JP2002238589A - 慢性腎不全、アテローム性動脈硬化および繊維症の標的としての新規なｓＭＡＤ３スプライス変異体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ｓＭＡＤ3dポリペプチドおよびポリヌクレオ
チド並びに前記ポリペプチドの組換え法による生産方法
を提供する。 【解決手段】 配列番号２のｓＭＡＤ3dポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも
９０％同一であり、かつｓＭＡＤ3dポリペプチドの活性
を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
またはこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオ
チド配列を含んでなるポリヌクレオチド。ｓＭＡＤ3dポ
リペプチドおよびポリヌクレオチドは慢性腎不全、アテ
ローム性動脈硬化および繊維症を含む機能障害または疾
病の治療と、このような症状の診断アッセイに有用であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、このポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチド、前記のポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの使用、並びにその生産方法に関する。より
詳細には、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドはＭＡＤファミリーに関係しており、以後これをｓＭ
ＡＤ3dと記す。本発明はまた、このようなポリヌクレオ
チドおよびポリペプチドの作用を阻害または活性化する
ことに関する。

【０００２】

【従来の技術】ＭＡＤ（Mothers against dpp)タンパク
質は、ショウジョウバエにおいて、サイトカイン／増殖
因子のＴＧＦ-βファミリーのメンバーであるＤＰＰ
（デカペンタプレージック）のシグナル伝達に必要であ
ることが見いだされた(Sekelskyら, 1995) 。ツメガエ
ル、マウス、ヒトなどの他の種における他のＭＡＤタン
パク質は、やはりＴＧＦ-βファミリーのメンバーであ
るＢＭＰ２／ＢＭＰ４のシグナルを伝達することがわか
っている(Hoodlessら, 1996; Graffら, 1996; Liuら, 1
996) 。これまでに５つのＭＡＤイソ型が同定されてい
る。イソ型ｓＭＡＤ１はＡＬＫ３／６受容体を介してＢ
ＭＰ２／４により活性化される。イソ型ｓＭＡＤ２およ
びｓＭＡＤ３はＡＬＫ５受容体を介してＴＧＦ-βによ
り活性化され、そしてイソ型ｓＭＡＤ４はＡＬＫ１受容
体を介してアクチビンにより活性化される。いくつかの
報告からは、Ｉ型受容体のリガンド活性化の後に、ＭＡ
Ｄタンパク質はリン酸化されることが示唆される(Hoodl
essら, 1996; Liuら, 1996) 。リン酸化されたＭＡＤは
その後核に移動し、ＭＡＤイソ型サブタイプに特異的
な、選別された初期中間遺伝子の遺伝子発現を生じさせ
る。

【０００３】最近の刊行物からは、ｓＭＡＤ３は細胞外
マトリックスに対するＴＧＦ-βの作用を媒介すること
に係わっており、また、ｓＭＡＤ４は増殖に関与してい
ることが示唆される。ＴＧＦ-βにより誘導されるマト
リックス産生は、アテローム性動脈硬化および慢性腎不
全を含む多くの繊維性疾患に関与していることがわかっ
た。こうしたことは、ＭＡＤファミリーに治療用ターゲ
ットとしての確立され実証された歴史があることを示し
ている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】明らかに、慢性腎不
全、アテローム性動脈硬化および繊維症を含むがこれら
に限らない、機能障害または疾病を予防し、改善し、治
療する上で何らかの役割を果たすＭＡＤファミリーの新
たなメンバーを同定して特性付ける必要性が存在してい
る。本発明はこのようなメンバーを提供するものであ
る。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、一つの態様に
おいて、ｓＭＡＤ3dポリペプチドおよび組換え物質、並
びにその生産方法に関する。本発明のもう一つの態様は
ｓＭＡＤ3dポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用
方法に関する。こうした使用には、とりわけ、慢性腎不
全、アテローム性動脈硬化および繊維症の治療が含まれ
る。他の態様では、本発明は、本発明により提供される
物質を用いてアゴニストおよびアンタゴニストを同定す
る方法、並びに同定された化合物を用いてｓＭＡＤ3dの
平衡異常と関連した症状を治療することに関する。本発
明のさらに他の態様は、不適当なｓＭＡＤ3d活性または
ｓＭＡＤ3dレベルと関連した疾病を検出するための診断
アッセイに関する。定義 下記の定義は、本明細書中で頻繁に使用される用語を理
解しやすくするためのものである。

【０００６】「ｓＭＡＤ3d」とは、一般的には配列番号
２で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドまたは
そのアレル変異体を意味する。

【０００７】「ｓＭＡＤ3d活性もしくはｓＭＡＤ3dポリ
ペプチド活性」または「ｓＭＡＤ3dもしくはｓＭＡＤ3d
ポリペプチドの生物学的活性」とは、類似の活性、向上
した活性、または望ましくない副作用が低下したこれら
の活性を含めて、ｓＭＡＤ3dの代謝的または生理的機能
を意味する。さらに、前記ｓＭＡＤ3dの抗原および免疫
原としての活性も含まれる。

【０００８】「ｓＭＡＤ3d遺伝子」とは、配列番号１で
表されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドま
たはそのアレル変異体および／またはそれらの相補体を
意味する。

【０００９】本明細書中で用いる「抗体」には、ポリク
ローナルおよびモノクローナル抗体、キメラ抗体、一本
鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロ
ブリン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメン
トが含まれる。

【００１０】「単離された」とは、天然の状態から「人
間の手によって」改変されたことを意味する。「単離さ
れた」組成物または物質が天然に存在するのであれば、
それはそのもとの環境から変化しているか移動してお
り、またはその両方である。例えば、生存している動物
の体内に自然界で存在するポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドは「単離された」ものではないが、その天然状
態の共存物質から分離されたポリヌクレオチドまたはポ
リペプチドは、本明細書中で用いられるように、「単離
された」ものである。

【００１１】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾が行わ
れてきた。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界
に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵素的
または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスおよび
細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含
する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴ
ヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチドも
包含する。

【００１２】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含む任
意のペプチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプ
チド」は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたは
オリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質とい
う）の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コ
ード化アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリ
ペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロ
セスで、または当技術分野で公知の化学的修飾法のいず
れかで修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾
は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究文献
に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側
鎖、アミノまたはカルボキシル末端を含めてポリペプチ
ドのどこでも行うことができる。同じタイプの修飾が所
定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさ
まざまに異なる程度で存在してもよい。また、所定のポ
リペプチドが多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。
ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、
分枝のある又はない環状であってもよい。環状の、分枝
した、または分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天
然プロセスから生じることがあり、また、合成法によっ
て製造することもできる。修飾としては、アセチル化、
アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの
共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌ
クレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の
共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架
橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有
架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形
成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、
ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチ
ル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リ
ン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸
化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転
移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある。例えば、
PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 2nd
Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, Ne
w York, 1993; POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICAT
ION OF PROTEINS, B.C. Johnson 編, Academic Press,
New York,1983中のWold, F., Posttranslational Prote
in Modifications: Perspectivesand Prospects, pgs.
1-12; Seifter ら, “Analysis for protein modificat
ions and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (199
0) 182:626-646; および Rattan ら, “Protein Synthe
sis: Posttranslational Modifications and Aging",An
n NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこと。

【００１３】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドにおいてアミノ酸の置換、付
加、欠失、融合および末端切断（トランケーション）を
生じさせることができる。典型的なポリペプチドの変異
体は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。
一般的には、基準ポリペプチドの配列と変異体の配列が
全般的によく類似しており、多くの領域で同一となるよ
うな相違に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意
に組み合わせた１以上の置換、付加、欠失によりアミノ
酸配列が相違していてよい。置換または挿入されるアミ
ノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっ
ても、なくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドの変異体はアレル変異体のように天然に存在するも
のでも、天然に存在することが知られていない変異体で
あってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの
天然に存在しない変異体は、突然変異誘発法または直接
合成により調製することができる。

【００１４】「同一性」はヌクレオチド配列またはアミ
ノ酸配列の同一性の尺度である。一般に、最大級のマッ
チ（一致）が得られるように配列を並べる。「同一性」
それ自体は当技術分野で認識された意味をもち、発表さ
れた技法を使って計算することができる。例えば、COMP
UTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY, Lesk, A.M. 編, Oxford
University Press, New York, 1988; BIOCOMPUTING: I
NFORMATICS AND GENOME PROJECTS, Smith, D.W. 編, Ac
ademic Press, New York, 1993; COMPUTER ANALYSIS OF
SEQUENCE DATA, PART I, Griffin, A.M. and Griffin,
H.G. 編, Humana Press, New Jersey, 1994; SEQUENCE
ANALYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY, vonHeinje, G., Aca
demic Press, 1987; および SEQUENCE ANALYSIS PRIME
R, Gribskov, M. and Devereux, J.編, M Stockton Pre
ss, New York, 1991を参照のこと。２つのポリヌクレオ
チドまたはポリペプチド配列間の同一性を決定する方法
は多数存在していると同時に、「同一性」なる用語は当
業者には公知である (Carillo, H. and Lipton, D., SI
AM J Applied Math (1988) 48:1073) 。２つの配列間の
同一性または類似性を決定するために汎用される方法と
しては、Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop
編, Academic Press, San Diego, 1994 および Carill
o, H. and Lipton, D., SIAM J Applied Math (1988) 4
8:1073 に記載される方法があるが、これらに限らな
い。同一性および類似性の決定方法はコンピュータプロ
グラムに集成されている。２つの配列間の同一性および
類似性を決定するための好適なコンピュータプログラム
法としては、ＧＣＳプログラムパッケージ (Devereux,
J.ら, Nucleic Acids Research (1984) 12(1):387)、BL
ASTP、BLASTN、FASTA (Atschul, S.F.ら, J Molec Biol
(1990) 215:403)があるが、これらに限らない。

【００１５】一例として、配列番号１の基準ヌクレオチ
ド配列に対して、例えば、少なくとも９５％の「同一
性」を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドとは、このポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が配
列番号１の基準ヌクレオチド配列のそれぞれ１００ヌク
レオチドにつき最高で５つの点突然変異を含みうること
を除けば、基準配列と同一であることを意図している。
言い換えると、基準ヌクレオチド配列と少なくとも９５
％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドを得るには、基準配列中の５％までのヌクレオチドを
欠失させるか、他のヌクレオチドで置換するか、または
基準配列中の全ヌクレオチドの５％までのヌクレオチド
数を基準配列に挿入すればよい。基準配列のこれらの突
然変異は、基準ヌクレオチド配列の5'もしくは3'末端位
置、またはこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基
準配列中のヌクレオチドの間に個々に、または基準配列
内に１以上の連続するグループとして配置することがで
きる。

【００１６】同様に、配列番号２の基準アミノ酸配列に
対して、例えば、少なくとも９５％の「同一性」を有す
るアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、このポリペ
プチド配列が配列番号２の基準アミノ酸配列のそれぞれ
１００アミノ酸につき最高で５つのアミノ酸変更を含み
うることを除けば、基準配列と同一であることを意図し
ている。言い換えると、基準アミノ酸配列と少なくとも
９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを
得るには、基準配列中の５％までのアミノ酸残基を欠失
させるか、他のアミノ酸で置換するか、または基準配列
中の全アミノ酸残基の５％までのアミノ酸数を基準配列
に挿入すればよい。基準配列のこれらの変更は、基準ア
ミノ酸配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、また
はこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基準配列中
のアミノ酸残基の間に個々に、または基準配列内に１以
上の連続するグループとして配置することができる。

【００１７】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチド 一つの形態において、本発明はｓＭＡＤ3dポリペプチド
（またはｓＭＡＤ3dタンパク質）に関する。このｓＭＡ
Ｄ3dポリペプチドには、配列番号２のポリペプチドだけ
でなく、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチ
ド、その全長において配列番号２のアミノ酸配列と少な
くとも８０％、好ましくは少なくとも９１％、より好ま
しくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む
ポリペプチドも含まれる。さらに、少なくとも９７〜９
９％同一であるものが非常に好適である。また、その全
長において配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９１
％、より好ましくは少なくとも９５％同一であるアミノ
酸配列を有するポリペプチドもｓＭＡＤ3dポリペプチド
に含まれる。さらに、少なくとも９７〜９９％同一であ
るものが非常に好適である。ｓＭＡＤ3dポリペプチドは
ｓＭＡＤ3dの少なくとも１つの生物学的活性を示すこと
が好ましい。

【００１８】ｓＭＡＤ3dポリペプチドは「成熟」タンパ
ク質の形であっても、融合タンパク質のような、より大
きいタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加
のアミノ酸配列を含めることが有利であり、このような
アミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プ
ロ配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配
列、または組換え生産の際の安定性を確保する付加的配
列などがある。

【００１９】また、ｓＭＡＤ3dポリペプチドの断片も本
発明に含まれる。こうした断片は全体的に前記ｓＭＡＤ
3dポリペプチドのアミノ酸配列の一部と同一であるが、
全部とは同一でないアミノ酸配列を有するポリペプチド
である。ｓＭＡＤ3dポリペプチドと同様に、断片は「フ
リースタンディング」（それ自体で独立）していても、
より大きいポリペプチド内に含まれていてもよく、つま
りその大きいポリペプチドの一部または一領域、最も好
ましくは一つの連続領域、を断片が構成していてもよ
い。本発明のポリペプチド断片の代表的な例として、お
よその見当でアミノ酸番号１−２０、２１−４０、４１
−６０、６１−８０、８１−１００、および１０１から
ｓＭＡＤ3dポリペプチドの末端までの断片が挙げられ
る。ここで、「およそ」とは、上記の範囲の一端または
両端で数個、５個、４個、３個、２個または１個のアミ
ノ酸が増えたり減ったりした範囲を含むものである。

【００２０】好適な断片としては、例えば、アミノ末端
を含む一連の残基もしくはカルボキシル末端を含む一連
の残基の欠失、またはアミノ末端を含むものとカルボキ
シル末端を含むものとの二連の残基の欠失を除外すれ
ば、ｓＭＡＤ3dポリペプチドのアミノ酸配列を有するト
ランケーション(truncation)ポリペプチドが含まれる。
また、αヘリックスとαヘリックス形成領域、βシート
とβシート形成領域、ターンとターン形成領域、コイル
とコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒
性領域、β両親媒性領域、可変性領域、表面形成領域、
基質結合領域、および高抗原指数領域を含む断片のよう
な、構造的または機能的特性により特徴づけられる断片
も好適である。その他の好適な断片は生物学的に活性な
断片である。生物学的に活性な断片は、同様の活性をも
つ断片、その活性が向上した断片、または望ましくない
活性が減少した断片を含めて、ｓＭＡＤ3d活性を媒介す
るものである。さらに、動物、特にヒトにおいて抗原性
または免疫原性がある断片も含まれる。

【００２１】これらのポリペプチド断片はどれも、抗原
活性を含めたｓＭＡＤ3dの生物学的活性を保持すること
が好ましい。特定された配列および断片の変異型も本発
明の一部を構成する。好適な変異型は同類アミノ酸置換
により対象物と異なるもの、すなわち、ある残基が同様
の性質の他の残基で置換されているものである。典型的
なこうした置換は、Ala, Val, Leu と Ileの間；Ser と
Thr の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間；
塩基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基PheとTyr
の間で起こる。特に、数個、５〜１０個、１〜５個ま
たは１〜２個のアミノ酸が任意の組合せで置換、欠失ま
たは付加されている変異型が好適である。

【００２２】本発明のｓＭＡＤ3dポリペプチドは任意の
適当な方法で製造することができる。このようなポリペ
プチドには、単離された天然のポリペプチド、組換え的
に生産されたポリペプチド、合成的に製造されたポリペ
プチド、またはこれらの方法の組合せにより製造された
ポリペプチドが含まれる。このようなポリペプチドの製
造のための手段は当業界でよく理解されている。本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう一つの形態はｓＭＡＤ3dポリヌクレオチド
に関する。ｓＭＡＤ3dポリヌクレオチドには、ｓＭＡＤ
3dポリペプチドおよび断片をコードする単離されたポリ
ヌクレオチド、並びにこれらと密接に関連したポリヌク
レオチドが含まれる。さらに特定すると、本発明のｓＭ
ＡＤ3dポリヌクレオチドとしては、配列番号２のｓＭＡ
Ｄ3dポリペプチドをコードする配列番号１中に含まれる
ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、および配列
番号１の特定配列を有するポリヌクレオチドがある。さ
らに、ｓＭＡＤ3dポリヌクレオチドには、配列番号２の
ｓＭＡＤ3dポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
と全長において少なくとも８０％同一であるヌクレオチ
ド配列を含むポリヌクレオチド、および配列番号１のヌ
クレオチド配列と全長において少なくとも８０％同一で
あるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが含まれ
る。これに関連して、少なくとも９０％同一であるポリ
ヌクレオチドが好適であり、特に少なくとも９５％同一
であるものが好適である。さらに、少なくとも９７％同
一であるものがより好ましく、少なくとも９８〜９９％
同一であるものがより一層好ましく、少なくとも９９％
同一であるものが最も好ましい。また、増幅反応に使用
できる条件下、またはプローブやマーカーとして使用で
きる条件下でハイブリダイズするのに十分な、配列番号
１中に含まれるヌクレオチド配列との同一性を有するヌ
クレオチド配列もｓＭＡＤ3dポリヌクレオチドに含まれ
る。本発明はまた、このようなｓＭＡＤ3dポリヌクレオ
チドと相補的なポリヌクレオチドを提供する。

【００２３】本発明のｓＭＡＤ3dは、ヒトｓＭＡＤ3dを
コードする表１のｃＤＮＡ（配列番号１）の配列決定の
結果により示されるように、ＭＡＤファミリーの他のタ
ンパク質と構造的に関連している。配列番号１のｃＤＮ
Ａ配列は配列番号２の３８１個のアミノ酸からなるポリ
ペプチドをコードするオープンリーディングフレーム
（ヌクレオチド番号２−１１４４）を含んでいる。表２
のアミノ酸配列（配列番号２）は３８１個のアミノ酸残
基においてヒトｓＭＡＤ３(Y. Zhang ら, Nature383:16
8-172, 1996)と約９０％同一である（Clustal法使
用）。事実、ｓＭＡＤ３は４４個のアミノ酸（残基１３
３から１７６まで）の内部欠失を含むｓＭＡＤ３のスプ
ライス変異体である。表１のヌクレオチド配列（配列番
号１）は１１４８個のヌクレオチド残基においてヒトｓ
ＭＡＤ３(Y. Zhang ら, Nature 383:168-172, 1996)と
約８９％同一である（Martinez/Needleman-Wunsch DNA
Alignment 使用）。事実、ｓＭＡＤ３は１３２ｂｐ（ヌ
クレオチド４６０から５９１まで）のインフレーム(in
frame)欠失をもつｓＭＡＤ３のスプライス変異体であ
る。したがって、本発明のｓＭＡＤ3dポリペプチドおよ
びポリヌクレオチドは、とりわけ、それらの相同ポリペ
プチドおよびポリヌクレオチドと同様の生物学的機能／
特性をもつことが予測され、それらの有用性は当業者に
は自明である。

【００２４】

【表１】 CATGTCGTCCATCCTGCCTTTCACTCCCCCGATCGTGAAG 40 TGCCTGCTGGGCTGGAAGAAGAGCGAGCAGAACGGGCAGG 80 AGGAGAAATGGTGCGAGAAGGCGGTCAAGAGCCTGGTCAA 120 GAAACTCAAGAAGACGGGGCAGCTGGACGAGCTGGAGAAG 160 GCCATCACCACGCAGAACGTCAACGCCAAGTGCATCACCA 200 CCCCCAGGTCCCTGGATGGCCGGTTGCAGGTGTCCCATCG 240 GAAGGGGCTCCCTCATGTCATcTACTGCCGCCTGTGGCGA 280 TGGCCAGACCTGCACAGCCACCACGAGCTGCGGGCCATGG 320 AGCTGTGTGAGTTCGCCTTCAATATGAAGAAGGACGAGGT 360 CTGCGTGAATCCCTACCACTACCAGAGAGTAGAGACACCA 400 GAGACCCCACCCCCTGGCTACCTGAGTGAAGATGGAGAAA 440 CCAGTGACCACCAGATGAACCACAGCATGGACGCAGGTTC 480 TCCAAACCTATCCCCGAATCCGATGTCCCCAGCACATAAT 520 AACTTGGACCTGCAGCCAGTTACCTACTGCGAGCCGGCcT 560 TCTGGTGCTCCATCTCcTACTACGAGCTGAACCAGCGCGt 600 cggggagACaTTCcACGCCTCgCAGCCATCCATGACTGTG 640 GATGGCTTCACCGAcCCCTCCAATTCGGAGCGCTTCTGCC 680 TAgGGCTGCTCTCCAATGTCAACAGGAATGCAgCAGTGGA 720 GCTGACGCGGAGACACATCGGAAgAgGCGTGCGGCTCCAC 760 TACATCGGAGGGGAgGTCTTCGCAgAgTGCCTCAGTGACA 800 GCGCTATTTTTGTCCAGTcTCCCAACTGTAACCAGCGcTA 840 TGGcTGGCACCCGGCCACCGTcTGCAAGATCCCACCAGGA 880 TGCAACCTGAAGATTTTcAACAACCAGGAGTTcGcTGCCC 920 TcCTGGCCCAGTCGGTCAACCAGGGCTTTGAGGCTGTcTA 960 CCAGTTGACCCGAATGTGCACCATCCGCATGAGcTTcGTC 1000 AAAGGCTGGGGAGCGGAGTACAGGAGACAGACTGTGACCA 1040 GTACCCCCTGCTGGATTGAGCTGCACCTGAATGGGCCTTT 1080 GCAGTGGCTTGACAAGGTCCTCACCCAGATGGGCTCCCCA 1120 AGCATCCGCTGTTCCAGTGTGTCTTAGA 1148 ヒトｓＭＡＤ3dのヌクレオチド配列（配列番号１）

【００２５】

【表２】 MSSILPFTPPIVKCLLGWKKSEQNGQEEKWCEKAVKSLVK 40 KLKKTGQLDELEKAITTQNVNAKCITTPRSLDGRLQVSHR 80 KGLPHVIYCRLWRWPDLHSHHELRAMELCEFAFNMKKDEV 120 CVNPYHYQRVETPETPPPGYLSEDGETSDHQMNHSMDAGS 160 PNLSPNPMSPAHNNLDLQPVTYCEPAFWCSISYYELNQRV 200 GETFHASQPSMTVDGFTDPSNSERFCLGLLSNVNRNAAVE 240 LTRRHIGRGVRLHYIGGEVFAECLSDSAIFVQSPNCNQRY 280 GWHPATVCKIPPGCNLKIFNNQEFAALLAQSVNQGFEAVY 320 QLTRMCTIRMSFVKGWGAEYRRQTVTSTPCWIELHLNGPL 360 QWLDKVLTQMGSPSIRCSSVS. 382 ヒトｓＭＡＤ3dのアミノ酸配列（配列番号２） ｓＭＡＤ3dをコードする本発明の一つのポリヌクレオチ
ドは、標準的なクローニングおよびスクリーニングによ
り、ヒト腎臓の細胞中のｍＲＮＡから誘導されたｃＤＮ
Ａライブラリーから、エクスプレスド・シークエンス・
タグ（expressed sequence tag: EST)分析 (Adams, M.
D. ら, Science (1991) 252:1651-1656;Adams, M.D.
ら, Nature (1992) 355:632-634; Adams, M.D.ら, Natu
re (1995)377 Supp:3-174) を用いて得ることができ
る。また、本発明のポリヌクレオチドはゲノムＤＮＡラ
イブラリーのような天然源から得ることができ、商業的
に入手可能な公知の技法を用いて合成することもでき
る。

【００２６】配列番号２のｓＭＡＤ3dポリペプチドをコ
ードするヌクレオチド配列は、表１中に含まれるポリペ
プチドコード配列（配列番号１のヌクレオチド番号２−
１１４４）と同一であっても、遺伝子コードの重複性
（縮重）のため、やはり配列番号２のポリペプチドをコ
ードする配列であってもよい。

【００２７】本発明のポリヌクレオチドをｓＭＡＤ3dポ
リペプチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリ
ヌクレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列また
はその断片単独、他のコード配列（例えば、リーダーも
しくは分泌配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タ
ンパク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードす
るもの）と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリ
ペプチドのコード配列またはその断片が含まれる。例え
ば、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列
がコードされ得る。本発明のこの形態の好ましい具体例
として、マーカー配列は、ｐＱＥベクター(Qiagen, In
c.)により提供されかつGentz ら, Proc.Natl. Acad. Sc
i. USA (1989) 86:821-824に記載されるようなヘキサ−
ヒスチジンペプチド、またはＨＡタグである。また、こ
のポリヌクレオチドは5'および3'非コード配列、例え
ば、転写されるが翻訳されない配列、スプライシングお
よびポリアデニル化シグナル、リボソーム結合部位、お
よびｍＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。

【００２８】さらに好適な具体例は、数個、５〜１０
個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、または１個のアミ
ノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失または付加されて
いる、表２のｓＭＡＤ3dポリペプチドのアミノ酸配列
（配列番号２）を含むｓＭＡＤ3d変異型をコードするポ
リヌクレオチドである。

【００２９】本発明はさらに、前記の配列とハイブリダ
イズするポリヌクレオチドに関する。これに関して、本
発明は特にストリンジェントな条件下で前記のポリヌク
レオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドに関す
る。本明細書中で用いる「ストリンジェントな条件」と
は、配列間に少なくとも８０％、好ましくは少なくとも
９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より一層好
ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性があるときだ
けハイブリダイゼーションが起こる条件を指す。

【００３０】配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列
またはその断片と同一であるか実質的に同一である本発
明のポリヌクレオチドは、ｓＭＡＤ3dポリペプチドをコ
ードする全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する
ために、また、ｓＭＡＤ3d遺伝子との配列類似性が高い
他の遺伝子（ヒト以外の種に由来する相同体およびオー
ソログ体(ortholog)をコードする遺伝子を含む）のｃＤ
ＮＡおよびゲノムクローンを単離するために、ｃＤＮＡ
およびゲノムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブ
として用いることができる。このようなハイブリダイゼ
ーション技法は当業者には公知である。一般的に、これ
らのヌクレオチド配列は対象物のヌクレオチド配列と８
０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％同一で
ある。プローブはたいてい１５個以上のヌクレオチドを
含み、好ましくは３０個以上を含み、５０個以上のヌク
レオチドを有していてもよい。特に好ましいプローブは
３０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するものであ
る。

【００３１】一実施形態において、ｓＭＡＤ3dポリペプ
チド（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ
体を含む）をコードするポリヌクレオチドを得ること
は、配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片を有
する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブ
リダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリ
ーニングし、前記のポリヌクレオチド配列を含む全長ｃ
ＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する各工程を含んで
なる。かくして、もう一つの形態では、本発明のｓＭＡ
Ｄ3dポリヌクレオチドはさらに、配列番号１のヌクレオ
チド配列またはその断片とストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズするヌクレオチド配列を含んでなるヌク
レオチド配列を含むものである。ｓＭＡＤ3dポリペプチ
ドも、前記のハイブリダイゼーション条件により得られ
たヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を
含んでなるポリペプチドを含む。このようなハイブリダ
イゼーション技法は当業者に公知である。ストリンジェ
ントなハイブリダイゼーション条件は上で定義したとお
りであるか、または、50% ホルムアミド、５×SSC (150
mM NaCl, 15mM クエン酸三ナトリウム) 、50mMリン酸ナ
トリウム (pH7.6)、５×Denhardt溶液、10% デキストラ
ン硫酸および20μg/mlの変性し剪断したサケ精子ＤＮＡ
を含有する溶液中で４２℃で一夜インキュベートし、次
いでフィルターを 0.1×SSC 中約６５℃で洗浄する条件
である。

【００３２】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、動物およびヒトの疾病に対する治療薬および診
断薬を探索するための研究用の試薬および材料として利
用することができる。ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含有するベ
クター、このベクターにより遺伝子操作された宿主細
胞、および組換え法による本発明のポリペプチドの生産
に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡ
を用いてこの種のタンパク質を生産するための無細胞翻
訳系も使用することができる。

【００３３】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み入れるため
に、宿主細胞が遺伝子操作される。宿主細胞へのポリヌ
クレオチドの導入は、Davis ら, BASIC METHODS IN MOL
ECULAR BIOLOGY (1986) およびSambrook ら, MOLECULAR
CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y. (1989) などの多くの標準的な実験室マニュアルに記
載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェ
クション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェク
ション、トランスベクション(transvection)、マイクロ
インジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェク
ション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレー
プローディング(scrape loading)、弾丸導入(ballistic
introduction)または感染により行うことができる。

【００３４】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。

【００３５】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エ
レメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ
４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、ア
デノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レ
トロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せ
に由来するベクター、例えば、コスミドやファージミド
のようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素
に由来するものがある。この発現系は発現を起こさせる
だけでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよ
い。一般的に、宿主内でのポリペプチドの産生のために
ポリヌクレオチドを維持し、増やし、発現するのに適し
た系またはベクターはどれも使用することができる。Sa
mbrookら, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL
(前掲) に記載されるような、日常的に用いられる公知
の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発
現系に挿入することができる。

【００３６】翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、
細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるため
に、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込
むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチ
ドに対して内因性であっても、異種シグナルであっても
よい。

【００３７】スクリーニングアッセイで使用するためｓ
ＭＡＤ3dポリペプチドを発現させようとする場合、その
ポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適であ
る。この場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先
立って細胞を回収する。ｓＭＡＤ3dポリペプチドが培地
に分泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製す
るために培地を回収する。細胞内に産生される場合は、
その細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収す
る必要がある。

【００３８】組換え細胞培養物からｓＭＡＤ3dポリペプ
チドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエ
タノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換ク
ロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め
た公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、
高速液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポリ
ペプチドが単離および／または精製中に変性されるとき
は、タンパク質を再生させるための公知の技法を用い
て、活性のあるコンフォメーションを復元することが可
能である。診断アッセイ 本発明はまた、診断薬としてのｓＭＡＤ3dポリヌクレオ
チドの使用に関する。機能障害と関連したｓＭＡＤ3d遺
伝子の変異型の検出は、ｓＭＡＤ3dの過少発現、過剰発
現または変化した発現により生ずる疾病またはその罹病
性の診断に追加しうる、またはその診断を下しうる診断
用ツールを提供するだろう。ｓＭＡＤ3d遺伝子に変異が
ある個体を、さまざまな技法によりＤＮＡレベルで見つ
け出すことができる。

【００３９】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料から得ること
ができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用して
も、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使って酵素的に
増幅してもよい。同様の方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを
使用することもできる。欠失および挿入変異は、正常な
遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイズの変化によ
り検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識ｓＭＡＤ
3dヌクレオチド配列とハイブリダイズさせることで同定
できる。完全にマッチした配列とミスマッチの二重鎖と
はＲＮアーゼ消化により、または融解温度の差異により
区別できる。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を用い
るもしくは用いないゲルでのＤＮＡ断片の電気泳動の移
動度の変化により、または直接ＤＮＡ配列決定によって
も検出できる（例えば、Myers ら,Science (1985) 230:
1242 を参照のこと）。特定位置での配列変化はヌクレ
アーゼプロテクションアッセイ（例えば、ＲＮアーゼお
よびＳ１プロテクション）または化学的開裂法によって
も確認できる（Cottonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA
(1985) 85:4397-4401を参照のこと）。別の実施形態で
は、例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを
行うため、ｓＭＡＤ3dヌクレオチド配列またはその断片
を含むオリゴヌクレオチドプローブのアレイを構築する
ことができる。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能
性を有し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性
を含めた分子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすため
に用いられている（例えば、M. Chee ら, Science, Vo
l.274, pp.610-613 (1996) を参照のこと）。

【００４０】診断アッセイは、前記の方法によりｓＭＡ
Ｄ3d遺伝子の変異を検出することで、慢性腎不全、アテ
ローム性動脈硬化および繊維症への罹りやすさを診断ま
たは判定する方法を提供する。

【００４１】さらに、被験者から得られたサンプルから
ｓＭＡＤ3dポリペプチドまたはｓＭＡＤ3dｍＲＮＡのレ
ベルの異常な低下または増加を測定する方法により、慢
性腎不全、アテローム性動脈硬化および繊維症の診断を
下すことができる。発現の低下または増加は、当技術分
野で公知のポリヌクレオチド定量法のいずれか、例えば
ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼプロテクション、ノ
ーザンブロット、その他のハイブリダイゼーション法に
よりＲＮＡレベルで測定することができる。宿主から得
られたサンプル中のｓＭＡＤ3dポリペプチドのようなタ
ンパク質のレベルを測定するためのアッセイ法は当業者
によく知られている。こうしたアッセイ法として、ラジ
オイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロ
ット分析、ＥＬＩＳＡアッセイなどがある。

【００４２】かくして、もう一つの形態において、本発
明は、疾病（特に慢性腎不全、アテローム性動脈硬化お
よび繊維症）またはこのような疾病への罹りやすさを診
断するためのキットに関し、このキットは、(a) ｓＭＡ
Ｄ3dポリヌクレオチド（好ましくは、配列番号１のヌク
レオチド配列）もしくはその断片、(b) (a) のヌクレオ
チド配列に相補的なヌクレオチド配列、(c) ｓＭＡＤ3d
ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチ
ド）もしくはその断片、または(d) ｓＭＡＤ3dポリペプ
チド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）に対す
る抗体、を含んでなる。このようなキットにおいて、
(a) 、(b) 、(c) または (d)が実質的な構成成分である
ことが理解されよう。染色体アッセイ 本発明のヌクレオチド配列はまた、染色体の同定にも有
用である。この配列は個々のヒト染色体上の特定の位置
をターゲッティングし、その特定位置とハイブリダイズ
することができる。本発明に従って関連配列の染色体地
図を作成することは、これらの配列と遺伝子関連疾患と
を相関させる上で重要な第一段階である。ひとたび配列
が正確な染色体位置にマッピングされたら、その染色体
上のその配列の物理的位置を遺伝地図データと相関させ
ることができる。この種のデータは、例えば、V. McKus
ick, Mendelian Inheritance in Man (Johns Hopkins U
niversity Welch Medical Library からオンラインで入
手可能) 中に見いだせる。その後、同一の染色体領域に
マッピングされた遺伝子と疾患との関係を連鎖分析（物
理的に隣接した遺伝子の共遺伝）により同定する。

【００４３】患者と正常個体とのｃＤＮＡまたはゲノム
配列の差異も調べることができる。患者の一部または全
部に変異が観察されるが、どの正常個体にも観察されな
い場合は、その変異が疾病の原因である可能性がある。抗体 本発明のポリペプチドまたはその断片もしくは類似体、
またはそれらを発現する細胞は、ｓＭＡＤ3dポリペプチ
ドに免疫特異的な抗体を産生するための免疫原としても
使用することができる。「免疫特異的」とは、その抗体
が従来技術における他の関連ポリペプチドに対するその
親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質的に高
い親和性を有することを意味する。

【００４４】ｓＭＡＤ3dポリペプチドに対する抗体は、
慣用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以
外）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類
似体もしくは細胞を投与することにより得られる。モノ
クローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養物により
産生される抗体をもたらす任意の技法を用いることがで
きる。例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.
およびMilstein, C.,Nature (1975) 256:495-497)、ト
リオーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法(Kozbor
ら, Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハ
イブリドーマ技法 (Coleら, MONOCLONAL ANTIBODIES AN
D CANCER THERAPY, pp.77-96, Alan R.Liss, Inc., 198
5) などがある。

【００４５】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特許第4,94
6,778 号）を適応させることができる。また、ヒト化抗
体を発現させるために、トランスジェニックマウスまた
は他の哺乳動物を含む他の生物を利用することができ
る。

【００４６】前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを
発現するクローンを単離・同定したり、アフィニティー
クロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製すること
もできる。

【００４７】ｓＭＡＤ3dポリペプチドに対する抗体は、
とりわけ、慢性腎不全、アテローム性動脈硬化および繊
維症の治療に使用できる可能性がある。ワクチン 本発明の別の形態は、哺乳動物において免疫学的応答を
生起させる方法に関し、この方法は、特に慢性腎不全、
アテローム性動脈硬化および繊維症から前記動物を防御
するための抗体および／またはＴ細胞免疫応答を生ずる
のに十分なｓＭＡＤ3dポリペプチドまたはその断片を哺
乳動物に接種することを含んでなる。本発明のさらに別
の形態は、哺乳動物を疾病から防御する抗体を産生させ
るような免疫学的応答を引き出すために、in vivo でｓ
ＭＡＤ3dポリヌクレオチドの発現を指令するベクターを
介してｓＭＡＤ3dポリペプチドを供給することを含んで
なる、哺乳動物において免疫学的応答を引き出す方法に
関する。

【００４８】本発明の更なる形態は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物においてｓＭＡＤ3dポリペプ
チドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチ
ン製剤（組成物）に関し、この組成物はｓＭＡＤ3dポリ
ペプチドまたはｓＭＡＤ3d遺伝子を含有する。ワクチン
製剤は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ｓＭＡＤ
3dポリペプチドは胃の中で分解されうるので、非経口的
（皮下、筋肉内、静脈内、皮内等への注射を含む）に投
与することが好ましい。非経口投与に適した製剤として
は、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤およびこの製剤を受容
者の血液と等張にする溶質を含みうる水性および非水性
の無菌注射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含みうる
水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした製剤は
１回量容器または数回量容器（例えば、密閉アンプルお
よびバイアル）で提供することができ、また、使用直前
に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で
保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤の免疫
原性を増強するためのアジュバント系、例えば水中油型
のアジュバント系や当技術分野で公知の他のアジュバン
ト系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性で
変化し、ルーチンな実験操作により簡単に決定できる。スクリーニングアッセイ 本発明のｓＭＡＤ3dポリペプチドは、このポリペプチド
を活性化する化合物（アゴニスト）またはその活性を阻
害する化合物（アンタゴニスト、または阻害剤ともい
う）のスクリーニング法において使用することができ
る。こうして、本発明のポリペプチドは、例えば、細
胞、無細胞調製物、化学物質ライブラリーおよび天然産
物の混合物からアゴニストまたはアンタゴニストを評価
し同定するためにも用いられる。これらのアゴニストま
たはアンタゴニストは、本発明のポリペプチドの、場合
によって、天然のまたは修飾された基質、リガンド、受
容体、酵素などであってよく、また、本発明のポリペプ
チドの構造的または機能的な模擬物であってもよい（Co
ligan ら, Current Protocols in Immunology 1(2): Ch
apter 5 (1991)を参照のこと）。

【００４９】ｓＭＡＤ3dポリペプチドは多くの病理を含
めて多数の生物学的機能に関与している。したがって、
一方ではｓＭＡＤ3dポリペプチドを刺激し、他方ではｓ
ＭＡＤ3dポリペプチドの機能を阻害し得る化合物および
薬物を見つけ出すことが望まれる。一般的に、アゴニス
トは慢性腎不全、アテローム性動脈硬化および繊維症の
ような症状の治療および予防目的で用いられる。アンタ
ゴニストは慢性腎不全、アテローム性動脈硬化および繊
維症のような症状のさまざまな治療および予防目的で使
用しうる。

【００５０】一般に、こうしたスクリーニング法はｓＭ
ＡＤ3dポリペプチドを発現する適当な細胞、またはｓＭ
ＡＤ3dポリペプチドに応答する適当な細胞を用いるもの
である。この種の細胞には哺乳動物、酵母、ショウジョ
ウバエ由来の細胞または大腸菌細胞が含まれる。次い
で、ｓＭＡＤ3dポリペプチドを発現する細胞（もしくは
発現されたポリペプチドを含む細胞膜）またはｓＭＡＤ
3dポリペプチドに応答する細胞を試験化合物と接触させ
て、その結合または機能的応答の刺激もしくは阻害を観
察する。候補化合物と接触させた細胞の能力を、接触さ
せなかった同一細胞とｓＭＡＤ3d活性に関して比較す
る。

【００５１】これらのアッセイでは候補化合物の結合を
簡単に試験することができ、そこでは候補化合物と直接
または間接に結合された標識により、または標識した競
合物質との競合を用いるアッセイにより、ｓＭＡＤ3dポ
リペプチドを担持する細胞への付着が検出される。さら
に、これらのアッセイでは、ｓＭＡＤ3dポリペプチドを
担持する細胞に適した検出系を用いて、候補化合物がｓ
ＭＡＤ3dポリペプチドの活性化により生ずるシグナルを
結果的にもたらすか否かを試験することができる。一般
的に、活性化の阻害剤は既知のアゴニストの存在下でア
ッセイされ、そして候補化合物の存在がアゴニストによ
る活性化に与える影響が調べられる。

【００５２】さらに、これらのアッセイは、候補化合物
とｓＭＡＤ3dポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて
混合物をつくり、この混合物中のｓＭＡＤ3d活性を測定
し、そしてこの混合物のｓＭＡＤ3d活性を標準と比較す
る各ステップを単に含むだけでよい。

【００５３】また、ｓＭＡＤ3dのｃＤＮＡ、タンパク質
またはこのタンパク質に対する抗体を用いて、細胞内で
のｓＭＡＤ3dのｍＲＮＡまたはタンパク質の生産に及ぼ
す添加化合物の作用を検出するためのアッセイを組み立
てることができる。例えば、当技術分野で公知の標準方
法によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用
いて、ｓＭＡＤ3dタンパク質の分泌レベルまたは細胞結
合レベルを測定するためのＥＬＩＳＡを構築することが
でき、これは適切に操作された細胞または組織からのｓ
ＭＡＤ3dの生産を抑制または増強する物質（それぞれア
ンタゴニストまたはアゴニストともいう）の探索に用い
ることができる。

【００５４】膜結合受容体または可溶性受容体が存在す
るのであれば、当技術分野で公知の標準的な受容体結合
法によりこの種の受容体を同定するためにｓＭＡＤ3dタ
ンパク質を用いることができる。こうした受容体結合法
には、限定するものではないが、リガンド結合および架
橋アッセイがあり、このアッセイでは、ｓＭＡＤ3dを放
射性アイソトープ（例：１２５I）で標識するか、化学
的に修飾（例：ビオチン化）するか、または検出や精製
に適したペプチド配列に融合させ、そして推定上の受容
体源（細胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、体液な
ど）とインキュベートする。その他の方法としては、表
面プラズモン共鳴および分光学のような生物物理的方法
がある。受容体の精製およびクローニングに用いること
に加えて、これらの結合アッセイは、もし存在するので
あれば、ｓＭＡＤ3dのその受容体への結合と競合するｓ
ＭＡＤ3dのアゴニストまたはアンタゴニストを同定する
ために用いることもできる。スクリーニングアッセイを
行うための標準的な方法は当技術分野でよく理解されて
いる。

【００５５】ｓＭＡＤ3dポリペプチドの潜在的なアンタ
ゴニストの例としては、抗体、ある場合には、ｓＭＡＤ
3dポリペプチドのリガンド、基質、受容体、酵素などと
密接な関係があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパク
質（例えば、リガンド、基質、受容体、酵素などの断
片）、または本発明のポリペプチドと結合するが応答を
誘導しない（それゆえポリペプチドの活性を妨げる）小
分子などがある。

【００５６】かくして、他の形態において、本発明は、
ｓＭＡＤ3dポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニス
ト、リガンド、受容体、基質、酵素など、またはｓＭＡ
Ｄ3dポリペプチドの生産を低下または増加させる化合物
を同定するためのスクリーニングキットに関し、このキ
ットは、(a) ｓＭＡＤ3dポリペプチド（好ましくは、配
列番号２のポリペプチド） (b) ｓＭＡＤ3dポリペプチド（好ましくは、配列番号２
のポリペプチド）を発現する組換え細胞、(c) ｓＭＡＤ
3dポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチ
ド）を発現する細胞膜、または(d) ｓＭＡＤ3dポリペプ
チド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）に対す
る抗体、を含んでなる。このようなキットにおいて、
(a) 、(b) 、(c) または (d)が実質的な構成成分である
ことが理解されよう。予防および治療法 本発明は、ｓＭＡＤ3dポリペプチド活性の過剰量と不足
量のどちらにも関係した慢性腎不全、アテローム性動脈
硬化および繊維症などの異常な状態の治療法を提供す
る。

【００５７】ｓＭＡＤ3dポリペプチドの活性が過剰であ
る場合は、いくつかのアプローチが利用可能である。一
つのアプローチは、例えば、リガンド、基質、受容体、
酵素などの結合をブロックすることにより、または第２
のシグナルを抑制することで異常な状態を軽減すること
により、ｓＭＡＤ3dポリペプチドの機能を阻害するのに
有効な量で、前記の阻害剤化合物（アンタゴニスト）を
製剤学上許容される担体とともに患者に投与することを
含んでなる。もう一つのアプローチでは、リガンド、基
質、酵素、受容体などと結合する能力がまだある可溶性
形態のｓＭＡＤ3dポリペプチドを、内因性のｓＭＡＤ3d
ポリペプチドとの競合状態で投与する。このような競合
剤の典型的な例はｓＭＡＤ3dポリペプチドの断片であ
る。

【００５８】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性ｓＭＡＤ3dポリペプチドをコードする遺伝
子の発現を抑制することができる。こうした公知技術
は、体内で生成されるか別個に投与されるアンチセンス
配列の使用を必要とする。例えば、Oligodeoxynucleoti
des as Antisense Inhibitors of Gene Expression, CR
C Press, Boca Raton, FL (1988)中のO'Connor, J Neur
ochem (1991) 56:560 を参照のこと。あるいはまた、こ
の遺伝子と共に三重らせんを形成するオリゴヌクレオチ
ドを供給することもできる。例えば、Lee ら, Nucleic
Acids Res (1979)6:3073; Cooney ら, Science (1988)
241:456; Dervanら, Science (1991) 251:1360 を参照
のこと。これらのオリゴマーはそれ自体を投与すること
もできるし、関連オリゴマーをin vivo で発現させるこ
ともできる。

【００５９】ｓＭＡＤ3dおよびその活性の過少発現に関
係した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプロ
ーチを取ることができる。一つのアプローチは、治療上
有効な量のｓＭＡＤ3dポリペプチドを活性化する化合物
（すなわち、前記のアゴニスト）を製剤学上許容される
担体とともに患者に投与して、異常な状態を緩和するこ
とを含んでなる。別法として、患者の関連細胞において
ｓＭＡＤ3dを内因的に産生させるために遺伝子治療を用
いることができる。例えば、上で述べたような複製欠損
レトロウイルスベクターによる発現のために本発明のポ
リヌクレオチドを遺伝子操作する。次にレトロウイルス
発現構築物を単離し、本発明のポリペプチドをコードす
るＲＮＡを含有するレトロウイルスプラスミドベクター
で形質導入されたパッケージング細胞に導入する。その
結果、パッケージング細胞は対象の遺伝子を含有する感
染性のウイルス粒子を産生するようになる。in vivo で
の細胞処理およびin vivo でのポリペプチド発現のため
に、これらの産生細胞を患者に投与する。遺伝子治療の
概論に関しては、Human Molecular Genetics, T Strach
anand A P Read, BIOS Scientific Publishers Ltd (19
96) 中のChapter 20, Gene Therapy and other Molecul
ar Genetic-based Therapeutic Approaches(およびその
中の引用文献) を参照のこと。もう一つのアプローチは
治療量のｓＭＡＤ3dポリペプチドを適当な製剤学上の担
体とともに投与することである。製剤および投与 可溶性形態のｓＭＡＤ3dポリペプチドのようなペプチ
ド、アゴニストおよびアンタゴニストペプチド、または
小分子は適当な製剤学上の担体と組み合わせて製剤化す
ることができる。このような製剤は治療上有効な量のポ
リペプチドまたは化合物と、製剤学上許容される担体ま
たは賦形剤を含有する。この種の担体としては、食塩
水、生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、
エタノール、およびこれらの組合せがあるが、これらに
限らない。製剤は投与様式に適合させるべきであり、こ
れは当技術分野の技量の範囲内である。本発明はさら
に、前記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以
上の容器を含んでなる医薬用パックおよびキットに関す
る。

【００６０】本発明のポリペプチドおよび他の化合物は
単独で使用しても、他の化合物、例えば治療用化合物と
一緒に使用してもよい。

【００６１】医薬組成物を全身投与するときの好ましい
形態は、注入（注射）、典型的には静注である。皮下、
筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用でき
る。全身投与の別の手段は、胆汁酸塩、フシジン酸、そ
の他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘膜および経
皮投与である。さらに、腸溶剤またはカプセル剤として
適切に製剤化されているのであれば、経口投与も可能で
ある。これらの化合物は軟膏、ペースト、ゲルなどの剤
形で局所に投与しても、かつ／または局在化させてもよ
い。

【００６２】必要な投与量範囲はペプチドの選択、投与
経路、製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左
右される。しかし、適当な投与量は患者の体重１kgあた
り0.1 〜100 μg の範囲である。利用可能な化合物が多
種多様であり、それぞれの投与経路の効率も異なるた
め、必要とされる投与量は広範に変動することを予想す
べきである。例えば、経口投与は静注による投与よりも
高い投与量を必要とすることが予想される。こうした投
与量レベルの変動は、当技術分野でよく理解されている
ような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整するこ
とができる。

【００６３】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ex vivo でポリペプチドをコードするＤＮＡまたは
ＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより、例えばレトロ
ウイルスプラスミドベクターを用いて、遺伝子工学的に
操作する。その後、この細胞を患者に導入する。

【００６４】

【実施例】以下の実施例は、特にことわらない限り、当
業者には公知の標準的な技法を用いて実施した。実施例
は単なる例示であって、本発明を制限するものではな
い。 実施例１ ＭＡＤファミリーのメンバー間のコンセンサス配列に基
づいて設計したプライマーを用いる縮重ＲＴ−ＰＣＲに
よりＭＡＤファミリーライブラリーを作製した。制限酵
素マッピングにより４０のクローンをスクリーニングし
た。これらのクローンの１つであるｓＭＡＤ3dはｓＭＡ
Ｄ３変異体として同定されたもので、１３２ｂｐのイン
フレーム欠失を含んでいた。この変異体は、ｓＭＡＤ３
のオープンリーディングフレームに隣接するｓＭＡＤ３
特異的プライマーを用いる独立ＰＣＲにより確認され
た。該ライブラリーにおいて該部分クローンと同じ欠失
を含んでいる全長クローンを単離した。

【００６５】本明細書中に引用された、特許および特許
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。

【００６６】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Zhu, Yuan; Laping, Nicholas J <120> A Novel sMAD3 Splice Variant as a Target in Chronic Renal Failure, Atherosclerosis and Fibrosis <130> PA01-637 <150> US08/904874 <151> 1997-8-1 <160> 2 <210> 1 <211> 1148 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 CATGTCGTCC ATCCTGCCTT TCACTCCCCC GATCGTGAAG TGCCTGCTGG GCTGGAAGAA 60 GAGCGAGCAG AACGGGCAGG AGGAGAAATG GTGCGAGAAG GCGGTCAAGA GCCTGGTCAA 120 GAAACTCAAG AAGACGGGGC AGCTGGACGA GCTGGAGAAG GCCATCACCA CGCAGAACGT 180 CAACGCCAAG TGCATCACCA CCCCCAGGTC CCTGGATGGC CGGTTGCAGG TGTCCCATCG 240 GAAGGGGCTC CCTCATGTCA TCTACTGCCG CCTGTGGCGA TGGCCAGACC TGCACAGCCA 300 CCACGAGCTG CGGGCCATGG AGCTGTGTGA GTTCGCCTTC AATATGAAGA AGGACGAGGT 360 CTGCGTGAAT CCCTACCACT ACCAGAGAGT AGAGACACCA GAGACCCCAC CCCCTGGCTA 420 CCTGAGTGAA GATGGAGAAA CCAGTGACCA CCAGATGAAC CACAGCATGG ACGCAGGTTC 480 TCCAAACCTA TCCCCGAATC CGATGTCCCC AGCACATAAT AACTTGGACC TGCAGCCAGT 540 TACCTACTGC GAGCCGGCCT TCTGGTGCTC CATCTCCTAC TACGAGCTGA ACCAGCGCGT 600 CGGGGAGACA TTCCACGCCT CGCAGCCATC CATGACTGTG GATGGCTTCA CCGACCCCTC 660 CAATTCGGAG CGCTTCTGCC TAGGGCTGCT CTCCAATGTC AACAGGAATG CAGCAGTGGA 720 GCTGACGCGG AGACACATCG GAAGAGGCGT GCGGCTCCAC TACATCGGAG GGGAGGTCTT 780 CGCAGAGTGC CTCAGTGACA GCGCTATTTT TGTCCAGTCT CCCAACTGTA ACCAGCGCTA 840 TGGCTGGCAC CCGGCCACCG TCTGCAAGAT CCCACCAGGA TGCAACCTGA AGATTTTCAA 900 CAACCAGGAG TTCGCTGCCC TCCTGGCCCA GTCGGTCAAC CAGGGCTTTG AGGCTGTCTA 960 CCAGTTGACC CGAATGTGCA CCATCCGCAT GAGCTTCGTC AAAGGCTGGG GAGCGGAGTA 1020 CAGGAGACAG ACTGTGACCA GTACCCCCTG CTGGATTGAG CTGCACCTGA ATGGGCCTTT 1080 GCAGTGGCTT GACAAGGTCC TCACCCAGAT GGGCTCCCCA AGCATCCGCT GTTCCAGTGT 1140 GTCTTAGA 1148 <210> 2 <211> 381 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ser Ser Ile Leu Pro Phe Thr Pro Pro Ile Val Lys Cys Leu Leu 1 5 10 15 Gly Trp Lys Lys Ser Glu Gln Asn Gly Gln Glu Glu Lys Trp Cys Glu 20 25 30 Lys Ala Val Lys Ser Leu Val Lys Lys Leu Lys Lys Thr Gly Gln Leu 35 40 45 Asp Glu Leu Glu Lys Ala Ile Thr Thr Gln Asn Val Asn Ala Lys Cys 50 55 60 Ile Thr Thr Pro Arg Ser Leu Asp Gly Arg Leu Gln Val Ser His Arg 65 70 75 80 Lys Gly Leu Pro His Val Ile Tyr Cys Arg Leu Trp Arg Trp Pro Asp 85 90 95 Leu His Ser His His Glu Leu Arg Ala Met Glu Leu Cys Glu Phe Ala 100 105 110 Phe Asn Met Lys Lys Asp Glu Val Cys Val Asn Pro Tyr His Tyr Gln 115 120 125 Arg Val Glu Thr Pro Glu Thr Pro Pro Pro Gly Tyr Leu Ser Glu Asp 130 135 140 Gly Glu Thr Ser Asp His Gln Met Asn His Ser Met Asp Ala Gly Ser 145 150 155 160 Pro Asn Leu Ser Pro Asn Pro Met Ser Pro Ala His Asn Asn Leu Asp 165 170 175 Leu Gln Pro Val Thr Tyr Cys Glu Pro Ala Phe Trp Cys Ser Ile Ser 180 185 190 Tyr Tyr Glu Leu Asn Gln Arg Val Gly Glu Thr Phe His Ala Ser Gln 195 200 205 Pro Ser Met Thr Val Asp Gly Phe Thr Asp Pro Ser Asn Ser Glu Arg 210 215 220 Phe Cys Leu Gly Leu Leu Ser Asn Val Asn Arg Asn Ala Ala Val Glu 225 230 235 240 Leu Thr Arg Arg His Ile Gly Arg Gly Val Arg Leu His Tyr Ile Gly 245 250 255 Gly Glu Val Phe Ala Glu Cys Leu Ser Asp Ser Ala Ile Phe Val Gln 260 265 270 Ser Pro Asn Cys Asn Gln Arg Tyr Gly Trp His Pro Ala Thr Val Cys 275 280 285 Lys Ile Pro Pro Gly Cys Asn Leu Lys Ile Phe Asn Asn Gln Glu Phe 290 295 300 Ala Ala Leu Leu Ala Gln Ser Val Asn Gln Gly Phe Glu Ala Val Tyr 305 310 315 320 Gln Leu Thr Arg Met Cys Thr Ile Arg Met Ser Phe Val Lys Gly Trp 325 330 335 Gly Ala Glu Tyr Arg Arg Gln Thr Val Thr Ser Thr Pro Cys Trp Ile 340 345 350 Glu Leu His Leu Asn Gly Pro Leu Gln Trp Leu Asp Lys Val Leu Thr 355 360 365 Gln Met Gly Ser Pro Ser Ile Arg Cys Ser Ser Val Ser 370 375 380

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 9/10 ４Ｃ０８５ Ａ６１Ｐ 9/10 13/12 ４Ｃ０８６ 13/12 Ｃ０７Ｋ 14/47 ４Ｈ０４５ Ｃ０７Ｋ 14/47 16/18 16/18 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 1/68 5/00 Ａ (72)発明者 ユアン，チュウ アメリカ合衆国 19422 ペンシルバニア 州 ブルー ベル，オークモント ドライ ブ 203 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA43 BA80 CA04 DA06 GA11 4B063 QA01 QA12 QA17 QA18 QA19 QQ42 QQ79 QR59 QR77 QR80 QS24 QS25 QS28 QS34 4B064 AG01 CA02 CA19 CC24 DA01 DA13 4B065 AA26X AA93X AA93Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA44 CA46 4C084 AA06 AA07 AA13 AA17 MA52 MA66 NA14 ZA451 ZA811 ZC781 4C085 AA03 AA13 BB11 CC04 DD22 DD23 EE01 FF24 4C086 AA01 AA02 AA04 EA16 MA05 MA66 NA14 ZA45 ZA81 ZC78 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA76 DA86 EA23 EA50 FA74

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２のｓＭＡＤ3dポリペプチドを
   コードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも
   ９０％同一であり、かつｓＭＡＤ3dポリペプチドの活性
   を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
   またはこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオ
   チド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 前記のポリヌクレオチドが、配列番号２
   のｓＭＡＤ3dポリペプチドをコードする配列番号１中に
   含まれるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１に記
   載のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 前記のポリヌクレオチドが、その全長に
   おいて配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９０
   ％同一であるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１
   に記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 配列番号１のポリヌクレオチドである、
   請求項３に記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 ＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項１に
   記載のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 配列番号２のｓＭＡＤ3dポリペプチドの
   アミノ酸配列において１もしくは複数のアミノ酸が付
   加、欠失または置換されており、かつｓＭＡＤ3dポリペ
   プチドの活性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレ
   オチド配列を含んでなるポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在
   するとき配列番号２のポリペプチドと少なくとも９１％
   同一であるアミノ酸配列を含むｓＭＡＤ3dポリペプチド
   を産生することができる発現系を含んでなるＤＮＡまた
   はＲＮＡ分子。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の発現系を含有する宿主
   細胞。
9. 【請求項９】 ｓＭＡＤ3dポリペプチドを産生させるの
   に十分な条件下で請求項８に記載の宿主細胞を培養し、
   この培養物から前記ポリペプチドを回収することを含ん
   でなる、ｓＭＡＤ3dポリペプチドの産生方法。
10. 【請求項１０】 宿主細胞が適当な培養条件下でｓＭＡ
    Ｄ3dポリペプチドを産生するように、請求項７に記載の
    発現系を用いて宿主細胞を形質転換またはトランスフェ
    クションすることを含んでなる、ｓＭＡＤ3dポリペプチ
    ドを産生する細胞の作製方法。
11. 【請求項１１】 全長において配列番号２のアミノ酸配
    列と少なくとも９１％同一であるアミノ酸配列を含んで
    なるｓＭＡＤ3dポリペプチド。
12. 【請求項１２】 配列番号２のアミノ酸配列を含む、請
    求項１１に記載のポリペプチド。
13. 【請求項１３】 請求項１１に記載のｓＭＡＤ3dポリペ
    プチドに免疫特異的な抗体。
14. 【請求項１４】 請求項１１に記載のｓＭＡＤ3dポリペ
    プチドの活性増加または発現増加を必要としている患者
    を治療するための医薬組成物であって、治療に有効な量
    の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアゴニスト、および／ま
    たは(b) 前記ポリペプチド活性のin vivo 生産をもたら
    す形の、配列番号２のｓＭＡＤ3dポリペプチドをコード
    するヌクレオチド配列と全長において少なくとも９０％
    同一であるヌクレオチド配列、または前記ヌクレオチド
    配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単
    離されたポリヌクレオチド、を含んでなる医薬組成物。
15. 【請求項１５】 請求項１１に記載のｓＭＡＤ3dポリペ
    プチドの活性または発現を抑制する必要がある患者を治
    療するための医薬組成物であって、治療に有効な量の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアンタゴニスト、および
    ／または(b) 前記ポリペプチドをコードするヌクレオチ
    ド配列の発現を抑制する核酸分子、および／または(c)
    前記ポリペプチドのリガンド、基質または受容体に関し
    て前記ポリペプチドと競合するポリペプチド、を含んで
    なる医薬組成物。
16. 【請求項１６】 請求項１１に記載のｓＭＡＤ3dポリペ
    プチドの発現または活性と関連した被験者の疾病または
    その罹病性の検出方法であって、 (a) 前記被験者のゲノム中にｓＭＡＤ3dポリペプチドを
    コードするヌクレオチド配列の突然変異があるかどうか
    を調べる、および／または(b) 前記被験者から得られた
    サンプル中のｓＭＡＤ3dポリペプチド発現の存在または
    量を分析する、ことを含んでなる方法。
17. 【請求項１７】 請求項１１に記載のｓＭＡＤ3dポリペ
    プチドを阻害（拮抗）または活性化する化合物の同定方
    法であって、 (a) ｓＭＡＤ3dポリペプチドを発現している細胞（もし
    くはｓＭＡＤ3dポリペプチドを発現している細胞膜）ま
    たはｓＭＡＤ3dポリペプチドに応答する細胞と候補化合
    物とを接触させ、そして(b) その結合、または機能的応
    答の刺激もしくは抑制を観察するか、または候補化合物
    と接触させた細胞（または細胞膜）の能力を、接触させ
    なかった同一の細胞と、ｓＭＡＤ3dポリペプチド活性に
    関して比較する、ことを含んでなる方法。
18. 【請求項１８】 請求項１７に記載の方法により同定さ
    れたアンタゴニスト。
19. 【請求項１９】 請求項１０に記載の方法により作製さ
    れた組換え宿主細胞、またはｓＭＡＤ3dポリペプチドを
    発現しているその膜。