JP2002514438A - チトクロームｐ４５０基質としての７−アルコキシクマリン類 - Google Patents

チトクロームｐ４５０基質としての７−アルコキシクマリン類

Info

Publication number
JP2002514438A
JP2002514438A JP2000548501A JP2000548501A JP2002514438A JP 2002514438 A JP2002514438 A JP 2002514438A JP 2000548501 A JP2000548501 A JP 2000548501A JP 2000548501 A JP2000548501 A JP 2000548501A JP 2002514438 A JP2002514438 A JP 2002514438A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
compound
formula
cyp2d6
enzyme
assay
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2000548501A
Other languages
English (en)
Inventor
スティーブン・エドワード・クラーク
Original Assignee
スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー filed Critical スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー
Publication of JP2002514438A publication Critical patent/JP2002514438A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/06—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2
    • C07D311/08—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring
    • C07D311/16—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring substituted in position 7
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Luminescent Compositions (AREA)

Abstract

(57)【要約】 チトクロームＰ４５０基質としての７−アルコキシクマリン誘導体。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、クマリン誘導体、それらを製造する方法および酵素基質としてのそ
れらの使用に関する。
【０００２】 代謝作用による薬物相互作用のほとんどは、チトクロームＰ４５０酵素の阻害
によるものである。Ｐ４５０酵素が個々に関与する薬物相互作用はインビトロ方
法を用いて予測できる。典型的なインビトロＰ４５０酵素アッセイは、適当な基
質を酵素源と一緒にインキュベートすることを含む。慣用的には、時間のかかる
クロマトグラフィー方法が、これらのインキュベーションにおける代謝物の検出
に用いられている。最近になって、蛍光測定プレートリーダーの有用性により、
一般に酵素アッセイのハイスループットが容易になった。Ｐ４５０アッセイを蛍
光プレートリーダー技術に用いるためには、個々の酵素についての適当な蛍光生
成物を用いて基質を同定する必要がある。生体異物−代謝チトクロームＰ４５０
のうち、ＣＹＰ２Ｄ６は薬物の代謝に一般に関与するものの１つである。
【０００３】 ３−シアノ−７−エトキシクマリンは、ＣＹＰ２Ｄ６の阻害をスクリーニング
すると記載されている (Crespiら、Anal. Biochem., 1997, 248, 188-190)。他
のＣＹＰ２Ｄ６基質も記載されているが (Koymansら、Chem. Res. Toxicol., 19
92, 5, 211-219)、しかしながら、これらはハイスループットスクリーニングに
適する蛍光生成物を提供するものではない。
【０００４】 この度、ＣＹＰ２Ｄ６の改良された基質であり、ハイスループット阻害スクリ
ーニングアッセイを行うために有用である、特定の化合物が同定された。 本発明によれば、ＣＹＰ２Ｄ６酵素の阻害剤について試験するためのアッセイ
であって、酵素および式（Ｉ）：
【化４】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素またはＣ1-2アルキルであり、Ｒ3は、
Ｃ1-2アルキルである］ の化合物を、試験化合物と接触させ、酵素による式（Ｉ）の化合物のＯ−脱アル
キル化の阻害を測定することを含むアッセイが提供される。 好ましくは、Ｒ1は水素であり、Ｒ2はメチルである。 Ｒ3は、好ましくはメチルである。
【０００５】 一般に、試験化合物の不在下における式（Ｉ）の化合物のＯ−脱アルキル化の
速度は、所定の時点でのＯ−脱アルキル化度として知られている。アッセイは、
Ｏ−脱アルキル化の阻害について連続的にまたは特定の時点で試験してもよい。 ＣＹＰ２Ｄ６を用いて式（Ｉ）の化合物をＯ−脱アルキル化することにより、
式（ＩＩ）：
【化５】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は、式（Ｉ）ついて定義したものである。］ の定量が容易な蛍光生成物が得られ、これは、例えば、４０９ｎｍの励起波長お
よび４８５ｎｍの放射波長などの適当な励起波長および放射波長でスキャンする
ことができる。 アッセイは、溶液中または固体支持体を用いるかのいずれで行ってもよい。ア
ッセイを溶液中で行う場合、適当な溶媒には、メタノール、アセトニトリルおよ
びＤＭＳＯが包含される。
【０００６】 試験化合物を、基質の添加の前に酵素と予めインキュベートしてもよく、また
は別に、基質を同時に加えてもよい。酵素および基質の最終濃度は、アッセイを
行うための処理に適当な速度が達せられるように、計算する。所望により、反応
を、例えば酸または溶媒を加えることにより終了させてもよい。生成物を蛍光検
出のいずれかの慣用的なシステム、例えばマルチ−ウェルプレート／蛍光プレー
トリーダーを用いて分析してもよい。
【０００７】 式（Ｉ）の特定の化合物は新規であり、それゆえ、本発明のさらなる態様によ
れば、Ｒ1およびＲ2の少なくとも１つがメチルである上記に定義した式（Ｉ）の
化合物が提供される。 式（ＩＩ）の特定の化合物は新規であり、それゆえ、本発明のさらなる態様
によれば、Ｒ1がメチルであり、Ｒ2が水素またはエチルである上記に定義した式
（Ｉ）の化合物が提供される。
【０００８】 式（Ｉ）の化合物は、例えば、スキーム１において示されるような慣用的な方
法により製造してもよい。
【化６】 かくして、本発明のさらなる態様によれば、式（ＩＩＩ）：
【化７】 ［式中、Ｌは、例えばＢｒなどの脱離基であり、Ｒ3はＣ1-2アルキルである］ の化合物を、式（ＩＶ）： ＮＨＲ1Ｒ2 （ＩＶ） ［式中、Ｒ1およびＲ2は、式（Ｉ）における定義と同意義である；ただし、Ｒ1
およびＲ2の少なくとも１つはメチルである］ の化合物と反応させることを含む、式（Ｉ）の化合物の製造方法が提供される。 反応は、好ましくは、例えば炭酸カリウムなどの塩基の存在下で行う。
【０００９】 チトクロームＰ４５０酵素の阻害は、薬物／薬物の相互作用の機構に関するこ
とが多いため、本発明によるアッセイは、逆の薬物／薬物の相互作用を引き起こ
す可能性のある化合物を同定するのに特に有用である。それゆえ、該アッセイを
試験化合物の化学的修飾体と組み合わせて用い、試験化合物を医薬として使用し
うる可能性を増加させることができる。 かくして、本発明のさらなる態様によれば、化合物のＣＹＰ２Ｄ６酵素阻害剤
活性を減じる方法であって、上記したアッセイにおいてＣＹＰ２Ｄ６の阻害剤と
しての化合物を同定し、その後、ＣＹＰ２Ｄ６の阻害に関与すると思われる官能
部が除去されるか変更されている化学的に修飾したバージョンの試験化合物を製
造することを含む方法が提供され、この方法により新規な化合物が製造される。
【００１０】 本方法による試験化合物の化学的修飾を、当該分野で当業者に周知の技術を用
いて行うことができる。 本発明のこの態様により製造される新規化合物は医薬としての適用が見出され
る可能性がある。この方法により製造される化合物は、文献およびデータベース
検索を行うことで新規であると容易に同定されるであろう。かかる化合物の医薬
活性を、当該分野で当業者に周知の慣用の生物学的スクリーニング方法を用いて
容易に確かめることができる。 本発明を以下の実施例により説明する。
【００１１】 実施例１ ７−メトキシ−４−（メチルアミノメチル）クマリンの製造 テトラヒドロフラン中のメチルアミンの溶液（２Ｍ、１．１０ｍｌ）を、４−
ブロモメチル−７−メトキシクマリン（０．３０ｇ）、炭酸カリウム（０．５ｇ
）およびジクロロメタン（１０ｍｌ）の氷冷混合物に加えた。混合物を室温にて
２日間攪拌し、ついで、炭酸カリウムの水性溶液に加えた。有機相を水で洗浄し
、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、蒸発させた。残渣をシリカゲル上カラムクロマトグ
ラフィーにより精製し（溶出液 ジクロロメタン中１０％メタノール）、ついで
メタノールから結晶化し、標記化合物を白色固体として得た（０．１４ｇ）。 融点：１０９.０−１０９.５℃； Ｃ12Ｈ13ＮＯ3として：測定値（％）；Ｃ, 65.64；Ｈ, 5.93；Ｎ, 6.34：計算値
（％）Ｃ, 65.74；Ｈ, 5.98；Ｎ, 6.39；δH(ＣＤＣl3）： 2.54 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.90 (d, J = 1.1 Hz, 2H), 6.36 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.83 - 6.8
8 (m, 2H), 7.58 (d, J = 8.2 Hz, 1H); マススペクトル ｍ／ｚ ２２０（ＭＨ+）。
【００１２】 実施例２ ７−メトキシ−４−（ジメチルアミノメチル）クマリンの製造 ジメチルアミン塩酸塩（０．１８ｇ）、４−ブロモメチル−７−メトキシクマ
リン（０．３０ｇ）、炭酸カリウム（０．５ｇ）およびジクロロメタン（１０ｍ
ｌ）の混合物を室温にて２日間攪拌した。固体を濾別し、濾液を濃縮した。残渣
をシリカゲル上カラムクロマトグラフィーにより精製し（溶離剤 ジクロロメタ
ン中５％メタノール）、ついでメタノールから結晶化し、標記化合物を白色固体
として得た（０．１４５ｇ）。 融点：９７.０℃； δH(CDCl3): 2.31 (s, 6H), 3.50 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 6.31 (s, 1H), 6.82 - 6.87 (m, 2H), 7.76 (d, J = 8.6 Hz, 1H); マススペクトル ｍ／ｚ ２３４（ＭＨ+）。
【００１３】 アッセイ方法 材料： ５ｍＭ ７−メトキシ−４−（メチルアミノメチル）クマリン（すなわち、メタ
ノール中１．０９５ｍｇ／ｍＬ）−暗所で約−２０℃にて保存 ２％（ｗ／ｖ） ＮａＨＣＯ3−約４ーＣにて保存 ５０ｍＭ リン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．４ コファクター溶液：１ｍＬの２％（ｗ／ｖ） ＮａＨＣＯ3に付き、 約１．７ｍｇ ＮＡＤＰ、一ナトリウム塩 約７．８ｍｇ グルコース−６−ホスフェート、一ナトリウム塩 約６ユニット グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、タイプＶＩ
Ｉ（Ｂａｋｅｒｓ Ｙｅａｓｔより） のコファクター溶液を調製した。
【００１４】 方法： １）インキュベートあたり、１ｕＬ（５ｍＭ）の７−メトキシ−４−（メチルア
ミノメチル）クマリン、５ｕＬ（５０ｕｇ）のＣＹＰ２Ｄ６ミクロソームタンパ
ク質および２１４ｕＬのバッファーを混合し、最終濃度が２０ｕＭの７−メトキ
シ−４−（メチルアミノメチル）クマリンおよび２００ｕｇ／ｍＬのタンパク質
を得る。 ２）９６−ウェルプレートの各ウェルに、２２０ｕＬのインキュベーション混合
物および５ｕＬの試験化合物（または対照ウェル用に５ｕＬの適当な溶媒−メタ
ノール、アセトニトリルまたはＤＭＳＯを用いてもよい）を加える。 ３）プレートリーダー中にてマルチ−ウェルプレートを３７℃にて５分間プレイ
ンキュベートする。コファクター溶液を３７℃にて５分間、前以って加温する。
４）各ウェルに２５ｕＬのコファクター溶液を加え、４０９ｎｍの励起波長およ
び８０ゲイン（a gain of ８０）の４８５ｎｍの放射波長でスキャンする。１分
間隔にて１０サイクルスキャンする。
【００１５】 結果 ＣＹＰ２Ｄ６基質としての７−メトキシ−４−（メチルアミノメチル）クマリ
ンの確認を、診断的なＣＹＰ２Ｄ６阻害剤であるキニジンを用いて行った (Otto
nら、J. Pharm. Expt. TheＲ1988, 247, 242-247)。キニジンを用い、７−メト
キシ−４−（メチルアミノメチル）クマリンの代謝（Ｏ−脱アルキル化）が、１
７ｎＭのＩＣ50（典型的な他のよく解析されたＣＹＰ２Ｄ６基質の阻害値）で阻
害された（図１）。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ７−メトキシ−４−（メチルアミノメチル）クマリン代謝のキニ
ジンによる阻害。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 2G045 AA28 DA20 FA29 FB01 FB06 JA20 4B063 QA18 QQ24 QQ95 QR41 QR57 QR58 QX02 4C062 EE27

Claims (10)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ＣＹＰ２Ｄ６酵素の阻害剤について試験するためのアッセイ
    であって、酵素および式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素またはＣ1-2アルキルであり、Ｒ3は、
    Ｃ1-2アルキルである］ で示される化合物を、試験化合物と接触させ、酵素による式（Ｉ）の化合物のＯ
    −脱アルキル化の阻害を測定することを含むアッセイ。
  2. 【請求項２】 酵素による式（Ｉ）の化合物のＯ−脱アルキル化の阻害を、
    式（ＩＩ）： 【化２】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は、請求項１における定義と同意義である］ で示される化合物を蛍光検出により定量することにより測定する請求項１記載の
    アッセイ。
  3. 【請求項３】 ４０９ｎｍの励起波長および４８５ｎｍの放射波長をスキャ
    ンすることにより式（ＩＩ）の化合物を定量する請求項２記載のアッセイ。
  4. 【請求項４】 Ｒ1が水素であり、Ｒ2がメチルである先行するいずれか１つ
    に記載のアッセイ。
  5. 【請求項５】 Ｒ3がメチルである先行するいずれか１つに記載のアッセイ
    。
  6. 【請求項６】 Ｒ1およびＲ2の少なくとも１つがメチルである請求項１にお
    いて定義した式（Ｉ）の化合物。
  7. 【請求項７】 Ｒ1がメチルであり、Ｒ2が水素またはエチルである請求項２
    において定義した式（ＩＩ）の化合物。
  8. 【請求項８】 式（ＩＩＩ）： 【化３】 ［式中、Ｌは脱離基であり、Ｒ3はＣ1-2アルキルである］ で示される化合物を、式（ＩＶ）： ＮＨＲ1Ｒ2 （ＩＶ） ［式中、Ｒ1およびＲ2は、請求項６における定義と同意義である］ で示される化合物と反応させることを含む、請求項６において定義した式（Ｉ）
    の化合物の製造方法。
  9. 【請求項９】 化合物のＣＹＰ２Ｄ６酵素阻害剤活性を減じる方法であって
    、請求項１〜５のいずれか１つに記載のアッセイにおいてＣＹＰ２Ｄ６の阻害剤
    として化合物を同定し、その後、ＣＹＰ２Ｄ６阻害に関与していると考えられる
    官能部が除去されるか変更されている化学的に修飾したバージョンの試験化合物
    を製造することを含む方法。
  10. 【請求項１０】 請求項９の方法にしたがって製造された新規化合物。
JP2000548501A 1998-05-08 1999-04-28 チトクロームｐ４５０基質としての７−アルコキシクマリン類 Pending JP2002514438A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9810016.7 1998-05-08
GBGB9810016.7A GB9810016D0 (en) 1998-05-08 1998-05-08 Compounds
PCT/EP1999/003032 WO1999058710A1 (en) 1998-05-08 1999-04-28 7-alkoxycoumarins as cytochrome p450 substrates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2002514438A true JP2002514438A (ja) 2002-05-21

Family

ID=27772877

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2000548501A Pending JP2002514438A (ja) 1998-05-08 1999-04-28 チトクロームｐ４５０基質としての７−アルコキシクマリン類

Country Status (8)

Country Link
US (1) US6617124B1 (ja)
EP (1) EP1075539B1 (ja)
JP (1) JP2002514438A (ja)
AT (1) ATE403741T1 (ja)
DE (1) DE69939257D1 (ja)
ES (1) ES2312207T3 (ja)
GB (1) GB9810016D0 (ja)
WO (1) WO1999058710A1 (ja)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6420130B1 (en) 1998-12-14 2002-07-16 Aurora Biosciences Corporation Optical molecular sensors for cytochrome P450 activity
US6514687B1 (en) 1998-12-14 2003-02-04 Vertex Pharmaceuticals (San Diego), Llc Optical molecular sensors for cytochrome P450 activity
US6143492A (en) * 1998-12-14 2000-11-07 Aurora Biosciences Corporation Optical molecular sensors for cytochrome P450 activity
DE69907962T2 (de) * 1998-12-14 2004-05-19 Vertex Pharmaceuticals (San Diego) Llc, San Diego Optische molekularsensoren für cytochrome p-450 aktivität
EP1210342A1 (en) 1999-08-19 2002-06-05 Gentest Corporation The use of fluorescein aryl ethers in high throughput cytochrome p450 inhibition assays
US6207404B1 (en) 1999-09-30 2001-03-27 Gentest Corporation Coumarin-based CYP3A fluorescent assay reagents
US7056654B2 (en) * 1999-12-13 2006-06-06 Smithkline Beecham Corporation Screening assay for inhibitors of human cytochrome P-450
WO2001044494A2 (en) * 1999-12-13 2001-06-21 Smithkline Beecham P.L.C. P450 enzyme substrate
AU2001271985A1 (en) * 2000-07-12 2002-01-21 American Home Products Corporation Method for testing for inhibition of drug-metabolizing cytochrome p450 isozymes
CN115023222A (zh) * 2019-10-25 2022-09-06 J·夸克 神经系统病症的治疗

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE734121A (ja) * 1968-06-14 1969-11-17

Also Published As

Publication number Publication date
EP1075539B1 (en) 2008-08-06
ES2312207T3 (es) 2009-02-16
ATE403741T1 (de) 2008-08-15
WO1999058710A1 (en) 1999-11-18
EP1075539A1 (en) 2001-02-14
US6617124B1 (en) 2003-09-09
DE69939257D1 (de) 2008-09-18
GB9810016D0 (en) 1998-07-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2002514438A (ja) チトクロームｐ４５０基質としての７−アルコキシクマリン類
JPH03500367A (ja) 酵素制御型放出システム
US6031094A (en) Beta-lactam substrates and uses thereof
Okada et al. Detection of esterase activity by chromogenic and fluorogenic probe based on an O-nitrobenzoxadiazole (O-NBD) unit
JP3648763B2 (ja) ウミホタルルシフェリン誘導体および糖加水分解酵素の定量方法
CN113004220B (zh) 一种酯酶检测荧光探针、制备方法及应用
JP2009504177A (ja) 生物学的に活性な血清パラオキソナーゼのレベルを決定するための方法および組成物
EP1095032B1 (en) Reagents for cyp2d fluorescent assay
US6756209B1 (en) 7-Alkoxycoumarins as CYP2C9 substrates and activity assay
JP4422346B2 (ja) Ｃｙｐ３ａ４の基質としてのレゾルフィン誘導体
EP1019531A1 (en) A method to assay enzymatic covalent bond formation and cleavage
EP1307586B1 (en) Enzyme substrate
CA2318298A1 (en) 7-alkoxycoumarins as cytochrome p450 substrates
US20030077686A1 (en) Enzyme substrate
WO2001044495A2 (en) Diethoxyfluorescein as indicator for cytochrome p450
WO2001044494A2 (en) P450 enzyme substrate
Samala et al. Investigating structure–activity relationship
JPH09136883A (ja) ベンゾフラン誘導体及び蛍光標識化剤
TW201229027A (en) Salicylic acid derivates with fluorophores and method of making and using the same

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20060407

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20090203

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20090714