JP2002005914A - 分取液体クロマトグラフ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 分取液体クロマトグラフにおいて、目的の試
料成分を再現性よく分画でき、かつ予備検討時のクロマ
トグラムに基づいて分画に必要な分画パラメータを算出
する時間を短縮できるようにする。 【解決手段】 試料を装置に注入して予備検討を行な
い、クロマトグラム作成部３によりクロマトグラムを作
成する。クロマトグラムが表示部５に表示され、いずれ
かのピークが選択されると、ピーク範囲算出部７は選択
ピークのピーク範囲を算出する。記憶部１５には予め分
画信号レベル用の基準値が設定されており、分画信号レ
ベル算出部９は分画信号レベル用の基準値に基づいて選
択ピークの分画信号レベルを算出する。分画時間算出部
１１は選択ピークと分画信号レベルの交差位置に基づい
て分画開始時間及び分画終了時間を算出する。分画信号
傾斜値算出部１３は分画開始時間及び分画終了時間での
選択ピークの分画信号傾斜値を算出する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は液体クロマトグラフ
に関し、特に、試料成分を分画して採取する分取機構及
び検出器の検出信号に基づいてクロマトグラムを作成す
るデータ処理装置を備えた分取液体クロマトグラフに関
するものである。

【０００２】

【従来の技術】分取液体クロマトグラフは、図４に示さ
れるように、分離カラム８、移動相容器２に収容された
移動相を分離カラム８へ送液する送液ポンプ４、試料を
分離カラム８への移動相流路に注入するインジェクタ
６、分離カラム８からの試料成分を検出する検出器１
０、及び検出器１０の出力に基づいて溶出液から試料成
分を採取するフラクションコレクタ１２を備えている。
フラクションコレクタ１２には切替えバルブと分取容器
が配置されている。１４は、検出器１０の検出信号に基
づいてクロマトグラムを作成し、そのクロマトグラムを
ＣＲＴ画面１６に表示するパーソナルコンピュータ（Ｐ
Ｃ）である。ＰＣ１４はフラクションコレクタ１２の動
作の制御も行なう。

【０００３】試料はインジェクタ６から流路に注入さ
れ、移動相により分離カラム８に送られ、分離されて溶
出する。検出器１０は分離カラム８から溶出する試料成
分を検出する。ＰＣ１４は検出器１０の検出信号に基づ
いてクロマトグラムを作成し、ＣＲＴ画面１６に表示す
る。分離カラム８から溶出した試料成分をフラクション
コレクタ１２により分画する場合、その分画には、分画
の開始及び終了の基準となる分画開始時間及び分画終了
時間（分画時間）、分画信号レベル、分画信号傾斜値な
どの分画パラメータが必要である。これらの分画パラメ
ータはフラクションコレクタ１２の動作の制御に用いら
れる。

【０００４】装置に試料を注入し分離して分取する際、
時間が分画開始時間に対して所定範囲内であるか、検出
器１０からの検出信号が分画信号レベルに対して所定範
囲内であるか、又は検出信号の信号傾斜値が開始側の分
画信号傾斜値に対して所定範囲内である場合に、その部
分の移動相の分取を開始する。そして、時間が分画終了
時間に対して所定範囲内であるか、検出器１０からの検
出信号が分画信号レベルに対して所定範囲内であるか、
又は検出信号の信号傾斜値が終了側の分画信号傾斜値に
対して所定範囲内である場合に、その部分の移動相の分
取を終了する。分画パラメータは、オペレータの経験に
基づいて設定したり、もしくは分画を行なう前に試料を
装置に注入して予備検討を行ない、そのクロマトグラム
に基づいて視覚的に分画パラメータを予想したり、クロ
マトグラムデータを解析することにより分画パラメータ
を得たりしていた。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかし、経験や視覚的
な判断に基づく分画パラメータの設定は、分画の再現性
が得にくいという問題があった。また、クロマトグラム
データを解析することによる分画パラメータの取得には
計算に長時間を要するという問題があった。そこで本発
明は、目的の試料成分を再現性よく分画でき、かつ予備
検討時のクロマトグラムに基づいて分画に必要な分画パ
ラメータを算出する時間を短縮できる分取液体クロマト
グラフを提供することを目的とするものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】図１は本発明にかかる分
取液体クロマトグラフのデータ処理装置の一態様を示す
ブロック図である。本発明は、分離カラム、移動相を分
離カラムへ送る送液手段、分離カラムへの移動相流路に
試料を注入するインジェクタ、分離カラムから溶出する
試料成分を検出する検出器、試料成分を分画して採取す
るフラクションコレクタ及び検出器の検出信号に基づい
てクロマトグラムを作成するデータ処理装置１を備えた
分取液体クロマトグラフである。そして、データ処理装
置１は、検出器の検出信号に基づいてクロマトグラムを
作成するクロマトグラム作成部３と、クロマトグラムを
表示する表示部５と、表示部５に表示されたクロマトグ
ラム上で選択された選択ピークのピーク範囲を算出する
ピーク範囲算出部７と、分画パラメータ算出部２０とを
備えている。分画パラメータ算出部２０は、選択ピーク
の分画信号レベルを算出する分画信号レベル算出部９、
選択ピークの分画開始時間及び分画終了時間を算出する
分画時間算出部１１、及び選択ピークの分画信号傾斜値
を算出する分画信号傾斜値算出部１３のうちの少なくと
も１つと、算出される分画信号レベル、分画開始時間及
び分画終了時間、又は分画信号傾斜値のための予め設定
される基準値を記憶する記憶部１５とを備えている。図
１は、分画信号レベル算出部９、分画時間算出部１１及
び分画信号傾斜値算出部１３を備えた態様を示す。

【０００７】

【実施例】装置の構成は図４に示されたものと同じであ
る。本発明のデータ処理装置はＰＣ１４及びＣＲＴ画面
１６により実現される。データ処理装置は、図１に示す
ように、分画パラメータ算出部２０に、分画信号レベル
算出部９、分画時間算出部１１、分画信号傾斜値算出部
１３及び記憶部１５を備えている。記憶部１５には分画
信号レベルの算出に必要な分画信号レベル用の基準値が
設定されている。その基準値は、選択ピークのピーク高
さに対して何％以上の部分を分画するかを基準にして設
定されている。この実施例では基準値を３０％とした。
ただし、分画信号レベル用の基準値は選択ピークのピー
ク高さに対するパーセンテージに限定されるものではな
く、選択ピークのピーク高さによって変動しない一定の
信号レベル、すなわち分画信号レベルそのものであって
もよい。

【０００８】図２はこの一実施例の動作を示すフローチ
ャートである。図３はクロマトグラムを示す波形図であ
る。縦軸は信号値、横軸は時間を示す。図１から図４を
参照して試料成分を分離分取する例を説明する。予備検
討を実施するために、試料をインジェクタ６から流路に
注入する。試料は移動相により分離カラム８に送られ、
分離されて溶出し、その試料成分は検出器１０により検
出される（ステップＳ１）。検出器１０の検出信号に基
づいてクロマトグラム作成部３は図３に示すクロマトグ
ラムを作成し、作成したクロマトグラムを表示部５に表
示し、そのクロマトグラムデータを記憶部１５に記憶す
る。（ステップＳ２）。

【０００９】オペレータにより、マウスなどの指示装置
を使用して表示部５に表示されたクロマトグラム上で分
画すべきピークの近傍の位置が指定されてピークが選択
される（ステップＳ３）。ピーク範囲算出部７は、選択
ピークの頂点位置、開始点Ｂ及び終了点Ｃを算出し、選
択ピークの範囲を確認し、選択ピークの頂点位置、開始
点及び終了点を記憶部１５に記憶する（ステップＳ
４）。分画信号レベル算出部９は、選択ピークのピーク
高さＡ及び記憶部１５に記憶された分画信号レベル用の
基準値に基づいて選択ピークのスレッシュホールド（分
画信号レベル）ａを算出し、記憶部１５に記憶する。こ
こでスレッシュホールドａはピーク高さＡの３０％の値
である。

【００１０】選択ピークの開始点Ｂの信号値がスレッシ
ュホールドａの値よりも小さい場合は上昇中の選択ピー
クとスレッシュホールドａが交差し、終了点Ｃの信号値
がスレッシュホールドａの値よりも小さい場合は下降中
の選択ピークとスレッシュホールドａが交差する。選択
ピークとスレッシュホールドａが交差する場合は各分画
パラメータを求めることができる。すなわち、分画時間
算出部１１は上昇中の選択ピークとスレッシュホールド
ａの交差位置（分画開始時間）ｂ及び下降中の選択ピー
クとスレッシュホールドａの交差位置（分画終了時間）
ｃを算出し、記憶部１５に記憶する（ステップＳ６）。

【００１１】分画時間算出部１１により分画開始時間ｂ
及び分画終了時間ｃが算出された場合、分画信号傾斜値
算出部１３は分画開始時間ｂにおける選択ピークの傾斜
レベルｄと分画終了時間ｃにおける選択ピークの傾斜レ
ベルｅを算出し、記憶部１５に記憶する（ステップＳ
７）。表示部５は、記憶部１５に記憶された分画パラメ
ータ、すなわちスレッシュホールドａ、分画時間ｂ，ｃ
及び分画信号傾斜値ｄ，ｅを表示する。

【００１２】このように、オペレータにより表示部５に
表示された予備検討時のクロマトグラム上で分画したい
ピークを選択するだけでその選択ピークに関する分画パ
ラメータを得ることができる。そして、選択されたピー
クのみについて分画パラメータの算出を行なうので、分
画パラメータを算出する時間を短縮できる。その後、試
料を装置に再度注入して、得られた分画パラメータに基
づいて分画することにより、目的の試料成分を再現性よ
く分画できる。

【００１３】この実施例では、図３のクロマトグラムに
表示されているピークは１つのみであるが、複数のピー
クに関して分画する場合は、各ピークを選択し、各選択
ピークについて図２のステップＳ４からステップＳ７の
動作を行なうようにすればよい。また、この実施例では
分取機構としてフラクションコレクタ１２を用いている
が、本発明はこれに限定されるものではなく、例えばバ
ルブ機構と複数のサンプリングループを備え、分離カラ
ムからの溶出液をバルブの切替えにより各サンプリング
ループに分画する機構など、他の分取機構であってもよ
い。また、この実施例では、分画パラメータ算出部２０
は、分画信号レベル算出部９、分画時間算出部１１及び
分画信号傾斜値算出部１３を備えているが、本発明はこ
れに限定されるものではなく、分画信号レベル算出部
９、分画時間算出部１１及び分画信号傾斜値算出部１３
のうちの少なくとも１つを備えていればよい。

【００１４】また、この実施例では、記憶部１５には分
画信号レベル用の基準値のみが設定されているが、分画
信号レベル用の基準値、分画時間用の基準値もしくは分
画傾斜値用の基準値、又はこれらの組合せが設定され
る。そして、各算出部は、対応する基準値が記憶部に設
定されているのであればその基準値に基づいて対応する
分画パラメータを算出することができるし、他の算出部
が算出した分画パラメータに基づいて対応する分画パラ
メータを算出することもできる。ただし、いずれか１つ
の算出部に対応する１つの基準値のみが記憶部１５に設
定されている場合は、その算出部は記憶部１５に設定さ
れている基準値に基づいて対応する分画パラメータを算
出しなければならない。

【００１５】分画パラメータ算出部２０に、分画信号レ
ベル算出部９、分画時間算出部１１及び分画信号傾斜値
算出部１３のうちのいずれか２つが備えられている場
合、記憶部１５には、いずれか一方の算出部に対応する
基準値又は各算出部に対応する２つの基準値が設定され
る。各算出部は、対応する基準値が記憶部に設定されて
いる場合はその基準値に基づいて分画パラメータを算出
することができるし、対応する基準値が記憶部に設定さ
れていない場合はもう一方の算出部が算出した分画パラ
メータに基づいて対応する分画パラメータを算出するこ
とができる。分画パラメータ算出部２０に、分画信号レ
ベル算出部９、分画時間算出部１１及び分画信号傾斜値
算出部１３のうちのいずれか１つのみが備えられている
場合、記憶部１５には、その１つの算出部に対応する基
準値が設定される。

【００１６】

【発明の効果】本発明の分取液体クロマトグラフでは、
データ処理装置１は、検出器の検出信号に基づいてクロ
マトグラムを作成するクロマトグラム作成部３と、クロ
マトグラムを表示する表示部５と、表示部５に表示され
たクロマトグラム上で選択された選択ピークのピーク範
囲を算出するピーク範囲算出部７と、分画パラメータ算
出部２０とを備え、分画パラメータ算出部２０は、選択
ピークの分画信号レベルを算出する分画信号レベル算出
部９、選択ピークの分画開始時間及び分画終了時間を算
出する分画時間算出部１１、及び選択ピークの分画信号
傾斜値を算出する分画信号傾斜値算出部１３のうちの少
なくとも１つと、算出される分画信号レベル、分画開始
時間及び分画終了時間、又は分画信号傾斜値のための予
め設定される基準値を記憶する記憶部１５とを備え、予
備検討時のクロマトグラム上で選択された目的の試料成
分のピークについて、分画時間、分画信号レベル、分画
信号傾斜値のうちの少なくとも１つを算出するようにし
たので、目的の試料成分を再現性よく分画でき、かつ予
備検討時のクロマトグラムに基づいて分画に必要な分画
パラメータを算出する時間を短縮できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 本発明にかかる分取液体クロマトグラフのデ
ータ処理装置の一態様を示すブロック図である。

【図２】 一実施例の動作を示すフローチャートであ
る。

【図３】 クロマトグラムを示す波形図である。

【図４】 分取液体クロマトグラフを示す流路図であ
る。

【符号の説明】

１ データ処理装置 ３ クロマトグラム作成部 ５ 表示部 ７ ピーク範囲算出部 ９ 分画信号レベル算出部 １１ 分画時間算出部 １３ 分画信号傾斜値算出部 １５ 記憶部 ２０ 分画パラメータ算出部

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 分離カラム、移動相を分離カラムへ送る
   送液手段、分離カラムへの移動相流路に試料を注入する
   インジェクタ、分離カラムから溶出する試料成分を検出
   する検出器、試料成分を分画して採取する分取機構及び
   検出器の検出信号に基づいてクロマトグラムを作成する
   データ処理装置を備えた分取液体クロマトグラフにおい
   て、 前記データ処理装置は、検出器の検出信号に基づいてク
   ロマトグラムを作成するクロマトグラム作成部と、クロ
   マトグラムを表示する表示部と、前記表示部に表示され
   たクロマトグラム上で選択された選択ピークのピーク範
   囲を算出するピーク範囲算出部と、分画パラメータ算出
   部とを備え、 前記分画パラメータ算出部は、前記選択ピークの分画信
   号レベルを算出する分画信号レベル算出部、前記選択ピ
   ークの分画開始時間及び分画終了時間を算出する分画時
   間算出部、及び前記選択ピークの分画信号傾斜値を算出
   する分画信号傾斜値算出部のうちの少なくとも１つと、
   算出される前記分画信号レベル、前記分画開始時間及び
   分画終了時間、又は前記分画信号傾斜値のための予め設
   定される基準値を記憶する記憶部とを備えたことを特徴
   とする分取液体クロマトグラフ。