JP2002501931A - ＭｕｒＧの基質類似体、その製造方法およびそれを用いたアッセイ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 細菌細胞壁生合成に関与するＭｕｒＧ、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を監視する一般的な方法を開示する。より具体的には、ＭｕｒＧにより触媒される酵素反応におけるＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃの受容体として機能する、リピドＩ（ＭｕｒＧの天然基質）の単純基質類似体の合成を記載する。本発明の基質類似体を使用するアッセイがさらに開示され、これは、ＭｕｒＧ活性阻害剤を含む様々な他の基質の同定、酵素の機序および／または構造研究の促進、および他の用途に有用である。高流量アッセイも記載する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 １．発明の分野 本発明は、ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：細菌細胞壁生合成に関与する酵素であるム
ラミルペンタペプチドピロホスホリル、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフ
ェラーゼ（ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ、ＭｕｒＧ、またはその相同体）の
基質類似体に関する。本発明の基質類似体は、ＭｕｒＧの膜結合天然基質である
リピドＩの機能的代替物として有用である。特に、本発明の基質類似体は、Ｍｕ
ｒＧにより触媒される酵素活性のアッセイに、ＭｕｒＧの他の基質類似体並びに
酵素活性または細胞壁生合成の阻害剤（すなわち潜在的抗菌薬）の同定法に、お
よび、その活性タンパク質／ペプチド断片の研究を含む、ＭｕｒＧの単離および
精製に、有利に利用できる。

【０００２】 ２．発明の背景 ２．１．細菌酵素学 現存する抗生物質に対する耐性の出現により、細菌酵素学への興味が復活した
。重要な生合成経路に関与する細菌酵素についての詳細な機序および構造情報が
、新規な抗菌剤の開発につながり得るペプチドグリカン生合成との干渉は、細菌
感染処置における実績ある戦略であるので、ペプチドグリカン生合成に関与する
全ての酵素が、新規抗生物質開発の潜在的標的である。経路中のいくつかの初期
酵素に関するいくつかの詳細な構造および機序情報が現在入手可能であるが、ほ
とんどの下流酵素は研究が非常に困難であることが分かってきた。

【０００３】 この困難には２つの主な理由がある：第一に、下流酵素は、膜に結合しており
、それにより本質的に扱いにくく；第二に、ほとんどの下流酵素における分離し
た基質は、入手できないか、または容易に入手できない。モノマー基質は、天然
源から大量に得ることが困難な場合もある。また、基質は、天然源から大量に入
手し得るが、御しにくいポリマー物質である場合もある。容易に入手できる分離
した基質がないので、下流酵素の活性を確実かつ明確なセットの反応条件下で測
定するために使用できる酵素アッセイを開発することは不可能であった。この必
要が充足されていないことにより、構造特徴づけに適した多くの活性型下流酵素
を精製する試みが妨げられ、かかる酵素に関する詳細な機序情報を得る試みもは
るかにより不可能であった。

【０００４】 いくつかの最善の抗生物質は、細菌細胞を囲むペプチドグリカンポリマーの生
合成との干渉により機能する。一般的な抗生物質に耐性である細菌病原体の出現
により、ペプチドグリカン生合成に関与する酵素についてより学ばねばならなく
なった。生合成経路のいくつかの初期酵素の特徴づけにおいて顕著な前進がなさ
れたが（例えば、（ａ）Ｆａｎ，Ｃ．；Ｍｏｅｗｓ，Ｐ．Ｃ．；Ｗａｌｓｈ，Ｃ
．Ｔ．；Ｋｎｏｘ，Ｊ．Ｒ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９４、２６６、４３９；（
ｂ）Ｂｅｎｓｏｎ，Ｔ．Ｅ．；Ｆｉｌｍａｎ，Ｄ．Ｊ．；Ｗａｌｓｈ，Ｃ．Ｔ．
；Ｈｏｇｌｅ，Ｊ．Ｍ．、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１９９５、２、６
４４；（ｃ）Ｊｉｎ，Ｈ．Ｙ．；Ｅｍａｎｕｅｌｅ，Ｊ．Ｊ．；Ｆａｉｒｍａｎ
，Ｒ．；Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｊ．Ｇ．；Ｈａｉｌ，Ｍ．Ｅ．；Ｈｏ，Ｈ．Ｔ．
；Ｆａｌｋ，Ｐ．；Ｖｉｌｌａｆｒａｎｃａ，Ｊ．Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ １９９６、３５、１４２３；（ｄ）Ｓｋａｒｚｙｎｓｋｉ，Ｔ．；Ｍｉｓ
ｔｒｙ，Ａ．；Ｗｏｎａｃｏｔｔ，Ａ．；Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ，Ｓ．Ｅ．；Ｋ
ｅｌｌｙ，Ｖ．Ａ．；Ｄｕｎｃａｎ，Ｋ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ １９９６、４
、１４６５；（ｅ）Ｓｃｈｏｎｂｒｕｎｎ，Ｅ．；Ｓａｃｋ，Ｓ．；Ｅｓｃｈｅ
ｎｂｕｒｇ，Ｓ．；Ｐｅｒｒａｋｉｓ，Ａ．；Ｋｒｅｋｅｌ，Ｆ．；Ａｍｒｈｅ
ｉｎ，Ｎ．；Ｍａｎｄｅｌｋｏｗ，Ｅ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ １９９６、４、
１０６５；（ｆ）Ｂｅｎｓｏｎ，Ｔ．Ｅ．；Ｗａｌｓｈ，Ｃ．Ｔ．；Ｈｏｇｌｅ
，Ｊ．Ｍ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９７、３６、８０６参照）、下流
酵素は、研究が非常に困難であることが判明した。困難の一部は、かかる下流酵
素が膜に結合しており（例えば、（ａ）Ｇｉｔｔｉｎｓ，Ｊ．Ｒ．；Ｐｈｏｅｎ
ｉｘ，Ｄ．Ａ．；Ｐｒａｔｔ，Ｊ．Ｍ． ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅ
ｖ．１９９４、１３、１；（ｂ）Ｂｕｐｐ，Ｋ．；ｖａｎ Ｈｅｉｊｅｎｏｏｒ
ｔ，Ｊ．１９９３、１７５、１８４１参照）、それにより本質的に扱いにくいと
いう事実からきており、一部には、多くの酵素における基質が容易に入手できな
いからである。（例えば、（ａ）Ｐｌｅｓｓ，Ｄ．Ｄ．；Ｎｅｕｈａｕｓ，Ｆ．
Ｃ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９７３、２４８、１５６８；（ｂ）ｖａｎ Ｈ
ｅｉｊｅｎｏｏｒｔ，Ｙ．；Ｇｏｍｅｚ，Ｍ．；Ｄｅｒｒｉｅｎ，Ｍ．；Ａｙａ
ｌａ，Ｊ．；ｖａｎ Ｈｅｉｊｅｎｏｏｒｔ，Ｊ．Ｊ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．
１９９２、１７４、３５４９参照。）これらの問題から、下流酵素の詳細な機序
調査に適切な活性アッセイの開発は妨げられている。ＭｒａＹ活性を監視する蛍
光アッセイについては、Ｂｒａｎｄｉｓｈ，Ｐ．Ｅ．；Ｂｕｒｎｈａｍ，Ｍ．Ｋ
．；Ｌｏｎｓｄａｌｅ，Ｊ．Ｔ．；Ｓｏｕｔｈｇａｔｅ，Ｒ．；Ｉｎｕｋａｉ，
Ｍ．；Ｂｕｇｇ，Ｔ．Ｄ．Ｈ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９６、２７１、７
６０９参照。

【０００５】 ２．２． ＭｕｒＧ ペプチドグリカン生合成に関与している、１つのこのような下流酵素はＭｕｒ
Ｇである。ＭｕｒＧは、ペプチドグリカン生合成の生合成経路の最後の細胞内段
階、すなわち、ＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）の
、脂質連結Ｎ−アセチルムラミルペンタペプチド基質であるリピドＩへの転移を
触媒する。（下記のスキーム１参照。）

【０００６】 ｍｕｒＧ遺伝子は、初めて、１９８０年に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で同定され
、１９９０年代初期に２つのグループにより独立してシークエンスされたが、Ｍ
ｕｒＧ酵素についてほとんど知られていない。哺乳動物相同体は全くなく、また
、一部には脂質連結基質（リピドＩ、スキームＩ）は極めて単離が困難であるた
め、ＭｕｒＧ活性の直接的アッセイは全く開発されなかった。この脂質連結基質
は、細菌細胞に微量にしか存在しない。脂質連結基質の合成に関与する酵素を過
剰発現するように改良された細菌細胞の使用により、脂質連結基質の量を増加さ
せることは可能であるが、単離は依然として非常に困難である。さらに、単離し
た基質は扱いにくい。

【０００７】 その結果、ＭｕｒＧ活性は、現在、粗膜調製物を使用して、放射標識ＵＤＰ−
ＧｌｃＮＡｃ供与基から、膜の脂質連結受容成分への放射標識の取り込みを監視
することにより、評価する。シグナルを増加させるために、膜は、しばしば、Ｍ
ｒａＹおよび／またはＭｕｒＧを過剰発現する細菌培養物から調製する。Ｍｒａ
Ｙは、ＭｒａＹ基質であるＵＤＰ−Ｎ−アセチルムラミン酸ペンタペプチドを、
脂質ホスフェート部分に付着させ、ＭｕｒＧの基質であるリピドＩを提供する反
応を触媒する酵素である。典型的には、膜調製物に、リピドＩへの変換のために
外因性ＵＤＰ−Ｎ−アセチルムラミン酸ペンタペプチドを補う。このＭｒａＹ基
質は、細菌培養物から大量に容易に単離できる。この「カップリングした」酵素
アッセイは、ＭｕｒＧ酵素の潜在的阻害剤のスクリーニングには扱い易いが、詳
細な機序調査には適しておらず、精製中のＭｕｒＧ活性を追跡するためには使用
できない。

【０００８】 より具体的には、ＭｕｒＧは細胞膜結合酵素であり、これは、ＵＤＰ−Ｎ−ア
セチルグルコサミン（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）の、ウンデカプレニルピロホスフ
ェートＮ−アセチルムラミルペンタペプチド基質（リピドＩ）のＣ４ヒドロキシ
ルへの転移を触媒し、その結果、二糖−ペンタペプチド基礎単位（リピドＩＩ、
スキーム１）が構築され、これは、ポリマーペプチドグリカンに取り込まれる。
例えば、（ａ）Ｂｕｇｇ，Ｔ．Ｄ．Ｈ．；Ｗａｌｓｈ，Ｃ．Ｔ．Ｎａｔ．Ｐｒｏ
ｄ．Ｒｅｐ．１９９２、１９９；（ｂ）Ｍｅｎｇｉｎ−Ｌｅｃｒｅｕｌｘ，Ｄ．
；Ｆｌｏｕｒｅｔ，Ｂ．；ｖａｎ Ｈｅｉｊｅｎｏｏｒｔ，Ｊ．Ｊ．Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ．１９８２、１５１、１１０９参照。すでに記載したように、ムラミル
ペンタペプチド基質は、細菌に独特である。従って、ＭｕｒＧ酵素は、特異的Ｍ
ｕｒＧ阻害剤の発見または設計の潜在的標的である。

【０００９】 ＭｕｒＧ活性の特徴づけに何十年も努力を費やしたにもかかわらず、実際上、
酵素に関する構造または機序情報は全く得られなかった。例えば、（ａ）Ａｎｄ
ｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．；Ｍａｔｓｕｈａｓｈｉ，Ｍ．；Ｈａｓｋｉｎ，Ｍ．Ａ．
；Ｓｔｒｏｍｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ １９６５、５３、８８１；（ｂ）Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．；Ｍａｔｓ
ｕｈａｓｈｉ，Ｍ．；Ｈａｓｋｉｎ，Ｍ．Ａ．；Ｓｔｒｏｍｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ
．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９６７、２４２、１８０；（ｃ）Ｔａｋｕ，Ａ．
；Ｆａｎ，Ｄ．Ｐ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９７６、２５１、６１５４；（
ｄ）Ｍｅｎｇｉｎ−Ｌｅｃｒｅｕｌｘ，Ｄ．；Ｔｅｘｉｅｒ，Ｌ．；ｖａｎ Ｈ
ｅｉｊｅｎｏｏｒｔ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１９９０、１８、２８
１０；（ｅ）Ｉｋｅｄａ，Ｍ．；Ｗａｃｈｉ，Ｍ．；Ｊｕｎｇ，Ｈ．Ｋ．；Ｉｓ
ｈｉｎｏ，Ｆ．；Ｍａｔｓｕｈａｓｈｉ，Ｍ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１
９９０、１８、４０１４；（ｆ）Ｍｅｎｇｉｎ−Ｌｅｃｒｅｕｌｘ，Ｄ．；Ｔｅ
ｘｉｅｒ，Ｌ．；Ｒｏｕｓｓｅａｕ，Ｍ．；ｖａｎ Ｈｅｉｊｅｎｏｏｒｔ，Ｊ
．Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ１９９１、１７３、４５６２；（ｇ）Ｍｉｙａｏ，Ａ
．；Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ，Ａ．；Ｓａｔｏ，Ｔ．；Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｔ．；Ｔ
ｈｅｅｒａｇｏｏｌ，Ｔ．；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｙ．Ｇｅｎｅ、１９９２、１
１８、１４７；（ｈ）Ｉｋｅｄａ，Ｍ．；Ｗａｃｈｉ，Ｍ．；Ｍａｔｓｕｈａｓ
ｈｉ，Ｍ．Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９２、３８、５３
参照。リピドＩの単離が困難なため、簡単で直接的なＭｕｒＧ活性のアッセイの
開発は妨げられてきた。その結果、定量化できる活性形のＭｕｒＧの精製や、機
能する最少の長さの決定ができず；また、詳細な機序研究の実施や、基質要求の
決定も不可能であった。

【００１０】 それ故、酵素阻害剤の効果的なスクリーニングのため、並びに、ＭｕｒＧ、そ
の様々な変異体、およびその活性断片の精製、特徴づけ、および同定のための両
方に使用できる直接的な酵素アッセイが必要とされる。

【００１１】

【化８】

【００１２】 ３．発明の要約 ＭｕｒＧ酵素であるＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼの基質類似体を開示する
。初めて、上記のスキーム１で示すように、（ｉ）基質類似体および標識ＵＤＰ
−ＧｌｃＮＡｃの存在下で酵素のＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性により、
標識カップリング生成物が生成されるような、少なくとも野生型ＭｕｒＧ酵素に
より受容される構造を有し、（ｉｉ）標識カップリング生成物からの標識ＵＤＰ
−ＧｌｃＮＡｃの分離を促進する構造特徴を有するリピドＩの基質類似体。

【００１３】 特に、式：

【００１４】

【化９】

【００１５】 ［式中、「Ｒ」は、２個以上の炭素原子を含むアシル基であり、「Ｒ_１」は、１
個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ｒ_２」は、水素
、または１個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ａ」
は、置換または非置換アミノ酸残基、または２個以上の置換または非置換アミノ
酸残基を含むペプチドであり、「Ｒ_３」は、５個以上の炭素原子を含む置換また
は非置換アルキル基である］ で示される化学部分を含む物質を本明細書で開示し、該物質は、少なくとも野生
型ＭｕｒＧ酵素に結合親和性を示し、ただし、該物質は野生型ＭｕｒＧ酵素の天
然基質であるリピドＩではない。より具体的には、本発明の物質は、少なくとも
野生型ＭｕｒＧ酵素またはその相同体のＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性受
容体として役立つ。

【００１６】 また、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質またはその活性
断片を含むことが想像されるサンプルにおいて、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラー
ゼ活性を検出する方法も開示する。好ましくは、該方法は、（ａ）ＧｌｃＮＡｃ
トランスフェラーゼ活性を示すタンパク質またはその活性断片を含むことが想像
されるサンプルを提供し；（ｂ）サンプルを、有効量の標識ＧｌｃＮＡｃ基質、
および上記式（Ｉ）の化学部分を含む物質と、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ
活性を示すタンパク質またはその活性断片の存在下でグリコシド結合を介して該
物質にカップリングした標識ＧｌｃＮＡｃを含む標識カップリング生成物を提供
するのに有効な条件下で接触させ； （ｃ）該サンプルにおけるＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性の指標である、
該標識カップリング生成物の形成または存在を検出することを含む。

【００１７】 また、本発明の目的は、上記式（Ｉ）の化合物を含む、ＧｌｃＮＡｃトランス
フェラーゼ活性を示すタンパク質またはその活性断片を含むことが想像されるサ
ンプルにおいてＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を検出するアッセイを提供
することである。同物を利用するスクリーンおよび方法もまた本発明により考え
られる。特に、（ｉ）ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質ま
たはその活性断片、（ｉｉ）上記式（Ｉ）の化学部分を含む物質、および（ｉｉ
ｉ）標識ＧｌｃＮＡｃ基質を含む、潜在的抗菌活性を示す化合物についてのスク
リーンを提供する。

【００１８】 さらに、本発明の方法は、ビオチンタグを介した固体支持体への式１の「Ａ」
または「Ｒ_３」基の結合を含む検出段階を提供するものであって、ここで、該固
体支持体は、アビジンまたはストレプトアビジン覆膜レジンを含む。この段階は
、シンチレーション近接アッセイの使用を介した、生成物形成の連続的監視を提
供する。さらに、ビオチン標識物質の分離は、アビジン覆膜レジンを通す濾過を
含む。

【００１９】 本発明の好ましい実施形態において、「Ｒ_３」は、Ｈ、１〜約５０個の炭素原
子を含む脂肪族基、３〜約５５個の炭素原子を含む芳香族またはヘテロ芳香族基
、ピロホスフェート保護基および薬学的に許容されるその塩から選択し得る。

【００２０】 さらに、方法検出段階は、ビオチンタグを介した固体支持体への該「Ａ」また
は「Ｒ_３」の結合を含み、ここで、該固体支持体は、アビジンまたはストレプト
アビジン覆膜レジンを含む。

【００２１】 このように、ＭｕｒＧまたはＭｕｒＧ様活性の酵素アッセイに使用する、基質
類似体が調製される。かくして、ＭｕｒＧ活性の直接的アッセイが提供される。

【００２２】 本発明のこれらおよび他の目的は、さらに、下記に、本発明の好ましい実施形
態と共に記載する。

【００２３】 ５．好ましい実施形態の詳細な説明 ５．１． 本発明の一般的な態様 本発明は、式：

【００２４】

【化１０】

【００２５】 ［式中、「Ｒ」は、２個以上の炭素原子を含むアシル基であり、「Ｒ_１」は、１
個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ｒ_２」は、水素
、または１個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ａ」
は、置換または非置換アミノ酸残基、または２個以上の置換または非置換アミノ
酸残基を含むペプチドであり、「Ｒ_３」は、５個以上の炭素原子を含む置換また
は非置換アルキル基である］ で示される化学部分を含む物質を考える。好ましくは、本発明の物質（時に、本
明細書で、基質類似体または単に化合物と称する）は、少なくとも野生型Ｍｕｒ
Ｇ酵素に結合親和性を示す。より好ましくは、本発明の物質は、少なくとも野生
型ＭｕｒＧ酵素のＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性受容体として役立つ。本
発明の物質は、野生型ＭｕｒＧ酵素の天然基質であるリピドＩを包含するほどは
広く定義しないことを注記することは重要である。

【００２６】 本明細書で開示し記載した物質は、一部、タンパク質またはその活性断片との
結合親和性の強度に応じて、少なくとも野生型ＭｕｒＧ酵素、その相同体、およ
びおそらく、そのある変異形の、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性に対して
阻害活性を有することができることは当業者には明らかである。すなわち、本発
明の基質類似体は、タンパク質またはその活性断片に頑強に結合することにより
、リピドＩのＮ−アセチルムラミン酸部分のＣ４ヒドロキシル位へのＧｌｃＮＡ
ｃの転移を起こす、グリコシル化反応を触媒するＭｕｒＧまたはＭｕｒＧ様酵素
の能力を強力に阻害できる。勿論、ＭｕｒＧおよびその相同体は、大腸菌および
他のグラム陰性細菌から得られる。枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｅ．フェ
ーカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、Ｅ．ヒラエ（Ｅ．ｈｉｒａｅ）などのグラ
ム陽性細菌、並びに、Ｍ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）
もまた、ＭｕｒＧの相同体をもつことが知られている。

【００２７】 従って、本発明の好ましい実施形態において、「Ｒ」は、アシル基であり、ア
セチル、プロピオニル、ブタノイル、ペンタノイル、ヘキサノイル等を含むがこ
れに限定されない。「Ｒ_１」基は、置換または非置換アルキル基であり、メチル
、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、フェニル、ベンジル、トル
エイル、アントラシル等を含むがこれに限定されない。「Ｒ_２」基は、水素また
は置換または非置換アルキル基であり、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペ
ンチル、ヘキシル、フェニル、ベンジル、トルエイル、アントラシル等を含むが
これに限定されない。

【００２８】 従って、「アルキル」基という用語は、脂肪族または芳香族基を包含でき、「
置換」という用語は、特定のアルキル基が、置換基を有することができ、これは
、追加のアルキル基、ヘテロ原子、または、ヘテロ原子含有官能基を含むがこれ
に限定されず、これは、アルコール、エーテル、カルボン酸、エステル、アミド
、アミン、アルキルアミン、チオール、スルフィド、スルフェート、スルホキシ
ド、スルホン酸、リン酸、リン酸エステル、ホスフィド、ホスホネート、ホスホ
ルアミデート等を含むがこれに限定されない。任意のアシル基は、２個以上の炭
素原子を有することができ、任意のアルキル基は、１個以上の炭素原子を有する
ことができる。各基は、２５個もの炭素原子、好ましくは２０個の炭素原子、よ
り好ましくは１５個まで、最も好ましくは１０個までの炭素原子を有することが
できる。

【００２９】 本発明の１つの実施形態において、「Ｒ_３」基は、置換または非置換アルキル
基であり得、これは、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル
、フェニル、ベンジル、トルエイル、ナフチル、アントラシル等を含むがこれに
限定さない。より具体的には、「Ｒ_３」基は、天然ＭｕｒＧ基質であるリピドＩ
に見られる５５−炭素炭化水素アンカーの擬似体を含む。かかる擬似体は、シト
ロネロール、他のポリプレノール誘導体、または芳香族基を含むがこれに限定さ
れない。さらに、「Ｒ_３」基は、合成レジンまたはビーズなどの固体支持体に結
合できる。

【００３０】 「Ａ」基は、任意の置換または非置換アミノ酸残基、または２個以上の置換ま
たは非置換アミノ酸残基を含む任意のペプチドを包含すると広く考える。「Ａ」
基は、１、２、または３個という少ないアミノ酸残基、または１０個以上という
多いアミノ酸残基、好ましくは１０個以下、より好ましくは８個以下、最も好ま
しくは５個以下（例えばペンタペプチド）を有することができる。他の化学部分
が、「Ａ」基と結合し得、好ましくは共有結合的に付着し得、これは、リンカー
基、標識基（例えば、放射標識基、蛍光基等）、親和性基（例えば、ビオチン、
アビジン、ストレプトアビジン等またはハプテン、例えば、ジニトロフェノール
、ジゴキセゲニン等）、疎水性基、親水性基等を含むがこれに限定されない。本
発明の１つの実施形態において、ビオチンが、「Ａ」基にコンジュゲートし、こ
こで、ビオチン部分は、直接またはリンカー部分を介して、共有結合的に（例え
ばアミノ酸残基のアミノ基に）付着（結合）している。

【００３１】 好ましい実施形態において、式（Ｉ）の物質の乳酸部分に付着しているアミノ
酸残基はＡｌａである。Ｄ−γ−連結グルタミン酸残基が、好ましくは、この最
初のアラニン残基の隣に付着する。リジン残基（Ｌ−Ｌｙｓ）は、好ましくは、
特にグラム陽性細菌において、このグルタミン酸残基の隣に付着する。グラム陰
性細菌では、この第三残基は、好ましくは、メソ−ジアミノピメレートまたは「
ｍ−ＤＡＰ」である。この位置の他の残基は、Ｌ−アラニン、Ｌ−ホモセリン、
Ｌ−ジアミノ酪酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−オルニチン、ＬＬ−ＤＡＰ、並びに
、上記で言及したメソ形を含むがこれに限定されない。さらに別の残基は、Ｌ−
Ｏｒｎ、ＬＬ−Ｄｐｍ、ｍ−ＨｙＤｐｍ、Ｌ−Ｄａｂ、Ｌ−ＨｙＬｙｓ、Ｎ^γ−
アセチル−Ｌ−Ｄａｂ、Ｌ−Ｈｓｒ、Ｌ−Ａｌａ、またはＬ−Ｇｌｕを含み得る
。ペンタペプチドの好ましいアミノ酸配列は、Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−γ−Ｇｌｕ−Ｌ
−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａであり、そのアミノ末端は、アミド結合を介
して、式（Ｉ）の物質の乳酸部分に付着している。さらに別の適切なアミノ酸配
列は、Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−γ−Ｇｌｕ−メソ−ＤＡＰ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａで
あり得る。潜在的利点のあるトリペプチド配列は、Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−γ−Ｇｌｕ
−Ｌ−Ｌｙｓであり、任意には、Ｌ−Ｌｙｓアミノ酸残基において、親和性「ハ
ンドル」、例えばビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、免疫グロブリン、
プロテインＡ等またはその断片、またはハプテン、例えばジニトロフェノール、
ジゴキセゲニン等で置換されている。他に可能なものは、ジペプチド配置であり
、Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｌｙｓを含むがこれに限定されず、ここでも任意にＤ−Ｌｙ
ｓアミノ酸残基において置換されている。

【００３２】 本発明の方法において、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性は、ＧｌｃＮＡ
ｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質またはその活性断片を含むことが想
像されるサンプルにおいて検出する。方法は、（ａ）ＧｌｃＮＡｃトランスフェ
ラーゼ活性を示すタンパク質またはその活性断片を含むことが想像されるサンプ
ルを提供し；（ｂ）サンプルを、有効量の標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ基質、およ
び上記式（Ｉ）の化学部分を含む物質であるが野生型ＭｕｒＧ酵素の天然基質で
あるリピドＩではない物質と、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタン
パク質またはその活性断片の存在下でグリコシド結合を介して該物質にカップリ
ングした標識ＧｌｃＮＡｃを含む標識カップリング生成物を提供するのに有効な
条件下で接触させ；（ｃ）該サンプルにおけるＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ
活性の指標である、該標識カップリング生成物の形成または存在を検出する段階
を含む。好ましくは、標識ＧｌｕＮＡｃ基質は、標識ＵＤＰ−ＧｌｕＮＡｃであ
る。

【００３３】 本発明の方法において、サンプルの少なくとも一部が、溶解細菌培養物の一部
、その上清の一部、その膜画分の一部、そのタンパク質画分の一部、精製酵素、
精製または合成脂質または同物の混合物を含み得る。

【００３４】 標識カップリング生成物の形成または存在の検出は、当業者には明らかな多く
の方法で実施できる。例えば、検出段階は、標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ基質から
の標識カップリング生成物の分離を含み得る。本開示のいずれかで議論したよう
に、標識種の分離は、疎水性捕獲、アフィニティークロマトグラフィー、または
他の固相分離技術を含むがこれに限定されない、様々なアプローチを使用して達
成できる。よって、標識カップリング生成物の定量は、利用した標識の性質に応
じて実施できる。

【００３５】 本発明の目的と一致して、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパ
ク質またはその活性断片を含むことが想像されるサンプルにおいて、ＧｌｃＮＡ
ｃトランスフェラーゼ活性を検出するためのアッセイを提供する。本発明のアッ
セイは、式：

【００３６】

【化１１】

【００３７】 ［式中、「Ｒ」は、２個以上の炭素原子を含むアシル基であり、「Ｒ_１」は、１
個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ｒ_２」は、水素
、または１個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ａ」
は、置換または非置換アミノ酸残基、または２個以上の置換または非置換アミノ
酸残基を含むペプチドであり、「Ｒ_３」は、５個以上の炭素原子を含む置換また
は非置換アルキル基である］ で示される化合物を含み、ここで、該物質は、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ
活性を示すタンパク質またはその活性断片の存在下でＧｌｃＮＡｃ基質とカップ
リング生成物を形成でき、ただし、該物質は野生型ＭｕｒＧ酵素の天然基質であ
るリピドＩではない。アッセイは、さらに、標識ＧｌｃＮＡｃ基質を含む。

【００３８】 潜在的抗菌活性を示す化合物についてのスクリーンも考える。かかるスクリー
ンは、（ｉ）ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質またはその
活性断片、（ｉｉ）上記式（Ｉ）の化合部分を含む物質、ただし、該物質は野生
型ＭｕｒＧ酵素の天然基質であるリピドＩではなく、ここで、該物質は、Ｇｌｃ
ＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質またはその活性断片の存在下で
ＧｌｃＮＡｃ基質とカップリング生成物を形成でき、および（ｉｉｉ）標識Ｇｌ
ｃＮＡｃ基質を含む。

【００３９】 従って、酵素ＭｕｒＧまたはその活性断片を含むスクリーンを、標識ＧｌｃＮ
Ａｃ基質の存在下、基質類似体、例えば、式（Ｉ）の物質と接触させる。酵素は
、勿論、標識ＧｌｃＮＡｃ（例えば、Ｃ−１４標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ）の、
基質類似体のムラミン酸部分のＣ４−ヒドロキシル基へのカップリングを触媒す
る。標識カップリング生成物の形成は、その後、図１に提示したように、時間を
かけて監視し、グラフを作成する。（カップリング生成物は、最初に、標識Ｇｌ
ｃＮＡｃ基質から、例えば、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、濾過（反応
を固相で実施する場合）等により、分離しなければならないであろう。）潜在的
阻害化合物（または化合物群）を、その後、上記した対照混合物などの混合物に
加え、標識カップリング生成物の生成の減少を、好ましくは、潜在的阻害化合物
の濃度の関数として監視する。

【００４０】 ５．２．基質類似体の調製 我々の最初の合成標的８（上記、および下記のスキーム２）は、５５炭素ウン
デカプレノール鎖が、シトロネロールの１０炭素鎖により置換されている点でリ
ピドＩとは異なる。長鎖脂質は扱いにくいため、より短い脂質鎖を選択し；アリ
ルピロホスフェートは不安定なため、飽和イソプレノール単位を含む脂質をさら
に選択する。ＭｕｒＧは、脂質連結基質を認識する膜結合酵素であるが、その化
学は、脂質アンカーからはるかに遠い、脂質連結基質のＣ４ヒドロキシルで起こ
る。それ故、脂質の変化は、基質認識を壊すことなく達成できることが望ましい
。

【００４１】

【化１２】

【００４２】 ８（下記のスキーム２参照）を製造するために、ムラミン酸誘導体１（シグマ
から入手可能）を、５段階でアノマージベンジルホスフェート５に変換し、保護
ペンタペプチド１３にカップリングさせる。Ｃｈｅｎ，Ｊ．；Ｄｏｒｍａｎ，Ｇ
．；Ｐｒｅｓｔｗｉｃｈ，Ｇ． Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９６、６１、３９
３。ＬｙｓおよびＧｌｕ上のシリル保護基は、穏やかな条件下で容易に脱保護で
きるため好ましい。従って、ペプチドのＣ末端は、示したようにメチルエステル
であるか、またはトリメチルシリルエチルエステルであり得る。

【００４３】 保護ペンタペプチドは、Ｄ−Ａｌａ−ＦＭＯＣサスリン（Ｓａｓｒｉｎ）レジ
ン（Ｂａｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手可能）上で、１１段階で、
全収率１５％で合成される（下記の方法４参照）。実験詳細は、下記の例の章に
提供する。水素化分解脱保護により、アノマーホスフェートが生成し、これをジ
フェニルシトロネロールピロホスフェートで処理すると７が生成する（スキーム
２参照）。ジフェニルシトロネロールピロホスフェート（１０、下記の方法１）
が、シトロネロールホスフェートをジフェニルクロロホスフェートで処理するこ
とにより、その場で生成する（下記の例の章参照；また、Ｗａｒｒｅｎ，Ｃ．Ｄ
．；Ｊｅａｎｌｏｚ，Ｒ．Ｗ． Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９７８、５０、
１２２参照）。グリコシルピロホスフェートを形成する他の方法については、（
ａ）Ｉｍｐｅｒｉａｌｉ，Ｂ．；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ，Ｊ．Ｗ． Ｔｅｔ．Ｌｅ
ｔｔ．１９９０、４５、６４８５；（ｂ）Ｗｉｔｔｍａｎｎ，Ｖ．；Ｗｏｎｇ，
Ｃ．−Ｈ． Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９７、６２、２１４４参照。ピロホス
フェート交換反応は、非保護糖ヒドロキシルの存在下で容易に起こる。最後に、
ペプチド上の側鎖保護基を、ＴＢＡＦで除去し、これはまた、Ｃ末端メチルエス
テルも加水分解し、所望の生成物８が得られる。８は、酸および塩基の両方に感
受性であることを注記する。合成は、酸および塩基への曝露を最小限としつつ、
一方、全３個の基礎単位、ペプチド、炭水化物、および脂質の独立した修飾が可
能となるような収束性アプローチを提供する。

【００４４】 従って、上記およびさらに下記でも説明する同一の一般的スキームを使用して
（ここで、ＴＭＳＥはトリメチルシリルエチルであり、ＴＥＯＣはトリメチルシ
リルエチルオキシカルボニルであり、Ｎ−リンカーは６−アミノヘキサン酸であ
る）、様々な化合物を調製し、基質結合のための要件を定めることができる。

【００４５】

【化１３】

【００４６】 ５．３． ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼアッセイ ＭｕｒＧ活性アッセイに基質８を使用した最初の試みにより、ペーパークロマ
トグラフィーまたは薄層クロマトグラフィーのような比較的粗製の分離法を使用
して、放射標識生成物を、過剰の標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃから分離するには、
いくらか困難があることが判明する。従って、ある適用において、過剰の標識Ｕ
ＤＰ−ＧｌｃＮＡｃの除去を促進するために、脂質鎖の長さを調整することが好
ましくあり得る。例えば、より長い脂質鎖（例えば約Ｃ_１５−Ｃ_４０）は、非特
異的脂質−脂質相互作用を利用する疎水性レジンまたは適切なフィルターを使用
した分離法を促進し得る。その上、固相レジンにつなぐことは、本発明の商業上
の実施形態に、より好ましくあり得る。さらに別の代替物は、親和性基、例えば
、ビオチン、ＩｇＧ結合ドメイン、またはハプテン、例えばジニトロフェノール
、ジゴキセゲニン等を含み、これは、それぞれ、アビジン／ストレプトアビジン
を含む親和性レジンを使用するアフィニティークロマトグラフィーまたはプロテ
インＡによる分離を促進するために、基質類似体に付着している。

【００４７】 証拠により、ＭｕｒＧは、ペプチド鎖の第三アミノ酸残基の実体に比較的感受
性が低いことが示唆される。大腸菌株（例えばＢＬ２１）は、Ｌ−リジンよりも
むしろメソ−ジアミノピメリン酸（ｍ−ＤＡＰ）を有するムラミルペンタペプチ
ド基質を作る。大腸菌ＭｕｒＧは、これらのリジン類似体を受容する。蛍光標識
類似体もまた、いくつかの株により受容される：Ｗｅｐｐｎｅｒ，Ｗ．Ａ．；Ｎ
ｅｕｈａｕｓ，Ｆ．Ｃ． Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９７８、２５３、４７２
；Ｗｈｉｔｅ，Ｄ．原核生物の生理学および生化学、オックスフォード大学出版
：ニューヨーク、１９９５、ｐ．２１２−２２３。従って、第三アミノ酸残基は
、置換基を、アミノ酸／ペプチド部分に付着させるのに簡便な位置となる。本発
明の好ましい実施形態において、アフィニティーラベル置換Ｌ−Ｌｙｓを、ペプ
チド鎖の第三アミノ酸残基として使用する。より好ましくは、ビオチン部分は、
６−アミノヘキサン酸などの二官能性脂肪族試薬を含むつなぎを介して、リジン
の遊離アミノ基に連結するが、より短いまたはより長いつなぎも使用できる。目
的の分子に付着する様々な長さのつなぎ、例えば、ビオチン、発色団、発蛍光団
等は、市販で入手できる。

【００４８】 このように、ビオチンは、６−アミノヘキサン酸リンカーのカルボン酸基を介
して、リジン残基のεアミノ基に付着し（スキーム２）（６−｛（ビオチノイル
）アミノ｝ヘキサン酸スクシンイミドエステルは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏ
ｂｅｓ，Ｉｎｃ．から購入できる）、放射標識生成物は、アビジン誘導体化レジ
ン（テトラリンク（Ｔｅｔｒａｌｉｎｋ）（登録商標）テトラマーアビジンレジ
ン、プロメガ）を使用して、反応混合物中の他の放射活性成分から容易に分離で
きる。ＭｕｒＧの、ビオチン標識基質９を認識する能力は、様々な粗膜調製物を
９および^１４Ｃ−ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃと共にインキュベートした後、レジンに
結合する放射活性を計測することにより評価する。（例えば、Ｂａｋｅｒ，Ｃ．
Ａ．；Ｐｏｏｒｍａｎ，Ｒ．Ａ．；Ｋｅｚｄｙ，Ｆ．Ｊ．；Ｓｔａｐｌｅｓ，Ｄ
．Ｊ．；Ｓｍｉｔｈ，Ｃ．Ｗ．；Ｅｌｈａｍｍｅｒ，Ａ．Ｐ． Ａｎａｌ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．１９９６、２３９、２０参照。）反応は、ＭｕｒＧを過剰発現する
細菌培養物で迅速かつ効率的であるが、内因性レベルのＭｕｒＧのみを発現する
培養物ではほとんど検出できない（図１、曲線ＡとＥを比較）。

【００４９】 ｍｕｒＧ遺伝子は、Ｐｒｏｆ．Ｗ．Ｄ．Ｄｏｎａｃｈｉｅ（エジンバラ大学）
から入手したｐＵＧ１８プラスミドから得ることができる。大腸菌ｍｕｒＧ遺伝
子配列は、Ｍｅｎｇｉｎ−Ｌｅｃｒｅｕｌｘ，Ｄ．等、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉ
ｄｓ Ｒｅｓ．１９９０、１８、２８１０およびＩｋｅｄａ，Ｍ．等、同書、１
９９０、１８、４０１４に記載されている。鋳型としてｐＵＧ１８プラスミドを
使用したポリメラーゼ連鎖反応による遺伝子増幅を実施する。ノバゲンから入手
できる、ｐＴ７ＢｌｕｅＴ ＰＣＲクローニングベクターをこの目的に使用する
。ｍｕｒＧを含むＤＮＡ断片を、制限酵素ＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩによりｐＴ
７ＢｌｕｅＴプラスミドから切出し、断片をゲル電気泳動で精製する。精製断片
を、その後、これもまたノバゲンから入手できる、ｐＥＴ１５ｂ発現ベクターの
ＮｄｅＩ／ＢａｍＨＩクローニング部位に挿入する。

【００５０】 ｍｕｒＧ遺伝子を、ｐＥＴ１５ｂからｐＥＴ３ａプラスミド（ノバゲン）にサ
ブクローニングする。ＭｕｒＧは、ＩＰＴＧ誘導性ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓ
Ｓ株（ノバゲン）で過剰発現させる。Ｓｔｕｄｉｅｒ，Ｆ．Ｗ．；Ｒｏｓｅｎｂ
ｅｒｇ，Ａ．Ｈ．；Ｄｕｎｎ，Ｊ．Ｊ．；Ｄｕｂｅｎｄｏｒｆｆ，Ｊ．Ｗ． Ｍ
ｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９９０、１８５、６０参照。過剰発現細胞溶解液を
、基質に添加する前に熱処理することにより、反応が進行するのを防ぐ（図１参
照；ＡとＤを比較）。従って、反応は、活性ＭｕｒＧの存在に依存する。さらに
、初期反応速度およびカップリング生成物への変換の両方が、９の濃度と共に増
加する（図１参照；ＡとＢとＣを比較）。

【００５１】 それ故、合成基質類似体は、異なった、かつ劇的に短い脂質鎖を有するにもか
かわらず、ＭｕｒＧ活性についての直接的なアッセイで効率的に機能する。この
合成基質は、アミノ酸切り詰め、付加、欠失、置換または他の変異を生じるｍｕ
ｒＧ遺伝子の構造的修飾後、過剰発現細胞溶解液における酵素活性を評価するた
めに使用できる。合成基質類似体はまた、精製中の酵素活性のアッセイに、並び
に、全または部分精製酵素に関する詳細な機序研究に使用できる。従って、Ｍｕ
ｒＧの高分解能構造分析が、現在可能である。さらに、他の合成基質の、９と、 ^１４ Ｃ−ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃについて競合する能力を評価することにより、Ｍ
ｕｒＧ阻害の直接スクリーニングに使用する類似の受容体を同定することが可能
である。

【００５２】 本発明のさらなる説明として、以下の例を提供する。

【００５３】 ６．例 以下の方法を提供し、特に上記のスキーム２および下記の方法１〜４を参照す
る。

【００５４】 ６．１． 化合物２の調製 化合物１（４８２ｍｇ、１．０２２ｍｍｏｌ、シグマ）および４−ジメチルア
ミノピリジン（１０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を前以て混合し、トルエンとの
共沸蒸留により３回乾燥させ、その後、８ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）
に溶かす。トリクロロエタノール（０．２３ｍＬ、２．４０５ｍｍｏｌ）、次い
で、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２４８ｍｇ、１．２０３ｍｍｏ
ｌ）を反応容器に加える。室温で４時間撹拌した後、反応溶液を、綿栓を通して
濾過し、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）で濯ぐ。濾液を濃縮し、フラッシュクロマト
グラフィー（１５％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）により精製すると、４５３ｍｇ
（８０％）の白色粉末が得られる。Ｒ_ｆ０．３９（１５％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ_２Ｃ
ｌ_２）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、２７０ＭＨｚ）δ７．４３−７．２５（ｍ
、１０Ｈ）、７．６７（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．５９（ｓ、１Ｈ）、
５．３４（ｄ、Ｊ＝３．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．９８（ｄ、Ｊ＝１１．９Ｈｚ、１
Ｈ）、４．７１−３．７０（ｍ、１０Ｈ）、２．０４（ｓ、３Ｈ）、１．５０（
ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）；質量分析［Ｍ＋Ｈ］^＋、６０３．５。

【００５５】 ６．２ 化合物３の調製 化合物２（３６０ｍｇ、０．５９９ｍｍｏｌ）を、３０ｍＬのＥｔＯＡｃ（酢
酸エチル）に溶かし、９００ｍｇの２０％Ｐｄ−Ｃを加える。反応容器を水素で
満たし、室温で撹拌する。３０分後、触媒を濾過して除去し、メタノールで洗浄
する。濾液を濃縮すると、完全に水素化した生成物が得られ、これはさらに精製
することなく次の反応に使用する。

【００５６】 トリオールの６ｍＬ ＤＭＦ溶液に、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（
０．９ｍＬ、６ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸（１１．４ｍｇ、０．
０６ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で１０時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ _３ で中和し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×２０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥さ
せ、濾過し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（９０％ＥｔＯＡｃ／石油
エーテル）により精製すると、２４８ｍｇ（８１％）のα、βアノマーの混合物
が得られる。

【００５７】 ６．３． 化合物４の調製 化合物３（２０２ｍｇ、０．３９５ｍｍｏｌ）および１Ｈ−テトラゾールを前
以て混合し、トルエンとの共沸蒸留により乾燥させ、その後、１０ｍＬのＣＨ_２ Ｃｌ_２に溶かし、−３０℃に冷却する。この溶液に、ジベンジルＮ，Ｎ−ジイソ
プロピルホスファミド（０．２６６ｍＬ、０．７９１ｍｍｏｌ）を加える。混合
物を室温で１時間撹拌し、−４０℃に冷却し、ｍ−ＣＰＢＡ（５６０ｍｇ、２ｍ
ｍｏｌ）を加え、反応物を、３０分間０℃で、その後、３０分間室温で撹拌する
。混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、１０％Ｎａ_２ＳＯ_３水、飽和ＮａＨＣＯ_３、
および水で洗浄し；その後、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、フラ
ッシュクロマトグラフィー（６５％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製する
と、２００ｍｇ（７０％）の白色固体が得られる。Ｒ_ｆ０．２４（７０％ＥｔＯ
Ａｃ／石油エーテル）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、２７０ＭＨｚ）δ７．４４
−７．３３（ｍ、１５Ｈ）、７．２０（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．１０
（ｍ、１Ｈ）、５．５６（ｓ、１Ｈ）、５．０５（ｍ、６Ｈ）、４．６１（ｑ、
Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．１０−３．６１（ｍ、６Ｈ）、１．８６（ｓ、３
Ｈ）、１．４８（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）。

【００５８】 ６．４． 化合物５の調製 亜鉛ダストを、化合物４（５８ｍｇ、０．０７５２ｍｍｏｌ）の５ｍＬ９０％
ＡｃＯＨ／Ｈ_２Ｏ溶液に加える。混合物を室温で激しく撹拌する。１時間後、触
媒を濾過して除去し、濾液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（１０％Ｍ
ｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３、０．１％ＡｃＯＨ）により精製すると、４４ｍｇ（９１％
）の生成物が得られる。Ｒ_ｆ０．１９（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３、０．１％Ａ
ｃＯＨ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ７．４４−７．２５（
ｍ、１５Ｈ）、６．１１（ｍ、１Ｈ）、５．５５（ｓ、１Ｈ）、５．０２（ｍ、
４Ｈ）、４．３３（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．９６（ｍ、１Ｈ）、３．
７７（ｍ、１Ｈ）、３．７３−３．６６（ｍ、４Ｈ）、１．９４（ｓ、３Ｈ）、
１．３２（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）。

【００５９】 ６．５． 化合物６の調製 化合物５（４５ｍｇ、０．０７０４ｍｍｏｌ）およびＮＨ_２−Ｌ−Ａｌａ−γ
−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｏ−ＴＭＳＥ）−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｎ−ＴＥＯＣ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ
−Ａｌａ−ＯＣＨ_３（３５ｍｇ、０．０４６９ｍｍｏｌ）を前以て混合し、トル
エンとの共沸蒸留により３回乾燥させ、その後、０．９ｍＬのＤＭＦに溶かし、
その後、０℃に冷却する。ジイソプロピルエチルアミン（４１μｌ、０．２３５
ｍｍｏｌ）、次いで、ＨＯＢｔ（１２．７ｍｇ、０．０９３８ｍｍｏｌ）および
ピリジンＢＯＰ（４９ｍｇ、０．０９３８ｍｍｏｌ）を反応容器に加える。３０
分間室温で撹拌した後、溶液を１０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、０．０１ＮのＨ
Ｃｌ水、および水で洗浄する。その後、溶液を、濃縮し、フラッシュクロマトグ
ラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）により精製すると、５９ｍｇ（９２％）
の化合物６が得られる。Ｒ_ｆ０．１６（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ Ｎ
ＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ７．５０−７．３０（ｍ、１５Ｈ）、５．
８７（ｍ、１Ｈ）、５．６３（ｓ、１Ｈ）、５．１３（ｍ、４Ｈ）、４．４１（
ｍ、１Ｈ）、４．４０（ｍ、１Ｈ）、４．３６（ｍ、１Ｈ）、４．３５（ｍ、１
Ｈ）、４．３０（ｍ、１Ｈ）、４．２１（ｍ、１Ｈ）、４．１９（ｍ、２Ｈ）、
４．１４（ｍ、２Ｈ）、４．１３（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｍ、１Ｈ）、３．８
４（ｍ、１Ｈ）、３．７９（ｍ、２Ｈ）、３．７６（ｍ、１Ｈ）、３．６６（ｓ
、３Ｈ）、３．０９（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．２８（ｔ、Ｊ＝８．８
Ｈｚ、２Ｈ）、２．１８（ｍ、１Ｈ）、１．９１（ｍ、１Ｈ）、１．８６（ｓ、
３Ｈ）、１．７７（ｍ、１Ｈ）、１．６７（ｍ、１Ｈ）、１．５１（ｍ、２Ｈ）
、１．４５−１．３５（ｍ、１８Ｈ）、１．０１−０．９７（ｍ、４Ｈ）、０．
０５−０．０２（ｓ、ｓ、１８Ｈ）；質量分析［Ｍ＋Ｈ］^＋１３９４。

【００６０】 ６．６． 化合物７の調製 化合物６（１５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を１ｍＬのＭｅＯＨに溶かし、２
０ｍｇの２０％Ｐｄ−Ｃを加える。反応溶液を水素で満たし、室温で撹拌する。
一滴のジイソプロピルエチルアミンを３０分後に加え、その後、溶液を５ｍＬの
ＭｅＯＨに希釈し、２０分間撹拌する。混合物を濾過し、濃縮すると、水素化脱
ベンジル化生成物（７ａ）が得られ、これはさらに精製することなく次の反応に
使用する。Ｒ_ｆ０．２８（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：２：０．５）。

【００６１】 シトロネロールホスフェート（ジイソプロピルエチルアンモニウム、１８ｍｇ
、０．０５３ｍｍｏｌ）を、トルエンとの共沸蒸留により３回乾燥させ、その後
、１ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２に溶かす。ジイソプロピルエチルアミン（１８．５μＬ
、０．１０６ｍｍｏｌ）を加える。溶液を−２０℃に冷却し、ジフェニルホスホ
ロクロリデート（１１．５μＬ、０．０８０ｍｍｏｌ）を加える。反応容器を、
室温まで加温し、１時間室温で撹拌する。メタノール（０．１ｍＬ）を添加後、
反応物をさらに１時間室温で撹拌し、その後、溶媒を蒸発させ、残渣をトルエン
との共沸蒸留により２回乾燥させ、０．２ｍＬのＤＭＦに溶かす。

【００６２】 上記からの化合物７ａを、トルエンとの共沸蒸留により３回乾燥させ、０．１
ｍＬのＤＭＦに溶かす。ジイソプロピルエチルアミン（３．９μＬ、０．０２２
ｍｍｏｌ）を加える。０．１ｍＬのシトロネロールジフェニルピロホスフェート
溶液を、化合物７ａを含む溶液に移す。反応混合物を４８時間室温で撹拌し、そ
の後、Ｃ１８逆相カラム（８ｍｍ×８０ｍｍ、粒子サイズ４０μｍ、孔サイズ６
０Å、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒから）に直接のせ、０．１％トリエチルアミンを含む
ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３
５％の各１０ｍＬ）で溶出する。純粋な化合物を含む画分を合わせ、濃縮すると
、４．６ｍｇ（２８％）の白色粉末が得られる。Ｒ_ｆ０．３６（ＣＨＣｌ_３：Ｍ
ｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：２：０．５）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ、５００ＭＨｚ）
δ８．３６（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．２１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１
Ｈ）、８．１９（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．１０（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ
、１Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．９５（ｔ、Ｊ＝５．０
Ｈｚ、１Ｈ）、５．２６（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．０７（ｔ、Ｊ＝７
．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．３０（ｍ、１Ｈ）、４．２７（ｍ、１Ｈ）、４．２３（
ｍ、１Ｈ）、４．１３（ｍ、１Ｈ）、４．１２（ｍ、２Ｈ）、３．８７（ｍ、１
Ｈ）、３．７７（ｍ、２Ｈ）、３．６２（ｍ、１Ｈ）、３．６０（ｓ、３Ｈ）、
３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．３３（ｍ、１Ｈ）、２．９１（ｍ、２Ｈ）、２．１
７（ｍ、２Ｈ）、１．９４（ｍ、２Ｈ）、１．９１（ｍ、１Ｈ）、１．８０（ｓ
、３Ｈ）、１．６２（ｓ、３Ｈ）、１．５８（ｓ、３Ｈ）、１．５１（ｍ、３Ｈ
）、１．５０（ｍ、１Ｈ）、１．４９（ｍ、１Ｈ）、１．３５（ｍ、２Ｈ）、１
．２９（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．２７（ｍ、２Ｈ）、１．２５（ｄ、
Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、１．２４（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．２３（
ｍ、２Ｈ）、１．１９（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．１１（ｍ、１Ｈ）、
０．８４（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．０２−０．０１（ｓ、ｓ、１８Ｈ
）；質量分析［Ｍ＋Ｈ］^＋１３２１。

【００６３】 ６．７． 化合物８の調製 化合物７（５ｍｇ、０．００３３ｍｍｏｌ）の５０μｌ ＤＭＦ溶液に、テト
ラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＨＦ中１Ｍ、０．３ｍＬ）を加える。反応
混合物を２４時間室温で撹拌し、その後、Ｃ１８逆相カラム（８ｍｍ×８０ｍｍ
、粒子サイズ４０μｍ、孔サイズ６０Å、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒから）に直接のせ
、ＣＨ_３ＣＮ／０．１％ＮＨ_４ＨＣＯ_３水溶液（０、５％、１０％、１５％、２
０％、２５％、３０％の各１０ｍＬ）で溶出する。純粋な化合物を含む画分を合
わせ、濃縮し、凍結乾燥して塩を除去する。白色粉末（２ｍｇ、５７％）が得ら
れる。Ｒ_ｆ０．１８（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：３：１）；^１Ｈ Ｎ
ＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ５．５８（ｍ、１Ｈ）、５．１１（ｔ、Ｊ
＝６．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．５０−３．５６（ｍ、１２Ｈ）、２．９４（ｍ、２
Ｈ）、２．３４（ｍ、２Ｈ）、２．１０（ｓ、３Ｈ）、２．００（ｍ、１Ｈ）、
１．９８（ｍ、２Ｈ）、１．９２（ｍ、１Ｈ）、１．７４（ｍ、２Ｈ）、１．６
７（ｓ、３Ｈ）、１．６２（ｍ、１Ｈ）、１．６０（ｓ、３Ｈ）、１．５０−１
．３９（ｍ、１２Ｈ）、１．２３（ｍ、２Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ
、３Ｈ）；質量分析［Ｍ＋Ｈ］^＋１０６２。

【００６４】 ６．８． 化合物９の調製 化合物８（２ｍｇ、０．００１９ｍｍｏｌ）の０．１ｍＬ Ｈ_２Ｏ／ジオキサ
ン（１：１）溶液に、ＮａＨＣＯ_３（３．２ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）、次い
で、６−（（ビオチノイル）アミノ）ヘキサン酸スクシンイミドエステル（２ｍ
ｇ、０．００４４ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を２時間室温で撹拌し、その
後、Ｃ１８逆相カラム（８ｍｍ×８０ｍｍ、粒子サイズ４０μｍ、孔サイズ６０
Å、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒから）に直接のせ、ＣＨ_３ＣＮ／０．１％ＮＨ_４ＨＣＯ _３ 水溶液（０、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％の各１０ｍＬ）
で溶出する。純粋な化合物を含む画分を合わせ、濃縮し、凍結乾燥して塩を除去
する。白色粉末（２ｍｇ、７６％）が得られる。Ｒ_ｆ０．４０（ＣＨＣｌ_３：Ｍ
ｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：３：１）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ
５．５２（ｄ、Ｊ＝４．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．１２（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ
）、４．５０（ｍ、１Ｈ）、４．３９−４．１９（ｍ、８Ｈ）、４．００−３．
７２（ｍ、４Ｈ）、３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．２２（ｍ、１Ｈ）、３．１８（
ｍ、２Ｈ）、２．９５（ｄｄ、Ｊ＝１２．５、５．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．７１（
ｄ、Ｊ＝１２．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．２７（ｍ、２Ｈ）、２．０２（ｓ、３Ｈ）
、２．０１（ｍ、２Ｈ）、１．８５（ｍ、２Ｈ）、１．６７（ｍ、２Ｈ）、１．
６７（ｓ、３Ｈ）、１．６２（ｍ、１Ｈ）、１．６１（ｓ、３Ｈ）、１．５３（
ｍ、２Ｈ）、１．４５−１．３７（ｍ、１２Ｈ）、１．３８（ｍ、１Ｈ）、１．
１７（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）；質量分析［Ｍ＋Ｈ
］^＋１４０２。

【００６５】 ６．９． 化合物１０の調製（下記の方法１） （Ｒ）−（＋）−β−シトロネロール（３３０ｍｇ、２．１１１ｍｍｏｌ）を
、トルエンとの共沸蒸留により３回乾燥させ、その後、２１ｍＬの乾燥ヘキサン
に溶かす。別の乾燥フラスコで、オキシ塩化リン（０．９８ｍＬ、１０．５６ｍ
ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．４７ｍＬ、１０．５６ｍｍｏｌ）を１０
ｍＬ乾燥ヘキサンに溶かし、室温で撹拌する。シトロネロール溶液を、その後、
ゆっくりと（１時間かけて）オキシ塩化リン溶液に加え、その後、３０分間撹拌
し続ける。７０ｍＬのアセトン／水／トリエチルアミン（８８：１０：２）の混
合物を反応物に加え、１８時間室温で撹拌し、シトロネロールホスフェートジク
ロリドを、シトロネロールホスフェートに変換する。溶媒を真空蒸発させて、水
性残渣を得、これをＣ１８逆相カラム（５０ｍｍ×１２ｃｍ、粒子サイズ４０μ
ｍ、孔サイズ６０Å、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒから）にのせ、ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ（
０、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％の各１００ｍＬ）で溶出
する。純粋な化合物を含む画分を合わせ、濃縮すると、５６６ｍｇ（６２％）の
油性残渣が得られる。Ｒ_ｆ０．４２（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：２：
０．５）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ５．０９（ｔ、Ｊ＝５
．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．９０（ｍ、２Ｈ）、１．９９（ｍ、２Ｈ）、１．６７（
ｍ、１Ｈ）、１．６５（ｓ、３Ｈ）、１．６２（ｍ、１Ｈ）、１．５９（ｓ、３
Ｈ）、１．４１（ｍ、１Ｈ）、１．３４（ｍ、１Ｈ）、１．１６（ｍ、１Ｈ）、
０．９１（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００
ＭＨｚ）δ１３２．０８、１２５．９６、６５．１１、３９．００、３８．９４
、３０．４５、２６．６１、２６．１０、１９．９３、１７．９２。

【００６６】

【化１４】

【００６７】 ６．１０． 化合物１１の調製（方法２） ＯＨ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｎ−ＢＯＣ）−ＮＨＦｍｏｃ（６０７ｍｇ、１．２９５ｍ
ｍｏｌ）の１０ｍＬ ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、１０ｍＬトリフルオロ酢酸を加える
。混合物を２０分間室温で撹拌し、その後、濃縮し、凍結乾燥する。残渣を１０
ｍＬのＤＭＦに溶かし、その後、ジイソプロプルエチルアミン（１．１３ｍＬ、
６．４７５ｍｍｏｌ）を加える。２−（トリメチルシリル）エチルｐ−ニトロフ
ェニルカーボネート（４４０ｍｇ、１．５５４ｍｍｏｌ）を３ｍＬのＤＭＦに溶
かし、Ｌ−Ｌｙｓ溶液に移す。混合物を２時間室温で撹拌する。ＤＭＦ溶媒を真
空蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ、その後、０．
１％ＡｃＯＨを含む１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）により精製すると、６３５ｍ
ｇ（９５％）の白色固体が得られる。Ｒ_ｆ０．２５（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ _３ ）。

【００６８】 ６．１１． 化合物１２の調製（方法３） Ｄ−Ｇｌｕ（ベンジル）（１．０４６ｇ、４．４１ｍｍｏｌ）の４０ｍＬ水／
ジオキサン（１：１）溶液に、ＮａＨＣＯ_３（１．１ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）の
１０ｍＬ水溶液を加える。混合物を２０分間撹拌する。その後、９−フルオエニ
ルメチルクロロホルメート（１．３７ｇ、５．２９ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのジ
オキサンに溶かし、ゆっくりと（１時間かけて）Ｄ−Ｇｌｕ溶液に加え、その後
、１０分間撹拌し続ける。混合物を直接シリカゲルカラムにのせ、０．１％Ａｃ
ＯＨを含む５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３により溶出する。生成物を含む画分を合わ
せ、濃縮し、再度フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ、その後、０．１
％ＡｃＯＨを含む５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）により精製すると、１．８８ｇ（
９３％）の白色粉末が得られる。Ｒ_ｆ０．２７（０．１％ＡｃＯＨを含む５％Ｍ
ｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）。

【００６９】 Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｇｌｕ（ベンジル）−ＯＨ（３５０ｍｇ、０．７６２ｍｍｏｌ
）および４−ジメチルアミノピリジン（９．３ｍｇ、０．０７６２ｍｍｏｌ）を
前以て混合し、トルエンとの共沸蒸留により３回乾燥させ、次いで、８ｍＬのＥ
ｔＯＡｃに溶かす。トリメチルシリルエタノール（０．３２８ｍＬ、２．２８７
ｍｍｏｌ）、次いで、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（３１４ｍｇ、
１．５２５ｍｍｏｌ）を反応容器に加える。混合物を、２時間室温で撹拌した後
、反応溶液を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄する。濾液を濃縮し、フラッシュクロマ
トグラフィー（１５％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製すると、３５０ｍ
ｇ（８２％）の白色粉末が得られる。Ｒ_ｆ０．３３（１５％ＥｔＯＡｃ／石油エ
ーテル）。

【００７０】 Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｇｌｕ（ベンジル）２−（トリメチルシリル）エチルエステル
（２７０ｍｇ、０．４８３ｍｍｏｌ）を、１１ｍＬのメタノールに溶かし、５０
０ｍｇの２０％Ｐｄ−Ｃを加える。反応容器を水素で満たし、室温で撹拌する。
１０分後、混合物を濾過し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（１０％Ｍ
ｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）により精製すると、２０３ｍｇ（９０％）の白色粉末が得
られる。Ｒ_ｆ０．４３（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）。

【００７１】 ６．１２． 化合物１３の調製（方法４） サスリンレジン−ＯＯＣ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨＦｍｏｃ（８００ｍｇ、０．５６
ｍｍｏｌ）を、反応容器に入れ、以下の溶媒（各２０ｍＬ）で連続的に洗浄する
：ＣＨ_２Ｃｌ_２（２×３分間）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ、２×３分間）
、２０％ピペリジン／ＮＭＰ（３０分間）、ＮＭＰ（２×３分間）、５０％ジオ
キサン／水（２×５分間）、ＮＭＰ（３×５分間）、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×３分間
）、ＮＭＰ（１×３分間）。ＯＨ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨＦｍｏｃ（７０１ｍｇ、２
．２４ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．５９ｍＬ、３．３６ｍｍ
ｏｌ）、ＨＯＢｔ／ＨＢＴＵ（ＤＭＦ中０．４５Ｍ、２．５ｍＬ）、および１０
ｍＬのＮＭＰを容器に加え、徹底的に混合する。反応容器を２時間室温で振り、
その後、以下の溶媒（各２０ｍＬ）で連続的に洗浄する：ＮＭＰ（５×８分間）
、ｉ−ＰｒＯＨ（５×８分間）、ＣＨ_２Ｃｌ_２（４×３分間）およびＮＭＰ（２
×３分間）。

【００７２】 最後のアミノ酸Ｌ−Ａｌａ−ＦｍｏｃではＦｍｏｃ基を切断しない以外は、同
じ方法を、他の３個のアミノ酸にも使用する。

【００７３】 全てのアミノ酸をカップリングさせた後、ペンタペプチドを、僅かに撹拌させ
ながら１％ＴＦＡ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（５×２分間、各１５ｍＬ）でイッシング（ｉ
ｓｈｉｎｇ）することによりレジンから取り外した。取り外した溶液を、カニュ
ーレを介して、２ｍＬのピリジンおよび２０ｍＬのメタノールを含む容器に移す
。濾液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（０．１％ＡｃＯＨを含む５％
ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）により３回精製すると、３００ｍｇ（５６％）の生成物
が得られる。Ｒ_ｆ０．３４（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）。

【００７４】 ＫＨＣＯ_３（２８．４ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）を、微細粉末に粉砕し、Ｆ
ｍｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−γ−Ｇｌｕ（Ｏ−ＴＭＳＥ）−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｎ−ＴＥ
ＯＣ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ（１３５．４ｍｇ、０．１４２ｍｍｏｌ
）と混合する。混合物を２ｍＬのＤＭＦに溶かし、ＣＨ_３Ｉ（０．４４ｍＬ、７
．１ｍｍｏｌ）を加える。混合物を２時間室温で撹拌し、フラッシュクロマトグ
ラフィー（９０％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製すると、４７ｍｇ（３
４％）の白色粉末が得られる。Ｒ_ｆ０．４０（１００％ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ Ｎ
ＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６、５００ＭＨｚ）δ８．２４（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ
）、８．１８（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．１７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、
１Ｈ）、８．０１（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．８９（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈ
ｚ、２Ｈ）、７．７２（ｄｄ、Ｊ＝７．４、７．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．４７（ｄ
、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４１（ｄｄ、Ｊ＝７．４、７．４Ｈｚ、２Ｈ）
、７．３２（ｄｄ、Ｊ＝７．４、７．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．９４（ｔ、Ｊ＝５．
２Ｈｚ、１Ｈ）、４．２９−４．１２（ｍ、８Ｈ）、４．１１（ｔ、Ｊ＝８．８
Ｈｚ、２Ｈ）、４．００（ｔ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．５９（ｓ、３Ｈ）
、２．９１（ｍ、２Ｈ）、２．１７（ｍ、２Ｈ）、１．９２（ｍ、１Ｈ）、１．
７９（ｍ、１Ｈ）、１．５６（ｍ、１Ｈ）、１．４８（ｍ、１Ｈ）、１．３５（
ｍ、２Ｈ）、１．２８（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ）、１．２３（ｍ、５Ｈ）、
１．１９（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）、０．９３（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ
）、０．８９（ｔ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、２Ｈ）、０．０２−０．０１（ｓ、ｓ、１
８Ｈ）；質量分析［Ｍ＋Ｈ］^＋９９２。

【００７５】 Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−γ−Ｇｌｕ（Ｏ−ＴＭＳＥ）−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｎ−
ＴＥＯＣ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ−ＯＣＨ_３（１００ｍｇ、０．１０４ｍｍ
ｏｌ）を、２ｍＬの２０％ピペリジン／ＤＭＦに溶かし、３０分間室温で撹拌す
る。溶媒を真空蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ、
次いで、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）により精製すると、６０ｍｇ（７８％）
の所望の生成物が得られる。Ｒ_ｆ０．２３（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）。

【００７６】 ６．１３． ＭｕｒＧ活性アッセイ法 ６．１３．１． タンパク質調製 野生型ｍｕｒＧ遺伝子をｐＥＴ３ａプラスミドにクローン化し、高厳密性発現
宿主ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ（ノバゲン）に形質転換する。溶原化細胞を
、３７℃で、２０μｇ／ｍＬアンピシリンおよび３４μｇ／ｍＬクロラムフェニ
コールを補充した２×ＹＴ培地中で、Ｏ．Ｄ．_{６００ｎｍ}＝０．７まで増殖させ
；ｍｕｒＧタンパク質の過剰発現を、１ｍＭのＩＰＴＧで１．２５時間誘導する
ことにより達成する。ＳＤＳ／ＰＡＧＥ分析により、〜３８，０００分子量に移
動する単一の新しいバンドの生成が示される。誘導細胞培養物の数百個のアリコ
ートを、１．０ｍＬのサンプルを５０００ｒｐｍで１０分間４℃で遠心分離する
ことにより調製する。上清を除去し、ペレットを−２０℃で凍結させる。非形質
転換ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ培養物の凍結ペレットストックもまた陰性対
照として調製する。全ペレットに関するＢＳＡ基準と共に沈降ロウリーアッセイ
（シグマ）を使用したタンパク質定量により、ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳお
よび過剰発現細胞培養物における、全タンパク質濃度はそれぞれ１１および１７
μｇ／ペレットと示される。反応直前に、ペレットを氷上で解凍し、１００μＬ
の１×Ｒｘｎ緩衝液に再懸濁する。

【００７７】 ６．１３．２． 反応条件 オートクレーブをかけた無菌の脱イオンＨ_２Ｏ中のビオチニル化脂質基質を、
Ｒｘｎ緩衝液（１×：１００ｍＭトリス−Ｃｌ ｐＨ７．６、１ｍＭ ＭｇＣｌ _２ ）を含む０．５ｍＬのオートクレーブをかけたエッペンドルフチューブ中にア
リコート化する。エタノールを、非加熱Ｓｐｅｅｄ ＶＡＣを使用して、^１４Ｃ
−ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ（ＮＥＮデュポン）のエタノール：水の溶液から除去し
、その後、基質混合物（１．１×１０^５ＤＰＭ；９．４μＭのｒｘｎ濃度）に加
える。最後に、０．５〜１．０μｇのタンパク質を含む５μＬの氷で冷やした粗
細胞溶解液を加えて、全容量を２０μＬとする。全反応は２４℃で実施する。反
応は、１０μＬの１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳの添加によりクエンチする。

【００７８】 ６．１３．３ トランスフェラーゼ活性決定 １モル過剰のビオチン結合テトラリンクテトラメリックアビジンレジン（プロ
メガ）および脱イオンＨ_２Ｏを、各クエンチした反応チューブに加え、最終容量
を３５０μＬとする。懸濁液を、室温で１０分間頻繁にボルテックスをかけなが
らインキュベートし、３０μｍフリットを有する空の１．５ｍＬマイクロカラム
チューブ（バイオラッド）に移す。レジンを、脱イオンＨ_２Ｏを使用して洗浄（
５×０．５ｍＬ）する。洗浄したレジンを、１．０ｍＬの無菌脱イオンＨ_２Ｏを
使用して、１０ｍＬエコライト（ＩＣＮ）に移し、ボルテックスをかける。サン
プルを直ちに計測する。

【００７９】 様々な実験の結果は、図１に図で表す。

【００８０】 ６．１４ 野生型大腸菌ＭｕｒＧの精製 ｐＥＴ３ａベクター（ノバゲン）からの野生型大腸菌ＭｕｒＧを過剰発現して
いるＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ細胞（ノバゲン）を、１００μｇ／ｍＬアン
ピシリンおよび３４μｇ／ｍＬクロラムフェニコールを補充した８Ｌ ２ＸＹＴ
培地で増殖する。ＯＤ_{６００ｎｍ}が０．６に達すると、ＩＰＴＧを加え、最終濃
度を１ｍＭとする。誘導した細胞培養物を、さらに３．５時間増殖させ、その後
、細胞を５００ｍＬバッチ中、５０００ｒｐｍ（ベックマンＲＣ５Ｂ遠心機）で
１０分間遠心沈殿させ、上清をデカントする。各細胞ペレットを、５ｍＬの２５
ｍＭ ＭＥＳ（ｐＨ６．０）、４ｍＭ ＤＴＴおよび３％トリトンＸ−１００中
に再懸濁し、全８０ｍＬの懸濁液を合わせ、その後−７０℃に凍結する。懸濁液
を４℃で解凍し、それに最終濃度５ｍＭとなるようにＭｇＣｌ_２を加え、最終濃
度２０μｇ／ｍＬとなるようにＤＮＡｓｅを加える。１時間４℃で振った後、細
胞片を、１５，０００ｒｐｍで３５分間遠心沈殿させる。上清をデカントし、緩
衝液Ａ（２５ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ６．０、４ｍＭ ＤＴＴ）で６倍に希釈し、緩
衝液Ａで平衡化したＳＰ−セファロースカラム（ファルマシアバイオテック）に
アプライする。４０分間４０％緩衝液Ｂ（２０ｍＭトリスｐＨ８．０、１Ｍ Ｎ
ａＣｌ、４ｍＭ ＤＴＴ）／緩衝液Ａで洗浄した後、結合した酵素を、１２０分
間かけて、４０％緩衝液Ｂで開始し、１００％緩衝液Ｂで終る線形塩勾配を使用
して溶出する。溶出した酵素は、７ｍｇ／ｍＬに濃縮し、スーパーデックス ２
００ＨＲ １０／３０カラム（ファルマシアバイオテック）に、ＴＢＳＥ緩衝液
（１００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭトリスｐＨ８．０、１０ｍＭ ＥＤＴＡおよ
び４ｍＭ ＤＴＴ）の流速０．５ｍＬ／分でアプライする。タンパク質が、単一
の対称ピークとして、推定分子量７２ｋＤで溶出する。酵素の純度は、クーマシ
ーブルー染色ＳＤＳポリアクリルアミドゲルから９８％以上であると推定される
。精製酵素の収率は、細菌培養物の約１．３ｍｇ／Ｌである。精製酵素は４℃で
貯蔵し、少なくとも１ヶ月間安定である。

【００８１】 以下の例は、明細書の図２〜８に最もよく関連する。

【００８２】 ６．１５ 精製した可溶性酵素を用いた初期速度アッセイ 以下の溶液を、アッセイ前に調製する：１）Ｈ_２Ｏ中、１７７．３μＭ［^１４ Ｃ］−ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ（０．０５ｍＣｉ／ｍＬ）；２）Ｈ_２Ｏ中、１．５
ｍＭ ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ；３）０．５μｇ／μＬのビオチニル化リピドＩ類
似体（１ｂ）；４）５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）および５ｍＭ ＭｇＣ
ｌ_２を含む１０×反応緩衝液。酵素ストックは、０．５ｍＬチューブ中、精製酵
素をＴＢＳＥで希釈して最終の濃度を０．０４μｇ／μＬにすることにより調製
し、アッセイを行う前の２日間４℃で貯蔵する。

【００８３】 ３０個の反応を、２μＬの１０×反応緩衝液を、適当量のビオチニル化リピド
Ｉ類似体（１ｂ）、放射活性ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ、非放射活性ＵＤＰ−Ｇｌｃ
ＮＡｃ、およびＨ_２Ｏと個々に混合して最終容量１８μｌとすることにより調製
する。リピドＩ類似体（１ｂ）の最終濃度は、７μＭ、１０μＭ、１５μＭ、３
０μＭ、１００μＭ、およびＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃの最終濃度は、１１μＭ、１
５μＭ、２０μＭ、４０μＭ、１００μＭ、２００μＭである。反応は、２μＬ
の酵素ストックの添加により開始し、４分間２４℃で行う。反応は１０μｌの１
％（ｗ／ｖ）ＳＤＳの添加により停止する。

【００８４】 放射標識生成物は、放射標識出発物質から、各チューブへの３倍モル過剰のビ
オチン結合テトラリンクテトラマーアビジンレジン（プロメガ）をインキュベー
トすることにより分離する。脱イオンＨ_２Ｏを、各チューブに加えて、最終容量
を約２５０μＬとし、懸濁液を、真空ラインを取り付けたマルチスクリーンアッ
セイシステム（ミリポール）に取り付けた１．０μｍ孔サイズの９６ウェルフィ
ルタープレートに移す。レジンを、０．２ｍＬの脱イオンＨ_２Ｏで１５回洗浄す
る。洗浄したレジンを、１０ｍＬエコライトを含むシンチレーションバイアルに
移し、ボルテックスをかける。サンプルを、ベックマンＬＳ５０００シンチレー
ションカウンターで直ちに計測する。

【００８５】 ６．１６ ＩＣ_５０測定 ＩＣ_５０アッセイは、リピドＩ類似体（１ｂ）およびＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ濃
度をそれぞれ１８μＭおよび３４．３μＭに固定する以外は、初期速度アッセイ
と同じように実施する。各セットのアッセイは、５または６個の異なる濃度の阻
害化合物の１つで実施する。ＩＣ_５０は、反応速度（一定時間に取り込まれる計
数）が５０％減少する濃度とする。

【００８６】 ６．１７ 一般的な方法 全てのアミノ酸は、ＢＡケムから購入する。特記しない限り、全ての化学物質
は、アルドリッチまたはシグマから購入し、さらに精製することなく使用する。
ジクロロメタン、トルエン、ベンゼン、ピリジン、ジイソプロピルエチルアミン
およびトリエチルアミンは、乾燥アルゴン下で水素化カルシウムから蒸留する。
ジエチルエーテルおよびテトラヒドロフランは、乾燥アルゴン下でベンゾフェノ
ンカリウムから蒸留する。ＤＭＦ、酢酸エチルおよびメタノールは、活性化モレ
キュラーシーブ上で乾燥させる。

【００８７】 分析薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、蛍光指示薬で前以て覆膜されたシ
リカゲル６０Ｆ_２５４プレート（厚さ０．２５ｍｍ）上で実施する。展開したプ
レートを、短波長ＵＶ光で調べ、アニスアルデヒドまたはＭｏ（Ｖａｕｇｈｎ）
染色で染色する。フラッシュクロマトグラフィーは、ＥＭサイエンスからのシリ
カゲル６０（２３０−４００メッシュ）を使用して実施する。

【００８８】 ＮＭＲスペクトルは、ＪＥＯＬ ＧＳＸ−２７０ＮＭＲ分光計またはＶａｒｉ
ａｎ Ｉｎｏｖａ ５００／ＶＮＭＲ分光計で記録する。化学シフト（δ）は、
テトラメチルシランからの百万分率（ｐｐｍ）低磁場で報告する。カップリング
定数（Ｊ）は、ヘルツ（Ｈｚ）で報告する。多重度は、以下のように略する：一
重線（ｓ）、二重線（ｄ）、三重線（ｔ）、四重線（ｑ）、多重線（ｍ）、二重
の二重線（ｄｄ）、見かけの三重線（ａｐｔ）、広い一重線（ｂｓ）、五重線（
ｐ）および八重線（ｏ）。

【００８９】 高分解能質量分析（ＦＡＢ）は、カリフォルニア大学のリバーサイディパート
メント化学科質量分析施設でＤｒ．Ｒｏｎ Ｎｅｗにより得られる。低分解能質
量分析（ＥＳＩ）は、プリンストン大学化学科でＤｒ．Ｄｏｒｏｔｈｙ Ｌｉｔ
ｔｌｅにより得られる。

【００９０】 ６．１７．１ 化合物３ 化合物２（４８２ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ；図７参照）および４−ジメチルア
ミノピリジン（１０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の８ｍＬ ＴＨＦ溶液に、トリク
ロロエタノール（０．２３ｍＬ、２．４０ｍｍｏｌ）、次いで、１，３−ジシク
ロヘキシルカルボジイミド（２４８ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）を加える。室温で
４時間撹拌後、反応溶液を、綿栓を通して濾過し、沈殿物をＥｔＯＡｃで濯ぐ。
濾液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（１５％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ_２Ｃｌ _２ ）により精製すると、４５３ｍｇ（８０％）の３が、白色粉末として得られる
。Ｒ_ｆ０．３９（１５％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ _３ 、５００ＭＨｚ）δ７．４３−７．２５（ｍ、１０Ｈ）、７．０７（ｄ、Ｊ＝
６．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．５９（ｓ、１Ｈ）、５．３４（ｄ、Ｊ＝３．２Ｈｚ、
１Ｈ）、４．９８（ｄ、Ｊ＝１１．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．６８（ｄ、Ｊ＝１２．
０Ｈｚ、１Ｈ）、４．６６（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．６０（ｄ、Ｊ＝
１１．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．５１（ｄ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２１（
ｄｄ、Ｊ＝１０．５、４．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．００（ｍ、１Ｈ）、３．８５（
ｍ、２Ｈ）、３．７５（ｍ、２Ｈ）、２．０４（ｓ、３Ｈ）、１．５０（ｄ、Ｊ
＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、５００ＭＨｚ）δ１７３
．８、１７０．９、１３７．５、１３７．４、１２９．３、１２８．６、１２８
．５、１２８．１、１２８．０、１２６．１、１０１．６、９７．５、９４．６
、８３．４、７５．２、７５．１、７４．３、７０．５、６９．２、６３．１、
５４．２、２３．４、１８．９；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃ_２７Ｈ_３１ＮＯ_８Ｃｌ_３ ［Ｍ＋Ｈ^＋］の計算値：６０２．１１１５、実測値：６０２．１１３０。

【００９１】 ６．１７．２ 化合物４ 化合物３（３６０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）の３０ｍＬ ＥｔＯＡｃ溶液に、
５００ｍｇの２０％Ｐｄ−Ｃを加える。反応容器を水素で満たす。室温で３０分
間撹拌後、懸濁液を濾過し、触媒をメタノールで濯ぐ。濾液を濃縮すると、透明
な油状物が得られ、これはさらに精製することなく次の反応に使用する。

【００９２】 この透明な油状物の６ｍＬ ＤＭＦ溶液に、ベンズアルデヒドジメチルアセタ
ール（０．９ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）、次いで、ｐ−トルエンスルホン酸（１１
．４ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を加える。反応物を、室温で１０時間撹拌し、飽
和ＮａＨＣＯ_３で中和する。その後、混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×２０ｍＬ）で
抽出する。ＣＨ_２Ｃｌ_２層を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し
、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（９０％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）
により精製すると、２４８ｍｇ（８１％）の４が、α、βアノマーの混合物（α
：β＝４：１）として得られる。Ｒ_ｆ（αアノマー）０．３３、Ｒ_ｆ（βアノマ
ー）０．２８（９０％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）；αアノマー^１Ｈ ＮＭＲ（
ＣＤＣｌ_３、２７０ＭＨｚ）δ７．５０−７．３５（ｍ、５Ｈ）、５．６６（ｂ
ｓ、１Ｈ）、５．５８（ｓ、１Ｈ）、５．０２（ｄ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ、１Ｈ）
、４．９５（ｍ、１Ｈ）、４．６７（ｍ、１Ｈ）、４．５８（ｄ、Ｊ＝１２．０
Ｈｚ、１Ｈ）、４．２７（ｄｄ、Ｊ＝１０．０、５．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．０５
（ｍ、１Ｈ）、２．０６（ｓ、３Ｈ）、１．５２（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）
；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、２７０ＭＨｚ）δ１７４．２、１７１．９、１
３７．６、１２９．２、１２８．５、１２６．２、１０１．５、９４．７、９１
．４、８３．５、７５．５、７５．０、７４．６、６９．２、６２．９、５４．
９、２３．４、１８．９；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃ_２０Ｈ_２５ＮＯ_８Ｃｌ_３［Ｍ＋
Ｈ^＋］の計算値：５１２．０６４６、実測値：５１２．０６５３。

【００９３】 ６．１７．３ 化合物５ 化合物４（２０２ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）および１Ｈ−テトラゾールを前以
て混合し、トルエンと共沸蒸留し、１０ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２に溶かす。反応溶液
を−３０℃に冷却し、ジベンジルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスファミド（０．２
７ｍＬ、０．７９ｍｍｏｌ）を加える。反応物を３０分で室温まで加温し、さら
に１時間撹拌する。その後、反応物を−４０℃に冷却し、ｍ−ＣＰＢＡ（５６０
ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加える。３０分間０℃で、さらに３０分間室温で撹拌した
後、反応物を、２０ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、１０％Ｎａ_２ＳＯ_３水（２×
２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（２×２０ｍＬ）、および水（２×２０ｍＬ）で
抽出する。ＣＨ_２Ｃｌ_２層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮し、
フラッシュクロマトグラフィー（６５％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製
すると、２００ｍｇ（７０％）の５が、白色固体として得られる。Ｒ_ｆ０．２４
（７０％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、５００ＭＨ
ｚ）δ７．４４−７．３３（ｍ、１５Ｈ）、７．２０（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１
Ｈ）、６．１０（ｍ、１Ｈ）、５．５６（ｓ、１Ｈ）、５．０７（ｍ、４Ｈ）、
５．０２（ｄ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．６４（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２
Ｈ）、４．５９（ｄ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．０９（ｍ、１Ｈ）、４．
０３（ｍ、１Ｈ）、３．９５（ｍ、１Ｈ）、３．８３−３．６８（ｍ、３Ｈ）、
１．８６（ｓ、３Ｈ）、１．４８（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭ
Ｒ（ＣＤＣｌ_３、５００ＭＨｚ）δ１７３．８、１７１．２、１３７．１、１２
９．４、１２８．８、１２８．５、１２８．２、１２８．０、１２６．１、１０
１．７、９６．２、９６．１、８２．６、７５．３、７４．３、７４．２、６９
．７、６８．６、６４．６、５４．２、５４．１、２３．０、１８．８；ＨＲＭ
Ｓ（ＦＡＢ）Ｃ_３４Ｈ_３７ＮＯ_１１Ｃｌ_３ＰＮａ［Ｍ＋Ｎａ^＋］の計算値：７９
４．１０６８、実測値：７９４．１０９５。

【００９４】 ６．１７．４ 化合物６ 化合物５（５８ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）の５ｍＬ９０％ＡｃＯＨ／Ｈ_２Ｏ
溶液に、亜鉛ダスト（３０ｍｇ）を加える。反応物を、室温で１時間激しく撹拌
する。懸濁液を濾過し、沈殿物をメタノールで濯ぐ。濾液を濃縮し、フラッシュ
クロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３／０．１％ＡｃＯＨ）により
精製すると、４４ｍｇ（９１％）の６が白色固体として得られる。Ｒ_ｆ０．１９
（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３、０．１％ＡｃＯＨ）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ
、５００ＭＨｚ）δ７．４４−７．２５（ｍ、１５Ｈ）、６．１１（ｍ、１Ｈ）
、５．５５（ｓ、１Ｈ）、５．０２（ｍ、４Ｈ）、４．３３（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈ
ｚ、１Ｈ）、３．９６（ｍ、１Ｈ）、３．７７（ｍ、１Ｈ）、３．７−３．６６
（ｍ、４Ｈ）、１．９４（ｓ、３Ｈ）、１．３２（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）
；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ１８１．２、１７４．２、１
３９．０、１３７．１、１３０．０、１２９．９、１２９．３、１２９．２、１
２７．３、１０２．８、９７．４、８３．２、７８．３、７５．０、７１．２、
６９．２、６６．４、５６．２、５６．１、２２．８、１９．７；ＨＲＭＳ（Ｆ
ＡＢ）Ｃ_３２Ｈ_３６ＮＯ_１１ＰＮａ［Ｍ＋Ｎａ^＋］の計算値：６６４．１９２４
、実測値：６６４．１９３８。

【００９５】 ６．１７．５ 化合物７ ６．１７．５．１． Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｎ−ＴＥＯＣ）−ＯＨ Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｎ−ＢＯＣ）−ＯＨ（６０７ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ
）の１０ｍＬ ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、１０ｍＬのトリフルオロ酢酸を加える。混
合物を２０分間室温で撹拌し、濃縮する。残渣を１０ｍＬのＤＭＦに溶かす。ジ
イソプロピルエチルアミン（１．１ｍＬ、６．４８ｍｍｏｌ）を加える。２−（
トリメチルシリル）エチルｐ−ニトロフェニルカーボネート（４４０ｍｇ、１．
５５ｍｍｏｌ）を３ｍＬのＤＭＦに溶かし、反応溶液に移す。２時間室温で撹拌
後、溶媒を真空下で除去する。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（最初にＥ
ｔＯＡｃ、その後、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３／０．１％ＡｃＯＨで溶出する
）により精製すると、６３５ｍｇ（９５％）の所望の生成物が白色固体として得
られる。Ｒ_ｆ０．５４（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）。

【００９６】 ６．１７．５．２． Ｚ−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＨ）−ＯＴＭＳＥ Ｚ−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｏ−ｂｚｌ）−ＯＨ（１．１ｇ、３．０ｍｍｏｌ）およびＤ
ＭＡＰ（３７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の３０ｍＬ ＥｔＯＡｃ溶液に、ＤＣＣ（
０．７ｇ、３．６ｍｍｏｌ）および２−（トリメチルシリル）エタノール（０．
５ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を加える。２０分間室温で撹拌後、反応物を濾過する
。濾液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（１５％ＥｔＯＡｃ／石油エー
テル）により精製すると、１．３ｇ（９１％）のＺ−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｏ−ｂｚｌ）
−ＯＴＭＳＥが白色固体として得られる。Ｒ_ｆ０．３０（１５％ＥｔＯＡｃ／石
油エーテル）。

【００９７】 Ｚ−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｏ−ｂｚｌ）−ＯＴＭＳＥ（１．２ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の
３０ｍＬ ＭｅＯＨ溶液に、９００ｍｇの２０％Ｐｄ−Ｃを加える。１０分間室
温で撹拌後、懸濁液を濾過する。濾液を濃縮し、２０ｍＬのＨ_２Ｏ／ジオキサン
（１：１）に溶かす。この溶液にＮａＨＣＯ_３（０．４４、５．２ｍｍｏｌ）を
加える。Ｃｂｚ−スクシンイミド（０．８ｇ、３．１ｍｍｏｌ）の５ｍＬジオキ
サン溶液を、３０分間かけて反応物に加える。その後、１ｍＬのＡｃＯＨを加え
る。溶媒を真空下で除去する。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（最初に１
０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、その後、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３／０．１
％ＡｃＯＨで溶出する）により精製すると、０．９ｇ（８７％）のＺ−Ｄ−Ｇｌ
ｕ（ＯＨ）−ＯＴＭＳＥが白色固体として得られる。Ｒ_ｆ０．４９（１０％Ｍｅ
ＯＨ／ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ７．２４−
７．１５（ｍ、５Ｈ）、４．９６（ｄ、Ｊ＝３．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．１０（ｍ
、４Ｈ）、２．２８（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．０２（ｍ、１Ｈ）、１
．８０（ｍ、１Ｈ）、０．８７（ｔ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、−０．０８（ｓ
、９Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ１７６．３、１７３
．９、１５８．６、１３８．２、１２９．５、１２９．１、１２８．９、６７．
７、６４．７、５５．０、３１．２、２７．８、１８．２、−１．３；

【００９８】 ペプチド７は、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を用いて標準的なＨＯＢｔ／ＨＢＴＵ法
により合成する。Ｒ_ｆ０．２９（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ ＮＭＲ
（ＤＭＳＯ、５００ＭＨｚ）δ８．１５（ｄ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．１
４（ｄ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．１０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８
．０２（ｄ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．９２（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、１Ｈ）
、４．３０（ｍ、１Ｈ）、４．１９（ｍ、２Ｈ）、４．１７−４．０７（ｍ、５
Ｈ）、４．００（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．３１（ｑ、Ｊ＝８．５Ｈｚ
、１Ｈ）、２．９２（ｍ、２Ｈ）、２．１８（ｍ、２Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ
）、１．８０（ｍ、１Ｈ）、１．５７（ｍ、１Ｈ）、１．４８（ｍ、１Ｈ）、１
．３６（ｍ、２Ｈ）、１．２９（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．２５（ｍ、
２Ｈ）、１．２０（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．１３（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈ
ｚ、３Ｈ）、０．９２（ｍ、６Ｈ）、０．０２−０．００（３ｓ、２７Ｈ）； ^１３ Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ、５００ＭＨｚ）δ１７５．８、１７２．３、１７２
．０、１７１．８、１７１．５、１７１．４、１５６．２、６２．６、６２．４
、６１．２、５２．９、５１．３、５０．１、４７．７、４７．６、３１．４、
３１．２、２９．２、２７．２、２２．６、２１．４、１８．０、１７．４、１
６．９、１６．８、１６．７、−１．４、−１．５、−１．６；ＨＲＭＳ（ＦＡ
Ｂ）Ｃ_３６Ｈ_７２Ｎ_６Ｏ_１０Ｓｉ_３Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ^＋］の計算値：８５５．４５
１５、実測値：８５５．４５６４。

【００９９】 ６．１７．６ 化合物８ 化合物６（８５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）およびＮＨ_２−Ｌ−Ａｌａ−□−Ｄ
−Ｇｌｕ（Ｏ−ＴＭＳＥ）−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｎ−ＴＥＯＣ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａ
ｌａ−ＯＴＭＳＥ（７）（１５３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の１．５ｍＬ ＤＭ
Ｆ溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１１６μＬ、０．６６ｍｍｏｌ）、次
いで、ＨＯＢｔ（２７ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）およびピリジンＢＯＰ（１０４
ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加える。３０分間室温で撹拌後、溶液を１０ｍＬの
ＥｔＯＡｃで希釈し、０．０１Ｎ ＨＣｌ水（３×１０ｍＬ）で洗浄する。有機
層を濃縮し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、フラッシュクロマトグラフィー（
５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）により精製すると、１６８ｍｇ（８７％）の８が白
色固体として得られる。Ｒ_ｆ０．２４（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ Ｎ
ＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ７．５２−７．３７（ｍ、１５Ｈ）、５．
８８（ｍ、１Ｈ）、５．６５（ｓ、１Ｈ）、５．１３（ｍ、４Ｈ）、４．４１（
ｍ、２Ｈ）、４．３５（ｍ、３Ｈ）、４．１７（ｍ、８Ｈ）、４．０６（ｄｄ、
Ｊ＝９．５、３．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｍ、３Ｈ）、３．７７（ｍ、１Ｈ
）、３．１０（ｍ、２Ｈ）、２．９９（ｔ、Ｊ＝１４．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．１
９（ｍ、１Ｈ）、１．９０（ｍ、１Ｈ）、１．８８（ｓ、３Ｈ）、１．７７（ｍ
、１Ｈ）、１．６７（ｍ、１Ｈ）、１．５１（ｍ、２Ｈ）、１．４３−１．３５
（ｍ、１４Ｈ）、１．０１−０．９７（ｍ、６Ｈ）、０．０６−０．０４（３ｓ
、２７Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、５００ＭＨｚ）δ１７３．９、１７
２．８、１７２．４、１７１．８、１７１．３、１５７．１、１３７．１、１３
５．５、１３５．４、１２９．２、１２９．０、１２８．９、１２８．７、１２
８．４、１２８．１、１２６．１、１０１．６、９７．１、８２．５、８１．０
、７８．２、７６．７、７０．０、６９．６、６８．４、６４．８、６４．１、
６３．８、６３．０、５３．９、５３．３、５１．４、５０．０、４９．１、４
８．４、４０．４、３１．６、３１．５、２９．６、２７．９、２３．１、２２
．７、１９．６、１８．０、１７．９、１７．８、１７．５、１７．４、−１．
３、−１．４、−１．５；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃ_６８Ｈ_１０６Ｎ_７Ｏ_２０ＰＳｉ _３ Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ^＋］の計算値：１４７８．６４３６、実測値：１４７８．６４
１７。

【０１００】 ６．１７．７ 化合物９ 化合物８（８７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の５ｍＬ ＭｅＯＨ溶液に、２０ｍ
ｇの２０％Ｐｄ−Ｃを加える。反応容器を水素で満たし、室温で撹拌する。１ｍ
Ｌのピリジンを、３０分後に加える。この溶液を１５ｍＬのＭｅＯＨで希釈し、
３０分間撹拌する。触媒を濾過して除去する。濾液を濃縮すると、生成物９ａが
得られ、これはさらに精製することなく次の反応に使用する。Ｒ_ｆ０．２８（Ｃ
ＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：２：０．５）

【０１０１】 シトロネロールホスフェート（２５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）［参照：Ｗａｒ
ｒｅｎ，Ｃ．Ｄ．、Ｊｅａｎｌｏｚ，Ｒ．Ｗ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ、１４、４１２
−４１９、１９７５］をトルエン（３×１ｍＬ）と共蒸発させ、２ｍＬのＣＨ_２ Ｃｌ_２に溶かす。ジイソプロピルエチルアミン（９２μＬ、０．５３ｍｍｏｌ）
を加える。この溶液を−２０℃に冷却し、ジフェニルホスホロクロリデート（２
６μＬ、０．１３ｍｍｏｌ）を加える。反応物を１０分間で室温まで加温し、室
温で撹拌する。１時間後、メタノール（１ｍＬ）を加え、反応物をさらに１時間
室温で撹拌する。溶媒を真空下で除去する。残渣をトルエン（３×１ｍＬ）と共
蒸発させ、０．５ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２に溶かす。

【０１０２】 化合物９ａ（５８ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を、トルエン（３×１ｍＬ）と共
蒸発させ、１ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２に溶かす。０．４ｍＬのシトロネロールジフェ
ニルピロホスフェート溶液、次いで、ピリジン（２０μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）
を反応物に加える。反応物を室温で１８時間撹拌する。溶媒を真空下で除去し、
残渣をＣ１８逆相カラム（８ｍｍ×８０ｍｍ、粒子サイズ４０μｍ、孔サイズ６
０Å、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒから）にのせ、ＣＨ_３ＣＮ／０．１％ＮＨ_４ＨＣＯ_３ 水溶液（０、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％の各１０
ｍＬ）で溶出する。所望の生成物を含む画分を合わせ、濃縮すると、３４ｍｇ（
６８％）の９が白色粉末として得られる。Ｒ_ｆ０．２１（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ
：Ｈ_２Ｏ＝４．５：１．５：０．２）。この生成物は、さらに精製することなく
次の反応に使用する。ＥＳＩ−ＭＳ Ｃ_５７Ｈ_１０９Ｎ_７Ｏ_２３Ｐ_２Ｓｉ_３Ｎａ
［Ｍ＋Ｎａ^＋］の計算値：１４２９、実測値：１４２９。

【０１０３】 ６．１７．８ 化合物１ａ 化合物９（４３ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）の０．７ｍＬ ＤＭＦ溶液に、テ
トラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＨＦ中１Ｍ、０．７ｍＬ）を加える。反
応物を室温で２４時間撹拌する。溶媒を真空下で除去する。残渣をＣ１８逆相カ
ラム（８ｍｍ×８０ｍｍ、粒子サイズ４０μｍ、孔サイズ６０Å、Ｊ．Ｔ．Ｂａ
ｋｅｒから）にのせ、ＣＨ_３ＣＮ／０．１％ＮＨ_４ＨＣＯ_３水溶液（０、５％、
１０％、１５％、２０％、２５％、３０％の各１０ｍＬ）で溶出する。所望の生
成物を含む画分を合わせ、濃縮する。粗生成物を、ジエチルアミノエチルセルロ
ースカラム（１４ｍｍ×８０ｍｍ、Ｗｈａｔｍａｎ Ｌａｂｓａｌｅｓ，Ｉｎｃ
．から）上でさらに精製し、２５０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３で溶出すると、凍結乾
燥後に２４ｍｇの１ａ（９３％）が白色粉末として得られる。Ｒ_ｆ０．１８（Ｃ
ＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：３：１）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５０
０ＭＨｚ）δ５．５８（ｍ、１Ｈ）、５．１１（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、１Ｈ）、
４．５０−３．５６（ｍ、１２Ｈ）、２．９４（ｍ、２Ｈ）、２．３４（ｍ、２
Ｈ）、２．１０（ｓ、３Ｈ）、２．００（ｍ、１Ｈ）、１．９８（ｍ、２Ｈ）、
１．９２（ｍ、１Ｈ）、１．７４（ｍ、２Ｈ）、１．６７（ｓ、３Ｈ）、１．６
２（ｍ、１Ｈ）、１．６０（ｓ、３Ｈ）、１．５０−１．３９（ｍ、１２Ｈ）、
１．２３（ｍ、２Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭ
Ｒ（Ｄ_２Ｏ、５００ＭＨｚ）δ１７８．２、１７７．９、１７６．７、１７６．
６、１７６．５、１７６．４、１７６．３、１６５．３、１３５．５、１２７．
６、９７．０、８２．２、８０．３、７５．４、７４．１、７２．０、７１．９
、７１．８、７０．４、６７．６、６２．７、５６．６、５５．８、５２．３、
５１．９、５１．２、４１．５、３８．８、３４．０、３２．７、３１．０、３
０．０、２８．６、２７．２、２７．１、２４．６、２４．４、２１．０、１９
．２、１９．１、１８．８；ＥＳＩ−ＭＳ Ｃ_４１Ｈ_７４Ｏ_２１Ｎ_７Ｐ_２ ［Ｍ
＋Ｈ^＋］の計算値：１０６２、実測値：１０６２。

【０１０４】 ６．１７．９ 化合物１ｂ 化合物１ａ（２５ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）の１．５ｍＬ Ｈ_２Ｏ／ジオキ
サン（１：１）溶液に、ＮａＨＣＯ_３（２３ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、次いで、
６−（（ビオチノイル）アミノ）ヘキサン酸スクシンイミドエステル（１２ｍｇ
、０．０２７ｍｍｏｌ）を加える。反応物を室温で２時間撹拌する。溶媒を真空
下で除去する。残渣をジエチルアミノエチルセルロースカラム（１４ｍｍ×８０
ｍｍ、Ｗｈａｔｍａｎ Ｌａｂｓａｌｅｓ，Ｉｎｃ．から）上にのせ、２５０ｍ
Ｍ ＮＨ_４ＨＣＯ_３で溶出すると、凍結乾燥後に１６ｍｇの１ｂ（８０％）が白
色粉末として得られる。Ｒ_ｆ０．４０（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：３
：１）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ５．４９（ｄｄ、Ｊ＝３
．０、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．１１（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．５０
（ｄｄ、Ｊ＝４．８、７．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．３７（ｍ、２Ｈ）、４．３１（
ｄｄ、Ｊ＝４．３、７．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．２９（ｍ、１Ｈ）、４．２４（ｍ
、３Ｈ）、４．１６（ｄ、Ｊ＝１０．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．０２（ｍ、２Ｈ）、
３．９９（ｍ、１Ｈ）、３．９０（ｄ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．７４（
ｍ、１Ｈ）、３．７０（ｍ、１Ｈ）、３．４９（ｄｄ、Ｊ＝９．５、９．５Ｈｚ
、１Ｈ）、３．２１（ｍ、１Ｈ）、３．１７（ｍ、４Ｈ）、２．９４（ｄｄ、Ｊ
＝４．８、１２．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．７１（ｄ、Ｊ＝１２．８Ｈｚ、１Ｈ）、
２．３１（ｍ、１Ｈ）、２．２８（ｍ、２Ｈ）、２．２５（ｍ、１Ｈ）、２．２
０（ｍ、４Ｈ）、２．０２（ｓ、３Ｈ）、２．００（ｍ、２Ｈ）、１．８６（ｍ
、２Ｈ）、１．８２（ｍ、１Ｈ）、１．７３（ｍ、４Ｈ）、１．６７（ｓ、３Ｈ
）、１．６３（ｍ、５Ｈ）、１．６１（ｓ、３Ｈ）、１．５２（ｍ、４Ｈ）、１
．４５（ｍ、２Ｈ）、１．４４（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ）、１．４３（ｄ、
Ｊ＝６．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．４１（ｍ、２Ｈ）、１．３８（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈ
ｚ、３Ｈ）、１．３７（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．３５（ｍ、２Ｈ）、
１．１７（ｍ、１Ｈ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭ
Ｒ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ１７７．２、１７６．５、１７６．２、１７
６．１、１７６．０、１７５．６、１７４．７、１７４．６、１７４．５、１７
４．２、１６６．３、１３２．１、１２６．２、９６．４、８１．３、７８．８
、７５．２、７１．０、６５．７、６３．６、６３．０、６１．８、５７．２、
５５．７、５５．０、５４．２、５０．９、５０．７、５０．４、４１．２、４
０．４、４０．２、３９．１、３９．０、３８．６、３７．２、３７．０、３３
．０、３２．５、３０．６、３０．３、３０．２、３０．０、２９．６、２７．
７、２７．１、２６．９、２６．７、２６．１、２４．５、２３．５、２０．０
、１９．５、１８．４、１８．３、１８．０、１７．９；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）
Ｃ_５７Ｈ_９５Ｎ_１０Ｏ_２４Ｐ_２ＳＮａ ［Ｍ−３Ｈ^＋＋２Ｎａ^＋］の計算値：１
４４３．５５１２、実測値：１４４３．５４９４。

【０１０５】 ６．１７．１０ 化合物１０ 化合物１０は、段階ｅで中間体６を、７にではなく、ジペプチドＣＨ_３ＮＨ−
Ｄ−γ−Ｇｌｕ（Ｏ−ＴＭＳＥ）−Ｌ−Ａｌａ−ＮＨ_２にカップリングさせる以
外は、１ａと同じスキームに従って実施する。Ｒ_ｆ０．４１（ＣＨＣｌ_３：Ｍｅ
ＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：３：１）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ５
．４９（ｄｄ、Ｊ＝３．０、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．１１（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈ
ｚ、１Ｈ）、４．３３（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２７（ｑ、Ｊ＝７．
０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２４（ｄｄ、Ｊ＝３．８、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．１６
（ｍ、１Ｈ）、４．０４（ｍ、２Ｈ）、４．００（ｍ、１Ｈ）、３．９０（ｄｄ
、Ｊ＝１．８、１１．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．７５（ｄｄ、Ｊ＝９．６、９．６Ｈ
ｚ、１Ｈ）、３．７０（ｄｄ、Ｊ＝５．７、１１．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（
ｄｄ、Ｊ＝９．６、９．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．６４（ｓ、３Ｈ）、２．１８（ｍ
、２Ｈ）、２．１６（ｍ、１Ｈ）、２．０２（ｓ、３Ｈ）、１．９８（ｍ、２Ｈ
）、１．９２（ｍ、１Ｈ）、１．７２（ｍ、１Ｈ）、１．６７（ｓ、３Ｈ）、１
．６２（ｍ、１Ｈ）、１．６１（ｓ、３Ｈ）、１．４７（ｍ、１Ｈ）、１．４３
（ｄ、ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、６Ｈ）、１．３７（ｍ、１Ｈ）、１．１８（ｍ、１
Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、
５００ＭＨｚ）δ１７７．２、１７６．１、１７６．０、１７４．４、１７４．
２、１３２．０、１２６．１、９６．３、８１．１、７８．９、７５．２、７０
．８、６５．７、６３．０、５５．１、５４．９、５１．０、３９．１、３８．
６、３３．３、３０．６、３０．１、２６．７、２６．５、２６．１、２３．４
、１９．９、１９．５、１８．２、１７．９；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ） Ｃ_３０Ｈ_{５ ３} Ｎ_４Ｏ_１７Ｐ_２ ［Ｍ−Ｈ^＋］の計算値：８０３．２８８１、実測値：８０３
．２８６１。

【０１０６】 ６．１７．１１ 化合物１１ａ 化合物１１ａは、段階ｅで化合物６を、７にではなく、ＴＥＯＣ−ＮＨＣＨ_２ ＣＨ_２ＮＨ_２にカップリングさせる以外は、１ａと同じスキームに従って実施す
る。シリル保護基を、１ａの製造と同じように、ＴＢＡＦを使用して取り外す。
Ｒ_ｆ０．２０（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：２：０．５）；^１Ｈ ＮＭ
Ｒ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ５．５８（ｂｓ、１Ｈ）、５．１１（ｔ、Ｊ
＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．３０（ｑ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．２１（ｍ
、１Ｈ）、４．０４（ｍ、３Ｈ）、３．７２（ｍ、１Ｈ）、３．７８（ｍ、１Ｈ
）、３．７３（ｍ、１Ｈ）、３．６４（ｍ、１Ｈ）、３．５０（ｄｄ、Ｊ＝９．
４、９．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．４０（ｍ、１Ｈ）、３．１３（ｍ、２Ｈ）、２．
０３（ｓ、３Ｈ）、２．００（ｍ、２Ｈ）、１．７３（ｍ、１Ｈ）、１．６７（
ｓ、３Ｈ）、１．６３（ｍ、１Ｈ）、１．６１（ｓ、３Ｈ）、１．４６（ｍ、１
Ｈ）、１．３９（ｍ、１Ｈ）、１．３８（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、３Ｈ）、１．１
８（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（Ｃ
Ｄ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ１７６．２、１７３．６、１３１．２、１２５．２
、９５．６、８０．７、７８．１、７４．３、７０．３、６４．９、６２．０、
５４．２、３９．７、３８．２、３７．８、３７．５、２９．８、２５．８、２
５．２、２２．５、１９．１、１８．６、１７．０；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃ_２３ Ｈ_４３Ｎ_３Ｏ_１３Ｐ_２Ｎａ ［Ｍ−２Ｈ^＋＋Ｎａ^＋］の計算値：６５４．２１６
９、実測値：６５４．２１９９。

【０１０７】 ６．１７．１２ 化合物１１ｂ 化合物１１ａ（４ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェニルアセ
テート（１．２ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）を０．４ｍＬのＤＭＦに溶かす。大
量のＫＨＣＯ_３を、ＰＨを上昇させるために加える。等量の４−ニトロフェニル
アセテートを１２時間毎に加える。３日後、反応が完了する。溶媒を除去し、残
渣をＣ１８逆相カラム（８ｍｍ×８０ｍｍ、粒子サイズ４０μｍ、孔サイズ６０
Å、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒから）にのせ、ＣＨ_３ＣＮ／０．１％ＮＨ_４ＨＣＯ_３水
溶液（０、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％の各１０ｍ
Ｌ）で溶出する。所望の生成物を含む画分を合わせ、濃縮すると、３ｍｇ（７１
％）の１１ｂが白色粉末として得られる。Ｒ_ｆ０．２６（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ
：Ｈ_２Ｏ＝３：２：０．５）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ５
．５０（ｂｓ、１Ｈ）、５．１２（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２２（ｑ
、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．０４（ｍ、２Ｈ）、４．００（ｍ、１Ｈ）、３
．８９（ｄ、Ｊ＝１２．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．７２（ｍ、２Ｈ）、３．４６（ｄ
ｄ、Ｊ＝９．５、９．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．３６（ｍ、２Ｈ）、３．２８（ｍ、
２Ｈ）、２．０４（ｓ、３Ｈ）、２．０２（ｍ、２Ｈ）、１．９８（ｓ、３Ｈ）
、１．７３（ｍ、１Ｈ）、１．６８（ｓ、３Ｈ）、１．６３（ｍ、１Ｈ）、１．
６２（ｓ、３Ｈ）、１．４６（ｍ、１Ｈ）、１．４０（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３
Ｈ）、１．３８（ｍ、１Ｈ）、１．１８（ｍ、１Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝６．
７Ｈｚ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ１７６．４、
１７４．５、１７３．８、１３２．０、１２６．１、９６．４、８１．９、７９
．２、７５．１、７１．０、６５．６、６２．９、５５．０、４０．２、４０．
１、３９．０、３８．６、３０．６、２６．７、２６．０、２３．４、２２．８
、１９．９、１９．５、１７．９；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃ_２５Ｈ_４６Ｎ_３Ｏ_１４ Ｐ_２ ［Ｍ−Ｈ^＋］の計算値：６７４．２４５５、実測値：６７４．２４８８。

【０１０８】 ６．１７．３ 化合物１１ｃ 化合物１１ｃは、段階ｈ（スキームＩＩ）で記載した同じケミストリーを使用
して、１１ａおよび６−（（ビオチノイル）アミノ）ヘキサン酸スクシンイミド
エステルから製造する。Ｒ_ｆ０．３０（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：２
：０．５）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ５．４９（ｄｄ、Ｊ
＝２．７、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．１２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．
５０（ｄｄ、Ｊ＝５．０、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．３２（ｄｄ、Ｊ＝４．４、
７．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．２０（ｑ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．１６（ｍ、
１Ｈ）、４．０３（ｍ、２Ｈ）、３．９８（ｍ、１Ｈ）、３．９０（ｄ、Ｊ＝１
２．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．７１（ｍ、１Ｈ）、３．７０（ｍ、１Ｈ）、３．４５
（ｄｄ、Ｊ＝９．４、９．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．２３（ｍ、１Ｈ）、３．１８（
ｍ、６Ｈ）、２．９４（ｄｄ、Ｊ＝５．０、１２．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．７２（
ｄ、Ｊ＝１２．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．２４（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．
２１（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．０３（ｓ、３Ｈ）、２．００（ｍ、２
Ｈ）、１．７３（ｍ、３Ｈ）、１．６８（ｓ、３Ｈ）、１．６４（ｍ、６Ｈ）、
１．６２（ｓ、３Ｈ）、１．５３（ｍ、２Ｈ）、１．４５（ｍ、３Ｈ）、１．４
０（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、３Ｈ）、１．３６（ｍ、３Ｈ）、１．１８（ｍ、１Ｈ
）、０．９４（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５
００ＭＨｚ）δ１７６．５、１７６．４、１７６．１、１７４．４、１６６．３
、１３２．０、１２６．１、９６．５、８１．９、７９．２、７５．２、７０．
９、６５．７、６３．５、６２．９、６１．８、５７．１、５５．０、４１．２
、４０．４、４０．１、３９．１、３９．０、３８．６、３７．２、３７．０、
３０．６、３０．３、３０．０、２９．６、２７．８、２７．１、２６．８、２
６．７、２６．１、２３．４、２０．０、１９．６、１８．０；ＨＲＭＳ（ＦＡ
Ｂ）Ｃ_３９Ｈ_６９Ｎ_６Ｏ_１６Ｐ_２Ｓ ［Ｍ−Ｈ^＋］の計算値：９７１．３９６６
、実測値：９７１．３９４８。

【０１０９】 ６．１７．１４ 化合物１２ａ 化合物８の水素化からの中間体を、１ａを製造したのと同じ方法を使用して、
ＴＢＡＦを用いて脱保護する。Ｒ_ｆ０．１６（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝
３：４：１．５）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ５．３４（ｄ
ｄ、Ｊ＝３．０、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２４（ｍ、３Ｈ）、４．１７（ｄｄ
、Ｊ＝６．７、６．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．０８（ｄｄ、Ｊ＝４．６、８．５Ｈｚ
、１Ｈ）、４．０３（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．９３（ｍ、１Ｈ）、３
．８０（ｍ、１Ｈ）、３．７５（ｍ、１Ｈ）、３．５９（ｄｄ、Ｊ＝５．５、１
１．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．５６（ｍ、１Ｈ）、３．３８（ｄｄ、Ｊ＝９．７、９
．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．８２（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．２２（ｍ、２
Ｈ）、２．１５（ｍ、１Ｈ）、１．８６（ｓ、３Ｈ）、１．７０（ｍ、４Ｈ）、
１．５８（ｍ、２Ｈ）、１．４０（ｍ、１Ｈ）、１．３１（ｍ、６Ｈ）、１．２
５（ｍ、６Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ１７９．４、
１７８．８、１７８．０、１７６．２、１７５．９、１７４．７、１７４．０、
１７３．８、９５．３、８１．２、７８．７、７４．９、７１．２、６２．８、
５５．５、５５．３、５５．０、５１．９、５１．１、５０．８、４０．５、３
３．１、３２．５、３０．４、２８．４、２３．７、２３．４、１９．８、１９
．４、１８．４、１８．０；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃ_３１Ｈ_５３Ｎ_７Ｏ_１８Ｐ ［
Ｍ−Ｈ^＋］の計算値：８４２．３１８５、実測値：８４２．３２１２。

【０１１０】 ６．１７．１５ 化合物１２ｂ 化合物１２ｂは、段階ｈ（スキームＩＩ）で記載した同じケミストリーを使用
して、１２ａおよび６−（（ビオチノイル）アミノ）ヘキサン酸スクシンイミド
エステルから製造する。Ｒ_ｆ０．２７（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：４
：１．５）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ５．４５（ｄｄ、Ｊ
＝７．０、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５１（ｄｄ、Ｊ＝５．０、７．５Ｈｚ、１
Ｈ）、４．３９（ｍ、２Ｈ）、４．３２（ｍ、２Ｈ）、４．２６（ｍ、３Ｈ）、
４．１２（ｍ、１Ｈ）、３．９１（ｍ、１Ｈ）、３．８６（ｄ、Ｊ＝１１．６Ｈ
ｚ、１Ｈ）、３．７３（ｄｄ、Ｊ＝５．５、１１．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．６９（
ｍ、１Ｈ）、３．５３（ｍ、１Ｈ）、３．２２（ｍ、１Ｈ）、３．１７（ｍ、４
Ｈ）、２．９４（ｄｄ、Ｊ＝５．０、１２．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．７２（ｄ、Ｊ
＝１２．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．３０（ｍ、４Ｈ）、２．２１（ｍ、４Ｈ）、１．
９９（ｓ、３Ｈ）、１．８９（ｍ、１Ｈ）、１．８２（ｍ、１Ｈ）、１．７４（
ｍ、２Ｈ）、１．６３（ｍ、４Ｈ）、１．５３（ｍ、４Ｈ）、１．４６（ｍ、２
Ｈ）、１．４４（ｍ、６Ｈ）、１．３９（ｍ、６Ｈ）、１．３５（ｍ、４Ｈ）； ^１３ Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ１７７．５、１７７．４、１７
７．３、１７６．５、１７６．３、１７４．８、１７４．７、１７４．６、１７
４．３、１７４．２、１６６．０、９４．３、８０．６、７８．６、７３．２、
６８．９、６２．８、６１．１、６０．９、５６．１、５５．０、５４．３、５
４．２、５１．６、５０．４、５０．１、４０．４、３９．８、３９．６、３６
．４、３６．２、３２．５、３１．４、２８．８、２８．７、２８．６、２８．
５、２８．４、２６．２、２５．９、２５．８、２３．２、２２．７；ＨＲＭＳ
（ＦＡＢ）Ｃ_４７Ｈ_７８Ｎ_１０Ｏ_２１Ｐ_２Ｓ ［Ｍ−Ｈ^＋］の計算値：１１８１
．４８０１、実測値：１１８１．４７６９。

【０１１１】 ６．１７．１６ 化合物１３ａ 化合物６（１２ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）の１ｍＬメタノール溶液に、１０
ｍｇパールマン触媒を加える。反応容器を水素で満たす。室温で３０分間撹拌後
、数滴のピリジンを加える。懸濁液をさらに３０分間撹拌した後、濾過する。濾
液を濃縮すると、黄色の油状物が得られ、これを、ジエチルアミノエチルセルロ
ースカラム（１４ｍｍ×８０ｍｍ、Ｗｈａｔｍａｎ Ｌａｂｓａｌｅｓ，Ｉｎｃ
．から）上で精製し、１Ｍ ＮＨ_４ＨＣＯ_３で溶出すると、７ｍｇ（９０％）の
１３ａが白色粉末として得られる。Ｒ_ｆ０．２９（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２ Ｏ＝３：４：１．５）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ５．７３
（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．７２（ｑ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．
８６（ｍ、１Ｈ）、３．８４（ｄ、Ｊ＝１１．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．７４（ｍ、
１Ｈ）、３．７０（ｍ、１Ｈ）、３．６６（ｄｄ、Ｊ＝５．５、１１．６Ｈｚ、
１Ｈ）、３．４５（ｄｄ、Ｊ＝９．８、９．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．０（ｓ、３Ｈ
）、１．８３（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５
００ＭＨｚ）δ１８０．４、１７３．２、９３．７、７７．７、７７．４、７４
．２、７１．８、６２．０、５４．５、２２．２、１９．２；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ
）Ｃ_１１Ｈ_１９ＮＯ_１１Ｐ ［Ｍ−Ｈ^＋］の計算値：３７２．０６９６、実測値
：３７２．０７１１。

【０１１２】 ６．１７．１７ 化合物１３ｂ ２（２０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）の１ｍＬ ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、ＤＩＥ
Ａ（１６μＬ、０．９２４ｍｍｏｌ）を加える。反応容器を−３０℃に冷却し、
その後、ＭｅＯＴｆ（５．２μＬ、０．０４６ｍｍｏｌ）を加える。反応は、室
温で３０分間撹拌後、完了する。飽和ＮａＨＣＯ_３を加える。混合物をＣＨ_２Ｃ
ｌ_２（３×５ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥
させ、濾過し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（４５％ＥｔＯＡｃ／石
油エーテル）により精製すると、１８ｍｇ（８７％）の生成物が白色粉末として
得られる。以下の化学は１３ａと同じである。Ｒ_ｆ０．１２（ＣＨＣｌ_３：Ｍｅ
ＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝３：２：０．５）；^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）
δ５．５０（ｄｄ、Ｊ＝３．４、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｑ、Ｊ＝６．
７Ｈｚ、１Ｈ）、３．８７（ｍ、２Ｈ）、３．８４（ｍ、１Ｈ）、３．７３（３
、３Ｈ）、３．６２（ｍ、２Ｈ）、３．４２（ｄｄ、Ｊ＝９．２、９．２Ｈｚ、
１Ｈ）、２．００（ｓ、３Ｈ）、１．３７（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）；^１３ Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δ１７６．４、１７３．８、９５．０
、８０．７、７７．３、７４．８、７２．８、６２．９、５４．９、５２．６、
２３．２、１９．４；ＥＳＩ−ＭＳ Ｃ_１２Ｈ_２３ＮＯ_１１Ｐ ［Ｍ＋Ｈ^＋］の
計算値：３８８、実測値：３８８。

【０１１３】 ６．１７．１８ 化合物１４ 化合物１４ａ−ｃは、（Ｒ）−（＋）−β−シトロネロール−ＯＰＯ_３ＰＯ（
ＯＰｈ）_２ではなく、Ｒ−ＯＰＯ_３ＰＯ（ＯＰｈ）_２を使用する以外は、１ａと
同じアプローチにより製造する。１４ａＣ_３２Ｈ_５８Ｎ_７Ｏ_２１Ｐ_２［Ｍ＋Ｈ^＋ ］のＥＳＩ−ＭＳ：９３８；１４ｂＣ_３３Ｈ_６０Ｎ_７Ｏ_２１Ｐ_２［Ｍ＋Ｈ^＋］の
ＥＳＩ−ＭＳ：９５２；１４ｃＣ_３４Ｈ_６０Ｎ_７Ｏ_２１Ｐ_２［Ｍ＋Ｈ^＋］のＥＳ
Ｉ−ＭＳ：９６４。

【０１１４】 ６．１７．１９ 化合物１５ １００μＬ ＨＥＰＥＳ反応緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．９、お
よび２．５ｍＭ ＭｇＣｌ_２）中、１等量の１ｂ（１０μｇ）および３等量の^{１ ４} Ｃ−ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃを含む微量遠心管チューブに、１μｇの精製Ｍｕｒ
Ｇを加える。反応は、ＭｕｒＧを６５℃まで５分間加熱することにより、３０分
後に終了する。反応は、１０μＬアリコートを、３倍モル過剰のテトラリンクテ
トラマーアビジンレジン（反応混合物の容量の１０分の１に期待される１ｂの量
に基づく）を含むチューブに移し、Ｈ２Ｏで希釈し、懸濁液を、９６ウェルフィ
ルタープレートに移し、初期速度アッセイの実験下でより詳細に記載したように
、非結合放射活性を除去するためにイッシングすることにより評価する。その後
、レジンを、エコライトを含むシンチレーションバイアルに移し、計測する。二
糖生成物１５への変換は、レジンに取り込まれた計数に基づき９０％以上である
と推定される。１５を含む混合物は、トランスグリコシダーゼ活性の評価に適し
ている。

【０１１５】 ^１Ｈ ＮＭＲ帰属は、１Ｄおよび２Ｄスペクトル（ＣＯＳＹ）から行う。 ^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δｐｐｍ５．０９（ｔ、Ｊ＝５．
０Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−７）、３．９０（ｍ、２Ｈ、Ｈ−１）、１．９９（ｍ、２Ｈ
、Ｈ−６）、１．６７（ｍ、１Ｈ、Ｈ−２）、１．６５（ｓ、３Ｈ、Ｈ−９）、
１．６２（ｍ、１Ｈ、Ｈ−３）、１．５９（ｓ、３Ｈ、Ｈ−１０）、１．４１（
ｍ、１Ｈ、Ｈ−２’）、１．３４（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５）、１．１６（ｍ、１Ｈ、
Ｈ−５’）、０．９１（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ、Ｈ−４）。

【０１１６】 ^１Ｈ ＮＭＲ帰属は、１Ｄおよび２Ｄスペクトル（ＣＯＳＹ、ＲＯＥＳＹ）か
ら行う。 ^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ、５００ＭＨｚ）δｐｐｍ８．２４（ｄ、Ｊ＝７．５
Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−γ−Ｇｌｕ−ＮＨ）、８．１８（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ、
Ｄ−Ａｌａ_２−ＮＨ）、８．１７（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ａｌａ_１−
ＮＨ）、８．０１（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ）、７．４７
（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ、Ｌ−Ａｌａ−ＮＨ）、６．９４（ｔ、Ｊ＝５．０
Ｈｚ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−ＮＨＣＯＯＲ）、４．２９（ｍ、１Ｈ、Ｄ−Ａｌａ_１ −Ｈα）、４．２４（ｍ、１Ｈ、Ｄ−Ａｌａ_２−Ｈα）、４．１８（ｍ、１Ｈ、
Ｄ−γ−Ｇｌｕ−Ｈα）、４．１４（ｍ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈα）、４．１２
（ｍ、１Ｈ、Ｌ−Ａｌａ−Ｈα）、３．５８（ｓ、３Ｈ、Ｄ−Ａｌａ_２−ＣＯＯ
ＣＨ _３）、２．９１（ｍ、２Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈε）、２．１７（ｍ、２Ｈ、Ｄ
−γ−Ｇｌｕ−Ｈγ）、１．９２（ｍ、１Ｈ、Ｄ−γ−Ｇｌｕ−Ｈβ）、１．７
９（ｍ、１Ｈ、Ｄ−γ−Ｇｌｕ−Ｈβ’）、１．５６（ｍ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−
Ｈβ）、１．４８（ｍ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈβ’）、１．３５（ｍ、２Ｈ、Ｌ
−Ｌｙｓ−Ｈδ）、１．２９（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ、Ｄ−Ａｌａ_２−ＣＨ _３ ）、１．２３（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ、Ｌ−Ａｌａ−ＣＨ _３）、１．２２
（ｍ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈγ）、１．１９（ｍ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈγ’）
、１．１９（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ、Ｄ−Ａｌａ_１−ＣＨ _３）、０．０１−
０．００（ｓ、９Ｈ；ｓ、９Ｈ、ＴＭＳ−ＣＨ _３）。

【０１１７】 ^１Ｈ ＮＭＲ帰属は、１Ｄおよび２Ｄスペクトル（ＣＯＳＹ、ＲＯＥＳＹ）か
ら行う。 ^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ、５００ＭＨｚ）δｐｐｍ８．３６（ｄ、Ｊ＝７．２
Ｈｚ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ）、８．２１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−
Ａｌａ_２−ＮＨ）、８．１９（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ａｌａ_１−ＮＨ ）、８．１０（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−γ−Ｇｌｕ−ＮＨ）、７．３２
（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ、Ｌ−Ａｌａ−ＮＨ）、６．９５（ｔ、Ｊ＝５．０
Ｈｚ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−ＮＨＣＯＯＲ）、５．２６（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１
Ｈ、Ｈ−１’）、５．０７（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−７）、４．３０（
ｍ、１Ｈ、Ｌ−Ａｌａ−Ｈα）、４．２７（ｍ、１Ｈ、Ｄ−Ａｌａ_２−Ｈα）、
４．２３（ｍ、１Ｈ、Ｄ−Ａｌａ_１−Ｈα）、４．１３（ｍ、１Ｈ、Ｄ−γ−Ｇ
ｌｕ−Ｈα）、４．１２（ｍ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈα）、４．１２（ｍ、１Ｈ
、Ｈ−７’）、３．８７（ｍ、１Ｈ、Ｈ−２’）、３．７７（ｍ、２Ｈ、Ｈ−１
）、３．６２（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５’）、３．６０（ｓ、３Ｈ、Ｄ−Ａｌａ_２−Ｃ
ＯＯＣＨ _３）、３．５１（ｍ、１Ｈ、Ｈ−３’）、３．３３（ｍ、１Ｈ、Ｈ−４
’）、２．９１（ｍ、２Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈε）、２．１７（ｍ、２Ｈ、Ｄ−γ
−Ｇｌｕ−Ｈγ）、１．９４（ｍ、２Ｈ、Ｈ−６）、１．９１（ｍ、１Ｈ、Ｄ−
γ−Ｇｌｕ−Ｈβ）、１．５１（ｍ、１Ｈ、Ｄ−γ−Ｇｌｕ−Ｈβ）、１．８０
（ｓ、３Ｈ、ＮＨＣＯＣＨ _３−２’）、１．６２（ｓ、３Ｈ、ＣＨ_３−９）、１
．５８（ｓ、３Ｈ、ＣＨ_３−１０）、１．５０（ｍ、１Ｈ、Ｈ−３）、１．５１
（ｍ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈβ）、１．４９（ｍ、１Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈβ）、
１．３５（ｍ、２Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈδ）、１．５１（ｍ、１Ｈ、Ｈ−２）、１
．２７（ｍ、１Ｈ、Ｈ−２）、１．２９（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ、Ｄ−Ａｌ
ａ_１−ＣＨ _３）、１．１９（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ、Ｄ−Ａｌａ_２−ＣＨ _３ ）、１．２４（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ _３−８’）、１．２７（ｍ、１
Ｈ、Ｈ−５）、１．１１（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５）、１．２５（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ
、３Ｈ、Ｌ−Ａｌａ−ＣＨ _３）、１．２３（ｍ、２Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈγ）、０
．８４（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ_３−４）、０．０２−０．０１（ｓ、
９Ｈ；ｓ、９Ｈ、ＴＭＳ−ＣＨ _３）。

【０１１８】 ^１Ｈ ＮＭＲ帰属は、１Ｄおよび２Ｄスペクトル（ＣＯＳＹ）から行う。 ^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δｐｐｍ５．５８（１Ｈ、Ｈ−１
’）、５．１１（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−７）、４．５０−４．００（
Ｌ−Ａｌａ−Ｈα、Ｄ−γ−Ｇｌｕ−Ｈα、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈα、Ｄ−Ａｌａ_{１， ２−} Ｈα、Ｈ−７’）、４．１０（ｍ、１Ｈ、Ｈ−２’）、３．９８（ｍ、１Ｈ
、Ｈ−５’）、３．８７（ｍ、１Ｈ、Ｈ−６’）、３．８０（ｍ、１Ｈ、Ｈ−３
’）、３．７５（ｍ、１Ｈ、Ｈ−６’）、３．５６（ｍ、１Ｈ、Ｈ−４’）、２
．９４（ｍ、２Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈε）、２．３４（ｍ、２Ｈ、Ｄ−γ−Ｇｌｕ
−Ｈγ）、２．１０（ｓ、３Ｈ、ＮＨＣＯＣＨ _３−２’）、２．００（ｍ、１Ｈ
、Ｄ−γ−Ｇｌｕ−Ｈβ）、１．９２（ｍ、１Ｈ、Ｄ−γ−Ｇｌｕ−Ｈβ）、１
．９８（ｍ、２Ｈ、Ｈ−６）、１．７４（ｍ、２Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈδ）、１．
６７（ｓ、３Ｈ、ＣＨ_３−９）、１．６２（ｍ、１Ｈ、Ｈ−３）、１．６０（ｓ
、３Ｈ、ＣＨ_３−１０）、１．５０−１．３９（１２Ｈ、Ｌ−Ａｌａ−ＣＨ _３、
Ｄ−Ａｌａ_１，２−ＣＨ _３、ＣＨ _３−７’）、１．２３（ｍ、２Ｈ、Ｌ−Ｌｙｓ
−Ｈγ）、０．９３（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ_３−４）。

【０１１９】 ^１Ｈ ＮＭＲ帰属は、１Ｄおよび２Ｄスペクトル（ＣＯＳＹ）から行う。 ^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）δｐｐｍ５．５２（ｄ、Ｊ＝４．
５Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−１’）、５．１２（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−７）、
４．５０（ｍ、１Ｈ、Ｈ−ｂ１）、４．３９−４．１９（Ｌ−Ａｌａ−Ｈα、Ｄ
−γ−Ｇｌｕ−Ｈα、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｈα、Ｄ−Ａｌａ_１，２−Ｈα、Ｈ−７’）
、４．３１（ｍ、１Ｈ、Ｈ−ｂ２）、４．２０（ｍ、１Ｈ、Ｈ−２’）、４．０
０（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５’）、３．８９（ｍ、１Ｈ、Ｈ−６’）、３．７６（ｍ、
１Ｈ、Ｈ−３’）、３．７２（ｍ、１Ｈ、Ｈ−６’）、３．５１（ｍ、１Ｈ、Ｈ
−４’）、３．２２（ｍ、１Ｈ、Ｈ−ｂ４）、３．１８（ｍ、２Ｈ、Ｈ−ｂ９）
、２．９５（ｄｄ、Ｊ＝１２．５、５．０Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−ｂ３）、２．７１（
ｄ、Ｊ＝１２．５Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−ｂ３’）、２．２７（ｍ、２Ｈ、Ｄ−γ−Ｇ
ｌｕ−Ｈγ）、２．０２（ｓ、３Ｈ、ＮＨＣＯＣＨ _３−２’）、２．０１（ｍ、
２Ｈ、Ｈ−６）、１．８５（ｍ、２Ｈ、Ｄ−γ−Ｇｌｕ−Ｈβ）、１．６７（ｍ
、２Ｈ、Ｈ−ｂ５）、１．６７（ｓ、３Ｈ、ＣＨ_３ −９）、１．６１（ｓ、３Ｈ
、ＣＨ _３−１０）、１．６２（ｍ、１Ｈ、Ｈ−３）、１．５３（ｍ、２Ｈ、Ｈ−
ｂ１０）、１．４５−１．３７（１２Ｈ、Ｌ−Ａｌａ−ＣＨ _３、Ｄ−Ａｌａ_{１， ２} −ＣＨ _３、ＣＨ _３−８’）、１．３８（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５）、１．１７（ｍ、
１Ｈ、Ｈ−５）、０．９４（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ _３−４）。

【０１２０】 先行例は、本発明のさらなる説明として提供する。上記した特定の実施形態は
、決して本発明を限定すると解釈されるものではなく、本発明は、かかる実施形
態、並びに、本明細書で提供する開示を考察すれば通常の技術的理解力を有する
者には明らかである実施形態を広く包含するものである。本発明は、以下に示す
特許請求の範囲のみによって限定される。

【図面の簡単な説明】

４．図面の簡単な説明

【図１】 図１： 基質類似体５ｂの濃度および活性ＭｕｒＧ酵素の濃度の関数としての
ＧｌｃＮＡｃ転移のプロット。全反応は、０．５〜１．０μｇ全タンパク質およ
び９．４μＭ １４Ｃ−ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ（２６５ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）を含
む、１００ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．６、１ｍＭ ＭｇＣｌ_２中で実施する
。Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤ曲線の反応は、ＭｕｒＧを過剰発現する形質転換ＢＬ２
１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ株由来の細胞溶解液を使用して実施する：Ａ）−■ ７
．１μＭ ５ｂ；Ｂ）−◆ ３．５μＭ ５ｂ；Ｃ）−● ０．７１μＭ ５ｂ
；Ｄ）−○７．１μＭ ５ｂ＋熱処理細胞溶解液（６５℃、５分間）。Ｅ曲線の
反応は、内因性レベルのＭｕｒＧのみを発現するＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ
細胞溶解液を使用して実施する：Ｅ）−▽ ７．１μＭ ５ｂ。

【図２】 図２（ａ）： 可変基質としてＵＤＰ−ＧｉｃＮＡｃを用いた初期速度データ
の二重逆数プロット。初期速度は、７μＭ（◇）、１０μＭ（▽）、１５μＭ（
■）、３０μＭ（＋）、１００μＭ（●）の一定の受容体１ｂ濃度で測定する。
０．０８μＭの精製ＭｕｒＧを各反応に使用する。 図２（ｂ）： 勾配の二次プロット。 図２（ｃ）： 切片対［１ｂ］^−１。迅速な平衡連続機序を想定したデータの
分析により、以下の動態パラメーターが得られる：Ｋ_{ＵＤＰ−ＧＬＣＮＡＣ}＝１
１０±３０μＭ、Ｋ_１ｂ＝６０±１５μＭ。

【図３】 図３： 化合物１２ａおよびＵＤＰのＩＣ５０測定。全てのアッセイは、１８
μＭ １ｂおよび３４．３μＭ ＵＤＰ−ＧｌＣＮＡｃを用いて同一条件下で実
施する。各ＩＣ_５０値は、５または６個のデータ点を式にあてはめることにより
決定する： 値は、式：

【化１５】 ［式中、ｖ_１は、濃度（１）の阻害剤の存在下における初期速度であり、ｖ_０は
、阻害剤の非存在下の初期速度である］ に５または６個のデータ点をあてはめることにより決定する。

【図４】 図４： リピドＩおよび類似体（１ａ、１ｂ）の構造。

【図５】 図５： ＭｕｒＧ活性の基質をもとにした阻害剤。

【図６】 図６： ＭｕｒＧの別の受容体。

【図７】 図７： リピドＩ類似体（１ａ、１ｂ）の合成。試薬および条件：（ａ）ＣＣ
ｌ_３ＣＨ_２ＯＨ、ＤＣＣ／ＤＭＡＰ、ＴＨＦ、室温、４時間、８０％；（ｂ）１
．Ｈ_２／Ｐｄ、ＥｔＯＡｃ、室温、０．５時間；２．ＰｈＣＨ（ＯＣＨ_３）_２、
触媒ＴｓＯＨ、ＤＭＦ、室温、１０時間、８１％、２段階；（ｃ）ｉＰｒ_２ＮＰ
（ＯＢｎ）_２、^１Ｈ−テトラゾール、ＣＨ_２Ｃｌ_２、−２０℃−＞０℃、０．５
時間、その後、ｍＣＰＢＡ、−４０℃−＞２５℃、２時間、７０％；（ｄ）Ｚｎ
ダスト、９０％、ＡｃＯＨ／Ｈ_２Ｏ、室温、１時間、９１％；（ｅ）ＨＯＢｔ、
ピリジンＢｏｐ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、０℃、３０分間、８７％；（ｆ）１．Ｈ_２ ／Ｐｄ、ＣＨ_３ＯＨ、室温、３０分間、その後、ピリジン；２．（Ｒ）−（＋）
−β−シトロネロール−ＯＰＯ_３ＰＯ（ＯＰｈ）_２、ピリジン、ＣＨ_２Ｃｌ_２、
室温、１８時間、６８％；（ｇ）ＴＢＡＦ、ＤＭＦ、室温、２４時間、９３％；
（ｈ）６−（（ビオチノイル）アミノ）ヘキサン酸スクシンイミドエステル、Ｎ
ａＨＣＯ_３、Ｈ_２Ｏ／ジオキサン、室温、２時間、８０％。

【図８】 図８： ＭｕｒＧによる二糖の合成。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｚ // Ｃ１２Ｎ 9/10 Ｃ１２Ｎ 9/10 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，Ｖ Ｎ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 メン，ホンビン アメリカ合衆国 08544−0036 ニュージ ャージー州 プリンストン， ニュー サ ウス ビルディング ５ (72)発明者 パーク，ピーター アメリカ合衆国 08544−0036 ニュージ ャージー州 プリンストン， ニュー サ ウス ビルディング ５ (72)発明者 ジーイー，ミン アメリカ合衆国 08540 ニュージャージ ー州 プリンストン， ウエスト ドライ ブ 1106 Ｆターム(参考） 2G045 BB10 BB14 BB20 BB24 BB29 BB46 BB51 CB01 FB01 FB05 FB07 FB08 GC30 4B050 CC10 DD02 LL01 LL03 LL10 4B063 QA01 QA06 QQ67 QQ70 QR06 QR23 QS01 QS35 QX07 4C057 AA18 CC03 DD03 JJ09 4H011 AA02 BB19 DH11

Claims (36)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式： 【化１】 ［式中、「Ｒ」は、２個以上の炭素原子を含むアシル基であり、「Ｒ_１」は、１
   個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ｒ_２」は、水素
   、または１個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ａ」
   は、置換または非置換アミノ酸残基、または２個以上の置換または非置換アミノ
   酸残基を含むペプチドであり、「Ｒ_３」は、５個以上の炭素原子を含む置換また
   は非置換アルキル基である］ で示される化学部分を含む物質であって、該物質は、少なくとも野生型ＭｕｒＧ
   酵素に結合親和性を示し、ただし、該物質は、野生型ＭｕｒＧ酵素の天然基質で
   あるリピドＩではない前記物質。
2. 【請求項２】 少なくとも野生型ＭｕｒＧ酵素のＧｌｃＮＡｃトランスフェ
   ラーゼ活性受容体として役立つ、請求項１の物質。
3. 【請求項３】 少なくとも野生型ＭｕｒＧ酵素またはその相同体のＧｌｃＮ
   Ａｃトランスフェラーゼ活性を阻害する、請求項１の物質。
4. 【請求項４】 「Ｒ」はアセチル基である、請求項１の物質。
5. 【請求項５】 「Ｒ_１」はメチル基である、請求項１の物質。
6. 【請求項６】 「Ｒ_２」は水素である、請求項１の物質。
7. 【請求項７】 「Ｒ_３」はシトロネロールである、請求項１の物質。
8. 【請求項８】 「Ａ」はペンタペプチドである、請求項１の物質。
9. 【請求項９】 式（Ｉ）の物質の乳酸部分に付着しているアミノ酸残基は、
   Ａｌａである、請求項８の物質。
10. 【請求項１０】 前記Ａｌａに付着しているアミノ酸残基は、Ｇｌｕである
    、請求項９の物質。
11. 【請求項１１】 前記Ｇｌｕに付着しているアミノ酸残基は、Ｌｙｓである
    、請求項１０の物質。
12. 【請求項１２】 前記ペンタペプチドは、Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ
    −Ａｌａの配列を有し、そのアミノ末端は、アミド結合を介して、式（Ｉ）の物
    質の乳酸部分に付着している、請求項８の物質。
13. 【請求項１３】 「Ａ」はビオチン部分にコンジュゲートしている、請求項
    １の物質。
14. 【請求項１４】 前記ビオチン部分は、直接またはリンカー部分を介して、
    アミノ酸残基のアミノ基に共有結合的に付着している、請求項１３の物質。
15. 【請求項１５】 「Ｒ_３」は固体支持体に結合している、請求項１の物質。
16. 【請求項１６】 ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質ま
    たはその活性断片を含むことが想像されるサンプルにおいてＧｌｃＮＡｃトラン
    スフェラーゼ活性を検出する方法であって、 （ａ）ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質またはその活性断
    片を含むことが想像されるサンプルを提供し； （ｂ）サンプルを、有効量の標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ基質、および式： 【化２】 ［式中、「Ｒ」は、２個以上の炭素原子を含むアシル基であり、「Ｒ_１」は、１
    個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ｒ_２」は、水素
    、または１個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ａ」
    は、置換または非置換アミノ酸残基、または２個以上の置換または非置換アミノ
    酸残基を含むペプチドであり、「Ｒ_３」は、５個以上の炭素原子を含む置換また
    は非置換アルキル基である］ で示される化学部分を含む物質、ただし、該物質は野生型ＭｕｒＧ酵素の天然基
    質であるリピドＩではない物質と、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示す
    タンパク質またはその活性断片の存在下でグリコシド結合を介して該物質にカッ
    プリングした標識ＧｌｃＮＡｃを含む標識カップリング生成物を提供するのに有
    効な条件下で接触させ、 （ｃ）該サンプルにおけるＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性の指標である、
    該標識カップリング生成物の形成または存在を検出することを含む、前記方法。
17. 【請求項１７】 前記標識ＧｌｃＮＡｃ基質は、標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ
    である、請求項１６の方法。
18. 【請求項１８】 前記サンプルの少なくとも一部が、溶解細菌培養物の一部
    、その上清の一部、その膜画分の一部、そのタンパク質画分の一部、精製酵素、
    精製または合成脂質、若しくは同物の混合物を含む、請求項１６の方法。
19. 【請求項１９】 検出段階は、標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ基質からの標識カ
    ップリング生成物の分離を含む、請求項１６の方法。
20. 【請求項２０】 ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質ま
    たはその活性断片を含むことが想像されるサンプルにおいて、ＧｌｃＮＡｃトラ
    ンスフェラーゼ活性を検出するためのアッセイであって、式： 【化３】 ［式中、「Ｒ」は、２個以上の炭素原子を含むアシル基であり、「Ｒ_１」は、１
    個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ｒ_２」は、水素
    、または１個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ａ」
    は、置換または非置換アミノ酸残基、または２個以上の置換または非置換アミノ
    酸残基を含むペプチドであり、「Ｒ_３」は、５個以上の炭素原子を含む置換また
    は非置換アルキル基である］ で示される化合物を含み、ここで、該物質は、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ
    活性を示すタンパク質またはその活性断片の存在下でＧｌｃＮＡｃ基質とカップ
    リング生成物を形成でき、ただし、該物質は野生型ＭｕｒＧ酵素の天然基質であ
    るリピドＩではない前記アッセイ。
21. 【請求項２１】 さらに標識ＧｌｃＮＡｃ基質を含む、請求項２０のアッセ
    イ。
22. 【請求項２２】 潜在的抗菌活性を示す化合物のスクリーンであって、 （ｉ）ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質またはその活性断
    片、 （ｉｉ）式： 【化４】 ［式中、「Ｒ」は、２個以上の炭素原子を含むアシル基であり、「Ｒ_１」は、１
    個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ｒ_２」は、水素
    、または１個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ａ」
    は、置換または非置換アミノ酸残基、または２個以上の置換または非置換アミノ
    酸残基を含むペプチドであり、「Ｒ_３」は、５個以上の炭素原子を含む置換また
    は非置換アルキル基である］ で示される化学部分を含む物質、ただし、該物質は野生型ＭｕｒＧ酵素の天然基
    質であるリピドＩではない物質であって、該物質は、ＧｌｃＮＡｃトランスフェ
    ラーゼ活性を示すタンパク質またはその活性断片の存在下でＧｌｃＮＡｃ基質と
    カップリング生成物を形成できる物質、及び （ｉｉｉ）標識ＧｌｃＮＡｃ基質 を含む前記スクリーン。
23. 【請求項２３】 リピドＩの基質類似体であって、（ｉ）該基質類似体およ
    び標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃの存在下で、酵素のＧｌｃＮＡｃトランスフェラー
    ゼ活性により、標識カップリング生成物が生成されるような、少なくとも野生型
    ＭｕｒＧ酵素により受容される構造を有し、（ｉｉ）該標識カップリング生成物
    からの標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃの分離を促進する構造特徴を有する、前記基質
    類似体。
24. 【請求項２４】 式： 【化５】 ［式中、「Ｒ」は、２個以上の炭素原子を含むアシル基であり、「Ｒ_１」は、１
    個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ｒ_２」は、水素
    、または１個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ａ」
    は、置換または非置換アミノ酸残基、または２個以上の置換または非置換アミノ
    酸残基を含むペプチドであり、「Ｒ_３」は、Ｈ、１〜約５０個の炭素原子を含む
    脂肪族基、３〜約５５個の炭素原子を含む芳香族またはヘテロ芳香族基、ピロホ
    スフェート保護基および薬学的に許容されるその塩から選択し得る］ で示される化学部分を含む物質であって、該物質は、少なくとも可溶型ＭｕｒＧ
    酵素に結合親和性を示し、ただし、該物質は野生型ＭｕｒＧ酵素の天然基質であ
    るリピドＩではない前記物質。
25. 【請求項２５】 「Ａ」または「Ｒ_３」が、固体支持体に結合している、請
    求項２４の物質。
26. 【請求項２６】 前記固体支持体は、アビジンまたはストレプトアビジン覆
    膜レジンであり、前記「Ａ」または「Ｒ_３」は、ビオチン部分にコンジュゲート
    している、請求項２５の物質。
27. 【請求項２７】 前記ビオチン部分は、直接またはリンカー部分を介して、
    「Ａ」または「Ｒ_３」に付着している、請求項２６の物質。
28. 【請求項２８】 請求項２４の物質および薬学的に許容される担体を含む薬
    学的組成物。
29. 【請求項２９】 ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質ま
    たはその活性断片を含むことが想像されるサンプルにおいて、ＧｌｃＮＡｃトラ
    ンスフェラーゼ活性を検出する方法であって、 （ａ）ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質またはその活性断
    片を含むことが想像されるサンプルを提供し； （ｂ）サンプルを、有効量の標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ基質、および式： 【化６】 ［式中、「Ｒ」は、２個以上の炭素原子を含むアシル基であり、「Ｒ_１」は、１
    個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ｒ_２」は、水素
    、または１個以上の炭素原子を含む置換または非置換アルキル基であり、「Ａ」
    は、置換または非置換アミノ酸残基、または２個以上の置換または非置換アミノ
    酸残基を含むペプチドであり、「Ｒ_３」は、Ｈ、１〜約５０個の炭素原子を含む
    脂肪族基、３〜約５５個の炭素原子を含む芳香族またはヘテロ芳香族基、ピロホ
    スフェート保護基および薬学的に許容されるその塩から選択し得る］ で示される化学部分を含むが野生型ＭｕｒＧ酵素の天然基質であるリピドＩでは
    ない物質と、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質またはその
    活性断片の存在下でグリコシド結合を介して該物質にカップリングした標識Ｇｌ
    ｃＮＡｃを含む標識カップリング生成物を提供するのに有効な条件下で接触させ
    ； （ｃ）該サンプルにおけるＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性の指標である、
    該標識カップリング生成物の形成または存在を検出することを含む、前記方法。
30. 【請求項３０】 前記標識ＧｌｃＮＡｃ基質は、標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ
    である、請求項２９の方法。
31. 【請求項３１】 前記サンプルの少なくとも一部が、溶菌細菌培養物の一部
    、その上清の一部、その膜画分の一部、そのタンパク質画分の一部、精製酵素、
    可溶性酵素、精製または合成脂質または同物の混合物を含む、請求項３０の方法
    。
32. 【請求項３２】 検出段階は、標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ基質からの標識カ
    ップリング生成物の分離を含む、請求項２９の方法。
33. 【請求項３３】 前記検出段階は、ビオチンタグを介した固体支持体への前
    記「Ａ」または「Ｒ_３」の結合を含み、ここで、該固体支持体は、アビジンまた
    はストレプトアビジン覆膜レジンを含む、請求項２９の方法。
34. 【請求項３４】 前記検出段階は、シンチレーション近接アッセイの使用を
    介した、生成物形成の連続的監視を提供する、請求項３３の方法。
35. 【請求項３５】 前記物質は、ビオチン標識物質であり、前記分離は、アビ
    ジン覆膜レジンを通す濾過を含む、請求項１６の方法。
36. 【請求項３６】 ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性阻害能を有する化合
    物を同定する方法であって、 （ａ）ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ活性を示すタンパク質または活性断片を
    含むサンプルを提供し； （ｂ）サンプルを、潜在的阻害剤および有効量の標識ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃおよ
    び式： 【化７】 で示される物質と接触させ； （ｃ）カップリング生成物の形成または存在を検出し、潜在的阻害剤の非存在下
    で得られた量と、生成物の量を比較することを含む前記方法。