を提供する。この抗体は、例えば、細胞表面に存在する哺乳類グリシン輸送体のエピトープであって、且つ図１に示したアミノ酸配列に含まれる哺乳類グリシン輸送体の細胞表面エピトープのアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有するエピトープに向けられたモノクローナル抗体を包含し得る。本発明は更に、ヒト・グリシン輸送体に向けられた抗体を提供する。この抗体は、例えば、細胞表面に存在するヒト・グリシン輸送体のエピトープであって、且つ図７に示したアミノ酸配列に含まれるヒト・グリシン輸送体の細胞表面エピトープのアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有するエピトープに向けられたモノクローナル抗体を包含し得る。アミノ酸配列は、これによって構築されるタンパク中に疎水性または親水性領域を生成するか否かを決定するために、当該技術において周知の方法により分折される。細胞膜タンパクの場合、水性環境においては、親水性領域が細胞表面に位置する一方、疎水性領域は細胞膜の脂質二重層内に挿入されるタンパク部分を形成することが周知である。従って、図１に示した親水性アミノ酸配列に対する抗体は、上記のように、哺乳類グリシン輸送体の表面エピトーブに結合するであろう。図７に示した親水性アミノ酸配列に対する抗体は、上記のように、ヒト・グリシン輸送体の表面エピトープに結合するであろう。哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体に向けられる抗体は、血清由来の抗体またはモノクローナル抗体であってよく、当該技術において周知の方法を用いて製造される。例えばモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術を用いることにより、免疫化した動物からの抗体産生Ｂ細胞をミエローマ細胞と融合させ、こうして得られた所望の抗体を産生するハイブリドーマ細胞ラインを選択することによって製造される。ＮＩＨ３Ｔ３細胞またはＬｔｋ^-細胞のような細胞が、このような抗体を作る免疫原として用いられ得る。或いは、商業的に入手可能な機械、並びに図１および図７に示したアミノ酸配列を用いて、合成ペプチドを調製してもよい。更に別の手段として、ｃＤＮＡ又はそのフラグメントのようなＤＮＡをクローン化して発現させ、得られたポリペブチドを回収して免疫原に用いてもよい。これら抗体は、単離されたＤＮＡによりコードされる哺乳類グリシン輸送体の存在を検出するために有用であり、或いは生きた動物、ヒト、動物もしくはヒトから単離された生物学的組織もしくは体液中において該輸送体の機能を阻害するために有用である。本発明は、天然に存在する物質がグリシン輸送体に結合するのをブロックするために有効な量の哺乳類グリシン輸送体に向けられた抗体と、薬剤的に許容可能なキャリアとを含有する薬剤組成物を提供する。細胞表面に存在する哺乳類グリシン輸送体のエピトープであって、且つ図１に示したアミノ酸配列に含まれる哺乳類グリシン輸送体の細胞表面エピトープのためのアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有するエピトーブに向けられたモノクローナル抗体は、この目的のために有用である。本発明は更に、天然に存在する物質がグリシン輸送体に結合するのをブロックするために有効な量のグリシン輸送体に向けられた抗体と、薬剤的に許容可能なキャリアとを含有する薬剤組成物を提供する。細胞表面に存在する哺乳類グリシン輸送体のエピトープであって、且つ図１に示したアミノ酸配列に含まれる哺乳類グリシン輸送体の細胞表面エピトープのためのアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有するエピトープに向けられたモノクローナル抗体は、この目的のために有用である。本発明はまた、哺乳類グリシン輸送体の発現を低下させることにより緩和される患者の異常を治療する方法であって、患者に対して、天然に存在する物質のグリシン輸送体への結合をブロックするために有効な量の上記薬剤組成物を投与することにより、哺乳類グリシン輸送体の過剰発現からもたらされる異常を緩和することを具備した方法を提供する。前記抗体の前記輸送体への結合は、該輸送体が機能するのを阻害することによって過剰発現の影響を中和する。上記のモノクローナル抗体は、両者共この目的のために有用である。本発明は更に、ヒト・グリシン輸送体の発現を低下させることにより緩和される患者の異常を治療する方法であって、患者に対して、天然に存在する物質のグリシン輸送体への結合をブロックするために有効な量の上記薬剤組成物を投与することにより、ヒト・グリシン輸送体の過剰発現からもたらされる異常を緩和することを具備した方法を提供する。前記抗体の前記輸送体への結合は、該輸送体が機能するのを阻害することによって過剰発現の影響を中和する。上記のモノクローナル抗体は、両者共この目的のために有用である。加えて、本発明はグリシン輸送体活性の過剰に関連する異常症状を治療する方法であって、患者に対して、天然に存在する物質のグリシン輸送体への結合をブロックするために有効な量の上記薬剤組成物を投与することにより、前記異常症状を緩和することを具備した方法を提供する。このような異常症状の幾つかの例は、癲癇、ミオクローヌス、痙攣性麻痺、筋肉痙攣、精神分裂病および認識障害である。本発明は、細胞の表面におけるグリシン輸送体の存在を検出する方法であって、哺乳類グリシン輸送体に向けられた抗体が該輸送体に結合される条件下で、前記細胞を前記抗体と接触させることと、該細胞に結合した前記抗体の存在を検出し、これにより前記細胞表面における哺乳類グリシン輸送体の存在を検出することとを具備する方法を提供する。本発明は更に、細胞の表面におけるグリシン輸送体の存在を検出する方法であって、ヒト・グリシン輸送体に向けられた抗体が該輸送体に結合される条件下で、前記細胞を前記抗体と接触させることと、該細胞に結合した前記抗体の存在を検出し、これにより前記細胞表面におけるヒト・グリシン輸送体の存在を検出することとを具備する方法を提供する。このような方法は、所定の細胞が該細胞表面にグリシン輸送体の発現を欠いているか否かを決定するために有用である。結合された抗体は、当該技術において周知の方法によって検出される。例えば、蛍光マーカーを該抗体に結合し、蛍光顕微鏡下で細胞サンプルを検査して、抗体の結合を示す細胞上の蛍光を検出する。上記に述べたモノクローナル抗体類は、この目的のために有用である。本発明は、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡを発現する、トランスジェニック非ヒト哺乳動物を提供する。本発明は又、ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡを発現する、トランスジェニック非ヒト哺乳動物を提供する。本発明はまた、トランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡ（一以上のヌクレオチドにおいてグリシン輸送体をコードする核酸分子の配列とは異なった核酸配列を有する）をコードし、且つグリシン輸送体活性を有するタンパクをコードしないＤＮＡを発現するトランスジェニック非ヒト哺乳動物を提供する。本発明は更に、トランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡ（一以上のヌクレオチドにおいてグリシン輸送体をコードする核酸分子の配列とは異なった核酸配列を有する）をコードし、且つグリシン輸送体活性を有するタンパクをコードしないＤＮＡを発現するトランスジェニック非ヒト哺乳動物を提供する。本発明はまた、そのゲノムが哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡを具備したトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、前記ＤＮＡは前記グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに対して相補的なアンチセンスｍＲＮＡ中に転写されるように前記ゲノム中に配置されており、該アンチセンスｍＲＮＡは、前記グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡとハイブリダイズすることによりその翻訳を低下させるような、トランスジニック哺乳動物を提供する。本発明は更に、そのゲノムがヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡを具備したトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、前記ＤＮＡは前記グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに対して相補的なアンチセンスｍＲＮＡ中に転写されるように前記ゲノム中に配置されており、該アンチセンスｍＲＮＡは、前記グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡとハイブリダイズすることによりその翻訳を低下させるような、トランスジニック哺乳動物を提供する。該ＤＮＡは、発現が誘導され又は特定の細胞タイプに限定され得るように、追加的に誘導プロモータを具備し、又は追加的に組織特異的な調節要素を具備し得る。ＤＮＡの例は、図１および図７に示したコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有するＤＮＡ分子またはｃＤＮＡ分子である。トランスジェニック動物の一例は、トランスジェニックマウスである。組織特異性決定領域の例は、メタロチオネインプロモータ（Low，M．J.，Lechan,R.M.，Hamme r，R.E．et al．Science 231:1002-1004(1986)）及びＬ７プロモータ（ObeTdick ,j.，Smeyne,R，J.，Mann,J,R.，jackson,S ．and Morgan，J.I.，Science 248: 223-226(1990)）である。種々の技術を用いて、グリシン輸送体の発現が増大もしくは減少され、または発現されたグリシン輸送体タンパクのアミノ酸配列が変更されるようなトランスジェニック動物を創製することによって、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体の生理学的役割および行動的役割を解明する動物モデル系が製造される。これら技術の例には次のものが含まれるが、これらに限定されるものではない。１）トランスジェニック動物を製造するために、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡの正常もしくは突然変異バージョン、又はこれら遺伝子の相同性動物バージョンを、マイクロインジェクション、レトロウイルス感染または当業者に周知の他の手段によって、適切な受精胚胎内に挿入すること（Hogan B．et al..Manipulating the Mouse Embryo，A Laborat ory Manual．Cold Spring Harbor Labor alory(1986)）。2）これらグリシン輸送体の構造または発現調節を変えるために、これら遺伝子の突然変異もしくは正常なヒトもしくは動物バージョンと、トランスジェニック動物における天然の遺伝子座との相同性組換え（Capecchi M.R． Science 244:1288-1292(1989);Zimmer,A．and Gruss,P Nature 338;150-153(198 9)）を行なうこと。相同性組換えの技術は当該技術において周知である。これは天然遺伝子を挿入遺伝子で置き換えるから、天然の輸送体を発現できないが、例えば、挿入された突然変異輸送体（組換えにより、動物ゲノムの天然輸送体と置換されたもの）を発現し、当該輸送体の過少発現をもたらす動物を製造するために有用である。マイクロインジェクションはゲノムに遺伝子を加えるが、遺伝子を除去することはないから、それ自身の輸送体および追加された輸送体を発現して、輸送体の過剰発現をもたらす動物を製造するために有用である。トランスジェニック動物を製造するために用いることができる一つの手段について、マウスを例に説明すれば次の通りである。雌のマウスを交配させ、生じた受精卵を切開した輸卵管から取り出す。この卵子を、Ｍ２培地（Hogan B．et al .,Manipulating the Mouse Embryo，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboralory(1986)）のような適切な培地中に保存する。哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡまたはｃＤＮＡは、当該技術において周知の方法により、ベクター（例えば、上記のプラスミドｐＳＶＬ−ｒＢ２０ａ）から精製される。ヒト・グリシン輸送体の場合、ＤＮＡまたはｃＤＮＡは、当該技術において周知の方法により、ベクターｐBluescript−ｈＴＣ２７ａから精製される。導入遺伝子(trans-gene)の発現を調節する実験的手段を提供するために、誘導プロモータがＤＮＡのコーディング領域と融合され得る。その代わりに又はこれに加えて、導入遺伝子の組織特異的発現を可能とするために、組織特異性の調節要素をコーディング領域に融合してもよい。適切な緩衝溶液中のＤＮＡをマイクロインジェクション針（ピペットプラー(pipet pulle r)を用いてキャピラリー管から作製され得る）の中に収容し、遺伝子を注入すべき卵子を凹部スライド(depression slide)内に置く。針を卵子の前核中に挿入し、ＤＮＡ溶液を注入する。注入された卵子は、次いで擬妊娠マウス（実際には妊娠していないが、妊娠を維持するように適切なホルモンによって刺激されたマウス）の輸卵管中に移される。その後、卵子は子宮へ移動し、着床し、所定期間だけ発育される。先に述べたように、マイクロインジェクションは卵子細胞中にＤＮＡを挿入する唯一の方法ではなく、ここでは例示の目的のためだけに用いられている。輸送体に特異的な薬剤の正常な作用は、該輸送体を活性化または阻害することであるから、上記のトランスジェニック動物モデル系は、これらグリシン輸送体に向けられた薬剤の生物学的活性を試験するために（このような薬剤が入手可能になる前であっても）有用である。これら動物モデル系は、生きた動物において、天然遺伝子または導入遺伝子の発現を誘導または阻害して、正常もしくは突然変異グリシン輸送体の発現を増大もしくは減少させるので、これらグリシン輸送体を活性化または阻害する薬剤の可能な治療的適用を予測しまたは評価するために有用である。こうして、これらグリシン輸送体に向けられた薬剤の生物学的活性を、そのような薬剤が人手可能になる前に評価することを可能とするモデル系が製造される。グリシン輸送体を過剰産生または過少産生するトランスジェニック動物は、その生理学的状態によって、グリシン輸送体の過剰産生または過少産生が治療的に有用であるか否かを示す。従って、トランスジェニックモデル系に基づいて薬剤作用を評価することは有用である。一つの用途は当該技術において周知の事実、即ち、抗欝剤のような薬剤は神経伝達物質の取込みをブロックすることにより、シナプス間隙における神経伝達物質の量を増大させるという事実に基づいている。この作用の生理学的結果は、影響された細胞がより少ない輸送体を産生することを刺激し、結局は過少発現が導かれることである。従って、輸送体を過少発現する動物は、過少発現をもたらす薬剤の作用が実際に治療的であるか否かを研究するためのテスト系として有用である。もう一つの用途は、もし過剰発現が異常を導くことが見出だされれば、下方調節する薬剤またはグリシン輸送体に対するアンタゴニストとして作用する薬剤を開発する価値があることが示されること、並びに、もし有望な治療的適用がこれらモデル系によって明らかにされないときは、これらグリシン輸送体に向けられたアゴニスト又はアンタゴニスト薬剤を製造することによって、または人間におけるでこれらグリシン輸送体の発現を増大または減少させる何等かの方法によって、グリシン輸送体の活性化または阻害が治療的に達成されることである。本発明によって更に提供されるのは、哺乳類グリシン輸送体を種々のレベルで発現することの生理学的効果を決定する方法であって、哺乳類グリシン輸送体の発現を調節する誘導プロモータを使用することにより、その哺乳類グリシン輸送体発現のレベルが変化されるようなトランスジェニック非ヒト哺乳動物を製造することを具備した方法である。本発明は、ヒト・グリシン輸送体を種々のレベルで発現することの生理学的効果を決定する方法であって、ヒト・グリシン輸送体の発現を調節する誘導プロモータを使用することにより、そのヒト・グリシン輸送体発現のレベルが変化されるようなトランスジェニック非ヒト哺乳動物を製造することを具備した方法を提供する。本発明はまた、哺乳類グリシン輸送体を種々のレベルで発現することの生理学的効果を決定する方法であって、夫々が異なった量の哺乳類グリシン輸送体を発現する複数のトランスジェニック非ヒト哺乳動物からなるパネルを製造することを具備した方法を提供する。本発明は更に、ヒト・グリシン輸送体を種々のレベルで発現することの生理学的効果を決定する方法であって、夫々が異なった量のヒト・グリシン輸送体を発現する複数のトランスジェニック非ヒト哺乳動物からなるパネルを製造することを具備した方法を提供する。このような動物は、発生によってトランスジェニック動物になるべき卵細胞中に、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体をコードする異なった量のＤＮＡを導入することによって製造され得る。本発明はまた、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体の過剰発現からもたらされる異常を緩和することができる物質を同定するための方法であって、少なくとも一つの哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体をコードする人為的に導入されたＤＮＡ分子を発現するトランスジェニック非ヒト哺乳動物に物質を投与することと、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体の過剰発現の結果としてトランスジェニック非ヒト哺乳動物が示す身体的および行動的な異常を、前記物質が軽減するか否かを決定こととを具備する方法を提供する。ここで使用される「物質」の用語は、化合物または組成物（スクリーニングから導かれる天然物または合成物であり得る）を意味する。ＤＮＡ分子の例は、図１に示されたコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有する、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡまたはｃＤＮＡ分子である。ＤＮＡ分子の例は、図７に示したコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有する、ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡまたはｃＤＮＡ分子である。本発明は、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体の過剰発現からもたらされる異常を軽減するために有効な量の上記物質と、薬剤的に許容可能なキャリアとを含有する薬剤組成物を提供する。本発明は更に、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体の過剰発現の結果からもたらされる異常を治療するための方法であって、患者に対して、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体の過剰発現からもたらされる異常を軽減するために有効な量の上記薬剤組成物を投与することを具備した方法を提供する。本発明はまた、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体の過少発現からもたらされる異常を緩和することができる物質を同定するための方法であって、機能しない哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体のみを発現する上記のトランスジェニック非ヒト哺乳動物に前記物質を投与することと、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体の過少発現の結果としてトランスジェニック非ヒト咄乳動物が示す身体的および行動的な異常を、前記物質が軽減するか否かを決定こととを具備する方法を提供する。本発明はまた、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体の過少発現からもたらされる異常を軽減するために有効な量の上記物質と、薬剤的に許容可能なキャリアとを含有する薬剤組成物を提供する。本発明は更に、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体の過少発現の結果からもたらされる異常を治療するための方法であって、患者に対して、哺乳類グリシン輸送体またはヒト・グリシン輸送体の過少発現からもたらされる異常を軽減するために有効な量の上記薬剤組成物を投与することを具備した方法を提供する。本発明は、特定の哺乳類グリシン輸送体対立遺伝子の発現に伴う疾患の疾病素因を診断する方法であって：ａ）該疾患に履患している患者のＤＮＡを得ることと；ｂ）制限酵素のパネルで前記ＤＮＡの制限切断を行うことと；ｃ）得られたＤＮＡフラグメントをサイジングゲル上で電気泳動により分離することと；ｄ）得られたゲルを、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡに特異的にハイブリダイズすることができ、且つ検出マーカーでラベルされた核酸プローブに接触させることと；ｅ）検出マーカーでラベルされた哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡにハイブリダイズされている標識バンドを検出し、該疾患に履患した患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンを得ることと；ｆ）ステップａ〜ｅによる診断のために得られた、ＤＮＡを調製することと；ｇ）ステップｅで得られた前記疾患に履患している患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンと、ステップｆで診断のために得られたＤＮＡとを比較して、これらパターンが同一であるか又は異なっているかを決定することにより、パターンが同一であれば該疾患の疾病素因ありと診断することとを具備した方法を提供する。この方法はまた、特定の哺乳類グリシン輸送体対立遺伝子の発現が関与している病気を診断するためにも用いられ得る。本発明は、特定のヒト・グリシン輸送体対立遺伝子の発現に伴う疾患の疾病素因を診断する方法であって：ａ）該疾患に履患している患者のＤＮＡを得ることと；ｂ）制限酵索のパネルで前記ＤＮＡの制限切断を行うことと；ｃ）得られたＤＮＡフラグメントをサイジングゲル上で電気泳動により分離することと；ｄ）得られたゲルを、ヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡに特異的にハイブリダイズすることができ、且つ検出マーカーでラベルされた核酸プローブに接触させることと；ｅ）検出マーカーでラベルされたヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡにハイブリダイズされている標識バンドを検出し、該疾患に履患した患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンを得ることと；ｆ）ステップａ〜ｅによる診断のために得られた、ＤＮＡを調製することと；ｇ）ステップｅで得られた前記疾患に履患している患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンと、ステップｆで診断のために得られたＤＮＡとを比較して、これらパターンが同一であるか又は異なっているかを決定することにより、パターンが同一であれば該疾患の疾病素因ありと診断することとを具備した方法を提供する。この方法はまた、特定のヒト・グリシン輸送体対立遺伝子の発現が関与している病気を診断するためにも用いられ得る。本発明は、単離されたグリシン輸送体を調製する方法であって、細胞にグリシン輸送体の発現を誘導することと、得られた細胞から該輸送体を回収することと、こうして回収された受容体を精製することとを具備した方法を提供する。単離されたグリシン輸送体の一例は、図１または図７に示したアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有する単離されたタンパクである。例えば、ホルモンのような物質に曝すことによって、細胞に輸送体の発現を誘導できる。次いで、細胞はホモジナイズされ、該ホモジネートから、例えばグリシン又は該輸送体に結合することが知られている他の物質を含むアフィニティーカラムを使用して、前記受容体が単離される。次に、こうして得られた分画は、これをイオン交換カラムと接触させて、どの分画が輸送体活性有し又は抗輸送体抗体と結合するかを決定することによって精製され得る。本発明は、単離されたグリシン輸送体を製造する方法であって、グリシン輸送体をコードする核酸を適切なベクター中に挿入することと、得られたベクターを適切な宿主細胞内に挿入することと、得られた細胞によって生産された前記輸送体を回収することと、こうして回収された前記輸送体を精製することとを具備した方法を提供する。単離されたグリシン輸送体の一例は、図１または図７に示したアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有する単離されたタンパクである。このグリシン輸送体を製造する方法では、当業者に周知の組換えＤＮＡ技術を使用する。例えば、グリシン輸送体をコードする単離された核酸が、発現ベクターのような適切なベクターに挿入される。適切な宿主細胞（例えばバクテリア細胞、または酵母細胞のような真核細胞）が、該ベクターで形質導入される。グリシン輸送体は、アフィニティー精製、クロマトグラフィー、或いは当業者に周知の他の方法によって培地から単離される。本発明は、哺乳類グリシン輸送体に結合できることが知られていない物質が、哺乳類グリシン輸送体に結合できるか否かを決定するための方法であって、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子を有する哺乳動物細胞と前記物質とを、前記グリシン輸送体に結合することが知られている物質が結合される条件下で接触させることと、前記グリシン輸送体に結合したリガンドの存在を検出することと、これによって前記物質が前記グリシン輸送体に結合するか否かを決定することとを具備した方法を提供する。細胞内の前記ＤＮＡは、図１に示すコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を好ましく有することができ、前記哺乳動物細胞は非神経細胞起源である。非神経系哺乳動物細胞の一例は、Ｃｏｓ７細胞である。ある物質が哺乳類グリシン輸送体に結合できるか否かを決定するための好ましい方法は、表面にグリシン輸送体を発現している形質導入された非神経系哺乳動物細胞（即ち、天然には何れのタイプのグリシン輸送体を発現せず、該細胞内に形質導入されたときにのみ該輸送体を発現する）と前記物質、またはこのような形質導入細胞から誘導された膜プレパレーションと前記物質とを、該物質のグリシン輸送体へのイン・ビボ結合が支配的であり、これに関連することが知られている条件下で接触させることと、細胞表面の前記グリシン輸送体に結合した被検物質の存在を検出することと、これによって前記物質が前記グリシン輸送体に結合するか否かを決定することとを具備する。この応答系は、適切なホスト細胞内に単離されたＤＮＡを形質導入することによって得られる。このようなホスト系は、先在する細胞ラインから単離され、或いは適切な成分を現存の細胞ラインに挿入することによって創製され得る。このような形質導入系は、上記物質での哺乳類グリシン輸送体の活性化を研究し又はアッセイするための完全な応答系を提供する。形質導入系は、公知の薬剤または候補薬剤と、前記輸送体に結合し且つ放射性試薬、分光学的試薬または他の試薬でラベルされた物質との間で競争結合アッセイを行なうための生きた細胞培養体として有用である。形質導入細胞から単離された輸送体を含む膜プレパレーションもまた、これら競争結合アッセイのために有用である。形質導入系は、哺乳類グリシン輸送体の本来の機能を活性化または阻害する治療剤として直接使用され得、または該治療剤として更に改変され得るような、薬剤開発のための可能性をもった天然化合物または合成化合物を同定するために有用な「薬剤発見系」を構成する。該形質導入系はまた、哺乳類グリシン輸送体部位における公知薬剤の親和性および効率を測定するためにも有用である。本発明は、哺乳類グリシン輸送体に特異的に結合できることが知られていない化合物が、哺乳類グリシン輸送体に特異的に結合できるか否かを決定するための方法であって、哺乳動物細胞内での発現に適用されるプラスミド（該プラスミドは更に、哺乳類グリシン輸送体を細胞表面に発現させるＤＮＡを含む）を有する哺乳動物細胞と前記物質とを、前記哺乳類グリシン輸送体に結合することが知られているリガンドが結合される条件下で接触させることと、前記哺乳類グリシン輸送体に結合した化合物の存在を検出すること（結合した化合物の存在は、該化合物が前記哺乳類グリシン輸送体に特異的に結合できることを示す）とを具備した方法を提供する。本発明は、ヒト・グリシン輸送体に特異的に結合できることが知られていない化合物が、ヒト・グリシン輸送体に特異的に結合できるか否かを決定するための方法であって、哺乳動物細胞内での発現に適用されるプラスミド（該プラスミドは更に、ヒト・グリシン輸送体を細胞表面に発現させるＤＮＡを含む）を有する哺乳動物細胞と前記物質とを、ヒト・グリシン輸送体に結合することが知られているリガンドが結合される条件下で接触させることと、前記ヒト・グリシン輸送体に結合した化合物の存在を検出すること（結合した化合物の存在は、該化合物が前記ヒトグリシン輸送体に特異的に結合できることを示す）とを具備した方法を提供する。本発明はまた、細胞表面の哺乳類グリシン輸送体と特異的に相互作用してこれに結合する薬剤を同定するために、薬剤をスクリーニングする方法であって、細胞表面における哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞を複数の薬剤に接触させることと、前記哺乳動物細胞に結合する薬剤を検出することと、これによって哺乳類グリシン輸送体と特異的に相互作用してこれに結合する薬剤を同定することとを具備する方法を提供する。細胞内の前記ＤＮＡは、図１に示したコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有し得る。本発明は更に、細胞表面のヒト・グリシン輸送体と特異的に相互作用してこれに結合する薬剤を同定するために、薬剤をスクリーニングする方法であって、細胞表面におけるヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞を複数の薬剤に接触させることと、前記哺乳動物細胞に結合する薬剤を検出することと、これによってヒト・グリシン輸送体と特異的に相互作用してこれに結合する薬剤を同定することとを具備する方法を提供する。細胞内の前記ＤＮＡは、図７に示したコーディング配列と実質的に同じコーディング配列を有し得る。種々の検出方法が用いられ得る。前記薬剤は、検出マーカー物質（例えば放射性ラベル、またはビオチンのような非同位体ラベル）と結合させることによって「ラベル」され得る。好ましくは、前記哺乳動物細胞は非神経細胞起源である。非神経系哺乳動物細胞の一例は、Ｃｏｓ７細胞である。薬剤候補は、当該技術において周知の放射性リガンド結合法（その例はここに記載の結合アッセイに示される）を用いて、形質導入された細胞内で発現されたグリシン輸送体タンパクに対して高い親和性で結合する化合物を選択することによって同定される。薬剤候捕はまた、一つの特別のグリシン輸送体サブタイプに高い親和性で結合するが、他の何れのグリシン輸送体サブタイプまたは他の何れの公知の輸送体部位に対しても高い親和性で結合しない化合物を同定することによって、選択性をスクリーニングされる。特異的な高親和性の化合物は、患者に投与された後、主に標的グリシン輸送体部位と相互作用するので、欲しない副作用をもった薬剤を製造する機会はこのアプローチによって最小限に抑制される。本発明は、上記の方法によって同定された薬剤と、薬剤的に許容され得るキャリアとを含有する薬剤組成物を提供する。ここで用いる「薬剤的に許容され得るキャリア」の用語は、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水およびエマルジョン（油／水もしくは水／油エマルジョン）、種々のタイプの湿潤化剤のような標準的な薬剤キャリアの何れをも包含する。候補薬剤が特定の投与経路、例えば経口または注射によって充分に生物学的に利用可能であることが示され（望ましい治療的利点を得るためには、充分な治療的濃度が作用部位において充分な時間だけ維持されなければならない）、更に毒性がないこと及び適切な疾患モデルにおいて治療的に有効であることが示されたならば、該薬剤は、所望の治療的利点を得るために、該薬剤を生物学的に利用可能とすると決定された投与経路により、適切な固体処方または溶液処方の形で患者に投与され得る。出願人は個々の輸送体サブタイプのタンパクを同定し、また治療のための薬理学的化合物を同定する方法を記載した。特定の輸送体サブタイプに向けられた薬理学的化合物は、効果的で且つ副作用が最小限である新しい治療を提供する。神経系グリシン輸送体の分子構造の解明は、グリシン作動性神経伝達を理解する上で重要なステップである。この出願の開示は、グリシン輸送体をコードするラット脳由来ｃＤＮＡクローンの単離、アミノ酸配列および機能的発現を報告している。この出願の開示は更に、グリシン輸送体をコードするヒト脳由来ｃＤＮＡクローンの単離、アミノ酸配列および機能的発現を報告している。これら輸送体の同定は、グリシン作動性伝達および神経調節の基礎をなす分子的機構の解明において重要な役割を果たし、また新規な治療剤の開発を補助するに違いない。グリシン輸送体をコードする相補的ＤＮＡクローン（ｒＢ２０ａと称する）がラット脳から単離され、その機能的特性が哺乳動物細胞において試験された。ｒＢ２０ａのヌクレオチド配列は、６３８アミノ酸のタンパク（膜スパンニングドメインに一致する高度に疎水性な１２の領域を含む）を予言する。50nmの［３Ｈ］グリシンと共にインキュベートしたとき、ｒＢ２０ａで暫定的に形質導入されたＣＯＳ細胞は、形質導入されない対照細胞の５０倍も多くの放射活性を蓄積する。ｒＢ２０ａによってコードされる輸送体はグリシンに対する高い親和性を示し（Ｋｍ＝100ｕＭ）、細胞外のナトリウムおよび塩素イオンに依存する。加えて、グリシン輸送体をコードする相補的ＤＮＡクローン（ｈＴＣ２７ａと称する）がヒト脳から単離された。グリシン輸送体の構造および機能の分析によって、認識増強剤として有用であり、また癲癇および他の精神病の治療に有用な薬剤を開発するためのモデルが提供される。本発明は、新しい輸送体タンパク、そのアミノ酸配列、並びにその哺乳類遺伝子およびヒト遺伝子を初めて同定している。この発見により提供される情報および実験手段は、この新しい輸送体タンパク、その関連ｍＲＮＡ分子またはその関連ゲノムＤＮＡのための新しい治療薬および新しい治療もしくは診断試験を生み出すために有用である。この発見により提供される情報および実験手段は、この新しい輸送体タンパク、その関連ｍＲＮＡ分子またはその関連ゲノムＤＮＡのための新しい治療薬および新しい治療もしくは診断試験を生み出すために有用であろう。より詳細には、本発明はグリシン輸送体をコードする哺乳類ｃＤＮＡクローンおよびゲノムクローンの最初の単離に関する。ｒＢ２０ａとして特定された、輸送体の新しい哺乳類遺伝子が同定され、特徴付けられた。また、一連の関連ｃＤＮＡクローンおよび関連ゲノムクローンが単離された。更に、哺乳類グリシン輸送体が、Ｃｃｓ７細胞をプラスミドｐＳＶＬ−ｒＢ２０ａで形質導入することにより、該細胞内で発現された。コードされたタンパクの薬理学的な特性が決定され、これら特性によって、該タンパクはグリシン輸送体に分類される。この哺乳類グリシン輸送体を細胞表面に発現する哺乳動物の細胞ラインが構築され、該グリシン輸送体を研究するために用いられる十分に定義された初めての培養細胞ラインが確立された。本発明は更に、グリシン輸送体をコードするヒトｃＤＮＡクローン及びゲノムクローンの最初の単離に関する。ここでｈＴＣ２７ａとして特定される、ヒト輸送体のための新規なヒト遺伝子が同定され、特徴付けられた。本発明は、以下に示す実験の詳細を参照することによって更によく理解されるであろう。しかし、以下で詳述される個々の実験は単なる例示であり、上記で説明され且つ後記の請求の範囲に定義される本発明を限定することを意味しない。当業者はこのことを容易に承認するであろう。〔実験の詳細〕＜材料および方法＞ラットグリシン輸送体のクローニングおよびシークエンシング：ラムダZAP II ベクター(Stratagene,La Jolla,CA)中のラットの脳ｃＤＮＡライブラリーが、ラットのＧＡＢＡ輸送体ｃＤＮＡのコード領域に相当する重なりプローブを使用して、低い厳密性でスクリーニングされた(Guaslella et al．1990)。ランダムにプライムされたラット脳のｃＤＮＡから、ＧＡＢＡ輸送体をコードしているＰＣＲ生成物を生じさせるために、正確なプライマーが使用された。三組の（プライマーによる）生成物が、全コード領域を示すように、ラットのＧＡＢＡ輸送体ｃＤＮＡのヌクレオチドの配列から三組のプライマーが創製された(Guaslella et al．1990)。プライマーセット１は、862bpのＰＣＲ生成物を産生するために、ヌクレオチド-125から-109から派生するセンスオリゴヌクレオチドとして、およびヌクレオチド721から737から派生するアンチセンスオリゴヌクレオチドとして作成され；プライマーセット２は、821bpのＰＣＲ生成物を産生するために、ヌクレオチド613から629および1417‐1433から夫々派生するセンスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドから構成され；プライマーセット３は、559bpのＰＣＲ生成物を得るために，ヌクレオチド1318から1334および1860‐1876から生じるセンスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドから夫々構成される。559bpＰＣＲ生成物はゲル精製され、サブクローンされ、配列決定されて、その独自性が確認された。その他のものは、ゲル精製されて直接プローブとして使用された。三つのプローブは全て、無作為プライミンングの方法により³²Ｐで標識された(Feinberg and Volgelstein,1983)。ハイブリダイゼーションが、25％フォルムアミド、10％硫酸デキストラン、5X SSC（１X SSCは，0.15M塩化ナトリウム、0.0015Mクエン酸ナトリウム）、１XのDenhardt’s（0 ．02%ポリビニルピロリドン、0.02%Ficollおよび0.02％子牛血清アルブミン）および100μｇ／mlの超音波破砕されたサーモン精子ＤＮＡを含む溶液中において4 0℃で行われた。濾紙が、40℃において0.1%のドデシル硫酸ナトリウム(SDS)を含む0.1X SSCで洗浄され、一枚の増感スクリーンーの存在下で、コダックXARフィルムに-70℃で露光させた。プローブにハイブリダイスしているラムダファージは、プラーク精製され、正確に適合しているものを排除するために同じプローブ混合物で、高い厳密性をもってスクリーニングされた。候補クローンは、f1ヘルパーファージによるin-vivo切り出しによりファージミド(phagemids)に変換された。pBluescrip１の二本鎖ｃＤＮＡのヌクレオチド配列が、シークエナーゼ（U ．S．Biochemical Corp.，Cleaveland，Ohio）を使用してサンガーのデイデイオキシヌクレオチドチェインターミネータ法(Sanger，1977)により分析された。発現：二つのｃＤＮＡクローン（合わせるとグリシン輸送体遺伝子の全コード領域に亘り、5’の未翻訳配列の63塩基対および3’の未翻訳配列の189塩基対を含む）が同定された。これらの二つのクローンは、内部のNcol部位で連結することにより完全な長さのクローン(rB20a と命名)に構築され、次いで真核細胞発現ベクターpSVL（Pharmacia LKB Biotech nology，Piscataway，NJ）にクローン化された。COS細胞の一時的トランスフェクションが、DMSOと共にDEAE-デキストランを使用して、若干改良を加えたLopat a et al．(1984)の方法に準拠して実施された。COS細胞は、６‐ウエルプレート (37℃、５%CO₂)内において、10%子牛血清、100U/m｜ペニシリンG、および100μl /ml硫酸ストレプトマイシンを捕充した高グルコースDulbecco改良イーグル培地中で成育された。細胞は、常法に従い、トランスフェクションの二日後に輸送研究のために使用された。輸送研究：グリシン輸送を測定するために、６‐ウエルプレート（ウエル直径 35mm）で成育されたCOS細胞がHEPES緩衝生理食塩水（HBS，NaCl 150mM，HEPES 2 0mM，CaCl₂1mM，グルコース10mM，KCl 5mM，MgCl₂1mM，pH7.4）で３回洗浄し、3 7℃の水浴中において平衡化された。10分後に培地を除去し、［³Ｈ］グリシン（ New England Nuclear，sp．activity=45Ci/mmol）を含む溶液およびHBS中に必要とされる薬剤を添加した（1．５ml/well）。プレートは37℃で10から20分間インキュベートされ、HBSで急速に三回洗浄された。細胞は、0.05%ナトリウムデオキシコレート／0.１N Na0H(1ml/well)で溶解され、0.5mlのアリコートが除去され、1NのHClで中和され、放射線活性がシンチレーション計測によって測定された。溶解細胞アリコート中の蛋白質が、ブラッドロード試薬（Bradford Reagent;Biorad,Richmond，CA）により、メーカ指示書に準拠して定量された。非特異的取り込みが、並行ウエル中１mMの無標識グリシンで測定され、これを全取り込み量（非競合）から差し引いて、特異的取り込み量を得た。データは全て特異的取り込みを示す。ノーザレンブロット分析：RNAzol（Cinna/Biotecx LaboraloriesInc.；Hous ton，TX）を使用し、メーカーの概説書に従って、全細胞性ＲＮＡがラット組織より単離された。不活性化されたＲＮＡサンプル（-30μg）が、3.3%のホルムアルデヒドを含む1.2gアガロースゲル中で分離された。RNAsは、10X SSC中で一晩の毛細管ブロッテイングによって、ニトロセルロース膜に移された（Schleicher and Schuell，Keene，NH）。ノーザレンブロットは洗浄され、真空下で２時間8 0℃でベーキングされた。予備ハイブリダイゼーションが、50%のホルムアミド、 2X SSC、1X Denhardt’s、0.1%SDS、20mMリン酸ナトリウムおよび10mM EDTAを含む溶液中で１時間、65℃で行なわれた。ブロットは、125μg/mlの超音波破砕されたサケ精子ＤＮＡを含むプレハイブリダイゼーション混合物中において、42 ℃で一晩、³²Ｐで標識されたＤＮＡプローブ（無作為にプライムされた）とハイブリダイスされた。ブロットは、65℃において、2XSSC/1% SDSと0.1X SSC/1% SD S中で順次洗浄され、次いで-90℃において、一つの増感スクリーンを用いてコダックXAR-5フィルムを最高一週間露光させた。In Situ ハイブリダイゼーション：雄のSprague-Dawleyラット(Charles River) を軌首し、その脳をイソペンタン中で急速冷凍した。切片をクライオスタット上で切断し、ポリＬリジンで被覆されたカバースリップ上に解凍載置し(Thawmount ed)、使用するまで-80℃で貯蔵した。組織は4%パラフォルムアルデヒド中で固定され、5mMのジチオトレイトール（DTT）で処理され、アセチル化され（0.1Mのトリエタノールアミン中0.25％無水酢酸）、次いで脱水された。組織は50%のホルムアミド、4X SSC(0.6M NaCl/0.06Mクエン酸ナトリウム)、１X Denhardt’s溶液（0.2％ポリビニルピロリジン，0.2% Ficoll，0.2%子牛血清アルブミン）、50mM DTT、500μｇ/mlのサケ精子DNA、500μｇ/ml酵母tRNA、10%硫酸デキストランを含む溶液中で予備ハイブリダイズされ（１時間、40℃）、次いで同様の溶液中で一晩、³⁵Ｓ‐標識されたアンチセンスオリゴヌクレオチド(45mers)とハイブリダイズされた。洗浄および脱水の後、切片をコダックX-OMAT ARフィルム上に-20℃ ４日間並置した。ハイブリダイゼーション信号の特異性を証明するために、ハイブリダイゼーションに先だって、類似組織を100μg/mlのRNase Aで前処理した（ 37℃で30分）。グリシン輸送体の領域（膜通過ドメインIIIおよびIV間のループ部分、3’未翻訳部分）を分離するように設計された二つの異なるオリゴヌクレオチドが、同一パターンのハイブリダイゼーションを示した。スクリーニング用ヒトｃＤＮＡライブラリーを確認するためのＰＣＲの使用：ｈGlyclnｅのための、ラットＰＣＲプライマーの配列は、5’‐(ATGGCTGTGGCTCA CGGACCTGTGG)及び5’-(TGAAGACTTGACTCCTCGAATGAGGCAGAG)であった。ＰＣＲ反応は、20mM Tris（pH8.3）、50mM KCl、1.5mM MgCl₂、0.001％ゼラチン、2mM dNTP ’s、各プライマの１μM、Taqポリメラーゼ、及びラムダファージライブラリ、水または対照プラスミドのアリコートを含む緩衝液中において、94℃で２分、50 ℃で２分および72℃で３分からなるサイクルを40サイクルで実施された。ＰＣＲ産生物は1.2%アガロースゲル中での電気泳動で分離され、ナイロン膜（ゼータプローブGT；Blo-Rad Laboratories，Richmond，CA）にブロットされ、25%のホルムアミド、10%の硫酸デキストラン、5X SSC、1X Denhardt’s、100μg/mlの超音波破砕サケ精子DNAを含む溶液中において40℃で一晩、³²Ｐで標識されたオリゴヌクレオチドプローブ（45mersの重なり）とハイブリダイズされた。オリゴヌクレオチドの配列は、ラット・グリシン輸送体のアミノ酸204-226に対応した。ブロットは低い厳密性（0.1X SSC，40℃）で洗浄され、コダックXARフィルムを最高３日間、一つの増感スクリーンを用いて-70℃で露光させた。ヒトクローンの単離およびシークエンシング： hGlycineを含むことが確認されているラムダZAPベクターまたはラムダZAP IIベクター（Stratagene，La Joll a，CA）中のヒトｃＤＮＡライブラリーが、厳密性を下げてスクリーニングされた（25％のホルムアミド、40℃ハイブリダイゼーション；0.1X SSC，40℃洗浄）。ハイブリダイズするラムダファージはプラーク精製され、f1ヘルパーファージによるin vivo切り出しによってファージミドに変換された。ｐBluescript中の二本鎖ｃＤＮＡsのヌクレオチド配列が、シークエナーゼ(U．S．Biochemical Corp.，Cleaveland，Ohio)を使用し、サンガーのデイデイオキシヌクレオチドチェインターミネーション法(Sanger，1977)によって分析された。＜結果＞グリシン輸送体をクローン化するために、ラット脳ｃＤＮＡライブラリが、ラットＧＡＢＡ輸送体をコードするプローブを用いて、低い厳密性でスクリーンされた(Guaslella et al.，1990)。単離された48のクローンのうちの10クローンが、高厳密性ではないが低い厳密性で、ＧＡＢＡ輸送体プローブとハイブリダイズしたことが同定された。ＤＮＡ配列分析によって、これらのクローンの内の７つが重複した断片を含むことが明らかになった。このクローンの内の二つは、1917 塩基対の読み取り枠と共に2.2kbの配列(rB20a)を構成していることがわかった。ラットＧＡＢＡ輸送体とこれら配列との比較により、55‐60％のヌクレオチドがコード領域内で一致することが分かった。GenbankおよびEMBLデータベースの調査によって、このヌクレオチド配列が新規であること、最も緊密に関係している配列の二つはラットのＧＡＢＡ輸送体(Gualella et al.，1990)およびヒトノルエピネフリン輸送体(Pacholczyk ee al.，1991)であることが証明された。ヌクレオチドおよび推定アミノ酸配列、並びにrB20aによってコードされた蛋白の膜トポロジーの提案が図１に示めされている。位置１のＡＴＧ開始コドンから位置1917の終始コドンに亘る読み取り枠は、約72,000の相対分子量(Mr)を有する、長さ638アミノ酸の蛋白をコードすることが出来る。ハイドロパシー(hydrop athy)分析では、膜スパンニングセグメントに相当し得る１２の疎水性ドメインがある事が示された（データ不表示）。我々は細胞中に両末端をもち、ＧＡＢＡ (Guaslella et al.)およびノルアドレナリン（Pacholczyk et al.，1991）輸送体用に提案される膜トポロジーと同様に、グリシン輸送体の模型を作成した。６つの可能なＡｓｎ連結グリコシル化部位のうちの４つは、第３および第４の膜貫通ドメインの間のループ（細胞外と予想される）に見られる。ＧＡＢＡ輸送体と並べて比較することにより、45%のアミノ酸同一性（保存的置換では68%の相同性）が明らかになった。ヒト・ノルエピネフリン輸送体(Pacholczyk et al．1991) とrB20aとの比較では、同程度(42%)のアミノ酸同一性（図２）を示した。これらのデータによって、該新規配列は脳で発現される新規な輸送体をコードしていることが示唆された。この可能性を探索するために、この配列が哺乳類発現ベクタ（pSVL）に入れ、ＣＯＳ細胞にトランスフェクトし、種々の放射線標識した神経伝達物質およびアミノ酸の輸送についてスクリーニングした。 rB20aで一時的にトランスフェクトされたＣＯＳ細胞(COS /rB20a)は、トランスフェクトされていない対照細胞よりも［³Ｈ］グリシンを多く蓄積した（図３）。低濃度の［³Ｈ］グリシン(50‐100nM)と共に20分のインキュベーション(37℃)を行なっている間、特異的取り込みは対照（平均±SEM、n=6 被験体）の54±6倍を凌ぐ増加を示した；代表的な実験を図３に示す。特異的取り込みは、対照において全取り込みの45±4%を、トランスフェクトされた細胞において全取り込みの87±１%（平均士SEM，n=6）を夫々示した。また、両者の場合の非特異的取り込みの絶対濃度は類似していた。トランスフェクトされた細胞で高パーセンテージの特異的取り込みが観察されることは、rB20aの発現の結果として増大された取り込みが飽和可能であることを実証している。［³Ｈ］グリシンの取り込みが、当該挿入物を欠くプラスミドまたは無関係な挿入物を含むプラスミドでのトランスフェクションによって増加しなかったこと（表示なし）は、上記の取り込み増加がrB20aに特異的であって、膜の非特異的パーターベーションに起因するものではない事を示している。更に、rB20aの発現は［³Ｈ］ＧＡＢＡ、［³Ｈ］ヒスタミン、［³Ｈ］グルタミン酸、［³Ｈ］チロシン、［³Ｈ］ノルエピネフリン、［³Ｈ］５−ＨＴ、［³Ｈ］ドーパミンの取り込みを有意に変化させなかった（データ表示なし）。［³Ｈ］グリシンの輸送は、Na⁺をLi⁺（図３）またはコリン（不表示）で置換するか、或いはCl^-をアセテートおよびグルコネートで置換すると≧95%低下する（図３）。この様に、rB20aによってコードされたグリシン輸送体は、クローン化されたＧＡＢＡ輸送体に対してと同じように(Guastella et al.，1990)、Na⁺ およびCl^-を絶対的に必要とする。これらのデータを総合すると、rB20aがナトリウムおよび塩素依存性の飽和可能なグリシン輸送体をコードしていることが示される。 rB20a/COS細胞における50nM［³Ｈ］グリシンの取り込みの速度論が図４Ａに示される。［³Ｈ］グリシンの特異的蓄積は、最初の数分間は直線的であり、約５分で飽和に達した。グリシンのクローン化輸送体に対する親和性を測定するために、rB20aでトランスフェクトされたＣＯＳ細胞を種々の濃度の［³Ｈ］グリシンと共にインキュベートし、その放射活性の特異的蓄積を測定した。代表的実験が図４Ｂに示されているが、図４Ｂでは、キャリア媒介されたプロセスについて予想されたように、取り込みがグリシンの高濃度で飽和したことがわかる。このデータの非直線的回帰分析によって、123μMのＫ_Mと、28nM／分／１mg蛋白のＶ_max が示された（２実験の平均）。 rB20aのよってコードされる輸送体の薬理学的特異性を調べるために、我々は、［³Ｈ］グリシンの取り込みについてrB20aでトランスフェクトされたＣＯＳ細胞と競合する様々な薬剤の能力を調査した（表１）。表１rB20a によってトランスフェクトされたCOS-7細胞における[³H]取り込みの薬学的特異性 ^aグリシン輸送体をコードするrB20aでトランスフェクトされたCOS-7細胞は、5 0nMの[³H]グリシンおよび表示された化合物と共に10分（37℃）インキュベートされた。非特異的取り込みが1mM グリシンで測定された。データは特異的[³H]グリシン取り込みのパーセント置換で示す。グリシンは、種々の組織における多重アミノ酸輸送システムの基質である。それ故、先に同定されたシステムに対するこのクローン化された輸送体の関係を決定ことが重要であった。システムＡの基質であるα-(メチルアミノ)イソ酪酸酸( 1mM)も、システムＡＳＣの基質であるL-セリン(lmM)も、［³H]グリシンの取り込みに対して有意には競合しなかった。サルコシン（N-メチルグリシン）に阻害された特異的［³H］グリシン輸送は、10μM，100μM，1mMで夫々、23%，64%，100% であり、約50μMのIC50と合致した。グリシンのエチルエステル及びメチルエステルは阻害能力がグリシンよりも弱く、1mMにおいて夫々32%および42%だけ、特異的輸送を阻害した。10μM，100μMでは阻害はみられなかった。他の試験に供した薬剤は、[³H]グリシンの取り込みについて競合しなかった。これらのデータは、rB20aがグリシンに特異的な輸送体をコードしている事を示している。グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡの分布を決定するために、我々はラット脳の種々の領域および周辺組織から単離した全ＲＮＡのノーザレンブロット分析を実施した（図５）。高い厳密性でグリシン輸送体ｃＤＮＡとハイブリダイズする単一の転写物(約3.8kb)が、全脳、中脳、後脳、小脳および脊椎等の全中枢神経系サンプル中に存在し、前脳には低量存在していた。シクロフィリン（Danielsonet al.，1988）をコードするｃＤＮＡでの再プロービングによりＲＮＡ量を正規化したところ、脊椎および小脳中におけるグリシンｍＲＮＡの調整量は、後脳および中脳で見られる量とほぼ等しい事がわかった。この転写物は、脾蔵、腎臓または大動脈では検出されなかった。非常に弱い信号が肝臓で検出されたが、これは関連遺伝子との交差ハイブリダイゼーションか、或いはグリシン輸送体ｍＲＮＡの超低レベル発現を反映している。これらのデータは、グリシン輸送体ｍＲＮＡが主に神経系で発現される事を示唆している。グリシン輸送体の局剤化をより詳細に測定するために、ラット中枢神経系の冠状切片において、特異的アンチセンスプローブのin-situハイブリダイゼーションが行なわれた（図６）。グリシン輸送体ｍＲＮＡは全脳レベルで観察されたが、その分布はかなりの領域的不均一を示した。中程度から高程度のｍＲＮＡが脊椎領域、脳幹領域、および中脳領域で検出され、この領域においては、阻害的神経伝達におけるグリシンの役割が十分に実証される。淡蒼球および視床下部は中程度に標識されたが、視床および線条(Siriatum)では弱く標識され、黒質は標識されなかった。新皮質は、全てのロストロコーダル(rostrocaudal)レベルで、弱く拡散した標識を示した。臭覚球の僧帽細胞層および小脳の顆粒層では、濃厚な標識がみられた。驚いたことに、海馬形成の錐体細胞層（歯状円形CA1，CA2，CA 3）で高濃度の標識が観察されたか（図６）、この領域では通常のグリシン受容体が無いかまたは少ない（Malosio et al．，1991，van den Pol and Gorcs，1988）。海馬における標識パターンは、むしろＮＭＤＡレセプターにおけるグリシン可変部のパターンに相当している(Monoghan，1990)。ヒト・グリシン輸送体をコードするｃＤＮＡクローン（hGlycine）を得るために、我々は、ヒトｃＤＮＡライブラリにおいてｈGlycineの有無を検出する、ラット・グリシン輸送体ｃＤＮＡのヌクレオチド配列に基づくＰＣＲプライマーを使用した。ＰＣＲは、ラットとヒトの配列間の誤適合を誘うために、アニーリング温度を下げて実施された（実験法参照）；ラット・グリシン輸送体配列に相当する放射線標識されたオリゴヌクレオチドとの低い厳密性でのハイブリダイゼーションによって、増幅されたhGlycine配列が検出された。ヒト側頭皮質ｃＤＮＡライブラリ(Stratagene)が、同じプローブによって、低い厳密性で同定およびスクリーニングされ、その結果、hGlycineのコード領域の主要部分を含む部分的ｃＤＮＡクローン(hTC27a)が単離された。該クローンからのhGlycineヌクレオチド配列と、長い読取り枠の翻訳に基づく推定アミノ酸配列が図７に示される。該配列は、コード領域(312アミノ酸)の936塩基対、および5’未翻訳領域の45塩基対を含む。ラット・グリシン輸送体アミノ酸配列との比較によって、該クローンによってコードされる領域（開始メチオニン(N-末端)およびヒトグリシン輸送体の予想される膜貫通ドメイン1‐5を含む）に亘って、95%の同一性のあることがわかった。ラットと比較すると、ヒト配列においては翻訳開始位置が異なるため、ヒトグリシン輸送体のN-末端は14の付加的アミノ酸を含む事が予想される。＜考察＞シナプス間伝達の重要性にもかかわらず、神経伝達物質輸送体の分子的性質についての我々の理解は、神経伝達物質レセプターの理解に比較して遅れている。グリシン輸送体をコードするｃＤＮＡクローンの我々による同定は、ＧＡＢＡ輸送体（Guaslella et al..，1990)、ノルエピネフリン輸送体(Pacholczy et al. ，1991）、ドーパミン輸送体(Kllly et al.，1991，Shimada et al.，1991)、およびセロトニン輸送体(Blakely et al.，1991;Hoffman et al.，1991)の最近のクローニングと共に、このクラスの膜蛋白の構造的特質を決定するための枠組みを提供する。ラット脳からクローン化されたグリシン輸送体は、輸送体族の他のメンバーと類似する典型的な配列を示す。グリシン輸送体アミノ酸配列を、ＧＡＢＡおよびノルエピネフリン輸送体（図２）の配列と並べて比較すると、該族内において高度に保存された多数のドメインがある事がわかる。基質特異性が異なるにもかかわらず、ＧＡＢＡ担体とノルエピネフリン担体の間では半分以上の残基が共通しており、これらの残基はグリシン輸送体にも存在している。これらの大半は、クローン化された５つの輸送体すべてに共通している。このような領域が、基質認識に直接に関係しているとは思えない。むしろ、これら領域は共通の輸送機能に奉仕しているようだ。神経伝達物質輸送体を、助長されたグルコース担体(Kayano et al.，1990)のような他の同様にモデル化された栄養輸送体から区別する特徴は、膜通過ドメイン３および４の間の細胞外の大ループ（幾つかのグリコシル化可能部位を有する）である。該ループおよび膜通過ドメイン9‐11におけるアミノ酸配列は、他の多くの領域におけるアミノ酸配列よりも一層多様化しており、これらドメインが基質認識特異性に貢献する可能性を提起している。信号伝達に加えて、グリシンは、神経組織および非神経組織の両者における蛋白のアミノ酸構成成分として機能する。ノーザンブロット分析によって、該クローン化グリシン輸送体が神経に特異的であることが示唆され、従って、該輸送体は“sysiem gly”、即ち肝細胞(Chrislensen and Handlogten，1981;Moseley e t al.，1988)および赤血球細胞(Felipe et al.，1990)等の非神経細胞に存在するグリシン特異的輸送系から区別される。クローン化グリシン輸送体の薬理学的特異性（表１）は、培養グリア細胞(Zefra and Gimenez，1989)に存在する高親和性のグリシン輸送体にみられる特異性、並びに脊椎(Lopez-Corcuera and Arag on，1989)から単離された再構成輸送体と類似しており、通常のアミノ酸輸送体系システムＡおよびシステムＡＳＣ(Christensen，1984)（グリシンばかりでなく他のアミノ酸も輸送する）とは明らかに区別される。更に、該クローン化された輸送体のグリシンとの親和性（Ｋｍ＝123μM）は、グリア細胞培養に存在する高親和性輸送体(95μM,Zefra and Gimenez，1989)の親和性とほぼ同一であり、ラット脳シナプトソーム中の高親和性輸送体（50μM;Ma yor et al.，1981)とは２倍異なるだけである。総合すると、これらのデータは神経伝達におけるクローン化グリシン輸送体の役割を支持しており、これは他の神経伝達物質との高度の構造的類似性に合致する。神経特異的で高度に親和性のグリシン輸送体の同定は、選択的でかつ中枢作用性のグリシン取り込み阻害剤を創製し得ることを示唆している。グリシン輸送体ｍＲＮＡの局剤化研究によって、ｍＲＮＡは、脊椎および脳幹に存在している（ここでは古典的な阻害に関与すると思われる）ばかりでなく、古典的なグリシン阻害レセプターが無いかあるいは低量でしか存在しない思われる海馬および皮質(Malosio et al.，1991;Van den Pol and Gorcs，1988)においても、大規模に発現されることが解明された。むしろ、これらの領域はＮＭＤＡレセプターに関連したグリシン結合部位を多く含んでおり(Monoghan，1990;Mori yoshi et al.，1991;Kumar et al.，1991)、グリシン輸送体がＮＭＤＡレセプターを調整し、記憶保存のような認識プロセスを調節することに関与しているであろうことを示唆している。海馬形成に高濃度のグリシン輸送体ｍＲＮＡが関与するという我々知見は、細胞外空間におけるグリシンの内因性レベルが該輸送体によって調節され得ることを示唆している。グリシンの濃度を調節し、それによってＮＭＤＡレセプターの機能的有効性を調節する能力は、高度の神経系プロセスを調整するために重要であろう。近年、Smith et al．(1992)によってクローン化された物と類似しているが同一ではないグリシン輸送体ｃＤＮＡが、ラット(Guastella et al.，1992)及びマウス(Liu et al.，1992a)の両者からクローン化された。これらのイソ形体は、択一的なスプライシングに起因し得るものであり、組織特異的発現を調整する手段を提供できるであろう。グリシン輸送体に加えて、先にクローン化された神経伝達物質輸送体との有意な配列相同性を示す別の輸送体が幾つかクローン化された。最近、ＧＡＢＡ輸送体GAT-1のマウス相同体に相当するｃＤＮＡおよび遺伝子クローンが報告された(Liu et al.，1992)。我々は最近、ラットの脳から、新規な二つの高親和性ＧＡＢＡ輸送体（GAT-2，GAT-3と命名）をクローニングし、発現させたことを報告した(Borden et al.，1992)。Borden et al．(1992)によって報告されたラットGAT-3配列と100％のアミノ酸同一性を示す、ラット脳由来のβ‐アラニン感受性ＧＡＢＡ輸送体がClark et al.，(1992)によってクローン化された。高親和性のL-プロリン輸送体がFremeau et al.，(1992)によって報告されたが、これは興奮性神経伝達物質におけるL‐プロリンの役割を支持している。コリン輸送体として同定されたラットｃＤＮＡが、Mayser et al.，(1992) によって報告された。Smith et al.，（1992a）によって報告されたラット・タウリン輸送体のアミノ酸配列と90%同一であるタウリン輸送体ｃＤＮＡが、犬の腎臓細胞から最近クローン化された(Uchida et al.，1992)。最後に、マウスのＧＡＢＡ輸送体をコードするｃＤＮＡが、Lopez-Corcuera et al.，（1992）によって最近クローンされた；このｃＤＮＡにコードされる輸送体は、犬のベタイン輸送体(Yamaguchiet al.，1992)と88%同一である。薬剤の開発プロセスにおけるヒト遺伝子産物の使用は、他の種の遺伝子産物（これらは同じ薬理学的特徴を示さない）を凌ぐ顕著な利点を提供する。阻害的アミノ酸輸送体の領域において、このヒトをターゲットとするドラッグデザインへのアブローチを容易にするために、我々は、ラット脳の高親和性グリシン輸送体 (Smith et al.,1992)のヌクレオチド配列を使用して、ヒト・グリシン輸送体をクローン化した。ヒト脳グリシン輸送体のクローニングおよび発現は、その薬理学的特徴をラットのグリシン輸送体の薬理学的特徴と比較すること可能にし、また、ヒト治療剤としてのグリシン取り込み阻害剤の作用機構を理解し、予想するための手段を提供する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】平成５年１２月６日（１９９３．１２．６）【補正内容】請求の範囲１．哺乳類グリシン輸送体をコードする、単離された核酸分子。２．前記核酸分子がヒト・グリシン輸送体をコードする、請求項１に記載の核酸分子。３．前記核酸分子がＤＮＡ分子である、請求項１に記載の単離された核酸分子。４．前記ＤＮＡ分子がｃＤＮＡ分子である、請求項３に記載の単離されたＤＮＡ分子。５．前記ＤＮＡ分子がゲノムＤＮＡから誘導される、請求項３に記載のＤＮＡ分子。６．請求項３のＤＮＡ分子を具備するベクター。７．プラスミドベクターである、請求項６に記載のベクタ。８．バクテリア細胞内でのグリシン輸送体の発現に適用される請求項６に記載のベクターであって、グリシン輸送体をコードする前記ＤＮＡのバクテリア細胞内での発現のために必要な調節因子を具備し、該調節因子は前記ＤＮＡに対してその発現を可能とするように位置付けられているベクター。９．酵母細胞内でのグリシン輸送体の発現に適用される請求項６に記載のベクターであって、グリシン輸送体をコードする前記ＤＮＡの酵母細胞内での発現のために必要な調節因子を具備し、該調節因子は前記ＤＮＡに対してその発現を可能とするように位置付けられているベクター。１０．哺乳動物細胞内でのグリシン輸送体の発現に適用される請求項６に記載のベクターであって、グリシン輸送体をコードする前記ＤＮＡの哺乳動物細胞内での発現のために必要な調節因子を具備し、該調節因子は前記ＤＮＡに対してその発現を可能とするように位置付けられているベクター。１１．哺乳動物細胞内でのグリシン輸送体の発現に適用される請求項７に記載のベクターであって、グリシン輸送体をコードする前記ＤＮＡの哺乳動物細胞内での発現のために必要な調節因子を具備し、該調節因子は前記ＤＮＡに対してその発現を可能とするように位置付けられているベクター。１２．ｐＳＶＬ−ｒＢ２０ａと命名された請求項１１に記載のプラスミド（ＡＴＣＣ受付番号第75132号）。１３．ｐBluescript−ｈＴＣ２７ａと命名された、請求項１１に記載のプラスミド（ＡＴＣＣ受付番号第75342号）。１４．請求項７に記載のプラスミドを具備する哺乳動物細胞。１５．前記哺乳動物細胞がＣｏｓ７細胞である請求項１４に記載の哺乳動物細胞。１６．請求項１２に記載のプラスミドを具備するＣｏｓ７細胞。１７．哺乳類グリシン輸送体をコードする核酸分子の配列中に含まれる配列と特異的にハイブリダイズすることができる、少なくとも１５ヌクレオチドの核酸分子を具備した核酸プローブ。１８．ヒト・グリシン輸送体をコードする核酸分子の配列中に含まれる配列と特異的にハイブリダイズすることができる、少なくとも１５ヌクレオチドの核酸分子を具備した核酸プローブ。１９．前記核酸がＤＮＡである、請求項１７に記載の核酸プローブ。２０．請求項１７に従う核酸プローブの混合物であって、夫々のプローブは、所定の位置で互いに異なる配列を有している混合物。２１．哺乳類グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに特異的に結合できる配列を有し、該ｍＲＮＡの翻訳を妨害するアンチセンスオリゴヌクレオチド。２２．ヒト・グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに特異的に結合できる配列を有し、該ｍＲＮＡの翻訳を妨害するアンチセンスオリゴヌクレオチド。２３．ヌクレオチドの化学的類縁体を具備する請求項２１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。２４．請求項２１に従うアンチセンスオリゴヌクレオチドの混合物であって、夫々のオリゴヌクレオチドは所定の位置で互いに異なる配列を有している混合物。２５．哺乳類グリシン輸送体の発現を検出する方法であって、細胞または組織からＲＮＡを得ることと、こうして得られたＲＮＡを、ハイブリダイズ条件下において請求項１７の核酸プローブと接触させることと、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出すること（該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在は哺乳類グリシン輸送体の発現を示す）と、これにより前記哺乳類グリシン輸送体の発現を検出することとを具備する方法。２６．ヒト・グリシン輸送体の発現を検出する方法であって、細胞または組織からＲＮＡを得ることと、こうして得られたＲＮＡを、ハイブリダイズ条件下において請求項１８の核酸プローブと接触させることと、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出すること（該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在はヒト・グリシン輸送体の発現を示す）と、これによりヒト・グリシン輸送体の発現を検出することとを具備する方法。２７．in situハイブリダイゼーションにより細胞または組織における哺乳類グリシン輸送体の発現を検出する方法であって、前記細胞または組織を、ハイブリダイズ条件下において請求項１７の核酸プローブと接触させることと、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出すること（該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在は哺乳類グリシン輸送体の発現を示す）と、これにより哺乳類グリシン輸送体の発現を検出することとを具備する方法。２８．in situハイブリダイゼーションにより細胞または組織におけるヒト・グリシン輸送体の発現を検出する方法であって、前記細胞または組織を、ハイブリダイズ条件下において請求項１８の核酸プローブと接触させることと、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出すること（該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在はヒト・グリシン輸送体の発現を示す）と、これによりヒト・グリシン輸送体の発現を検出することとを具備する方法。２９．遺伝子ライブラリーからグリシン輸送体以外の輸送体をコードする遺伝子を単離する方法であって、前記ライブラリーをハイブリダイズ条件下で請求項１７のプローブと接触させることと、該プローブがハイブリダイズする遺伝子を単離することとを具備する方法。３０．請求項２８に記載の方法であって、更に、前記ライブラリーを具備するＤＮＡを同時に、ハイブリダイズ条件下において、前記第一のプローブがハイブリダイズする遺伝子ＤＮＡの相補鎖ＤＮＡ配列にハイブリダイズできる配列を具備した第二の核酸プローブと接触させることと、両方のプローブがハイブリダイズした遺伝子配列を処理して該遺伝子配列の多重コピーを生成させることと、増幅された遺伝子配列を単離することと、単離された遺伝子配列をプローブとして用いることにより、増幅されたＤＮＡ配列がハイブリダイズする遺伝子を遺伝子ライブラリーから単離することとを具備した方法。３１．請求項２９または３０に記載の方法で単離された遺伝子。３２．合成遺伝子であって、請求項１の単離された核酸分子と、これに付着して前記合成遺伝子から転写されるＲＮＡ分子の数を増大させる少なくとも一つの調節因子とを具備する合成遺伝子。３３．合成遺伝子であって、請求項１の単離された核酸分子と、これに付着して前記合成遺伝子から転写されるＲＮＡ分子の数を減少させる少なくとも一つの調節因子とを具備する合成遺伝子。３４．単離された哺乳類グリシン輸送体タンパク。３５．前記哺乳類グリシン輸送体タンパクがヒト・グリシン輸送体である、請求項３４に記載の輸送体タンパク。３６．請求項３４の哺乳類グリシン輸送体を製造する方法であって、細胞に前記哺乳類グリシン輸送体の発現を誘導することと、得られた細胞から該哺乳類グリシン輸送体を回収することとを具備した方法。３７．請求項３４の哺乳類グリシン輸送体タンパクを製造する方法であって、前記哺乳類グリシンをコードする核酸分子を適切なベクターに挿入することと、得られたベクターを適切なホスト細胞に挿入することと、得られた細胞により産生された前記哺乳類グリシン輸送体を回収することとを具備した方法。３８．請求項３５のヒト・グリシン輸送体を製造する方法であって、細胞に前記ヒト・グリシン輸送体の発現を誘導することと、得られた細胞から前記ヒト・グリシン輸送体を回収することとを具備した方法。３９．請求項３５のヒト・グリシン輸送体タンパクを製造する方法であって、前記ヒト・グリシンをコードする核酸分子を適切なベクターに挿入することと、得られたベクターを適切なホスト細胞に挿入することと、得られた細胞により産生された前記ヒト・グリシン輸送体を回収することとを具備した方法。４０．哺乳類グリシン輸送体もしくは該哺乳類グリシン輸送体のタンパクフラグメントに向けられた抗体。４１．ヒト・グリシン輸送体もしくは該ヒト・グリシン輸送体のタンパクフラグメントに向けられた抗体。４２．前記抗体がモノクローナル抗体である請求項４０に記載の抗体。４３．前記抗体がモノクローナル抗体である請求項４１に記載の抗体。４４．請求項４２に記載のモノクローナル抗体であって、該抗体が哺乳類細胞表面グリシン輸送体のエピトープ（哺乳類グリシン輸送体の細胞表面エピトープのアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有する）に向けられたモノクロナル抗体。４５．請求項４３に記載のモノクローナル抗体であって、該抗体がヒト・細胞表面グリシン輸送体のエピトープ（ヒト・グリシン輸送体の細胞表面エピトープのアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有する）に向けられたモノクロナル抗体。４６．ヒト・グリシン輸送体の過剰発現に起因した異常を緩和するのに効果的な物質の有効量と、薬剤的に許容可能なキャリアとを含有する薬剤組成物。４７．ヒト・グリシン輸送体の過少発現に起因した異常を緩和するのに効果的な物質の有効量と、薬剤的に許容可能なキャリアとを含有する薬剤組成物。４８．細胞膜を通過して細胞内で哺乳類グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡと特異的に結合し、その翻訳を阻害することにより哺乳類グリシン輸送体の発現を低下させるのに有効な量の請求項２２のオリゴヌクレオチドと、細胞膜を透過できる薬剤的に許容可能な疎水性キャリアとを含有する薬剤組成物。４９．請求項４８に記載の薬剤組成物であって、前記ヌクレオチドがｍＲＮＡを不活性化する物質に連結されている薬剤組成物。５０．請求項４９に記載の薬剤組成物であって、ｍＲＮＡを不活性化する前記物質がリボザイムである薬剤組成物。５１．請求項４９に記載の薬剤組成物であって、細胞膜を透過できる薬剤的に許容可能な前記疎水性キャリアが、選択された細胞タイプに特異的な輸送体に結合し、該選択された細胞タイプの細胞によって取り込まれる構造を具備している薬剤組成物。５２．天然に存在する基質のグリシン輸送体への結合をブロックするために有効な量の請求項４１の抗体と、薬剤的に許容可能なキャリアとを含有する薬剤組成物。５３．請求項１の核酸分子を具備するトランスジェニック非ヒト哺乳動物。５４．そのゲノムが請求項１の核酸分子を具備したトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、前記核酸分子は、前記グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに相補的で且つ前記グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡとハイブリダイズすることによりその翻訳を低下させるアンチセンスｍＲＮＡ中に転写されるように、前記ゲノム中に配置されているトランスジェニック非ヒト哺乳動物。５５．請求項５３のトランスジェエニック非ヒト哺乳動物であって、前記核酸分子が更に誘導プロモータを具備するトランスジェエニック非ヒト哺乳動物。５６．請求項５３に記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、前記核酸分子が更に組織特異的調節要素を具備するトランスジェニック非ヒト哺乳動物。５７．前記トランスジェニック非ヒト哺乳動物がマウスである、請求項５３に記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物。５８．ヒト・グリシン輸送体の発現レベルを変化させることの生理学的効果を決定する方法であって、そのヒト・グリシン輸送体の発現レベルが、ヒト・グリシン輸送体の発現を調節する誘導プロモータを使用することによって変化され得るトランスジェニック非ヒト哺乳動物を製造することを具備した方法。５９．ヒト・グリシン輸送体を種々のレベルで発現することの生理学的効果を決定する方法であって、夫々が異なった量のヒト・グリシン輸送体を発現する複数のトランスジェニック非ヒト哺乳動物からなるパネルを製造することを具備した方法。６０．ヒト・グリシン輸送体に特異的に結合できることが知られていない化合物が、ヒト・グリシン輸送体に特異的に結合できるか否かを決定するための方法であって、哺乳動物細胞内での発現に適用されるプラスミド（該プラスミドは更に、ヒト・グリシン輸送体を細胞表面に発現させるＤＮＡを含む）を有する哺乳動物細胞と前記化合物とを、ヒト・グリシン輸送体に結合することが知られているリガンドを結合される条件下で接触させることと、前記ヒト・グリシン輸送体に結合した化合物の存在を検出すること（結合した化合物の存在は、該化合物が前記ヒトグリシン輸送体に特異的に結合できることを示す）とを具備した方法。６１．請求項６０に記載の方法であって、前記哺乳動物細胞が非神経細胞である方法。６２．請求項６１に記載の方法であって、前記非神経細胞がＣＯＳ７細胞である方法。６３．細胞表面のヒト・グリシン輸送体と特異的に相互作用してこれに結合する薬剤を同定するために、化合物をスクリーニングする方法であって、哺乳動物細胞内での発現に適用されるプラスミド（該プラスミドは更に、細胞表面におけるヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子を含む）を具備する哺乳動物細胞を複数の化合物に接触させることと、前記哺乳動物細胞の表面に発現されたヒト・グリシン輸送体に結合する化合物を検出することと、これによってヒト・グリシン輸送体と特異的に相互作用してこれに結合する化合物を同定することとを具備する方法。６４．請求項６３に記載の方法であって、前記哺乳動物細胞が非神経細胞である方法。６５．請求項６４に記載の方法であって、前記非神経細胞がＣＯＳ７細胞である方法。６６．哺乳動物細胞表面のヒト・グリシン輸送体に結合できることが知られておらず、且つこのような結合を行なうことができ、又はこのような結合を行なうリガンドの結合を妨けることができる化合物を同定する方法であって、哺乳動物細胞内での発現に適用されるプラスミド（該プラスミドは更に、ヒト・グリシン輸送体を前記哺乳動物細胞の細胞表面に発現させるＤＮＡを含む）を有する哺乳動物細胞を前記化合物に接触させることと、該化合物がヒト・グリシン輸送体に結合し、又はそのような結合を行なうリガンドの結合を妨げるか否かを決定することと、これにより該化合物を、ヒト・グリシン輸送体と相互作用してこれに結合する化合物として、またはこのような結合を行なうリガンドによるグリシン受容体への結合を妨げる化合物として同定することを具備した方法。６７．請求項６６に記載の方法であって、前記哺乳動物細胞が非神経細胞である方法。６８．請求項６３の方法により同定された薬物と、薬剤的に許容され得るキャリアとを含有する薬剤組成物。６９．細胞表面グリシン輸送体の発現を検出する方法であって、細胞から全ｍＲＮＡを得ることと、こうして得られたｍＲＮＡを、ハイブリダイズ条件下で請求項１７の核酸プローブと接触させることと、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出すること（該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在は前記細胞表面グリシン輸送体の発現を示す）と、これにより前記細胞による前記グリシン輸送体の発現を検出することとを具備する方法。７０．患者の異常を治療する方法（前記異常はグリシン輸送体の発現を低下させることにより緩和される）であって、患者に対して、患者におけるグリシン輸送体の発現を低下させるために有効な量の請求項４８の薬剤組成物を投与することを具備した方法。７１．グリシン輸送体活性の過剰に関連する異常症状を治療する方法であって、患者に対して、患者におけるグリシン輸送体の発現を低下させるために有効な量の請求項４８の薬剤組成物を投与することを具備した方法。７２．請求項７１に記載の方法であって、前記異常症状が癲癇である方法。７３．請求項７１に記載の方法であって、前記異常症状がミオクローヌスである方法。７４．請求項７１に記載の方法であって、前記異常症状が痙攣性麻痺である方法。７５．請求項７１に記載の方法であって、前記異常症状が筋肉痙攣である方法。７６．請求項７１に記載の方法であって、前記異常症状が精神分裂病である方法。７７．請求項７１に記載の方法であって、前記異常症状が認識障害である方法。７８．哺乳類グリシン輸送体の発現を低下させることにより緩和される異常を治療する方法であって、患者に対して、天然に存在する基質の前記グリシン輸送体への結合をブロックするために有効な量の請求項５２の薬剤組成物を投与し、これにより哺乳類グリシン輸送体の過剰発現からもたらされる異常を緩和することを具備した方法。７９．グリシン輸送体活性の過剰に関連する異常症状を治療する方法であって、患者に対して、天然に存在する基質の前記グリシン輸送体への結合をブロックするために有効な量の請求項５２の薬剤組成物を投与することにより、前記異常症状を緩和することを具備した方法。８０．請求項７９に記載の方法であって、前記異常症状が癲癇である方法。８１．請求項７９に記載の方法であって、前記異常症状がミオクローヌスである方法。８２．請求項７９に記載の方法であって、前記異常症状が痙攣性麻痺である方法。８３．請求項７９に記載の方法であって、前記異常症状が筋肉痙攣である方法。８４．請求項７９に記載の方法であって、前記異常症状が精神分裂病である方法。８５．請求項７９に記載の方法であって、前記異常症状が認識障害である方法。８６．細胞の表面における哺乳類グリシン輸送体の存在を検出する方法であって、前記細胞と請求項４０の抗体とを、該抗体の前記輸送体への結合を可能とする条件下で接触させることと、該細胞に結合した前記抗体の存在を検出し、これにより前記細胞表面における哺乳類グリシン輸送体の存在を検出することとを具備する方法。８７．哺乳類グリシン輸送体の過剰発現からもたらされる異常を緩和することができる物質を同定するための方法であって、請求項５３のトランスジェニック非ヒト哺乳動物に物質を投与することと、哺乳類グリシン輸送体の過剰発現の結果として前記トランスジェニック非ヒト哺乳動物が示す身体的および行動的な異常を、前記物質が軽減するか否かを決定こととを具備する方法。８８．哺乳類グリシン輸送体の過剰発現からもたらされる異常を治療する方法であって、患者に対して、哺乳類グリシン輸送体の過剰発現によりもたらされる異常を緩和するのに有効な量の請求項４６の薬剤組成物を投与することを具備した方法。８９．哺乳類グリシン輸送体の過少発現からもたらされる異常を緩和することができる物質を同定するための方法であって、請求項５４のトランスジェニック非ヒト哺乳動物に物質を投与することと、哺乳類グリシン輸送体の過少発現の結果として前記トランスジェニック非ヒト哺乳動物が示す身体的および行動的な異常を、前記物質が軽減するか否かを決定こととを具備する方法。９０．哺乳類グリシン輸送体の過少発現からもたらされる異常を治療する方法であって、患者に対して、哺乳類グリシン輸送体の過少発現によりもたらされる異常を緩和するのに有効な量の請求項４７の薬剤組成物を投与することを具備した方法。９１．特定の哺乳類グリシン輸送体対立遺伝子の発現に伴う疾患の疾病素因を診断する方法であって、ａ）該疾患に履患している患者のＤＮＡを得ることと、ｂ）制限酵素のパネルで前記ＤＮＡの制限切断を行うことと、ｃ）得られたＤＮＡフラグメントをサイジングゲル上で電気泳動により分離することと、ｄ）得られたゲルを、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡに特異的にハイブリダイズすることができ、且つ検出マーカーでラベルされた核酸プローブに接触させることと、ｅ）検出マーカーでラベルされた哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡにハイブリダイズされている標識バンドを検出し、該疾患に履患した患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンを形成することと、ｆ）ステップａ〜ｅによる診断のために得られた、ＤＮＡを調製することと、ｇ）ステップｅで得られた前記疾患に履患している患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンと、ステップｆで診断のために得られたＤＮＡとを比較して、これらバターンが同一であるか又は異なっているかを決定することにより、パターンが同一であれば該疾患の疾病素因ありと診断することとを具備した方法。９２．請求項９１に記載の方法であって、特定の哺乳類グリシン輸送体対立遺伝子の発現に付随する疾病が診断される方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ボーデン、ローレンス・エーアメリカ合衆国、ニュージャージー州 07601、ハッケンサック、アパートメント３エー、プロスペクト・アビニュー 345 (72)発明者ブランチェック、テレサアメリカ合衆国、ニュージャージー州 07666、ティーネック、マーテンス・アビニュー 541 (72)発明者ハーティッグ、ポール・アールアメリカ合衆国、ニュージャージー州 08540、プリンストン、セイヤー・ドライブ 104 (72)発明者ウエインシャンク、リチャード・エルアメリカ合衆国、ニューヨーク州 10024、ニューヨーク、アパートメント２エー、ウエスト・エイティーセブンス・ストリート 302 【要約の続き】

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳類グリシン輸送体をコードする、単離された核酸分子。２．前記核酸分子がヒト・グリシン輸送体をコードする、請求項１に記載の核酸分子。３．前記核酸分子がＤＮＡ分子である、請求項１に記載の単離された核酸分子。４．前記ＤＮＡ分子がｃＤＮＡ分子である、請求項３に記載の単離されたＤＮＡ分子。５．前記ＤＮＡ分子がゲノムＤＮＡから誘導される、請求項３に記載のＤＮＡ分子。６．一以上のヌクレオチドにおいて、グリシン輸送体をコードする核酸分子の配列とは異なる核酸配列を有し、グリシン輸送体活性を有するタンパクをコードしない、単離された核酸分子。７．前記核酸分子がＤＮＡ分子である、請求項６に記載の核酸分子。８．前記ＤＮＡ分子がｃＤＮＡ分子である、請求項７に記載の核酸分子。９．請求項３に記載のＤＮＡ分子を具備するベクター。１０．プラスミドベクターである、請求項９に記載のベクター。１１．バクテリア細胞内での発現に適用される請求項９に記載のベクターであって、グリシン輸送体をコードする前記ＤＮＡのバクテリア細胞内での発現のために必要な調節因子を具備し、該調節因子は前記ＤＮＡに対してその発現を可能とするように位置付けられているベクター。１２．酵母細胞内での発現に適用される請求項９に記載のベクターであって、グリシン輸送体をコードする前記ＤＮＡの酵母細胞内での発現のために必要な調節因子を具備し、該調節因子は前記ＤＮＡに対してその発現を可能とするように位置付けられているベクター。１３．哺乳動物細胞内での発現に適用される請求項９に記載のベクターであって、グリシン輸送体をコードする前記ＤＮＡの哺乳動物細胞内での発現のために必要な調節因子を具備し、該調節因子は前記ＤＮＡに対してその発現を可能とするように位置付けられているベクター。１４．哺乳動物細胞内での発現に適用される請求項１０に記載のプラスミドであって、グリシン輸送体をコードする前記ＤＮＡに対してその発現を可能とするように位置付けられた、哺乳動物細胞内での前記ＤＮＡの発現のために必要な調節因子を具備したプラスミド。１５．ｐＳＶＬ−ｒＢ２０ａと命名された請求項１４に記載のプラスミド（ＡＴＣＣ受付番号第75132号）。１６．ｐ Bluescript−ｈＴＣ２７ａと命名された、請求項１４に記載のプラスミド（ＡＴＣＣ受付番号第号）。１７．請求項１０に記載のプラスミドを具備する哺乳動物細胞。１８．前記哺乳動物細胞がＣｏｓ７細胞である請求項１７に記載の哺乳動物細胞。１９．請求項１５に記載のプラスミドを具備するＣｏｓ７細胞。２０．哺乳類グリシン輸送体をコードする核酸分子の配列中に含まれる配列と特異的にハイブリダイズすることができる、少なくとも１５ヌクレオチドの核酸分子を具備した核酸プローブ。２１．ヒト・グリシン輸送体をコードする核酸分子の配列中に含まれる配列と特異的にハイブリダイズすることができる、少なくとも１５ヌクレオチドの核酸分子を具備した核酸プローブ。２２．前記核酸がＤＮＡである、請求項２０に記載の核酸プローブ。２３．請求項２０に従う核酸プローブの混合物であって、夫々のプローブは、所定の位置で互いに異なる配列を有している混合物。２４．哺乳類グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに特異的に結合できる配列を有し、該ｍＲＮＡの翻訳を妨害するアンチセンスオリゴヌクレオチド。２５．ヒト・グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに特異的に結合できる配列を有し、該ｍＲＮＡの翻訳を妨害するアンチセンスオリゴヌクレオチド。２６．ヌクレオチドの化学的類縁体を具備する請求項２４に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。２７．請求項２４に従うアンチセンスオリゴヌクレオチドの混合物であって、夫々のオリゴヌクレオチドは、所定の位置で互いに異なる配列を有している混合物。２８．哺乳類グリシン輸送体の発現を検出する方法であって、細胞または組織からＲＮＡを得ることと、こうして得られたＲＮＡを、ハイブリダイズ条件下において請求項２０の核酸プローブと接触させることと、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出すること（該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在は哺乳類グリシン輸送体の発現を示す）と、これにより前記哺乳類グリシン輸送体の発現を検出することとを具備する方法。２９．ヒト・グリシン輸送体の発現を検出する方法であって、細胞または組織からＲＮＡを得ることと、こうして得られたＲＮＡを、ハイブリダイズ条件下において請求項２１の核酸プローブと接触させることと、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出すること（該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在はヒト・グリシン輸送体の発現を示す）と、これによりヒト・グリシン輸送体の発現を検出することとを具備する方法。３０．in situハイブリダイゼーションにより細胞または組織における哺乳類グリシン輸送体の発現を検出する方法であって、前記細胞または組織を、ハイブリダイズ条件下において請求項２０の核酸プローブと接触させることと、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出すること（該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在は哺乳類グリシン輸送体の発現を示す）と、これにより哺乳類グリシン輸送体の発現を検出することとを具備する方法。３１．in situハイブリダイゼーションにより細胞または組織におけるヒト・グリシン輸送体の発現を検出する方法であって、前記細胞または組織を、ハイブリダイズ条件下において請求項２１の核酸プローブと接触させることと、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出すること（該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在はヒト・グリシン輸送体の発現を示す）と、これによりヒト・グリシン輸送体の発現を検出することとを具備する方法。３２．遺伝子ライブラリーからグリシン輸送体以外の輸送体をコードする遺伝子を単離する方法であって、前記ライブラリーをハイブリダイズ条件下で請求項２０のプローブと接触させることと、プローブがハイブリダイズする遺伝子を単離することとを具備する方法。３３．請求項３１に記載の方法であって、更に、前記ライブラリーを具備するＤＮＡを同時に、ハイブリダイズ条件下において、前記第一のプローブがハイブリダイズする遺伝子ＤＮＡの相補鎖ＤＮＡ配列にハイブリダイズできる配列を具備した第二の核酸プローブと接触させることと、両方のプローブがハイブリダイズした遺伝子配列を処理して該遺伝子配列の多重コピーを生成させることと、増幅された遺伝子配列を単離することと、単離された遺伝子配列をプローブとして用いることにより、増幅されたＤＮＡ配列がハイブリダイズする遺伝子を遺伝子ライブラリーから単離することとを具備した方法。３４．請求項３２または３３に記載の方法で単離された遺伝子。３５．合成遺伝子であって、請求項１の単離された核酸分子と、これに付着して前記合成遺伝子から転写されるＲＮＡ分子の数を増大させる少なくとも一つの調節因子とを具備する合成遺伝子。３６．合成遺伝子であって、請求項１の単離された核酸分子と、これに付着して前記合成遺伝子から転写されるＲＮＡ分子の数を減少させる少なくとも一つの調節因子とを具備する合成遺伝子。３７．単離された哺乳類グリシン輸送体タンパク。３８．前記哺乳類グリシン輸送体タンパクがヒト・グリシン輸送体である、請求項３７に記載の輸送体タンパク。３９．請求項３７の哺乳類グリシン輸送体を製造する方法であって、細胞に哺乳類グリシン輸送体の発現を誘導することと、得られた細胞から哺乳類グリシン輸送体を回収することとを具備した方法。４０．請求項３７の哺乳類グリシン輸送体タンパクを製造する方法であって、哺乳類グリシンをコードする核酸分子を適切なベクターに挿入することと、得られたベクターを適切なホスト細胞に挿入することと、得られた細胞により産生された哺乳類グリシン輸送体を回収することとを具備した方法。４１．請求項３８のヒト・グリシン輸送体を製造する方法であって、細胞にヒト・グリシン輸送体の発現を誘導することと、得られた細胞からヒト・グリシン輸送体を回収することとを具備した方法。４２．請求項３８のヒト・グリシン輸送体タンパクを製造する方法であって、ヒト・グリシンをコードする核酸分子を適切なベクターに挿入することと、得られたベクターを適切なホスト細胞に挿入することと、得られた細胞により産生された前記ヒト・グリシン輸送体を回収することとを具備した方法。４３．哺乳類グリシン輸送体もしくは該哺乳類グリシン輸送体のタンパクフラグメントに向けられた抗体。４４．ヒト・グリシン輸送体もしくは該ヒト・グリシン輸送体のタンパクフラグメントに向けられた抗体。４５．前記抗体がモノクローナル抗体である請求項４３に記載の抗体。４６．前記抗体がモノクローナル抗体である請求項４４に記載の抗体。４７．請求項４５に記載のモノクローナル抗体であって、前記抗体が哺乳類細胞表面グリシン輸送体のエピトープ（哺乳類グリシン輸送体の細胞表面エピトープのアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有する）に向けられたモノクロナル抗体。４８．請求項４６に記載のモノクローナル抗体であって、前記抗体がヒト・細胞表面グリシン輸送体のエピトープ（ヒト・グリシン輸送体の細胞表面エピトープのアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有する）に向けられたモノクロナル抗体。４９．ヒト・グリシン輸送体の過剰発現に起因した異常を緩和するのに効果的な物質の有効量と、薬剤的に許容可能なキャリアとを含有する薬剤組成物。５０．ヒト・グリシン輸送体の過少発現に起因した異常を緩和するのに効果的な物質の有効量と、薬剤的に許容可能なキャリアとを含有する薬剤組成物。５１．細胞膜を通過して細胞内で哺乳類グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡと特異的に結合し、その翻訳を阻害することにより哺乳類グリシン輸送体の発現を低下させるのに有効な量の請求項２５のオリゴヌクレオチドと、細胞膜を透過できる薬剤的に許容可能な疎水性キャリアとを含有する薬剤組成物。５２．請求項５１に記載の薬剤組成物であって、前記ヌクレオチドがｍＲＮＡを不活性化する物質に連結されている薬剤組成物。５３．請求項５２に記載の薬剤組成物であって、ｍＲＮＡを不活性化する物質がリボザイムである薬剤組成物。５４．請求項５２に記載の薬剤組成物であって、細胞膜を透過できる薬剤的に許容可能な疎水性キャリアが、選択された細胞タイプに特異的な輸送体に結合し、該選択された細胞タイプの細胞によって取り込まれる構造を具備している薬剤組成物。５５．天然に存在する基質がグリシン輸送体に結合するのをブロックするために有効な量の哺乳類グリシン輸送体に向けられた抗体と、薬剤的に許容可能なキャリアとを含有する薬剤組成物。５６．請求項１の核酸分子を具備するトランスジェニック非ヒト哺乳動物。５７．請求項６の核酸分子を具備するトランスジェニック非ヒト哺乳動物。５８．そのゲノムが請求項１の核酸分子を具備したトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、前記核酸分子は前記グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡに対して相補的なアンチセンスｍＲＮＡ中に転写されるように前記ゲノム中に配置されており、該アンチセンスｍＲＮＡは、前記グリシン輸送体をコードするｍＲＮＡとハイブリダイズすることによりその翻訳を低下させるトランスジェニック非ヒト哺乳動物。５９．請求項５６のトランスジェエニック非ヒト哺乳動物であって、前記核酸分子が更に誘導プロモータを具備するトランスジェエニック非ヒト哺乳動物。６０．請求項５６または５７に記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、前記核酸分子が更に組織特異的調節要素を具備するトランスジェニック非ヒト哺乳動物。６１．前記トランスジェニック非ヒト哺乳動物がマウスである、請求項５６に記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物。６２．ヒト・グリシン輸送体の発現レベルを変化させることの生理学的効果を決定する方法であって、ヒト・グリシン輸送体の発現を調節する誘導プロモータを使用することにより、そのヒト・グリシン輸送体の発現レベルが変化され得るトランスジェニック非ヒト哺乳動物を製造することを具備した方法。６３．ヒト・グリシン輸送体を種々のレベルで発現することの生理学的効果を決定する方法であって、夫々が異なった量のヒト・グリシン輸送体を発現する複数のトランスジェニック非ヒト哺乳動物からなるパネルを製造することを具備した方法。６４．ヒト・グリシン輸送体に特異的に結合できることが知られていない化合物が、ヒト・グリシン輸送体に特異的に結合できるか否かを決定するための方法であって、哺乳動物細胞内での発現に適用されるプラスミド（該プラスミドは更に、ヒト・グリシン輸送体を細胞表面に発現させるＤＮＡを含む）を有する哺乳動物細胞と前記物質とを、ヒト・グリシン輸送体に結合することが知られているリガンドが結合される条件下で接触させることと、前記ヒト・グリシン輸送体に結合した化合物の存在を検出すること（結合した化合物の存在は、該化合物が前記ヒトグリシン輸送体に特異的に結合できることを示す）とを具備した方法。６５．請求項６４に記載の方法であって、前記哺乳動物細胞が非神経細胞である方法。６６．請求項６５に記載の方法であって、前記非神経細胞がＣＯＳ７細胞である方法。６７．細胞表面のヒト・グリシン輸送体と特異的に相互作用してこれに結合する薬剤を同定するために、化合物をスクリーニングする方法であって、哺乳動物細胞内での発現に適用されるプラスミド（該プラスミドは更に、細胞表面におけるヒト・グリシン輸送体をコードするＤＮＡ分子を含む）を具備する哺乳動物細胞を複数の化合物に接触させることと、前記哺乳動物細胞の表面に発現されたヒト・グリシン輪送体に結合する薬剤を検出することと、これによってヒト・グリシン輸送体と特異的に相互作用してこれに結合する化合物を同定することとを具備する方法。６８．請求項６７に記載の方法であって、前記哺乳動物細胞が非神経細胞である方法。６９．請求項６８に記載の方法であって、前記非神経細胞がＣＯＳ７細胞である方法。７０．哺乳動物細胞表面のヒト・グリシン輸送体に結合できることが知られていない化合物あり、且つこのような結合を行ない、或いはこのような結合を行なうリガンドの結合を妨げることができる化合物を同定する方法であって、哺乳動物細胞内での発現に適用されるプラスミド（該プラスミドは更に、ヒト・グリシン輸送体を前記哺乳動物細胞の細胞表面に発現させるＤＮＡを含む）を有する哺乳動物細胞を前記化合物に接触させることと、該化合物がヒト・グリシン輸送体に結合し、又はそのような結合を行なうリガンドの結合を妨げるか否かを決定することとにより、該化合物を、ヒト・グリシン輸送体と相互作用してこれに結合する化合物として、またはこのような結合を行なうリガンドによるグリシン受容体への結合を妨げる化合物として同定することを具備した方法。７１．請求項７０に記載の方法であって、前記哺乳動物細胞が非神経細胞である方法。７２．請求項６７の方法により同定された薬剤と、薬剤的に許容され得るキャリアとを含有する薬剤組成物。７３．細胞表面グリシン輸送体の発現を検出する方法であって、細胞から全ｍＲＮＡを得ることと、こうして得られたｍＲＮＡを、ハイブリダイズ条件下で請求項２０の核酸プローブと接触させることと、該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出すること（該プローブにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在は細胞表面グリシン輸送体の発現を示す）と、これにより前記細胞による前記グリシン輸送体の発現を検出することとを具備する方法。７４．グリシン輸送体の発現を低下させることにより緩和される患者の異常を治療する方法であって、患者に対して、患者におけるグリシン輸送体の発現を低下させるために有効な量の請求項５１の薬剤組成物を投与することを具備した方法。７５．グリシン輸送体活性の過剰に関連する異常症状を治療する方法であって、患者に対して、患者におけるグリシン輸送体の発現を低下させるために有効な量の請求項５１の薬剤組成物を投与することを具備した方法。７６．請求項７５に記載の方法であって、前記異常症状が癲癇である方法。７７．請求項７５に記載の方法であって、前記異常症状がミオクローヌスである方法。７８．請求項７５に記載の方法であって、前記異常症状が痙攣性麻痺である方法。７９．請求項７５に記載の方法であって、前記異常症状が筋肉痙攣である方法。８０．請求項７５に記載の方法であって、前記異常症状が精神分裂病である方法。８１．請求項７５に記載の方法であって、前記異常症状が認識障害である方法。８２．哺乳類グリシン輸送体の発現を低下させることにより緩和される異常を治療する方法であって、患者に対して、天然に存在する基質の前記グリシン輸送体への結合をブロックするために有効な量の請求項５５の薬剤組成物を投与し、これにより哺乳類グリシン輸送体の過剰発現からもたらされる異常を緩和することを具備した方法。８３．グリシン輸送体活性の過剰に関連する異常症状を治療する方法であって、患者に対して、天然に存在する基質のグリシン輸送体への結合をブロックするために有効な量の請求項５５の薬剤組成物を投与することにより、前記異常症状を緩和することを具備した方法。８４．請求項８３に記載の方法であって、前記異常症状が癲癇である方法。８５．請求項８３に記載の方法であって、前記異常症状がミオクローヌスである方法。８６．請求項８３に記載の方法であって、前記異常症状が痙攣性麻痺である方法。８７．請求項８３に記載の方法であって、前記異常症状が筋肉痙攣である方法。８８．請求項８３に記載の方法であって、前記異常症状が精神分裂病である方法。８９．請求項８３に記載の方法であって、前記異常症状が認識障害である方法。９０．細胞の表面における哺乳類グリシン輸送体の存在を検出する方法であって、前記細胞と請求項４３の抗体とを、該抗体の前記輸送体への結合を可能とする条件下で接触させることと、該細胞に結合した前記抗体の存在を検出し、これにより前記細胞表面における哺乳類グリシン輸送体の存在を検出することとを具備する方法。９１．哺乳類グリシン輸送体の過剰発現からもたらされる異常を緩和することができる物質を同定するための方法であって、請求項５６のトランスジェニック非ヒト哺乳動物に物質を投与することと、哺乳類グリシン輸送体の過剰発現の結果として前記トランスジェニック非ヒト哺乳動物が示す身体的および行動的な異常を、前記物質が軽減するか否かを決定こととを具備する方法。９２．哺乳類グリシン輸送体の過剰発現からもたらされる異常を治療する方法であって、患者に対して、哺乳類グリシン輸送体の過剰発現によりもたらされる異常を緩和するのに有効な量の請求項４９の薬剤組成物を投与することを具備した方法。９３．哺乳類グリシン輸送体の過少発現からもたらされる異常を緩和することができる物質を同定するための方法であって、請求項５７または５８のトランスジェニック非ヒト哺乳動物に物質を投与することと、哺乳類グリシン輸送体の過少発現の結果として前記トランスジェニック非ヒト哺乳動物が示す身体的および行動的な異常を、前記物質が軽減するか否かを決定こととを具備する方法。９４．哺乳類グリシン輸送体の過少発現からもたらされる異常を治療する方法であって、患者に対して、哺乳類グリシン輸送体の過少発現によりもたらされる異常を緩和するのに有効な量の請求項５０の薬剤組成物を投与することを具備した方法。９５．特定の哺乳類グリシン輸送体対立遺伝子の発現に伴う疾患の疾病素因を診断する方法であって、ａ）該疾患に履患している患者のＤＮＡを得ることと、ｂ）制限酵素のパネルで前記ＤＮＡの制限切断を行うことと、ｃ）得られたＤＮＡフラグメントをサイジングゲル上で電気泳動により分離することと、ｄ）得られたゲルを、哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡに特異的にハイブリダイズすることができ、且つ検出マーカーでラベルされた核酸プローブに接触させることと、ｅ）検出マーカーでラベルされた哺乳類グリシン輸送体をコードするＤＮＡにハイブリダイズされている標識バンドを検出し、該疾患に履患した患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンを形成することと、ｆ）ステップａ〜ｅによる診断のために得られた、ＤＮＡを調製することと、ｇ）ステップｅで得られた前記疾患に履患している患者のＤＮＡに特異的な独特のバンドパターンと、ステップｆで診断のために得られたＤＮＡとを比較して、これらパターンが同一であるか又は異なっているかを決定することにより、パターンが同一であれば該疾患の疾病素因ありと診断することとを具備した方法。９６．請求項９５に記載の方法であって、特定の哺乳類グリシン輸送体対立遺伝子の発現に付随する疾病が診断される方法。