JP2002360248A - 除草的に活性な化合物の同定のためのｖｌｃｆａｅの使用 - Google Patents

除草的に活性な化合物の同定のためのｖｌｃｆａｅの使用

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クリスタ・レヘルト−クンツエ
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ルート・メイスナー
Klaus Tietjen
クラウス・テイートエン
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 新規な除草的に活性な化合物の同定のための
ＶＬＣＦＡＥの使用を提供すること。 【解決手段】 本発明は、新規な除草的に活性な化合物
の同定のための、超長鎖脂肪酸エロンガーゼの生物学的
活性を有する植物ポリペプチドをコードする核酸の使
用、及びそれによりコードされるポリペプチドの使用、
ならびにこれらのポリペプチドのモジュレーターの発見
のための方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は新規な除草的に活性
な化合物を同定するための、超長鎖脂肪酸エロンガーゼ
の生物学的活性を有する植物ポリペプチドをコードする
核酸の使用及びそれらによりコードされるポリペプチド
の使用、ならびにこれらのポリペプチドのモジュレータ
ーの発見のための方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び課題】脂肪酸エロンガーゼは３−ケト
アシル−ＣｏＡ−シンターゼ又は「縮合酵素」とも呼ば
れる。以下ＶＬＣＦＡＥと省略される超長鎖脂肪酸エロ
ンガーゼは、１８個より多いＣ原子の鎖長を有する脂肪
酸の生合成を担う（Ｍｉｌｌａｒ，Ａ．Ａ．ａｎｄ Ｋ
ｕｎｓｔ，Ｌ．１９９７，Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕ
ｒｎａｌ１２（１），１２１−１３１）。マロニル−Ｃ
ｏＡエステルは別として、ＶＬＣＦＡＥにより認識され
る基質はＣ18より大きいか又はそれと等しい（Ｃ１８
＋）鎖長を有する脂肪酸−ＣｏＡエステルのみであり、
該タンパク質はおそらくミクロソーム的に細胞質中に加
わっている。１８個までのＣ原子を有する脂肪酸の合成
は植物において初めから葉緑体中で行われ、脂肪酸はア
シルキャリヤータンパク質（ＡＣＰ）によりエステル化
される（ＷＯ ９８／５４９５４）。下記でＶＬＣＦＡ
と呼ぶ長鎖脂肪酸は、植物のクチクラ中のワックス層の
成分及び前駆体である。それらは細胞膜の成分及び前駆
体あるいは特殊な貯蔵トリアシルグリセリドの成分であ
り得る。しかしながら、それらは植物においてシグナル
機能を有する、又は二次メッセンジャー機能を有する脂
質、例えばスフィンゴ脂質の成分もしくは前駆体でもあ
り得る。（ＭＩｌｌａｒ，Ａ．Ａ． ａｎｄ Ｋｕｎｓ
ｔ，Ｌ．１９９７，Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａ
ｌ １２（１），１２１−１３１，Ｍｉｌｌａｒ ｅｔ
ａｌ．２０００，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｌａｎｔ
Ｓｃｉｅｎｃｅ ５，９５−１０１）。
【０００３】生化学的研究（Ｍａｔｔｈｅｓ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｚ．Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ．１９９８，５３
ｃ，１００４−１０１１，Ａｂｕｌｎａｊａ ａｎｄ
Ｈａｒｗｏｏｄ，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９
９１，３０（５），１４４５−１４４７）は、例えばク
ロロアセトアミド、オキシアセトアミド及びチオカルバ
メートのような除草性物質の種類が長鎖脂肪酸の合成を
阻害することを明らかにした。しかしながら、この研究
は、これが脂肪酸エロンガーゼ酵素の直接の阻害又はそ
れとの相互作用により起こるのかどうかを示さなかっ
た。同様に、植物中に存在する多くのエロンガーゼのい
ずれが阻害されるかは不明確である。生化学的及び細胞
生物学研究はさらに、ＢＡＳ １３−３３８のような化
合物がＣ１８：１脂肪酸延長を阻害することを明らかに
した（Ｍｏｅｌｌｅｒ ａｎｄ Ａｌｂｒｅｃｈｔ １
９９４，Ｊ．Ｐｌｎａｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１４４，３
７６−３８４）。含まれるエロンガーゼはこの研究にお
いても未知であった。
【０００４】ＶＬＣＦＡＥは、例えばアラビドプシス
（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）において遺伝子の複合ファ
ミリー（ｃｏｍｐｌｅｘ ｆａｍｉｌｙ）を示す植物−
特異的遺伝子である。このファミリー中の１つの遺伝子
であるｆｉｄｄｌｅｈｅａｄは、最外植物細胞層である
表皮において特異的に発現され、これらの細胞の分化を
抑制する。ＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤ−タンパク質の機能が
損なわれている突然変異体は、葉及び花器官の融合／接
着を示す。ｆｉｄｄｌｅｈｅａｄ突然変異体の花器官の
融合／接着はバイオリンの渦巻きに似ており、突然変異
体にこの名前を与えた。ｆｉｄｄｌｅｈｅａｄ植物は有
意な形態学的変化及び発育の大きな損傷を示す。（Ｌｏ
ｌｌｅ ｅｔ ａｌ．１９９２，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ
ｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １５２，３８３−３９２，Ｙ
ｅｐｈｒｅｍｏｖ ｅｔ ａｌ．１９９９，Ｔｈｅ Ｐ
ｌａｎｔ Ｃｅｌｌ １１，２１８７−２２０１，Ｐｒ
ｕｉｔｔ ｅｔ ａｌ．２０００，ＰＮＡＳ ９７
（３），１３１１−１３１６）。表皮細胞は本質的に融
合／接着に含まれる。さらに、細胞は細胞質の融合なし
で細胞外層を介してのみ融合する。表皮細胞は細胞外ク
チクラの形成を担うので、ｆｉｄｄｌｅｈｅａｄの機能
の喪失はクチクラ中のＶＬＣＦＡ成分における変化を生
じ、これが記載した器官の融合を引き起こすと仮定され
るべきである。
【０００５】ＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤポリペプチドをコー
ドする核酸は受け入れ番号ＡＪ０１０７１３又はＯ６４
８４６（ＧｅｎＥＭＢＬ）の下に入手可能であり、ＷＯ
９８／５４９５４に示されており、本出願において配
列番号：１の下に記載されている。
【０００６】エロンガーゼの多様性、それらの基質特異
性及びそれらの組織−特異的発現は、植物が多様な貯
蔵、クチクラ及びシグナル脂質を生産することを可能に
する。この合成の多様性を、形質転換植物における異種
遺伝子発現を介して実際に用いることができる。さら
に、遺伝子転移により、特定の基質特異性を有するエロ
ンガーゼの故の合成の能力を１つの植物の種から他の種
に移すことが可能である。他方、例えばプロモーターの
交換により、組織特異的脂質合成を１つの植物種内で意
図的に変化させることも可能である。種々の公開文献が
この型の研究を扱っている。（例えばＷＯ ９６／１３
５８２、ＷＯ ９８／４６７６６、ＷＯ ９８／５４９
５４、ＷＯ ９５／１５３８７、ＷＯ ００／０８１７
２を参照されたい）。
【０００７】
【課題を解決するための手段】今回、驚くべきことに、
オキシアセトアミドの種類からの除草的に活性な物質、
フルフェナセト（ｆｌｕｆｅｎａｃｅｔ）を用いてｆｉ
ｄｄｌｅｈｅａｄ表現型を誘導できることが見いだされ
た。活性物質はｆｉｄｄｌｅｈｅａｄを表現型模写す
る。さらに、活性物質はロゼット葉の融合も生ずる。
【０００８】オキシアセトアミド、フルフェナセトが花
器官のｆｉｄｄｌｅｈｅａｄ−様融合を誘導するという
発見は、ＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤ（ＦＤＨ）、超長鎖脂肪
酸エロンガーゼが除草的に活性な物質の相互作用パート
ナー（標的）であるという結論に導く。
【０００９】ＶＬＣＦＡＥは、特にアラビドプシス及び
他の植物からのＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤも、互いに広範囲
の相同性を示すので、適した相同核酸及び遺伝子ファミ
リーの他のメンバーによりコードされる相同ポリペプチ
ドを、除草的に活性な物質及び前記の種類の物質のため
の分子相互作用パートナー（標的）として用いることも
できる。かくして除草的に活性な物質は種々のＶＬＣＦ
ＡＥと相互作用することができるが、植物において起こ
る種々のＶＬＣＦＡＥとの相互作用は必ずしも同じ強さ
ではあり得ない。これは中でも、観察される除草剤の種
類の選択性を説明し得る。遺伝子ファミリーの他のメン
バー、例えばアラビドプシス・タリアナ（Ａｒａｂｉｄ
ｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）からのＦＩＤＤＬＥＨ
ＥＡＤ（ＦＤＨ）（受け入れ番号 ＡＪ０１０７１３又
はＯ６４８４６）と相同であるアラビドプシスからの脂
肪酸エロンガーゼ及びベータ−ケトアシル−ＣｏＡシン
ターゼを下記の表及び図１において、限定的にではなく
例として挙げる。示されている遺伝子の間の系統発生的
関連の程度もそれから定性的に推定され得る。
【００１０】
【表１】
【００１１】Ｂｏｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．２０００（Ｐ
ｅｓｔ Ｍａｎａｇ．Ｓｃｉ．５６，４９７−５０８）
による公開文献における結論は、植物ＶＬＣＦＡＥがク
ロロアセトアミドの一次標的（ｐｒｉｍａｒｙ ｔａｒ
ｇｅｔｓ）だということである。
【００１２】しかしながら、ＶＬＣＦＡＥが除草的な活
性な物質に関するタンパク質標的であり、新規な改良さ
れた除草的に活性な物質を同定するために、この目的の
ために適した方法（アッセイ）において用いられ得るこ
とは、ＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤＶＬＣＦＡＥの例により本
出願において初めて見いだされる。
【００１３】これは特に、好ましくはＦＤＨへの６０
％、特に好ましくは８０％、そして特別に好ましくは９
０％の相同性を有するポリペプチドを包含して、アラビ
ドプシスからのＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤ（ＦＤＨ）ポリペ
プチドへの相同性を示す、植物からのポリペプチドに当
てはまる。
【００１４】これに関し、新規な除草的に活性な物質を
同定するために、好ましくはＦＤＨへの６０％、特に好
ましくは８０％、そして特別に好ましくは９０％の相同
性を有するポリペプチドを包含して、アラビドプシスか
らのＦＤＨ−相同ＶＬＣＦＡＥが特に好ましい。
【００１５】新規な除草的に活性な物質を同定するため
にアラビドプシスからのＦＤＨポリペプチドを用いるこ
とは、特別に好ましいやり方で可能である。
【００１６】従って本発明は、ＶＬＣＦＡＥモジュレー
ターを同定するための、ＶＬＣＦＡＥの生物学的活性を
有する植物ポリペプチドの使用に関する。
【００１７】本発明は同様に、ＶＬＣＦＡＥモジュレー
ターを同定するための、アラビドプシスからのＦＤＨポ
リペプチドへの６０％、好ましくは８０％、そして特に
好ましくは９０％の相同性を有する、ＶＬＣＦＡＥの生
物学的活性を持った植物ポリペプチドの使用に関する。
【００１８】本発明は同様に、ＶＬＣＦＡＥモジュレー
ターを同定するための、アラビドプシスからのＦＤＨポ
リペプチドへの６０％、好ましくは８０％、そして特に
好ましくは９０％の相同性を有する、ＶＬＣＦＡＥの生
物学的活性を持ったアラビドプシスからのポリペプチド
の使用に関する。
【００１９】本発明は特に、ＶＬＣＦＡＥモジュレータ
ーを同定するための、配列番号：２を有するＦＩＤＤＬ
ＥＨＥＡＤポリペプチドの使用に関する。
【００２０】本発明は同様に、ＶＬＣＦＡＥモジュレー
ターを同定するための、ＶＬＣＦＡＥをコードする核酸
の使用に関する。
【００２１】本発明は同様に、ＶＬＣＦＡＥをコード
し、且つ配列番号：１のコード配列に従うｆｉｄｄｌｅ
ｈｅａｄ配列への６０％、好ましくは８０％、そして特
に好ましくは９０％の相同性を有する核酸の、ＶＬＣＦ
ＡＥモジュレーターを同定するための使用に関する。こ
れに関し、アラビドプシスの相同染色体が特に好まし
い。
【００２２】本発明は特に、ＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤポリ
ペプチドをコードし、且つ配列番号：１を有する核酸
の、ＶＬＣＦＡＥモジュレーターを同定するための使用
にも関する。
【００２３】本発明に従って用いられるべきポリヌクレ
オチド又はポリヌクレオチドフラグメントは、好ましく
は植物からのポリヌクレオチドに対応するものである。
【００２４】本発明に従って用いられるべきポリヌクレ
オチド又はポリヌクレオチドフラグメントは、特に好ま
しくはアラビドプシスからのポリヌクレオチドに対応す
るものである。
【００２５】本発明に従って用いられるべきポリペプチ
ドは、特別に好ましくは、 ａ）配列番号：２に示される配列、 ｂ）配列番号：１を有する核酸によりコードされる配
列、 ｃ）ＶＬＣＦＡＥの生物学的活性を依然として有してい
る、ａ）又はｂ）の下に定義される配列の部分的配列、 ｄ）ａ）〜ｃ）の下に定義される配列と少なくとも６０
％、好ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一性
を有する配列、 ｅ）配列番号：２に示されるポリペプチドのＣ−末端に
局在する活性部位を含む配列、 ｆ）ｅ）の下に定義される配列と少なくとも６０％、好
ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一性を有す
る配列、 ｇ）配列番号：２に示されるポリペプチドの特異的Ｎ末
端を含む配列、ならびに ｈ）ｇ）の下に定義される配列と少なくとも６０％、好
ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一性を有す
る配列、から選ばれる配列を含む。
【００２６】本発明に従って用いられるべき核酸の特別
に好ましい態様は、配列番号：１において示されるＦＤ
Ｈ−コード配列を有するｃＤＮＡ分子により示され、配
列番号：１において示されるイントロンはもう存在しな
い。
【００２７】配列番号：１において示される核酸のＦＤ
Ｈ−コード領域は位置１７６〜５８３、１１１９〜１７
４５及び１８２１〜２４３８に及んでいる。
【００２８】本発明に従って用いられるべき核酸は特
に、一本鎖もしくは二本鎖デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）
又はリボ核酸（ＲＮＡ）である。好ましい実施態様は、
ゲノムＤＮＡのフラグメントであり、それは配列番号：
１において示されるイントロン及びｃＤＮＡｓを含有す
ることができる。
【００２９】本発明に従って用いられるべき核酸は、好
ましくは植物からのゲノムＤＮＡに対応するＤＮＡもし
くはＤＮＡフラグメントである。
【００３０】本発明に従って用いられるべき核酸は、特
に好ましくはアラビドプシスからのゲノムＤＮＡに対応
するＤＮＡもしくはＤＮＡフラグメントである。
【００３１】本発明に従って用いられるべき核酸は、特
別に好ましくは、 ａ）配列番号：１に示される配列、 ｂ）配列番号：２に示されるアミノ酸配列を含むポリペ
プチドをコードする配列、 ｃ）ａ）又はｂ）の下に定義される配列の少なくとも１
４塩基対の長さの部分的配列、 ｄ）ａ）又はｂ）の下に定義される配列にハイブリッド
形成する配列、 ｅ）ａ）又はｂ）の下に定義される配列と少なくとも６
０％、好ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一
性を有する配列、 ｆ）配列番号：２に示されるポリペプチドのＣ−末端に
局在する活性部位をコードする配列、 ｇ）ｆ）の下に定義される配列と少なくとも６０％、好
ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一性を有す
る配列、 ｈ）配列番号：２に示されるポリペプチドの特異的Ｎ末
端をコードする配列、 ｉ）ｈ）の下に定義される配列と少なくとも６０％、好
ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一性を有す
る配列、 ｊ）ａ）〜ｉ）の下に定義される配列に相補的である配
列、ならびに ｋ）遺伝コードの縮重のために、ａ）〜ｈ）の下に定義
される配列と同じアミノ酸配列をコードする配列 から選ばれる配列を含む。
【００３２】本発明に従って用いられるべき核酸の特別
に好ましい態様は、配列番号：１に示されるＦＤＨ−コ
ード配列を有するｃＤＮＡ分子により示される。
【００３３】本明細書で用いられる「ハイブリッド形成
する」という用語は、一本鎖核酸分子が相補的鎖と塩基
対形成するようになるプロセスを記述する。この方法
で、本明細書に開示する配列情報から出発して、例えば
配列番号：２に示されるアミノ酸配列と同じか、もしく
は類似のエロンガーゼの性質を有するＶＬＣＦＡＥ、特
にＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤをコードするＤＮＡフラグメン
トをアラビドプシス以外の植物から単離することができ
る。かくして例えば、配列的及び機能的にＦＤＨに相同
であり、新規な除草的に活性な物質を同定するために適
している核酸配列及びポリペプチドを発見するために、
ＦＤＨに特徴的なＮ−末端ポリペプチド配列をコードす
る核酸配列を用いることができる。
【００３４】ハイブリッド形成条件は以下の式により近
似的に計算される： 融解温度Ｔｍ＝８１．５℃＋１６．６ ｌｏｇ［ｃ（Ｎ
ａ+）］＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ））−５００／ｎ （Ｌｏｔｔｓｐｅｉｃｈ ａｎｄ Ｚｏｒｂａｓ，１９
９８）。
【００３５】これにおいて、ｃは濃度であり、ｎは塩基
対におけるハイブリッド形成配列セクション（ｓｅｃｔ
ｉｏｎ）の長さである。＞１００ｂｐの配列の場合、５
００／ｎの項は省略される。最高緊縮を用い、洗浄はＴ
ｍより５〜１５℃低い温度及び１５ｍＭ Ｎａ+のイオ
ン濃度（０．１ｘＳＳＣに等しい）で行われる。ハイブ
リッド形成にＲＮＡプローブが用いられる場合、融解温
度はそれより１０〜１５℃高い。
【００３６】好ましいハイブリッド形成条件を下記に示
す： ハイブリッド形成溶液：ＤＩＧ Ｅａｓｙ Ｈｙｂ（Ｒ
ｏｃｈｅにより供給） ハイブリッド形成温度：３７℃、好ましくは４２℃（Ｄ
ＮＡ−ＤＮＡ）、５０℃（ＤＮＡ−ＲＮＡ）。 １．洗浄段階：２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ 室温で２
ｘ５分； ２．洗浄段階：１ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ ５０℃で
２ｘ１５分；好ましくは０．５ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤ
Ｓ ６５℃で２ｘ１５分；特に好ましくは０．２ｘＳＳ
Ｃ、６８℃で２ｘ１５分。
【００３７】「活性部位」という用語は、配列番号：２
に示される配列の位置１９１〜位置３１０のアミノ酸配
列を有するペプチド領域に機能的に対応するペプチド領
域を指す。反応性アミノ酸システインは位置２５７に位
置する。
【００３８】核酸の同一性の程度は、好ましくはＮＣＢ
Ｉ ＢＬＡＳＴＮプログラム、バージョン２．０．４．
（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７）を用い
て決定される。
【００３９】本発明は、植物細胞において、特にアラビ
ドプシスにおいて、天然には本発明に従って用いられる
べき核酸の転写を調節している調節領域の、ＶＬＣＦＡ
Ｅ阻害剤を同定するための方法における使用にも関す
る。
【００４０】本明細書で用いられる場合、「調節領域」
という用語は、細胞タンパク質と相互作用し、転写の調
節を生ずる、関連する遺伝子の非翻訳領域、例えばプロ
モーター、エンハンサー、リプレッサー又はアクチベー
タ結合部位、あるいは終止配列を指す。
【００４１】本発明はさらに、本発明に従って用いられ
るべき核酸及び異種プロモーターを含むＤＮＡ構築物
の、ＶＬＣＦＡＥモジュレーターを同定するための使用
に関する。
【００４２】本明細書で用いられる場合、「異種プロモ
ーター」という用語は、原生物において関連する遺伝子
の発現を調節しているプロモーターの性質と異なる性質
を有するプロモーターを指す。
【００４３】異種プロモーターの選択は、発現に原核細
胞が用いられるか、もしくは真核細胞が用いられるか、
又は無−細胞系が用いられるかに依存する。異種プロモ
ーターの例は植物細胞のためのカリフラワーモザイクウ
ィルスの３５Ｓプロモーター、酵母細胞のためのアルコ
ールデヒドロゲナーゼプロモーター、原核細胞又は無−
細胞系のためのＴ３、Ｔ７又はＳＰ６プロモーターなら
びに植物からの組織−特異的プロモーター、例えばＦＩ
ＤＤＬＥＨＥＡＤの表皮−特異的プロモーター及び他の
組織−特異的エロンガーゼのプロモーターである。
【００４４】本発明はさらに、本発明に従って用いられ
るべき核酸、本発明に従って用いられるべき調節領域又
は本発明に従って用いられるべきＤＮＡ構築物を含有す
るベクターの、ＶＬＣＦＡＥモジュレーターを同定する
ための方法における使用に関する。
【００４５】用いられ得るベクターは、分子生物学実験
室で用いられるすべてのファージ、プラスミド、ファー
ジミド、ファスミド、コスミド、ＹＡＣｓ、ＢＡＣｓ、
人工染色体又は粒子衝撃に適した粒子である。
【００４６】好ましいベクターは、植物細胞のためのｐ
ＢＩＮ（Ｂｅｖａｎ，１９８４）及びその誘導体、酵母
細胞のためのｐＦＬ６１（Ｍｉｎｅｔ ｅｔ ａｌ，１
９９２）又は例えばｐ４ＸＸｐｒｏｍ ベクター系列
（Ｍｕｍｂｅｒｇ Ｄ．，Ｍｏｅｌｌｅｒ Ｒ．ａｎｄ
Ｆｕｎｋ Ｍ．１９９５，Ｇｅｎｅ １５６，１１９
−１２２）、バクテリア細胞のためのｐＢＬＵＥＳＣＲ
ＩＰＴ−ベクター、ファージのためのｌａｍｄａＺＡＰ
（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）である。
【００４７】本発明は、本発明に従って用いられるべき
核酸、本発明に従って用いられるべきＤＮＡ構築物又は
本発明に従って用いられるべきベクターを含有する宿主
細胞の、ＶＬＣＦＡＥモジュレーターを同定するための
使用にも関する。
【００４８】本明細書で用いられる場合、「宿主細胞」
という用語は、天然には本発明に従って用いられるべき
核酸を含有しておらず、且つ本発明に従って用いられる
べきポリペプチドの発現に適している細胞を指す。
【００４９】適した宿主細胞は原核細胞、好ましくは
Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）及び真核細胞、例えばサッカ
ロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ピチア・パストリス（Ｐｉ
ｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、昆虫、植物の細胞、カ
エル卵細胞及び哺乳類細胞系の両方である。
【００５０】本明細書で用いられる場合、「ポリペプチ
ド」という用語は、通常ペプチド、オリゴペプチドもし
くはオリゴマーと称される短いアミノ酸鎖及び通常タン
パク質と称されるもっと長いアミノ酸鎖の両方を指す。
それは、自然のプロセス、例えば翻訳後プロセシングに
より、又は当該技術の現状である化学的方法により修飾
されていることができるアミノ酸鎖を包含する。そのよ
うな修飾はポリペプチドにおいて種々の点で、且つ複数
回、例えばペプチド主鎖上、アミノ酸側鎖上、アミノ末
端上及び／又はカルボキシル末端上で起こり得る。それ
らは例えばアセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、
アミド化、フラビン、ヘム部分、ヌクレオチドもしくは
ヌクレオチド誘導体、脂質もしくは脂質誘導体又はホス
ファチジルイノシトールとの共有結合、環化、ジスルフ
ィド架橋の形成、脱メチル化、シスチン形成、ホルミル
化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ヒドロキ
シル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、
タンパク質分解プロセシング、リン酸化、セレノイル化
及びアミノ酸のｔＲＮＡ−媒介付加を含む。
【００５１】本発明に従うペプチドは「成熟（ｍａｔｕ
ｒｅ）」タンパク質の形態、あるいは例えば融合タンパ
ク質のようなもっと大きなタンパク質の一部の形態にあ
ることができる。それらはさらに分泌もしくは「リーダ
ー」配列、プロ配列（ｐｒｏｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）、簡
単な精製を可能にする配列、例えば多重ヒスチジン残基
（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ ｒｅｓｉｄ
ｕｅｓ）又は追加の安定化アミノ酸を有していることが
できる。
【００５２】本発明に従って用いられるべきポリペプチ
ドは完全なＶＬＣＦＡＥである必要はなく、それらがま
だ完全なＶＬＣＦＡＥの生物学的活性を有している限
り、それらのフラグメントのみであることもできる。配
列番号：２に示されるアミノ酸配列を有するＶＬＣＦＡ
Ｅと同じ型の生物学的活性を働かせるポリペプチドも本
発明に従うとみなされる。本発明に従って用いられるべ
きポリペプチドはさらに、アラビドプシスからのＶＬＣ
ＦＡＥに対応する必要はない。以下の植物のＶＬＣＦＡ
Ｅもしくはそれらのフラグメントに相同である、まだ後
者の生物学的活性を働かせることができるポリペプチド
も、本発明に従って用いられるべきポリペプチドとみな
される： 以下の属の双子葉植物：イチビ、ヒユ、ブタクサ、アノ
ダ（ａｎｏｄａ）、アンテミス（Ａｎｔｈｅｍｉｓ）、
アファネス（Ａｐｈａｎｅｓ）、アトリプレクス（Ａｔ
ｒｉｐｌｅｘ）、ベリス（Ｂｅｌｌｉｓ）、ビデンス
（Ｂｉｄｅｎｓ）、カプセラ（Ｃａｐｓｅｌｌａ）、カ
ルズウス（Ｃａｒｄｕｕｓ）、カシヤ（Ｃａｓｓｉ
ａ）、ヤグルマギク、アカザ、シルシウム（Ｃｉｒｓｉ
ｕｍ）、コンボルブルス（Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓ）、
チョウセンアサガオ、デスモジウム（Ｄｅｓｍｏｄｉｕ
ｍ）、エメクス（Ｅｍｅｘ）、エリシムム（Ｅｒｙｓｉ
ｍｕｍ）、トウダイグサ、チシマオドリコ、ガリンソガ
（Ｇａｌｉｎｓｏｇａ）、ヤエムグラ、ハイビスカス、
サツマイモ、コチア（Ｋｏｃｈｉａ）、オドリコソウ、
マメグンバイナズナ、リンデルニア（Ｌｉｎｄｅｒｎｉ
ａ）、マツリカリア（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ）、メンタ
（Ｍｅｎｔｈａ）、メルクリアリス（Ｍｅｒｃｕｒｉａ
ｌｉｓ）、ムルゴ（Ｍｕｌｌｕｇｏ）、ワスレナグサ、
ケシ、ファルビチス（Ｐｈａｒｂｉｔｉｓ）、プランタ
ゴ（Ｐｌａｎｔａｇｏ）、ミチヤナギ、スベリヒユ、ウ
マノアシガタ、ラファヌス（Ｒａｐｈａｎｕｓ）、イヌ
ガラシ、ロタラ（Ｒｏｔａｌａ）、ルメクス（Ｒｕｍｅ
ｘ）、サルソラ（Ｓａｌｓｏｌａ）、ハンゴンソウ、セ
スバニア（Ｓｅｓｂａｎｉａ）、シダ（Ｓｉｄａ）、カ
ラシ、ナス、ノゲシ、スフェノクレア（Ｓｐｈｅｎｏｃ
ｌｅａ）、ハコベ、タンポポ、トラスピ（Ｔｈｌａｓｐ
ｉ）、シロツメクサ、イラクサ、クワガタソウ、スミ
レ、オナモミ。 以下の属の双子葉植物：ナンキンマメ、フダンソウ、ア
ブラナ、キウリ、カボチャ、ヒマワリ、ニンジン、ダイ
ズ、ワタ、サツマイモ、アキノノゲシ、アマ、トマト、
タバコ、インゲンマメ、エンドウ、ソラマメ。 以下の属の単子葉植物：アエギロプス（Ａｅｇｉｌｏｐ
ｓ）、カモジグサ、ヌカボ、スズメノテッポウ、アペラ
（Ａｐｅｒａ）、カラスムギ、ブラキアリア（Ｂｒａｃ
ｈｉａｒｉａ）、キツネガヤ、センクルス（Ｃｅｎｃｈ
ｒｕｓ）、コメリナ（Ｃｏｍｍｅｌｉｎａ）、シノドン
（Ｃｙｎｏｄｏｎ）、カヤツリグサ、ダクチロクテニウ
ム（Ｄａｃｔｙｌｏｃｔｅｎｉｕｍ）、ヒメシバ、ヒ
エ、ハリイ、オヒシバ、エラグロスチス（Ｅｒａｇｒｏ
ｓｔｉｓ）、エリオクロア（Ｅｒｉｏｃｈｌｏａ）、ウ
シノケグサ、テンツキ、ヘテランテラ（Ｈｅｔｅｒａｎ
ｔｈｅｒａ）、イムペラタ（Ｉｍｐｅｒａｔａ）、カモ
ノハシ、レプトクロア（Ｌｅｐｔｏｃｈｌｏａ）、ドク
ムギ、コナギ、キビ、スズメノヒエ、ファラリス（Ｐｈ
ａｌａｒｉｓ）、アワガエリ、イチゴツナギ、ロトボエ
リア（Ｒｏｔｔｂｏｅｌｌｉａ）、オモダカ、ホタル
イ、エノコロ、モロコシ。 以下の属の単子葉植物：ネギ、パイナップル、アスパラ
ガス、カラスムギ、オオムギ、イネ、キビ、サトウキ
ビ、ライムギ、ツリチカレ（Ｔｒｉｔｉｃａｌｅ）、コ
ムギ、トウモロコシ。
【００５３】本発明に従って用いられるべきポリペプチ
ドは、それらがまだ完全な脂肪酸エロンガーゼの生物学
的活性を働かせる限り、天然に存在するＶＬＣＦＡＥの
対応する領域と比較して、欠失又はアミノ酸置換を有し
ていることができる。同類置換が好ましい。そのような
同類置換は、以下の群からの１つのアミノ酸が別のアミ
ノ酸により置き換えられている変異を含む： １．非極性又は極性が低い小さい脂肪族残基：Ａｌａ、
Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ及びＧｌｙ； ２．極性で負に帯電した残基及びそれらのアミド：Ａｓ
ｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ及びＧｌｎ； ３．極性で正に帯電した残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ及びＬｙ
ｓ； ４．大きな脂肪族の非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌ
ｅ、Ｖａｌ及びＣｙｓ；ならびに ５．芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ及びＴｒｐ。
【００５４】以下のリストは好ましい同類置換を示す：
【００５５】
【表２】
【００５６】かくして本発明は、ＶＬＣＦＡＥの生物学
的活性を働かせ、且つ配列番号：２に示される配列と、
それらの全長に及んで少なくとも６０％の同一性、好ま
しくは８０％の同一性、特に好ましくは９０％の同一
性、そして特に好ましくは９７〜９９％の同一性を示す
アミノ酸配列を含むポリペプチドの使用にも関する。
【００５７】アミノ酸配列の同一性の程度は好ましくは
ＢＬＡＳＴＰ＋ＢＥＡＵＴＹプログラム、バージョン
２．０．４．（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９
９７）により決定される。
【００５８】本発明に従って用いられるべきポリペプチ
ドの好ましい実施態様は、配列番号：２に示されるアミ
ノ酸配列を有するＶＬＣＦＡＥ ＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤ
（ＦＤＨ）である。
【００５９】ＦＤＨアミノ酸配列は、相同性に基づいて
（Ｙｅｐｈｒｅｍｏｖ ｅｔ ａｌ．１９９９）、脂肪
酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）のファミリーに属する。ＦＤ
Ｈタンパク質は約５３〜７５のアミノ酸の領域及び約９
３〜１１５の領域に２つの可能的な（ｐｏｔｅｎｔｉａ
ｌ）貫膜ドメインを有する。
【００６０】Ｎ末端における最初の４５〜５０アミノ酸
はＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤタンパク質に特異的であり、今
までのところ、それらの生物学的役割は完全に明らかに
されてはいない。Ｎ末端は非常に特異的であり、ＦＤＨ
に関する認識配列としてそれを用いることができる。
【００６１】本明細書で用いられる場合、「ＶＬＣＦＡ
Ｅの生物学的活性」という用語は、１８個及びそれより
多いＣ原子の鎖長を有する脂肪酸を生合成する能力、な
らびに基質であるマロニル−ＣｏＡエステル及び／又は
Ｃ18より大きいか、もしくはそれと等しい鎖長を有する
脂肪酸ＣｏＡエステルを認識する能力を意味する。
【００６２】本発明に従って用いられるべき核酸は、通
常の方法で調製され得る。例えば核酸分子を完全に化学
的に合成することができる。本発明に従う核酸の短片を
化学的に合成し、そのようなオリゴヌクレオチドを放射
性標識するか、又は蛍光色素で標識することもできる。
標識されたオリゴヌクレオチドを用い、植物ｍＲＮＡか
ら出発して作られるｃＤＮＡバンクをスクリーニングす
ることもできる。標識されたオリゴヌクレオチドがハイ
ブリッド形成するクローンを関連するＤＮＡフラグメン
トの単離のために選択する。単離されたＤＮＡの特性化
の後、本発明に従って用いられるべき核酸が簡単な方法
で得られる。
【００６３】本発明に従って用いられるべき核酸を、化
学的に合成されたオリゴヌクレオチドを用いるＰＣＲ法
により調製することもできる。
【００６４】本明細書で用いられる場合、「オリゴヌク
レオチド（単数もしくは複数）」という用語は、１０〜
５０ヌクレオチド、好ましくは１５〜３０ヌクレオチド
から成るＤＮＡ分子を意味する。それらは化学的に合成
され、プローブとして用いられ得る。
【００６５】本発明に従う核酸によりコードされる本発
明に従って用いられるべきポリペプチドは、本発明に従
って用いられるべき核酸を含有する宿主細胞を適した条
件下で培養することにより調製され得る。次いで細胞又
は培地から通常の方法で所望のポリペプチドを単離する
ことができる。試験管内システムにおいてポリペプチド
を調製することもできる。
【００６６】本発明に従って用いられるべき核酸を用い
て宿主細胞により合成される、本発明に従って用いられ
るべきポリペプチドを単離するための迅速な方法は、融
合パートナーが簡単な方法でアフィニティー−精製され
得る融合タンパク質の発現で開始される。融合パートナ
ーは、例えばグルタチオンＳ−トランスフェラーゼであ
ることができる。その場合、融合タンパク質をグルタチ
オンアフィニティーカラム上で精製することができる。
例えば融合パートナーと、精製されるべき本発明に従う
ポリペプチドの間のリンカーにおける部分的タンパク質
分解的切断により、融合パートナーを除去することがで
きる。リンカーは、トリプシン切断のための部位を限定
するアルギニン及びリシン残基のような標的アミノ酸を
それが含むように設計され得る。オリゴヌクレオチドを
用いる標準的クローニング法を用いることにより、その
ようなリンカーを形成することができる。
【００６７】さらに別の可能な精製法は、調製的電気泳
動、ＦＰＬＣ、ＨＰＬＣ（例えばゲル濾過、逆相もしく
はわずかに疎水性のカラムを用いる）、ゲル濾過、分別
沈殿、イオン交換クロマトグラフィー及びアフィニティ
ークロマトグラフィーに基づく。
【００６８】ＶＬＣＦＡＥは膜タンパク質もしくは膜−
関連タンパク質なので、例えばポリペプチドの二次構造
及び三次構造にわずかにしか、又は全く影響を与えない
洗剤、例えば非イオン性洗剤を用いる洗剤抽出を好まし
くは精製法の間に行う。
【００６９】本発明に従って用いられるべきポリペプチ
ドの精製は、本発明に従う核酸を発現する宿主細胞から
出発する膜の単離を包含し得る。そのような細胞は好ま
しくは本発明に従って用いられるべきポリペプチドを、
膜画分中のポリペプチドの量が天然にＦＤＨ遺伝子を発
現する細胞の同等の膜中に見いだされる量より少なくと
も１０倍多いような十分なコピー数で発現し；該量は特
に好ましくは１００倍、特別に好ましくは少なくとも１
０００倍多い。
【００７０】アッセイ目的のために、膜画分、特にミク
ロソーム画分を濃縮し、特別な精製なしで用いることも
できる。
【００７１】本明細書で用いられる場合、「単離又は精
製」という用語は、本発明に従って用いられるべきポリ
ペプチドを細胞又は組織の他のタンパク質又は他の巨大
分子から分離することを意味する。本発明に従って用い
られるべきポリペプチドを含有する組成物を、宿主細胞
からの調製物（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）と比較して、
タンパク質含有率に関して好ましくは少なくとも１０−
倍、そして特に好ましくは少なくとも１００−倍濃縮す
る。
【００７２】本発明に従って用いられるべきポリペプチ
ドを、融合パートナーがなくても、ポリペプチドに結合
する抗体によりアフィニティー−精製することができ
る。
【００７３】本発明は、本発明に従うポリペプチドに結
合し、それらの性質を改変する化学化合物の発見のため
の方法にも関する。本発明に従うＶＬＣＦＡＥの多様な
機能のために、活性に影響を与えるモジュレーターは新
規な成長−調節もしくは除草性活性物質に相当する。モ
ジュレーターはアゴニストもしくはアンタゴニスト又は
阻害剤又は活性化剤であることができる。
【００７４】本明細書で用いられる場合、「アゴニス
ト」という用語は、ＶＬＣＦＡＥ活性を助長するか、又
は強化する分子を指す。
【００７５】本明細書で用いられる場合、「アンタゴニ
スト」という用語は、ＶＬＣＦＡＥ活性を遅滞させる
か、又は妨害する分子を指す。
【００７６】本明細書で用いられる場合、「モジュレー
ター」という用語は、アゴニスト及びアンタゴニストに
関する一般的（ｇｅｎｅｒｉｃ）用語に相当する。モジ
ュレーターは、本発明に従うポリペプチドに結合する小
さい有機化学分子、ペプチド又は抗体であることができ
る。モジュレーターはさらに、それ自身が本発明に従う
ポリペプチドに結合する分子に結合し、かくしてそれら
の生物学的活性に影響を与える小さい有機化学分子、ペ
プチド又は抗体であることができる。モジュレーターは
天然の基質及びリガンド又はそれらの構造的もしくは機
能的模倣物質（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｍｉｍｅｔｉｃ
ｓ）であることができる。
【００７７】モジュレーターは好ましくは小さい有機化
学化合物である。
【００７８】ＶＬＣＦＡＥへのモジュレーターの結合
は、それで処理される植物の死に導くやり方で細胞プロ
セスを改変することができる。
【００７９】従って、本発明はＦＤＨタンパク質又はそ
れに相同のＶＬＣＦＡＥのモジュレーターを同定するた
めの上記の方法により発見されたＶＬＣＦＡＥモジュレ
ーターにも関する。
【００８０】本発明はさらに、本発明に従って用いられ
るべきポリペプチドの発現を改変する化学化合物の発見
のための方法に関する。そのような「発現モジュレータ
ー」も新規な成長−調節もしくは除草性活性物質に相当
する。発現モジュレーターは、本発明に従って用いられ
るべきポリペプチドをコードする核酸の調節領域に結合
する小さい有機化学分子、ペプチド又は抗体であること
ができる。発現モジュレーターはさらに、それ自身が本
発明に従って用いられるべきポリペプチドをコードする
核酸の調節領域に結合する分子に結合し、かくしてそれ
らの発現に影響を与える小さい有機化学分子、ペプチド
又は抗体であることもできる。発現モジュレーターはア
ンチセンス分子であることもできる。
【００８１】本発明は同様に、本発明に従って用いられ
るべきポリペプチドのモジュレーター、あるいは発現モ
ジュレーターの、植物成長調節剤又は除草剤としての使
用に関する。
【００８２】本発明は同様に、発現モジュレーターの発
見のための上記の方法により発見されるＶＬＣＦＡＥの
発現モジュレーターに関する。
【００８３】本発明に従う方法は、高−処理量スクリー
ニング（ＨＴＳ）を含む。これのために、宿主細胞、な
らびに本発明に従って用いられるべき核酸及び／又は本
発明に従って用いられるべきポリペプチドを含有する無
−細胞調製物の両方を使用することが可能である。
【００８４】モジュレーターの発見のために、本発明に
従って用いられるべきポリペプチドを含有する合成反応
混合物（例えば試験管内転写の産物）又は細胞成分、例
えば膜もしくは他のいずれかの調製物をポリペプチドの
標識された基質もしくはリガンドと一緒に、アゴニスト
もしくはアンタゴニストであり得る候補分子の存在下及
び不在下でインキュベーションすることができる。本発
明に従って用いられるべきポリペプチドの活性を向上さ
せるか、又は阻害する候補分子の能力は、標識されたリ
ガンドの結合の増加もしくは減少から、あるいは標識さ
れた基質の転換の増加もしくは減少から明らかとなる。
十分に結合して本発明に従うポリペプチドの活性を向上
させる分子はアゴニストである。十分に結合して本発明
に従って用いられるべきポリペプチドの生物学的活性を
阻害する分子は優れたアンタゴニストである。これら
は、上記の種類の、しかしながらそれらに限られない除
草性物質の阻害剤であり得る。
【００８５】本発明に従って用いられるべきポリペプチ
ドの生物学的活性の検出を、いわゆるリポーター系によ
り助長することができる。これに関し、リポーター系
は、生成物に転換される測色的に標識された基質あるい
は本発明に従って用いられるべきポリペプチドの活性も
しくは発現における変化に応答するリポーター遺伝子、
あるいは他の既知の結合アッセイを含むが、これらに限
られない。
【００８６】膜−関連タンパク質の活性は他の方法で有
利に測定され得る。Ｅ．コリにおけるそのようなタンパ
ク質の機能的異種発現は多くの場合に困難であるか、又
は不可能である。この場合、適したクローニング（例え
ば適したＰＣＲ戦略を用いる）により、タンパク質の膜
−関連部分からタンパク質の触媒的に活性な部分を分離
し、遺伝子産物が可溶性タンパク質を与え、容易に精製
され得るようにすることができる。可溶性タンパク質の
活性の測定には広いレパートリの測定の可能性が利用さ
れ得る。例えば蛍光−標識されたリガンドもしくは基質
を用いる蛍光偏光により、特に感度の高い測定を行うこ
とができる。
【００８７】本発明に従って用いられるべきポリペプチ
ドのモジュレーターを発見することができる方法の他の
例は置換アッセイであり、その方法ではこの目的に適し
た条件下で、本発明に従って用いられるべきポリペプチ
ド及びモジュレーターの可能性のあるものを、本発明に
従って用いられるべきポリペプチドに結合することが知
られている分子、例えば天然の基質もしくはリガンド又
は基質もしくはリガンド模倣物質と一緒にする（ｃｏｍ
ｐａｃｔｅｄ）。基質もしくはリガンド模倣物質は、例
えば放射性標識されているか、又は蛍光もしくは色素マ
ーカー（ＵＶも）が与えられていることができる。本発
明に従って用いられるべきポリペプチド自身を類似の方
法で標識し、リガンドに結合しているか、又は反応を行
ったポリペプチドの数が厳密に決定され得るようにする
こともできる。この方法でアゴニスト又はアンタゴニス
トの有効性を評価することができる。
【００８８】本発明はさらに、本発明に従って用いられ
るべき核酸、本発明に従って用いられるべきＤＮＡ構築
物、又は本発明に従って用いられるべきベクターの、形
質転換植物の生産のための使用、ならびに対応するその
ままの形質転換植物、又はそれらの一部もしくは増殖材
料に関する。
【００８９】本発明は同様に、本発明に従って用いられ
るべき核酸、本発明に従って用いられるべきＤＮＡ構築
物、又は本発明に従って用いられるべきベクターの導入
の後に、ＶＬＣＦＡＥの細胞内濃度が対応する野生型の
形態と比較して増加もしくは減少している形質転換植
物、植物の一部、原形質体、植物組織又は植物増殖材料
に関する。
【００９０】本明細書で用いられる場合、「植物の一
部」という用語は、植物のすべての地表及び地下部分及
び器官、例えば苗条、葉、花及び根、ならびにそれらか
ら作られる原形質体及び組織培養を意味する。
【００９１】本明細書で用いられる場合、「増殖材料」
という用語は、栄養及び生殖増殖材料、例えば挿木、塊
茎、根茎、取木及び種子を意味する。
【００９２】本発明は、ＶＬＣＦＡＥをコードする配列
において改変が行われ、植物中に存在するＶＬＣＦＡＥ
の生物学的活性もしくは量の増加もしくは減少に導くＶ
ＬＣＦＡＥの生産を生じている植物にも関する。
【００９３】本明細書で用いられる場合、「突然変異誘
発」という用語は、自然の突然変異率を増加させ、かく
して突然変異体を単離するための方法を指す。これは、
生体内において突然変異原により、例えば突然変異を誘
導するのに適した化学化合物又は物理的効果（例えば塩
基類似体、挿入物質、ＵＶ線など）を用いて突然変異体
を作ることを含み得る。必要な突然変異体は、特定の表
現型に関する選択により得られ得る。染色体上の突然変
異の位置は、相補及び組換え分析により他の既知の突然
変異に対して相対的に決定され得る。標的化された方法
（ｔａｒｇｅｔｅｄ ｍａｎｎｅｒ）で染色体もしくは
染色体外ＤＮＡ中に突然変異を導入することもできる
（試験管内突然変異誘発、部位指向された突然変異誘発
（ｓｉｔｅｄｉｒｅｃｔｉｅｄ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉ
ｓ）、誤りがちなＰＣＲ（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎｅ Ｐ
ＣＲ）など）。
【００９４】本明細書で用いられる場合、「突然変異
体」という用語は、改変された（突然変異した）遺伝子
を宿している生物を指す。突然変異体は、改変されてい
ない遺伝子を宿している野生型との比較により限定され
る。
【００９５】本発明に従って用いられるべきＶＬＣＦＡ
Ｅ、特にＦＤＨタンパク質はシグナリング及び発育プロ
セスにおいて役割を果たすので、形質転換「センス」植
物又は対応する内在性ＶＬＣＦＡＥ又はシグナル変換に
おいてそれに結合する要素の量もしくは活性の向上に関
して慎重に（ｄｅｌｉｂｅｒａｔｅｌｙ）選択された植
物は、除草的に活性な化合物に対する耐性の向上を取得
する。アミノ酸配列を突然変異させることにより、ＶＬ
ＣＦＡＥタンパク質への除草的活性を有する化合物に耐
性であるＶＬＣＦＡＥを開発することも可能である。植
物における、特に作物植物、例えばトウモロコシ、小
麦、大麦、カラス麦、稲、ライ麦、トマト、まめ、ポテ
トの木、ラクツカ・サチバ（Ｌａｃｔｕｃａ ｓａｔｉ
ｖａ）、ブラシカセアエ（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａ
ｅ）、木材植物（ｗｏｏｄ ｐｌａｎｔｓ）、フィスコ
ミトレラ・パテンス（Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ
ｐａｔｎｓ）における、そのような自然に単離された、
又は合成的に生産された突然変異体の遺伝子の転移及び
発現は、それらを除草剤−耐性とするか、又は除草剤に
対する許容性の向上により特徴付ける。
【００９６】
【実施例】実施例１フルフェナセトを用いるアラビドプシス・タリアナ（Ａ
ｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ）の除草剤処
理：ｆｉｄｄｌｅｈｅａｄ表現型の形成 ４℃で保存されたアラビドプシスの種子（生態型 Ｃｏ
ｌｕｍｂｉａ Ｃｏｌ−０）を土壌中に撒き、長日条件
下（１６時間 光／８時間 暗）に、２２℃±２℃で栽
培した。
【００９７】２週令の植物に２５０ｇ／ｈａ及び５０ｇ
／ｈａのフルフェナセトを噴霧し、長日条件下（１６時
間 光／８時間 暗）に、２２℃±２℃でさらに栽培し
た。フルフェナセト処理から後の７日及び１１日の間に
花器官はアラビドプシスの木の最も上の茎上の葉と融合
する。これらの融合は、「ｆｉｄｄｌｅｈｅａｄ」突然
変異体における融合に非常に類似している。植物のグル
タチオンＳ−トランスフェラーゼ活性によりフルフェナ
セトが分解されるために、１８日からすべての花は再び
正常に現れる。 実施例２記載されているＦＤＨヌクレオチド配列の単離 Ｙｅｐｈｒｅｍｏｖ ｅｔ ａｌ．１９９９，Ｔｈｅ
Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ１１，２１８７−２２０１，Ｐｒ
ｕｉｔｔ ｅｔ ａｌ．２０００，ＰＮＡＳ９７
（３），１３１１−１３１６に類似して、又はＷＯ ９
８／５４９５４（クローン ＥＬ ４）に記載されてい
る通りに、記載されているＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤ（ＦＤ
Ｈ）ヌクレオチド配列の単離を行うことができる。配列
番号：１に記載されている配列を助けとして、熟練者に
既知の方法により、直接的に配列を得ることもできる。 実施例３ＶＬＣＦＡＥに向けられた活性物質に耐性の形質転換ア
ラビドプシス植物の生産 選択された突然変異ＶＬＣＦＡＥ遺伝子構築物を適した
ｐＢＩＮベクター構築物中にクローニングし、適したア
グロバクテリア株に転移させる。ベクター配列は、植物
において選択され得、例えばカナマイシンに対する耐性
又は除草剤ＢＡＳＴＡに対する耐性を与えるマーカー遺
伝子を宿している。アラビドプシス植物を育て、４〜６
週間後、開花の少し前に、ベクター構築物で形質転換さ
れたアグロバクテリア株の懸濁液中に沈める。真空浸透
により植物組織のバクテリア懸濁液との接触を強化する
ことができる。この方法で処理された植物を、種子が熟
すまでさらにインキュベーションする。種子を収穫し、
選択培地上に置く。生き残る唯一の実生は、転移された
遺伝子構築物及びマーカー遺伝子を含有するもの、かく
して成功裏に形質転換されたものである。方法の詳細な
記載はＢｅｃｈｔｈｏｌｄ Ｎ．ａｎｄ Ｐｅｌｌｅｔ
ｉｅｒ Ｇ．：ｉｎ Ｐｌａｎｔａ Ａｇｒｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａ
ｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｕｌｔ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ｔｈａｌｉａｎａ ｐｌａｎｔｓｂｙ ｖａｃｕｕｍ
ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ．Ｉｎ：Ａｒａｂｉｄｏｐ
ｓｉｓ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｍ
ａｒｔｉｎｅｚ−Ｚａｐａｔｅｒ Ｊ．Ｍ．ａｎｄ Ｓ
ａｌｉｎａｓ Ｊ．，１９９８ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅ
ｓｓ ＩＳＢＮ ０−８９６０３−３９１−０に見いだ
され得る。図及び配列表の説明 図１：ＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤ（ＦＤＨ）に相同性を有す
るアラビドプシス・タリアナ ベータ−ケトアシル−Ｃ
ｏＡシンターゼの系統樹（ＤＮＡ Ｓｔａｒ Ｐｒｏｇ
ｒａｍ ＭｅｇＡｌｉｇｎ（Ｃｌｕｓｔａｌ ｍｅｔｈ
ｏｄ ｗｉｔｈＰＡＭ２５０ “ｒｅｓｉｄｕｅ ｗｅ
ｉｇｈｔ ｔａｂｌｅ”））。 配列番号：１：アラビドプシス・タリアナからの“ＦＩ
ＤＤＬＥＨＥＡＤ”（ＦＤＨ）ポリペプチド、超長鎖脂
肪酸エロンガーゼをコードする核酸配列。これはゲノム
配列であり、それがイントロンがまだ存在する理由であ
る。コード領域を指示する。 配列番号：２：アラビドプシス・タリアナからの“ＦＩ
ＤＤＬＥＨＥＡＤ”（ＦＤＨ）ポリペプチドのアミノ酸
配列。
【００９８】
【表３】
【００９９】
【表４】
【０１００】
【表５】
【０１０１】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> BAYER AG <120> Use of VLCFAE for identifying herbicidally active compounds <130> 200106055 <150> 10034804.1 <151> 2000-07-18 <160> 2 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 2782 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <220> <221> CDS <222> (176)..(583) <220> <221> CDS <222> (1119)..(1745) <220> <221> CDS <222> (1821)..(2438) <400> 1 acattaacta cctctcacca accaccaaac ccaatcccca caatattacc attactctca 60 tataactaca catattcata tttacatttt ttgccaacac aactccttat aagatataca 120 cttcatcaac ctatagatct cactcacata atcaacctac aaaacaaaaa caaga atg 178 Met 1 ggt aga tcc aac gag caa gat ctg ctc tct acc gag atc gtt aat cgt 226 Gly Arg Ser Asn Glu Gln Asp Leu Leu Ser Thr Glu Ile Val Asn Arg 5 10 15 ggg atc gaa cca tcc ggt cct aac gcc ggc tca cca acg ttc tcg gtt 274 Gly Ile Glu Pro Ser Gly Pro Asn Ala Gly Ser Pro Thr Phe Ser Val 20 25 30 agg gtc agg aga cgt ttg cct gat ttt ctt cag tcg gtg aac ttg aag 322 Arg Val Arg Arg Arg Leu Pro Asp Phe Leu Gln Ser Val Asn Leu Lys 35 40 45 tac gtg aaa ctt ggt tac cac tac ctc ata aac cat gcg gtt tat ttg 370 Tyr Val Lys Leu Gly Tyr His Tyr Leu Ile Asn His Ala Val Tyr Leu 50 55 60 65 gcg acc ata ccg gtt ctt gtg ctg gtt ttt agt gct gag gtt ggg agt 418 Ala Thr Ile Pro Val Leu Val Leu Val Phe Ser Ala Glu Val Gly Ser 70 75 80 tta agc aga gaa gag att tgg aag aag ctt tgg gac tat gat ctt gca 466 Leu Ser Arg Glu Glu Ile Trp Lys Lys Leu Trp Asp Tyr Asp Leu Ala 85 90 95 act gtt atc gga ttc ttc ggt gtc ttt gtt tta acc gct tgt gtc tac 514 Thr Val Ile Gly Phe Phe Gly Val Phe Val Leu Thr Ala Cys Val Tyr 100 105 110 ttc atg tct cgt cct cgc tct gtt tat ctt att gat ttc gct tgt tac 562 Phe Met Ser Arg Pro Arg Ser Val Tyr Leu Ile Asp Phe Ala Cys Tyr 115 120 125 aag ccc tcc gat gaa cac aag gtacgtccca acttttccat agaggaaata 613 Lys Pro Ser Asp Glu His Lys 130 135 gtctaaatta cttttaccca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa atctaaatta agtatactta 673 agaaattata attagatttg tcaaaaaata ataattataa ttagatggat tagttgttta 733 tagggctgcc taaataaaat aaaattttgc ctttgcatgt gttacgttag taattatttt 793 tcaggtatat ataaaaagta attattttgc aaaaccttta gatattggtt acgtttgatt 853 taaaaccgaa tggtttcgta gaaatttgag aaagtagata acctaaaaac tccgattaaa 913 gaaaccggtt tgacttatat aattttaact ggtttctgtt ttcattttat tttataaaaa 973 aaacaatcca aatttacgac ctataatcaa aggagattga taggaaccgg actgataatt 1033 aaatgaagct gaatcaaacc aaacaaaagt tcatttaatt ccggttctct cgggtttaat 1093 ctctttttgc attggattgg tttag gtg aca aaa gaa gag ttc ata gaa cta 1145 Val Thr Lys Glu Glu Phe Ile Glu Leu 140 145 gcg aga aaa tca ggg aag ttc gac gaa gag aca ctc ggt ttc aag aag 1193 Ala Arg Lys Ser Gly Lys Phe Asp Glu Glu Thr Leu Gly Phe Lys Lys 150 155 160 agg atc tta caa gcc tca ggc ata ggc gac gag aca tac gtc cca aga 1241 Arg Ile Leu Gln Ala Ser Gly Ile Gly Asp Glu Thr Tyr Val Pro Arg 165 170 175 tcc atc tct tca tca gaa aac ata aca acg atg aaa gaa ggt cgt gaa 1289 Ser Ile Ser Ser Ser Glu Asn Ile Thr Thr Met Lys Glu Gly Arg Glu 180 185 190 gaa gcc tct aca gtg atc ttt gga gca cta gac gaa ctc ttc gag aag 1337 Glu Ala Ser Thr Val Ile Phe Gly Ala Leu Asp Glu Leu Phe Glu Lys 195 200 205 aca cgt gta aaa cct aaa gac gtt ggt gtc ctt gtg gtt aac tgt agc 1385 Thr Arg Val Lys Pro Lys Asp Val Gly Val Leu Val Val Asn Cys Ser 210 215 220 225 att ttc aac ccg aca ccg tcg ttg tcc gca atg gtg ata aac cat tac 1433 Ile Phe Asn Pro Thr Pro Ser Leu Ser Ala Met Val Ile Asn His Tyr 230 235 240 aag atg aga ggg aac ata ctt agt tac aac ctt gga ggg atg gga tgt 1481 Lys Met Arg Gly Asn Ile Leu Ser Tyr Asn Leu Gly Gly Met Gly Cys 245 250 255 tcg gct gga atc ata gct att gat ctt gct cgt gac atg ctt cag tct 1529 Ser Ala Gly Ile Ile Ala Ile Asp Leu Ala Arg Asp Met Leu Gln Ser 260 265 270 aac cct aat agt tat gct gtt gtt gtg agt act gag atg gtt ggg tat 1577 Asn Pro Asn Ser Tyr Ala Val Val Val Ser Thr Glu Met Val Gly Tyr 275 280 285 aat tgg tac gtg gga agt gac aag tca atg gtt ata cct aat tgt ttc 1625 Asn Trp Tyr Val Gly Ser Asp Lys Ser Met Val Ile Pro Asn Cys Phe 290 295 300 305 ttt agg atg ggt tgt tct gcc gtt atg ctc tct aac cgt cgt cgt gac 1673 Phe Arg Met Gly Cys Ser Ala Val Met Leu Ser Asn Arg Arg Arg Asp 310 315 320 ttt cgc cat gct aag tac cgt ctc gag cac att gtc cga act cat aag 1721 Phe Arg His Ala Lys Tyr Arg Leu Glu His Ile Val Arg Thr His Lys 325 330 335 gct gct gac gac cgt agc ttc agg tttcattcat tttggtatta attcgtttta 1775 Ala Ala Asp Asp Arg Ser Phe Arg 340 345 caatctcttg accgacctag taactaattt tgtgtggttt ttagg agt gtg tac cag 1832 Ser Val Tyr Gln gaa gaa gat gaa caa gga ttc aag ggg ttg aag ata agt aga gac tta 1880 Glu Glu Asp Glu Gln Gly Phe Lys Gly Leu Lys Ile Ser Arg Asp Leu 350 355 360 365 atg gaa gtt gga ggt gaa gct ctc aag aca aac atc act acc tta ggt 1928 Met Glu Val Gly Gly Glu Ala Leu Lys Thr Asn Ile Thr Thr Leu Gly 370 375 380 cct ctt gtc cta cct ttc tcc gag cag ctt ctc ttc ttt gct gct ttg 1976 Pro Leu Val Leu Pro Phe Ser Glu Gln Leu Leu Phe Phe Ala Ala Leu 385 390 395 ctc cgc cga aca ttc tca cct gct gcc aaa acg tcc aca acc act tcc 2024 Leu Arg Arg Thr Phe Ser Pro Ala Ala Lys Thr Ser Thr Thr Thr Ser 400 405 410 ttc tct act tcc gcc acc gca aaa acc aat gga atc aag tct tcc tct 2072 Phe Ser Thr Ser Ala Thr Ala Lys Thr Asn Gly Ile Lys Ser Ser Ser 415 420 425 tcc gat ctg tcc aag cca tac atc ccg gac tac aag ctc gcc ttc gag 2120 Ser Asp Leu Ser Lys Pro Tyr Ile Pro Asp Tyr Lys Leu Ala Phe Glu 430 435 440 445 cat ttt tgc ttc cac gcg gca agc aaa gta gtg ctt gaa gag ctt caa 2168 His Phe Cys Phe His Ala Ala Ser Lys Val Val Leu Glu Glu Leu Gln 450 455 460 aag aat cta ggc ttg agt gaa gag aat atg gag gct tct agg atg aca 2216 Lys Asn Leu Gly Leu Ser Glu Glu Asn Met Glu Ala Ser Arg Met Thr 465 470 475 ctt cac agg ttt gga aac act tct agc agt gga atc tgg tat gag ttg 2264 Leu His Arg Phe Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly Ile Trp Tyr Glu Leu 480 485 490 gct tac atg gag gcc aag gaa agt gtt cgt aga ggc gat agg gtt tgg 2312 Ala Tyr Met Glu Ala Lys Glu Ser Val Arg Arg Gly Asp Arg Val Trp 495 500 505 cag atc gct ttc ggt tct ggt ttt aag tgt aac agt gtg gtg tgg aag 2360 Gln Ile Ala Phe Gly Ser Gly Phe Lys Cys Asn Ser Val Val Trp Lys 510 515 520 525 gca atg agg aag gtg aag aag cca acc agg aac aat cct tgg gtg gat 2408 Ala Met Arg Lys Val Lys Lys Pro Thr Arg Asn Asn Pro Trp Val Asp 530 535 540 tgc atc aac cgt tac cct gtg cct ctc taa attatcattc ttctaaatta 2458 Cys Ile Asn Arg Tyr Pro Val Pro Leu 545 550 aatcaagtaa gatctctaat tactccaacc aaaagataca gtttggttgg atgataggag 2518 ttatttactg atcattcgta tctaagtctg ttataagaat ggatgtggct agagtcctgt 2578 tcagcttcaa cttgttttat tttttgtttg ttctctattg gatcttcata aactttgaga 2638 gattaaagaa aaaaactctt ctttagtttg atagaacaga tggtcattgt aatttcttta 2698 atatgtcaaa gtaaaacaat ttctttttaa ggcaatctat attcagatac ataataaatt 2758 tagtttacgt gtataagaag atac 2782 <210> 2 <211> 550 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 2 Met Gly Arg Ser Asn Glu Gln Asp Leu Leu Ser Thr Glu Ile Val Asn 1 5 10 15 Arg Gly Ile Glu Pro Ser Gly Pro Asn Ala Gly Ser Pro Thr Phe Ser 20 25 30 Val Arg Val Arg Arg Arg Leu Pro Asp Phe Leu Gln Ser Val Asn Leu 35 40 45 Lys Tyr Val Lys Leu Gly Tyr His Tyr Leu Ile Asn His Ala Val Tyr 50 55 60 Leu Ala Thr Ile Pro Val Leu Val Leu Val Phe Ser Ala Glu Val Gly 65 70 75 80 Ser Leu Ser Arg Glu Glu Ile Trp Lys Lys Leu Trp Asp Tyr Asp Leu 85 90 95 Ala Thr Val Ile Gly Phe Phe Gly Val Phe Val Leu Thr Ala Cys Val 100 105 110 Tyr Phe Met Ser Arg Pro Arg Ser Val Tyr Leu Ile Asp Phe Ala Cys 115 120 125 Tyr Lys Pro Ser Asp Glu His Lys Val Thr Lys Glu Glu Phe Ile Glu 130 135 140 Leu Ala Arg Lys Ser Gly Lys Phe Asp Glu Glu Thr Leu Gly Phe Lys 145 150 155 160 Lys Arg Ile Leu Gln Ala Ser Gly Ile Gly Asp Glu Thr Tyr Val Pro 165 170 175 Arg Ser Ile Ser Ser Ser Glu Asn Ile Thr Thr Met Lys Glu Gly Arg 180 185 190 Glu Glu Ala Ser Thr Val Ile Phe Gly Ala Leu Asp Glu Leu Phe Glu 195 200 205 Lys Thr Arg Val Lys Pro Lys Asp Val Gly Val Leu Val Val Asn Cys 210 215 220 Ser Ile Phe Asn Pro Thr Pro Ser Leu Ser Ala Met Val Ile Asn His 225 230 235 240 Tyr Lys Met Arg Gly Asn Ile Leu Ser Tyr Asn Leu Gly Gly Met Gly 245 250 255 Cys Ser Ala Gly Ile Ile Ala Ile Asp Leu Ala Arg Asp Met Leu Gln 260 265 270 Ser Asn Pro Asn Ser Tyr Ala Val Val Val Ser Thr Glu Met Val Gly 275 280 285 Tyr Asn Trp Tyr Val Gly Ser Asp Lys Ser Met Val Ile Pro Asn Cys 290 295 300 Phe Phe Arg Met Gly Cys Ser Ala Val Met Leu Ser Asn Arg Arg Arg 305 310 315 320 Asp Phe Arg His Ala Lys Tyr Arg Leu Glu His Ile Val Arg Thr His 325 330 335 Lys Ala Ala Asp Asp Arg Ser Phe Arg Ser Val Tyr Gln Glu Glu Asp 340 345 350 Glu Gln Gly Phe Lys Gly Leu Lys Ile Ser Arg Asp Leu Met Glu Val 355 360 365 Gly Gly Glu Ala Leu Lys Thr Asn Ile Thr Thr Leu Gly Pro Leu Val 370 375 380 Leu Pro Phe Ser Glu Gln Leu Leu Phe Phe Ala Ala Leu Leu Arg Arg 385 390 395 400 Thr Phe Ser Pro Ala Ala Lys Thr Ser Thr Thr Thr Ser Phe Ser Thr 405 410 415 Ser Ala Thr Ala Lys Thr Asn Gly Ile Lys Ser Ser Ser Ser Asp Leu 420 425 430 Ser Lys Pro Tyr Ile Pro Asp Tyr Lys Leu Ala Phe Glu His Phe Cys 435 440 445 Phe His Ala Ala Ser Lys Val Val Leu Glu Glu Leu Gln Lys Asn Leu 450 455 460 Gly Leu Ser Glu Glu Asn Met Glu Ala Ser Arg Met Thr Leu His Arg 465 470 475 480 Phe Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly Ile Trp Tyr Glu Leu Ala Tyr Met 485 490 495 Glu Ala Lys Glu Ser Val Arg Arg Gly Asp Arg Val Trp Gln Ile Ala 500 505 510 Phe Gly Ser Gly Phe Lys Cys Asn Ser Val Val Trp Lys Ala Met Arg 515 520 525 Lys Val Lys Lys Pro Thr Arg Asn Asn Pro Trp Val Asp Cys Ile Asn 530 535 540 Arg Tyr Pro Val Pro Leu 545 550
【図面の簡単な説明】
【図１】ＦＩＤＤＬＥＨＥＡＤ（ＦＤＨ）に相同性を有
するアラビドプシス・タリアナベータ−ケトアシル−Ｃ
ｏＡシンターゼの系統樹（ＤＮＡ Ｓｔａｒ Ｐｒｏｇ
ｒａｍ ＭｅｇＡｌｉｇｎ（Ｃｌｕｓｔａｌ ｍｅｔｈ
ｏｄ ｗｉｔｈ ＰＡＭ２５０ “ｒｅｓｉｄｕｅ ｗ
ｅｉｇｈｔ ｔａｂｌｅ”））を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｑ 1/48 ＺＮＡ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 33/50 Ｚ 33/50 Ｃ１２Ｒ 1:19 //(Ｃ１２Ｑ 1/02 1:91 Ｃ１２Ｒ 1:19） Ｃ１２Ｒ 1:645 (Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/48 Ｚ Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｑ 1/48 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｑ 1/48 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｑ 1/48 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 ルート・メイスナー ドイツ51381レーフエルクーゼン・ホルツ アーベーク38 (72)発明者 クラウス・テイートエン ドイツ40764ランゲンフエルト・アムアル テンブロイヒ98 Ｆターム(参考） 2B030 AA02 AB03 AD08 CA06 CA17 CA19 CB02 CD03 CD07 CD09 2G045 AA31 AA40 CB20 DA20 DA36 FB01 4B024 AA07 AA08 AA11 BA10 CA04 DA01 DA05 DA06 EA05 GA11 HA11 4B063 QA01 QA20 QQ06 QQ09 QQ26 QR06 QX02 4H011 AB01 AB03 BB19 BB22 DH11

Claims (24)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 超長鎖脂肪酸エロンガーゼの生物学的活
    性を有するポリペプチドの、除草的に活性な化合物の同
    定のための使用。
  2. 【請求項２】 ポリペプチドが配列番号：２に従うポリ
    ペプチドと６０％相同であることを特徴とする請求項１
    に従う使用。
  3. 【請求項３】 除草的に活性な化合物がこれらのポリペ
    プチドのモジュレーターであることを特徴とする請求項
    １に従う使用。
  4. 【請求項４】 ポリペプチドが ａ）配列番号：２に示される配列、 ｂ）配列番号：１を有する核酸によりコードされる配
    列、 ｃ）ＶＬＣＦＡＥの生物学的活性を依然として有してい
    る、ａ）又はｂ）の下に定義される配列の部分的配列、 ｄ）ａ）〜ｃ）の下に定義される配列と少なくとも６０
    ％、好ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一性
    を有する配列、 ｅ）配列番号：２に示されるポリペプチドのＣ−末端に
    局在する活性部位を含む配列、 ｆ）ｅ）の下に定義される配列と少なくとも６０％、好
    ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一性を有す
    る配列、 ｇ）配列番号：２に示されるポリペプチドの特異的Ｎ末
    端を含む配列、 ｈ）ｇ）の下に定義される配列と少なくとも６０％、好
    ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一性を有す
    る配列、 から選ばれる配列を含むことを特徴とする請求項１〜３
    のいずれか１つに従う使用。
  5. 【請求項５】 超長鎖脂肪酸エロンガーゼの生物学的活
    性を有するポリペプチドをコードする核酸の、これらの
    ポリペプチドのモジュレーターを同定するための方法に
    おける使用。
  6. 【請求項６】 超長鎖脂肪酸エロンガーゼの生物学的活
    性を有するポリペプチドをコードする核酸の、それらに
    よりコードされるポリペプチドの発現を改変する物質を
    同定するための使用。
  7. 【請求項７】 一本鎖又は二本鎖ＤＮＡ又はＲＮＡが含
    まれることを特徴とする請求項５又は６に従う使用。
  8. 【請求項８】 ゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡのフラグメン
    トが含まれることを特徴とする請求項５又は６に従う使
    用。
  9. 【請求項９】 核酸が ａ）配列番号：１に示される配列、 ｂ）配列番号：２に示されるアミノ酸配列を含むポリペ
    プチドをコードする配列、 ｃ）ａ）又はｂ）の下に定義される配列の少なくとも１
    ４塩基対の長さの部分的配列、 ｄ）ａ）又はｂ）の下に定義される配列にハイブリッド
    形成する配列、 ｅ）ａ）又はｂ）の下に定義される配列と少なくとも６
    ０％、好ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一
    性を有する配列、 ｆ）配列番号：２に示されるポリペプチドのＣ−末端に
    局在する活性部位をコードする配列、 ｇ）ｆ）の下に定義される配列と少なくとも６０％、好
    ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一性を有す
    る配列、 ｈ）配列番号：２に示されるポリペプチドの特異的Ｎ末
    端をコードする配列、 ｉ）ｈ）の下に定義される配列と少なくとも６０％、好
    ましくは８０％、特に好ましくは９０％の同一性を有す
    る配列、 ｊ）ａ）〜ｉ）の下に定義される配列に相補的である配
    列、ならびに ｋ）遺伝コードの縮重のために、ａ）〜ｈ）の下に定義
    される配列と同じアミノ酸配列をコードする配列から選
    ばれる配列を含むことを特徴とする請求項５〜８のいず
    れかに従う使用。
  10. 【請求項１０】 配列番号：１を有する核酸を含むＤＮ
    Ａ構築物及び異種プロモーターの、除草的に活性な化合
    物を同定するための方法における使用。
  11. 【請求項１１】 配列番号：１を有する核酸を含むベク
    ターの、除草的に活性な化合物を同定するための方法に
    おける使用。
  12. 【請求項１２】 配列番号：２を有するポリペプチドを
    コードする核酸を含有する宿主細胞の、除草的に活性な
    化合物を同定するための方法における使用。
  13. 【請求項１３】 用いられる宿主細胞がＥ．コリ（Ｅ．
    ｃｏｌｉ）であることを特徴とする請求項１２に従う使
    用。
  14. 【請求項１４】 酵母、昆虫、哺乳類又は植物細胞が含
    まれることを特徴とする請求項１３に従う宿主細胞の使
    用。
  15. 【請求項１５】 以下の段階： ａ）超長鎖脂肪酸エロンガーゼの生物学的活性を有する
    ポリペプチド又はポリペプチドを含有する宿主細胞を化
    学化合物又は化学化合物の混合物と、化学化合物とポリ
    ペプチドの相互作用を許す条件下で接触させ、 ｂ）ポリペプチドに特異的に結合する化学化合物を決定
    することを含んでなる、超長鎖脂肪酸エロンガーゼの生
    物学的活性を有するポリペプチドに結合する化学化合物
    を発見するための方法。
  16. 【請求項１６】 以下の段階：ａ）超長鎖脂肪酸エロン
    ガーゼの生物学的活性を有するポリペプチド又はポリペ
    プチドを含有する宿主細胞を化学化合物又は化学化合物
    の混合物と、化学化合物とポリペプチドの相互作用を許
    す条件下で接触させ、 ｂ）化学化合物によりポリペプチドの活性が低下するか
    又は向上するかを決定し、そして適宜、 ｃ）ポリペプチドの活性を特異的に低下又は向上させる
    化合物を決定することを含んでなる、超長鎖脂肪酸エロ
    ンガーゼの生物学的活性を有するポリペプチドの阻害剤
    及び／又は活性化剤を発見するための方法。
  17. 【請求項１７】 以下の段階： ａ）超長鎖脂肪酸エロンガーゼの生物学的活性を有する
    ポリペプチドをコードする核酸を含有する宿主細胞を化
    学化合物又は化学化合物の混合物と接触させ、 ｂ）ポリペプチド濃度を決定し、 ｃ）ポリペプチドの発現に特異的に影響する化合物を決
    定すること を含んでなる、超長鎖脂肪酸エロンガーゼの生物学的活
    性を有するポリペプチドの発現を改変する化合物を発見
    するための方法。
  18. 【請求項１８】 天然には植物細胞における、特にアラ
    ビドプシス（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）における配列番
    号：１を有する核酸の転写を調節する調節領域の、請求
    項１０に従うＤＮＡ構築物、請求項１１に従うベクタ
    ー、請求項１２〜１４のいずれかに従う宿主細胞又は請
    求項１５〜１７のいずれかに従う方法における使用。
  19. 【請求項１９】 超長鎖脂肪酸エロンガーゼの生物学的
    活性を有するポリペプチドのモジュレーターの、植物成
    長調節剤又は除草剤としての使用。
  20. 【請求項２０】 請求項１６又は１７に従う方法により
    発見されるＶＬＣＦＡＥのモジュレーター。
  21. 【請求項２１】 請求項１６又は１７に従う方法により
    発見される除草的に活性な物質。
  22. 【請求項２２】 配列番号：２を有するポリペプチドを
    コードする核酸の、トランスジェニック植物の生産のた
    めの使用。
  23. 【請求項２３】 配列番号：２を有するポリペプチドを
    コードする核酸の導入の後、請求項１４に従うポリペプ
    チドの細胞内濃度が対応する野生−型細胞と比較して増
    加又は減少していることを特徴とするトランスジェニッ
    ク植物、植物の一部、プロトプラスト、植物組織又は植
    物増殖材料。
  24. 【請求項２４】 生物学的活性又は発現パターンが対応
    する内在性ポリペプチドと比較して改変されている、配
    列番号：２を有するポリペプチドを含有することを特徴
    とする植物、植物の一部、プロトプラスト、植物組織又
    は植物増殖材料。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5679881A (en) 1991-11-20 1997-10-21 Calgene, Inc. Nucleic acid sequences encoding a plant cytoplasmic protein involved in fatty acyl-CoA metabolism
AU703957B2 (en) 1994-10-26 1999-04-01 Cargill Incorporated FAE1 genes and their uses
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US6307128B1 (en) * 1997-06-03 2001-10-23 Miami University Fatty acid elongases
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