JP2002508328A - 粘液溶解及び炎症治療の製薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 患者の炎症及び粘液粘度を減少させる式（Ｉ）のリン脂質の使用を開示し、Ｘ、Ｙ又はＺの一つは（ａ）を表わし、各Ｒは水素又はメチルを表わし、Ｘ、Ｙ又はＺの夫々他の二つは‐ＣＯ‐Ｒ^１を表わし、ここでＲ^１は無置換の直鎖又は分岐のＣ_{１２−２１}アルキル又はＣ_{１１‐２１}アルケニル又は、ハロ、Ｃ_１−６直鎖又は分岐アルコキシ若しくはシアノからなる群から選択された一つ又はそれ以上の置換基で置換された直鎖又は分岐のＣ_{１２−２１}アルキル又はＣ_{１１‐２１}アルケニルである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 発明の分野 本発明は粘液溶解及び炎症の局所治療の分野に係り、より詳細には、粘着性粘
液、粘膜の粘着性分泌物の粘度を低粘ちゅう化又は低下させる際の特定の粘液溶
解薬の使用に関する。粘液分泌物の粘度を減少させる、並びに炎症を軽減させる
ことにより、かかる溶解薬は、肺気道からの蓄積された粘液分泌物を除去する際
、カゼリフレックス(cough reflex)及び繊毛作用の効率を増大させる。

【０００２】 先行技術の説明 粘液の気道クリアランスに有益な効果を及ぼすことを示すことが分かっている
薬は数多報告されており、例えば、繊毛に及ぼす、又は粘液分泌物の物理的性質
を改質させることにより、上記効果を及ぼす。例えば、ヨウ化カリウムの飽和溶
液又はヨウ化グリセリンのようなヨウ化物類で表わされるあるクラスは、浄化を
容易にする「シンナー」分泌物の分泌を刺激すると考えられている。別のクラス
はＮ‐アセチルシステインである。肺粘液分泌物の粘度は、ムコタンパク質の濃
度にかなり依存し、Ｎ‐アセチルシステインのフリーのスルフヒドリル基は、ム
コタンパク質のジスルフィド結合を開裂させ、よって、粘液の粘度を減少させる
と考えられている。粘液溶解薬の概観のためには、P.C. Braga: Drugs in Bronc
hial Mucology, Raven Press, New York, 1989の刊行物を参照するとよい。

【０００３】 増大した粘液分泌物と関係する疾患をしばしば伴う炎症は、トラウマ、多くの
バクテリア及びウイルス感染、アレルギー性及び免疫原性反応、自己免疫疾患な
どのような幅広い範囲の病気をも伴う勢力のある症候である。炎症の迅速でしか
も効果的な治療が望まれており、患者の不安と、炎症自体に起因する患者の二次
損傷を最小限に押さえる。

【０００４】 肺道だけでなく、皮膚、目、粘膜（頬及び鼻）及び肛門/直腸/会陰領域を含む
体の他の表面の炎症は、適当な坑炎症剤の投与により、局所的に治療可能である
。本発明はリン脂質化合物であり、局所的に投与される粘液溶解性及び坑炎症性
の双方を有する剤の使用に関する。 １９８３年１２月２０日に発行されたTragerとChylinskiの米国特許第４,４２
１,７４８号には、レシチンの無菌の水溶性低張性溶液を含有する人工の目薬（t
earing agent）の局所的投与と、粘度変化剤とが記載されている。レシチンはリ
ン酸のコリンエステル部に結合した、ステアリン酸、パルチミン酸及びオレイン
酸のジグリセリドの混合物であるホスファチジルコリンである。それは生きてい
る生物にて発見され、神経組織の重要な構成要素である。

【０００５】 Glonekらによる米国特許第４,９１４,０８８号には、乾燥した目の治療方法を
開示しており、電荷を有するリン脂質が目に投与される。

【０００６】 Thomassenらによる１９９４年の研究（Am. Respir. Cell Mol. Biol., 10: 39
9-404）には、ジパルミトイル‐ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）が肺胞マク ロファージ分泌物に全く効果がなかったことを示すデータを提示している。

【０００７】 発明の要約 本発明の目的は、肺粘液の粘度を減少させる方法を提供することと、肺道内で
の炎症を軽減させることである。

【０００８】 本発明の別の目的は、過剰の粘液分泌物を有する患者の蓄積された粘液の除去
を改善させることである。

【０００９】 本発明のさらに別の目的は、炎症と関連した蓄積粘液分泌物に起因する気道閉
塞に関係するさまざまな肺疾患を改善させる方法を提供することである。

【００１０】 本発明のさらに別の目的は、皮膚、目、鼻および肺通路、肛門、直腸などを含
む哺乳類の炎症の局所的治療用の組成物を提供することである。

【００１１】 作用の特定モードに拘束されることなく、式（Ｉ）の以下のリン脂質は、顕著
な局所坑炎症性及び粘液溶解活性を示すことが判明した。

【００１２】

【化6】 ここでＸ、Ｙ又はＺの一つは以下の化学式で表わされ、

【００１３】

【化7】 さらに、各Ｒ基は独立に水素又はメチルを表わし（３つの全てのＲ基がメチルで
ある化合物が好ましい）、Ｘ、Ｙ又はＺの夫々の他の２つは独立に‐ＣＯ‐Ｒ^１ を表わし、Ｒ^１は無置換の直鎖若しくは分岐のＣ_{１１−２１}アルキル又はＣ_{１１ −２１} アルケニルであり、あるいは、ハロ（つまり、フルオロ、ブロモ、クロロ
又はヨード）、Ｃ_１−６の直鎖又は分岐アルコキシ若しくはシアノからなる群か
ら選択された（好ましくは）一つ又はそれ以上の置換基で置換された直鎖又は分
岐のＣ_{１１−２１}アルキル又はＣ_{１１−２１}アルケニルである。２つの‐ＣＯ‐
Ｒ^１基が同じであることが好ましい。

【００１４】 式（Ｉ）の本発明のリン脂質は、グリセリン骨格の２の位置に光学活性炭素を
含有する。側鎖Ｒ^１に存在する光学中心を有するものを含む全ての光学異性体は
、本発明の範囲内にあると考える。さらに、Ｒ^１がアルケニルであることから生
じる幾何異性体も本発明に含まれる。

【００１５】 式（Ｉ）の好ましいリン脂質は、式（ＩＩ）で表わされる。

【００１６】

【化８】 ここで、Ｒ及びＲ^１は前述に定義した通りであり、それらの全ての異性体を含む
。

【００１７】 式（Ｉ）の最も好ましいリン脂質は、ジパルミトイルホスファチジルコリン（
ＤＰＰＣ）であり、１,２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコ リン及びジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）として同定され、さ
らに、１,２‐ジステアロイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコリンとして同 定される。ＤＰＰＣの天然の異性体は、ジパルミトイル‐Ｌ‐α‐ホスファチジ
ルコリンである。

【００１８】 式（Ｉ）の他の代表的なリン脂質には、 １,２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォエタノールアミン； １,３‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐２‐ホスフォコリン； １,２‐ジステアロイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォ‐（Ｎ‐メチル）エタ ノールアミン； １‐パルミトイル‐２‐オレオリル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコリン； １,３‐ジステアロイル‐ｓｎ‐グリセロ‐２‐ホスフォ‐（Ｎ、Ｎ‐ジメチル ）エタノールアミン； １,２‐ジラウリル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコリン； １,２‐ジエイコサノイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコリン； １‐オレオイル‐３‐ミリストイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォ‐（Ｎ‐メ
チル）エタノールアミン； １,２‐ジ‐（９‐クロロ‐オクタデカノイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフ ォコリン； １,２‐ジ‐（９‐オクタデセノイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコリン ； １,２‐ジ‐（８‐シアノ‐ヘキサデカノイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフ ォコリン； １,３‐ジ‐（９‐ヘキサデセノイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐２‐ホスフォコリン と １,２‐ジ‐（８‐メトキシ‐ヘキサデカノイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐２‐ホス フォコリンがある。

【００１９】 発明の詳細な説明 式（Ｉ）のリン脂質及びその合成方法は文献に公知であり、そのうちの最も好
ましいＤＰＰＣ及びＤＳＰＣを含む数多は市販されている。例えば、米国特許第
４,８１４,１１２号及び第４,６２２,１８０号や、HansenらによるLipids (1982
), 17, 453-459や、MurariらによるJ. Org. Chem., (1982), 47, 2158-2163や、
LammersらによるChem. Phys. Lipids (1978), 22, 293-305や、EiblらによるLei
bigs Ann. Chem. (1967), 709, 226-230や、OkazakiらによるBull. Chem. Soc.
Jpn. (1981), 54, 2399-2407を参照するとよい。

【００２０】 ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）は、ヒトの自然の肺の表面
活性物質の主要な成分（約８０％）である。肺の表面活性物質は、肺胞の表面で
通常分泌される物質である。肺の表面活性物質の欠乏が未熟児及び幼児の呼吸窮
迫症候群（ＲＤＳ）の原因であると認められる。かかる欠乏は大人の呼吸窮迫症
候群（ＡＲＤＳ）の成長では主な要因ではないが、その疾患の病態生理学に重要
な寄与をしている。

【００２１】 ＲＤＳは未熟児の間では、死及び能力障害を引き起こす原因である。加えて、
年間ＡＲＤＳの約１５０,０００件では、６０乃至８０％の死亡率をもたらすと 報告されている。ＲＤＳ及びＡＲＤＳを治療するために、多くの天然の表面活性
物質（ヒト及びウシ）及び全合成された表面活性物質が、例えば、エアロゾル調
合の吸入により、ヒト被験者の肺に投与されている。

【００２２】 一般に、多くの合成吸入表面活性物質調合にはＤＰＰＣが含まれている。なぜ
なら、ＤＰＰＣはＲＤＳ及びＡＲＤＳを患っている患者の呼吸機能を改善させる
ということが周知であるからである。肺胞の表面張力を減少させ、よって、酸素
と二酸化炭素との交換をより容易にする。例えば、米国特許第５,２９９,５６６
号には、ＤＰＰＣを含有する表面活性物質の分散液の調製方法が開示されており
、米国特許第５,１１０,８０６号には、ＤＰＰＣ、長鎖アルコール及び非イオン
性界面活性剤とを含有する合成表面活性物質が開示されており、米国特許第４, ７６５,９８７号には、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ及びソヤレシチン（Soya lecithin）
を含有する合成表面活性物質が開示されており、米国特許第４,５７１,３３４号
には、肺表面活性物質と組み合わせたさまざなま薬が開示されており、米国特許
第４,３１２,８６０号には、ＤＰＰＣ及び脂肪酸を含有する合成表面活性物質が
開示されている。各前記文献は参考文献として、本願にて引用される。

【００２３】 しかしながら、出願人はＤＰＰＣ又は式（Ｉ）のリン脂質の他の何れの実施例
も、本発明の基礎である、粘液溶解性若しくは坑炎症活性を有するものとして報
告されていなかったことは、知らなかった。本発明のリン脂質Ｉは粘着性粘液の
粘度を減少させ、よって、肺道からの粘度のある濃縮された粘液の除去を容易に
し、炎症を軽減させることが判明した。結果として、粘液の気管支及び気管ドレ
ナージが改善され、肺及び上部呼吸道での粘液の蓄積に起因する急性若しくは慢
性肺疾患のうっ血が緩和される。

【００２４】 よって、本発明は粘着性肺粘液分泌物及び炎症に起因する呼吸窮迫を軽減させ
る方法、より詳細には、患者が患っている非肺胞タイプ、つまり気管、気管支及
び細気管支での窮迫を軽減させる方法を提供する。その方法は、エアロゾルの断
続的な吸入により、肺道に式（Ｉ）のリン脂質を粘液溶解に有効な量を運搬させ
ることにより、うまく達成される。

【００２５】 さらに、式（Ｉ）の化合物は、以下に限定されないが、気管支喘息、気管支炎
、膵嚢胞性繊維症、リウマチ様関節炎、乾癬、即座及び遅延タイプ過敏症反応、
結膜炎、鼻炎、痔などを含む炎症に寄与する若しくは主因である病気状態の局所
治療にて有用である。 「局所適用」とは、肺膜に局所的に接触するように吸入されて、若しくは直腸膜
に接触するように浣腸又は坐薬により、皮膚、結膜、粘膜、周口膜に局所的であ
る。

【００２６】 投与及び製薬組成物 効果的である必要性のある式（Ｉ）の化合物の量は、もちろん、処置すべき個体
哺乳類や、炎症を生じさせる状態により変化し、最終的には、医者及び獣医の裁
量である。考慮すべき要因としては、処置すべき状態、投与経路、調合の性質、
哺乳類の体重、年齢、一般的な状態及び投与すべき特定化合物がある。

【００２７】 一般には、化合物は、任意に影響を及ぼす領域に利用される。しかしながら、
個別に測定した投薬量は本発明の範囲内であり、投薬の公知な投与量に応じて炎
症の鎮静を監視したいのなら、個々の患者に投与される。

【００２８】 一般には、式（Ｉ）の化合物を含有する製薬組成物には、活性成分として、薬
１．０％から１００％の一つ又はそれ以上の式（Ｉ）の化合物を包含する。活性
成分が全体の組成物以下ならば、残りは局所投与用の薬剤学的に適当なキャリア
又は、乳化剤、乾燥剤、色剤、香気剤、安定剤、流動促進剤などのような、局所
製薬技術に周知である他の副成分を含む。

【００２９】 式（Ｉ）の化合物を含有する好ましい製薬組成物は、溶液、懸濁液、エマルジ
ョン、ゲル、ローション、クリーム、軟膏、坐薬などのような液体若しくは半液
体の形態であり、従来の局所キャリアを利用する。吸入治療では、従来のエアロ
ゾル調合及び方法を利用する。

【００３０】 粘液溶解活性 本発明のリン脂質の粘液溶解活性は、それぞれウシ気管粘液と動物モデルを利用
して、標準的インビトロ及びインビボアッセイにて調べた。インビトロアッセイ
に関して、ウシ気管粘液をＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ又は他の式（Ｉ）のリン脂質と混
合させたときに、粘液は液化され、ビヒクル単独（生理食塩水）を利用したとき
よりも自由な流動性を有する。インビボ粘液溶解アッセイは、本願の参考文献と
して引用されるChandらによるAgents and Actions, 38: 165-170に説明されたア
ッセイと同様である。特に、１６６頁以下にあるマウスの粘液溶解活性の評価を
参照するとよい。前記のインビトロ及びインビボアッセイの詳細な説明は、後述
の例に記載されている。試験化合物であるＤＰＰＣから典型的に得られた結果か
ら、既知の粘液溶解活性のあるＮ‐アセチルシステインと同等な粘液溶解活性を
示す。

【００３１】 肺気道への薬のエアロゾル運搬は長い年数、臨床実務で利用されている。さま
ざまな医療薬剤が、例えば、Ｎ‐アセチルシステインや、ＲＤＳ及びＡＲＤＳを
患っている患者を治療する際に、ＤＰＰＣ及びＤＳＰＣを含有する合成表面活性
物質調合を含み、エアロゾル治療に利用されている。エアロゾル運搬システムの
利点は、延長した期間にわたり、断続的に全肺領域へ幅広く行渡る薬剤運搬にあ
る。

【００３２】 式（Ｉ）のリン脂質は、例えば、噴霧器若しくは測定投与した吸入器（metere
d-dose inhaler）による投与の使用するために準備したエアロゾル化液体調合の
分散液として利用することを意図している。本発明のリン脂質は、直接吸入用の
適当な平均径の無菌親液性粉末、あるいはその粉末は水或いは分散液としての約
０．４から約０．９％の生理食塩水とともに再構成され、適当な噴霧器若しくは
吸入システムを介して運搬される。何れかの軸に沿った微粒子分散粉末の好まし
い平均径は、約１から約１０ミクロン（μｍ）であり、より好ましくは約５から
１０μｍである。一般には、リン脂質は、例えば、測定投与量エアロゾル単位と
して存在するジクロロジフルオロメタンのような本技術分野で認められる噴射剤
とともに、約０．１から１０％重量/正常若しくは僅かに低張性生理食塩水に分 散させた体積の量を含む。各衝撃作用により、０．１乃至１００ｍｇのリン脂質
Ｉが放出される。

【００３３】 エアロゾルによる薬運搬システムを製造する技術は、よく文献に記載されてい
る。式（Ｉ）のリン脂質は本願で繰返し詳細に説明するまでもなく、本技術分野
で認められる方法により、かかるシステムに導入される。実際に、前述したよう
に、ＤＰＰＣ及びＤＰＳＣを含有するエアロゾル調合及びそれらの調製は、ＲＤ
Ｓ及びＡＲＤＳ治療に対して以前に説明されており、同様なエアロゾル方法論が
本発明に利用される。

【００３４】 本発明によれば、本発明のリン脂質Ｉは、炎症及び粘液粘度又は蓄積粘液が大
きな問題である呼吸病気の治療における吸入剤として有用である。かかる病気に
は、慢性気管支炎、膵嚢胞繊維炎及び喘息（American Thoracic Society, Sympo
sia Excerpts, 1994 International Conferenceを参照）がある。さらに、閉鎖 性肺疾患は増大した粘液分泌物と関連している（Ferguson and Chermiack (1993
) Management of COPD, New Eng. J. Med., pp. 1017-1021）。本発明はＲＤＳ やＡＲＤＳの治療には応用できない。なぜならば、上記呼吸疾患は現存している
肺胞であり、粘液性分泌物を濃縮する若しくは過剰の粘液性分泌物により、特徴
付けられない。

【００３５】 本発明のリン脂質Ｉは単独で、又は他の粘液溶解性成分及び/又は気道及び肺 の肺胞へのエアロゾル運搬に適する他の活性成分、例えば、抗生物質や気管支拡
張薬などと組合わせて利用される。

【００３６】 坑炎症性活性 炎症は、マクロファージを含み、さまざまなタイプの細胞タイプが関係する複雑
な過程である。例えば、S. L. Kunkel, “Inflammatory Cytokines”, pp. 1-15
, in Manual of Vascular Mediators, P. A. Ward, Editor, produced by the p
ublishers of Hospital Practiceを参照するとよい。Ralph and Nakoinz, J. Im
munology (1977) 119: 950-954及びRaschkeらによるCell (1978)15: 261-267を 含み、マクロファージに関する参考文献は数多くある。

【００３７】 マクロファージは感染により、並びにさまざまな非感染刺激物及びプロ炎症(p
ro-inflammatory)剤により活性化される。活性化されると、マクロファージはさ
まざまな反応に関与する。マクロファージはバクテリアを食菌し、酸素依存若し
くは酸素に独立な経路の何れかにより殺す。酸素依存経路に関して、マクロファ
ージの活性化により、酸素消費が増加し、反応性酸素種（例えば、スーパーオキ
サイドのようなラジカル）が発生する。活性化マクロファージによる反応性酸素
種の発生は、炎症応答と関連している。加えて、活性化されると、マクロファー
ジは、数多のインターロイキン及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ‐α）を含むさまざ
まな炎症サイトカインを放出する。上記活性化関連過程の何れかの阻害により、
炎症を軽減させることができる。

【００３８】 上記理由のため、マクロファージ活性化は炎症過程の研究では非常に重要であ
る。マクロファージ活性化を低減させる剤は、坑炎症剤として有用である傾向に
ある。

【００３９】 式（Ｉ）化合物の坑炎症活性は、従来技術の多くの方法によりアッセイされた
。炎症、マクロファージ活性化及びマウス耳水腫の二つのモデルを例で利用し、
本発明の化合物の坑炎症性の効果を例証する。

【００４０】 説明の目的でＤＰＰＣを利用した以下の例は説明の目的であり、本発明の範囲
を限定することを意図したものではない。

【００４１】 例１ ウシ気管粘液の粘液溶解活性 気管粘液は、ローカル屠場から入手した屠殺直後のウシから優しくスクレープし
た。固定させた等温条件下で、その粘液は、５ｍｌの粘液と１ｍｌの生理食塩水
との割合で混合し、１分間音波処理した。１ｍｌの試験化合物又はコントロール
生理食塩水に１ｍｌの上記混合物を添加し、さらに１分間音波処理した。音波処
理５分後、１ｍｌのサンプルを１８ｇｘ１．５インチ針を有する３ｍｌのシリン
ジのバレルへピペットで移し、リングスタンドに垂直に取付けた。時間ゼロで、
針のキャップを外し、シリンジ/針組合わせを介して循環させた粘液の循環時間 を記録した。結果を以下に示す。

【００４２】 化合物 最終濃度 循環時間 コントロール生理食塩水 コントロール ３分３２秒 ＤＰＰＣ ５ｍｇ/ｍｌ ２分２０秒 結果から、ＤＰＰＣはウシ気管粘液への直接の粘液溶解効果を有することがわ
かる。同様な結果はＤＳＰＣでも得られる。

【００４３】 例２ マウス気管粘液の粘液溶解活性 エアロゾルとして、マウスへ試験化合物を運搬する手順は、前述に引用したChan
dらにより説明された、マウスに粘液溶解活性の評価に利用したアッセイを変更 させたものである。 １． 試験動物はＨｓｄ：１ＣＲ（ＣＤ−１）マウスであり、その重量は夫々約
２５ｇである。 ２． 試験化合物は通常の生理食塩水で希釈して２５ｍｇ/ｍｌの濃度にし、約 １００ｍｇ/ｋｇでヒトDe Vilbiss atomizer Model No. 15を利用して投与した 。コントロールグループは生理食塩水を与える。ノズルはマウスの口に置かれ、
２回スプレーの投与量を与える。 ３． ３０分後、生理食塩水中の５％溶液として、溶解させたフェノールレッド
を１０ｇ体重当たり０．１ｍｌの供給量でＩＰを与えた。 ４． フェノールレッド投与後、動物は１００％のＣＯ_２に晒して殺す。 ５． 全体の気管を除去し、外部ブロットドライ及び気管を１．０ｍｌ生理食塩
水で洗浄した。３０分後、０．１ｍｌの１Ｍ水酸化ナトリウムを気管洗浄液に添
加して、洗浄液体のｐＨを安定化させる。 ６． 気管へ分泌されたフェノールレッドの量を、５４６ｎｍで光化学的に定量
化する。 ７． 運搬された供給量の補正は、５回の別々の管で、管ごとに５回のスプレイ
の体積を測定して行う。平均量は５８乃至６３μｌの範囲で、６０．４μｌ/ス プレイである。

【００４４】 試験結果から、Ｎ‐アセチルシステインでは約６２％であり、生理食塩水のコ
ントロールではゼロ％であったのと比べて、ＤＰＰＣでは粘液溶解活性の測定さ
れた変化の割合は約５８％である。

【００４５】 例３ 吸入カートリジ 成分 カートリッジ当たりの量 ＤＰＰＣ ５．０ｍｇ ラクトース、q.s. ２５．０ｍｇ 活性成分であるＤＰＰＣは、平均径で１０乃至５０ミクロンの粒子サイズに予
めマイクロサイズ化され、高エネルギーミキサーで通常の錠剤グレードのラクト
ースとブレンドされる。粉末ブレンドがマイクロサイズ化され、１乃至１０ミク
ロンの微粒子サイズになり、適当な大きさの硬質ゼラチンカプセル、又は適当な
カプセル化機械のカートリッジに充填される。カプセル若しくはカートリッジの
呼吸用含有量は、粉末吸入器を利用して投与される。

【００４６】 例４ 測定液体投与量 成分 カートリジ当たりの量 ＤＰＰＣ ５．０重量％ 等張性生理食塩水 q. s. 活性成分であるＤＰＰＣを十分な量の無菌等張性生理食塩水に溶解させて、５
重量％の溶液を作る。溶液は、適当な噴霧器装置を介してエアロゾル測定投与量
の形態で投与される。

【００４７】 例５ マクロファージ活性化阻害による坑炎症活性のインビトロアッセイ 肺胞マクロファージの活性化は肺炎症の重要な要素である。その活性化状態で
は、肺胞マクロファージはさまざまな炎症媒介物質及び反応性酸素種を分泌する
。炎症の本発明のインビトロモデルでは、マウスマクロファージはフォルボール
‐１２‐ミリステート‐１３‐アセテート（ＰＭＡ）により活性化される。ＤＰ
ＰＣ存在下、若しくは不存在下でのマクロファージ活性化の強度は、マクロファ
ージの呼吸バーストを測定することにより求める（反応性酸素種の放出）。

【００４８】 ＲＡＷ２６４．７細胞系統（American Type Culture Collection, Rockville,
Maryland, USA, Accesion No. TIB 71）はマウス単核細胞/マクロファージ系統
であり、その細胞は多くのマクロファージの識別可能な機能を示す。マクロファ
ージ同様、その細胞は食菌可能であり、適当な信号に応じて、酸化的バースト（
増大した酸素消費）を受け、酸素ラジカル（例えば、スーパーオキサイド）が発
生する。インビトロで上記細胞の活性化を阻害する剤は、呼吸バーストを阻害し
、活性化と関連する酸素ラジカルの対応する生産により、炎症過程の重要な工程
を阻止する。

【００４９】 呼吸バースト及びマクロファージ活性化に伴う対応する酸素ラジカルの生産は
、培地に添加したルミノールと酸素ラジカルの反応を基礎とする化学発光を含む
多くの方法で測定することが可能である（M. A. Trushらによる1978, “The Gen
eration of Chemiluminescence by Phagocyte Cells”, Methods in Enzymology
57: 462-494）。マクロファージ細胞系統の培地のルミノールから生じる化学発
光は、マクロファージ活性化のマーカとして、本技術分野では認識されている。

【００５０】 材料 細胞系統：ＲＡＷ ２６４．７（ＡＴＣＣ ＴＩＢ‐７１、装置依存（attach
ment dependent）） 培地：１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）のあるダルベッコ改質イ−グル培地（
ＤＥＭＥ、シグマケミカル（株）Cat. No. D-7777） 細胞系統を培養させる標準的プロトコール：Ｔ‐７５又はＴ‐１５０フラスコ
；３７℃；９５％空気、５％ＣＯ_２；１００％湿度 細胞系統は、トリプシン（１ｍｇ/ｍＬ）及びエチレンジアミン四酢酸（ＥＤ ＴＡ）（Ｃａ‐Ｍｇフリーのハンク平衡塩溶液の１μＭ）を１：４乃至１：５の
分割比で約８０％の融合性で培養させる 全ての手順はスタンダードバイオアッセイレベル２（ＢＬ−２）汚染手順を利
用して、クラスＩＩ生物学的安全性キャビネットにて、無菌で実行される。スト
ック細胞系統での遺伝的浮動を排除するために、約１ヶ月間隔で、液体窒素保存
から解凍させて、フレッシュな培養を調製する。

【００５１】 方法論 細胞培養後、血球計算番盤で細胞を数える。細胞濃度をｍＬ当たり約１,０００,
０００細胞の細胞濃度に調整する。

【００５２】 フェノールレド及びＦＢＳなしで、ＤＭＥＭ中細胞を懸濁させる。

【００５３】 １ｍＬの細胞懸濁液をピペットで、米国カルフォルニア州サンディエゴにある
アナリティカルルミネッセンスラボラトリから市販されている標準ルミノメータ
キュベット（１２ｘ７５ｍｍ）へ入れる。

【００５４】 ルミノールを添加して０．２μＭの最終濃度にする。

【００５５】 リン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）、あるいはジメチルスルホキシドに溶解さ
せた試験化合物を添加し、最終濃度のレベルを０乃至３０μＭの範囲にする。

【００５６】 １００ナノグラムのＰＭＡを添加する。

【００５７】 １分間待ち、サンディエゴにあるアナリティカルルミネッセンスラボラトリか
ら市販されているモノライト２０１０ルミノメータで光カウント（つまり、発光
）を読む。 データ解析 バックグラウンド：試験化合物及びＰＭＡを添加せず。 コントロール：試験化合物を添加せず。 計算： 阻害％ ＝ １−Ｌ（試験化合物）−Ｌ（バックグラウンド） ｘ １００ Ｌ（コントロール）−Ｌ（バックグラウンド） ここでＬは発光（呼吸バースト）である。

【００５８】 結果 図１に示すように、１ナノＭのＰＭＡ存在下でのＤＰＰＣの投与量‐応答曲線で
ある。ＤＰＰＣはＰＭＡ及びその結果生じる呼吸バーストにより、マクロファー
ジの活性化を効果的に阻害する。同様な結果はＤＳＰＣでも得られる。上記結果
により、式（Ｉ）の化合物は気道にて坑炎症剤として作用することを示している
。

【００５９】 例６ マウス耳水腫モデルによる坑炎症活性のインビトロアッセイ 坑炎症剤の評価の共通インビトロモデルは、マウスの耳でのフォルボールミリ
ステートアセテート（ＰＭＡ）誘発炎症である。この方法は、Joseph Y. Chang とAlan J. Lewis（編集）, Alan R. Liss, Inc New York, pp.221-223 (1989)の
゛Pharmacological Methods in the Control of Inflammation”に説明されてい
る。このアッセイでは、炎症に特徴である水腫を、耳にＰＭＡを適用した後、約
６時間後の耳の厚さ若しくは耳十両を求めることにより定量化している。

【００６０】 材料 マウス：米国インディアナポリスにあるハーランスプラギュドーレイから入手
した雄ＣＤ‐１、２１乃至２４ｇ（製造番号３００２）。

【００６１】 方法論 ０（ビヒクル）、１％、２．５％、５％（ｗ/ｖ）の試験化合物を含有する、 アセトン及びエタノールの同体積の混合物中に０．０１％（ｗ/ｖ）のＰＭＡを 調製する。

【００６２】 同体積のアセトン及びエタノールのビヒクルコントロール溶液を調製する。

【００６３】 １％のデキサメタジンを含有する、同体積のアセトンとエタノールの混合物に
０．０１％（ｗ/ｖ）のＰＭＡのコントロール溶液を調製する。

【００６４】 マウスを３つのグループに分ける。

【００６５】 ２０μＬの上記溶液の一つをマイクロピペッタを利用して、右耳に適用して、
マウスの各グループを処置する。

【００６６】 ６時間待ち、ＣＯ_２チャンバーにてマウスを安楽死させる。

【００６７】 耳を切除して、６ｍｍ径の円形に打抜く。

【００６８】 同じグループで打ち抜かれた３つの適当な耳の重量をまとめて測定する。

【００６９】 未処置の全ての耳サンプルの平均重量を求める（コントロール耳の平均重量）
。

【００７０】 試験耳サンプルの各グループの平均重量を求める（試験耳の平均重量）。

【００７１】 以下のように耳重量の平均増加率％を計算する： 耳重量の平均増加率％ ＝ 試験耳の平均重量 − コントロール耳の平均重量 ｘ １００ コントロール耳の平均重量 結果 図２及び図３は、ＤＰＰＣの坑炎症性質の一連の研究結果を示す。５％での上
記化合物の単一の適用により、図２に示すように耳水腫には効果はなかった。１
０％では、ＤＰＰＣの単一の適用により３４％まで耳水腫が阻害された。５％の
ＤＰＰＣを２回投与した場合、ＰＭＡ適用の１回目と２０分後の適用では、耳水
腫は５４％まで減少した。しかしながら、２回治療、ＰＭＡ治療２０分前に１回
と、ＰＭＡ治療の際にもう１回では、耳水腫には実質的に効果はなかった。

【００７２】 図３は、炎症応答の最初の２時間中に繰返しＤＰＰＣを適用すると、７２％ま
で耳水腫が阻害されることが分かる。ＤＰＰＣは天然に存在する分子であるので
、公知の毒性はなく、肺炎症の治療に頻繁なスケジュールで、安全に吸入させる
ことができる。

【００７３】 前記のアッセイで得られた正の結果は、式（Ｉ）化合物の坑炎症活性を有して
いることを示している。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ＤＰＰＣ存在下での、ＰＭＡ誘発Ｒａｗ２６４．７細胞の呼吸バーストを示す
グラフである。

【図２】 マウスでのＰＭＡ誘発耳水腫の炎症への、ＤＰＰＣのさまざまな濃度の効果を
示すグラフである。

【図３】 ＤＰＰＣで処置したマウスのＰＭＡ誘発耳水腫の阻害の経過時間での結果を示
すグラフである。

【手続補正書】

【提出日】平成１２年７月３日（２０００．７．３）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正内容】

【発明の名称】 粘液溶解及び炎症治療の製薬組成物

【特許請求の範囲】

【化１】 ここでＸ、Ｙ又はＺの一つが、

【化２】 で表わされ、各Ｒは水素又はメチルであり、他の二つのＸ、Ｙ又はＺは‐ＣＯ‐
Ｒ^１で表わされ、Ｒ^１は無置換の直鎖若しくは分岐したＣ_{１１‐２１}アルキル又
はＣ_{１１‐２１}アルケニル、又はシアノ、ハロ、Ｃ_１‐６の直鎖若しくは分岐し
たアルコキシからなる群から選択された一つ又はそれ以上の置換基で置換された
直鎖若しくは分岐したＣ_{１１‐２１}アルキル又はＣ_{１１‐２１}アルケニルであり
、並びに前記のすべての異性体である式Ｉで表わされる化合物の使用。

【化３】 ここで各Ｒは水素又はメチルを表わし、Ｒ^１は無置換の直鎖若しくは分岐したＣ _{１１−２１} アルキル又はＣ_{１１−２１}アルケニル、あるいはハロ、Ｃ_１−６の直
鎖又は分岐したアルコキシ又はシアノからなる群から選択された一つ又はそれ以
上の置換基で置換された直鎖若しくは分岐したＣ_{１１−２１}アルキル又はＣ_{１１ −２１} アルケニルであり、並びに前記の全ての異性体である式ＩＩのリン脂質を
利用する請求項１記載の使用。

【化４】 ここでＸ、Ｙ又はＺの一つが、

【化５】 で表わされ、各Ｒは水素又はメチルであり、他の二つのＸ、Ｙ又はＺは‐ＣＯ‐
Ｒ^１で表わされ、Ｒ^１は無置換の直鎖若しくは分岐したＣ_{１１‐２１}アルキル又
はＣ_{１１‐２１}アルケニル、又はシアノ、ハロ、Ｃ_１‐６の直鎖若しくは分岐し
たアルコキシからなる群から選択された一つ又はそれ以上の置換基で置換された
直鎖若しくは分岐したＣ_{１１‐２１}アルキル又はＣ_{１１‐２１}アルケニルであり
、並びに前記のすべての異性体である式Ｉで表わされる化合物の使用。

【発明の詳細な説明】

【０００１】 発明の分野 本発明は粘液溶解及び炎症の局所治療の分野に係り、より詳細には、粘着性粘
液、粘膜の粘着性分泌物の粘度を低粘ちゅう化又は低下させる際の特定の粘液溶
解薬の使用に関する。粘液分泌物の粘度を減少させる、並びに炎症を軽減させる
ことにより、かかる溶解薬は、肺気道からの蓄積された粘液分泌物を除去する際
、カゼリフレックス(cough reflex)及び繊毛作用の効率を増大させる。

【０００２】 先行技術の説明 粘液の気道クリアランスに有益な効果を及ぼすことを示すことが分かっている
薬は数多報告されており、例えば、繊毛に及ぼす、又は粘液分泌物の物理的性質
を改質させることにより、上記効果を及ぼす。例えば、ヨウ化カリウムの飽和溶
液又はヨウ化グリセリンのようなヨウ化物類で表わされるあるクラスは、浄化を
容易にする「シンナー」分泌物の分泌を刺激すると考えられている。別のクラス
はＮ‐アセチルシステインである。肺粘液分泌物の粘度は、ムコタンパク質の濃
度にかなり依存し、Ｎ‐アセチルシステインのフリーのスルフヒドリル基は、ム
コタンパク質のジスルフィド結合を開裂させ、よって、粘液の粘度を減少させる
と考えられている。粘液溶解薬の概観のためには、P.C. Braga: Drugs in Bronc
hial Mucology, Raven Press, New York, 1989の刊行物を参照するとよい。

【０００３】 増大した粘液分泌物と関係する疾患をしばしば伴う炎症は、トラウマ、多くの
バクテリア及びウイルス感染、アレルギー性及び免疫原性反応、自己免疫疾患な
どのような幅広い範囲の病気をも伴う勢力のある症候である。炎症の迅速でしか
も効果的な治療が望まれており、患者の不安と、炎症自体に起因する患者の二次
損傷を最小限に押さえる。

【０００４】 肺道だけでなく、皮膚、目、粘膜（頬及び鼻）及び肛門/直腸/会陰領域を含む
体の他の表面の炎症は、適当な坑炎症剤の投与により、局所的に治療可能である
。本発明はリン脂質化合物であり、局所的に投与される粘液溶解性及び坑炎症性
の双方を有する剤の使用に関する。 １９８３年１２月２０日に発行されたTragerとChylinskiの米国特許第４,４２
１,７４８号には、レシチンの無菌の水溶性低張性溶液を含有する人工の目薬（t
earing agent）の局所的投与と、粘度変化剤とが記載されている。レシチンはリ
ン酸のコリンエステル部に結合した、ステアリン酸、パルチミン酸及びオレイン
酸のジグリセリドの混合物であるホスファチジルコリンである。それは生きてい
る生物にて発見され、神経組織の重要な構成要素である。

【０００５】 Glonekらによる米国特許第４,９１４,０８８号には、乾燥した目の治療方法を
開示しており、電荷を有するリン脂質が目に投与される。

【０００６】 Thomassenらによる１９９４年の研究（Am. Respir. Cell Mol. Biol., 10: 39
9-404）には、ジパルミトイル‐ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）が肺胞マク ロファージ分泌物に全く効果がなかったことを示すデータを提示している。

【０００７】 Girod-Vaquezらによる米国特許第５,２６２,４０５号では、閉塞気道の治療に
利用されるリン脂質を含有する組成物が開示されている。その特許では、ジパル
ミトイルホスファチジルグリセリンにような化合物の表面活性について議論して
いる。上記特許では、粘膜組織に亘る粘液に移動は、全体として、流動的界面現
象であることを保留せずに開示している。Girod-Vaquezらは、粘液の移動性を変
化させるのに鍵を握る特性として、粘液の「濡れ性」が特徴であるとしている。
Girod-Vaquezらによれば、粘液自体の濡れ性のみを変化させることにより、粘液
とその下にある粘膜との間の界面力を変化させ、粘着性のある粘膜が気道を通し
て移動することができるようになる。

【０００８】 欧州特許第ＥＰ‐Ａ‐５２８０３４号では、喘息の治療を開示しており、４０
％までのリン脂質を含有する材料を含む肺の表面活性材料が患者に投与される。

【０００９】 KaiらによるJapan J. Pharmacol. 49: 375-380の”Protective Effect of Sur
face-Active Phospholipids against the Acid-Including Inhibition of the T
racheal Mucociliary Transport”では、中枢呼吸道にある表面活性リン脂質の 生理学的役割の研究を報告している。その研究により、肺表面活性物質からなる
組成物を基礎とするリン脂質は粘膜繊毛運搬の酸誘発阻害を減少させることが判
明した。

【００１０】 BrownとPattishall（1993）によるClin. Perinatol. 20(4): 761-789の”Othe
r Uses of Surfactants”は、新生児の肺窮迫症候群の治療適用での肺性表面活 性物質の潜在的可能性を説明する概観論文である。

【００１１】 発明の要約 本発明の目的は、肺粘液の粘度を減少させる方法を提供することと、肺道内で
の炎症を軽減させることである。

【００１２】 本発明の別の目的は、過剰の粘液分泌物を有する患者の蓄積された粘液の除去
を改善させることである。

【００１３】 本発明のさらに別の目的は、炎症と関連した蓄積粘液分泌物に起因する気道閉
塞に関係するさまざまな肺疾患を改善させる方法を提供することである。

【００１４】 本発明のさらに別の目的は、皮膚、目、鼻および肺通路、肛門、直腸などを含
む哺乳類の炎症の局所的治療用の組成物を提供することである。

【００１５】 作用の特定モードに拘束されることなく、式（Ｉ）の以下のリン脂質は、顕著
な局所坑炎症性及び粘液溶解活性を示すことが判明した。

【００１６】

【化6】 ここでＸ、Ｙ又はＺの一つは以下の化学式で表わされ、

【００１７】

【化7】 さらに、各Ｒ基は独立に水素又はメチルを表わし（３つの全てのＲ基がメチルで
ある化合物が好ましい）、Ｘ、Ｙ又はＺの夫々の他の２つは独立に‐ＣＯ‐Ｒ^１ を表わし、Ｒ^１は無置換の直鎖若しくは分岐のＣ_{１１−２１}アルキル又はＣ_{１１ −２１} アルケニルであり、あるいは、ハロ（つまり、フルオロ、ブロモ、クロロ
又はヨード）、Ｃ_１−６の直鎖又は分岐アルコキシ若しくはシアノからなる群か
ら選択された（好ましくは）一つ又はそれ以上の置換基で置換された直鎖又は分
岐のＣ_{１１−２１}アルキル又はＣ_{１１−２１}アルケニルである。２つの‐ＣＯ‐
Ｒ^１基が同じであることが好ましい。

【００１８】 式（Ｉ）の本発明のリン脂質は、グリセリン骨格の２の位置に光学活性炭素を
含有する。側鎖Ｒ^１に存在する光学中心を有するものを含む全ての光学異性体は
、本発明の範囲内にあると考える。さらに、Ｒ^１がアルケニルであることから生
じる幾何異性体も本発明に含まれる。

【００１９】 式（Ｉ）の好ましいリン脂質は、式（ＩＩ）で表わされる。

【００２０】

【化８】 ここで、Ｒ及びＲ^１は前述に定義した通りであり、それらの全ての異性体を含む
。

【００２１】 式（Ｉ）の最も好ましいリン脂質は、ジパルミトイルホスファチジルコリン（
ＤＰＰＣ）であり、１,２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコ リン及びジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）として同定され、さ
らに、１,２‐ジステアロイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコリンとして同 定される。ＤＰＰＣの天然の異性体は、ジパルミトイル‐Ｌ‐α‐ホスファチジ
ルコリンである。

【００２２】 式（Ｉ）の他の代表的なリン脂質には、 １,２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォエタノールアミン； １,３‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐２‐ホスフォコリン； １,２‐ジステアロイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォ‐（Ｎ‐メチル）エタ ノールアミン； １‐パルミトイル‐２‐オレオリル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコリン； １,３‐ジステアロイル‐ｓｎ‐グリセロ‐２‐ホスフォ‐（Ｎ、Ｎ‐ジメチル ）エタノールアミン； １,２‐ジラウリル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコリン； １,２‐ジエイコサノイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコリン； １‐オレオイル‐３‐ミリストイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォ‐（Ｎ‐メ
チル）エタノールアミン； １,２‐ジ‐（９‐クロロ‐オクタデカノイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフ ォコリン； １,２‐ジ‐（９‐オクタデセノイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォコリン ； １,２‐ジ‐（８‐シアノ‐ヘキサデカノイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフ ォコリン； １,３‐ジ‐（９‐ヘキサデセノイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐２‐ホスフォコリン と １,２‐ジ‐（８‐メトキシ‐ヘキサデカノイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐２‐ホス フォコリンがある。

【００２３】 発明の詳細な説明 式（Ｉ）のリン脂質及びその合成方法は文献に公知であり、そのうちの最も好
ましいＤＰＰＣ及びＤＳＰＣを含む数多は市販されている。例えば、米国特許第
４,８１４,１１２号及び第４,６２２,１８０号や、HansenらによるLipids (1982
), 17, 453-459や、MurariらによるJ. Org. Chem., (1982), 47, 2158-2163や、
LammersらによるChem. Phys. Lipids (1978), 22, 293-305や、EiblらによるLei
bigs Ann. Chem. (1967), 709, 226-230や、OkazakiらによるBull. Chem. Soc.
Jpn. (1981), 54, 2399-2407を参照するとよい。

【００２４】 ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）は、ヒトの自然の肺の表面
活性物質の主要な成分（約８０％）である。肺の表面活性物質は、肺胞の表面で
通常分泌される物質である。肺の表面活性物質の欠乏が未熟児及び幼児の呼吸窮
迫症候群（ＲＤＳ）の原因であると認められる。かかる欠乏は大人の呼吸窮迫症
候群（ＡＲＤＳ）の成長では主な要因ではないが、その疾患の病態生理学に重要
な寄与をしている。

【００２５】 ＲＤＳは未熟児の間では、死及び能力障害を引き起こす原因である。加えて、
年間ＡＲＤＳの約１５０,０００件では、６０乃至８０％の死亡率をもたらすと 報告されている。ＲＤＳ及びＡＲＤＳを治療するために、多くの天然の表面活性
物質（ヒト及びウシ）及び全合成された表面活性物質が、例えば、エアロゾル調
合の吸入により、ヒト被験者の肺に投与されている。

【００２６】 一般に、多くの合成吸入表面活性物質調合にはＤＰＰＣが含まれている。なぜ
なら、ＤＰＰＣはＲＤＳ及びＡＲＤＳを患っている患者の呼吸機能を改善させる
ということが周知であるからである。肺胞の表面張力を減少させ、よって、酸素
と二酸化炭素との交換をより容易にする。例えば、米国特許第５,２９９,５６６
号には、ＤＰＰＣを含有する表面活性物質の分散液の調製方法が開示されており
、米国特許第５,１１０,８０６号には、ＤＰＰＣ、長鎖アルコール及び非イオン
性界面活性剤とを含有する合成表面活性物質が開示されており、米国特許第４, ７６５,９８７号には、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ及びソヤレシチン（Soya lecithin）
を含有する合成表面活性物質が開示されており、米国特許第４,５７１,３３４号
には、肺表面活性物質と組み合わせたさまざなま薬が開示されており、米国特許
第４,３１２,８６０号には、ＤＰＰＣ及び脂肪酸を含有する合成表面活性物質が
開示されている。各前記文献は参考文献として、本願にて引用される。

【００２７】 しかしながら、出願人はＤＰＰＣ又は式（Ｉ）のリン脂質の他の何れの実施例
も、本発明の基礎である、粘液溶解性若しくは坑炎症活性を有するものとして報
告されていなかったことは、知らなかった。本発明のリン脂質Ｉは粘着性粘液の
粘度を減少させ、よって、肺道からの粘度のある濃縮された粘液の除去を容易に
し、炎症を軽減させることが判明した。結果として、粘液の気管支及び気管ドレ
ナージが改善され、肺及び上部呼吸道での粘液の蓄積に起因する急性若しくは慢
性肺疾患のうっ血が緩和される。

【００２８】 よって、本発明は粘着性肺粘液分泌物及び炎症に起因する呼吸窮迫を軽減させ
る方法、より詳細には、患者が患っている非肺胞タイプ、つまり気管、気管支及
び細気管支での窮迫を軽減させる方法を提供する。その方法は、エアロゾルの断
続的な吸入により、肺道に式（Ｉ）のリン脂質を粘液溶解に有効な量を運搬させ
ることにより、うまく達成される。

【００２９】 さらに、式（Ｉ）の化合物は、以下に限定されないが、気管支喘息、気管支炎
、膵嚢胞性繊維症、リウマチ様関節炎、乾癬、即座及び遅延タイプ過敏症反応、
結膜炎、鼻炎、痔などを含む炎症に寄与する若しくは主因である病気状態の局所
治療にて有用である。 「局所適用」とは、肺膜に局所的に接触するように吸入されて、若しくは直腸膜
に接触するように浣腸又は坐薬により、皮膚、結膜、粘膜、周口膜に局所的であ
る。

【００３０】 投与及び製薬組成物 効果的である必要性のある式（Ｉ）の化合物の量は、もちろん、処置すべき個体
哺乳類や、炎症を生じさせる状態により変化し、最終的には、医者及び獣医の裁
量である。考慮すべき要因としては、処置すべき状態、投与経路、調合の性質、
哺乳類の体重、年齢、一般的な状態及び投与すべき特定化合物がある。

【００３１】 一般には、化合物は、任意に影響を及ぼす領域に利用される。しかしながら、
個別に測定した投薬量は本発明の範囲内であり、投薬の公知な投与量に応じて炎
症の鎮静を監視したいのなら、個々の患者に投与される。

【００３２】 一般には、式（Ｉ）の化合物を含有する製薬組成物には、活性成分として、薬
１．０％から１００％の一つ又はそれ以上の式（Ｉ）の化合物を包含する。活性
成分が全体の組成物以下ならば、残りは局所投与用の薬剤学的に適当なキャリア
又は、乳化剤、乾燥剤、色剤、香気剤、安定剤、流動促進剤などのような、局所
製薬技術に周知である他の副成分を含む。

【００３３】 式（Ｉ）の化合物を含有する好ましい製薬組成物は、溶液、懸濁液、エマルジ
ョン、ゲル、ローション、クリーム、軟膏、坐薬などのような液体若しくは半液
体の形態であり、従来の局所キャリアを利用する。吸入治療では、従来のエアロ
ゾル調合及び方法を利用する。

【００３４】 粘液溶解活性 本発明のリン脂質の粘液溶解活性は、それぞれウシ気管粘液と動物モデルを利用
して、標準的インビトロ及びインビボアッセイにて調べた。インビトロアッセイ
に関して、ウシ気管粘液をＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ又は他の式（Ｉ）のリン脂質と混
合させたときに、粘液は液化され、ビヒクル単独（生理食塩水）を利用したとき
よりも自由な流動性を有する。インビボ粘液溶解アッセイは、本願の参考文献と
して引用されるChandらによるAgents and Actions, 38: 165-170に説明されたア
ッセイと同様である。特に、１６６頁以下にあるマウスの粘液溶解活性の評価を
参照するとよい。前記のインビトロ及びインビボアッセイの詳細な説明は、後述
の例に記載されている。試験化合物であるＤＰＰＣから典型的に得られた結果か
ら、既知の粘液溶解活性のあるＮ‐アセチルシステインと同等な粘液溶解活性を
示す。

【００３５】 肺気道への薬のエアロゾル運搬は長い年数、臨床実務で利用されている。さま
ざまな医療薬剤が、例えば、Ｎ‐アセチルシステインや、ＲＤＳ及びＡＲＤＳを
患っている患者を治療する際に、ＤＰＰＣ及びＤＳＰＣを含有する合成表面活性
物質調合を含み、エアロゾル治療に利用されている。エアロゾル運搬システムの
利点は、延長した期間にわたり、断続的に全肺領域へ幅広く行渡る薬剤運搬にあ
る。

【００３６】 式（Ｉ）のリン脂質は、例えば、噴霧器若しくは測定投与した吸入器（metere
d-dose inhaler）による投与の使用するために準備したエアロゾル化液体調合の
分散液として利用することを意図している。本発明のリン脂質は、直接吸入用の
適当な平均径の無菌親液性粉末、あるいはその粉末は水或いは分散液としての約
０．４から約０．９％の生理食塩水とともに再構成され、適当な噴霧器若しくは
吸入システムを介して運搬される。何れかの軸に沿った微粒子分散粉末の好まし
い平均径は、約１から約１０ミクロン（μｍ）であり、より好ましくは約５から
１０μｍである。一般には、リン脂質は、例えば、測定投与量エアロゾル単位と
して存在するジクロロジフルオロメタンのような本技術分野で認められる噴射剤
とともに、約０．１から１０％重量/正常若しくは僅かに低張性生理食塩水に分 散させた体積の量を含む。各衝撃作用により、０．１乃至１００ｍｇのリン脂質
Ｉが放出される。

【００３７】 エアロゾルによる薬運搬システムを製造する技術は、よく文献に記載されてい
る。式（Ｉ）のリン脂質は本願で繰返し詳細に説明するまでもなく、本技術分野
で認められる方法により、かかるシステムに導入される。実際に、前述したよう
に、ＤＰＰＣ及びＤＰＳＣを含有するエアロゾル調合及びそれらの調製は、ＲＤ
Ｓ及びＡＲＤＳ治療に対して以前に説明されており、同様なエアロゾル方法論が
本発明に利用される。

【００３８】 本発明によれば、本発明のリン脂質Ｉは、炎症及び粘液粘度又は蓄積粘液が大
きな問題である呼吸病気の治療における吸入剤として有用である。かかる病気に
は、慢性気管支炎、膵嚢胞繊維炎及び喘息（American Thoracic Society, Sympo
sia Excerpts, 1994 International Conferenceを参照）がある。さらに、閉鎖 性肺疾患は増大した粘液分泌物と関連している（Ferguson and Chermiack (1993
) Management of COPD, New Eng. J. Med., pp. 1017-1021）。本発明はＲＤＳ やＡＲＤＳの治療には応用できない。なぜならば、上記呼吸疾患は現存している
肺胞であり、粘液性分泌物を濃縮する若しくは過剰の粘液性分泌物により、特徴
付けられない。

【００３９】 本発明のリン脂質Ｉは単独で、又は他の粘液溶解性成分及び/又は気道及び肺 の肺胞へのエアロゾル運搬に適する他の活性成分、例えば、抗生物質や気管支拡
張薬などと組合わせて利用される。

【００４０】 坑炎症性活性 炎症は、マクロファージを含み、さまざまなタイプの細胞タイプが関係する複雑
な過程である。例えば、S. L. Kunkel, “Inflammatory Cytokines”, pp. 1-15
, in Manual of Vascular Mediators, P. A. Ward, Editor, produced by the p
ublishers of Hospital Practiceを参照するとよい。Ralph and Nakoinz, J. Im
munology (1977) 119: 950-954及びRaschkeらによるCell (1978)15: 261-267を 含み、マクロファージに関する参考文献は数多くある。

【００４１】 マクロファージは感染により、並びにさまざまな非感染刺激物及びプロ炎症(p
ro-inflammatory)剤により活性化される。活性化されると、マクロファージはさ
まざまな反応に関与する。マクロファージはバクテリアを食菌し、酸素依存若し
くは酸素に独立な経路の何れかにより殺す。酸素依存経路に関して、マクロファ
ージの活性化により、酸素消費が増加し、反応性酸素種（例えば、スーパーオキ
サイドのようなラジカル）が発生する。活性化マクロファージによる反応性酸素
種の発生は、炎症応答と関連している。加えて、活性化されると、マクロファー
ジは、数多のインターロイキン及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ‐α）を含むさまざ
まな炎症サイトカインを放出する。上記活性化関連過程の何れかの阻害により、
炎症を軽減させることができる。

【００４２】 上記理由のため、マクロファージ活性化は炎症過程の研究では非常に重要であ
る。マクロファージ活性化を低減させる剤は、坑炎症剤として有用である傾向に
ある。

【００４３】 式（Ｉ）化合物の坑炎症活性は、従来技術の多くの方法によりアッセイされた
。炎症、マクロファージ活性化及びマウス耳水腫の二つのモデルを例で利用し、
本発明の化合物の坑炎症性の効果を例証する。

【００４４】 説明の目的でＤＰＰＣを利用した以下の例は説明の目的であり、本発明の範囲
を限定することを意図したものではない。

【００４５】 例１ ウシ気管粘液の粘液溶解活性 気管粘液は、ローカル屠場から入手した屠殺直後のウシから優しくスクレープし
た。固定させた等温条件下で、その粘液は、５ｍｌの粘液と１ｍｌの生理食塩水
との割合で混合し、１分間音波処理した。１ｍｌの試験化合物又はコントロール
生理食塩水に１ｍｌの上記混合物を添加し、さらに１分間音波処理した。音波処
理５分後、１ｍｌのサンプルを１８ｇｘ１．５インチ針を有する３ｍｌのシリン
ジのバレルへピペットで移し、リングスタンドに垂直に取付けた。時間ゼロで、
針のキャップを外し、シリンジ/針組合わせを介して循環させた粘液の循環時間 を記録した。結果を以下に示す。

【００４６】 化合物 最終濃度 循環時間 コントロール生理食塩水 コントロール ３分３２秒 ＤＰＰＣ ５ｍｇ/ｍｌ ２分２０秒 結果から、ＤＰＰＣはウシ気管粘液への直接の粘液溶解効果を有することがわ
かる。同様な結果はＤＳＰＣでも得られる。

【００４７】 例２ マウス気管粘液の粘液溶解活性 エアロゾルとして、マウスへ試験化合物を運搬する手順は、前述に引用したChan
dらにより説明された、マウスに粘液溶解活性の評価に利用したアッセイを変更 させたものである。 １． 試験動物はＨｓｄ：１ＣＲ（ＣＤ−１）マウスであり、その重量は夫々約
２５ｇである。 ２． 試験化合物は通常の生理食塩水で希釈して２５ｍｇ/ｍｌの濃度にし、約 １００ｍｇ/ｋｇでヒトDe Vilbiss atomizer Model No. 15を利用して投与した 。コントロールグループは生理食塩水を与える。ノズルはマウスの口に置かれ、
２回スプレーの投与量を与える。 ３． ３０分後、生理食塩水中の５％溶液として、溶解させたフェノールレッド
を１０ｇ体重当たり０．１ｍｌの供給量でＩＰを与えた。 ４． フェノールレッド投与後、動物は１００％のＣＯ_２に晒して殺す。 ５． 全体の気管を除去し、外部ブロットドライ及び気管を１．０ｍｌ生理食塩
水で洗浄した。３０分後、０．１ｍｌの１Ｍ水酸化ナトリウムを気管洗浄液に添
加して、洗浄液体のｐＨを安定化させる。 ６． 気管へ分泌されたフェノールレッドの量を、５４６ｎｍで光化学的に定量
化する。 ７． 運搬された供給量の補正は、５回の別々の管で、管ごとに５回のスプレイ
の体積を測定して行う。平均量は５８乃至６３μｌの範囲で、６０．４μｌ/ス プレイである。

【００４８】 試験結果から、Ｎ‐アセチルシステインでは約６２％であり、生理食塩水のコ
ントロールではゼロ％であったのと比べて、ＤＰＰＣでは粘液溶解活性の測定さ
れた変化の割合は約５８％である。

【００４９】 例３ 吸入カートリジ 成分 カートリッジ当たりの量 ＤＰＰＣ ５．０ｍｇ ラクトース、q.s. ２５．０ｍｇ 活性成分であるＤＰＰＣは、平均径で１０乃至５０ミクロンの粒子サイズに予
めマイクロサイズ化され、高エネルギーミキサーで通常の錠剤グレードのラクト
ースとブレンドされる。粉末ブレンドがマイクロサイズ化され、１乃至１０ミク
ロンの微粒子サイズになり、適当な大きさの硬質ゼラチンカプセル、又は適当な
カプセル化機械のカートリッジに充填される。カプセル若しくはカートリッジの
呼吸用含有量は、粉末吸入器を利用して投与される。

【００５０】 例４ 測定液体投与量 成分 カートリジ当たりの量 ＤＰＰＣ ５．０重量％ 等張性生理食塩水 q. s. 活性成分であるＤＰＰＣを十分な量の無菌等張性生理食塩水に溶解させて、５
重量％の溶液を作る。溶液は、適当な噴霧器装置を介してエアロゾル測定投与量
の形態で投与される。

【００５１】 例５ マクロファージ活性化阻害による坑炎症活性のインビトロアッセイ 肺胞マクロファージの活性化は肺炎症の重要な要素である。その活性化状態で
は、肺胞マクロファージはさまざまな炎症媒介物質及び反応性酸素種を分泌する
。炎症の本発明のインビトロモデルでは、マウスマクロファージはフォルボール
‐１２‐ミリステート‐１３‐アセテート（ＰＭＡ）により活性化される。ＤＰ
ＰＣ存在下、若しくは不存在下でのマクロファージ活性化の強度は、マクロファ
ージの呼吸バーストを測定することにより求める（反応性酸素種の放出）。

【００５２】 ＲＡＷ２６４．７細胞系統（American Type Culture Collection, Rockville,
Maryland, USA, Accesion No. TIB 71）はマウス単核細胞/マクロファージ系統
であり、その細胞は多くのマクロファージの識別可能な機能を示す。マクロファ
ージ同様、その細胞は食菌可能であり、適当な信号に応じて、酸化的バースト（
増大した酸素消費）を受け、酸素ラジカル（例えば、スーパーオキサイド）が発
生する。インビトロで上記細胞の活性化を阻害する剤は、呼吸バーストを阻害し
、活性化と関連する酸素ラジカルの対応する生産により、炎症過程の重要な工程
を阻止する。

【００５３】 呼吸バースト及びマクロファージ活性化に伴う対応する酸素ラジカルの生産は
、培地に添加したルミノールと酸素ラジカルの反応を基礎とする化学発光を含む
多くの方法で測定することが可能である（M. A. Trushらによる1978, “The Gen
eration of Chemiluminescence by Phagocyte Cells”, Methods in Enzymology
57: 462-494）。マクロファージ細胞系統の培地のルミノールから生じる化学発
光は、マクロファージ活性化のマーカとして、本技術分野では認識されている。

【００５４】 材料 細胞系統：ＲＡＷ ２６４．７（ＡＴＣＣ ＴＩＢ‐７１、装置依存（attach
ment dependent）） 培地：１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）のあるダルベッコ改質イ−グル培地（
ＤＥＭＥ、シグマケミカル（株）Cat. No. D-7777） 細胞系統を培養させる標準的プロトコール：Ｔ‐７５又はＴ‐１５０フラスコ
；３７℃；９５％空気、５％ＣＯ_２；１００％湿度 細胞系統は、トリプシン（１ｍｇ/ｍＬ）及びエチレンジアミン四酢酸（ＥＤ ＴＡ）（Ｃａ‐Ｍｇフリーのハンク平衡塩溶液の１μＭ）を１：４乃至１：５の
分割比で約８０％の融合性で培養させる 全ての手順はスタンダードバイオアッセイレベル２（ＢＬ−２）汚染手順を利
用して、クラスＩＩ生物学的安全性キャビネットにて、無菌で実行される。スト
ック細胞系統での遺伝的浮動を排除するために、約１ヶ月間隔で、液体窒素保存
から解凍させて、フレッシュな培養を調製する。

【００５５】 方法論 細胞培養後、血球計算番盤で細胞を数える。細胞濃度をｍＬ当たり約１,０００,
０００細胞の細胞濃度に調整する。

【００５６】 フェノールレド及びＦＢＳなしで、ＤＭＥＭ中細胞を懸濁させる。

【００５７】 １ｍＬの細胞懸濁液をピペットで、米国カルフォルニア州サンディエゴにある
アナリティカルルミネッセンスラボラトリから市販されている標準ルミノメータ
キュベット（１２ｘ７５ｍｍ）へ入れる。

【００５８】 ルミノールを添加して０．２μＭの最終濃度にする。

【００５９】 リン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）、あるいはジメチルスルホキシドに溶解さ
せた試験化合物を添加し、最終濃度のレベルを０乃至３０μＭの範囲にする。

【００６０】 １００ナノグラムのＰＭＡを添加する。

【００６１】 １分間待ち、サンディエゴにあるアナリティカルルミネッセンスラボラトリか
ら市販されているモノライト２０１０ルミノメータで光カウント（つまり、発光
）を読む。 データ解析 バックグラウンド：試験化合物及びＰＭＡを添加せず。 コントロール：試験化合物を添加せず。 計算： 阻害％ ＝ １−Ｌ（試験化合物）−Ｌ（バックグラウンド） ｘ １００ Ｌ（コントロール）−Ｌ（バックグラウンド） ここでＬは発光（呼吸バースト）である。

【００６２】 結果 図１に示すように、１ナノＭのＰＭＡ存在下でのＤＰＰＣの投与量‐応答曲線で
ある。ＤＰＰＣはＰＭＡ及びその結果生じる呼吸バーストにより、マクロファー
ジの活性化を効果的に阻害する。同様な結果はＤＳＰＣでも得られる。上記結果
により、式（Ｉ）の化合物は気道にて坑炎症剤として作用することを示している
。

【００６３】 例６ マウス耳水腫モデルによる坑炎症活性のインビトロアッセイ 坑炎症剤の評価の共通インビトロモデルは、マウスの耳でのフォルボールミリ
ステートアセテート（ＰＭＡ）誘発炎症である。この方法は、Joseph Y. Chang とAlan J. Lewis（編集）, Alan R. Liss, Inc New York, pp.221-223 (1989)の
゛Pharmacological Methods in the Control of Inflammation”に説明されてい
る。このアッセイでは、炎症に特徴である水腫を、耳にＰＭＡを適用した後、約
６時間後の耳の厚さ若しくは耳十両を求めることにより定量化している。

【００６４】 材料 マウス：米国インディアナポリスにあるハーランスプラギュドーレイから入手
した雄ＣＤ‐１、２１乃至２４ｇ（製造番号３００２）。

【００６５】 方法論 ０（ビヒクル）、１％、２．５％、５％（ｗ/ｖ）の試験化合物を含有する、 アセトン及びエタノールの同体積の混合物中に０．０１％（ｗ/ｖ）のＰＭＡを 調製する。

【００６６】 同体積のアセトン及びエタノールのビヒクルコントロール溶液を調製する。

【００６７】 １％のデキサメタジンを含有する、同体積のアセトンとエタノールの混合物に
０．０１％（ｗ/ｖ）のＰＭＡのコントロール溶液を調製する。

【００６８】 マウスを３つのグループに分ける。

【００６９】 ２０μＬの上記溶液の一つをマイクロピペッタを利用して、右耳に適用して、
マウスの各グループを処置する。

【００７０】 ６時間待ち、ＣＯ_２チャンバーにてマウスを安楽死させる。

【００７１】 耳を切除して、６ｍｍ径の円形に打抜く。

【００７２】 同じグループで打ち抜かれた３つの適当な耳の重量をまとめて測定する。

【００７３】 未処置の全ての耳サンプルの平均重量を求める（コントロール耳の平均重量）
。

【００７４】 試験耳サンプルの各グループの平均重量を求める（試験耳の平均重量）。

【００７５】 以下のように耳重量の平均増加率％を計算する： 耳重量の平均増加率％ ＝ 試験耳の平均重量 − コントロール耳の平均重量 ｘ １００ コントロール耳の平均重量 結果 図２及び図３は、ＤＰＰＣの坑炎症性質の一連の研究結果を示す。５％での上
記化合物の単一の適用により、図２に示すように耳水腫には効果はなかった。１
０％では、ＤＰＰＣの単一の適用により３４％まで耳水腫が阻害された。５％の
ＤＰＰＣを２回投与した場合、ＰＭＡ適用の１回目と２０分後の適用では、耳水
腫は５４％まで減少した。しかしながら、２回治療、ＰＭＡ治療２０分前に１回
と、ＰＭＡ治療の際にもう１回では、耳水腫には実質的に効果はなかった。

【００７６】 図３は、炎症応答の最初の２時間中に繰返しＤＰＰＣを適用すると、７２％ま
で耳水腫が阻害されることが分かる。ＤＰＰＣは天然に存在する分子であるので
、公知の毒性はなく、肺炎症の治療に頻繁なスケジュールで、安全に吸入させる
ことができる。

【００７７】 前記のアッセイで得られた正の結果は、式（Ｉ）化合物の坑炎症活性を有して
いることを示している。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 炎症を患っている哺乳類の炎症を局所的に減少させ、濃縮さ
   れた又は蓄積された粘液分泌物と関係する肺疾患に苦しんでいる患者の粘液の粘
   度を減少させる薬剤の製造において、 【化１】 ここでＸ、Ｙ又はＺの一つが、 【化２】 で表わされ、各Ｒは水素又はメチルであり、他の二つのＸ、Ｙ又はＺは‐ＣＯ‐
   Ｒ^１で表わされ、Ｒ^１は無置換の直鎖若しくは分岐したＣ_{１１‐２１}アルキル又
   はＣ_{１１‐２１}アルケニル、又はシアノ、ハロ、Ｃ_１‐６の直鎖若しくは分岐し
   たアルコキシからなる群から選択された一つ又はそれ以上の置換基で置換された
   直鎖若しくは分岐したＣ_{１１‐２１}アルキル又はＣ_{１１‐２１}アルケニルであり
   、並びに前記のすべての異性体である式Ｉで表わされる化合物の使用。
2. 【請求項２】 【化３】 ここで各Ｒは水素又はメチルを表わし、Ｒ^１は無置換の直鎖若しくは分岐したＣ _{１１−２１} アルキル又はＣ_{１１−２１}アルケニル、あるいはハロ、Ｃ_１−６の直
   鎖又は分岐したアルコキシ又はシアノからなる群から選択された一つ又はそれ以
   上の置換基で置換された直鎖若しくは分岐したＣ_{１１−２１}アルキル又はＣ_{１１ −２１} アルケニルであり、並びに前記の全ての異性体である式ＩＩのリン脂質を
   利用する請求項１記載の方法。
3. 【請求項３】 ジパルミトイル又はジステアロイルホスファチジルコリンを
   利用する請求項１又は２記載の方法。
4. 【請求項４】 ジパルミトイルホスファチジルコリンを利用する請求項１乃
   至３のうち何れか１項記載の方法。
5. 【請求項５】 一つ又はそれ以上の前記化合物は、喘息、気管支炎、膵嚢胞
   繊維炎、結膜炎、皮膚炎、痔及び鼻炎からなる群から選択された病気の治療の局
   所薬剤の製造に利用される請求項１乃至４のうち何れか１項記載の方法。
6. 【請求項６】 濃縮された若しくは蓄積された粘液分泌物が関係する肺疾患
   を患っている患者での粘液の粘度を低下させるエアロゾル粉末又は液体薬剤の製
   造において、 【化４】 ここでＸ、Ｙ又はＺの一つが、 【化５】 で表わされ、各Ｒは水素又はメチルであり、他の二つのＸ、Ｙ又はＺは‐ＣＯ‐
   Ｒ^１で表わされ、Ｒ^１は無置換の直鎖若しくは分岐したＣ_{１１‐２１}アルキル又
   はＣ_{１１‐２１}アルケニル、又はシアノ、ハロ、Ｃ_１‐６の直鎖若しくは分岐し
   たアルコキシからなる群から選択された一つ又はそれ以上の置換基で置換された
   直鎖若しくは分岐したＣ_{１１‐２１}アルキル又はＣ_{１１‐２１}アルケニルであり
   、並びに前記のすべての異性体である式Ｉで表わされる化合物の使用。