JP2002098677A - 液体クロマトグラフィーの試料導入方法及び装置 - Google Patents
液体クロマトグラフィーの試料導入方法及び装置Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 液体クロマトグラフィーに試料を導入する際
に試料バンドをせまくした後に分離カラムに導入する。 【解決手段】 液体クロマトグラフィーの分離カラムに
試料を導入する前に、試料導入バルブに連通した多連続
孔を持つ、又は多孔質である一体型の固相抽出カラム
（モノリシックカラム−Ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ Ｃｏｌ
ｕｍｎ）に試料を保持・濃縮し、試料バンドを狭くして
から分離カラムに導入することを特徴とする。
に試料バンドをせまくした後に分離カラムに導入する。 【解決手段】 液体クロマトグラフィーの分離カラムに
試料を導入する前に、試料導入バルブに連通した多連続
孔を持つ、又は多孔質である一体型の固相抽出カラム
（モノリシックカラム−Ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ Ｃｏｌ
ｕｍｎ）に試料を保持・濃縮し、試料バンドを狭くして
から分離カラムに導入することを特徴とする。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、液体クロマトグラ
フィーの試料導入方法及び装置に関するもので、特に試
料中の溶質の量の少ないサンプルを多量に注入する試料
導入方法及び装置に関するものである。
フィーの試料導入方法及び装置に関するもので、特に試
料中の溶質の量の少ないサンプルを多量に注入する試料
導入方法及び装置に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来は、図３のようなプレカラム３を用
いた濃縮流路を構築していた。ここで用いる濃縮用プレ
カラム３は、使う充填剤は分離カラムと保持挙動は異な
ったとしても、溶出時に狭いバンドで溶出し分離カラム
４に導入する必要がある。プレカラム３も分離カラム４
と同等以上の性能を有する必要がある。然るに、充填カ
ラムの性能は、使用する充填剤の粒子径に反比例する。
従って、圧力が高くなってしまい、図３に示すようなバ
ルブと送液ポンプを必要とする。その他１はインジェク
ションバルブ、２は切換バルブ、３はプレカラム、４は
分析カラム、５はポンプ、６はループ、７は検出器、８
は溶離液、９は溶離液。
いた濃縮流路を構築していた。ここで用いる濃縮用プレ
カラム３は、使う充填剤は分離カラムと保持挙動は異な
ったとしても、溶出時に狭いバンドで溶出し分離カラム
４に導入する必要がある。プレカラム３も分離カラム４
と同等以上の性能を有する必要がある。然るに、充填カ
ラムの性能は、使用する充填剤の粒子径に反比例する。
従って、圧力が高くなってしまい、図３に示すようなバ
ルブと送液ポンプを必要とする。その他１はインジェク
ションバルブ、２は切換バルブ、３はプレカラム、４は
分析カラム、５はポンプ、６はループ、７は検出器、８
は溶離液、９は溶離液。
【０００３】一方、ｉｎ−ＴｕｂｅＳＰＭＥ(チューブ
内での固相マイクロ抽出)と云う手法も、試料濃縮の方
法として開発されている。この方法は、細管の内側に固
定相を固定化した(ガスクロマトグラフィーのキャピラ
リーカラムと同様)開管カラムを用いる方法である。試
料量を大きくするため、抵抗の掛からない内径の太いカ
ラムを用いる必要がある。しかし、中空管であるため、
内径が大きくなると、拡散効率が下がり(溶質が液相に
接触する効率が下がる。)、濃縮性能が下がる。そのた
め、細いキャピラリーが用いられる。しかし、接触面は
増えるが、キャピラリー管表面に固定化する液相量は減
り、濃縮できる試料量が限定される。当然、目的成分以
外のマトリクスの影響を大きく受けることになる。分析
対象範囲が絞られる。
内での固相マイクロ抽出)と云う手法も、試料濃縮の方
法として開発されている。この方法は、細管の内側に固
定相を固定化した(ガスクロマトグラフィーのキャピラ
リーカラムと同様)開管カラムを用いる方法である。試
料量を大きくするため、抵抗の掛からない内径の太いカ
ラムを用いる必要がある。しかし、中空管であるため、
内径が大きくなると、拡散効率が下がり(溶質が液相に
接触する効率が下がる。)、濃縮性能が下がる。そのた
め、細いキャピラリーが用いられる。しかし、接触面は
増えるが、キャピラリー管表面に固定化する液相量は減
り、濃縮できる試料量が限定される。当然、目的成分以
外のマトリクスの影響を大きく受けることになる。分析
対象範囲が絞られる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】試料導入時の試料バン
ドは、分離分析の最終結果に大きく影響を与える。従っ
て、注入量が多いほど、試料バンドが大きくなり、分離
能が悪くなる。液体クロマトグラフから溶出するピーク
の巾（４σ）は、カラムでの広がり、注入口での広が
り、検出器での広がり、配管での広がりなどの広がりの
トータルであり、σ２（トータル）＝σ２（注入）＋σ
２（カラム）＋σ２（検出器）＋σ ２（配管）で表され
る。（文献（Ｊ．Ｐ．Ｃ．Ｖｉｓｓｅｒｓ，Ｒｅｃｅｎ
ｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｍｉｃｒｏｃｏｌ
ｕｍｎ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ
ｙ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｇｒ．Ａ８５６，１１７−１４
３（１９９９））カラムの性能を生かし、効率のよい分
離を得るためにはカラム外の広がりの効果は、それぞれ
カラムの１／１０〜１／２０以下にする必要がある。従
って、注入量は少なければ少ないほど、カラムを生かす
ことになるが、反面、微量分析で大量に注入し、感度を
稼ぎたい。
ドは、分離分析の最終結果に大きく影響を与える。従っ
て、注入量が多いほど、試料バンドが大きくなり、分離
能が悪くなる。液体クロマトグラフから溶出するピーク
の巾（４σ）は、カラムでの広がり、注入口での広が
り、検出器での広がり、配管での広がりなどの広がりの
トータルであり、σ２（トータル）＝σ２（注入）＋σ
２（カラム）＋σ２（検出器）＋σ ２（配管）で表され
る。（文献（Ｊ．Ｐ．Ｃ．Ｖｉｓｓｅｒｓ，Ｒｅｃｅｎ
ｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｍｉｃｒｏｃｏｌ
ｕｍｎ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ
ｙ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｇｒ．Ａ８５６，１１７−１４
３（１９９９））カラムの性能を生かし、効率のよい分
離を得るためにはカラム外の広がりの効果は、それぞれ
カラムの１／１０〜１／２０以下にする必要がある。従
って、注入量は少なければ少ないほど、カラムを生かす
ことになるが、反面、微量分析で大量に注入し、感度を
稼ぎたい。
【０００５】サンプル注入量は、以下の式（式１）で表
される。
される。
【式１】 上記式によれば、内径１ｍｍ、長さ１５ｃｍ、粒子径ｄ
ｐ＝３μmカラムでの試料溶液の最大中に有料は、カラ
ム効率ロスを５％として計算すると、４００ｎｌにな
る。生体中の薬物や、環境中の有害物質分析では、試料
中の溶質の量は極めて少なく、なるべく多くの試料を注
入したい。
ｐ＝３μmカラムでの試料溶液の最大中に有料は、カラ
ム効率ロスを５％として計算すると、４００ｎｌにな
る。生体中の薬物や、環境中の有害物質分析では、試料
中の溶質の量は極めて少なく、なるべく多くの試料を注
入したい。
【０００６】この従来のＨＰＬＣシステムにおいて、農
薬標準試料(溶離液で溶解)を０．１μＬ注入すると、グ
ラジェント分析でシャープなピークが得られた。（図
６）
薬標準試料(溶離液で溶解)を０．１μＬ注入すると、グ
ラジェント分析でシャープなピークが得られた。（図
６）
【表１】 この分析条件は、以下の全部の実験、実施例でインジェ
クション方法を除いて共通である。又、各クロマトグラ
ムにおけるピーク名は次の通りである。 サンプル濃度 Ａｓｕｌａｍ ５００（ｐｐｍ） (クロマトグラムの始めに出ているピーク) Ｔｈｉｕｒａｍ １００ ピーク１ ＭＣＰＰ ４０ ピーク２ Ｉｐｒｏｄｉｏｎｅ ５０ ピーク３ Ｐｅｎｃｙｃｕｒｏｎ ９０ ピーク４ Ｂｅｎｓｕｌｉｄｅ １００ ピーク５
クション方法を除いて共通である。又、各クロマトグラ
ムにおけるピーク名は次の通りである。 サンプル濃度 Ａｓｕｌａｍ ５００（ｐｐｍ） (クロマトグラムの始めに出ているピーク) Ｔｈｉｕｒａｍ １００ ピーク１ ＭＣＰＰ ４０ ピーク２ Ｉｐｒｏｄｉｏｎｅ ５０ ピーク３ Ｐｅｎｃｙｃｕｒｏｎ ９０ ピーク４ Ｂｅｎｓｕｌｉｄｅ １００ ピーク５
【０００７】次に、１０倍の感度を得るため、同様に１
μＬ注入した。ロード状態でループに入れられた体積は
１μＬとなる。インジェクション時には、流速４μＬ／
ｍｉｎでカラムに導入することになるため、１５秒掛か
ることになり、広いバンド巾となる。クロマトグラム上
では、１．Ｔｈｉｕｒａｍ、２．ＭＣＰＰのピークがテ
ーリングし、完全分離しない結果となる。溶出の遅いピ
ークでは、本カラムによる濃縮が見られ、改善されてい
るが、完全ではない。このように本カラム入口での濃縮
効果が期待できるグラジェント溶出による分析でさえ限
界があり、多量注入は不可能である。
μＬ注入した。ロード状態でループに入れられた体積は
１μＬとなる。インジェクション時には、流速４μＬ／
ｍｉｎでカラムに導入することになるため、１５秒掛か
ることになり、広いバンド巾となる。クロマトグラム上
では、１．Ｔｈｉｕｒａｍ、２．ＭＣＰＰのピークがテ
ーリングし、完全分離しない結果となる。溶出の遅いピ
ークでは、本カラムによる濃縮が見られ、改善されてい
るが、完全ではない。このように本カラム入口での濃縮
効果が期待できるグラジェント溶出による分析でさえ限
界があり、多量注入は不可能である。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明は、多量の試料を
導入し、溶出時に狭いバンドで溶出し分離カラムに導入
できると共に、高速度で試料濃縮が可能になり、濃縮時
でも試料変化がない試料導入方法及び装置を提案せんと
するもので、第１に液体クロマトグラフィーの分離カラ
ムに試料を導入する前に、試料導入バルブに連通した多
連続孔を持つ、又は多孔質である一体型の固相抽出カラ
ム（モノリシックカラム−Ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ Ｃｏ
ｌｕｍｎ）に試料を保持・濃縮し、試料バンドを狭くし
てから分離カラムに導入することを特徴とし、第２に液
体クロマトグラフィーの分離カラムに試料を導入する通
路に、試料導入バルブに連通した多連続孔を持つ、又は
多孔質である一体型の固相抽出カラムを連通させること
を特徴とする。
導入し、溶出時に狭いバンドで溶出し分離カラムに導入
できると共に、高速度で試料濃縮が可能になり、濃縮時
でも試料変化がない試料導入方法及び装置を提案せんと
するもので、第１に液体クロマトグラフィーの分離カラ
ムに試料を導入する前に、試料導入バルブに連通した多
連続孔を持つ、又は多孔質である一体型の固相抽出カラ
ム（モノリシックカラム−Ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ Ｃｏ
ｌｕｍｎ）に試料を保持・濃縮し、試料バンドを狭くし
てから分離カラムに導入することを特徴とし、第２に液
体クロマトグラフィーの分離カラムに試料を導入する通
路に、試料導入バルブに連通した多連続孔を持つ、又は
多孔質である一体型の固相抽出カラムを連通させること
を特徴とする。
【０００９】
【発明の実施の形態】図１に示す実施例により本発明を
詳細に説明する。１はインジェクションバルブで、ポー
ト１１とポート１４間にはモノリシスカラム６を設置し
て、ポート１６はサンプル注入口とし、シリンジ３等に
より試料注入可能としてある。ポート１５はドレイン２
に、ポート１３はポンプ５を介し溶離液８に連通させて
ある。ポート１２はカラム４を介して検出器７に連通さ
せてある。５１はポンプで、溶離液８１に連通し、ミキ
サー８２を介してポンプ５及びポート１３に連結してあ
る。
詳細に説明する。１はインジェクションバルブで、ポー
ト１１とポート１４間にはモノリシスカラム６を設置し
て、ポート１６はサンプル注入口とし、シリンジ３等に
より試料注入可能としてある。ポート１５はドレイン２
に、ポート１３はポンプ５を介し溶離液８に連通させて
ある。ポート１２はカラム４を介して検出器７に連通さ
せてある。５１はポンプで、溶離液８１に連通し、ミキ
サー８２を介してポンプ５及びポート１３に連結してあ
る。
【００１０】モノリシスカラムの具体的性質について
は、連続孔があり、その大きさが制御されている一体型
であれば特に制限されないが、例として、連続孔のポア
ーサイズは１〜２０ミクロンとするモノリシス構造をと
る。分離カラムの内径に対し、連続孔を持つプレカラム
の内径が分離カラムと同等か細いことを特徴とする。微
細粒子を充填した分離カラムに比べ、モノリシスカラム
は使用時の最適線速度が同一内径の場合、速い。従来よ
り濃縮時での試料変化がない。
は、連続孔があり、その大きさが制御されている一体型
であれば特に制限されないが、例として、連続孔のポア
ーサイズは１〜２０ミクロンとするモノリシス構造をと
る。分離カラムの内径に対し、連続孔を持つプレカラム
の内径が分離カラムと同等か細いことを特徴とする。微
細粒子を充填した分離カラムに比べ、モノリシスカラム
は使用時の最適線速度が同一内径の場合、速い。従来よ
り濃縮時での試料変化がない。
【００１１】この具体例について説明すると、多孔質ガ
ラス、例えばＮａＯ−Ｂ２Ｏ３−ＳｉＯ２系のものがあ
げられ、Ａ１２Ｏ３、ＺｒＯ２、ＺｎＯ２、Ｔｉｏ２、
ＳｎＯ２、ＣａＯ、ＭｇＯ２等種々の酸化物を添加した
ガラス(製造方法は特開平７−１２０４５０号に) 多孔質セラミック、例えばアルミナシリケート、ケイ砂
質、アルミナ質、多孔質ムラトイ質、ケイソウ土質、
(製造方法は同上) 合成無機一有機多孔質、アルコキシドけい素、アルコキ
シドチタン、アルコキシドジルコニウムなどと炭化水
素、芳香族、アルコール、炭素などの有機物から合成さ
れる無機一有機の両方の性質を持つ多孔質体
ラス、例えばＮａＯ−Ｂ２Ｏ３−ＳｉＯ２系のものがあ
げられ、Ａ１２Ｏ３、ＺｒＯ２、ＺｎＯ２、Ｔｉｏ２、
ＳｎＯ２、ＣａＯ、ＭｇＯ２等種々の酸化物を添加した
ガラス(製造方法は特開平７−１２０４５０号に) 多孔質セラミック、例えばアルミナシリケート、ケイ砂
質、アルミナ質、多孔質ムラトイ質、ケイソウ土質、
(製造方法は同上) 合成無機一有機多孔質、アルコキシドけい素、アルコキ
シドチタン、アルコキシドジルコニウムなどと炭化水
素、芳香族、アルコール、炭素などの有機物から合成さ
れる無機一有機の両方の性質を持つ多孔質体
【００１２】有機多孔質(マクロポーラスポリマー)、例
えば、アクリレート類、メタクリート類、ビニルピリジ
ン、Ｎ−ビニルピロリドン、酢酸ビニル及びスチレンか
らなる群から選択されたモノビニルモノマート、アルキ
レンジアクリレート、アルキレンジメタクリレート、ヒ
ドロシキアルキレンジアクリレート、ヒドロキシアルキ
レンジメタクリレート、ジビニルベンゼン及びジビニル
ピリジンから成る群から選ばれたジビニルモノマートの
コポリマーから成るポリマー等が挙げられる。そして、
上記基材に、各種液相を化学修飾又はコーティングした
もの(例えばオクタデシル基、フェニル基など)逆に基材
そのものでも各種液相を化学修飾又はコーティングした
ものかは問わない。分析目的成分と夾雑物との関連で決
定するのがよい。
えば、アクリレート類、メタクリート類、ビニルピリジ
ン、Ｎ−ビニルピロリドン、酢酸ビニル及びスチレンか
らなる群から選択されたモノビニルモノマート、アルキ
レンジアクリレート、アルキレンジメタクリレート、ヒ
ドロシキアルキレンジアクリレート、ヒドロキシアルキ
レンジメタクリレート、ジビニルベンゼン及びジビニル
ピリジンから成る群から選ばれたジビニルモノマートの
コポリマーから成るポリマー等が挙げられる。そして、
上記基材に、各種液相を化学修飾又はコーティングした
もの(例えばオクタデシル基、フェニル基など)逆に基材
そのものでも各種液相を化学修飾又はコーティングした
ものかは問わない。分析目的成分と夾雑物との関連で決
定するのがよい。
【００１３】又、本発明の実際の形態は種々に実施でき
る。一例として、図２のように組むことができる。通常
のＨＰＣＬシステムを用いて図３のループ部分にモノリ
シスカラムを用いるだけで、種々の効果が得られる。例
えば、内径０．３ｍｍ×１０ｍｍ、３μのＯＤＳシリカ
ゲルを濃縮カラムとして用いた場合、１０μｌの試料を
３秒で濃縮カラムに入れようとした場合には、約１０Ｍ
ｐａ以上かかる。同サイズのモノリシスカラム使用時に
は、０．２Ｍｐａ程度であった。
る。一例として、図２のように組むことができる。通常
のＨＰＣＬシステムを用いて図３のループ部分にモノリ
シスカラムを用いるだけで、種々の効果が得られる。例
えば、内径０．３ｍｍ×１０ｍｍ、３μのＯＤＳシリカ
ゲルを濃縮カラムとして用いた場合、１０μｌの試料を
３秒で濃縮カラムに入れようとした場合には、約１０Ｍ
ｐａ以上かかる。同サイズのモノリシスカラム使用時に
は、０．２Ｍｐａ程度であった。
【００１４】マニュアル及びオートサンプラーなどで試
料を直接導入できる圧力は、最大で１Ｍｐａ程度で、高
性能な充填タイプカラムは用いられないことになる。充
填カラムで同一圧力にするためには、粒径は３０μｍ程
度になり、分離能として１０分の１以下になり、十分な
濃縮、分離ができない。モノリシスは低圧で使用できる
ので、ループ位置に取り付けることで、濃縮導入が簡単
に行える。
料を直接導入できる圧力は、最大で１Ｍｐａ程度で、高
性能な充填タイプカラムは用いられないことになる。充
填カラムで同一圧力にするためには、粒径は３０μｍ程
度になり、分離能として１０分の１以下になり、十分な
濃縮、分離ができない。モノリシスは低圧で使用できる
ので、ループ位置に取り付けることで、濃縮導入が簡単
に行える。
【００１５】充填タイプでは、濃縮がうまくいっても、
メインカラム導入時に接続部と配管及びフィルター部分
に拡散が生じ、ミクロカラムなど低流速ではピーク形状
が悪くなる。モノリシスカラム、一体構造で、配管及び
フィルターが不要となり、空間容量によるピーク形状の
以上は生じない。
メインカラム導入時に接続部と配管及びフィルター部分
に拡散が生じ、ミクロカラムなど低流速ではピーク形状
が悪くなる。モノリシスカラム、一体構造で、配管及び
フィルターが不要となり、空間容量によるピーク形状の
以上は生じない。
【００１６】インジェクション部に従来の充填タイプを
取付けようとすると、どうしても配管が必要となる。配
管内部は充填物はなく、濃縮効果はないため。ピークバ
ンドは広がる。又。パイプ内部まで充填部を入れたとし
ても、どうしても充填物を止めるため、フィルターが必
要となる。やはり、濃縮効果は出ないのでピークバンド
は広がる。これらの影響は低流速ほど出る。（図４）
取付けようとすると、どうしても配管が必要となる。配
管内部は充填物はなく、濃縮効果はないため。ピークバ
ンドは広がる。又。パイプ内部まで充填部を入れたとし
ても、どうしても充填物を止めるため、フィルターが必
要となる。やはり、濃縮効果は出ないのでピークバンド
は広がる。これらの影響は低流速ほど出る。（図４）
【００１７】モノリシスカラム６では、形態を所望形状
の形成でき、且つインジェクターの奥部分まで差し込
め、全ての場所で濃縮効果が生じ、バンドが広がらな
い。ポンプでの高圧濃縮を用いて、濃縮した場合におい
ても、充填タイプでは１ｍＬ濃縮する場合、３５０Ｍｐ
ａ送液でも約１０分以上かかる。チウラムなどの分解し
やすい農薬においては、溶離液中で３分程度から分解が
生じた。モノリシスカラム６利用では、１００Ｍｐａ送
液で、２分以内に濃縮でき、分解する成分の分析に利用
できた。このように従来から行われているカラムスイッ
チングにも有効となる。（図５）
の形成でき、且つインジェクターの奥部分まで差し込
め、全ての場所で濃縮効果が生じ、バンドが広がらな
い。ポンプでの高圧濃縮を用いて、濃縮した場合におい
ても、充填タイプでは１ｍＬ濃縮する場合、３５０Ｍｐ
ａ送液でも約１０分以上かかる。チウラムなどの分解し
やすい農薬においては、溶離液中で３分程度から分解が
生じた。モノリシスカラム６利用では、１００Ｍｐａ送
液で、２分以内に濃縮でき、分解する成分の分析に利用
できた。このように従来から行われているカラムスイッ
チングにも有効となる。（図５）
【００１８】上記の基本例に加えて、多成分系の農薬分
析に応用できる。これらの農薬は、環境分析においてＨ
ＰＬＣ測定することが義務付けられている。通常は、こ
れらの分析を行う場合には、水溶液試料を煩雑な固相抽
出を用いて、クリーンアップし、その一部をＨＰＬＣに
導入するという方法が用いられる。この方法では試料の
取扱いにおいて、各工程における物質収支がわからない
という問題が生じる。そのため、標品添加による比較実
験から実試料を推定するしかない。
析に応用できる。これらの農薬は、環境分析においてＨ
ＰＬＣ測定することが義務付けられている。通常は、こ
れらの分析を行う場合には、水溶液試料を煩雑な固相抽
出を用いて、クリーンアップし、その一部をＨＰＬＣに
導入するという方法が用いられる。この方法では試料の
取扱いにおいて、各工程における物質収支がわからない
という問題が生じる。そのため、標品添加による比較実
験から実試料を推定するしかない。
【００１９】一方、カラムスイッチングによる導入で
は、各工程が連続に行えるので、物質収支が明確にな
り、精度の高い方法となる。しかし、従来のスイッチン
グ方法では、濃縮ポンプ及び洗浄に切り替えるバルブな
どが必要で、高価なシステムＨＰＬＣとなる。インジェ
クション部分のループにモノリシスカラムを用いること
で、簡単なＨＰＬＣシステムを用いて、カラムスイッチ
ングと同じ効果が得られた。又、メインの分析カラムに
キャピラリーカラムを用いることにより、溶媒使用量を
減らすこともできた。
は、各工程が連続に行えるので、物質収支が明確にな
り、精度の高い方法となる。しかし、従来のスイッチン
グ方法では、濃縮ポンプ及び洗浄に切り替えるバルブな
どが必要で、高価なシステムＨＰＬＣとなる。インジェ
クション部分のループにモノリシスカラムを用いること
で、簡単なＨＰＬＣシステムを用いて、カラムスイッチ
ングと同じ効果が得られた。又、メインの分析カラムに
キャピラリーカラムを用いることにより、溶媒使用量を
減らすこともできた。
【００２０】[実施例１]インジェクションバルブ１をロ
ード側(黒ライン)にしてシリンジ３で１０μＬ試料をポ
ート１６から注入すると、モノリシスカラム６に入る。
殆ど抵抗はなく、手で注入できる。試料成分はモノリシ
スカラム６入口にて濃縮される。溢れた液はポート１５
を経てドレイン２から廃棄される。試料成分はモノリシ
スカラム６入口に狭いバンドで濃縮される。
ード側(黒ライン)にしてシリンジ３で１０μＬ試料をポ
ート１６から注入すると、モノリシスカラム６に入る。
殆ど抵抗はなく、手で注入できる。試料成分はモノリシ
スカラム６入口にて濃縮される。溢れた液はポート１５
を経てドレイン２から廃棄される。試料成分はモノリシ
スカラム６入口に狭いバンドで濃縮される。
【００２１】次に、インジェクション側(点線)に切り替
えることによって、試料はポート１３を経てポンプ５か
らの溶離液8により、ポート１３−ポート１４−モノリ
シスカラム６−ポート１１−ポート１２と云う経路で逆
方向からカラム４に送り込まれる。この時、フィルター
や配管パイプによる試料拡散もなくカラム４に導入され
る。１０μＬ注入においても従来の方法のようなテーリ
ング現象は見られなかった。（図８） 本発明の方法では、従来のシステムに比べて、数十倍の
試料が導入できることになる。
えることによって、試料はポート１３を経てポンプ５か
らの溶離液8により、ポート１３−ポート１４−モノリ
シスカラム６−ポート１１−ポート１２と云う経路で逆
方向からカラム４に送り込まれる。この時、フィルター
や配管パイプによる試料拡散もなくカラム４に導入され
る。１０μＬ注入においても従来の方法のようなテーリ
ング現象は見られなかった。（図８） 本発明の方法では、従来のシステムに比べて、数十倍の
試料が導入できることになる。
【００２２】[実施例２]実施例１と同じ構成で、水で希
釈した試料液を用いた。試料量としては、５倍の５０μ
Ｌを導入した。ロード側(黒ライン)にしてシリンジ３で
希釈した５０μＬ試料を量り取り、ポート１６から注入
した。殆ど抵抗なく手で注入できた。試料成分は−モノ
リシスカラム６にて、濃縮される。溢れた液はポート１
５を経てドレインから廃棄される。試料成分はモノリシ
スカラム６入口に狭いバンドで濃縮される。濃縮効果は
水で希釈されているため、大きくなり多量の試料が導入
されても狭いバンドに濃縮される。
釈した試料液を用いた。試料量としては、５倍の５０μ
Ｌを導入した。ロード側(黒ライン)にしてシリンジ３で
希釈した５０μＬ試料を量り取り、ポート１６から注入
した。殆ど抵抗なく手で注入できた。試料成分は−モノ
リシスカラム６にて、濃縮される。溢れた液はポート１
５を経てドレインから廃棄される。試料成分はモノリシ
スカラム６入口に狭いバンドで濃縮される。濃縮効果は
水で希釈されているため、大きくなり多量の試料が導入
されても狭いバンドに濃縮される。
【００２３】次に、インジェクション側(点線)に切り替
えることによって、試料はポート１３を経てポンプ５か
らの溶離液8により、ポート１３−ポート１４−モノリ
シスカラム６−ポート１１−ポート１２と云う経路で逆
方向からカラム４に送り込まれる。この時、フィルター
や配管パイプによる試料拡散もなくカラム４に導入され
る。５０μＬ注入においても従来の方法のようなテーリ
ング現象は見られなかった。（図９） 本発明の方法では、希釈すれば従来のシステムに比べ
て、数百倍の試料が導入できることになる。
えることによって、試料はポート１３を経てポンプ５か
らの溶離液8により、ポート１３−ポート１４−モノリ
シスカラム６−ポート１１−ポート１２と云う経路で逆
方向からカラム４に送り込まれる。この時、フィルター
や配管パイプによる試料拡散もなくカラム４に導入され
る。５０μＬ注入においても従来の方法のようなテーリ
ング現象は見られなかった。（図９） 本発明の方法では、希釈すれば従来のシステムに比べ
て、数百倍の試料が導入できることになる。
【００２４】[実施例３]実施例２と同じ構成で、初期溶
離液に溶解した試料液を用いた。試料量としては、５０
μＬを導入した。ロード側(黒ライン)にして、初期プレ
コンディショニングとして、水を５０μＬ注入した。次
に、５０μＬ試料を量り取り注入した。殆ど抵抗はな
く、手で注入できた。モノリシスカラム６は、充分に水
に置換されているので、濃縮効果が期待できない溶離液
希釈試料でも目的成分は濃縮される。溢れた液はポート
１５を経てドレインから廃棄される。試料成分はモノリ
シスカラム６入口に狭いバンドで濃縮される。モノリシ
スカラム６のプレコンディショニング効果も、水希釈と
同じ効果が得られた。
離液に溶解した試料液を用いた。試料量としては、５０
μＬを導入した。ロード側(黒ライン)にして、初期プレ
コンディショニングとして、水を５０μＬ注入した。次
に、５０μＬ試料を量り取り注入した。殆ど抵抗はな
く、手で注入できた。モノリシスカラム６は、充分に水
に置換されているので、濃縮効果が期待できない溶離液
希釈試料でも目的成分は濃縮される。溢れた液はポート
１５を経てドレインから廃棄される。試料成分はモノリ
シスカラム６入口に狭いバンドで濃縮される。モノリシ
スカラム６のプレコンディショニング効果も、水希釈と
同じ効果が得られた。
【００２５】次に、インジェクション側(点線)に切り替
えることによって、試料はポート１３を経てポンプ５か
らの溶離液8により、ポート１３−ポート１４−モノリ
シスカラム６−ポート１１−ポート１２と云う経路で逆
方向からカラム４に送り込まれる。この時、フィルター
や配管パイプによる試料拡散もなくカラム４に導入され
る。テーリング現象は見られず、実施例２と同じクロマ
トが得られた。
えることによって、試料はポート１３を経てポンプ５か
らの溶離液8により、ポート１３−ポート１４−モノリ
シスカラム６−ポート１１−ポート１２と云う経路で逆
方向からカラム４に送り込まれる。この時、フィルター
や配管パイプによる試料拡散もなくカラム４に導入され
る。テーリング現象は見られず、実施例２と同じクロマ
トが得られた。
【００２６】[実施例４]実施例３と同じ構成で、初期溶
離液に溶解した試料液を用いた。試料量としては、５０
μＬを導入した。ロード側(黒ライン)にして、初期プレ
コンディショニングとして、水を５０μＬ注入した。次
に、５０μＬ試料を量り取り注入した次に、８０％ＡＣ
Ｎ溶液５０μＬ導入した。殆ど抵抗はなく、手で注入で
きた。溶出力の異なるモノリシスカラム６に流すことに
よって、成分の一部を洗浄脱着することができる。溶出
されない成分のみが濃縮され、分析目的以外の成分は、
溢れた液と同時にポート１５を経てドレインから廃棄さ
れる。目的成分はモノリシスカラム６入口に狭いバンド
で濃縮される。
離液に溶解した試料液を用いた。試料量としては、５０
μＬを導入した。ロード側(黒ライン)にして、初期プレ
コンディショニングとして、水を５０μＬ注入した。次
に、５０μＬ試料を量り取り注入した次に、８０％ＡＣ
Ｎ溶液５０μＬ導入した。殆ど抵抗はなく、手で注入で
きた。溶出力の異なるモノリシスカラム６に流すことに
よって、成分の一部を洗浄脱着することができる。溶出
されない成分のみが濃縮され、分析目的以外の成分は、
溢れた液と同時にポート１５を経てドレインから廃棄さ
れる。目的成分はモノリシスカラム６入口に狭いバンド
で濃縮される。
【００２７】次に、インジェクション側(点線)に切り替
えることによって、試料はポート１３を経てポンプ５か
らの溶離液8により、ポート１３−ポート１４−モノリ
シスカラム６−ポート１１−ポート１２と云う経路で逆
方向からカラム４に送り込まれる。この時、フィルター
や配管パイプによる試料拡散もなくカラム４に導入され
る。ロード時に８０％アセトニトリルで−モノリシスカ
ラム６を洗浄することによって、溶出の早い１．Ｔｈｉ
ｕｒａｍ，２．ＭＣＰＰ，３．Ｉｐｒｄｉｏｎｅ，成分
のみが洗浄され、目的である４．Ｐｅｎｃｙｃｕｒｏ
ｎ，５．Ｂｅｎｓｕｌｉｄｅのシャープなピークのみが
得られた。
えることによって、試料はポート１３を経てポンプ５か
らの溶離液8により、ポート１３−ポート１４−モノリ
シスカラム６−ポート１１−ポート１２と云う経路で逆
方向からカラム４に送り込まれる。この時、フィルター
や配管パイプによる試料拡散もなくカラム４に導入され
る。ロード時に８０％アセトニトリルで−モノリシスカ
ラム６を洗浄することによって、溶出の早い１．Ｔｈｉ
ｕｒａｍ，２．ＭＣＰＰ，３．Ｉｐｒｄｉｏｎｅ，成分
のみが洗浄され、目的である４．Ｐｅｎｃｙｃｕｒｏ
ｎ，５．Ｂｅｎｓｕｌｉｄｅのシャープなピークのみが
得られた。
【００２８】[実施例５]マニュアルインジェクターの代
りにオートサンプラーを用い、ループの代りにモノリシ
スカラムを装着した。ループ接続可能なオートサンブラ
ーならば、この発明方法が適用可能であった。実施例１
〜４と同じクロマト効果が得られた。
りにオートサンプラーを用い、ループの代りにモノリシ
スカラムを装着した。ループ接続可能なオートサンブラ
ーならば、この発明方法が適用可能であった。実施例１
〜４と同じクロマト効果が得られた。
【００２９】
【発明の効果】 上記の如く請求項１に記載の発明によ
れば、液体クロマトグラフィーの分離カラムに試料を導
入する前に、試料導入バルブに連通した多連続孔を持
つ、又は多孔質である一体型の固相抽出カラム（モノリ
シックカラム−Ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ Ｃｏｌｕｍｎ）
に試料を保持・濃縮し、試料バンドを狭くしてから分離
カラムに導入することを特徴とするので、多量の試料を
導入し、溶出時に狭いバンドで溶出し、分離カラムに導
入できると共に、高速度で試料濃縮が可能になり、濃縮
時でも試料変化がない資料導入方法が得られる。又、こ
の最適線速度範囲が広く、正確な流量コントロールの必
要が無く、工夫が要らないため、装置が簡略化でき、
且、試料導入バルブに連結しても充分な性能が得られ
る。更に、高流速でも性能に影響が少ないので、試料変
化の要因となる停滞時間も短くでき、さらに、分析時間
の短縮にも有効となる。
れば、液体クロマトグラフィーの分離カラムに試料を導
入する前に、試料導入バルブに連通した多連続孔を持
つ、又は多孔質である一体型の固相抽出カラム（モノリ
シックカラム−Ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ Ｃｏｌｕｍｎ）
に試料を保持・濃縮し、試料バンドを狭くしてから分離
カラムに導入することを特徴とするので、多量の試料を
導入し、溶出時に狭いバンドで溶出し、分離カラムに導
入できると共に、高速度で試料濃縮が可能になり、濃縮
時でも試料変化がない資料導入方法が得られる。又、こ
の最適線速度範囲が広く、正確な流量コントロールの必
要が無く、工夫が要らないため、装置が簡略化でき、
且、試料導入バルブに連結しても充分な性能が得られ
る。更に、高流速でも性能に影響が少ないので、試料変
化の要因となる停滞時間も短くでき、さらに、分析時間
の短縮にも有効となる。
【００３０】又、請求項２に記載の発明によれば液体ク
ロマトグラフィーの分離カラムに試料を導入する通路
に、試料導入バルブに連通した多連続孔を持つ、又は多
孔質である一体型の固相抽出カラムを連通させることと
したので、充填カラムタイプに比べて、圧力が数十分の
１以下になり、高圧ポンプによる導入が要らず、簡単に
試料注入部に組込めることになる。これは、マニュアル
インジェクターや従来のオートサンプラーのループ部分
を変更するだけで、濃縮導入できることになる。さら
に、試料導入後、溶媒強度の異なる液を流すことによっ
て、簡単にクリーンアップも可能となる。又、ＨＰＬＣ
分析において、温度コントロールは、分離性能の向上及
び分離特性変化を生じさせることで、有効な手段であ
る。それを、濃縮に利用することは、従来方法では行な
えなかった。濃縮充填タイプカラムは、カラム間及び充
填剤から成り立ち、内部まで温度変化させることは、熱
伝導から考えて不可能でその性能を引出すことはできな
い。請求項２に記載の発明では一体構造となるカラムの
使用により、熱伝導もよく温度コントロールすることが
可能となる。
ロマトグラフィーの分離カラムに試料を導入する通路
に、試料導入バルブに連通した多連続孔を持つ、又は多
孔質である一体型の固相抽出カラムを連通させることと
したので、充填カラムタイプに比べて、圧力が数十分の
１以下になり、高圧ポンプによる導入が要らず、簡単に
試料注入部に組込めることになる。これは、マニュアル
インジェクターや従来のオートサンプラーのループ部分
を変更するだけで、濃縮導入できることになる。さら
に、試料導入後、溶媒強度の異なる液を流すことによっ
て、簡単にクリーンアップも可能となる。又、ＨＰＬＣ
分析において、温度コントロールは、分離性能の向上及
び分離特性変化を生じさせることで、有効な手段であ
る。それを、濃縮に利用することは、従来方法では行な
えなかった。濃縮充填タイプカラムは、カラム間及び充
填剤から成り立ち、内部まで温度変化させることは、熱
伝導から考えて不可能でその性能を引出すことはできな
い。請求項２に記載の発明では一体構造となるカラムの
使用により、熱伝導もよく温度コントロールすることが
可能となる。
【００３１】更に、請求項３に記載の発明によれば固相
抽出カラムをインジェクション部に直接接続することと
したので、注入バルブに直接接続でき、更に、一体構造
のため、フィルターが必要でなく試料拡散の影響がない
ので、従来では難しい内径の細いキャピラリー、ミクロ
カラムにも適用できる。又、管内部全体をシールする必
要がないので、拡散容量に影響しないピンポイントな拡
散板も利用できる。
抽出カラムをインジェクション部に直接接続することと
したので、注入バルブに直接接続でき、更に、一体構造
のため、フィルターが必要でなく試料拡散の影響がない
ので、従来では難しい内径の細いキャピラリー、ミクロ
カラムにも適用できる。又、管内部全体をシールする必
要がないので、拡散容量に影響しないピンポイントな拡
散板も利用できる。
【図１】 本発明一実施例概略フロー図
【図２】 同上要大説明図
【図３】 従来例概略フロー図
【図４】 従来例一要部拡大説明図
【図５】 本発明一実施例一要部拡大説明図
【図６】 従来例による一実施クロマトグラム
【図７】 従来例による他実施クロマトグラム
【図８】 本発明一実施例による一実施クロマトグラム
【図９】 本発明他実施例による一実施クロマトグラム
１ インジェクター ２ ドレイン ３ シリンジ ４ 分析カラム ５ ポンプ ６ モノリシスカラム ７ 検出器 ８ 溶離液 ９ 溶離液
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 1/10 Ｇ０１Ｎ 1/10 Ｃ 1/36 1/28 Ｚ 35/10 35/06 Ｄ (72)発明者 古島 悟孝 埼玉県入間市狭山ヶ原237番地の２ ジー エルサイエンス 株式会社武蔵工場内 (72)発明者 濱田 孝之 埼玉県入間市狭山ヶ原237番地の２ ジー エルサイエンス 株式会社武蔵工場内 Ｆターム(参考） 2G058 AA01 BA08 DA09 EC01 EC08 GA14 GE02 4D017 AA01 AA11 BA03 DA03 EA05 EB01
Claims (3)
- 【請求項１】液体クロマトグラフィーの分離カラムに試
料を導入する前に、試料導入バルブに連通した多連続孔
を持つ、又は多孔質である一体型の固相抽出カラム（モ
ノリシックカラム−Ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ Ｃｏｌｕｍ
ｎ）に試料を保持・濃縮し、試料バンドを狭くしてから
分離カラムに導入することを特徴とする液体クロマトグ
ラフィーの試料導入方法。 - 【請求項２】液体クロマトグラフィーの分離カラムに試
料を導入する通路に、試料導入バルブに連通した多連続
孔を持つ、又は多孔質である一体型の固相抽出カラムを
連通させることを特徴とする液体クロマトグラフィーの
試料導入装置。 - 【請求項３】固相抽出カラムをインジェクション部に直
接接続することを特徴とする請求項２に記載の液体クロ
マトグラフィーの試料導入装置。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000291305A JP4892128B2 (ja) | 2000-09-25 | 2000-09-25 | 液体クロマトグラフィーの試料導入方法及び装置 |
| US10/381,407 US20030190757A1 (en) | 2000-09-25 | 2001-09-25 | Method and device for collecting and concentrating specimen |
| PCT/JP2001/008300 WO2002025268A1 (fr) | 2000-09-25 | 2001-09-25 | Procede et dispositif servant a recueillir et a concentrer un echantillon |
| DE0001329714T DE01970200T1 (de) | 2000-09-25 | 2001-09-25 | Verfahren und einrichtung zum sammeln und konzentrieren von proben |
| EP01970200A EP1329714A4 (en) | 2000-09-25 | 2001-09-25 | METHOD AND DEVICE FOR COLLECTING AND CONCENTRATING SAMPLES |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000291305A JP4892128B2 (ja) | 2000-09-25 | 2000-09-25 | 液体クロマトグラフィーの試料導入方法及び装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002098677A true JP2002098677A (ja) | 2002-04-05 |
| JP4892128B2 JP4892128B2 (ja) | 2012-03-07 |
Family
ID=18774397
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000291305A Expired - Fee Related JP4892128B2 (ja) | 2000-09-25 | 2000-09-25 | 液体クロマトグラフィーの試料導入方法及び装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4892128B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002086488A1 (fr) * | 2001-04-20 | 2002-10-31 | Gl Sciences Incorporated | Procede et instrument d'extraction d'un composant a l'etat de trace en phase solide |
| JP2006509214A (ja) * | 2002-12-09 | 2006-03-16 | ウオーターズ・インベストメンツ・リミテツド | 高圧勾配システムのための逆流防止 |
| JP2006201476A (ja) * | 2005-01-20 | 2006-08-03 | Canon Inc | 露光装置及びデバイスの製造方法 |
| JP2007121164A (ja) * | 2005-10-28 | 2007-05-17 | Shimadzu Corp | 流路切換バルブ及びそれを用いた高速液体クロマトグラフ |
| JP2020125912A (ja) * | 2019-02-01 | 2020-08-20 | 山善株式会社 | 分取液体クロマトグラフ方法、分取用液体クロマトグラフ装置及び分取用液体クロマトグラフ装置制御用プログラム |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61274258A (ja) * | 1985-05-30 | 1986-12-04 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | 試料濃縮法 |
| JPS6350062A (ja) * | 1986-08-20 | 1988-03-02 | Hitachi Ltd | 半導体装置 |
| JPH0755782A (ja) * | 1990-01-24 | 1995-03-03 | Hewlett Packard Co <Hp> | 液体クロマトグラフにおける移動相の温度制御装置 |
| JPH07120450A (ja) * | 1993-10-22 | 1995-05-12 | Sumika Bunseki Center:Kk | 多孔質体クロマトグラフィー用カラム |
| JPH09257779A (ja) * | 1996-03-27 | 1997-10-03 | Yokogawa Analytical Syst Kk | 微量陰イオン分析方法及び微量陰イオン分析装置 |
| WO2000047304A1 (de) * | 1999-02-09 | 2000-08-17 | Merck Patent Gmbh | Endstück für monolithische chromatographiesäulen |
-
2000
- 2000-09-25 JP JP2000291305A patent/JP4892128B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61274258A (ja) * | 1985-05-30 | 1986-12-04 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | 試料濃縮法 |
| JPS6350062A (ja) * | 1986-08-20 | 1988-03-02 | Hitachi Ltd | 半導体装置 |
| JPH0755782A (ja) * | 1990-01-24 | 1995-03-03 | Hewlett Packard Co <Hp> | 液体クロマトグラフにおける移動相の温度制御装置 |
| JPH07120450A (ja) * | 1993-10-22 | 1995-05-12 | Sumika Bunseki Center:Kk | 多孔質体クロマトグラフィー用カラム |
| JPH09257779A (ja) * | 1996-03-27 | 1997-10-03 | Yokogawa Analytical Syst Kk | 微量陰イオン分析方法及び微量陰イオン分析装置 |
| WO2000047304A1 (de) * | 1999-02-09 | 2000-08-17 | Merck Patent Gmbh | Endstück für monolithische chromatographiesäulen |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002086488A1 (fr) * | 2001-04-20 | 2002-10-31 | Gl Sciences Incorporated | Procede et instrument d'extraction d'un composant a l'etat de trace en phase solide |
| JP2006509214A (ja) * | 2002-12-09 | 2006-03-16 | ウオーターズ・インベストメンツ・リミテツド | 高圧勾配システムのための逆流防止 |
| JP2006201476A (ja) * | 2005-01-20 | 2006-08-03 | Canon Inc | 露光装置及びデバイスの製造方法 |
| JP4587170B2 (ja) * | 2005-01-20 | 2010-11-24 | キヤノン株式会社 | 露光装置及びデバイスの製造方法 |
| JP2007121164A (ja) * | 2005-10-28 | 2007-05-17 | Shimadzu Corp | 流路切換バルブ及びそれを用いた高速液体クロマトグラフ |
| JP4670590B2 (ja) * | 2005-10-28 | 2011-04-13 | 株式会社島津製作所 | 流路切換バルブ及びそれを用いた高速液体クロマトグラフ |
| JP2020125912A (ja) * | 2019-02-01 | 2020-08-20 | 山善株式会社 | 分取液体クロマトグラフ方法、分取用液体クロマトグラフ装置及び分取用液体クロマトグラフ装置制御用プログラム |
| JP7276809B2 (ja) | 2019-02-01 | 2023-05-18 | 山善株式会社 | 分取液体クロマトグラフ方法、分取用液体クロマトグラフ装置及び分取用液体クロマトグラフ装置制御用プログラム |
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