JP2002514081A

JP2002514081A - ヒト・リゾホスホリパーゼ

Info

Publication number: JP2002514081A
Application number: JP54740798A
Authority: JP
Inventors: ヒルマン、ジェニファー・エル; シャー、パルビ; マリー、リン・イー
Original assignee: Incyte Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Incyte Corp
Priority date: 1997-04-29
Filing date: 1998-04-29
Publication date: 2002-05-14
Also published as: CA2288073A1; AU7172098A; US5965423A; EP0979289A1; US6093561A; WO1998049319A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、ヒト・リゾホスホリパーゼ（ＮＨＬＰ）及びＮＨＬＰを同定しコードするポリヌクレオチドを提供する。また本発明は、発現ベクター、宿主細胞、抗体、アゴニスト、及びアンタゴニストを提供する。また本発明は、ＮＨＬＰの発現に関連する疾患の治療又は予防方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】ヒト・リゾホスホリパーゼ技術分野本発明は、ヒト・リゾホスホリパーゼの核酸及びアミノ酸配列及び細胞増殖、炎症、及び免疫反応に関連する疾患の診断、予防、及び治療におけるこれらの配列の使用に関するものである。また、本出願は、１９９７年４月２９日出願の係属中の米国特許出願第０８／８４４，１２０号の一部継続出願である。背景技術リゾホスホリパーゼ（ＬＰＬ）は、種々のアイソフォームで生ずる、幅広く分布する酵素である。これらのアイソフォームは、分子量、代謝される基質、及び活性に必要な最適ｐＨが様々に異なり、また細胞内脂質の活性を調節する。約１５〜３０ｋＤの小形のアイソフォームは加水分解酵素として機能し、６０ｋＤを越える大形のアイソフォームはアシル基転移酵素及び加水分解酵素の２つの機能を果たす。ＬＰＬは、リゾホスファチジルコリンを加水分解して飽和脂肪酸及びグリセロ−３−ホスホコリンを作り出し、またＬＰＬは、アシルカルニチン、アラキドン酸、及びホスファチジン酸のような脂質因子によって調節される。 Sugimoto,H.等（1996;J.Biol.Chem.271:7705-7711）はラットの肝臓から単量体の２４ｋＤのＬＰＬを単離した。この単量体ＬＰＬは、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルセリン、及び１−オレイオール−２−アセチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリンをｐＨ６〜８．０で加水分解した。１−パルミトイル−グリセロー３−ホスホコリンのＬＰＬによる加水分解を測定するアッセイにおいて、基質依存性曲線はＳ字形となり、酵素はｐＨ５．５〜９．０で活性であった。またこの活性はＣａ²⁺、Ｍｇ²⁺、又はＥＤＴＡの影響を受けなかった。Ｋ_m 及びＶ_maxは、それぞれ０．１７ｍＭ及び１．５５μＭ／分／ｍｇと計算された。このＬＰＬのｃＤＮＡが単離され、類推されたアミノ酸配列は、保存されたＧＸＳＸＧモチーフを有し、シュードモナス−フルオレッセンス（Pseudomonas fl uorescence ）及びスピルリナ−プラテンシス（Spirulina platensis）由来のエステル分解酵素に対する類似性を示した。ＬＰＬをコードする転写物は、脾臓、心臓、脳、肺、胃、精巣、及び肝臓から単離された。実験の結果から、ＨＬ−６０（骨髄性白血病）細胞系をＤＭＳＯ処理することによって、顆粒球分化が誘導され、２４ｋＤのＬＰＬの産生量が３倍増加し、またこのことはアラキドン酸の放出とも関連を有していることが分かった。ヒトの組織におけるＬＰＬの役割について様々な研究調査がなされてきた。リゾホスファチジルコリンは、細胞膜の中に形成されるか、或いはその細胞膜の中に入ってくると溶解する。Selle,H.等（1993;Eur.J.Biochem.212:411-416）は、赤血球膜におけるリゾホスファチジルコリンの加水分解におけるＬＰＬの役割を特性化した。Endresen,M.J.等（(1993)Scand.J.Clin.Invest.53:733-739）は、子癇前の女性の血清への遊離脂肪酸の放出量の上昇は、ＬＰＬによるリゾホスファチジルコリンの加水分解に起因することを報告した。腎臓の研究において、ＬＰＬが、シクロスポリンＡの細胞毒性及び細胞溶解性効果からＮＡ⁺、Ｋ⁺−ＡＴＰアーゼを保護することが分かった（Anderson,R.等（1994）Toxicol.Appl.Phar macol.125:176-183.）。ヒト・リゾホスホリパーゼ及びそれをコードするポリヌクレオチドの発見は、細胞増殖、炎症、及び免疫反応に関連する疾患の診断、予防、及び治療において役立つ新たな物質を提供することにより、当分野における必要性を満たすものである。発明の要約本発明は、配列番号：１又は配列番号：３のアミノ酸配列を含む実質的に精製されたポリペプチドを提供する。更に配列番号：３は配列番号：１の有意な延長（extension）である。また本発明は、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列と９０％以上のアミノ酸配列同一性を有する実質的に精製された変異体を提供する。また本発明は、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片の配列を含むポリペプチドをコードする単離され精製されたポリヌクレオチドを提供する。また本発明は、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと９０％以上のポリヌクレオチド配列同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチド変異体を含む。また本発明は、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと厳密な条件の下でハイブリダイズする単離され精製されたポリヌクレオチドや、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに相補的な単離され精製されたポリヌクレオチドを提供する。また本発明は、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：２の断片、又は配列番号：４の断片のポリヌクレオチド配列を含む単離され精製されたポリヌクレオチド、及び配列番号：２、配列番号：４、配列番号：２の断片、又は配列番号：４の断片のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドと９０％以上のポリヌクレオチド配列同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチド変異体を提供する。また本発明は、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：２の断片、又は配列番号：４の断片のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドに相補的な配列を有する単離され精製されたポリヌクレオチドを提供する。更に本発明は、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片の配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの少なくとも断片を含む発現ベクターを提供する。別の態様では、この発現ベクターは宿主細胞内に含められる。また本発明は、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を含むポリペプチドの製造方法であって、（ａ）前記ポリペプチドの発現に適した条件の下で、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの少なくとも断片を含む発現ベクターを含む宿主細胞を培養する過程と、（ｂ）前記宿主細胞の培地から前記ポリペプチドを回収する過程とを含むことを特徴とする配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を含むポリペプチドの製造方法を提供する。また本発明は、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片の配列を有する実質的に精製されたポリペプチドを、適切な医薬用担体と共に含む医薬品組成物を提供する。更に本発明は、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片の配列を含むポリペプチドに結合する精製された抗体及び前記ポリペプチドの精製されたアゴニスト及び精製されたアンタゴニストを包含する。また本発明は、細胞増殖の障害の治療又は予防方法であって、そのような治療が必要な患者に、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を有するポリペプチドのアンタゴニストを有効な量投与する過程を含む細胞増殖の障害の治療又は予防方法を提供する。また本発明は、炎症の治療又は予防方法であって、そのような治療が必要な患者に、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を有するポリペプチドのアンタゴニストを有効な量投与する過程を含む炎症の治療又は予防方法を提供する。また本発明は、免疫反応の障害の治療又は予防方法であって、そのような治療が必要な患者に、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を有するポリペプチドのアンタゴニストを有効な量投与する過程を含む免疫反応の障害の治療又は予防方法を提供する。また本発明は、生物学的サンプルにおける配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの検出方法であって、（ａ）配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの相補配列と、前記生物学的サンプルの核酸材料の少なくとも１つとをハイブリダイズさせ、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程と、（ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程とを含むことを特徴とし、前記ハイブリダイゼーション複合体の存在が、前記生物学的サンプルにおける配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの存在と相関性を有することを特徴とする生物学的サンプルにおける配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの検出方法を提供する。或る態様では、前記生物学的サンプルの核酸を、ハイブリダイゼーション過程の前にＰＣＲ法により増幅する。図面の簡単な説明第１Ａ図及び第ＩＢ図はＮＨＬＰのアミノ酸配列（配列番号：１）及び核酸配列（配列番号：２）を示す。第２Ａ図、第２Ｂ図、第２Ｃ図、及び第２Ｄ図は、ＮＨＬＰの延長されたアミノ酸配列（配列番号：３）及び延長された核酸配列(配列番号：４)を示す。この配列アライメントは、MacDNASIS PRO^TMソフトウェア（Hitachi Software Engine ering Co.,Ltd.,San Bruno,CA）を用いて作成した。第３Ａ図及び第３Ｂ図は、ＮＨＬＰ（配列番号：１及び配列番号：３）及びラットＬＰＬ（GI 1552244；配列番号：５）の間のアミノ酸配列アライメントを示す。配列アライメントは、LASERGENE^TMソフトウェア（DNASTAR Inc,Madison WI ）のマルチシーケンスアライメントプログラムを用いて作成した。発明の実施の形態本発明のタンパク質、核酸配列、及び方法について説明する前に、本発明は、ここに開示した特定の方法論、プロトコル、細胞系、ベクター、及び試薬に限定されず、その実施形態を変えて実施できることを理解されたい。また、ここで用いられる用語法は、特定の実施例のみを説明する目的で用いられたものであり、請求の範囲のみによって限定される本発明の範囲を限定することを意図したものではないということも理解されたい。本明細書及び請求の範囲において、単数を表す「１つの（或る）」及び「その」と形容されたものは、前後関係でそうでないことが明らかである場合以外は、複数の意味も含んでいることに注意しなければならない。従って、例えば「或る宿主細胞」なる表記が表すものには、複数のそのような宿主細胞が含まれ、「或る抗体」なる表記は、１またはそれ以上の抗体及び当業者に周知のその等価物等も表している。本明細書における全ての科学技術専門用語は、別の意味で定義されていない場合には、本発明の属する技術分野の専門家に一般に理解されるのと同じ意味を有する。ここに説明したものと類似のまたは等価な方法や材料を本発明の実施や試験において用いることができるが、好適な方法、装置、及び材料はここに説明されている。本明細書に記載された全ての文献は、本発明の関連において用いられ得る文献で報告された細胞系、ベクター、及び方法論を説明し開示する目的で引用されたものであり、この引用により本明細書と一体にされる。この引用の記載は、本発明には許容されない、従来発明によって先行開示されたそのような開示内容に先行することを許すものと解釈されるべきものではない。定義本明細書において、「ＮＨＬＰ」は、任意の種、特にウシ、ヒツジ、ブタ、マウス、ウマ、及び好ましくはヒトを含む哺乳類から得られる、天然の、合成の、半合成の、又は組換え体を起源とする実質的に精製されたＮＨＬＰのアミノ酸配列である。本明細書において、用語「アゴニスト」は、ＮＨＬＰに結合したとき、ＮＨＬＰの効果の持続期間を長くする、つまり延長するような分子である。アゴニストには、ＮＨＬＰに結合し、その効果を変調するタンパク質、核酸、糖質や、任意の他の分子が含まれ得る。本明細書において「アレル」或いは「アレル配列」とは、ＮＨＬＰをコードする遺伝子の対立形である。アレルは核酸配列における少なくとも一ヶ所の変化によって生じ、変異したｍＲＮＡ或いはポリペプチドを生成するが、そのｍＲＮＡ或いはポリペプチドの構造或いは機能は、変わる場合もあれば変わらない場合もある。遺伝子によっては、アレル形が存在しないもの、１つ存在するもの、或いは多数存在するものがある。一般にアレルを生じる変異はアミノ酸の自然な欠失、付加並びに置換に起因する。このタイプの変化はそれぞれ単独で、或いは他の変化と同時に、与えられた配列内で１又は２回以上生じ得る。本明細書において、ＮＨＬＰをコードする「変異」核酸配列は、欠失、挿入並びに異なるヌクレオチドによる置換を含み、結果的に同一のＮＨＬＰ、または機能的に等価のＮＨＬＰポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとなるものである。この定義には、ＭＨＬＰをコードするポリヌクレオチド配列の正常な染色体上の遺伝子座以外の位置における、不適切な、つまり予期しないアレルへのハイブリダイゼーション、及びＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチドの特定のオリゴヌクレオチドプローブを利用して容易に検出可能な又は検出が困難な多形性が含まれている。コードされたタンパク質も同様に変異され得、サイレント変化を生ずるアミノ酸残基の欠失、挿入並びに置換を含み、結果的に機能的に等価なＮＨＬＰとなる。意図的な（deliberate）アミノ酸置換は、ＮＨＬＰの生物学的活性が保持される限りにおいて、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性並びにまた両親媒性についての類似性に基づいてなされ得る。例えば負に荷電したアミノ酸にはアスパラギン酸及びグルタミン酸が含まれ、正に荷電したアミノ酸にはリジン及びアルギニンが含まれ、近い親水性値を持つ荷電していない極性頭基を有するアミノ酸には、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニン並びにチロシンが含まれる。本明細書において「アミノ酸配列」は、オリゴペプチド、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の配列及びその断片であり、自然発生又は合成の分子である。ＮＨＬＰの断片は、好ましくは約５〜約１５のアミノ酸からなる長さを有し、ＮＨＬＰの生物学的活性又は免疫学的活性を保持しているものである。ここで「アミノ酸配列」は、自然発生タンパク質分子のアミノ酸配列を指すものとして説明されているが、「アミノ酸配列」や類似の用語、例えば「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、アミノ酸配列を、説明されるタンパク質分子に関連する完全で元のままのアミノ酸配列に限定する意味で用いられてるのではない。本明細書において「増幅」は、核酸配列の更なる複製物を生成することであり、通常は当業者に周知のポリメラーゼ連鎖反応（PCR）技術を用いて行われる（D ieffenbach,C.W.及びG.S.Dveksler(1995)PCR Primer.a Laboratory Manual，Col d Spring Harbor Press,Plainview,NY）。本明細書において、用語「アンタゴニスト」は、ＮＨＬＰに結合したとき、ＮＨＬＰの生物学的又は免疫学的活性の作用の大きさを低下または持続時間を短くする分子である。アンタゴニストには、ＮＨＬＰの作用を低下させるタンパク質、核酸、糖質や、任意の他の分子が含まれ得る。本明細書において、用語「抗体」は、そのままの抗体分子及び、例えば抗原決定基と結合し得るFa、F(ab')₂、及びFvのようなその断片である。ＮＨＬＰポリペプチドに結合する抗体は、そのままのポリペプチド、或いは免疫化する抗原としての目的の小型のペプチドを含む断片を用いて調製することができる。動物（例えばマウス、ラット、又はウサギ）を免疫するのに用いられるポリペプチドまたはペプチドは、ＲＮＡの翻訳に由来するもの、又は化学的合成物を起源とするものであり得、必要ならば担体タンパク質と結合することができる。ペプチドに化学的に結合する、一般に用いられる担体には、ウシ血清アルブミン及びサイログロブリン、及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）が含まれる。次にこの結合したペプチドを用いて動物（例えばマウス、ラット、またはウサギ）を免疫する。本明細書において、用語「抗原決定基」は、特定の抗体と接触する分子の断片（即ちエピトープ）である。タンパク質またはタンパク質の断片を用いてホストの動物を免疫すると、このタンパク質の種々の領域が、抗原決定基（該タンパク質上の所定の領域または三次元構造）に特異的に結合する抗体の産生を誘発し得る。抗原決定基は、抗体への結合について、そのままの抗原（即ち免疫反応を引き出すために用いられる免疫原）と競合し得る。本明細書において、用語「アンチセンス」は、特定の核酸配列に対して相補的な核酸配列を含む任意の組成物である。「アンチセンス鎖」は、「センス」鎖に対して相補的な核酸鎖の意味で用いられる。アンチセンス分子は、相補鎖の合成が可能なウイルスプロモータに、目的の遺伝子を逆方向に結合することによる合成を含む任意の方法で作り出すことができる。相補的ヌクレオチドは、ひとたび細胞内に導入されると、この細胞によって作られた天然の配列と結合して二重鎖を形成し、次にこれらの二重鎖は更なる転写や翻訳を阻害する。「ネガティブ」なる表現はアンチセンス鎖の意味で用いられ、「ポジティブ」はセンス鎖の意味で用いられることがある。本明細書において、用語「生物学的に活性」は、自然発生の分子の構造的機能、調節機能、又は生化学的機能を有するタンパク質である。同様に「免疫学的に活性」は、天然の、組換え体の、又は合成のＮＨＬＰ、若しくはその任意のオリゴペプチドが適当な動物や細胞における特定の免疫応答を誘発し、特定の抗体に結合する能力である。本明細書において、用語「相補的」または「相補性」は、許容的な塩及び温度の条件の下での塩基対によるポリヌクレオチド同士の自然の結合をさす。例えば、配列「Ａ−Ｇ−Ｔ」は相補的配列「Ｔ−Ｃ−Ａ」に結合する。２つの二本鎖分子間の相補性は、核酸の幾つかのみが結合している「部分的」なものであるか、若しくは一本鎖分子間に完全な相補性が存在する場合は完全に相補的であり得る。核酸鎖同士の相補性の程度は、核酸鎖同士のハイブリダイゼーションの効率及び強度に有意な影響を与える。このことは、核酸鎖同士の結合によって左右される増幅反応において特に重要である。本明細書において「所定のポリヌクレオチド配列を含む組成物」とは、広く所定のポリヌクレオチド配列を含む任意の物質をさす。この組成物は、乾燥した製剤又は水溶液を含み得る。ＮＨＬＰ（配列番号：１）をコードするポリヌクレオチド配列又はその断片（例えば配列番号：２又はその断片）を含む組成物は、ハイブリダイゼーションプローブとして用いることができる。このプローブは凍結乾燥した形態で保存することができ、糖質のような安定化剤と結合させることができる。ハイブリダイゼーションにおいて、このプローブは、塩（例えばＮａＣｌ）、界面活性剤（例えばＳＤＳ）及び他の物質（例えばデンハート液、乾燥ミルク、サケの精子ＤＮＡ等）に展開することができる。本明細書において「コンセンサス配列」は、不要な塩基を分離するために再度シークエンシングされた核酸配列か、XL-PCR^TM(Perkin Elmer,Norwalk,CT)を用いて５’方向及び／または３’方向に延長されて、再度シークエンシングされた核酸配列か、GELVIEW^TMFragment Assembly system （GCG,Madison WI）を用いて２以上のインサイト社クローンの重複した配列を元に組み合わせて構成された核酸配列か、若しくは延長と組み合わせの双方によって形成された核酸配列の何れかである。本明細書において、「ポリヌクレオチドの発現と相関性を有する」なる表現は、ノーザン解析ハイブリダイゼーションアッセイにより、配列番号：２に類似なリボ核酸の存在が検出されることが、サンプル内のＮＨＬＰをコードするｍＲＮＡの存在を表しており、従って該タンパク質をコードする遺伝子からの転写物の発現と相関性を有しているということを表している。本明細書において「欠失」は、１または２以上のヌクレオチド若しくはアミノ酸残基が欠ける、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における変化である。本明細書において、用語「誘導体」は、ＮＨＬＰ、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチド配列、又はＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチド配列に相補的なポリヌクレオチド配列を化学的に修飾したものを意味する。ポリヌクレオチド配列の化学的修飾の例には、水素からアルキル基、アシル基、又はアミノ基への置換がある。誘導体ポリヌクレオチドは、未修飾の分子の生物学的又は免疫学的機能の少なくとも一つを保持しているポリペプチドをコードする。誘導体ポリペプチドは、グリコシル化、ポリエチレングリコール化（PEGylation）、又は任意の類似のプロセスによって修飾された、元のポリペプチドの生物学的又は免疫学的機能の少なくとも一つを保持するポリペプチドである。本明細書において、用語「相同性」は、相補性の程度である。部分的な相同性と、完全な相同性（即ち同一性）の場合があり得る。部分的に相補的な配列は、同一の配列が標的の核酸とハイブリダイズするのを少なくとも部分的に阻害するものであり、これを機能的な用語「実質的に相同な」を用いて表す。完全に相補的な配列と標的配列とのハイブリダイゼーションの阻害は、低い厳密性の条件の下で、ハイブリダイゼーションアッセイ（サザンブロット法またはノーザンブロット法、溶液ハイブリダイゼーション等）を用いて検定することができる。実質的に相同な配列またはプローブは、低い厳密性の条件の下で標的の配列と、完全に相同な配列またはプローブとの結合（即ちハイブリッド形成）について競合し、それを阻害する。これは、低い厳密性の条件が、非特異的な結合を許容するようなものであると言うのではない。低い厳密性の条件では、２つの配列の相互の結合が特異的（即ち選択的）相互作用であることが必要である。非特異的結合が存在しないことは、部分的な程度の相補性（即ち約３０％未満の同一性）を有していない第２の標的配列を用いることにより試験できる。非特異的結合が存在しない場合、プローブは第２の非相補的標的配列とハイブリダイズしない。「パーセント同一性」又は「％同一性」なる表記は、２以上のアミノ酸又は核酸配列を比較したときに認められた配列類似性のパーセンテージを指す。パーセント同一性は、例えばMegAlignプログラム（DNASTAR,Inc.,Madison WI）を用いて電子的に決定できる。このMegAlignプログラムは、例えばClustalメソッドのような異なるメソッドに従って２以上の配列の間のアライメントを作成できる( 例えばHiggins,D.G.及びP.M.Sharp(1988)Gene 73:237-244を参照)。Clustalアルゴリズムでは、全ての対の距離を調べることによって配列をクラスタ（集団）に分類する。このクラスタは、対単位でアライメントをとられ、次にグループ単位でアライメントをとられる。２つのアミノ酸配列、例えば配列Ａと配列Ｂとの間のパーセント類似性を、配列Ａの長さを分母とし、配列Ａの長さから配列Ａのギャップ残基の数を引き、更に配列Ｂのギャップ残基の数を引き、配列ＡとＢとの一致した残基の数の合計にしたものを分子として、それに１００を乗ずることによって計算する。２つのアミノ酸配列の間の相同性が小さいか、全くないギャップ部分は、求められた相同性のパーセンテージには含まれない。核酸配列間のパーセント同一性も、他の周知の方法、例えばJotun Hein法（例えば、Hein,J.(1990)Methods Enzymol.183:626-645参照）によってカウント、つまり計算することができる。配列間の同一性は、例えばハイブリダイゼーション条件を変える方法のような、他の周知の方法によっても決定することができる。「ヒト人工染色体」（ＨＡＣ）は１０Ｋ〜１０ＭのサイズのＤＮＡ配列を含み得、安定した分裂染色体分離及び維持に必要な全ての要素を含む直鎖状の小染色体である（例えば、Harrington,J.J.等(1997)Nat Genet.15:345-355参照）。本明細書において、用語「ヒト化抗体」は、元の結合能力をそのまま保持しつつ、ヒトの抗体により近づけるために非抗体結合領域においてアミノ酸を置換した抗体分子である。本明細書において、用語「ハイブリダイゼーション（ハイブリッド形成）」は、核酸の鎖が塩基対合を介して相補鎖と結合する過程である。本明細書において、用語「ハイブリダイゼーション複合体」は、相補的な塩基間での水素結合の形成によって、２つの核酸配列で形成された複合体である。ハイブリダイゼーション複合体は、溶液中で形成されるか（例えばＣ₀ｔ又はＲ₀ｔ解析）、或いは核酸は溶液中に存在する一方の核酸と、固定支持体（例えばin s ituハイブリダイゼーションのために細胞が固定されるメンブラン、フィルタ、ピン、またはスライドガラス）に固定化された他方の核酸との間で形成され得る。本明細書において「挿入」或いは「付加」は、自然発生の分子と比較して、それぞれ１または２以上のヌクレオチド、アミノ酸残基が加わるような、ヌクレオチド配列或いはアミノ酸配列の変化を指す。「免疫反応」は、炎症、外傷、免疫不全、又は感染症や遺伝病等に関連する状態をさすことがある。このような状態は、種々の因子、例えばサイトカイン、ケモカイン、及び他のシグナリング分子の発現によって特徴づけられ得、細胞の及び全身の防御系に影響を与え得る。「マイクロアレイ」とは、基板上に、合成された個々のポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを配列したものである。基板には例えば紙、ナイロン又は他のタイプのメンブラン、濾紙、チップ、スライドガラス、又は他の任意の適切な固形支持体が用いられる。本明細書において、マイクロアレイに関して用いられる用語「エレメント」又は「アレイエレメント」は、基板表面上に配置されたハイブリッド形成可能なポリヌクレオチドを指す。本明細書において、用語「変調」は、ＮＨＬＰの活性の変化又は変質である。変調は、タンパク質活性の上昇や低下、結合特性の変化、又はＮＨＬＰの生物学的、機能的、免疫学的特性の他の変化であり得る。本明細書において「核酸」又は「核酸配列」は、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、又はポリヌクレオチド、及びその断片や、一本鎖か二本鎖の、センス鎖又はアンチセンス鎖であるゲノム起源又は合成起源のＤＮＡ又はＲＮＡや、ペプチド核酸（ＰＮＡ）や、任意のＤＮＡ様又はＲＮＡ様材料を指す。同様に、本明細書において「断片」は、長さが約６０ヌクレオチド以上の、最も好ましくは長さが約１００ヌクレオチド以上、１０００ヌクレオチド以上、若しくは１００００ヌクレオチド以上の核酸配列を指す。本明細書において、用語「機能的に関連する」或いは「機能的にリンクする」とは、機能的に関連する核酸配列群を指す。プロモーターとコーディング配列とは、そのプロモーターがコーディング配列によってコードされるポリペプチドの転写を調節する場合、機能的に関連又は機能的にリンクしている。機能的に関連する或いは機能的にリンクする核酸配列同士は近接しており、且つ読み枠内に存在し得るが、例えばリプレッサー遺伝子のようなある種の遺伝子配列は、コードされるポリペプチドと近接した形でリンクしていないにも関わらず、ポリペプチドの発現を制御するオペレーター配列に結合している。本明細書において「オリゴヌクレオチド」は、ＰＣＲ増幅又はハイブリダイゼーションアッセイ、若しくはマイクロアレイで用いることができる核酸配列であって、長さが約６ヌクレオチド以上、最大６０ヌクレオチド程度、好適には１５〜３０ヌクレオチド、より好適には２０〜２５ヌクレオチドであるものを指す。本明細書において、オリゴヌクレオチドは、当分野において一般に定義されている用語「アンブリマー」、「プライマー」、「オリゴマー」、及び「プローブ」と実質的に等価である。本明細書において「ペプチド核酸」（ＰＮＡ）は、末端がリジンであるアミノ酸残基のペプチドバックボーンに結合した５ヌクレオチド以上の長さのオリゴヌクレオチドを含むアンチセンス分子又は抗遺伝子剤を意味する。末端のリジンがこの物質に安定性を与えている。ＰＮＡをポリエチレングリコール化した(pegyl ated)細胞におけるＰＮＡの寿命を延ばすことができる。このような細胞では、ＰＮＡが相補的な一本鎖ＤＮＡやＲＮＡに優先的に結合して、転写物の伸長を止める。（例えば、Nielsen,P.E.等(1993)Anticancer Drug Des.8:53-63参照）。本明細書において、用語「サンプル」は、その最も広い意味で用いられる。ＮＨＬＰをコードする核酸またはその断片、またはＮＨＬＰ自体を含む疑いのある生物学的サンプルは、体液；細胞、染色体、細胞小器官、又は細胞から単離された膜からの抽出物：細胞；溶液中の、または固体支持体に結合したゲノムのＤＮＡ、ＲＮＡ、又はｃＤＮＡ；組織；組織の写真；その他を含み得る。本明細書において、用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、抗体及びタンパク質またはペプチドの相互作用が、タンパク質上の特定の構造（即ち抗原決定基またはエピトープ）の存在に左右されることを意味している。つまり、この抗体はタンパク質全体ではなく、特定のタンパク質構造を認識して結合する。例えば、抗体がエピトープ「Ａ」に対して特異的である場合、標識した「Ａ」及びその抗体を含む反応において、エピトープＡ（つまり結合していない、無標識のＡ）を含むタンパク質が存在すると、抗体に結合した標識Ａの量が低下する。本明細書において、「厳密な条件」又は「厳密性条件」は、ポリヌクレオチド配列と本発明のポリヌクレオチド配列との間でハイブリッド形成が可能な条件を指す。適切な厳密性条件は、例えばプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーション溶液中の塩又はホルムアミドの濃度や、ハイブリダイゼーション温度によって定義され得、これは周知である。詳述すると、塩の濃度を低くするか、ホルムアミドの濃度を高くするか、或いはハイブリダイゼーション温度を高めることによって、厳密性を高めることができる。例えば、高い厳密性条件のハイブリダイゼーションは、約３７〜４２℃の温度と約５０％のホルムアミド濃度で生ずる。低い厳密性条件のハイブリダイゼーションは、約３０〜３５℃の温度と約３５〜２５％のホルムアミド濃度で生ずる。詳述すると、高い厳密性条件の下でのハイブリダイゼーションは、４２℃の温度の下、５０％のホルムアミド、５ＸＳＳＰＥ、０．３％ＳＤＳ、及び２００μ ｇ／ｍｌの同じ長さに切り揃えた変性したサケ精子において生じ得る。上述の低い厳密性条件のハイブリダイゼーションは、３５℃の温度と３５％のホルムアミド濃度で生ずる。特定の厳密性レベルに対応する温度範囲は、対象となる核酸のプリン塩基とピリミジン塩基の比を形成し、それに従って温度を調節することによって更に狭くなり得る。上述の範囲及び条件の変化はよく知られている。本明細書において、用語「実質的に精製」は、天然の環境から取り除かれ、単離又は分離されて、天然にはそれが結合して存在する他の構成要素から６０％以上、好ましくは７５％以上、最も好ましくは９０％以上遊離した核酸配列又はアミノ酸配列である。本明細書において「置換」は、それぞれ１または２以上のヌクレオチド或いはアミノ酸を、異なるヌクレオチド或いはアミノ酸に置換することによって生ずる変化である。本明細書の定義では、「形質転換」は、外来ＤＮＡが入り込みレシピエント細胞を変化させるプロセスを意味する。このプロセスは、よく知られた種々の方法を用いた天然または人工の条件の下で生じ得る。形質転換は、外来核酸配列を原核細胞または真核細胞の宿主細胞に導入するための任意の既知の方法に基づいている。この方法は形質転換される宿主細胞によって選択され、以下のものに限定されないが、ウイルス感染、電気穿孔法、リポフェクション、及び微粒子銃を用いる方法が含まれ得る。このように「形質転換された」細胞は、その中で挿入されたＤＮＡが自律的に複製するプラスミドとして、或いは宿主の染色体の一部として複製が可能な安定的に形質転換された細胞を含む。またこのような細胞は、限られた時間だけ挿入されたＤＮＡ又はＲＮＡを発現する一時的に形質転換された細胞も含む。本明細書においてＮＨＬＰの「変異体」は、１又は２箇所以上のアミノ酸が変異したアミノ酸配列である。この変異体は「保存的」変化を含むものであり得、この保存的変化においては、例えばロイシンをイソロイシンで置き換える場合のように置換されるアミノ酸が類似な構造的及び化学的特性を有する。稀に、変異体が「非保存的」に変化する場合もあり、この非保存的変化では例えばグリシンがトリプトファンで置換される。類似した小変化には、アミノ酸の欠失か挿入、若しくはその両方も含まれる。例えばDNASTARソフトウエアのような良く知られたコンピュータプログラムを用いて、生物学的或いは免疫学的活性を損なわずに置換、挿入、又は除去できるアミノ酸が何れかということ、及びそのようなアミノ酸がいくつかということを決定することができる。発明本発明は、新規なヒトリゾホスホリパーゼ（ＮＨＬＰ）の発見、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチド、及び細胞増殖、炎症、免疫反応の障害の診断、治療、又は予防のためのこれらの物質の使用に基づくものである。本発明のＮＨＬＰをコードする核酸は、腎臓ｃＤＮＡライブラリー（KIDNNOT1 9）を起源とするインサイト社クローンNo.2676650において、アミノ酸配列アライメントのコンピュータ検索を用いて初めに同定された。コンセンサス配列の配列番号：２は、以下の重複及び／又は延長された核酸配列、即ちインサイト社クローンNo.264813（HNT2AGT01を起源）、2676650(KIDNNOT19を起源)及び2730214( OVARTUT04を起源)から構成されたものである。更に、コンセンサス配列の配列番号：４は、以下の重複及び／又は延長された核酸配列、即ちインサイト社クローンNo.2135151（ENDCNOT01を起源）、3295783(TLYJINT01を起源)、776029(COLNNO T05を起源)、1275554 (TESTTUT02を起源)、000777(U937NOT01を起源)、及び1852007（LUNGFET03を起源）から構成されたものである。或る実施例では、本発明は、第１Ａ図及び第１Ｂ図に示すような配列番号：１のアミノ酸配列、又は第２Ａ図、第２Ｂ図、第２Ｃ図、及び第２Ｄ図に示すような配列番号：３のアミノ酸配列を有するポリペプチドを包含する。配列番号：１は208個のアミノ酸からなる長さを有し、Ｎ（5番）及びＮ（175番）にＮ結合グリコシル化可能部位を有し、Ｒ（18番）、Ｓ（49番）、Ｓ（60番）、Ｓ（88番）、及びＴ（77番）にリン酸化可能部位を有し、且つＧ（3番）、Ｇ（29番）、Ｇ（66番）、Ｇ（85番）、Ｇ（99番）、及びＧ（183番）にミリストイル化可能部位を有する。配列番号：３は230個のアミノ酸からなる長さを有し、配列番号：１とは異なる領域に追加のリン酸化部位を有する。第３Ａ図及び第３Ｂ図に示すように、ＮＨＬＰは、ラットＬＰＬ（GI 1552244；配列番号：５）と化学的及び構造的相同性を有する。詳述すると、配列番号：１のＮＨＬＰとラットＬＰＬは８２％の配列同一性を共有し、配列番号：３のＮＨＬＰは９２％の配列同一性を共有する。配列番号：２の概ね76番のヌクレオチドから概ね136番のヌクレオチドまでの断片は、ハイブリダイゼーションプローブとして有用である。また配列番号：４の概ね76番のヌクレオチドから概ね136番のヌクレオチドまでの断片も、ハイブリダイゼーションプローブとして有用である。ノーザン解析の結果から、種々のライブラリーにおけるこのＮＨＬＰの発現が分かる。このようなライブラリーの４０％は不死化細胞又は癌性細胞のものであり、２５％以上は免疫反応や炎症に関連するものである。特に注目すべきは、心血管、消化管、及び神経系を起源とするライブラリーにおけるＮＨＬＰの発現である。また本発明は、ＮＨＬＰの変異体を包含する。好適なＮＨＬＰ変異体は、ＮＨＬＰアミノ酸配列と約８０％以上、より好適には約９０％以上、最も好適には約９５％以上のアミノ酸配列同一性を有し、且つＮＨＬＰの機能又は構造的特性の少なくとも１つを有するものである。また本発明は、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチドを包含する。特定の実施例では、本発明は、ＮＨＬＰをコードする、配列番号：２又は配列番号：４の配列を含むポリヌクレオチド配列を包含する。また本発明は、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチド配列の変異体を包含する。詳述すると、このような変異体ポリヌクレオチド配列は、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチド配列と約８０％以上より好適には約９０％以上、最も好適には約９５％以上のポリヌクレオチド配列同一性を有する。本発明の特定の態様は、配列番号：２又は配列番号：４と約８０％以上、より好適には約９０％以上、最も好適には約９５％以上のポリヌクレオチド配列同一性を有する配列番号：２又は配列番号：４の変異体を包含する。上述のポリヌクレオチド変異体の何れもが、ＮＨＬＰの機能的又は構造的特徴の少なくとも１つを有するアミノ酸配列をコードし得る。当業者には理解されるように、遺伝暗号の縮重の結果、任意の既知の自然発生遺伝子のヌクレオチド配列と最小限の相同性しか有していないものも含めて、多種のＮＨＬＰコーディングヌクレオチド配列が作り出され得る。本発明は、可能なコドン選択に基づく組み合わせを選択することにより作り出され得る、全ての可能な核酸配列の変異をその範囲に含んでいる。それらの組み合わせは、自然発生のＮＨＬＰのヌクレオチド配列に適用されるような標準的なトリプレット遺伝暗号に基づいて作り出されるものであり、このような全ての変異は、ここに具体的に示されたものと考えられたい。ＮＨＬＰ及びその変異体をコードするヌクレオチド配列は、適切に選択された厳密性の条件の下で自然発生配列のヌクレオチド配列とハイブリッド形成可能なものであるのが好ましいが、実質的に異なるコドンの使用頻度を有するＮＨＬＰ又はその変異体をコードするヌクレオチド配列を作り出すことは有益であり得る。コドン選択は、特定のコドンが宿主によって使用される頻度に従って、特定の原核細胞又は真核細胞の発現宿主におけるペプチド発現の発生率を高めるように選択することができる。ＮＨＬＰ及びその誘導体をコードするヌクレオチド配列を、コードされるアミノ酸配列を変えないように実質的に変更する理由は、例えば自然発生配列から作り出される転写物より長い半減期のような、より望ましい特性を有するＲＮＡ転写物を作り出すためである。本発明の範囲には、ＮＨＬＰ又はその誘導体をコードするＤＮＡ配列又はその一部の、完全な合成ケミストリによる作製も含まれる。作製したこの合成遺伝子を、この出願時点において周知の試薬を用いて任意の入手可能なＤＮＡベクター及び細胞系に挿入することができる。更に、合成ケミストリを用いてＮＨＬＰをコードする配列又はその任意の一部分に突然変異を誘発させることができる。また本発明の範囲に含まれるものとして、種々の厳密性の条件の下で請求項に記載のヌクレオチド配列、特に配列番号：２、配列番号：４、配列番号：２の断片、又は配列番号：４の断片のヌクレオチド配列とハイブリダイズし得るポリヌクレオチド配列がある（例えばWahl,G.M.及びS.L.Berger(1987)Methods Enzymol ．152:399-407;及びKimmel,A.R.(1987)Methods in Enzymol.152:507-511参照）。当業者が一般に利用可能な周知のＤＮＡ配列決定のための方法が、本発明の実施において用いられ得る。この方法では酵素、例えばＤＮＡポ Cleveland ＯＨ）、Taqポリメラーゼ（Perkin Elmer）、熱安定性T7 ポリメラーゼ（Amersham,Chicago IL）、或いはGibco BRL(Gaithersburg MD)Met hods社から市販されているELONGASE増幅システムのような校正エキソヌクレアーゼと組換え体ポリメラーゼとの組み合わせのような酵素を使用する。この処理は、Hamilton Micro Lab2200（Hamilton,Reno,NV）、Peltier Thermal Cycler(PTC 200；MJ Reserch,Watertown MA）並びにABI377 DNAシーケンサ（Perkin Elmer）のような装置を用いて自動化するのが好ましい。ＮＨＬＰをコードする核酸配列は、部分的なヌクレオチド配列と、プロモーター及び調節エレメントのような上流配列を検出するための当業者には周知の様々な方法とを用いて伸長させることができる。例えば、用いることができる或る方法、即ち「制限部位」ＰＣＲ法では、汎用プライマーを用いて既知の座位に隣接する未知の配列を得る（例えば、Sarkar,G.(1993)PCR Methods Applic 2:318-32 2参照）。詳述すると、まずゲノムＤＮＡを、既知の領域に対して特異的なプライマー及びリンカー配列に対するプライマーの存在下で増幅する。増幅された配列を、その同じリンカープライマー及び最初のプライマーの内部に含まれる別の特異的プライマーを用いてＰＣＲの２巡目にかける。ＰＣＲの各回の生成物を、適切なＲＮＡポリメラーゼを用いて転写させ、逆転写酵素を用いて配列決定する。逆ＰＣＲ法を用いて、既知領域に基づく多様なプライマーを利用した配列の増幅、または伸長を行うことができる（例えば、Triglia,T.等(1988)Nucleic Acid s Res 16:8186参照）。プライマーは、OLIGO 4.06（National Biosciences社,Pl ymouth MN）や別の適切なプログラムを用いて、長さが２２〜３０ヌクレオチドで、５０％以上のＧＣ含量を有し、かつ約６８〜７２℃の温度で標的配列にアニールするように設計される。この方法ではいくつかの制限酵素を用いて遺伝子の既知領域の適当な断片を作り出す。次にこの断片を分子内ライゲーションにより環状にし、ＰＣＲ用の鋳型として使用する。使用できる別の方法にはキャプチャＰＣＲ法があり、この方法ではヒト及び酵母菌人工染色体ＤＮＡ内の既知の配列に隣接するＤＮＡ断片をＰＣＲ増幅する( 例えば、Lagerstrom,M.等(1991)PCR Methods Applic 1:111-119参照)。この方法では、ＰＣＲ処理の前に、ＤＮＡ分子の未知の部分に、複数の制限酵素による消化及びライゲーションによって組換え二本鎖配列を配置しておいてもよい。未知の配列を得るために用いることができる別の方法も周知である（例えば、Parker ,J.D.等(1991)Nucleic Acids Res 19:3055-3060参照）。更に、ＰＣＲ、ネスト化プライマー、PromoterFinder^TMライブラリーを用いて、ゲノムＤＮＡ内歩行を行うことができる（Clontech,Palo Alto CA）。このプロセスは、ライブラリーをスクリーニングする必要がなく、イントロン／エクソン接合部を探し出すのに有用である。完全長ｃＤＮＡをスクリーニングするときに好適なライブラリーは、サイズ選択された、より大きなｃＤＮＡを含むライブラリーである。またランダムプライミングした（rondom primed）ライブラリーは、遺伝子の５’及び上流領域を含む配列をより多く含むという点で好適である。ランダムプライミングしたライブラリーは、オリゴｄ（Ｔ）ライブラリーで完全長ｃＤＮＡが得られない場合に特に有用である。またゲノムライブラリーは、５’及び３’非翻訳領域への配列の伸長のために役立ち得る。配列決定やＰＣＲの産物のヌクレオチド配列をサイズ分析したり確認するためには、市販のキャピラリー電気泳動システムを用いることができる。詳述すると、キャピラリーシークエンシングでは、電気泳動による分離のための流動性ポリマー、レーザーで活性化される４つの異なる蛍光色素（各ヌクレオチドに対して１つ）を使用し、ＣＣＤカメラにより放射線の波長の検出を行う。出力／光強度は適切なソフトウエア（例えばPerkin elmer 製のGenotyper^TM及びSequence Navigator^TM）を用いて電気信号に変換され、サンプルの負荷からコンピュータ解析及び電子データ表示までの全過程がコンピュータ制御される。キャピラリー電気泳動法は、特定のサンプル内に限られた量だけ存在するＤＮＡ小片の配列決定に特に適している。本発明の別の実施例では、ＮＨＬＰ、融合タンパク質或いはその機能的等価物をコードするポリヌクレオチド配列を、適切な宿主細胞内でのＮＨＬＰの発現を誘導する組換えＤＮＡ分子において用いることができる。遺伝暗号固有の縮重のために、同一か機能的に等価なアミノ酸配列を実質的にコードする他のＤＮＡ配列も、ＮＨＬＰのクローニングや発現のために用いることができる。当業者には理解できるように、非自然発生コドンを有するＮＨＬＰコードディングヌクレオチド配列を作り出すことは有益であり得る。特定の原核細胞或いは真核細胞の宿主において選好されるコドンを選択して、例えば、ＮＨＬＰ発現率を増大させたり、或いは自然発生配列から生成された転写物より長い半減期のような望ましい特性を有する組換えＲＮＡ転写物を生成することができる。本発明のヌクレオチド配列は、様々な目的、例えば、以下のものに限定はしないが遺伝子産物のクローニング、プロセシング及び／又は発現を変えるようにＮＨＬＰをコードする配列を改変するために既知の方法を用いて組換えることができる。無作為断片によるＤＮＡ再編成や遺伝子断片のＰＣＲ再会合及び合成オリゴヌクレオチドを用いて、ヌクレオチド配列を組換えることができる。例えば、特定部位突然変異誘発のような当業者には周知の技術を用いて突然変異を誘発させることによって、新しい制限部位の挿入、グリコシル化パターンの変更、コドン選好の変化、スプライスバリアントの生成等をもたらすことができる。本発明の別の実施例では、未改変ＮＨＬＰコーディング配列、変異ＮＨＬＰコーディング配列、又は組換えＮＨＬＰコーディング配列を異種の配列に結合して、融合タンパク質をコードする配列にする。例えば、ＮＨＬＰ活性のインヒビターをペプチドライブラリーからスクリーニングする場合、市販の抗体により認識される異なるペプチドを発現するキメラＮＨＬＰタンパク質をコードすることが役立つ。融合タンパク質はＮＨＬＰ配列と異種のタンパク質配列との間の位置に切断部位を有するように設計することもでき、これによってＮＨＬＰを切断して、ヘテロの部分から分けて精製することが可能となる。本発明の別の実施例では、当業者によく知られた化学的方法（例えばCaruther s.M.H.等（1980）Nuc Acids Res Symp Ser 7:215-223;Horn,T.等（1980）Nucl.A cids Res Symp.Ser.225-232参照）を用いて、ＮＨＬＰコーディング配列の全体、或いはその一部を合成することができる。別法では、化学的方法を用いてタンパク質自体を作り出して、ＮＨＬＰアミノ酸配列の全体或いはその一部を合成することができる。例えば、種々の固相技術（例えば、Roberge,J.Y.等(1995)Scie nce 269:202-204参照）でペプチド合成を行うことができ、合成の自動化は、例えばABI 431Aペプチドシンセサイザ（Perkin Elmer）を用いることにより達成することができる。さらにＮＨＬＰのアミノ酸配列或いはその任意の部分を、その直接の合成の際の改変することにより、及び／又は化学的方法を用いた他のタンパク質或いはその任意の部分に由来する配列との結合することによって変異体ポリペプチドを作ることができる。このペプチドは、分離用高速液体クロマトグラフィにより実質的に精製することができる(例えば、Caruthers,M.H.等(1980)Nucl.Acids Res. Symp.Ser.215-223，及びHorn,T.等(1980)Nucl.Acids Res.Ser.225-232参照)。合成されたペプチドの組成は、アミノ酸解析或いはシークエンシングにより確認することができる（例えばCreighton T.（1983）Proteins Structure And Molecul ar Principles ,WH Freeman and Co.,NY参照）。生物学的に活性なＮＨＬＰを発現させるために、ＮＨＬＰコーディングヌクレオチド配列或いはその機能的等価物を、適切な発現ベクター、すなわち挿入されたコーディング配列の転写及び翻訳に必要な要素を含むベクターに挿入する。ＮＨＬＰコーディング配列及び適切な転写や翻訳の調節領域を含む発現ベクターを作製するために当業者に周知の方法が用いられる。これらの方法には、in v itro組換えＤＮＡ技術、合成技術、並びにin vivo組換え技術、又は遺伝子組換え技術が含まれる（例えば、Sambrook,J.等（1989）Molecular Cloning,A Labor atory Manual ,Cold Spring Harbor Press,Planview NY及びAusubel,F.M.等Curre nt Protocol in Molecular Biology ,John Wiley & Sons,New York NY，Ch.9,13 ，及び16参照）。種々の発現ベクター／宿主系を、ＮＨＬＰコーディング配列を保持し、かつ発現するために利用することができる。このようなものには、以下のものに限定はされないが、組換えバクテリオファージ、プラスミド或いはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換した細菌のような微生物や、酵母菌発現ベクターで形質転換した酵母菌や、ウイルス発現ベクター(例えばバキュロウイルス)を感染させた昆虫細胞系や、ウイルス発現ベクター（例えばカリフラワーモザイクウイルスCaMV 、タバコモザイタウイルスTMV）をトランスフェクトした、或いは細菌の発現ベクター（例えばTi、或いはpBR322プラスミド）で形質転換した植物細胞系や、或いは動物細胞系が含まれる。これらの系の「調節領域」或いは「制御配列」は、転写及び翻訳を実行するために宿主細胞のタンパク質と相互作用するベクターの非翻訳領域、即ちエンハンサー、プロモーター及び３’非翻訳領域である。このようなエレメントの、強さ及び特異性は様々であり得る。利用されるベクター及び宿主に応じて、構成的及び誘導的プロモーターを含む任意の数の適切な転写及び翻訳エレメントを用いることができる。例えば、細（Stratagene,LaJolla CA）のハイブリツドlacZプロモーターやpSport1^TMプラスミド(GIBCO/BRL)のような誘導的プロモーターを用いることができる。バキュロウイルスポリヘドリンプロモーターは昆虫細胞において用いることができる。植物細胞のゲノムに由来するプロモーター或いはエンハンサ（例えば熱ショック遺伝子,RUBISCO及び貯蔵タンパク質遺伝子）、若しくは植物ウイルスに由来するプロモーター或いはエンハンサ（例えばウイルス性プロモータ或いはリーダー配列）を、ベクターにクローン化してもよい。哺乳動物細胞では、哺乳類遺伝子或いは哺乳類ウイルス由来のプロモーターが最適である。ＮＨＬＰをコードする配列の多数の複製を含む株細胞を作る必要がある場合には、SV40或いはEBVに基づくベクターを適切な選択マーカーと共に用いる。細菌系では、ＮＨＬＰの用途に応じて多数の発現ベクターを選択することができる。例えば抗体誘発のために大量のＮＨＬＰが必要とされる場合は、容易に精製される融合タンパク質を高レベルで発現できるベクターが望ましい。そのようなベクターには、以下のものに限定はしない（Stratagene）（このベクターでは、ＮＨＬＰをコードする配列を、アミノ末端メチオニン及び後続のβ−ガラクトシダーゼの７残基の配列を備えたフレーム内においてベクターに結合してハイブリッドタンパク質を生成できる）や、pINベクター（例えば、Van Heeke,G.及びS.M.Schuster（1989）J.Bio l.Chem.264:5503-5509参照）等が含まれる。またpGEXベクター（Promage、Madis on WI）も、グルタチオンＳ−トランスファーゼ（GST）を有する融合タンパク質として異種ポリペプチドを発現するため用いることができる。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、グルタチオンアガロースビーズへ吸着させた後、遊離グルタチオンの存在下で溶出させることにより溶解した細胞から容易に精製できる。その系において生成されたタンパク質は、ヘパリン、トロンビン或いはＸＡ因子プロテアーゼ切断部位を含めて、目的のクローン化ポリペプチドを GST部分から随意に放出させることができるように設計される。酵母菌、サッカロミセスセレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）では、α因子、アルコールオキシダーゼ及びPGHのような構成的或いは誘導的プロモーターを含む多数のベクターを用いることができる（例えば、Ausubel等（前出）及びG rant等（1987）Methods Enzymol 153:516-544を参照）。植物発現ベクターを用いる場合には、ＮＨＬＰをコードする配列の発現は、多数のプロモーターの何れかで促進される。例えばCaMVの35S及び19Sプロモーターのようなウイルスのプロモーターを、単独で、或いはTMV（Takamatsu,N.等（198 7）EMBO J 6:307-311）由来のオメガリーダー配列と共に用いることができる。別法として、RUBISCOの小サブユニット、或いは熱ショックプロモーターのような植物プロモーターが用いてもよい（Coruzzi，G.等（1984）EMBO J 3:1671-168 0)；Broglie,R.等（1984）Science 224:838-843;及びWinter,J.等（1991）Resul ts Probl.Cell Differ.17:85-105）。これらの構成は、直接のＤＮＡ形質転換或いは病原体によるトランスフェクションにより植物細胞内に導入できる。このような技術の種々の一般に入手可能な文献に記載されている(例えば、Hobbs,S.又はMurry,L.E.McGraw Hill Yearbook of Science and Technology（ 1992）McGraw Hill NY,pp191-196を参照されたい)。ＮＨＬＰの発現のために用いることができる別の発現系は昆虫系である。そのような系の一つでは、Spodoptera frugiperda細胞或いはTrichoplusiaの幼虫において外来遺伝子を発現するためのベクターとして、Autographa californica核多角体病ウイルス（AcNPV）が用いられる。ＮＨＬＰをコードする配列は、ポリヘドリン遺伝子のようなウイルスの非必須領域にクローニングされ、ポリヘドリンプロモーターの制御下に置かれ得る。ＮＨＬＰコーディング配列の挿入が成功すると、ポリヘドリン遺伝子が不活性になり、コートタンパク質膜が欠如した変異体ウイルスが生成される。次に、この変異体ウイルスを用いて、S.frugiperda 細胞或いはTrichoplusiaの幼虫へ感染させ、その中でＮＨＬＰが発現される（例えば、Engelhard,E.K.等(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.91:3224-3227参照）。哺乳類宿主細胞では、多数のウイルス性発現系を利用することができる。発現ベクターとしてアデノウイルスが用いられる場合には、ＮＨＬＰをコードする配列は、後期プロモータ及び三連リーダー配列からなるアデノウイルス転写物／翻訳物複合体内に結合され得る。ウイルスのゲノムの非必須E1又はE3領域へ挿入することにより、感染した宿主細胞でＮＨＬＰを発現できる生ウイルスになる（例えば、Logan,J.及びShenk,T.（1984）Proc.Natl.Acad.Sci.81:3655-3659参照）。さらに、哺乳類宿主細胞内の発現を増加させるためにラウス肉腫ウイルス（RS V）エンハンサのような転写エンハンサを用いることができる。また、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）を用いることにより、プラスミドに含められて発現され得るものより大きいＤＮＡの断片を供給することもできる。治療の目的で、従来のデリバリー方法（リポソーム、ポリカチオンのアミノポリマー、又は小胞）を用いて６〜１０ＭのＨＡＣを構築し、供給する。また、ＮＨＬＰ配列の効率的な翻訳のためには、特定の開始シグナルも必要である。これらのシグナルには、ATG開始コドン及び隣接する配列が含まれる。ＮＨＬＰ及びその開始コドン及び上流配列が適切な発現ベクター内に挿入される場合には、翻訳制御シグナルを加える必要はない。しかしながらコーディング配列又はその一部のみが挿入される場合には、ATG開始コドンを含む外来の翻訳制御シグナルを与えなければならない。さらに、全インサートの転写が確実に行われるようにするために、開始コドンは正しい読み枠に存在しなければならない。外来転写エレメント及び開始コドンは、自然及び合成両方の様々な起源に由来するものであり得る。発現の効率は、その細胞系に適切なエンハンサーを含めることにより高めることができる（例えば、Scharf,D.等（1994）Results Probl.Cell Differ.20:125-162参照）。さらに宿主細胞株は、挿入された配列の発現を調節したり、発現したタンパク質を望ましい形にプロセシングする能力で選択される。このようなポリペプチドの修飾には、以下のものに限定はしないが、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化（lipidation）並びにアシル化が含まれる。またタンパク質の「プレプロ」部分を切り離す翻訳後プロセシングも、正しい挿入、折り畳み、及び／又は機能の発揮のために重要である。（例えばCHO、HeLa、MDCK 、293、WI38等のような）異なる宿主細胞は、そのような翻訳後の活動のための特定の細胞装置及び特徴的な機構を有しており、導入される異種タンパク質の修飾やプロセシングが確実に行われるように選択され得る。長期間にわたって組換えタンパク質の高収率の産生を確保するためには安定した発現が望ましい。例えば、ウイルスの複製起源や内在性発現エレメント及び選択マーカー遺伝子を含む発現ベクターを用いて、ＮＨＬＰを安定的に発現する株細胞を形質転換し得る。ベクターの導入の後、細胞を選択培地に切り替える前に濃縮培地内で１〜２日間増殖させる。選択マーカーの目的は、選択のための耐性を与え、その存在によって導入された配列をうまく発現する細胞を増殖、回収できるようにすることである。安定的に形質転換された細胞の耐性凝集塊は、その細胞型に適した組織培養技術を用いて増殖することができる。形質転換された株細胞を回収するために任意の数の選択系を用いることができる。選択系には、以下のものに限定はしないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（tk）及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（aprt）遺伝子が含まれ、それぞれtk及びaprt細胞において用いられる(例えば、Wigler,M.等(1 977)Cell 11:223-232及びLowy,I.等（1980）Cell 22:817-23参照)。また代謝拮抗物質、抗生物質或いは除草剤への耐性を選択の基礎として用いることができる。例えばdhfrはメトトレキセートに対する耐性を与え；nptはアミノ配糖体のネオマイシン及びG-418に対する耐性を与え；als或いはpatはクロルスルフロン（c hlorsulfuron）、ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ（phosphinot ricin acetyltransferase）に対する耐性を与える（例えば、Wigler,M.等(1980) Natl Acad Sci 77:3567;Colberre-Garapin,F.等（1981）J Mol Biol 150:1;Murr y，前出参照）。さらに選択に利用できる遺伝子として、例えば細胞がトリプトファンの代わりにインドールを利用できるようにするtrpB、細胞がヒスチジンの代わりにヒスチノール(histinol)を利用できるようにするhisDが文献に記載されている(例えば、Hartman,S.C.及びR.C.Mulligan（1988）Proc.Natl.Acad.Sci.85:8047-51 参照)。形質転換体を特定するためばかりではなく、特定ベクター系による一過性の或いは安定的なタンパク質発現の量を定量するために広く用いられる、例えばアントシアニン、β−グルクロニダーゼ及びその基質、GUS、及びルシフェラーゼ及びその基質のルシフェリンのような可視マーカーを用いてもよい。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）（Clontech,Palo Alto，CA）を用いることもできる。これらのマーカーは、形質転換体を同定するためのみならず、特定のベクター系による一時的な又は安定的なタンパク質発現の定量のためにも用いることができる（例えば、Rhodes，C.A.等（1995）Methods Mol.Biol.55:121-131参照）。マーカー遺伝子発現の存在／不存在によって目的の遺伝子の存在も示唆されるが、その存在及び発現は確認すべきである。例えばＮＨＬＰをコードする配列がマーカー遺伝子配列内に挿入された場合は、ＮＨＬＰをコードする配列を含む組換え体細胞をマーカー遺伝子の機能の存在により確認できる。別法では、マーカー遺伝子をＮＨＬＰをコードする配列と直列に配置して、両者が単一プロモータの制御下となるようにすることができる。誘導に応じてのマーカー遺伝子の発現、つまり選択は、通常直列に配置された配列の発現をも同時に示すことになる。この他当業者には周知の様々な方法により、ＮＨＬＰをコードする配列を含みＮＨＬＰを発現する宿主細胞を識別できる。このような方法には、以下に限定されないが、DNA-DNA或いはDNA-RNAハイブリダイゼーション及び、核酸及びタンパク質を検出及び／又は定量するための膜ベース、溶液ベース或いはチップベースの技術を含むタンパク質バイオアッセイ或いはイムノアッセイ技術が含まれる。ＮＨＬＰをコードする配列のプローブ、一部、或いは断片を用いる DNA-DNA又はDNA-RNAハイブリダイゼーション若しくは増幅により、ＮＨＬＰポリヌクレオチド配列の存在を検出することができる。核酸増幅に基づくアッセイでは、ＮＨＬＰをコードするDNA或いはRNAを含む形質転換体を検出するために、核酸配列に基づくオリゴヌクレオチド或いはオリゴマーを用いる。このタンパク質に特異的なポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体のいずれかを用いてＮＨＬＰポリペプチドの発現を検出し、測定するための種々のプロトコルが当業者には周知である。このようなプロトコルの例には、酵素結合免疫検定法(ELISA)、ラジオイムノアッセイ(RIA)及び蛍光表示式細胞分取器法（FACS ）を含まれる。ＮＨＬＰポリペプチド上で２つの非干渉なエピトープに対して反応するモノクローナル抗体を利用する二部位モノクローナルベースイムノアッセイ（two-site,monoclonal-based immunoassay）が好適であるが、競合的結合アッセイも用いられる。これらアッセイの並びに他のアッセイは、他の文献に記載されている(例えば、Hampton,R.等(1990);Serological Methods,a Laboratory M anual ,APS Press,St.Paul MN及びMaddox,D.E.等(1983),J.Exp.Med.158:1211-121 6を参照)。多くの標識及び結合技術が当業者には周知であり、種々の核酸及びアミノ酸のアッセイにおいて用いることができる。近縁な配列を検出するための、標識されたハイブリダイゼーションプローブやＰＣＲプローブを作成するための手段には、オリゴ標識、ニックトランスレーション法、末端標識、或いは標識ヌクレオチドを用いるＰＣＲ増幅などが含まれる。別法としては、ＮＨＬＰコーディング配列、或いはその任意の部分を、ｍＲＮＡプローブの作成のためのベクターにクローン化する。そのようなベクターは当分野では周知で、市販されており、例えば T7、T3、或いはSP6のような適切なＲＮＡポリメラーゼ及び標識されたヌクレオチドを加えることにより、in vitroでＲＮＡプローブを合成するために用いることができる。これらの方法は、種々の市販のキット(Pharmacia Upjohn（Kalamaz oo,MI）；Promega（Madison WI）；及びU.S.Biochemical Corp.（Cleveland OH ）)を用いて実行することができる。適切なリポーター分子、すなわち標識には、放射性核種、酵素、フルオレセント（蛍光剤）、化学発光剤或いは色素剤や、基質、補助因子、インヒビター、磁気粒子等が含まれる。ＮＨＬＰをコードするヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞を、コードされたタンパク質を細胞培地で発現させ、そこから回収するのに適した条件下で培養することができる。組換え体細胞により生成されるタンパク質は、用いられる配列及び／またはベクターに応じて、細胞内に分泌、つまり細胞内に含まれるようにすることができる。当業者には理解されるように、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを、原核細胞か真核細胞の細胞膜を通してのＮＨＬＰ分泌を誘導するシグナル配列を含むように設計することができる。他の組換え体作製物では、ＮＨＬＰをコードする配列を、可溶性タンパク質の精製を容易にするポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列に結合することができる。そのような精製を容易にするドメインには、以下のものに限定はしないが、固定化金属上での精製を可能にするヒスチジントリプトファンモジュールのような金属キレートペプチド、固定化免疫グロブリン上での精製を可能にするプロテインＡドメイン、並びにFLAGS伸長／アフィニティ精製システムにおいて用いられるドメイン（Immunex Corp.，Seattle WA）が含まれる。精製ドメインとＮＨＬＰの間にＸＡ因子或いはエンテロキナーゼ（Invitrogen,San Diego C A）に対して特異的な配列のような切断可能なリンカー配列を含めるのは精製を促進するのに役立つ。ＮＨＬＰをコードする配列とともに、６個のヒスチジン残基、それに続くチオレドキシン及びエンテロキナーゼ切断部位をコードする核酸配列を含むこのような発現ベクターの１つは、融合タンパク質を発現する。ヒスチジン残基は、IMIACに記載のような固定化金属イオンアフィニティクロマトグラフィー）精製を促進する（例えば、Porath,J等（1992;Protein E xp.Purif.3:263-281参照）。またエンテロキナーゼ切断部位が融合タンパク質からのＮＨＬＰの精製のための手段となる（例えば、Kroll,D.J.等(1993)DNA Cell Biol.12:441-453参照）。ＮＨＬＰの断片は、組換え体の生成によるばかりでなく、固層技術を用いた直接のペプチド合成で形成することもできる（例えば、Crelghton,T.E.(1984)Prot ein:Structures and Molecular Properties,pp55-60,W.H.Freeman and Co.,New York,MY参照）。タンパク質合成は手作業で行えるが、自動化することもできる。自動的な合成は、例えば、Applied Biosystem 431Aペプチドシンセサイザ（Pe rkin Elmer）を用いて行うことができる。ＮＨＬＰの種々の断片を個別に化学的に合成し、化学的方法を用いて結合して完全長分子を作り出してもよい。治療ＮＨＬＰとラット由来のリゾホスホリパーゼ（GI 1552244）との間に化学的及び構造的相同性が存在する。また、ＮＨＬＰは免疫反応、癌、及び炎症に関連するｃＤＮＡライブラリーにおいて発現される。従って、ＮＨＬＰは、細胞増殖、炎症、及び免疫反応の障害において一定の役割を果たしていると考えられる。従って、或る実施例では、細胞増殖の障害の治療又は予防のためにＮＨＬＰのアンタゴニストを患者に投与し得る。このような障害には、以下に限定されないが、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、滑液包炎、肝硬変、肝炎、混合型結合組織疾患（ＭＣＴＤ）、骨髄線維症、発作性夜間血色素尿症、真性多血症、乾癬、原発性血小板血症や、腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、奇形癌を含む癌、特に副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、子宮頚、胆嚢、神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌が含まれ得る。或る態様では、ＮＨＬＰに特異的に結合する抗体を、アンタゴニストとして直接的に用いたり、或いはＮＨＬＰを発現する細胞又は組織に薬物を送達するためのターゲティング又はデリバリー機構として間接的に用いることができる。別の実施例では、限定されないが、上述したもののような細胞増殖の障害の治療又は予防のために、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチドの相補配列を発現するベクターを患者に投与し得る。別の実施例では、任意のタイプの炎症、特に特定の疾患に関連する炎症の治療又は予防のためにＮＨＬＰのアンタゴニストを患者に投与し得る。このような特定の疾患には、以下に限定されないが、アジソン病、ＡＩＤＳ、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、貧血症、喘息、アテローム性動脈硬化症、気管支炎、胆嚢炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、萎縮性胃炎、腎炎、痛風、グレーブス病、過好酸球増加症、過敏性腸症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋又は心膜の炎症、変形性関節炎、骨粗鬆症、膵炎、腎嚢胞、多発筋炎、リウマチ性関節炎、強皮症、シェーグレン症候群、及び自己免疫性甲状腺炎が含まれる。或る態様では、ＮＨＬＰに特異的に結合する抗体を、アンタゴニストとして直接的に用いたり、或いはＮＨＬＰを発現する細胞又は組織に薬物を送達するためのターゲティング又はデリバリー機構として間接的に用いることができる。別の実施例では、限定されないが、上述したものを含む疾患に関連する炎症の治療又は予防のために、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチドの相補配列を発現するベクターを患者に投与し得る。更に別の実施例では、免疫反応の障害の治療又は予防のために、ＮＨＬＰのアンタゴニストを患者に投与し得る。このような免疫反応の障害には、以下に限定されないが、ＡＩＤＳ、アジソン病、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、強直性脊椎炎、アミロイド症、貧血症、喘息、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性甲状腺炎、気管支炎、胆嚢炎、接触性皮膚炎、クローン病、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、結節性紅斑、萎縮性胃炎、腎炎、グッドパスチャー症候群、痛風、グレーブス病、橋本甲状腺炎、過好酸球増加症、過敏性腸症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋又は心膜の炎症、変形性関節炎、骨粗鬆症、膵炎、多発筋炎、リウマチ性関節炎、強皮症、シェーグレン症候群、全身アナフィラキシー、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、潰瘍性大腸炎、ウェルナー症候群、及び癌と血液透析と体外循環との合併症；ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、原虫、及び蠕虫の感染症；及び外傷が含まれ得る。或る態様では、ＮＨＬＰに特異的に結合する抗体を、アンタゴニストとして直接的に用いたり、或いはＮＨＬＰを発現する細胞又は組織に薬物を送達するためのターゲティング又はデリバリー機構として間接的に用いることができる。別の実施例では、限定されないが、上述したものを含む免疫反応の障害の治療又は予防のために、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチドの相補配列を発現するベクターを患者に投与し得る。別の実施例では、本発明のタンパク質、アンタゴニスト、抗体、アゴニスト、相補配列、又はベクターの何れかを、他の適切な治療薬と組み合わせて投与し得る。当業者であれば、併用療法において用いるための適切な薬剤を従来の医薬上の原理に基づいて選択することができよう。複数の治療薬を組み合わせることにより、上述した種々の疾患の治療又は予防に効果のある相乗作用を与え得る。この方法を用いることにより、より少ない用量の各薬剤で、同じ治療効果を達成することができ、従って副作用の可能性を低下させることができる。ＮＨＬＰのアンタゴニストは、周知の方法により製造することができる。詳述すると、精製されたＮＨＬＰを用いて、抗体を作り出したり、或いはＮＨＬＰに特異的に結合するものを同定するべく薬物のライブラリーをスクリーニングすることができる。ＮＨＬＰの抗体も周知の方法を用いて製造することができる。このような抗体には、以下に限定されないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、及び一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、及びＦａｂ発現ライブラリーによって生成されるフラグメントが含まれる。中和抗体（即ち二量体形成を阻害するもの）は治療の用途に特に好適である。抗体を産生するため、ＮＨＬＰ或いは免疫学的特性を保持するその任意の一部、断片或いはオリゴペプチドを注射することによって、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス等を含む種々の宿主を免疫することができる。宿主の種に応じて、種々のアジュバントを免疫学的反応を高めるために用いることができる。そのようなアジュバントには、以下のものに限定はしないが、フロイントのアジュバント、水酸化アルミニウムのような無機質ゲルアジュバント、リゾレシチンのような界面活性物質アジュバント、プルロニックポリオールアジュバント、ポリアニオンアジュバント、ペプチドアジュバント、油性乳剤アジュバント、キーホールリンペットヘモシニアンアジュバント並びにジニトロフェノールアジュバントが含まれる。ＢＣＧ（カルメット‐ゲラン杆菌）及びコリネバクテリウム−パルヴム（Corynebacterium parvum）は有用なヒトアジュバントである。好ましくは、ＮＨＬＰに対する特異的抗体を誘発するために用いられるペプチドは、５個以上のアミノ酸、より好ましくは１０個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列を有し得る。また好ましくは、これらの配列は、自然タンパク質のアミノ酸配列の一部と同一であり、小形の自然発生の分子の全アミノ酸配列を含んでいてもよい。ＮＨＬＰアミノ酸の短いストレッチを、キーホールリンペットヘモシアニン及びキメラ分子に対して産生された抗体のような他のタンパク質の配列に融合してもよい。ＮＨＬＰのモノクローナル抗体は、培地内の連続株細胞によって抗体分子を産生する任意の技術を用いて調製できる。このような技術には、以下のものに限定はしないが、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術、及びＥＢＶ −ハイブリドーマ技術が含まれる（例えば、Kohler,G.等(1975)Nature 256:495- 497；Kozbor,D.等(1983)Immunol Methods 81:31-42；Cote,R.J.等(1983)Proc.Na tl.Acad.Sci.80:2026-2030；Cole,S.P.等(1984)Mol.Cell Biol.62:109-120参照）。さらに、適切な抗原特異性並びに生物活性を有する分子を得るための「キメラ抗体」の産生、即ちヒト抗体遺伝子へのマウス抗体遺伝子の結合のために開発された技術が用いられる（例えば、Morrison,S.L.等（1984）Proc.Natl.Acad.Sci. 81:6851-6855；Neuberger,M.S.等(1984)Nature 312:604-608;Takeda,S.等(1985) Nature 314:452-454参照）。別法として、一本鎖抗体の生成のための周知技術を適用して、ＮＨＬＰ特異的一本鎖抗体を作り出すことができる。近縁な特異性を有するが、イディオタイプの構成が異なる抗体は、無作為の免疫グロブリン組み合わせライブラリーからの鎖再編成（chain shuming）により生成することができる（例えば、Burton D.R.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci. 88:11120-3参照）。また抗体は、リンパ球集団でのin vivo産生を誘導することにより、或いは文献（例えば、Orlandi,R.等(1989),Proc.Natl.Acad.Sci.86:3833-3837；及びWint er,G.等1991,Nature 349:293-299参照）に開示されているような高度に特異的な結合試薬のパネルや組換え免疫グロブリンライブラリーをスクリーニングすることによっても生成することができる。ＮＨＬＰに対する特異結合部位を含む抗体フラグメントも生成することができる。このようなフラグメントには例えば、限定はしないが、抗体分子のペプシンによる消化で生成することができるF(ab')₂フラグメントや、F(ab')₂フラグメントのジスルフィド架橋を減らすことにより生成することができるFabフラグメントが含まれる。別法として、所望の特異性を有するモノクローナルFabフラグメントを迅速かつ容易に同定できるように、Fab発現ライブラリーを作製してもよい(例えばHuse,W.D.等（1989）Science 256:1275-1281参照)。所望の特異性を有する抗体を同定するための選別のために種々のイムノアッセイを用いることができる。確立された特異性を有するモノクローナル抗体或いはポリクローナル抗体のいずれかを用いる競合的結合アッセイ或いは免疫放射線測定法の種々のプロトコルが当分野ではよく知られている。このようなイムノアッセイでは、ＮＨＬＰとその特異的抗体との複合体の形成、並びに複合体形成の測定が行われる。特定のＮＨＬＰタンパク質上の２つの互いに非干渉なエピトープに対して反応するモノクローナル抗体を用いる二部位モノクローナルベースイムノアッセイが好適であるが、競合的結合アッセイも用いられる（Maddox，前出）。本発明の別の実施例では、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチド、またはその任意の断片やアンチセンス配列を、治療目的で用いることができる。或る態様では、このタンパク質の合成を阻害することが望ましいような状況において、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチドに対するアンチセンスを用いることができる。詳述すると、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチドに対するアンチセンス配列で細胞を形質転換することができる。従って、アンチセンス配列を用いて、ＮＨＬＰ関連の組織損傷を予防したり、遺伝子機能の調節を達成することができる。このような技術は現在周知となっており、センス又はアンチセンスオリゴマー、若しくはより大きな断片を、ＮＨＬＰコーディング配列のコード領域や調節領域の種々の位置から設計することができる。レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペス或いはワクシニアウイルスに由来する発現ベクター、或いは種々の細菌性プラスミドに由来する発現ベクターは、標的の器官、組織、または細胞群へのヌクレオチド配列の送達のために用いられる。当業者によく知られた方法を用いて、ＮＨＬＰをコードする配列のアンチセンスを発現する組換えベクターを作り出すことができる（例えば、Sambrook等（上記）及びAusubel等（上記）参照）。所望のＮＨＬＰ断片を高レベルで発現する発現ベクターを細胞または組織にトランスフェクトすることにより、ＮＨＬＰをコードする遺伝子の機能を停止させることができる。このような作製物は、翻訳不可能なセンス配列或いはアンチセンス配列で細胞に導入するために用いることができいる。このようなベクターは、ＤＮＡへ組み込まれない場合ですら、全ての複製物が内在性ヌクレアーゼにより分解されるまで、ＲＮＡ分子を転写し続ける。このような一過性の発現は、非複製ベクターでも１ヶ月以上、適当な複製エレメントがベクター系の一部である場合には更に長い期間継続し得る。上述のように、ＮＨＬＰをコードする配列の制御領域、即ちプロモータ、エンハンサ或いはイントロンに対するアンチセンス分子、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはＰＮＡを設計することにより遺伝子発現を改変することができる。転写開始部位、例えばリーダー配列の＋１０〜−１０領域の間に由来するオリゴヌクレオチドが好適である。また、転写産物がリボソームへの結合するのを防止することによりｍＲＮＡの翻訳を阻止するアンチセンス分子も設計される。同様に、「三重らせん」塩基対合法を用いて阻害を達成することができる。三重らせん対合は、二重らせんが十分にほどけないことでポリメラーゼ、転写因子、或いは調節分子が結合できないようにする。三重らせんＤＮＡを用いた最近の治療法の進歩は、文献に記載されてきた（例えばHuber,B.E.及びB.I.Carr,Molecular and Immun ologic Approaches ,Futura Publishing Co,MtKisco NY,pp．163-177のGee,J.E. 等(1994)参照）。リボザイムはＲＮＡの特異的切断を触媒することができる酵素性ＲＮＡ分子である。リボザイムの作用機序では、相補的標的ＲＮＡへのリボザイム分子の配列特異的ハイブリダイゼーションが行われ、その後エンドヌクレアーゼによる切断（endonucleolytic cleavage）がなされる。発明の範囲内には、ＮＨＬＰのエンドヌクレアーゼによる切断を特異的かつ効果的に触媒し得る人工合成のハンマーヘッド型リボザイム分子も含まれている。任意のＲＮＡ標的可能部分内の特異的なリボザイム切断部位を、初めに、配列 GUA、GUU並びにGUCが後続するリボザイム切断部位に対する標的分子を調べることによって同定する。一度同定されると、切断部位を含む標的遺伝子の領域に対応する１５〜２０個のリボヌクレオチドの間の短いＲＮＡ配列を、そのオリゴヌクレオチドの機能を停止させる２次構造の特徴について評価することが可能となる。候補の標的部分の適切性も、リボヌタレアーゼ保護アッセイを用いて相補的なオリゴヌクレオチドとのハイブリッド形成に対する接触性をアッセイすることにより評価することができる。本発明の相補的リボ核酸分子及びリボザイムは、ＲＮＡ分子を合成するのための当分野で周知の方法により調製することができる。これらの技術には、固相ホスホラミダイト（phosphoramidite）化学合成のようなオリゴヌクレオチドの化学的合成技術が含まれる。この他、ＲＮＡ分子を、ＮＨＬＰをコードするＤＮＡ配列のin vivo及びin vitro転写により生成することができる。このようなＤＮＡ配列は、Ｔ７或いはＳＰ６のような適切なＲＮＡポリメラーゼプロモーターを有する多種のベクターに組み込むことができる。更に別の方法として、構成的に或いは誘導的にアンチセンスＲＮＡを合成するアンチセンスｃＤＮＡ作成物を、株細胞、細胞或いは組織内に導入することができる。ＲＮＡ分子は、その細胞内安定性を高め及び半減期を長くするために修飾することができる。可能な修飾には、限定はしないが、その分子の５’末端か３’末端、或いはその両方へのフランキング配列の付加や、分子のバックボーン内においてホスホジエステラーゼ結合ではなくホスホロチオネート（phosphorothioate ）或いは２’Ｏ−メチルを使用することが含まれる。このコンセプトは、ＰＮＡ生成固有のものであり、内在性エンドヌクレアーゼにより容易に認識されないアデニン、グアニン、シチジン、チミン、及びウリジンの、アセチル−、メチル− 、チオ−形態、及び類似の改変形態とともに、イノシン、キュエオシン(queosin e)、及びワイブトシン（Wybutosine）のような従来あまり用いられなかった塩基を含めることによって、これら全ての分子に拡張することができる。細胞或いは組織内にベクターを導入するための方法には、上述の方法が含まれ、これらの方法は、in vivo、in vitro、及びex vivoの使用に対しても同様に適切なものである。ex vivo治療法の場合には、患者から採取された幹細胞にベクターを導入し、自家移植用のクローンとして増殖して同じ患者に戻す方法がある。またトランスフェクションによるデリバリー、リポソームによるデリバリーは、当分野でよく知られている。上述の治療法の任意のものは、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ウサギ、サル、及び最も好ましくはヒトのような哺乳類を含む、任意の適切な被験体に適用することができる。本発明の更に別の実施例は、上述の治療効果のいずれかを発揮させるべく、薬学的に許容される担体とともに医薬品組成物を投与することに関連する。このような医薬品組成物は、ＮＨＬＰ、ＮＨＬＰに対する抗体、ＮＨＬＰの擬似物、アゴニスト、アンタゴニスト、又はインヒビターからなるものであり得る。この医薬品組成物は、単体で、或いは例えば安定剤のような１種以上の他の薬剤と組み合わせて、任意の無菌の生体適合性製薬用担体に含めて投与される。このような担体には、限定はしないが、生理食塩水、緩衝食塩水、ブドウ糖或いは水が含まれる。これらの分子は、患者に対して、単体で、或いは他の薬品やホルモンと結合して、賦形剤或いは製薬学的に許容される担体と混合される他の医薬品組成物に含めて投与され得る。本発明の或る実施例では、医薬上に許容される担体とは、製薬学的に不活性なものである。本発明で用いられる医薬品組成物の投与経路には、以下の経路に限定されないが、経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、髄内投与、くも膜下内投与、心室内投与、経皮投与、皮下投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、経腸投与、局所投与、舌下投与、或いは直腸内投与が含まれ得る。活性成分に加えて、これらの薬品組成物は、薬学的に用いられ得る調合物内への活性化合物の処理を容易にする賦形剤及び補助剤を含む適切な製薬学的に許容される担体を含み得る。調合或いは投与に関する技術の詳細は、“Remington's Pharmaceutical Sciences”(Maack Publishing Co,Ea ston PA)の最新版において見ることができる。経口投与用の医薬品組成物は、当分野でよく知られる製薬学的に許容される担体を用いて適切な剤形に製剤される。このような担体により、薬品組成物は、治療を受ける患者による経口及び鼻腔摂取のための、錠剤、丸剤、カプセル剤、液体剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液或いは類似の製剤として処方される。経口投与するための製剤は、活性化合物と固形の賦形剤とを結合することによって得ることができるが、所望に応じて、必要なら適切な補助剤を添加した後、得られた混合物を粉砕し、顆粒の混合物を処理して、錠剤或いは糖衣剤核を得ることができる。適切な賦形剤は、ラクトース、スクロース、マンニトール或いはソルビトールを含む砂糖のような糖質或いはタンパク質充填剤、とうもろこし、小麦、米、じゃがいも等からのでんぷん、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース或いはカルボキシルメチルセルロースナトリウムのようなセルロース、アラビアゴム或いはトラガカントのようなゴム、並びにゼラチン或いはコラーゲンのようなタンパク質である。必要ならば、架橋結合したポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸ナトリウムのようなアルギン酸或いはアルギン酸ナトリウムや、その塩のような、崩壊剤或いは可溶化剤が加えられる。糖衣剤核は、濃縮砂糖溶液のような適切な錠皮を与えられるが、溶液はアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル剤、ポリエチレングリコール並びにまた二酸化チタン、ラッカー溶液及び適切な有機溶剤或いは溶剤混合物が含み得る。錠剤の識別のため、すなわち活性化合物の量、すなわち投与量を特徴付けるために染料或いは色素が錠剤或いは糖衣錠皮に加えられてもよい。経口投与可能な製剤は、ゼラチンからなるプッシュフィットカプセル及びゼラチンからなる柔らかい、密封されたカプセル、並びにグリセロール或いはソルビトールのような錠皮を含む。プッシュフィットカプセルは、ラクトース或いはでんぷんのような充填剤或いは結合剤、タルク或いはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、並びに付加的には安定剤と混合された活性処方組成物を含み得る。柔らかいカプセルでは、活性化合物は、安定剤があるなしにかかわらず、脂肪油、液体パラフィン、液体ポリエチレングリコールのような適切な液体に溶解或いは懸濁される。非経口投与用の製剤は、水溶性の活性化合物の水溶液を含む。注射用として、本発明の薬品組成物を水溶液、好適にはハンクの溶液、リンゲル溶液或いは生理緩衝食塩水のような生理学的に適合性の緩衝液に入れて製剤することができる。水性の注入懸濁剤は、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール或いはデキストランのような懸濁剤の粘性を高める物質を含み得る。更に、活性成分の懸濁液は、適切な油性注入懸濁剤として調製される。適切な親油性の溶媒或いは媒介物は、胡麻油のような脂肪油や、オレイン酸エチル、トリグリセリド或いはリポソームのような合成脂肪酸エステルを含む。また懸濁剤は、所望に応じて、それにより溶解度を増加し、非常に濃縮された溶液の調製ができるようになる適切な安定剤或いは薬剤を含んでもよい。局所的投与または経鼻粘膜投与用には、浸透される特定の障壁に対して適切な浸透剤を用いて調合が行われる。このような浸透剤は、一般に周知である。本発明の薬品組成物は周知の方法、例えば従来の混合処理、溶解処理、顆粒化処理、糖衣形成処理、研和処理、乳化処理、封入処理(entrapping)処理或いは凍結乾燥処理により製造される。この医薬品組成物は塩類として提供されることもあり、限定はしないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等を含む、多くの酸とともに形成することができる。塩は、対応する遊離塩基形態である水性或いはプロトニック溶剤において、より可溶性が高くなる傾向がある。他の場合には、好適な製剤は、１ｍＭ〜５０ｍＭのヒスチジン、０．１％〜２％のショ糖、使用前に緩衝剤と結合させたｐＨ範囲４．５〜５．５にある２％〜７％のマンニトールにおける凍結乾燥粉末である。医薬上に許容される担体で製剤された本発明の化合物を含む組成物は、調製された後、適切な容器内に入れて、さらに提示した疾病状態の治療のためにラベル付けすることができる。ＮＨＬＰの投与の場合、このようなラベルには、投与の量、頻度、方法が表示される。本発明において使用するために適切な医薬品組成物は、活性成分を所望の目的を達成するための有効量含む組成物である。有効量の決定は、当業者の能力の範囲内で十分行うことができる。任意の化合物について、治療的有効量は、初めに、新生物細胞、或いは通常マウス、ウサギ、イヌ、ブタのような動物モデルの何れかの細胞培地のアッセイから推定される。次いで、このような情報を用いて、ヒトにおける有効量や投与経路を決定することができる。治療的有効量とは、症状や状態を改善するタンパク質、その抗体、アンタゴニスト、またはインヒビターの量である。そのような化合物の毒性及び治療的有効性は、例えばＬＤ５０（個体群の５０％の致死投与量）及びＥＤ５０（個体群の５０％における治療的有効量、５０％有効量）を決定するための、細胞培地或いは実験動物における標準的な製薬学的方法により決定することができる。毒性と治療有効性との間の投与量比は治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。大きな治療指数を示す医薬品組成物が好ましい。これらの細胞培地のアッセイ及び付加的な動物研究から得られるデータは、ヒトへの使用に対する投与量の範囲を決める際に用いることができる。そのような化合物の投与量は、毒性がほとんど或いは全くなく、ＥＤ５０を達成する循環濃度の範囲内にあることが望ましい。投与量は、用いられる剤形、患者の感受性並びに投与経路に応じてこの範囲内で変わってくる。正確な投与量は治療されるべき患者を考慮して個々の医師により選択される。投与量及び投薬量は、十分なレベルの活性成分を与え、かつ所定の効果を維持するために調節される。考慮すべき付加的な要因は、疾患状態の重症度、または患者の年齢、体重並びに性別、食事、投与の時間及び頻度、併用する薬剤、反応感受性、並びに治療への耐性／反応を含む。長期的に作用する薬品組成物は３〜４日毎に、１週間毎に、或いは半減期及び特定の処方のクリアランス速度に応じて２週間に１度投与してもよい。通常の投与量は０．１〜１００，０００μｇの範囲にあって、全投与量は最大約１ｇであり、投与経路に応じて変わってくる。特定の投与量或いは送達の方法に関する手引きは、当分野の実施者が通常入手できる文献において見出すことができる。当業者なれば、ヌクレオチドに対しては、タンパク質やインヒビター用の剤形とは異なる剤形を採用するであろう。同様に、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの送達方式は、特定の細胞、状態、位置等によって決まってくる。診断別の実施例において、ＮＨＬＰに特異的な抗体は、ＮＨＬＰの発現を特徴とする状態や疾病の診断や、ＮＨＬＰで治療を受けている患者のモニタリングのためのアッセイにおいて役立つ。診断目的で有用な抗体は、上述の治療用のものと同じように調製することができる。ＮＨＬＰの診断的測定法には、ヒトの体液、細胞或いは組織の抽出物においてＮＨＬＰを検出するために抗体或いは標識を利用する方法が含まれる。本発明のポリペプチド及び抗体は、修飾したものでも、修飾なしでも用いることができ、共有結合、或いは非共有結合かのいずれかでリポーター分子と結合することにより標識することができる。種々のリポーター分子が周知となっており、その幾つかについては上記した。例えばELISA（酵素結合免疫測定法）、RIA（ラジオイムノアッセイ）並びにFA CS（蛍光表示式細胞分取器法）を含む、ＮＨＬＰを測定するための種々のプロトコルが当分野では周知であり、これによってＮＨＬＰ発現の変化や異常を診断するための基礎が得られる。ＮＨＬＰの発現の正常値、つまり標準値は、哺乳類、好ましくはヒトの正常被験者から得られる体液或いは細胞抽出物とＮＨＬＰに対する抗体とを、複合体形成に適した条件の下で結合することによって得ることができる。標準の複合体形成量は、種々の方法、好ましくは測光手段を用いることにより定量することができる。被験者、対照標準、及び生検組織からの患部組織サンプルにおいて発現されたＮＨＬＰの量を、標準値と比較する。標準値と被験者の値との偏差で、疾病診断のパラメータが確立される。本発明の別の実施例では、ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチドを、診断目的で用いることができる。使用できるポリヌクレオチドには、オリゴヌクレオチド配列、アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡ分子、及びペプチド核酸（ＰＮＡ）が含まれる。このポリヌクレオチドは、ＮＨＬＰの発現が疾病と相関性を有する生検組織における遺伝子発現を検出し、定量するために用いられる。診断的測定は、ＮＨＬＰが存在、不存在、及び過剰発現の何れの状態にあるかを区別したり、治療的介入の際にＮＨＬＰレベルの調節をモニタリングするのに役立つ。或る態様では、ＮＨＬＰまたは近縁な分子をコードする、ゲノム配列を含むポリヌクレオチド配列を検出できるハイブリダイゼーションプローブ或いはＰＣＲプローブを用いて、ＮＨＬＰをコードする核酸配列を同定することができる。そして、そのプローブの特異性、即ち、そのプローブが非常に高度な保存領域（例えば５’調節領域における１０個の独特のヌクレオチド）と、保存的である度合いの低い領域（例えば特に３’領域におけるシステイン残基の間の領域）の何れに由来するのかということ、及びハイブリダイゼーション或いは増幅の（高い、中程度の或いは低い）厳密性によって、そのプローブが自然発生ＮＨＬＰのみを同定するものであるか、或いはアレル配列や近縁な配列も同定するものであるかということが決まってくる。プローブは、近縁なインヒビターをコードする配列を検出するためにも用いることができ、好ましくは、これらのＮＨＬＰをコードする任意の配列から得られるヌクレオチドを少なくとも５０％含むべきである。本発明のハイブリダイゼーションプローブは、配列番号：２又は配列番号：４のヌクレオチド配列か、自然発生ＮＨＬＰのイントロン、プロモータ、及びエンハンサーエレメントを含むゲノムの配列に由来するものであり得る。ＮＨＬＰをコードするＤＮＡに対して特異的なハイブリダイゼーションプローブの作製のための他の手段には、ＮＨＬＰやＮＨＬＰ誘導体をコードする核酸配列を、ｍＲＮＡプローブ生成のためのベクターにクローン化する方法がある。このようなベクターは周知で市販されており、適切なＲＮＡポリメラーゼや適切な放射性標識ヌクレオチドを付加することにより、in vitroでのＲＮＡプローブを合成のために用いることができる。ハイブリダイゼーションプローブは種々のリポータ分子により標識することができ、この標識には、³²Ｐや³⁵Ｓのような放射性核種、アビジン／ビオチン結合系によりプローブに結合するアルカリホスファターゼのような酵素標識等が含まれる。ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチド配列を、ＮＨＬＰの発現に関連する疾患の診断のために用いることができる。このような疾患の例には、以下に限定されないが、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、滑液包炎、肝硬変、肝炎、混合型結合組織疾患（ＭＣＴＤ）、骨髄線維症、発作性夜間血色素尿症、真性多血症、乾癬、原発性血小板血症や、腺癌、白血病、黒色腫、骨髄腫、肉腫、及び奇形癌のような癌、特に副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、子宮頚、胆嚢、神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌のような細胞増殖の障害；任意のタイプの炎症、特に、アジソン病、ＡＩＤＳ、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、貧血症、喘息、アテローム性動脈硬化症、気管支炎、胆嚢炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、萎縮性胃炎、腎炎、痛風、グレーブス病、過好酸球増加症、過敏性腸症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋又は心膜の炎症、変形性関節炎、骨粗鬆症、膵炎、腎嚢胞、多発筋炎、リウマチ性関節炎、強皮症、シェーグレン症候群、及び自己免疫性甲状腺炎のような特定の疾患に関連する炎症；及びＡＩＤＳ、アジソン病、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、強直性脊椎炎、アミロイド症、貧血症、喘息、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性甲状腺炎、気管支炎、胆嚢炎、接触性皮膚炎、クローン病、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、結節性紅斑、萎縮性胃炎、腎炎、グッドパスチャー症候群、痛風、グレーブス病、橋本甲状腺炎、過好酸球増加症、過敏性腸症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋又は心膜の炎症、変形性関節炎、骨粗鬆症、膵炎、多発性筋炎、リウマチ性関節炎、強皮症、シェーグレン症候群、全身アナフィラキシー、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、潰瘍性大腸炎、ウェルナー症候群、及び癌と血液透析と体外循環の合併症のような免疫反応の障害；ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、原虫、及び蠕虫の感染症；及び外傷が含まれる。ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチド配列は、ＮＨＬＰ発現の変化を検出するための生検組織や体液を試験するための、サザンブロット法或いはノーザンブロット法、ドットブロット法或いは他の膜ベース技術、ＰＣＲ技術、ディップスティック試験法（試験紙法）、ピン或いはチップ技術及びELISAアッセイにおいて用いることができる。このような定性的或いは定量的試験方法は当分野ではよく知られている。特定の態様では、関連する疾患、特に上述してもののような疾患の存在を検出するアッセイにおいて、ＮＨＬＰをコードするヌクレオチド配列が有用であり得る。ＮＨＬＰをコードするヌクレオチド配列を標準的な方法で標識し、ハイブリダイゼーション複合体の形成に適した条件の下で患者の体液や組織サンプルに加える。適切なインキュベーション時間の経過後、このサンプルを洗浄しシグナルを定量して、標準値を比較する。生検サンプルまたは抽出サンプルにおけるシグナルの量が、比較できる対照サンプルのシグナル量と有意に異なっている場合、このヌクレオチド配列はサンプルのヌクレオチド配列とハイブリダイズしており、サンプルにおけるＮＨＬＰをコードするヌクレオチド配列のレベルの変化が存在することは、関連疾患の存在を示している。このようなアッセイは、動物実験、臨床試験、または個々の患者の治療のモニタリングにおける特定の治療措置の効果を評価するために用いることもできる。ＮＨＬＰの発現が関係する疾病の診断の基礎を得るために、正常な、或いは標準の発現プロフィールを確立する。この標準プロフィールは、動物或いはヒト何れかの正常な被験者から得られる体液或いは細胞抽出物を、ハイブリダイゼーション或いは増幅に適切な条件下で、ＮＨＬＰをコードする配列又はその一部分と結合することにより確立される。標準のハイブリッド形成量は、既知の量の実質的に精製されたＮＨＬＰが用いられる同一の実験で得られる値と、正常被験者に対して得られる値とを比較することにより定量することができる。正常なサンプルから得られた標準値は、疾病の症状を示す患者からのサンプルから得られる値と比較することができる。標準値と被験者値との偏差を用いて疾病の存在を確認する。ひとたび疾患が確認され、治療プロトコルが開始されると、患者での発現レベルが正常な患者において観察されるレベルに近づき始めたか否かを評価するために、このようなアッセイが定期的に繰り返される。継続的なアッセイから得られる結果を用いて、数日間或いは数ヶ月の期間にわたる治療効果を知ることができる。癌については、患者の生検組織において転写物が比較的少ない量存在することが疾病の発生の素因を示し、つまり実際の臨床的症状が現れる前に疾病を検出する手段となり得る。この型の一層確定的な診断により、医療従事者が予防的処置を講じたり、より早期に積極的な治療を開始することが可能となり、疾病の発生や更なる進行を予防することができるようになり得る。ＮＨＬＰをコードするオリゴヌクレオチドの別の診断目的の使用では、ＰＣＲを使用することがある。このようなオリゴマーは一般には化学的に合成するが、酵素を用いて作製したり、或いは組換え体を起源として作り出すこともできる。オリゴマーは、特定の遺伝子或いは状態を識別するために最適な条件下で用いられる２つのヌクレオチド配列、即ちセンス方向（５’→３’）のヌクレオチド及びアンチセンス方向（３’← ５’）のヌクレオチドからなる。同一の２つのオリゴマー、入れ子オリゴマーの組、或いはオリゴマーの縮重プールでさえ、近縁なＤＮＡまたはＲＮＡ配列の検出や定量のためのより厳密性の低い条件の下であっても用いることができる。さらにＮＨＬＰの発現を定量するための方法には、放射性標識（radiolabelin g）或いはビオチン標識ヌクレオチドの利用、コントロールの核酸の同時増幅（c oamplification）の利用、並びに実験結果を補完して引かれた標準的なグラフ曲線の利用も含まれる（例えば、Melby,P.C.等1993J.Immunol Methods,159:235-44 ;Duplaa,C.等(1993)Anal.Biochem.229-236参照）。多数のサンプルの定量は、EL ISA形式の連続アッセイを実行することにより一層迅速に行うことができる。このアッセイでは目的のオリゴマーが様々な希釈溶液中に存在し、分光光度計を用いる分析或いは比色分析反応により迅速に定量することができる。別の実施例では、ここに開示する任意のポリヌクレオチド配列を起源とするオリゴヌクレオチドをマイクロアレイにおける標的として用い得る。マイクロアレイを用いることにより、多くの遺伝子の発現レベルを同時にモニタし（転写物イメージを生成する）、また遺伝子の変異体、変異及び多形性を同定することができる。この情報は、遺伝子の機能の決定や、疾病の遺伝的な基礎の理解、疾病の診断、及び治療薬の開発や活性のモニタリングにおいて役立つ。マイクロアレイは、周知の方法を用いて準備され、利用され、解析される(例えば、Brennan,T.M.等(1995)米国特許第5,474,796号;Schena,M．等.(1996)Proc. Natl.Acad.Sci.93:10614-10619；Baldeschweiler等(1995)PCT出願WO95/251116； Shlon,D等(1995)PCT出願WO95/35505；Heller,R.A．等.(1997)Proc.Natl.Acad.Sc i.94:2150- 55；及びHeller,M.J.等(1997)米国特許第5,605,662号参照)。本発明の別の実施例では、ＮＨＬＰをコードする核酸配列を用いて、自然発生のゲノム配列マッピングのためのハイブリダイゼーションプローブを作り出すこともできる。この配列を、特定の染色体、染色体の特定の領域、又は人工染色体作成物にマッピングすることができる。前記人工染色体作成物には、例えばヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母菌人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、細菌性Ｐ１作成物又は一本鎖染色体ｃＤＮＡライブラリーがある（例えば、 Price,C.M.(1993)Blood Rev.7:127-134，及びTrask,B.J.(1991)Trends Genet.7: 149-154参照）。蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）は、他の染色体マッピング技術及び遺伝子地図データと関係を有し得る（例えば、Meyers,R.A.(ed.)Molecular Biology and Biotechnology ,VCH Publishers New York,NY,pp.965-968におけるH einz-Ulrich等を参照）。遺伝子地図データの例は、種々の科学誌や、Online Me ndelian Inheritance in Man（OMIM）に見ることができる。物理的染色体地図上でのＮＨＬＰをコードする配列の位置と、特定の疾病（または特定の疾病の素因）との相関関係を助けとして、ある遺伝病が関係するＤＮＡの領域の限界決定ができる。本発明のヌクレオチド配列を用いて、正常者とキャリアまたは患者との遺伝子配列の違いを検出することができる。染色体調製物のin situハイブリダイゼーション及び確定された染色体マーカーを用いる連鎖解析のような物理的地図作成技術は、遺伝子地図を延長するために大変重要である。多くの場合、特定のヒト染色体の数或いは腕が未知であっても、マウスのような別の哺乳類種の染色体上の遺伝子配置から、関連するマーカーがわかる。新しい配列は、物理的マッピングにより染色体のアーム、或いはその一部へ割当てることができる。これは位置クローニング或いは他の遺伝子発見技術を用いて疾患遺伝子を調査する研究者に貴重な情報を提供する。ひとたび毛細血管拡張性運動失調（AT ）のような疾患或いは症候群が、特定のゲノム領域へ、例えばATならば11q22-23 （例えばGatti,R.A.等（1988）Nature 336:577-580参照）へ、遺伝子連鎖によって粗い局所化がなされれば、その領域にマッピングされる任意の配列は、さらなる研究のための関連する遺伝子、或いは調節遺伝子ということになる。本発明のヌクレオチド配列は、正常者とキャリアまたは患者との間の、転座、逆位等による染色体位置の違いを検出するために用いることもできる。本発明の別の実施例では、ＮＨＬＰや、その触媒作用性または免疫原性フラグメント或いはオリゴペプチドを、種々の薬物スクリーニング技術において治療用化合物のスクリーニングのために用いることができる。そのような試験において用いられるフラグメントは、溶液に遊離した形態か、固体支持体へ付着したものか、細胞表面へ付着したものか、或いは細胞内に存在するものであり得る。ＮＨＬＰと試験される薬剤との結合複合体形成が測定され得る。別の薬物スクリーニング技術が、ＮＨＬＰポリペプチドへの適切な結合親和性を有する化合物の高スループットスクリーニングのために用いることができる( 例えば、Geysen等(1984)PCT出願WO84/03564参照)。この方法をＮＨＬＰに適用する場合には、多数の異なる小形ペプチドの試験用化合物を、プラスチックピン或いは他の表面のような固体基質上で合成する。ポリペプチド試験用化合物をＮＨＬＰ又はその断片と反応させ、洗浄する。次いで結合ＮＨＬＰを当分野で周知の方法により検出する。また、前述の薬物スクリーニング技術において使用するために、精製ＮＨＬＰをプレート上に直接コーティングすることもできる。この他、ペプチドを捕捉し固体支持体上にペプチドを固定するために非中和抗体を用いることができる。別の実施例では、ＮＨＬＰに結合し得る中和抗体が、ＮＨＬＰとの結合について試験化合物と特異的に競合する競合的薬物スクリーニングアッセイを使用することができる。このように、抗体を用いて、１または２以上のＮＨＬＰと共通のエピトープを有する任意のペプチドの存在を検出することができる。更に別の実施例では、ここに開示するＮＨＬＰをコードするヌクレオチド配列は、その新技術が、以下に限らないが、例えばトリプレット遺伝暗号及び特異的塩基対合相互作用のような特性を含む、現在周知のヌクレオチド配列の特性に基づく技術であれば、まだ開発されていない分子生物学的技術においても用いることができる。以下に示す本発明の実施例は、単なる例示であって、本発明をこの実施例に限定しようとするものではない。実施例実施例として、インサイト社クローンNo.2676650が単離された起源であるKIDN NOT19 ｃＤＮＡライブラリーの調製及び配列決定について説明する。但し、LIFE SEQ^TMデータベースにおけるライブラリーのｃＤＮＡの調製及び配列決定方法は時間の経過と共に変わってきており、特定の時期に使用可能であったキット、プラスミド、及び機器の使用に関連する調製及び配列決定法は漸次変更され、その変更が解析されてきている。１ KIDNNOT19 ｃＤＮＡライブラリーの作製 KIDNNOT19 ｃＤＮＡライブラリーは、年齢６５歳の白人男性から腎尿管切除術及び診査開腹の際に切除された非腫瘍性腎臓組織から単離された7.5ngのポリＡＲＮＡを用いて作製した。関連腫瘍組織についての病理は、グレード１明細胞型の腎細胞癌を呈しており、これは左腎の上側極にふ入り集塊を形成していた。上層の腎臓被膜には併発していなかった。５箇所の顕微鏡検査的には類似した付随小節も認められた。肺門リンパ節と同様に、腎静脈、動脈、及び尿管には併発していなかった。副腎には顕著な異常は認められなかった。更にこの患者は腹部の痛みを訴えていた。患者の既往歴には、良性高血圧症、脳血管障害、臍帯ヘルニア、腹部の悪性黒色腫、網膜裂孔、及び良性大腸新生物が含まれていた。また従前に患者が受けていた外科手術は、臍帯ヘルニア修復、回旋腱板修復、眼瞼形成術、及び精管切除術であった。患者には、ベラパミル塩酸塩、Zestril（リシノプリル）、アスピリン、及びニンニク錠が投薬されていた。家族歴には、父親の前立腺癌；母親の心筋梗塞、脳血管障害、及びアテローム性動脈硬化性冠動脈疾患：及び兄弟の筋梗塞及びアテローム性動脈硬化性冠動脈疾患が含まれていた。冷凍組織を、Brinkmann Homogenizer Polytron PT-3000（Brinkmann Instrume nts,Westbury.NY）を用いて、フェノール及びグアニジンイソチオシアネートの単一組成溶液であるTrizol試薬（Trizol（Cat.#10296-028;LIFE TECHNOLOGIES^TM ）10mlに対して組織1g）においてホモジナイズし溶解した。氷冷しながら短時間インキュベートした後、クロロホルムを添加し（1:5v/v）、溶解産物を遠心分離にかけた。上層のクロロホルム層を新たな試験管に取り出して、イソプロパノールでＲＮＡを抽出し、DEPC処理した水に再懸濁して、37℃で25分間ＤＮアーゼ処理した。KIDNNOT19 ｃＤＮＡライブラリーの調製では、ＲＮＡを0.3Mの酢酸ナトリウム及び2.5倍量のエタノールを用いて沈殿させ、Qiagen Oligotexkit（QIAGE N,Inc.，Chatsworth,CA）を用いて単離し、これをKIDNNOT19 ｃＤＮＡライブラリーの作製に用いた。このｍＲＮＡは、SuperScript Plasmid System for cDNA Synthesis and Plas mid Cloning（Cat.#18248-013,Gibco/BRL）の推奨プロトコルに従って取り扱った。CONUTUT01 ｃＤＮＡはSepharose CL4Bカラム（Cat.#275105-01,Pharmacia ）で分画化し、４００ｂｐを越えるｃＤＮＡをpSportＩにリゲートした。次にこのプラスミドpSportＩをDH5a^TMコンピテント細胞（Cat.#18258-012,Gi bco/B RL ）に入れて形質転換させた。２ｃＤＮＡクローンの単離及び配列決定プラスミドＤＮＡは細胞から放出され、REAL Prep 96 Plasmid Kit（Catalog #26173,QIAGEN,Inc.）を用いて精製した。推奨プロトコルを用いたが、以下の点を変更した。（１）２５mg/Lのカルベニシリン及び０．４％のグリセロールと共に１mlの滅菌Terrific Broth（Catalog#22711,Life Technologies^TM,Gaithersbu rg,MD）において細菌を培養した。（２）植菌の後、培地を１９時間インキュベートし、インキュベーションの終わりに、細胞を０．３mlの溶解バッファに溶解した。（３）イソプロパノール沈殿の後、プラスミドＤＮＡペレットを０．１ml の蒸留水に再懸濁した。プロトコルの最終ステップの後、サンプルを９６穴ブロックに移し４℃で保管した。このｃＤＮＡの配列決定は、Peltier Thermal Cyclers（PTC200 from MJ Rese arch,Watertown,MA）及びApplied Biosystems 377 DNA Sequencing Systemsと組み合わせてHamilton Micro Lab 2200（Hamilton,Reno,NV）を用いてSangerらの方法（1975,J.Mol.Biol.94:441f）により行い、読み枠を決定した。３ｃＤＮＡクローン及びそれらの類推されるタンパク質の相同性検索配列表のヌクレオチド配列及び、それらから類推されるアミノ酸配列を問い合わせ配列として用いて、例えばGenBank、SwissProt、BLOCKS、及びPima IIのようなデータベースを検索した。これらのデータベースには既に同定された配列が注釈付きで含められており、BLAST（Basic Local Alignment T oolを表す）を用いて相同性（類似性）を有する領域をこのデータベースのなかから検索した（Altschul S.F.(1993)J.Mol.Evol.36:290-300;Altschul.S.F.等(1 993)J.Mol.Biol.215:403-410）。 BLASTはヌクレオチド及びアミノ酸配列の両方のアライメントを生成して配列類似性を決定する。そのアライメントの局所性のために、BLASTは厳密な一致、すなわち原核生物（細菌）や真核生物（動物、菌類、又は植物）を起源とするホモログを求める際に特に有効である。一次配列パターンや二次構造ギャップペナルティを処理する際には、本明細書に一体に引用されたSmith等（1992,Protein Engineering 5:35-51）に記載のもののような他のアルゴリズムを用いることができる。本明細書に開示された配列の長さは少なくとも49ヌクレオチドであり、不必要な塩基は12％以下である（ここで、ＮはＡ、Ｃ、Ｇ、又はＴ以外と記録されたものである）。 BLAST法は、本明細書に一体に引用されたKarlin等（前出）に詳細に記載されているように、問い合わせ配列とデータベースの配列の一致を検索する。BLAST は発見したあらゆる配列の一致の統計的有意性を評価して、ユーザが選択した有意性の閾値を満たす一致のみを報告する。本出願での閾値は、ヌクレオチドで１０^-25、ペプチドで１０^-14に設定した。インサイト社のヌクレオチド配列を、霊長類（pri）、げっ歯類（rod）、及び他の哺乳類配列（mam）のGenBankデータベースで検索した。次に同じクローンから類推されたアミノ酸配列を、GenBankの機能性タンパク質データベース、哺乳類（mamp）、脊椎動物（vrtp）、及び真核生物（eukp）で、相同性について検索した。更に、保存的タンパク質モチーフをコードする遺伝子配列を同定するために、例えばBlock 2 Bioanalysis Program（Incyte,Palo Alto,CA）のような適切な解析プログラムを用いてｃＤＮＡライブラリーから同定された配列を解析し得る。このモチーフ解析プログラムは、Swiss-Protデータベース及びPROSITEに含められた配列情報に基づいており、ゲノムの配列又はｃＤＮＡの配列から翻訳された特性化されていないタンパク質の機能を決定するメソッドである（例えばBalroc h,A.等（1997）Nucleic Acids Res.25:217-221;及びAttwood,T.K.等(1997)J.Che m.Inf.Comput.Sci.37:417-424を参照されたい）。PROSITEは、多岐したタンパク質における共通の機能的又は構造的ドメインを同定するために用いられ得る。このメソッドは、重量マトリックスに基づいている。次にこのメソッドによって同定されたモチーフを、配列の一致の機会の分布の測定値を得るために、SWISS-PR OTデータベースに対して較正する。この他、隠れマルコフモデル（Hidden Markov models）（ＨＭＭ）を、それぞれが共通の生物学的機能を有することが知られているタンパク質のデータセットとして定義されるタンパク質ドメインを発見するために用いることができる（例えばPearson,W.R.及びD.J.Lipman(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85:2444-2448；及びSmith,T.F.及びM.S.Waterman(1981)J.Mol.Biol.147:195-197を参照）。ＨＭＭは、初めに音声認識パターンを検定するために開発されたが、現在では生物学的なコンテキストにおいて、タンパク質及び核酸配列を解析すると共に、タンパク質構造をモデル化するために用いられている(例えばKrogh,A.等(1994)J.Mol.Bio l.235:1501-1531；及びCollin,M.等（1993）Protein Sci.2:305-314.を参照)。ＨＭＭは形式的確率的基礎を有しており、アミノ酸又はヌクレオチドに対する位置特異的スコアを使用する。このアルゴリズムは、そのモチーフ解析能力を高めるために、新たに同定された配列からの情報を継続的に組み込んでいる。４ノーザン法による解析ノーザン解析は、標識されたヌクレオチド配列と特定の細胞型または組織に由来するＲＮＡが結合したメンブランとのハイブリッド形成を伴う、遺伝子の転写物の存在を検出するために用いられる実験技術である（例えばSambrook、前出,c h.7；及びAusubel,F.M．等、前出,ch.4及び16参照）。 BLASTを用いる類似のコンピュータ技術で、GenBankまたはLIFESEQ^TMデータベース（Incyte,PaloAlto CA）のようなデータベースにおける同一のまたは近縁な分子を検索した。この解析は、多くの膜ベースのハイブリダイゼーションより非常に短時間で行うことができる。更に、コンピュータ検索の感度を変更して、ある一致が正確な一致か、相同的であるかの分類を決定することができる。検索の基準値は、積スコアであり、これは以下の式で定義されるものである。（配列の一致（％）×最大BLASTスコア（％））／１００この積スコアでは、２つの配列間の類似性の程度、及び配列の長さの一致の双方が考慮されている。例えば、積スコアが４０の場合は、一致は誤差が１〜２％の範囲で正確であり、スコアが７０の場合は正確に一致している。相同な分子は、通常積スコアとして１５〜４０を示すものを選択することにより同定されるが、スコアの低いものは近縁関係にある分子として同定される。検索の結果は、完全長配列、又はその部分が存在するライブラリー、配列の存在量（abundance）、及びパーセント存在量（percent abundance）のリストとして報告される。存在量は、特定の転写物の検出回数を直接反映し、パーセント存在量は、存在量をライブラリー内で検出された配列の総数で除したものである。５ＮＨＬＰをコードするポリヌクレオチドの延長インサイト社クローンNo.2676650及び2135151を用いて、部分的ヌクレオチド配列を完全長まで伸長させるための、或いはゲノムライブラリーから５’または３’配列を得るためのオリゴヌクレオチドプライマーを設計することができる。一方のプライマーはアンチセンス方向（ＸＬＲ）の延長を開始するために合成され、他方のプライマーはセンス方向（ＸＬＦ）に配列を延長するために合成される。これらのプライマーにより、周知のＮＨＬＰ配列を「外側に」延長し、対象の制御領域の新しい未知のヌクレオチド配列を含むアンプリコンを生成できるようにな Plymouth MN）、或いは他の適切なプログラムを用いて、長さが２２〜３０ヌクレオチドで５０％以上のＧＣ含量を有し、かつ約６８〜７２℃の温度で標的配列にアニールするように設計することができる。アピン構造及びプライマー−プライマー二量体化を生じるような任意のヌクレオチドのストレッチの延長は回避される。選択されたヒトｃＤＮＡライブラリー（Gibco/BRL）を用いて配列を延長した。２以上の延長が必要な場合は、既知領域をさらに延長するために追加のプライマーの組が設計される。 XL-PCRキット（Perkin Elmer）の説明書の指示に従って、酵素と反応混合物とを完全に混合することにより、高い忠実度の増幅が得られる。４０pmolの各プライマーと、推奨された濃度のキットの他の全ての成分とから増幅を開始する場合、ＰＣＲはPeltier Thermal Cycler（PTC200；M.J.Reserch,Watertown MA）を用いて、以下のパラメータで実行される。ステップ１９４℃で１分間（初期変性）ステップ２６５℃で１分間ステップ３６８℃で６分間ステップ４９４℃で１５秒間ステップ５６５℃で１分間ステップ６６８℃で７分間ステップ７ステップ４〜６をさらに１５サイクル反復ステップ８９４℃で１５秒間ステップ９６５℃で１分間ステップ１０６８℃で７分１５秒間ステップ１１ステップ８〜１０を１２サイクル反復ステップ１２７２℃で８分間ステップ１３４℃（その温度を保持）反応混合物の５〜１０μｌのアリコットを、低濃度（約０．６〜０．８％）アガロースミニゲル上での電気泳動で解析して、反応物が配列を延長することに成功したか否かを決定する。最も大きな生成物或いはバンドを選択して、ゲルから切り出した。さらなる精製には、QIAQuick^TM（QIAGEN Inc.,Chatsworth,CA）のような市販のゲル抽出法を用いる。ＤＮＡ回収の後、クレノウ酵素を用いて一本鎖ヌクレオチドの延び出しを切り取り、再結合及びクローニングを容易にする平滑末端を作った。エタノール沈殿の後、生成物を１３μｌのリゲーション緩衝液内に再溶解し、１μｌのＴ４−ＤＮＡリガーゼ（１５単位）及び１μｌのＴ４ポリヌクレオチドキナーゼを加えて、その混合物を室温で２〜３時間、或いは１６℃で一昼夜インキュベートする。コンピテントな大腸菌細胞（４０μｌの適切な溶媒内にある）を、３μｌのリゲーション混合物を用いて形質転換し、８０μｌのＳＯＣ培地（ Sembrook等、上記）で培養する。３７℃で１時間のインキュベーションの後、全ての形質転換混合物を、 2xCarbを含むLuria Bertani（LB）寒天（Sembrook等、上記）上にのせる。後日、いくつかのコロニーを各プレートから無作為に選択し、適切な市販の無菌の９６穴マイクロタイタープレートの個々のウェル内に入れられた１５０μｌの液状 LB/2xCarb培地で培養する。さらに後日、５μｌの各一昼夜の培養物を非無菌９６穴プレート内に移し、水で１：１０に希釈した後、それぞれ５μｌのサンプルをＰＣＲアレイに移す。ＰＣＲ増幅のため、４単位のｒＴｔｈＤＮＡポリメラーゼを含む１８μｌの濃縮ＰＣＲ反応混合物（３．３ｘ）、ベクタープライマー、並びに延長反応に用いられる遺伝子特異的プライマーの一方或いは両方を各ウェルに加える。増幅は以下の条件に従って行う。ステップ１９４℃で６０秒間ステップ２９４℃で２０秒間ステップ３５５℃で３０秒間ステップ４７２℃で９０秒間ステップ５ステップ２〜４をさらに２９サイクル反復ステップ６７２℃で１８０秒間ステップ７４℃（そのまま保持）ＰＣＲ反応物のアリコットを、分子量マーカーと共にアガロースゲル上で移動させる。ＰＣＲ生成物のサイズを元の部分的なｃＤＮＡと比較して、適切なクローンを選択し、プラスミドに結合して、配列決定を行う。上述の手順を用いて５’調節配列を得るため、５’延長のために設計されたオリゴヌクレオチドを得るため、及び適切なゲノムライブラリーを得るために、同様に配列番号：２及び配列番号：４のヌクレオチド配列を用いることができる。６個別のハイブリダイゼーションプローブの標識及び使用配列番号：２及び配列番号：４の配列に基づくハイブリダイゼーションプローブを用いて、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ並びにゲノムＤＮＡをスクリーニングする。約２０の塩基対からなるオリゴヌクレオチドの標識について特に記すが、大きなｃＤＮＡフラグメントの場合でも概ね同じ手順を用いる。オリゴヌクレオチドをOL IGO4.06（National Bioscience）のような最新式のソフトウェアを用いてデザインし、５０ｐｍｏｌの各オリゴマーと、２５０ｍＣｉの[γ‐³²Ｐ]アデノシン三リン酸（Amersham,Chicago,IL）及びＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ識されたオリゴヌクレオチドを、SephadexG-25超精細樹脂カラム（Pharmacia & Upjohn,Kalamazoo,MI）を用いて精製する。毎分１０⁷カウントのセンス及びアンチセンスオリゴヌクレオチドのそれぞれを含む部分を、エンドヌクレアーゼAseI ，Bgl II，EcoRI，Pst I，Xba1或いはPvuII（DuPont NEN,Boston,MA）の１つを用いて切断したヒトゲノムＤＮＡの典型的な膜ベースのハイブリダイゼーション解析において用いる。各消化物からのＤＮＡを、０．７％アガロースゲル上で分画化して、ナイロン膜（Nytran Plus,Schleicher & Schuell,Durham NH）にトランスファーする。ハイブリダイゼーションは４０℃で１６時間かけて行う。非特異的シグナルを取り除くため、ブロットを、０．１ｘクエン酸ナトリウム食塩水及び０．５％ドデシル硫酸ナトリウムまで段階的に厳密性が増す条件下で、室温にて順次洗浄する。 XOMAT AR^TMフィルム（Kodak,Rochester,NY）を、Phosphoimager cassette（Mole cular Dynamics，Sunnyvale，CA）においてブロットに数時間露光した後、ハイブリダイゼーションパターンを視覚的に比較する。７マイクロアレイマイクロアレイ用のオリゴヌクレオチドを作るために、ここに開示したヌクレオチド配列を、ヌクレオチド配列の３’末端からコンピュータアルゴリズムを用いて調べる。このアルゴリズムは、その遺伝子に独特な、ハイブリダイゼーションに適した範囲内のＧＣ含量を有し、且つハイブリダイゼーションを妨げるような推定される２次構造が存在しない、決まった長さの各オリゴマーを同定する。このアルゴリズムは、長さ２０ヌクレオチドの２０個の配列特異的オリゴヌクレオチド（20-mers）を同定する。癌について、各配列のうち１個のヌクレオチドだけが変化している点を除いて一致しているオリゴヌクレオチドの組が作り出される。このプロセスはマイクロアレイにおける各遺伝子について反復され、２０個の20-mersの二重の組が、光照射化学プロセスを用いてシリコンチップの表面上で合成され配列される（Chee,M．等,PCT/WO95/11995、この引用により本明細書と一体にされたものとする）。別形態では、化学結合プロシージャ及びインクジェット装置を用いて、基板の表面上でオリゴマーを合成する（Baldeschweiler,J.D．等,前出）。ドットブロット法（スロットブロット法）に類似したアレイを用いて、真空システム、熱、ＵＶ、機械的又は化学的結合プロシージャを利用して、エレメントを基板の表面に配置し結合させる。通常アレイは、手を用いることにより、又は市販の材料及び機械を用いることによって製造され得、適切な数の要素を備えている。ハイブリダイゼーションの後、マイクロアレイを洗浄してハイブリダイズしていないプローブを取り除き、スキャナーを用いて蛍光のレベル及びパターンを求める。スキャンされた画像を調べて、マイクロアレイ上の各オリゴヌクレオチド配列の相補性の程度及び相対的な量を求める。完全長ｃＤＮＡ、発現された配列タグ（ＥＳＴ）、またはその断片は、マイクロアレイのエレメントを含み得る。ハイブリダイゼーションに適した断片は、例えばLASERGENE^TMのようなよく知られたソフトウェアを用いて選択することができる。本発明のヌクレオチド配列の一つに対応する、又は本発明で用いるｃＤＮＡライブラリーからランダムに選択された完全長ｃＤＮＡ、ＥＳＴ、又はその断片は、例えばスライドガラスのような適切な基質の上に配置される。ｃＤＮＡは、例えばＵＶ架橋の後、熱及び化学処理を施し、その後乾燥することによってスライドガラス上に固定される（例えば、Schena,M等(1995)Science 270:467-470 ；及びShalon,D等(1996)Genome Res.6:639-645参照）。蛍光プローブが調製されて、基質上のエレメントとのハイブリダイゼーションのために用いられる。この基質は、上述の手順で解析される。８相補的ポリヌクレオチドＮＨＬＰをコードする配列或いはその任意の一部分に対して相補的な配列は、自然発生のＮＨＬＰの発現を低下又は阻害するために用られる。約１５〜約３０塩基対からなるアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用について特に記すが、より小さな或いはより大きなｃＤＮＡフラグメントの場合でも概ね同じ方法を用いることができる。Oligo4.06ソフトウェア及びＮＨＬＰ（配列番号：１）のコーディング配列を用いて、適切なオリゴヌクレオチドを設計することができる。転写を抑制するためには、最も独特な５’配列から相補的なオリゴヌクレオチドを設計し、これを用いてプロモーターが結合するのを阻害する。翻訳を阻害するためには、相補的なオリゴヌクレオチドを設計して、リボソームがＮＨＬＰをコードする転写物に結合するのを阻害する。９ＮＨＬＰの発現ＮＨＬＰの発現は、ｃＤＮＡを適切なベクター内にサブクローニングし、そのベクターを宿主細胞にトランスフェクトすることによって行われる。このベクターは、適切なプロモーター、例えばクローニング部位の上流で、目的のｃＤＮＡと機能的に関連するβガラクトシダーゼを含む（例えば、Sambrook，前出,pp.40 4-433；及びRosenberg,M等(1983)Methods Enzymol.101:123-138参照）。単離されたトランスフェクト菌株を、イソプロピル-1-チオ‐β-D-ガラクトシド（IPTG）を用いて標準的な方法で誘導し、初めのβガラクトシダーゼの７残基、約５〜１５残基のリンカー、及び完全長ＮＨＬＰからなる融合タンパク質を作り出す。このシグナル配列は菌培地へのＮＨＬＰの分泌を誘導し、この培地は後の活性のアッセイにおいて直接用いることができる。１０ＮＨＬＰ活性の確認ＮＨＬＰの活性を、Sugimoto（前出）及びSugimoto,H.及びS.Yamashita（1994 ;J.Biol Chem.263:6252-8）に記載のような同位体アッセイを用いて試験する。このアッセイは、20mMのTris-HCl、pH8.0、0.4mMの１−［¹⁴Ｃ］パルミトイル− グリセロ−３−ホスホコリン（750dpm/nmol）及び大腸菌発現系（前出）から単離された酵素を含む0.1mlの反応混合物において37℃で60分間かけて行う。切断された生成物を定量することによって、ＮＨＬＰの活性を確認する。１１ＮＨＬＰ特異的抗体の産生標準的なプロトコルを用いたウサギの免疫化及び抗体の産生には、ＰＡＧＥ電気泳動法（Harrigton,M.G.(1990)Methods Enzymol.185:488-495）を用いて実質的に精製されたＮＨＬＰを用いる。ＮＨＬＰアミノ酸配列をDNAStarソフトウエア（DNASTAR社）を用いて解析して免疫抗原性の高い領域を決定し、対応するオリゴペプチドを当業者には周知の手段により合成して、当業者に周知の方法で抗体を産生するために用いる。Ｃ末端付近の、或いは隣接する親水性領域内のエピトープのような、適切なエピトープを選択するための解析法は、既存の論文に記載されている（Ausu bel等、上記、ch．11）。通常、約１５残基の長さを有するオリゴペプチドを、Applied BiosystemsのペプチドシンセサイザModel 431Aを用いてｆｍｏｃ法のケミストリにより合成し、Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ： Ausubel等、上記）を用いた反応によりキーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ、Sigma,St.Louis,ＭＯ）に結合する。フロイントの完全アジュバントにおいてオリゴペプチド−ＫＬＨ複合体を用いてウサギを免疫する。得られた抗血清の抗ペプチド活性を検査するには、例えばペプチドをプラスチックに結合し、１％BSAを用いてブロックし、ウサギ抗血清と反応させて洗浄し、さらに放射性ヨウ素標識されたヤギ抗ウサギＩｇＧと反応させる。１２特異的抗体を用いる自然発生ＮＨＬＰの精製自然発生ＮＨＬＰ或いは組換えＮＨＬＰは、ＮＨＬＰに特異的な抗体を用いるイムノアフィニティークロマトグラフィにより精製することができる。イムノアフィニティーカラムは、CNBr-activated Sepharose（Pharmacia & Upjohn）のような活性化クロマトグラフレジンとＮＨＬＰ抗体とを共有結合させることにより構築される。結合後、そのレジンを使用説明書の指示に従って、ブロックし洗浄する。ＮＨＬＰを含む培地をイムノアフィニティーカラムに通し、そのカラムをＮＨＬＰを優先的に吸着できる条件下で（例えば界面活性剤の存在下において高イオン強度バッファで）洗浄する。このカラムを、抗体／ＮＨＬＰ結合を切るような条件下（例えばｐＨ２〜３のバッファ、或いは高濃度の尿素またはチオシアン酸塩イオンのようなカオトロピックイオン）で溶出させ、ＮＨＬＰを回収する。１３ＮＨＬＰと相互作用する分子の同定ＮＨＬＰ又は生物学的に活性なその断片を、¹²⁵Ｉボルトンハンター試薬（例えば、Bolton等(1973)Biochem.J.133:529-38参照）で標識する。マルチウェルプレートに予め配列しておいた候補の分子を、標識したＮＨＬＰとともにインキュベートし、洗浄して、標識ＮＨＬＰ複合体を有する任意のウェルをアッセイする。異なる濃度のＮＨＬＰを用いて得られたデータを用いて、候補の分子とＮＨＬＰの会合、親和性、数の数値を計算する。上記のすべての刊行物及び特許明細書は、本明細書と一体に参照されたい。本発明の記載した方法及びシステムの種々の改変は、本発明の範囲及び精神から逸脱しないことは当業者には明らかであろう。本発明は特に好適な実施例に関連して記載されているが、本発明の請求の範囲は、そのような特定の実施例に不当に制限されるべきではないことを理解されたい。実際には、本発明を実施するために記載された方法の種々の改変は、分子生物学或いは関連する分野の専門家には明らかなように、請求の範囲内に含まれるものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 7/02 7/02 7/06 7/06 9/04 9/04 9/10 １０１ 9/10 １０１ 11/00 11/00 11/06 11/06 13/12 13/12 19/00 19/00 19/02 19/02 19/06 19/06 19/10 19/10 21/04 21/04 25/00 25/00 27/00 27/00 35/00 35/00 37/04 37/04 37/08 37/08 Ｃ０７Ｋ 16/40 Ｃ０７Ｋ 16/40 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 9/16 Ｄ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 9/16 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ１２Ｑ 1/68 5/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＩＬ，ＪＰ，ＫＺ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＲＵ，ＳＥ，ＳＧ，ＵＳ (72)発明者マリー、リン・イーアメリカ合衆国カリフォルニア州94028・ポルトラバレー・ロストランコスロード 1124

Claims

【特許請求の範囲】１．配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片のアミノ酸配列を含む実質的に精製されたポリペプチド。２．請求項１の配列と９０％以上のアミノ酸配列同一性を有する実質的に精製された変異体。３．請求項１のポリペプチドをコードする単離され精製されたポリヌクレオチド。４．請求項３のポリヌクレオチドと９０％以上のポリヌクレオチド配列同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチド変異体。５．請求項３のポリヌクレオチドと厳密な条件の下でハイブリダイズする単離され精製されたポリヌクレオチド。６．請求項３のポリヌクレオチドに相補的な単離され精製されたポリヌクレオチド。７．配列番号：２、配列番号：４、配列番号：２の断片、又は配列番号：４の断片のポリヌクレオチド配列を含む単離され精製されたポリヌクレオチド。８．請求項７のポリヌクレオチドと９０％以上のポリヌクレオチド配列同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチド変異体。９．請求項７のポリヌクレオチドに相補的な配列を有する単離され精製されたポリヌクレオチド。１０．請求項３のポリヌクレオチドの少なくとも断片を含む発現ベクター。１１．請求項１０の発現ベクターを含む宿主細胞。１２．配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片の配列を含むポリペプチドの製造方法であって、（ａ）前記ポリペプチドの発現に適した条件の下で請求項１１の宿主細胞を培養する過程と、（ｂ）前記宿主細胞の培地から前記ポリペプチドを回収する過程とを含むことを特徴とする配列番号：１、配列番号：３、配列番号：１の断片、又は配列番号：３の断片を含むポリペプチドの製造方法。１３．請求項１のポリペプチドを、適切な医薬用担体と共に含む医薬品組成物。１４．請求項１のポリペプチドに特異的に結合する精製された抗体。１５．請求項１のポリペプチドの精製されたアゴニスト。１６．請求項１のポリペプチドの精製されたアンタゴニスト。１７．細胞増殖の障害の治療又は予防方法であって、そのような治療が必要な患者に、請求項１６のアンタゴニストを有効な量投与する過程を含む細胞増殖の障害の治療又は予防方法。１８．炎症の治療又は予防方法であって、そのような治療が必要な患者に、請求項１６のアンタゴニストを有効な量投与する過程を含む炎症の治療又は予防方法。１９．免疫反応の障害の治療又は予防方法であって、そのような治療が必要な患者に、請求項１６のアンタゴニストを有効な量投与する過程を含む免疫反応の障害の治療又は予防方法。２０．生物学的サンプルにおける配列番号：１又は配列番号：３のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの検出方法であって、（ａ）請求項６のポリヌクレオチドと、前記生物学的サンプルの核酸の少なくとも１つとをハイブリダイズさせ、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程と、（ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程とを含むことを特徴とし、前記ハイブリダイゼーション複合体の存在が、前記生物学的サンプルにおける前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの存在と相関性を有することを特徴とする生物学的サンプルにおける配列番号：１又は配列番号：３のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの検出方法。２１．前記ハイブリダイゼーションを行う過程の前に、前記生物学的サンプルの核酸をＰＣＲ法により増幅することを特徴とする請求項２０に記載の方法。