JP2002504123A - 生物学的物質をデリバリーするための組成物およびその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、成分として、少なくとも１種の非イオン性の水溶性セグメントおよび少なくとも１種のポリイオンセグメントを有するブロックコポリマー、および疎水基を有する少なくとも１種の荷電した界面活性剤を有してなる超分子複合体を含む組成物であって、その界面活性剤の電荷がブロックコポリマーのポリイオンセグメントの電荷と反対である、生体物質の送達を促進するための組成物を提供する。その複合体の成分は、その反対の電荷間および界面活性剤の疎水基間の相互作用により結合する。その複合体は生物学的活性を有するアニオン界面活性剤を有していてもよく、その場合、かかるアニオン界面活性剤の正味の電荷は約１０よりも大きくない。

Description

【発明の詳細な説明】 生物学的物質をデリバリーするための組成物およびその製法 ３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§２０２（Ｃ）にしたがって、米国政府は、National Scien ce Fundationからの基金により一部作製された本明細書に記載する発明において 一定の権利を有する。発明の分野 本発明は、限定するものではないが、治療剤および診断剤を包含する生物学的 に活性な物質をデリバリーするための組成物に、特に、ブロックイオノマーおよ び反対に荷電した界面活性剤を含み、両親媒性ブロックコポリマーおよび高分子 電解質−界面活性剤複合体の組み合わさった性質を示す組成物に関する。従来技術 ＤＮＡ、および、非イオン性水溶性セグメント、例えば、ポリ（エチレンオキ サイド）（ＰＥＯ）およびポリカチオンセグメントを含むブロックイオノマーか らの高分子電解質複合体は、近年、遺伝子治療を行う手段として、例えば核酸な どのマクロ分子の生細胞へのデリバリーを促進することが提案された。これらの 複合体において、ＤＮＡの電荷はポリカチオンセグメントにより中和されている が、複合体は、ＰＥＯセグメントの作用により可溶性のままである。かかる系は 、ブロックイオノマーにより形成される一連の広範囲に及ぶ高分子電解質複合体 に属する。ＰＥＯ−ｂ−ポリ（Ｌ−リジン）カチオンおよびＰＥＯ−ｂ−ポリ（ α−β−アスパルテート）アニオン、ならびに、ＰＥＯ−ｂ−ポリメタクリレー トアニオンおよびポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウム）カチオンからの 複合体についての報告は、これらが両親媒性ブロックコポリマーおよび高分子電 解質複合体の組み合わさった性質を有する、新たな型の化学物質であることを示 唆している。かかる系は、安定で、水溶液に可溶であり、ＰＥＯセグメントから のシェルに囲まれた中和された ポリイオンセグメントからのミクロ相を形成し得ることが報告されている。加え て、これらの複合体は、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）により特徴付けられるものと 類似して、濃度依存的にミセル−様集合体を形成するようである。同時に、これ らの系は、臨界値を超えて塩濃度が増加すると解離する傾向があるため、塩−感 受性であるという点で、規則的な高分子電解質複合体のようにふるまう。さらに 、これらは、中和されたポリイオンセグメントが関与する置換反応に関係するこ とが示されている。これらの系は、高分子電解質成分を混合後のポリイオンカッ プリング反応の結果として生成される。かかる系の安定性は、臨界的に、反対の 電荷の相互作用する高分子電解質間の塩結合の数に依存する。協力的な系を形成 するために、少なくとも１０個の塩結合が必要である(Papisov and Litmanovich ,Adv.Polym．Sci.,1988,90:139)。好ましくは、塩結合の数は２０またはそれ以 上であるべきである。このことは、分子の正味の電荷が必要な数の塩結合を形成 するのに必要な最小数よりも少ない場合、すなわち、１０〜２０よりも少ない場 合、複合体が形成されないことを意味する。高分子電解質の分子内の荷電した単 位の最小分子量を約７０であると仮定した場合、かかる系の成分の分子量は、約 ７００、好ましくは約１，４００よりも大きくなければならない。しかしながら 、実際問題として、多くの荷電した単位が約２００以上の分子量を有している。 さらに、多くの相互作用する分子は、生理学的なｐＨにおいて２０〜３０％が荷 電している弱い塩基または酸である。このことは、これらの系におけるポリイオ ンの最小分子量を少なくとも３〜５倍高く、すなわち、少なくとも約２，０００ 〜７，０００とするであろう。通常、かかる系において用いられるポリヌクレオ チドの分子量は、８，０００〜１０，０００およびそれ以上である。それゆえ、 これらの系は、約１０〜２０よりも少ない電荷および約２，０００〜７，０００ よりも少ない分子量を有する物質とは形成され得ないという点で、基本的に制限 されている。発明の要約 本発明の一態様によれば、少なくとも１種の非イオン性の水溶性セグメントお よび少なくとも１種のポリイオンセグメントを有するブロックコポリマー、およ び疎 水基を有する少なくとも１種の荷電した界面活性剤を含む超分子複合体を含む組 成物であって、該界面活性剤の電荷がブロックコポリマーのポリイオンセグメン トの電荷と反対である組成物が提供される。複合体の成分は、その反対の電荷間 および界面活性剤の疎水基間の相互作用により結合する。生物学的活性を有する アニオン界面活性剤を含む本発明の組成物においては、しかしながら、かかるア ニオン界面活性剤は、約１０よりも多くない、好ましくは５よりも多くない、電 荷を有する。 ブロックコポリマーのポリイオンセグメントは、ポリアニオン性であってもよ く、その場合、界面活性剤はカチオン界面活性剤であり、または、ポリカチオン 性であってもよく、その場合界面活性剤はアニオン界面活性剤である。 本発明の別の態様によれば、小胞の形態にある上記した組成物の調製方法が提 供される。本発明の方法を行う場合、少なくとも一種の非イオン性の水溶性セグ メントとおよび少なくとも一種のポリイオンセグメントを有するプロックコポリ マーを、ブロックコポリマーのポリイオンセグメントの電荷と反対である界面活 性剤の電荷を有する、疎水基を有する荷電した界面活性剤と混合する。ブロック コポリマー中のポリイオン性セグメントの正味の電荷に対する界面活性剤の正味 の電荷の比は、約．０１〜約１００の間である。 本発明の組成物は、上記した、これまでに報告されているブロックイオノマー 高分子電解質複合体よりも多くの利点を提供する。例えば、本発明の組成物を用 い、比較的低分子量の生物学的物質（biological agent）および１０よりも少な い電荷を有する生物学的物質の治療的指標を改善することができる。さらに、こ れらはその水溶性を増加することにより生物学的物質の投与を容易にできる。そ れらはまた、体内における生物学的物質の安定性を増加させ、副作用を減少させ る。それらはさらに、体内に投与後、その中に組み込まれた生物学的物質の生物 学的利用能を増加させる。さらに、本発明の組成物は、部位特異的薬物デリバリ ー、および、酸性ｐＨを有する部位、例えば、腫瘍、細菌、胃、筋肉組織、また はアルカリ性ｐＨを有する部位、例えば、胃腸管における、放出のための手段を 備える。それらはさらに、初期エンドソームにおける生物学的物質の放出により 、および、細胞質および細胞コンパートメントへのその輸送の増強により、細胞 内へのマクロ分子および小型分 子の両者の生物学的物質のコンパートメント−特異的デリバリーのための手段を 有する。図面の詳細な説明 図１は、臭化セチルピリジニウム（１）および臭化ドデシルピリジニウム（２ ）のポリエチレンオキサイド−ブロック−ポリ（メタクリル酸ナトリウム）への 結合等温線をグラフで表したものであり、ふさがれた結合部位のフラクションで あるβを、界面活性剤濃度の関数としてプロットする。 図２は、ドキソルビシン（１）およびローダミン１２３（２）のポリエチレン オキサイド−ブロック−ポリ（メタクリル酸ナトリウム）への結合等温線をグラ フで表したものであり、ふさがれた結合部位のフラクションであるβを、生物学 的物質濃度の関数としてプロットする。 図３は、臭化セチルピリジニウムとポリエチレンオキサイド−ブロック−ポリ （メタクリル酸ナトリウム）（１）および臭化セチルピリジニウムとポリ（メタ クリル酸ナトリウム）（２）の混合物における混濁度を、混合物の配合の関数と して示すグラフである。 図４は、界面活性剤とブロックコポリマーのイオン単位の種々の比における、 臭化セチルピリジニウムとポリ（メタクリル酸ナトリウム）の混合物において形 成された粒子のゼータ電位（図４Ａ）および効果的な径（図４Ｂ）をグラフで示 したものである。 図５は、臭化セチルピリジニムおよびポリエチレン−オキサイド−ブロック− ポリメタクリル酸の混合物についてのポリイオンカップリング反応における変換 度の依存性を示す。発明の詳細な説明 本出願と同時に出願されるものは、発明者がAlexander V．Kabanov,Adi Eisen bergおよびVictor A.Kabanovであり、処理番号ＵＮＭＣ６３１１７Ｂである、名 称が「生物学的物質をデリバリーするための組成物」の出願である。処理番号Ｕ ＮＭ Ｃ６３１１７Ｂのすべての開示を出典明示により本明細書に包含する。 本発明のプラクティスにおいて用いるブロックコポリマーは、少なくとも２種 の異なるポリマーセグメントのコンジュゲートとして、最も単純に定義されるも のである（例えば、Tirrel,Interactions of Surfactants with Polymers and P roteins.Goddard and Ananthapadmanabhan,Eds.,pp.59 et seq,CRC Press(1992) を参照）。いくつかのブロックコポリマー構造は以下のように表現される： 最も単純なブロックコポリマー構造は、末端にて連結する２つのセグメントを 含み、Ａ−Ｂタイプのジブロックとなる。２より多くのセグメントの末端による 結果のコンジュゲーションは、Ａ−Ｂ−Ａタイプのトリブロック、．．．ＡＢＡ Ｂ．．．タイプのマルチブロック、または、．．．ＡＢＣ．．．構造のマルチセ グメントにさえもなる。ブロックコポリマー中の主要な鎖が、１またはそれ以上 のいつくかの繰り返し単位が異なるポリマーセグメントに連結するものとして定 義できる場合、コポリマーはグラフト構造、例えば、Ａ（Ｂ）_nタイプを有する 。より複雑な構造には、例えば、１つの中心に連結する２より多くのポリマーセ グメントを有する、（ＡＢ）_nまたはＡ_nＢ_mスターブロックが包含される。 ブロックコポリマーを製造する１の方法には、２つのモノマーの連続添加によ るアニオン重合が包含される（例えば、Schmolka，J.Am.Oil Chem.Soc.1977，54 :110;Wilczek-vera et al.,Macromolecules 1996,29:4036を参照）。この技術に より、分子量分布の狭いポリマーセグメントを有するブロックコポリマーが得ら れる。ブロックコポリマーの固相合成が近年確立され、これにより極めて高度な 正確さでポリマーセグメントの成長を制御できるようになった(Vinogradov et a l.,Bioconjugate Chemistry 1996，7:3)。ある場合には、ブロックコポリマーを 、別のポリマーセグメントの末端上でのポリマーセグメントの重合を開始するこ とにより(Katayose and Kataoka,Proc.Intern.Symp.Control.Rel.Bioact.Materi als,1996,23:899)、または、完成したポリマーセグメントのコンジュゲートによ り(kabanov et al.,Bioconjugate Chem 1995,6:639;Wolfert et al.,Human Gene Ther.1996,7:2123)、合成する。本発明に関連するブロックコポリマーの性質は 、（１）ブロックコポリマー構造、および、（２）ポリマーセグメントの特徴に より決定される。これらは、これらのセグメントのコンジュゲートに用いる連結 の化学構造と独立している(例えば、Tirrel,supra;Sperling,Introduction to P hysical Polymer Science.2d edn.,p.46 et seq.,John Wiley & Sons(1993)を参 照)。 好ましい実施態様において、ブロックコポリマーは、式： Ｎ−Ｐ、（Ｐ−Ｎ）_n−Ｐ、Ｎ−（Ｐ−Ｎ）_n、Ｎ−（Ｐ−Ｎ）_n、−Ｐ ［式中、Ｎは、非イオン性の水溶性セグメント（「Ｎ型セグメント」）であり、 Ｐ は、ポリイオンセグメント（「Ｐ型セグメント」）であり、ｎは、１〜５０００ の整数である］ で示されるポリマーからなる群から選択される。Ｎ型およびＰ型セグメントの重 合度は、約３〜約５００００であるのが好ましく、より好ましくは、約５〜約５ ０００、さらに好ましくは、約２０〜約５００である。１個よりも多い同一型の セグメントが１つのブロックコポリマーからなる場合、これらのセグメントは、 全て、同一の長さであっても、または、異なる長さであってもよい。 好ましいポリアニオンＰ型セグメントとしては、ポリメタクリル酸およびその 塩、ポリアクリル酸およびその塩、メタクリル酸およびその塩のコポリマー、ア クリル酸およびその塩のコポリマー、ヘパリン、ポリ(ホスフェート)、ポリアミ ノ酸（例えば、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、および複数のアニオン ユニットを含有するそれらのコポリマー）、ポリリンゴ酸、ポリ乳酸、ホリヌク レオチド、カルボキシル化デキストランなどが挙げられるが、これらに限定され るものではない。特に好ましいポリアニオンＰ型セグメントは、重合してカルボ キシル側基を有する生成物を生じるモノマーの重合化または共重合化の生成物で ある。かかるモノマーの代表的な例としては、アクリル酸、アスパラギン酸、１ ,４−フェニレンジアクリル酸、シトラコン酸、無水シトラコン酸、トランス− 桂皮酸、４−ヒドロキシ−３−メトキシ桂皮酸、ｐ−ヒドロキシ桂皮酸、トラン ス−グルタコン酸、グルタミン酸、イタコン酸、リノール酸、リノレン酸、メタ クリル酸、マレイン酸、無水マレイン酸、メサコン酸、トランス−β−ヒドロム コン酸、トランス−トランスムコン酸、オレイン酸、リシノール酸、２−プロペ ン−１−スルホン酸、４−スチレンスルホン酸、トランス−トラウマチン酸、ビ ニルスルホン酸、ビニルホスホン酸、ビニル安息香酸およびビニルグリコール酸 が挙げられる。 好ましいポリカチオンＰ型セグメントとしては、ポリアミノ酸（例えば、ポリ リシン）、ポリメタクリル酸のアルカノールアミンエステル（例えば、ポリ−( ジメチルアンモニオエチルメタクリレート)）、ポリアミン（例えば、スペルミ ン、ポリスペルミン、ポリエチレンイミン）、ポリビニルピリジン、および該ポ リカチオンセグメントの第４アンモニウム塩が挙げられるが、これらに限定され るものでは ない。 無毒性および非免疫原性のポリマー形成性Ｎ型およびＰ型セグメントを用いる のが好ましい。カチオンペプチドの高い毒性および免疫原性のために、非ペプチ ドＰ型セグメントが特に好ましい。 少なくとも１個のポリアニオンセグメントを有するブロックコポリマーの場合 、非イオンセグメントとしては、ポリエーテルグリコール（例えば、ポリ(エチ レンオキシド)、ポリ(プロピレンオキシド)）、エチレンオキシドとプロピレン オキシドとのコポリマー、ポリサッカリド（例えば、デキストラン）、ビニルモ ノマーの重合化生成物（例えば、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸エステル （例えば、ポリアクリロイルモルホリン）、ポリメタクリルアミド、ポリ(Ｎ− ２−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド、ポリビニルアルコール、ポリビニ ルピロリドン、ポリビニルトリアゾール、ポリビニルピリジンのＮオキシド）、 ポリオルトエステル、ポリアミノ酸、ポリグリセロール（例えば、ポリ−２−メ チル−２−オキサゾリン、ポリ−２−エチル−２−オキサゾリン）ならびにそれ らのコポリマーおよび誘導体が挙げられるが、これらに限定されるものではない 。 少なくとも１個のポリカチオンセグメントを含有するブロックコポリマーは、 ポリエーテルグリコール（例えば、ポリエチレングリコール）またはエチレンオ キシドとプロピレンオキシドとのコポリマーなどの非イオンセグメントを用いて 、同様に、配合されてもよい。例えば、Bronstein et al.,Proc.Am.Chem.Soc.,D ivision of Polymeric Materials:Science and Engineering,76:52(1997)；Kaba nov et al.,米国特許5,656,611;Spatz et al.,Macromolecules,29:3:220(1996); Wolfert et al.,Human Gene Ther.,7:2123(1996)；Harada and Kataoka,Macromo lecules,29:3220（1996）を参照のこと。 界面活性剤なる用語は、本明細書では、界面で吸着されるいずれの界面活性剤 をも包含するように最も一般的な意味で用いられる（例えば、Martin,Physical Pharmacy,4th edn.,p.370 et seq.,Lea & Febiger,Philadelphia,London,1993を 参照のこと）。これらの界面活性剤は、特に、水溶液中の空気−水界面で表面張 力を低下させ（例えば、Martin,Physical Pharmacy,4th edn.,p.370 et seq., Lea & Febiger,Philadelphia,London,1993を参照のこと）、ミセル形成性両親媒 性物質、石鹸、脂質、界面活性薬剤および他の生物学的界面活性剤など（例えば 、Martin,Physical Pharmacy,4th edn.,Lea & Febiger,Philadelphia,London,19 93；Marcel Dekker,New York,Basel,1979；Atwood and Florence,J.Phann.Pharm acol.1971,23:242S；Atwood and Florence,J.Pharm.,Sci.1974,63:988;Florence and Attwood,Physicochemical Principles of Pharmacy,2nd edn.,p.180 et se q.,Chapman and Hall,New York,1988；Hunter,Introduction to Modern Colloid Science,p.12 et seq.,Oxford University Press,Oxford,1993を参照のこと） が挙げられるが、これらに限定されるものではない。カチオン界面活性剤なる用 語は、本明細書では、水溶液中でカチオン基を生成することができるいずれの界 面活性剤をも包含するように用いられるが、これに限定されるものではない。こ のカチオン界面活性剤としては、水溶液中で解離してカチオン基を形成する強塩 基（例えば、第４アンモニウムまたはピリジニウム塩など）おはび水溶液中でプ ロトン化して酸−塩基反応の結果としてカチオン基を生成する比較的弱い塩基( 例えば、第１アミン、第２アミンなど)が挙げられるが、これらに限定されるも のではない。同様に、アニオン界面活性剤なる用語は、本明細書では、水溶液中 でアニオン基を生成することができるいずれの界面活性剤をも包含するように用 いられるが、これに限定されるものではない。このアニオン界面活性剤としては 、水溶液中で解離してアニオン基を形成する強酸およびそれらの塩（例えば、ア ルキルスルフェート、アルキルスルホネート、アルキルホスホネートなど）およ び水溶液中でイオン化して酸−塩基反応の結果としてアニオン基を生成する弱酸 (例えば、カルボン酸)が挙げられるが、これらに限定されるものではない。 本発明の実施に際して用いることができる荷電界面活性剤は、疎水／親油基、 すなわち、水にあまり溶解しない基を有し、および／または水−空気界面で吸着 する能力を示すカチオンおよびアニオン界面活性剤として広く特徴付けられ、お よび／または低い極性を有する有機溶媒中で可溶化して、および／または水性媒 体中で自己集成して無極性マイクロフェーズを形成する。かかる化合物の使用は 、本発明の重要な特徴である。界面活性剤分子の疎水基の相互作用は、以下にさ らに記載する ように、ブロックコポリマーおよび反対の電荷を有する界面活性剤の間のイオン 複合体の共同安定化をもたらす。典型的には、カチオン界面活性剤は、親油性第 ４アンモニウム塩、リポポリアミン、親油性ポリアミノ酸またはその混合物、特 に、遺伝子デリバリーにおいて用いるためのカチオン脂質製剤の成分として前記 で提案したものである。適当なカチオン界面活性剤の種々の分類および種の例を 以下に記載する。 本発明の組成物において用いることができるカチオン界面活性剤としては、第 １アミン（例えば、ヘキシルアミン、ヘプチルアミン、オクチルアミン、デシル アミン、ウンデシルアミン、ドデシルアミン、ペンタデシルアミン、ヘキサデシ ルアミン、オレイルアミン、ステアリルアミン、ジアミノプロパン、ジアミノブ タン、ジアミノペンタン、ジアミノヘキサン、ジアミノヘプタン、ジアミノオク タン、ジアミノノナン、ジアミノデカン、ジアミノドデカン）、第２アミン（例 えば、Ｎ,Ｎ−ジステアリルアミン、アドレノルチン、アドレナロン、アドレノ グロメルロトロピン、アルブテロール、アザコステロール、ベンズオクタミン、 ベンジダミン、カラゾロール、セタモロール、スピロゲルマニウム）、第３アミ ン（例えば、Ｎ,Ｎ',Ｎ'−ポリオキシエチレン(１０)−Ｎ−牛脂−１,３−ジア ミノプロパン、アセカイニド、塩酸アジフェニン、アジナゾラム、アヒスタン、 アロクラミド、アロクリプトピン、アルミトリン、アミトリプチリン、アニレリ ジン、アプリンジン、ベンシクラン、ベノキシネート、ビフェナミン、ブロムフ ェニルアミン、ブクモロール、ブフェトロール、ブホテニン、ブフラロール、ブ ナフチン、ブニトロール、ブプラノロール、ブタカイン、ブタミレート、ブテタ メート、ブトフィロロール、ブトキシカイン、ブトリプチリン、カプトジアミン 、塩酸カラミフェン、カルベタペンタン、カルビノキサミン、カルテオロール、 カッサイジン、カッサイン、カッサミン、クロルプロマジン、ジメノキサドール 、ジメタザン、ジフェンビドラミン、オルフェナドリン、ピリラミン、ピリスク シジアノール、ヨウ化スクシニルコリン、テトラカインなど）、第４アンモニウ ム塩、例えば、芳香環および非芳香環含有化合物（例えば、ドデシルトリメチル アンモニウムブロミド、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド、アルキ ルトリメチルアンモニウムブロミド、テトラデシルトリメ チルアンモニウムブロミド、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリ ド、ベンゾキノニウムクロリド、ベンゾキソニウムクロリド、ビベンゾニウムブ ロミド、セタルコニウムクロリド、セトヘキソニウムブロミド、ベンジロニウム ブロミド、ベンジルジメチルドデシルアンモニウムクロリド、ベンジルジメチル ヘキサデシルアンモニウムクロリド、ベンジルトリメチルアンモニウムメトキシ ド、セチルジメチルエチルアンモニウムブロミド、ジメチルジオクタデシルアン モニウムブロミド（ＤＤＡＢ）（例えば、Whitt et al.,Focus,1991,13:8を参照 のこと）、メチルベンゼトニウムクロリド、デカメトニウムクロリド、メチル混 合トリアルキルアンモニウムクロリド、メチルトリオクチルアンモニウムクロリ ド、Ｎ−アルキルピリジニウム塩、Ｎ−アルキルピペリジニウム塩、キナルジニ ウム塩、アムプロリウム、ベンジルピリニウム、ビスデクアリニウムハロゲン化 物、アゾニウムおよびアゾニウム塩、例えば、アニソトロピンメチルブロミド、 ブトロピウムブロミド、Ｎ−ブチルスコポルアンモニウムブロミド、テトラゾリ ウムブルー、キノリニウム誘導体（例えば、アトラクリウムベシラート）、ベボ ニウムメチルサルフェートのようなピペリジニウム塩、ベクロチアミンのような チアゾリウム塩）、１,２−ジアシル−３−(トリメチルアンモニオ)プロパン（ アシル基＝ジミリストイル、ジパルミトイル、ジステアロイル、ジオレオイル） 、１,２−ジアシル−３−(ジメチルアンモニオ)プロパン（アシル基＝ジミリス トイル、ジパルミトイル、ジステアロイル、ジオレオイル）、１,２−ジオレオ イル−３−(４'−トリメチルアンモニオ)ブタノイル−ｓｎ−グリセロール、１, ２−ジオレオイル−３−スクシニル−ｓｎ−グリセロールコリンエステル、コレ ステリル(４'−トリメチルアンモニオ)ブタノアート）、複素環状アミン（例え ば、アザククロノール（azacuclonol）、アザペロン、アザタジン、ベンゼチミ ド、ベンジペリロン（benziperylon）、ベンジルモルホリン、ベプリジル、ビペ リデン、ブジピン、ブファナミン、ブファニチン、ブタペラジン、ブトルファノ ール、ブゼピド、カリカンチン、カルピプラミン）、イミダゾール（例えば、ア ザニダゾール、アザチオプロピン（azathiopropine）、ビフォナゾール、ビザン トレン（bizantrene）、ブタカナゾール（butacanazole）、カファミノール）、 トリアゾール（例えば、ビテルタノール）、テトラゾール（例 えば、アゾセミド）、フェノチアジン（例えば、アズールＡ、Ｂ、Ｃ）、アミノ グリカン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、カルミノマイシン、４' −エピアドリアマイシン、４−デメトキシダウノマイシン、１１−デオキシダウ ノルビシン、１３−デオキシダウノルビシン、アドリアマイシン−１４−ベンゾ アート、アドリアマイシン−１４−アクタノアート、アドリアマイシン−１４− ナフタレンアセテート）、ローダミン（例えば、ローダミン１２３）、アクリジ ン（例えば、アクラニル、アクリフラビン、アクリゾルシン）、ジカチオンボラ フォームエレクトロライト（Ｃ１２Ｍｅ６；Ｃ１２Ｂｕ６）、ジアルキルグリセ チルホスホリルコリン、リゾレシチン）、コレステロールヘミスクシネートコリ ンエステル、リポポリアミン（例えば、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミ ン（ＤＯＧＳ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミドスペルミン（ ＤＰＰＥＳ）、Ｎ'−オクタデシルスペルミンカノルボキサミドヒドロキシトリ フルオロアセテート、Ｎ'，Ｎ''−ジオクタデシルスペルミンカルボキサミドヒ ドロキシトリフルオロアセテート、Ｎ'−ノナフルオロペンタデシルスペルミン カルボキサミドヒドロキシトリフルオロアセテート、Ｎ',Ｎ''−ジオクチル(ス ペルミンカルボニル)グリシンアミドヒドロキシトリフルオロアセテート、Ｎ'− (ヘプタデカフルオロデシル)−Ｎ'−(ノナフルオロペンタデシル)−スペルミン カルボニル)グリシンアミドヒドロキシトリフルオロアセテート、Ｎ'−[３,６, ９−トリオキサ−７−(２'−オキサエイコス−１１'−エニル)ヘプタエイコス− １８−エニル]スペルミンカルボキサミドヒドロキシトリフルオロアセテート、 Ｎ'−(１,２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノイル)スペルミ ンカルボキサミドヒドロキシトリフルオロアセテート）（例えば、Behr et al., Proc.Natl.Acad Sci.1989,86:6982；Remy et al.,Bioconjugate Chem.1994,5:64 7を参照のこと）、２,３−ジオレイルオキシ−Ｎ−[２(スペルミン−カルボキサ ミド)エチル]−Ｎ,Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテ ート(ＤＯＳＰＡ)(例えば、Ciccarone et al.,Focus 1993,15:80を参照のこと） 、Ｎ,Ｎ_I,Ｎ_II,Ｎ_III−テトラメチル−Ｎ,Ｎ_I,Ｎ_II,Ｎ_III−テトラパルミチルス ペルミン（ＴＭ−ＴＰＳ）(Lukow et al.,J.Virol.1993,67:4566)、Ｎ−[１−( ２,３−ジオレイルオキシ)プロピル]−Ｎ,Ｎ,Ｎ− トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）(例えば、Felgner,et al.,Proc .Natl.Acad.Sci.USA 1987,84:7413；Ciccarone et al.,Focus 1993,15:80を参照 のこと)、１,２−ジオレオイル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウム ブロミド（ＤＯＲＩ）(例えば、Felgner et al.,J.Biol.Chem.1994，269:2550を 参照のこと)、１,２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエ チルアンモニウムブロミド(ＤＯＲＩＥ)(例えば、Felgner et al.,J.Biol.Chem. 1994,269:2550を参照のこと)、１,２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチ ル−ヒドロキシプロピルアンモニウムブロミド（ＤＣ）ＲＩＥ−ＨＰ）(例えば 、Felgner et al.,J.Biol.Chem.1994,269:2550を参照のこと)、１,２−ジオレイ ルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシブチルアンモニウムブロミド（Ｄ ＯＲＩＥ−ＨＢ）(例えば、Felgner et al.,J.Biol.Chem.1994,269:2550を参照 のこと)、１,２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシペンチ ルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ−ＨＰｅ）(例えば、Felgner et al.,J.Bi ol.Chem.1994,269:2550を参照のこと)、１,２−ジミリスチルオキシプロピル− ３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド(ＤＭＲＩＥ)（例えば、 Felgner et al.,J.Biol.Chem 1994,269:2550を参照のこと）、１,２−ジパルミ トイルオキシプロピル−３−ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ ＤＰＲＩＥ）（例えば、Felgner et al.,J.Biol.Chem.1994,269:2550を参照のこ と）、１,２−ジステアロイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチ ルアンモニウムブロミド（ＤＳＲＩＥ）(例えば、Felgner et al.,J.Biol.Chem. 1994,269:2550を参照のこと)、Ｎ,Ｎ−ジメチル−Ｎ−[２−(２−メチル−４−( １,１,３,３−テトラメチルブチル)−フェノキシ]エトキシ)エチル]−ベンゼン メタンアミニウムクロリド（ＤＥＢＤＡ）、Ｎ−[１−(２,３−ジオレイルオキ シ)プロピル]−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルフェート(ＤＯＴ ＡＢ)、リポポリ−Ｌ(またはＤ)−リシン(例えば、Zhou,et al.,Biochim.Biophy s.Acta 1991,1065:8を参照のこと)、Ｎ−グルタリルホスファチジルエタノール アミンリシンに結合したポリ(Ｌ（またはＤ）−リシン（例えば、Zhou,et al.,B iochim.Biophys.Acta 1991,1065:8を参照のこと）、アミノ側基を有す るジドデシルグルタメートエステル（Ｃ₁₂ＧｌｕＰｈＣ_nＮ⁺）（例えば、Behr,B ioconjugate Chem.1994,5:382を参照のこと）、アミノ側基を有するジテトラデ シルグルタメートエステル（Ｃ₁₄ＧｌｕＣ_nＮ⁺）（例えば、Behr,Bioconjugate Chem.1994,5:382を参照のこと）、９−(Ｎ'，Ｎ''−ジオクタデシルグリシンア ミド)アクリジン（例えば、Remy et al.,Bioconjugate Chem.1994,5:647を参照 のこと）、４−[[Ｎ−[３−ビス(オクタデシルカルバモイル)−２−オキサプロ ピルカルボニル]グリシンアミド]ピロール−２−カルボキサミド]−４−ピロー ル−２−カルボン酸エチル（例えば、Remy et al.,Bioconjugate Chem.1994,5:6 47を参照のこと）、Ｎ',Ｎ'−ジオクタデシルオルニチルグリジンアミドヒドロ プトリフルオロアセテート（例えば、Remy et al.,Bioconjugate Chem.1994,5:6 47を参照のこと）、コレステロールのカチオン誘導体（例えば、コレステリル− ３(−オキシスクシンアミドエチレントリメチルアンモニウム塩、コレステリル −３−(−オキシスクシンアミドエチレンジメチルアミン、コレステリル−３(− カルボキシアミドエチレントリメチルアンモニウム塩、コレステリル−３(−カ ルボキサミドエチレンジメチルアミン、３([Ｎ−(Ｎ',Ｎ'−ジメチルアミノエタ ン−カルボモイル]コレステロール)（例えば、Singhal and Huang,In Gene Ther apeutics,Wolff,Ed.,p.118 et seq.,Birkhauser,Boston,1993を参照のこと）、 ｐＨ感受性カチオン脂質（例えば、４−(２,３−ビス−パルミトイルオキシ−プ ロピル)−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール、４−(２,３−ビス−オレオイルオ キシ−プロピル)−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール、コレステロール−(３−イ ミダゾール−１−イルプロピル)カルバメート、２,３−ビス−パルミトイル−プ ロピル−ピリジン−４−イル−アミン)など（例えば、Budker et al.,Nature Bi otechnology 1996，14:760を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定される ものではない。 ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジオレオイルホ スファチジルコリン（ＤＯＰＣ）（例えば、Felgner,et al.,Proc.Natl.Acad Sc i.USA 1987；Singhal and Huang,In Gene Therapetics,Wolff,Ed.,p.118 et seq .,Birkhauser,Boston,1993を参照のこと）を包含する（これらに限定されるもの ではない）カチオン界面活性剤および非イオン界面活性剤の混合物を含有する組 成 物は、遺伝子デリバリーおよび他の用途に関して特に有用である。この組成物と し ＩＣＴＩＮ^TM、LipofectＡＣＥ^TM、トランスフェクタム試薬（例えば、Ciccaron e et al.,Focus 1993,15:80；Lukow et al.,J.Virol.1993,67:4566；Behr,Bioco njugate Chem.1994,5:382;Singhal and Huang,In Gene Therapeutics,Wolff,Ed. ,p.118 et seq.,Birkhauser,Boston,1993；GIBCO-BRL Co.；Promega Co.,Sigma Coを参照のこと）を包含する（これらに限定されるものではない）市販のカチオ ン脂質組成物および細胞のトランスフェクションに用いられる他のカチオン脂質 組成物（例えば、Felgner et al.,J.Biol.Chem.1994,269：2550；Budker et al. ,上掲）が挙げられる。 本発明の組成物において用いることがてぎるアニオン界面活性剤としては、ア ルキルスルフェート、アルキルスルホネート、飽和および不飽和脂肪酸および誘 導体の塩を包含する脂肪酸石鹸（例えば、アドレン酸、アラキドン酸、５,６− デヒドロアラキドン酸、２０−ヒドロキシアラキドン酸、２０−トリフルオロア ラキドン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサトリエン酸、エ イコサジエン酸、７,７−ジメチル−５,８−エイコサジエン酸、７,７−ジメチ ル−５,８−エイコサジエン酸、８,１１−エイコサジイン酸、エイコサペンタエ ン酸、エイコサテトライン酸、エイコサトリエン酸、エイコサトリイン酸、エラ ド酸、イソリノール酸、リノエライド酸（linoelaidic acid）、リノール酸、リ ノレン酸、ジホモ−γ−リノレン酸、γ−リノレン酸、１７−オクタデシン酸、 オレイン酸、フィタン酸、ステアリドン酸（stearidonic acid）、２−オクテン 酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ウンデセレン酸（undece lenic acid）、ラウリン酸、ミリストレイン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、 パルミトレイン酸、ヘプタデカン酸、ステアリン酸、ノナンデカン酸、ヘンエイ コサン酸（heneicosanoic acid）、ドカサン酸（docasanoic acid）、トリコサ ン酸、テトラコサン酸、シス−１５−テトラコセン酸、ヘキサコサン酸、ヘプタ コサン酸、オクタコサン酸、トリオカンタン酸（triocantanoic acid））、ヒド ロキシ−、ヒドロペルオキシ−、ポリヒドロキシ−、エポキシ−脂肪酸の塩（例 えば、Ingram and Brash,Ljpjds 1988，23: 340；Honn et al.,Prostaglandins 1992,44:413；Yamamoto,Free Radic.Biol.Me d 1991,10:149；Fitzpatrick and Murphy,Pharmacol.Rev.1989,40:229；Muller et al.,Prostaglandins 1989,38:635；Falgueyret et al.,FEBS Lett.1990,262: 197；Cayman Chemical Co.,1994 Catalog,pp.78-108を参照のこと）、飽和およ び不飽和モノ−およびポリ−カルボン酸の塩（例えば、吉草酸、トランス−２, ４−ペンタジエン酸、ヘキサン酸、トランス−２−ヘキセン酸、トランス−３− ヘキセン酸、２,６−ヘプタジエン酸、６−ヘプテン酸、ヘプタン酸、ピメリン 酸、スベリン酸、セバシシン酸、アゼライン酸、ウンデカン二酸、デカンジカル ボン酸、ウンデカンジカルボン酸、ドデカンジカルボン酸、ヘキサデカン二酸、 ドカセン二酸（docasenedioic acid）、テトラコサン二酸、アガリシン酸、アロ イリチン酸、アザフリン、ベンダザック、ベンフロジルヘミスクジネート、ベン ジルペニシリン酸、ｐ−(ベンジルスルホンアミド)安息香酸、ビリベルジン、ボ ングクレク酸（bongkrekic acid）、ブマジゾン、カフェイン酸、２−エチルブ タン酸カルシウム、カポベン酸、カルプロフェン、セフォジジム、セフメノキシ ム、セフィキシム（cefixime）、セファゼドン、セファトリジン、セファマンド ール、セフォペラゾン、セフォラニド、セフォタキシム、セフォテタン（cefote tan）、セフオニシド、セフォチアム、セフォキシチン、セファマイシン、セチ リジン（cetiridine）、セトラル酸、セトラキサート、カウルムグラ酸、クロラ ムブジル、インドメタシン、プロトポルフィリンＩＸ、プロチジン酸）、プロス タン酸およびその誘導体（例えば、プロスタグランジン）(例えば、Nelson et a l.,C&EN 1982,30-44；Frolich,Prostaglandins,1984,27:349；Cayman Chemical Co.,1994 Catalog,pp.26-61を参照のこと)、ロイコトリエンおよびリポキシン（ 例えば、Samuelsson et al.,Science 1987,237:1171；Cayman Chemical Co.,199 4 Catalog,pp.64-75）、アルキルホスフェート、Ｏ−ホスフェート（例えば、ベ ンフオチアミン）、アルキルホスホネート、天然および合成脂質（例えば、ジメ チルアリルピロホスフェートアンモニウム塩、Ｓ−ファーネシルチオ酢酸、ファ ーネシルピロホスフェート、２−ヒドロキシミリスチン酸、２−フルオロパルミ チン酸、イノシトールトリホスフェート、ゲラニルピロホスフェート、ゲラニゲ ラニルピロホスフェート、α−ヒドロキ シファーネシルホスホン酸、イソペンチルピロホスフェート、ホスファチジルセ リン、カルジオリピン、ホスファチジン酸および誘導体、リゾホスファチジン酸 、スフィンゴリピドなど）、脂質の合成アナログ、例えば、ナトリウム−ジアル キルス フェート、ｎ−アルキルモノチオカルボネート、アルキル−およびアリールスル フェート(アサプロール（asaprol）、アゾスルファミド、ｐ−(ベンジルスルホ ンアミド)安息香酸、セフォニシド、ＣＨＡＰＳ)、モノ−およびジアルキルジチ オホスフェート、Ｎ−アルカノイル−Ｎ−メチルグルカミン、パーフルオロアル カノエート、胆汁酸のコール酸塩およびデスオキシコール酸塩、４−クロロイン ドール酢酸、ククルビン酸（cucurbic acid）、ジャスモン酸（jasmonic acid） 、７−エピジャスモン酸、１２−オキソフィトジエン酸、トラウマチン酸、ツベ ロン酸(tuberonic acid)、アブシジン酸、アシテルチン（acitertin）などが挙 げられるが、これらに限定されるものではない。 本発明の好ましいカチオンおよびアニオン界面活性剤としては、また、フルオ ロカーボンおよび混合フルオロカーボン−炭化水素界面活性剤が挙げられる。例 えば、Mukerjee,P.Coll.Surfaces A:Physicochem.Engin.Asp.1994,84:1；Guo et al.,J.Phys.Chem.1991,95:1982；Guo et al.,J.Phys.Chem,1992,96:10068を参 照のこと。本発明において有用なかかる界面活性剤のリストとしては、パーフル オロモノカルボン酸（例えば、ペンタフルオロプロピオン酸、ヘプタフルオロ酪 酸、ノナンフルオロペンタン酸、トリデカフルオロヘプタン酸、ペンタデカフル オロオクタン酸、ヘプタデカフルオロノナン酸、ノナデカフルオロデカン酸、パ ーフルオロドデカン酸、パーフルオロポリカルボン酸、パーフルオロテトラデカ ン酸）の塩およびパーフルオローポリカルボン酸（例えば、ヘキサフルオログル タル酸、パーフルオロアジピン酸、パーフルオロスベル酸、パーフルオロセバシ ン酸）の塩、ダブルテールハイブリッド界面活性剤、(Ｃ_mＦ_2m+1)(Ｃ_nＨ_2n+1)Ｃ Ｈ−ＯＳＯ₃Ｎａ（例えば、Guo et al.,J.Phys.Chem,1992,96:6738,Guo et al., J.Phys.Chem．1992，96:10068；Guo et al.,J.Phys.Chem.,1992,96:10068を参照 のこと）、フルオロ脂肪族ホスホネート、フルオロ脂肪族スルフェートなどが挙 げ られるが、これらに限定されるものではない。 本発明の生物学的物質の組成物は、さらに、リン脂質（例えば、ホスファチジ ルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトー ル、ジアシルホスファチジルコリン、ジ−Ｏ−アルキルホスファチジルコリン、 血小板活性化因子、ＰＡＦアゴニストおよびＰＡＦアンタゴニスト、リゾホスフ ァチジルコリン、リゾホスファチジルエタノール−アミン、リゾホスファチジル グリセロール、リゾホスファチジルイノシトール、リゾ−血小板活性化因子およ びアナログなど）、飽和および不飽和脂肪酸誘導体（例えば、エチルエステル、 プロピルエステル、コレステリルエステル、補酵素Ａエステル、ニトロフェニル エステル、ナフチルエステル、モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセ リド、脂肪アルコール、脂肪アルコールアセテートなど）、リポ多糖類、グリコ −およびスフィンゴ脂質（例えば、セラミド、セレブロシド、ガラクトシルジグ リセリド、ガングリオシド、ラクトセレブロシド(lactocerebroside)、リゾスル ファチド（lysosulfatide）、プシコシン、スフィンゴミエリン、スフィンゴシ ン、スルファチド）、色素産生性脂質（中性脂質、リン脂質、セレブロシド、ス フィンゴミエリン）、コレステロールおよびコレステロール誘導体、アンホテリ シンＢ、アバメクチン（abamectin）、アセジアスルホン、ｎ−アルキルフェニ ルポリオキシエチレンエーテル、ｎ−アルキルポリオキシエチレンエーテル（例 えば、Triton^TM）、ソルビタンエステル（例えば、Span^TM）、ポリグリコールエ ーテル界面活性剤（Tergitol^TM）ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、Twee n^TM）、ポリソルベート、ポリオキシエチル化グリコールモノエーテル(例えば、 Brij^TM、ポリオキシエチレン９ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン１０エー テル、ポリオキシエチレン１０トリデシルエーテル)、ルブロール（lubrol）、 エチレンオキシドとプロピレンオキシドとのコポリマー（例えば、Pluronic^TM、 Pluronic R^TM、Teronic^TM、Pluradot^TM）、アルキルアリールポリエーテルアル コール（Tyloxapol^TM）、パーフルオロアルキルポリオキシル化アミド、Ｎ,Ｎ− ビス[３−Ｄ−グルコナミトプロピル]コラミド、デカノイル−Ｎ−メチルグルカ ミド、ｎ−デシルα−Ｄ−グルコピラノシド、ｎ−デシルβ−Ｄ−グルコピラノ シド、ｎ−デシルβ−Ｄ−マルトピラノシド、ｎ −ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、ｎ−ウンデシルβ−Ｄ−グルコピラノシ ド、ｎ−ヘプチル(−ｄ−グルコピラノシド、ｎ−ヘプチル β−Ｄ−チオグルコ ピラノシド、ｎ−ヘキシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、ｎ−ノナノイルβ−Ｄ− グルコピラノシド、１−モノオレイル−ｒａｃ−グリセロール、ノナノイル−Ｎ −メチルグルカミド、ｎ−ドデシルα−Ｄ−マルトシド、ｎ−ドデシルβ−Ｄ− マルトシド、Ｎ,Ｎ−ビス[３−グルコナミドプロピル]デオキシコラミド、ジエ チレングリコールモノペンチルエーテル、ジギトニン、ヘプタノイル−Ｎ−メチ ルグルカミド、ヘプタノイル−Ｎ−メチルグルカミド、オクタノイル−Ｎ−メチ ルグルカミド、ｎ−オクチルβ−Ｄ−グルコピラノジド、ｎ−オクチルα−Ｄ− グルコピラノジド、ｎ−オクチルβ−Ｄ−チオガラクトピラノジド、ｎ−オクチ ルβ−Ｄ−チオグルコピラノジド、ベタイン（Ｒ₁Ｒ₂Ｒ₃Ｎ⁺Ｒ'ＣＯ₂ ^-、ここで 、Ｒ₁Ｒ₂Ｒ₃Ｒ'は、炭化水素鎖である）、スルホベタイン（Ｒ₁Ｒ₂Ｒ₃Ｎ⁺Ｒ'Ｓ Ｏ₃ ^-）、リン脂質（例えば、ジアルキルホスファチジルコリン）、３−[(３−コ ラミドプロピル)−ジメチルアンモニオ]−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホ ネート、３−[(３−コラミドプロピル)−ジメチルアンモニオ]−１−プロパンス ルホネート、Ｎ−デシル−Ｎ,Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンス ルホネート、Ｎ−ドデシル−Ｎ,Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパン スルホネート、Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ,Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プ ロパンスルホネート、Ｎ−オクタデシル−Ｎ,Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ− １−プロパンスルホネート、Ｎ−オクチル−Ｎ,Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ −１−プロパンスルホネート、Ｎ−テトラデシル−Ｎ,Ｎ−ジメチル−３−アン モニオ−１−プロパンスルホネート、ジアルキルホスファチジルエタノールアミ ンを包含する(これらに限定されるものではない）非イオンまたは両性イオン界 面活性剤を含有してもよい。 本発明の実施において使用できる界面活性のある生物学的物質は、限定するも のではないが医薬物質を包含し、診断またはイメージングにおける有用性を有す るもの、ならびに細胞、器官または生物において作用して細胞、器官または生物 の機能における変化を生じることができるものを包含する。かかる生物学的物質 は、診断、治療、免疫化またはヒトおよび動物疾患と戦うために適用される別法 において使用 される多種の物質を包含する。かかる試薬は、限定するものではないが、鎮痛剤 、抗炎症剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、駆虫剤、腫瘍破壊剤または抗癌 剤、毒素、ホルモン、神経伝達物質、免疫調節物質、色素、放射性標識、放射線 不透過性化合物、蛍光化合物、細胞レセプター結合分子、抗緑内障剤、散瞳化合 物および局部麻酔剤を包含する。 本発明の生物学的物質が荷電して反対の電荷のブロックコポリマーと複合体を 形成することは必須事項である。本明細書で使用される荷電した生物学的物質な る語は、限定するものではないが、水性溶液中でカチオンまたはアニオン基を生 じることができるいずれかの生物学的物質を包含する。これは、限定するもので はないが、水性溶液中に溶解してカチオン基を形成する強塩基（例えば、第４ア ンモニウムまたはピリジニウム塩など）および酸−塩基反応の結果、水性溶液中 でプロトン化してカチオン基を生じる弱塩基（例えば、第１アミン、第２アミン など）を包含する。アニオン性生物学的物質は、限定するものではないが、水性 溶液中に溶解してアニオン基を形成する強酸およびそれらの塩（例えば、硫酸基 、スルホン酸基、リン酸基、ホスホン酸基などを含有する試薬）、および酸−塩 基反応の結果、水性溶液中でイオン化してアニオン基を生じる弱酸（例えば、カ ルボン酸）を包含する。 本発明の組成物に使用できる生物学的物質は、限定するものではないが、イン ドメタシン、サリチル酸酢酸塩、イブプロフェン、スリンダク、ピロキシカムお よびナプロキセンのような非ステロイド系抗炎症剤、チモロールまたはピロカル ピンのような抗緑内障剤、アセチルコリンのような神経伝達物質、ジブカインの ような麻酔薬、フェノチアジン（例えば、コンパジン（compazine）、ソラジン （thorazine）、プロマジン、クロルプロマジン、アセプロマジン、アミノプロ マジン、ペラジン、プロクロルペラジン、トリフロペラジンおよびチオプロペラ ジン）、インドジャボクアルカロィド（例えば、レセルピンおよびデセルピン） 、チオキサンテン（例えば、クロルプロチキセンおよびチオチキセン）、ブチロ フェノン（例えば、ハロペリドール、モペロン、トリフロペリドール、チミペロ ンおよびドロペリドール）、ジフェニルブチルピペリジン（例えば、ピモジド） およびベンズアミド（例えば、スルピリドおよびチアプリド）のような神経弛緩 薬；グリセロール誘導体(例えば、 メフェネシンおよびメトカルバモール)、プロパンジオール(例えば、メプロバメ ート)、ジフェニルメタン誘導体（例えば、オルフェナドリン、ベンゾトラピン およびヒドロキシジン）およびベンゾジアゼピン（例えば、クロルジアゼポキシ ドおよびジアゼパム）のような精神安定剤；催眠薬（例えば、ゾルプデム（zolp dem）およびブトクタミド）；ベータ遮断薬(例えば、プロプラノロール、アセブ トロール、メトプロロールおよびピンドロール)：ジベンズアゼピン（例えば、 イミプラミン）、ジベンゾシクロヘプテン（例えば、アムチリプチリン（amtirl ptyline））およびテトラサイクリック（例えば、ミアンセリン）のような抗抑 制薬；ＭＡＯ阻害剤（例えば、フェネルジン、イプロニアジドおよびセレギリン ）；フェニルエチルアミン誘導体（例えば、アンフェタミン、デキサンフェタミ ン、フェンプロポレクス、フェンテルミン、アンフェプラモンおよびペモリン） およびジメチルアミノエタノール(例えば、クロフェンシクラン、シプロデナー ト、アミノレクスおよびマジンドール)のような精神興奮薬；ＧＡＢＡ−模倣物( 例えば、プロガバーイド(progabide))；アルカノイド（例えば、コデルゴクリン 、ジヒドロエルゴクリスチンおよびビンカミン）；抗パーキンソン剤（例えば、 Ｌ−ドーパミンおよびセレギリン）；アルツハイマー病の治療に使用される薬剤 、コリン作用薬(例えば、シチコリンおよびフィゾスチグミン）；血管拡張神経 薬（例えば、ペントキシフィリン）；および脳活性剤（例えば、ピリチノールお よびメクロフェノキサート）を包含する。 抗新生物薬もまた、本発明の組成物において生物学的物質として有益に使用で きる。代表例は、限定するものではないが、パクリタキセル（paclitaxel）、ダ ウノルビシン、ドキソルビシン、カルミノマイシン、４’−エピアドリアマイシ ン、４−デメトキシ−ダウノマイシン、１１−デオキシダウノルビシン、１３− デオキシダウノルビシン、アドリアマイシン−１４−ベンゾエート、アドリアマ イシン−１４−アクタノエート、アドリアマイシン−１４−ナフタレンアセテー ト、ビンブラスチン、ビンクリスチン、マイトマイシンＣ、Ｎ−メチルマイトマ イシンＣ、ブレオマイシンＡ₂、ジデアザテトラヒドロ葉酸、アミノプテリン、 メトトレキサート、コルヒチンおよびシスプラチンを包含する。代表的な抗菌剤 は、ゲンタマイシンを包含するアミノグリコシドである。代表的な抗ウイルス化 合物は、リファンピシン、 ３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）およびアシロビルである。代 表的な抗真菌剤は、フルコナゾール、アンホテリシンのようなマクロライドおよ びカンジシジンを包含するアゾールである。 代表的な駆虫化合物はアンチモン化合物である。また、適当な生物学的物質は 、限定するものではないが、ビンクリスチンおよびビンブラスチンのようなビン カアルカロイド、マイトマイシンＣおよびＮ−メチルマイトマイシンのようなマ イトマイシン型抗生物質、ブレオマイシンＡ₂のようなブレオマイシン型抗生物 質、メトトレキサートのような抗葉酸塩、アミノプテリンおよびジデアザ−テト ラヒドロ葉酸、タキサン（taxane）、アントラサイクリン抗生物質およびその他 のものを包含する。 また、組成物は、逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、アンジオテンシン 変換酵素、５μ−還元酵素などの酵素阻害剤を含むことができる。典型的なこれ らの試薬は、ファイナステリド（finasteride）、キナプリル、ラミプリル（ram ipril）、リシノプリル、サキナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナ ビル、ジドブジン、ザルシタビン、アロフェニルノルスタチン（allophenylnors tatine）、キノスタチン（kynostatin）、デラビリジン（delaviridine）、ビス −テトラヒドロフランリガンド（例えば、Ghoshら、J.Med.Chem.1996,39:3278参 照）およびジダノシンのようなペプチドおよび非ペプチド構造である。かかる試 薬は、単独または組み合わせ療法で；例えば、サキナビル、ザルシタビンおよび ジダノシン、ザルシタビン、およびジドブジンを利用する組み合わせ療法で投与 できる。例えば、Collierら、Antiviral Res.1996,29:99参照のこと。 他の適当な生物学的物質は、酸素トランスポーター（例えば、ポルフィン、ポ ルフィリンおよび金属イオンとのそれらの複合体）、補酵素およびビタミン（例 えば、ＮＡＤ／ＮＡＤＨ）ビタミンＢ１２、クロロフィル）などを包含する。 適当な生物学的物質は、さらに、磁気共鳴イメージングのような診断的視覚化 法に使用される試薬（例えば、ガドリニウム（ＩＩＩ）ジエチレントリアミド５ 酢酸）を包含し、キレート形成基(例えば、ジエチレントリアミン５酢酸、トリ エチレントリアミン５酢酸、エチレンジアミン４酢酸、１，２−ジアミノシクロ −ヘキサン −Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−４酢酸、Ｎ，Ｎ’−ジ（２−ヒドロキシベンジル）エチ レンジアミン)、Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)エチレンジアミン３酢酸など）で あってもよい。かかる生物学的物質は、さらに、アルファー、ベータ−またはガ ンマ−線を放射する放射性核種（例えば、ガリウム６７、インジウム１１１、テ クネチウム９９）を包含してもよい。ヨウ素含有放射線不透過性分子もまた、適 当な診断試薬である。診断試薬は、また、常磁性または超常磁性元素、または常 磁性元素および放射能核種の組み合わせを包含し得る。常磁性元素は、限定する ものではないが、ガドリニウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミ ウム(ＩＩＩ）、ユーロピウム（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）またはマンガン（ＩＩ ）を包含する。 組成物は、さらに、限定するものではないが、抗体、抗体のフラグメント、タ ンパク質リガンド、多糖類、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、低分子量の有機 分子などを包含する標的となる群を包含してもよい。かかる標的となる群は、ブ ロックコポリマーまたは界面活性剤に共有結合できるか、または疎水性の静電気 相互作用または水素結合を介して、組成物中に電子を共有しないで取り込むこと ができる。 本発明の新規な予想できない知見は、１から約５個のアニオン基を有する低分 子量の生物学的物質を反対の電荷のブロックコポリマーと処方できることである 。これらの生物学的物質の分子量は、４０００未満、好ましくは２０００未満、 いまだより好ましくは７００未満である。これらの生物学的物質が、試薬とブロ ックコポリマー間の複合体の協同的な安定性を提供する疎水基を含有することが さらに好ましい。かかる疎水基を含有する生物学的物質の代表例は、飽和および 不飽和脂肪酸、アラキドン酸および誘導体、ロイコトリエン、ポルフィリン、ア ントラサイクリン系抗生物質、プロスタグランジン、ベンゾジアゼピンなどを包 含する。 いずれかの特定の理論によって拘束されることを望むものではないが、協同的 結合のため、前記の界面活性剤および反対の電荷のブロックコポリマーが安定な 複合体を形成すると考えられる(例えば、Goddard,In Interactions of Surfacta nts with Polymers and Proteins.Goddard and Ananthapadmanabhan,Eds.,pp.17 1以下参照、CRC Press,Boca Raton,Ann Arbor,London,Tokyo,1992)。協同的結合 は、界面活性分子のブロックコポリマーへの結合が、同一のコポリマーに既に結 合して いる同一のまたは異なる界面活性剤の他の分子の存在により増強されるという意 味で生じる。本明細書の基礎となると考えられる協同的結合メカニズムにしたが って、界面活性剤はブロックコポリマーの反対に荷電したＰ型セグメントに静電 結合して、超分子複合体を形成する。これらの複合体は、同一のＰ型セグメント に結合した界面活性分子の疎水性部分がお互いに相互作用することによつで、協 同的に安定化される。実際、これらの疎水性相互作用なしに、所望の複合体の形 成は起こらないようである。図１は、セチルピリジニウムブロミドおよびドデシ ルピリジニウムブロミドとポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ（メタクリン 酸ナトリウム）ブロックコポリマーの相互作用についての結合等温線を示す。図 １からわかるように、界面活性剤上の疎水性置換基の長さにおける減少、より疎 水性のセチル−から疎水性のかなり小さいドデシルへの減少は、複合体の安定性 を１０倍以上減少させる。この結合メカニズムは、特に、界面活性のある生物学 的物質の特徴である。例えば、Florence and Attwood,Physicochemical、Princi ples of Pharmacy,2nd edn.,p.180以下参照、Chapman and Hall,New York,1988 参照のこと。例えば、図２は、ドキソルビシンおよびローダミン１２３とポリエ チレンオキシド−ブロック−ポリ（メタクリン酸ナトリウム）のコポリマーの相 互作用について結合等温線を提供する。 界面活性剤およびＰ型セグメント間の静電複合体の形成は電荷中和をもたらす 。その結果、複合体化セグメントの疎水性が増加し、水性溶解度が減少する。し かしながら、好ましい生物学的物質の組成物は、Ｐ型セグメントに結合したＮ型 セグメントの存在のため、水性溶液中に残存する。Ｎ型およびＰ型ブロックの相 対的な長さおよび量を変化させることにより、界面活性剤とブロックコポリマー 間に形成した複合体の疎水性−脂肪親和性特性を変化させ、好ましい組成物の安 定性を最適化することが可能である。本発明の組成物が生理学的な条件（ｐＨ、 浸透性など）および温度で水溶性であることが好ましい。図３は、セチルピリジ ニウムブロミドのポリ（メタクリン酸ナトリウム）セグメントのみへの結合が、 水不溶性複合体の形成をもたらし、一方、同一の界面活性剤のブロックコポリマ ーポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ（メタクリン酸ナトリウム）への結合 が水溶性複合体を生じることを示す。 本発明の組成物は、通常、ポリマーの型に依存して、熱力学的に安定であり、 週または月単位で溶液中に保存後、凝集しない小型の複合体を形成する。小型粒 子は、容易に小さな毛細管でさえ通って組織中に浸透でき、エンドサイトーシス を経て細胞に入ることができるので、このような限られたサイズの粒子を生産す る能力は重要である。これらの粒子の好ましいサイズは、５００ｎｍ未満、より 好ましくは２００ｎｍ未満、なおより好ましくは１００ｎｍ未満である。これら の系は、凍結乾燥することができ、凍結乾燥粉末として保存でき、次いで、再溶 解して同一サイズの粒子と一緒に溶液を形成できる。 本明細書にて複合体の電荷比と称されるパラメーターに関して本発明の複合体 を構成する成分について考えることが有用である。本明細書にて「φ」と命名す る、複合体の荷電率は、１のブロックコポリマー中のｐ−型セグメントの正味の 電荷に対するこのブロックコポリマー分子に結合した界面活性剤分子の正味の電 荷の割合である。例えば、界面活性剤分子が２個の正に荷電した基および５個の 負に荷電した基を有する場合、それは「正味の電荷」−３を有する。よって、正 味の電荷Ｚ₁を有する界面活性剤が逆の電荷を帯びたブロックコポリマーのｐ− 型セグメントに結合する場合、電荷比は次のように表される： ここにｎは１のブロックコポリマー分子に結合した界面活性剤分子数であり、ｚ₂ はｐ−型セグメントの反復単位の正味の電荷であり、ＰＤはｐ−型セグメント の重合率であり、γはブロックコポリマー分子中のｐ−型セグメント数である。 φ＜１の場合、複合体はｐ−型セグメントと同じ電荷符号を有する。φ＞１の 場合、複合体は界面活性剤と同じ電荷符号を有する。そしてφ＝１の場合、複合 体は電気的に中性である。それゆえ、組成物中の成分のモル比を変化させること により、得られる粒子の電荷を負から正に変化させることができ、その逆も可能 である。例えば、図４参照。結果として、静電気的および疎水的相互作用を組み 合わせることにより、種々の生物学的物質をかかる粒子中に含有させることがで きる。例えば、カチオン表面活性生物学的物質（例えば、アドリアマイシン−１ ４−ナフタレンア セテート）およびアニオンブロックコポリマー（例えば、ポリエチレンオキシド −ブロック−ポリ（メタクリル酸ナトリウム））から得られる組成物はφ＞１に おいて正に荷電する。アニオン表面活性生物学的物質（例えば、インドメタシン ）およびカチオンコポリマー(例えば、ポリエチレンイミンおよびポリエチレン オキシド)から得られる組成物はφ＞１において負に荷電する。 本発明組成物中におけるブロックコポリマーのｐ−型セグメントの正味の電荷 に対する界面活性剤の正味の電荷の割合を特徴づけるパラメーターを導入するこ とがさらに有用である。本明細書にて混合物の組成と称され、さらに本明細書に て「Ｚ」と命名されるこのパラメーターを次のように表す： ここにＺ₁、Ｚ₂、γ、およびＰＤは等式（１）における意味ど同じであり、Ｃ₁ およびＣ₂は混合物中の界面活性剤およびブロックコポリマーのモル濃度である 。特定の理論に拘泥するつもりはないが、複合体の電荷比と混合物の組成との間 の関係は次のようである：φ≧Ｚ₀このことは、ｎ≧Ｃ₁Ｃ₂であること、すなわ ち、１のブロックコポリマー分子に結合した界面活性剤分子数が、混合物中の界 面活性剤およびコポリマーのモル濃度比よりも小さくないことを意味する。さら に、Ｚが１未満、好ましくは０.５未満の場合、ｎ＞Ｃ₁Ｃ₂であること、すなわ ち、１のブロックコポリマー分子に結合した界面活性剤分子数が、混合物中の界 面活性剤およびコポリマーのモル濃度比よりも大きいことを意味する。それらの 関係により示される挙動に関する理由は、ブロックコポリマーのｐ−型セグメン トへの界面活性剤分子の結合が、同じブロックコポリマーにすでに結合している 界面活性剤分子の存在により促進されるからである。それゆえ、それらの関係は 、本発明の界面活性剤とブロックコポリマーとの間の協同的な結合機構を反映す る。 特定条件下で、複合体粒子は、内部水性腔を有する小胞を自発的に形成する。 種々の生物学的活性物質（例えば、３’−アジド−３’−デオキシチミジン、水 溶性プロテアーゼ阻害剤、インターロイキン、インスリン等）は、かかる小胞の 内部水性腔中に物理的に捕捉されうる。Ｚが約０.１よりも大きく１００未満、 好ましくは、 ０.４よりも大きく２０未満、さらに好ましくは、０.７よりも大きく１０未満で ある場合に小胞が形成するように、小胞形成のための最適条件が混合物の組成に より決定される。 さらにそのうえ、本発明組成物は、界面活性剤の疎水性基により形成される微 少フェーズにおける非極性相互作用により、疎水性生物学的物質（例えば、パク リタクセル）を可溶化させうる。 本発明の１の重要な態様は、生物学的活性表面活性作用剤の荷電基とブロック コポリマーのｐ−型セグメントの反復単位との間の静電気的相互作用がｐＨ依存 性であるということである。例えば、図５は、臭化セチルピリジニウムとポリメ タクリル酸およびポリエチレンオキシドのコポリマーとの間の反応のｐＨ依存性 を示す。ブロックコポリマーのｐ−型セグメントまたは界面活性剤またはｐ−型 セグメントおよび界面活性剤の両方のいずれかが弱酸または弱塩基であるのが好 ましい。得られる好ましい組成物は約２.０ないし約１０.０のｐＨ範囲、より好 ましくは、約３.０ないし約９.０のｐＨ範囲、さらに好ましくは、約４.０ない し約８.０のｐＨ範囲においてｐＨ依存性である。より鋭いｐＨ依存性を明らか にするより協同的なシステムを用いた場合、ｐＨ変化の結果としての、生物学的 活性な界面活性剤およびブロックコポリマーからできている複合体の解離は段階 的なタイプにより特徴づけられる。これらの複合体は、好ましくは、ｐＨ変化が 約３.０のｐＨ単位、より好ましくは、約２.０のｐＨ単位、さらにより好ましく は、約１.０のｐＨ単位である場合に解離するものである。生物学的活性界面活 性剤およびブロックコポリマーは互いに非共有結合的相互作用により結合するの で、複合体の解離は生物学的作用剤の放出を引き起こす。界面活性剤とブロック コポリマーとの複合体は、約５.５ないし約８.５のｐＨ範囲、好ましくは、約６ .５ないし約７.５のｐＨ範囲において安定である。しかしながら、これらの複合 体は、標的組織または細胞、あるいは生物学的物質の部位特異的放出を可能にす る他の標的部位においてｐＨシフトが起こった場合、容易に解離する。第１の具 体例の組成物からの生物学的活性界面活性剤の放出を容易にさせるために、これ らの生物学的物質の正味電荷の全量は５よりも大きくなく、より好ましくは、４ よりも大きくなく、さ らにより好ましくは、３よりも大きくない。 本発明組成物は種々の投与経路を可能にし、非経口（筋肉内、皮下、腹腔内、 および静脈のごとき）、経口、局所、経耳、経膣、肺から、および目からの経路 があるが、これらに限らない。これらの組成物は錠剤、カプセル、甘味入り錠剤 、トローチ、粉末、ゲル、シロップ、エリキシル、水溶液、懸濁液、ミセル、エ マルジョンおよびマイクロエマルジョン形態とすることができる。 慣用的な医薬処方を用いる。例えば、錠剤の場合、ラクトース、クエン酸ナト リウム、およびリン酸塩のごときよく知られた担体を用いることができる。デン プンのごとき崩壊剤、ならびにステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリ ウムおよびタルクのごとき滑沢剤は錠剤に広く使用されており、これらが存在し ていてもよい。経口投与用カプセルは、ラクトースおよび高分子ポリエチレング リコールのごとき希釈剤を含んでいてもよい。経口投与用水性懸濁液が必要な場 合、抱合体を乳化剤および懸濁促進剤と混合することができる。非経口投与には 、通常、抱合体の滅菌溶液を調製し、溶液のｐＨを適当に調節し、緩衝化させる 。静脈用には、溶質の全濃度を調節して調合物を等張にすべきである。目への投 与には、アプリケーターまたは点眼装置のごときよく知られた目へのデリバリー システムにより軟膏または滴下可能液体をデリバリーしてもよい。かかる組成物 はヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ヒドロキシプロピルメチルセルロースま たはポリビニルアルコールのごとき粘液模倣物質、ソルビン酸、ＥＤＴＡまたは 塩化ベンジルクロニウムのごとき保存料、および通常量の希釈剤および／または 担体を含んでいてもよい。肺への投与には、希釈剤および／または担体はエアロ ゾル形成に適したものとなるよう選択されるであろう。 下記実施例は本発明をさらに詳細に説明するためのものである。これらの実施 例は本発明の組成物および方法の特定の具体例を説明するだけであり、本発明を 何ら限定するものではない。 生物学的物質の生物学的特性および活性を変化させる、本発明の生物学的活性 組成物の能力は、便利には、以下の２つの実施例に記載されるような多くの実験 的モデルにおいて観察することができる。実施例１ 高レベルの糖蛋白Ｐ（Ｐ−ｇｐ）流出ポンプ（Gervasoniら、Cancer Reseazrc h）１９９１、５１：４９５５）を発現する多剤耐性ＫＢｖセルライン（ビンブ ラスチン耐性ヒト類表皮癌）を用いて、ドキソルビシン細胞毒性に対する本発明 の組成物の効果を評価することができる。ＫＢｖ細胞は、１０％ウシ胎児血清を 補足したＲＰＭＩ１６４０培地中、単層培養細胞としてインビトロにて維持した 。該細胞を薬剤不含培地に少なくとも４回継代培養し、実験的使用に付した。細 胞をトリプシン処理で収穫し、２０００ないし３０００個の細胞／ウエルで９６ −ウェルマイクロタイタープレート中の新鮮な培地にプレートし、１ないし２日 間培養して再び付着させた。その後、０.０２％ポリエチレンオキシド−ブロッ ク−ポリ（メタクリル酸ナトリウム）と共にまたはなしでドキソルビシンを種々 の濃度で加え、その細胞の単層を、３７℃で４時間、５％二酸化炭素と共にイン キュベートした。インキュベーション後、その細胞単層をＤ−ＰＢＳで３回洗浄 し、１０％ＦＢＳを補足したＲＰＭＩ１６４０に４日間培養した。薬物細胞毒性 を標準ＸＴＴアッセイ(Scudievoら、Cancer Research、１９８８、４８、４８２ ７）で測定した。簡単に言えば、５μｌ／ｍｌの滅菌ＰＢＳ中１.５４μｇ／ｍ ｌフェナジンメタスルフェート溶液を含有するＲＰＭＩ１６４０の滅菌処理した ｌ１ｍｇ／ｍｌのＸＴＴ溶液を細胞(２００μｌの培地を有するウェル当たり５ ０μｌの細胞)に加え、ＣＯ₂と共に３７℃で４ないし１６時間インキュベートし た。マイクロプレートリーダーを用いて、吸光度をλ４２０で測定した。実験は すべて３重反復にて行った。ＳＥＭ値は１０％（ｐ＜０.０５）未満であった。 用量応答曲線よりＩＣ５０の値を決定した。その結果を以下に示す： 上記したデータは本発明の組成物が多剤耐性癌細胞をＭＤＲ薬剤に対して化学 感作することを示すものである。 実施例２ 以下の実験は、ヒト腸上皮細胞Ｃａｃｏ−２におけるローダミン１２３の取込 みの効果を評価したものである。これらの細胞は、広範囲に及ぶ医薬に関してそ の細胞の透過能を制御するＰ−ｇｐを発現している（Thiebaultら、Proc.Natl.A cad.Sci.USA １９８７、８４：７７３５）。ローダミン１２３はＰ-ｇｐ流出系 にて作用する特異的プローブであり、通常、癌細胞および正常細胞におけるＰ− ｇｐ流出系を評価するのに用いられる（Jancisら、Mol.Pharmacol.１９９３、４ ３：５１；Leeら、Mol.Pharmacol.１９９４、４６：６２７）。薬物デリバリー の観点から、腸上皮細胞におけるｐ−ｇｐの機能を遮断することは著しい影響を 与えうる。Ｃａｃｏ−２細胞を１０％ウシ胎児血清を補足したＤＭＥＭ中に培養 した。Ｃａｃｏ−２単層細胞を２４−ウェルの培養プレートに増殖させ、集密に 達した後にローダミン取込み実験に使用した。単層細胞すべての集密度を倒立光 学顕微鏡を用いて肉眼観察により測定した。３.２μＭのローダミン１２３をポ リエチレンオキシド−ブロック−ポリ（メタクリル酸ナトリウム）の以下の組成 ：ＮａＣｌ（１２２ｍＭ）、ＮａＨＣＯ₃（２５ｍＭ）、グルコース（１０ｍＭ ）、ＫＣｌ（３ｍＭ）、ＭｇＳＯ₄（１.２ｍＭ）、Ｋ₂ＨＰＯ₄（０.４ｍＭ）、 ＣａＣｌ₂（１.４ｍＭ）およびＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）を有するアッセイ緩衝液 中０.０１％溶液を用いて処方した。ポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ(メ タクリル酸ナトリウム)の存在下または不在下におけるローダミン１２３のＣａ ｃｏ−２単層細胞での取込みを３７℃で６０分にわたって試験した。３７℃で３ ０分間ペルインキュベートした後、アッセイ用緩衝液を除去し、３.２μＭのロ ーダミン１２３を０.０１％ポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ（メタクリ ル酸ナトリウム）と共にまたはなしでその単層に加えた。これらの試料を３７℃ で９０分間該単層に曝し、ついで培地を除去し、Ｃａｃｏ−２単層を０.５ｍｌ の氷冷ＰＢＳで３回洗浄して取り込 みを停止させた。Ｃａｃｏ−２単層を１.０％トリトンＸ−１００（０.５ｍｌ） に可溶化させ、細胞結合したローダミン蛍光性および蛋白含量を測定するために アリコートを取り出した。ローダミン１２３の蛍光を、島津５０００分光蛍光計 を用いてλｅｘ＝４８８ｎｍおよびλｅｍ＝５５０ｎｍで測定し；蛋白含量をピ アス（Pierce）ＢＣＡを用いて測定する。ローダミン１２３のＣａｃｏ−２溶菌 液中濃度を標準曲線を作成することで決定する。取込み実験より由来のデータを タンパク１ｍｇ当たりの細胞結合ローダミンの量で示す。各データ値は４つの単 層の平均±ＳＥＭを示す。結果は次のとおりである： 上記データは、本発明の組成物がＭＤＲ薬物のＰ−ｇｐ流出系を発現する細胞 への移行を強化し、この処方が薬効を亢進することを示す。同様の増加がＭＤＲ 癌細胞にて観察される。さらには、同様の増加が肝細胞および脳微小血管内皮細 胞にて観察され、このことは本発明の組成物が薬物を腫瘍、肝臓に効果的にデリ バリーし、腸バリアおよび血管脳バリアを効果的に交差するのに用いることがで きることを示唆する。 実施例３ 本発明の組成物の生物学的に活性な物質が生物学的バリア、例えば腸を交差し て移行することについての効果が、都合よくは、膜インサート上で増殖させた単 層細胞ポリカルボネートを用いて測定できる。（例えば、Nerurkarら、Pharm Re s.１９９６、１３：５２８を参照のこと。）ポリカーボネート膜インサート上で 増殖させた集密状のＣａｃｏ−２単層を上記した培地中にプレインキュベートさ せた。プレインキュベーション期間および実際の透過性実験の両方について、１ .５ｍｌの 培地を単層のルーメン（ドナー）側に置き、２.６ｍｌの培地をアブルーメン（ レシーバー）側に置いた。３．２μＭのＲ１２３を０.０１％ポリエチレンオキ シド−ブロック−ポリ（メタクリル酸ナトリウム）と共にまたはなしでＣａｃｏ −２単層のドナー側に加えることで、ローダミン１２３の透過性を測定した。種 々の時間(０−９０分間)で、レシーバーコンパートメントにある１００μｌの試 料を取り出した。取り出した各試料を等容量のアッセイ用緩衝液と置き換えた。 ついで試料を、上記したように蛍光分光測光法でローダミン１２３についてアッ セイした。Ｃａｃｏ−２単層の強度を評価するために、少量の［³Ｈ］マニトー ル（０.５μＣｉ／ｍｌ）を各透過性実験を開始したコンパートメント先端部に 加えた。マニトールは容易にＣａｃｏ−２単層を交差しないため、この特定のマ ーカーはまたＣａｃｏ−２単層全体の取込みに対する本発明の組成物の効果も測 定する。これらの実験からのデータを、時間に対して、レシーバー溶液中に現れ たローダミン１２３の量をグラフに示すことで分析する。各データは４つの単層 の平均±ＳＥＭを示す。結果は次のとおりである： 上記したデータは本発明の組成物が腸バリアにおける界面活性生物学的物質の 透過性を亢進することを示すものである。 以下の実施例はさらに本発明の特徴を示すものである。 実施例４ Ａ.本実施例において使用したｔｅｒｔ−ブチルメタクリレートおよびエチレ ンオキシドのブロックコポリマーを、おおむね以前に公開された手順(Wangら,J. Polym.Sci.,Part A:Polym.Chem.1992,30:2251)に従って、連続的アニオン重合に よって調製した。コポリマーにおけるブロックの長さは、それぞれ、ＰＥＯにつ いては１７６であり、ｔｅｒｔ−ブチルメタクリレートセグメントについては１ ８６であった。Wangら（J.Polym.Sci.,Part A：Polym.Chem.1992,30:2251）に記 載されるように、このコポリマーを加水分解して、ポリエチレンオキシド−ブロ ック−ポリメタクリル酸を得た。ポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ（メタ クリル酸ナトリウム）を、酸形態のコポリマーをテトラヒドロフラン：メタノー ル混合液（９５：５ ｖ／ｖ）中に再溶解し、メタノール中のＮａＯＨを添加す ることによって調製した。ポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ（メタクリル 酸ナトリウム）を含有する沈殿を濾過し、メタノールで洗浄し、次いで水中に再 溶解し、凍結乾燥した。コポリマー試料中のカルボキシレート基の濃度を、電位 差滴定によって評価した。 Ｂ．セチルピリジニウムブロミド（Ｓｉｇｍａ Ｃｏ．）およびドデシルピリ ジニウムブロミド（Ｓｉｇｍａ Ｃｏ．）のポリエチレンオキシド−ブロック− ポリ（メタクリル酸ナトリウム）コポリマーとの結合等温式を、以下のイオン選 択性電極を使用することによって電位差測定した：Ａｇ／ＡｇＣｌ｜１Ｍ ＮＨ₄ ＮＯ₃寒天橋｜参照溶液（界面活性剤、２．５・１０^-4Ｍ）｜ＰＶＣメンブレン ｜試料溶液｜１Ｍ ＮＨ₄ＮＯ₃寒天橋｜Ａｇ／ＡｇＣｌ。ＰＶＣイオン選択性電 極の調製は他所に記載されている（Shirahamaら，Bull.Chem.Soc.Jpn.1981,54:3 75;ShirahamaおよびTashiro,Bull.Chem.Soc.Jpn.1984,57:377;Mel'nikovら,J.Am .Chem.Soc.1995,117:9951)。セルの起電力（ｅｍｆ）を、デジタルＲａｄ ｉｏ ｍｅｔｅｒ ｐＨＭ−８３ ｐＨメーターを用いて測定した。電極は検討した界 面活性剤濃度の範囲にわたって良好なネルンスト応答を示した。結合等温式を、 ５・１０^-4塩基−モル／Ｌポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ（メタクリル 酸ナトリウム）溶液の対応する界面活性剤の溶液を用いる滴定によって得た。結 果を、界面活性剤溶液の添加の結果としてのコポリマー濃度の低下について補正 した。占有結合部位の割合βを以下のようにに定義した β＝（Ｃ_t−Ｃ_f）／Ｃ_i （３） [式中、Ｃ_tは添加した界面活性剤の総濃度であり、Ｃ_fは遊離界面活性剤の濃度 であり（Ｃ_fを検量線（すなわち、ポリマーの非存在下およびＣ_t＜ＣＭＣで測定 した直線プロット「ｅｍｆ対ｌｏｇ Ｃ_t」）を使用して決定した）、Ｃ_iはブロ ックコポリマーのイオン性基の濃度である]。セチルピリジニウムプロミドおよ びドデシルピリジニウムブロミドの結合について得た結果を図１に示す。 実施例５ ドキソルビシン（Ｓｉｇｍａ Ｃｏ．）のポリエチレンオキシド−ブロック− ポリ（メタクリル酸ナトリウム）コポリマーへの結合等温式を、蛍光分光法を使 用して測定した。簡潔に記載すると、５５６ｎｍでのドキソルビジンの蛍光強度 （励起４７１ｎｍ）を１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ ７．４）中で、ブロックコ ポリマーの存在下および非存在下で測定した。ブロックコポリマーの存在下では 、ドキソルビシンの蛍光は消光した。占有結合部位の割合βを以下のように定義 した [式中、Ｉ₀およびＩはブロックコポリマーの非存在下および存在下での蛍光強度 であり、Ｃ_tは添加した界面活性剤の総濃度であり、Ｃ_iはブロックコポリマーの イオン性基の濃度である]。ドキソルビシンのポリエチレンオキシド−ブロック −ポリ（メタクリル酸ナトリウム）への結合について得た結果を図２に示す（曲 線１）。 実施例６ ドキソルビシンをローダミン１２３（Ｓｉｇｍａ Ｃｏ．）に置き換え、励起 ５０５ｎｍおよび発光５２２ｎｍで蛍光測定を実施し、 ［式中、Ｉ_maxはブロックコポリマーの飽和濃度での最大蛍光である］を使用し た 以外は実施例２の手順に従い、図２の結合等温式を得た（曲線２）。 実施例７ ポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ（メタクリル酸ナトリウム）は実施例 ４に記載のものと同じであった。Ｐｗ＝９３０のホモポリマー、ポリメタクリル 酸をラジカル重合（Lipatov,およびZubov,Vysokomlo.Soedin.,Ser.A.1959,1:88 ）によって得た。これらのポリマーとセチルピリジニウムブロミド（Ｓｉｇｍａ Ｃｏ．）との問で形成された複合体を、濁度測定を使用して研究した。アニオ ンポリマーの塩基モル濃度１．０８・１０^-3塩基−モル／Ｌ；温度２５℃、およ びｐＨ９．２。濁度測定を、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＵＶ１６０分光光度計を使用し て、４２０ｎｍで、代表的には３分間システムを平衡化した後に実施した。デー タを図３に（１００−Ｔ）／１００［式中、Ｔはポリエチレンオキシド−ブロッ ク−ポリ（メタクリル酸ナトリウム）およびポリ（メタクリル酸ナトリウム）由 来の複合体についての透過（％）である］として報告する。 実施例８ Ｎ−セチルピリジニウムブロミドとポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ（ メタクリル酸ナトリウム）との間の複合体を、ブロックコポリマーの８・１０^-4 塩基−モル／Ｌ溶液中、２５℃およびｐＨ９．２で調製した。Ｃ_t/Ｃ_i［Ｃ_tは添 加した界面活性剤の総濃度であり、Ｃ_iはブロックコポリマーのイオン性基の濃 度である］は０．０１〜５で変動した。電気泳動移動度（ＥＰＭ）測定を、２５ ℃で１５〜１８Ｖ／ｃｍの電場強度で、「ＺｅｔａＰｌｕｓ」Ｚｅｔａ Ｐｏｔ ｅｎｔｉａｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ(Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎ ｔ Ｃｏ.）を６３５ｎｍのレーザー波長で操作した１５ｍＶ固体レーザーとと もに使用することによって実施した。粒子のゼータポテンシャルをＥＰＭ値から スモルコフスキーの式を使用して算出した。有効流体力学的径を、Ｍｕｌｔｉ Ａｎｇｌｅ Ｏｐｔｉｏｎを備えた同じ機器を使用する光子相関分光法によって 測定した、全ての溶液を、二回蒸留水を使用して調製し、ポアサイズ０．２２μ ＭのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ メンブレンを通して繰り返し濾過した。サイズ測定を２５℃、９０°の角度で実 施した。結果を図４に示す。 実施例９ カチオン界面活性剤（Ｓ＋）と弱ポリ酸との間の相互作用は、以下のスキーム に従うプロトンの遊離を生じるイオン交換反応を表す： セチルピリジニウムブロミドとポリエチレンオキシド−ブロック−ポリメタクリ ル酸との混合物についてのこの反応の平衡を、異なるｐＨで電位差滴定によって 研究した（例えば、Kabanov,Polymer Science 1994,36:143を参照のこと）。ポ リエチレンオキシド−ブロック−ポリメタクリル酸を実施例４に記載のように合 成した。アルカリ滴定曲線を、Ｎ−セチルピリジニウムブロミド（Ｓｉｇｍａ Ｃｏ．）とポリエチレンオキシド−ブロック−ポリメタクリル酸との混合物につ いて得た。界面活性剤の総濃度は、ポリ酸のイオン化可能基の濃度に等しかった 。イオン交換反応（５）における転換度θを、もとの滴定曲線から、全てのアル カリがこの反応の結果として遊離されるプロトンの中和のために消費されるとい う仮定のもとに決定した。弱ポリ酸について、所定のｐＨでのθは以下のように 表される ［式中、Ｍ_bは添加した塩基のモル数であり、Ｖは反応系の現在容積であり、Ｋ_a は特徴的な解離定数であり、Ｃ₀はポリ酸の塩基−モル濃度である］。結果を図 ５に示す。 実施例１０ 本発明のブロックコポリマーと界面活性剤との間に形成された複合体の粒子中 の 内部水性容積の存在を、水溶性蛍光色素、５，６−カルボキジフルオレセインを 使用して便利に実証することができる。例えば、Parker,Photoluminiscence of Solutions;Elsevier:New York,303頁およびその次，1968を参照のこと。Ｎ−セ チルピリジニウムブロミドとポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ（メタクリ ル酸ナトリウム）との間の複合体を、実施例８に記載のように、Ｃ_t／Ｃ_i＝１で 、水中のコポリマーの溶液を１０ｍＭの５，６−カルボキシフルオレセイン（Ｓ ｉｇｍａ Ｃｏ．）中の同じコポリマーの溶液で置き換えて調製する。簡潔に記 載すると、１０ｍＭ ５，６−カルボキシフルオレセインの水溶液（ｐＨ ７． ４）０．８７ｍｌをポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ（メタクリル酸ナト リウム）の０．０３９Ｍ溶液５０μｌおよび０．０２５Ｍ Ｎ−セチルピリジニ ウムブロミド溶液８０μｌと混合する。室温で３０分間インキュベートした後、 複合体の粒子を外部容積中に残存する色素から、０．０１ｍＭ Ｎ−セチルピリ ジニウムブロミドの溶液で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５媒質（Ｐｈａ ｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用するゲル浸透クロマトグラフィーによっ て分離した。得られた溶液中の５，６−カルボキシフルオレセインの蛍光を励起 波長４９５ｎｍおよび２５℃でＳｈｉｍａｄｚｕ ５０００分光蛍光計を使用し て測定する。この系における色素の最大蛍光は、粒子の非存在下での遊離色素の 最大発光に対応する５１７．２ｎｍで観察された（スリット１．５ｎｍ）。この 系に１０％（ｖ／ｖ）水性Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（Ｓｉｇｍａ Ｃｏ．）４ ０μｌを添加すると、粒子の内部水性空洞からの濃縮された色素の遊離から生じ る蛍光強度の鋭い増加が生じた。このことは、粒子が内部水性容積を有する小胞 を表すことを示唆する。 実施例１１ Ｎ−セチルピリジニウムブロミドとポリエチレンオキシド−ブロック−ポリ（ メタクリル酸ナトリウム）との間の複合体を、実施例１０に記載のように、１０ ｍＭ５，６−カルボキシフルオレセイン溶液をカルセイン（Ｓｉｇｍａ Ｃｏ． ）の０．１ｍＭ溶液で置き換えて調製した。この複合体の粒子を、実施例１０に 記載のようにゲル浸透クロマトグラフィーによって分離した。カルセインの蛍光 強度を、それ ぞれ４９０ｎｍおよび５２０ｎｍの発光波長および励起波長で測定した。２μｌ のＣｏＣｌ₂溶液および４０μｌの１０％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００をこの系に 異なる順序で添加して、小胞外部の蛍光を消光した。ＣｏＣｌ₂を添加すること によって、この系における蛍光が最初の蛍光の３％まで低下した。Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００をＣｏＣｌ₂の後に添加した場合、蛍光はさらに最初の値の１％ま で低下した。対照的に、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００をＣｏＣｌ₂を事前に添加す ることなしに添加した場合、蛍光の変化は記録されなかった。ＣｏＣｌ₂溶液を Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００溶液の後に添加した場合、蛍光は最初の値の約１％ま で低下した。このことは、全容積の約２％の内部容積を有する小胞の形成を示唆 する。 実施例１２ ポリエチレングリコール（８，０００）−ポリエチレンイミン（ｍ．ｗ．２， ０００）コポリマーを、Vinogradovら（Pharma.Res.,14:S-641）によって以前に 報告されたように合成した。ポリエチレングリコール−ポリエチレンイミンコポ リマーとアニオン界面活性剤Ａｅｒｏｓｏｌ ＯＴ（Ｓｉｇｎｌａ Ｃｏ．）と の間の複合体をＣ_t／Ｃ_i＝１［式中、Ｃ_tは添加した界面活性剤の総濃度であり 、Ｃ_iはブロックコポリマーのイオン性基の濃度である］で得た。実施例８に記 載のような動的光散乱によって測定した、形成された粒子の大きさは５７ｎｍに 等しい。 実施例１３ ポリエチレングリコール−ポリエチレンイミンコポリマー（上記）と脂肪酸塩 、オレイン酸ナトリウム塩（Ｓｉｇｍａ Ｃｏ．）との間の複合体を、１０ｍＭ リン酸ナトリウム緩衝液（ＳＰＢ）（ｐＨ ６．０）中、Ｃ_t−Ｃ_i＝１で、同じ 緩衝液中のコポリマー溶液とメタノール中の脂肪酸塩溶液を単純に混合すること によって得た。複合体溶液中の最終メタノール含量は３％であった。上記実施例 ８に記載のような動的光散乱によって測定した、形成された粒子の大きさは５４ ｎｍであった。 実施例１４ ポリエチレングリコール−ポリエチレンイミンコポリマー（上記）と脂肪酸塩 、 オレイン酸ナトリウム塩との間の複合体を、上記実施例１３に記載のように、１ ０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ＳＰＢ）（ｐＨ ７．４）中、Ｃ_t−Ｃ_i＝１で 得た。上記実施例８に記載のような動的光散乱によって測定した、形成された粒 子の大きさは４４ｎｍであった。 実施例１５ ポリエチレングリコール−ポリエチレンイミンコポリマー（上記）と脂肪酸塩 、オレイン酸ナトリウム塩との間の複合体を、上記実施例１３に記載のように、 １０ｎＭ ＴＲＩＳ緩衝液（ｐＨ ８．２）中、Ｃ_t−Ｃ_i＝１で得た。上記実施 例８に記載のような動的光散乱によって測定した、形成された粒子の大きさは５ ６ｎｍであった。 実施例１６ ポリエチレングリコール−ポリエチレンイミンコポリマーとレチノイン酸(Ａ ｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．)との間の複合体を、１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ ＳＰＢ）（ｐＨ ７．４）中、Ｃ_t−Ｃ_i＝１で得た。水酸化ナトリウムを含有す る水／メタノール（６０：４０、ｖ／ｖ）混合液中のレチノイン酸の溶液を、Ｓ ＰＢ中のコポリマー溶液に添加した。複合体溶液中の最終メタノール含量は５％ であった。コポリマーの存在下でのレチノイン酸のＵＶ−ｖｉｓスペクトルにお けるさらなる吸収バンド（λ_max＝３０６ｎｍ）は、同じ条件での純粋なレチノ イン酸の吸収バンド（λ_max＝３４３ｎｍ）に匹敵することが見出された。 実施例１７ ４２．８ｍｇのノナフルオロペンタン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．）および１ ｍｇのＴａｘｏｌを水酸化ナトリウム（２．８４×１０^-4モル）を含有するエタ ノール５０μｌ中で混合した。この混合液を上記実施例１３に記載のように調製 したポリエチレングリコール−ポリエチレンイミンコポリマーとオレイン酸ナト リウム塩との間の複合体１ｍｌに添加した。一晩撹拌した後、試料を１０分間１ ３０００Ｒ ＰＭで遠心分離した。２０μｌの上清を１ｍｌのメタノールに添加し、ＵＶスペ クトルを記録した。Ｔａｘｏｌの濃度を２２７ｎｍでの吸光度から算出した（ε ＝４４，３５９ｍｌ／ｍｇ）。吸光係数をメタノール中の有機フッ素成分の存在 下で評価した。Ｔａｘｏｌの溶解度は７４．４％であった。上記実施例８に記載 のような動的光散乱によって測定した、Ｔａｘｏｌ／有機フッ素化合物混合液を 負荷した複合体粒子の大きさは６１ｎｍであった。 本発明の特定の実施態様を上記で記載および／または例示したが、種々の他の 実施態様が上記の開示から当業者に明らかとなる。それゆえ、本発明は記載およ び／または例示した特定の実施態様に限定されず、添付の請求の範囲から逸脱す ることなくかなりの変形および改変が可能である。

【手続補正書】 【提出日】平成１１年１２月２９日（１９９９．１２．２９） 【補正内容】 請求の範囲 １．成分として、少なくとも１種の非イオン性の水溶性セグメントおよび少な くとも１種のポリイオンセグメントを有するブロックコポリマー、および少なく とも１種の疎水基を有する荷電した界面活性剤を有してなる超分子複合体を含む 組成物であって、その界面活性剤の電荷がブロックコポリマーのポリイオンセグ メントの電荷と反対であり、その複合体の成分が、その反対の電荷間および界面 活性剤の疎水基間の相互作用により結合する；ただし、その複合体が生物学的活 性を有するアニオン界面活性剤を有する場合、かかるアニオン界面活性剤は約１ ０よりも大きくない正味の電荷を有する、ことを特徴とする組成物。 ２．界面活性剤の正味の電荷の、該複合体のブロックコポリマー成分中に存在 するポリイオンセグメントの正味の電荷に対する割合が、約０.０１ないし約１ ００である請求項１記載の組成物。 ３．荷電比が約０.１ないし約１０である請求項２記載の組成物。 ４．ブロックコポリマーのポリイオンセグメントがポリアニオン性である請求 項２記載の組成物。 ５．ブロックコポリマーの非イオンセグメントが、ポリエーテルグリコール、 エチレンオキシドとプロピレンオキシドとのコポリマー、ポリサッカリド、アク リルアミド、アクリル酸エステル、メタクリルアミド、メタクリル酸エステル、 Ｎ−(２−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド、ビニルアルコール、ビニルピ ロリドン、ビニルトリアゾールまたはビニルピリジンのＮオキシドからなる群よ り選択されるビニル化合物のホモポリマーおよびコポリマー、ポリオルトエステ ルおよびポリアミノ酸からなる群より選択される、請求項４記載の組成物。 ６．小胞の形態である請求項４記載の組成物。 ７．ポリアニオンセグメントが、ポリメタクリル酸およびその塩、ポリアクリ ル酸およびその塩、メタクリル酸およびその塩のコポリマー、アクリル酸および その塩のコポリマー、ヘパリン、ポリ(ホスフェート)、ポリアミノ酸、ポリリン ゴ酸、ポリ乳酸、核酸またはカルボキシル化デキストランからなる群より選択さ れる、請 求項４記載の組成物。 ８．ポリアニオンセグメントが、重合し、対となるカルボキシル基との生成物 を形成するモノマーより調製されるホモポリマーまたはコポリマーであって、そ のモノマーが、アクリル酸、アスパラギン酸（アミノ酸）、１,４−フェニレン ジアクリル酸、シトラコン酸、無水シトラコン酸、トランス−桂皮酸、４−ヒド ロキシ−３−メトキシ桂皮酸、ｐ−ヒドロキシ桂皮酸、トランス−グルタコン酸 、グルタミン酸（アミノ酸）、イタコン酸、リノール酸、リノレン酸、メタクリ ル酸、マレイン酸、無水マレイン酸、メサコン酸、トランス−β−ヒドロムコン 酸、トランス−トランスムコン酸、オレイン酸、リシノール酸、２−プロペン− １−スルホン酸、４−スチレンスルホン酸、トランス−トラウマチン酸、ビニル スルホン酸、ビニルホスホン酸、ビニル安息香酸およびビニルグリコール酸から なる群より選択される、請求項４記載の組成物。 ９．界面活性剤が、親油性第４アンモニウム塩、リポポリアミン、親油性ポリ アミノ酸、親油性第１−、第２−、第３−および複素環式アミン、親油性イミダ ゾール、親油性ピペリジニウム塩、親油性キナルジニウム塩、親油性アゾニウム およびアゾリウム塩、ｐＨ−感受性カチオン脂質、ニカチオン性ボラフォーム電 解液または該界面活性剤の混合物からなる群より選択される、請求項４記載の組 成物。 １０．さらに、非イオン性界面活性剤を有してなる、請求項４記載の組成物。 １１．その非イオン界面活性剤が、ジオロエオイルホスファチジルエタノール アミン、ジオレオイルホスファチジルコリンまたはその非イオン界面活性剤から なる群より選択される、請求項１０記載の組成物。 １２．ブロックコポリマーのポリイオンセグメントがポリカチオン性である、 請求項２記載の組成物。 １３．小胞の形態である、請求項１２記載の組成物。 １４．ポリカチオンセグメントが、ポリアミノ酸、ポリメタクリル酸のアルカ ノールアミンエステル、ポリアミン、ポリアルキレンイミン、ポリビニルピリジ ンおよび該ポリカチオンセグメントの第４アンモニウム塩からなる群より選択さ れる、請求項１２記載の組成物。 １５．アニオン界面活性剤が、アルキルスルフェート、アルキルスルホネート 、脂肪酸石鹸、ヒドロキシ−、ヒドロペルオキシ−、ポリヒドロキシ−、エポキ シ−脂肪酸の塩、モノ−およびポリ−カルボン酸の塩、プロスタン酸およびプロ スタグランジン、ロイコトリエンおよびリポキシン、アルキルホスフェート、脂 質、ナトリウム−ジアルキルスルホスクシネート、ｎ−アルキルエトキシル化ス ルフェート、胆汁酸のコール酸塩およびデスオキシコール酸塩、ペルフルオ−ロ カルボン酸、フルオロ脂肪性ホスホネート、フルオロ脂肪性ホスフェートからな る群より選択される、請求項１２記載の組成物。 １６．界面活性剤が生物学的に活性な試薬である、請求項１記載の組成物。 １７．生物学的に活性な試薬の分子量が約２０００未満である、請求項１６記 載の組成物。 １８．小胞の形態である請求項１に記載の組成物の製法であって、少なくとも １個の非イオン性の水溶性セグメントと、少なくとも１個のポリイオンセグメン トを有するブロックコポリマー、および疎水基を有する荷電した界面活性剤を混 合し、その界面活性剤の電荷がそのブロックコポリマーのポリイオンセグメント の電荷と反対であり、その界面活性剤の正味の電荷の、そのブロックコポリマー 中に存在するポリイオンセグメントの正味の電荷に対する比率が約０.０１と約 １００の間にあることを特徴とする；ただし、その界面活性剤が生物学的に活性 な試薬である場合、その試薬の電荷比は約５より大きくはない、組成物の製法。 １９．さらに、生物学的に活性な試薬を有してなる、請求項１記載の組成物。 ２０．小胞の形態の組成物であって、その小胞が生物学的に活性な試薬を含有 する内部容積を有する、請求項１９記載の組成物。 ２１．生物学的に活性な試薬が正または負の電荷を有する荷電種である、請求 項１９記載の組成物。 ２２．生物学的に活性な試薬が、鎮痛剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、 抗真菌剤、駆虫剤、腫瘍破壊剤または抗癌剤、蛋白、毒素、酵素阻害剤、ホルモ ン、神経伝達物質、糖蛋白、免疫調節物質、色素、放射性標識、放射線不透過性 化合物、蛍光化合物、細胞レセプター結合分子、抗緑内障剤、散瞳化合物および 局部麻酔剤 からなる群より選択される、請求項１９記載の組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 アイゼンバーグ，アディ カナダ、エイチ３エス・２ブイ６、ケベッ ク、モントリオール、ディーコン・ロード 6100番、ナンバー15ジェイ (72)発明者 カバノフ，ビクトール・エイ ロシア117296モスクワ、ロモノソフスキ ー・プロスペクト14番、アパートメント18

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．成分として、少なくとも１種の非イオン性の水溶性セグメントおよび少な くとも１種のポリイオンセグメントを有するブロックコポリマー、および少なく とも１種の疎水基を有する荷電した界面活性剤を有してなる超分子複合体を含む 組成物であって、その界面活性剤の電荷がブロックコポリマーのポリイオンセグ メントの電荷と反対であり、その複合体の成分が、その反対の電荷間および界面 活性剤の疎水基間の相互作用により結合する；ただし、その複合体が生物学的活 性を有するアニオン界面活性剤を有する場合、かかるアニオン界面活性剤は約１ ０よりも大きくない正味の電荷を有する、ことを特徴とする組成物。 ２．界面活性剤の正味の電荷の、該複合体のブロックコポリマー成分中に存在 するポリイオンセグメントの正味の電荷に対する割合が、約０．０１ないし約１ ００である請求項１記載の組成物。 ３．荷電比が約０．１ないし約１０である請求項２記載の組成物。 ４．ブロックコポリマーのポリイオンセグメントがポリアニオン性である請求 項２記載の組成物。 ５．ブロックコポリマーの非イオンセグメントが、ポリエーテルグリコール、 エチレンオキシドとプロピレンオキシドとのコポリマー、ポリサッカリド、アク リルアミド、アクリル酸エステル、メタクリルアミド、メタクリル酸エステル、 Ｎ−(２−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド、ビニルアルコール、ビニルピ ロリドン、ビニルトリアゾールまたはビニルピリジンのＮオキシドからなる群よ り選択されるビニル化合物のホモポリマーおよびコポリマー、ポリオルトエステ ルおよびポリアミノ酸からなる群より選択される、請求項４記載の組成物。 ６．小胞の形態である請求項４記載の組成物。 ７．ポリアニオンセグメントが、ポリメタクリル酸およびその塩、ポリアクリ ル酸およびその塩、メタクリル酸およびその塩のコポリマー、アクリル酸および その塩のコポリマー、ヘパリン、ポリ(ホスフェート)、ポリアミノ酸、ポリリン ゴ酸、ポリ乳酸、核酸またはカルボキシル化デキストランからなる群より選択さ れる、請求項４記載の組成物。 ８．ポリアニオンセグメントが、重合し、対となるカルボキシル基との生成物 を形成するモノマーより調製されるホモポリマーまたはコポリマーであって、そ のモノマーが、アクリル酸、アスパラギン酸（アミノ酸）、１,４−フェニレン ジアクリル酸、シトラコン酸、無水シトラコン酸、トランス−桂皮酸、４−ヒド ロキシ−３−メトキシ桂皮酸、ｐ−ヒドロキシ桂皮酸、トランス−グルタコン酸 、グルタミン酸（アミノ酸）、イタコン酸、リノール酸、リノレン酸、メタクリ ル酸、マレイン酸、無水マレイン酸、メサコン酸、トランス−β−ヒドロムコン 酸、トランス−トランスムコン酸、オレイン酸、リシノール酸、２−プロペン− １−スルホン酸、４−スチレンスルホン酸、トランス−トラウマチン酸、ビニル スルホン酸、ビニルホスホン酸、ビニル安息香酸およびビニルグリコール酸から なる群より選択される、請求項４記載の組成物。 ９．界面活性剤が、親油性第４アンモニウム塩、リポポリアミン、親油性ポリ アミノ酸、親油性第１−、第２−、第３−および複素環式アミン、親油性イミダ ゾール、親油性ピペリジニウム塩、親油性キナルジニウム塩、親油性アゾニウム およびアゾリウム塩、ｐＨ−感受性カチオン脂質、二カチオン性ボラフォーム電 解液または該界面活性剤の混合物からなる群より選択される、請求項４記載の組 成物。 １０．さらに、非イオン性界面活性剤を有してなる、請求項４記載の組成物。 １１．その非イオン界面活性剤が、ジオロエオイルホスファチジルエタノール アミン、ジオレオイルホスファチジルコリンまたはその非イオン界面活性剤から なる群より選択される、請求項１０記載の組成物。 １２．ブロックコポリマーのポリイオンセグメントがポリカチオン性である、 請求項２記載の組成物。 １３．小胞の形態である、請求項１２記載の組成物。 １４．ポリカチオンセグメントが、ポリアミノ酸、ポリメタクリル酸のアルカ ノールアミンエステル、ポリアミン、ポリアルキレンイミン、ポリビニルピリジ ンおよび該ポリカチオンセグメントの第４アンモニウム塩からなる群より選択さ れる、請求項１２記載の組成物。 １５．アニオン界面活性剤が、アルキルスルフェート、アルキルスルホネート 、脂肪酸石鹸、ヒドロキシ−、ヒドロペルオキシ−、ポリヒドロキシ−、エポキ シ− 脂肪酸の塩、モノ−およびポリ−カルボン酸の塩、プロスタン酸およびプロスタ グランジン、ロイコトリエンおよびリポキシン、アルキルホスフェート、脂質、 ナトリウム−ジアルキルスルホスクシネート、ｎ−アルキルエトキシル化スルフ ェート、胆汁酸のコール酸塩およびデスオキシコール酸塩、ペルフルオロカルボ ン酸、フルオロ脂肪性ホスホネート、フルオロ脂肪性ホスフェートからなる群よ り選択される、請求項１２記載の組成物。 １６．界面活性剤が生物学的に活性な物質である、請求項１記載の組成物。 １７．生物学的に活性な物質の分子量が約２０００未満である、請求項１６記 載の組成物。 １８．小胞の形態である請求項１に記載の組成物の製法であって、少なくとも １個の非イオン性の水溶性セグメントと、少なくとも１個のポリイオンセグメン トを有するブロックコポリマー、および疎水基を有する荷電した界面活性剤を混 合し、その界面活性剤の電荷がそのブロックコポリマーのポリイオンセグメント の電荷と反対であり、その界面活性剤の正味の電荷の、そのブロックコポリマー 中に存在するポリイオンセグメントの正味の電荷に対する比率が約０．０１と約 １００の間にあることを特徴とする；ただし、その界面活性剤が生物学的に活性 な物質である場合、その物質の電荷比は約５より大きくはない、組成物の製法。