JP2001525811A - 増殖抑制薬としてのベータラクタム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、その必要のある哺乳動物において細胞増殖を治療または減少させる方法であって、該哺乳動物に有効なＣｏＡ非依存性トランスアシラーゼ（ＣｏＡ−ＩＴ）阻害量の式（Ｉ）の化合物（ここに、変数Ｙ、Ｘ、ｍ、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₁₀、Ｒ₂₀、Ｒ₅、Ｒ₆およびＲ₇は明細書に定義したとおりである）を投与することからなる方法に関する。図３は、ＳＢ２１６７５４、（（３Ｓ，４Ｒ）−４−（イソブテニルオキシ）−３−トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン）がＨＬ−６０細胞の生存率を減少できることを示す。

Description

【発明の詳細な説明】 増殖抑制薬としてのベータラクタム 発明の分野 本発明は、新規な化合物、その医薬組成物ならびに抗炎症薬としておよび哺乳 動物における細胞増殖および癌の治療のためのそれらの使用に関する。 発明の背景 過去３０年にわたり、ポリ不飽和脂肪酸であるアラキドン酸（ＡＡ）およびア ラキドン酸の酸素化代謝物のレベルをイン・ビボにて調節することがヒト疾患に 緊密に関係することが確固として確立されてきた。発明者らの研究所では、ＡＡ を炎症性および新生細胞の膜リン脂質にアシル化する経路および酵素活性に焦点 を当ててきた（参考のため、Chiltonら、Biochem．Biophys．Acta 1299：1-15(1 996)を参照）。これらの研究は、２０種と同じ位くらい多くの異なるアラキドン 酸塩含有リン脂質分子種がいずれかの所定の炎症性または新生細胞型に存在する ことを示唆する。発明者らは、いくつかの異なる酵素活性を必要とする一連の様 式において、異なるＡＡ含有リン脂質分子種を通じてＡＡが移動することを明ら かにした（図１）。最初に、脂肪族アシルＣｏＡシンターゼによって、ＡＡがＡ Ａ−ＣｏＡに変換される。他の脂肪酸ではなくＡＡを利用する特異的な脂肪族ア シルＣｏＡシンターゼがあるようである。一旦形成されると、アラキドノイルＣ ｏＡは、ＣｏＡ依存性アシルトランスフェラーゼによって１−アシル−２−リゾ −ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンに組み込まれ得る。１−アシル−２−ＡＡ −ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン中のＡＡは、次いで、１−アルキル−２− ＡＡ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンおよび１−アルカ−１−エニル−２− ＡＡ−ｓｎ−グリセローホスホエタノールアミンのような１−エーテル結合リン 脂質に転移される。１−エーテル結合リン脂質は、多数の炎症性および新生細胞 に見られる大量のＡＡを含有する。後者の反応は、酵素ＣｏＡ非依存性トランス アシラーゼ（ＣｏＡ−ＩＴ）の作用によって組織化される。 補酵素Ａ非依存性トランスアシラーゼ（ＣｏＡ−ＩＴ）は、炎症性細胞のリン 脂質分子種間でのアラキドン酸塩の移動の原因となる酵素である。ＣｏＡ−ＩＴ は、１−アシル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１ −アシル−２−アラキドノイル−ＧＰＣ）のような１−アシル含有リン脂質のｓ ｎ−２位からアラキドン酸塩を除去する。次いで、ＣｏＡ−ＩＴはアラキドン酸 塩を１−アルキル−２−リゾ−ＧＰＣおよび１−アルケニル−２−リゾ−ｓｎ− グリセロ−３−ホスホエタノールアミンのような適当なリゾーリン脂質アセプタ ーへ転移させる（Sugiuraら、J．Biol．Chem．262：1199−1205（1987）;Kramer およびDeykin，Biol．Chem．258：13806−13811（1983）;Chiltonら、J．Biol． Chem．258：7268-7271(1983)）。該活性は、２０種の炭素脂肪族アシル基につい て選択的であり、それにより炎症性細胞がアラキドン酸塩を放出前に、特異的な リン脂質プールへ移動させるメカニズムである（WinklerおよびChilton，Drug N ews Perspec．6:133-138（1993）;Snyderら、J．Lipid Mediat．10：25-31(1994 )）。 リン脂質間でのＡＡの取り込みおよびリモデリングの経路は炎症性細胞および 新生細胞の範囲内で研究されつくしたが、発明者らはごく最近、該経路の機能的 重要性が解るようになった。発明者らは、近年、ＣｏＡ−ＩＴの阻害能を有する 構造上異なる種の分子（ＳＫ＆Ｆ４５９０５（２−［２−［３−（４−クロロ− ３−トリフルオロメチルフェニル）ウレイド］−４−トリフルオロメチルフェノ キシ］−４，５−ジクロロベンゼンスルホン酸）およびＳＫ＆Ｆ９８６２５（ジ エチル７−（３，４，５−トリフェニル−２−オキソ−２，３−ジヒドロイミダ ゾール−１−イル）ヘプタンホスホネートによって特徴付けられる）を見出した （Chiltonら、Biochemistry 34:5403-5410（1995）;Winklerら、J．Pharmacol． Exp．Ther．274:1338-1347(1995)）。これらのインヒビターを炎症性または新生 細胞に急性的にまたは慢性的に与えると、該インヒビターは、１−アシル結合リ ン脂質から１−アルキル−および１−アルケニル結合リン脂質への標識されたＡ Ａの移動を減少させる（Chiltonら、Biochemistry 34:5403-5410(1995)）。ＳＫ ＆Ｆ４５９０５およびＳＫ＆Ｆ９８６２５に加えて、抗腫瘍薬１−Ｏ−オクタデ シル−２−Ｏ−メチル−ホスホコリン（ＥＴ−１８−Ｏ−ＣＨ₃）もまた、 酵素ＣｏＡ−ＩＴの強力なインヒビターであることが確立された（Winklerら、J .Pharmacol．Exp．Ther．279:956-966(1996)）。さらに、他の研究は、ＣｏＡ− ＩＴインヒビターＳＫ＆Ｆ４５９０５およびＳＫ＆Ｆ９８６２５が増殖抑制特性 を有することを明らかにした（Suretteら、Biochemistry 35:9187-9196(1996)； Winklerら、J．Pharmacol．Exp．Ther．279:956-966(1996)）。より詳細には、 ＥＴ−１８−Ｏ−ＣＨ₃を包含する全てのＣｏＡ−ＩＴインヒビターが細胞増殖 を減少させ、いくつかの新生細胞系統においてアポトーシスを誘発する。ＣｏＡ −ＩＴに対する阻害活性を持たない構造上関連する化合物は、アポトーシスを誘 発しない。さらに、ホスホリパーゼＡ₂、５−リポキシゲナーゼおよびシクロオ キシゲナーゼのインヒビターはアポトーシスを誘導せず、それは、遊離のＡＡま たはその代謝産物が該プロセスの原因ではないことを示唆する。上記の知見は、 酵素ＣｏＡ−ＩＴの遮断が癌のような増殖性障害の治療に対する新規な化学療法 的解決法であることを示す。 より良いイン・ビボでの薬理学的および毒物学的プロフィールを有する他のＣ ｏＡ−ＩＴインヒビターを見出すことへの要望がある。これらの化合物は、疾患 に罹った細胞の細胞増殖を遮断し、それゆえ、白血病および他の増殖性疾患のよ うな癌ならびに乾癬のような病状に対する治療の可能性を提供する。 発明の概要 本発明は、酵素ＣｏＡ−ＩＴの阻害によって、哺乳動物における細胞増殖の疾 患または障害を減少、阻害または軽減させ、哺乳動物、好ましくはヒトにおいて 、アポトーシスを誘発する方法である。したがって、本発明は、かかる治療を必 要とするヒトに有効量のＣｏＡ−ＩＴ阻害化合物またはその医薬上許容される塩 を投与することによる、かかる治療を必要とする哺乳動物、好ましくはヒトにお ける該細胞増殖の治療のための有効量の式（Ｉ）のＣｏＡ−ＩＴインヒビターの 使用に関する。細胞増殖に関連する治療に好ましい病態は、乾癬、慢性関節リウ マチまたはアテローム性動脈硬化症である。 本発明の別の態様は、かかる治療を必要とする哺乳動物、好ましくはヒトにお ける癌細胞成長を治療する方法であって、該哺乳動物に有効量の式（Ｉ）の化合 物を投与することからなる方法に関する。癌細胞成長に関連する治療するための 好ましい病態は、白血病である。 本発明の別の態様は、かかる治療を必要とする哺乳動物においてアポトーシス を誘発する方法であって、該ヒトまたは哺乳動物に有効量の式（Ｉ）のＣｏＡ− 非依存性トランスアシラーゼ（ＣｏＡ−ＩＴ）インヒビターを投与することから なる方法に関する。 図面の簡単な説明 図１は、生じるアラキドン酸の移動およびアポトーシスとの関係の概略図であ る。 図２は、（３Ｓ，４Ｒ）−４−（イソブテニルオキシ）−３−トリフェニルメ チルアミノ）アゼチジン−２−オンによるＣｏＡ−ＩＴの時間依存性の阻害を示 す。 図３は、ＨＬ−６０細胞の生存率を減少させるＳＢ２１６７５４、（（３Ｓ， ４Ｒ）−４−（イソブテニルオキシ）−３−トリフェニルメチルアミノ）アゼチ ジン−２−オン）の能力を示す。 図４は、Ｐ３８８細胞へのチミジンの取り込みを遮断する（（３Ｓ，４Ｒ）− ４−（イソブテニルオキシ）−３−トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２ −オン）の能力を示す。 図５は、Ｐ３８８細胞においてＤＮＡ断片化を誘発する（（３Ｓ，４Ｒ）−４ −（イソブテニルオキシ）−３−トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２− オン）の能力を示す。 図６は、慢性骨髄性白血病細胞へのチミジンの取り込みを遮断する（（３Ｓ， ４Ｒ）−４−（イソブテニルオキシ）−３−トリフェニルメチルアミノ）アゼチ ジン−２−オン）の能力を示す。 図７は、慢性骨髄性白血病細胞におけるＤＮＡ断片化を誘発する（（３Ｓ，４ Ｒ）−４−（イソブテニルオキシ）−３−トリフェニルメチルアミノ）アゼチジ ン−２−オン）の能力を示す。 発明の詳細な記載 ＣｏＡ−ＩＴ活性の阻害は、細胞成長および増殖の減少、アポトーシスの誘導 を引き起こし、それにより、増殖性および癌障害における治療上の有用性を提供 する。したがって、本発明は、ＣｏＡ−ＩＴ阻害により、増殖性および癌障害を 治療する方法を提供する。該阻害は、かかる治療を必要とする哺乳動物に、有効 量の式（Ｉ）の化合物を投与することによる。該阻害は、哺乳動物、好ましくは ヒトにおいて増殖性事象の治療および潜在的な予防をもたらすであろう。哺乳動 物におけるかかる増殖状態は、疾患（例えば、癌）、皮膚疾患（例えば、乾癬） および炎症性疾患（例えば、慢性関節リウマチ）を包含するが、それらに限定さ れるものではない。それにより、急性および慢性疾患の両方の治療が可能である 。本明細書の目的の場合、式（Ｉ）の化合物は、ＣｏＡ−ＩＴの優先的および選 択的インヒビターである。 式（Ｉ）の化合物は、構造： ［式中、 ＹはＮＨであり； ＸはＯまたはＳ（Ｏ）_mであり； ｍは０または１もしくは２の整数であり； Ｒ₃は置換されていてもよいトリフェニルメチルであり； Ｒ₄は置換されていてもよいＣ_1-10アルキル、（ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_n−Ｃ≡Ｃ−Ｒ₅ または（ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_nＣ（Ｒ₁₀）＝Ｃ（Ｒ₇）₂であり； ｎは１〜４の整数であり； Ｒ₁₀およびＲ₂₀は独立して水素またはＣ_1-4アルキルであり； Ｒ₅は水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテ ロアリールアルキル、Ｃ（Ｏ）₂Ｒ₆またはＣ（Ｏ）Ｒ₆であり（ここに、アルキ ル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキ ル部分は置換されていてもよい）； Ｒ₆はＣ_1-10アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテ ロアリールアルキル、複素環式または複素環式アルキル部分であり（ここに、ア ルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキ ル、複素環式または複素環式アルキル部分は置換されていてもよい）； Ｒ₇は独立して水素、Ｃ_1-10アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロ アリール、ヘテロアリールアルキル、複素環式または複素環式アルキルである（ ここに、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリ ールアルキル、複素環式または複素環式アルキル部分は置換されていてもよい） ］ で示される化合物またはその医薬上許容される塩を表す。 適当には、ＸはＯまたはＳ（Ｏ）_mであり；ｍは０または１もしくは２の整数 である。 適当には、Ｒ₃は置換されていてもよいトリフェニルメチル基である。フェニ ル環は、独立して、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素のようなハロゲン、ヒドロ キシ；ヒドロキシ置換Ｃ_1-10アルキル;メトキシまたはエトキシのようなＣ_1-10 アルコキシ；ハロ置換Ｃ_1-10アルコキシ；メチルチオ、メチルスルフィニルまた はメチルスルホニルのようなＳ（Ｏ）_mアルキル；Ｓ（Ｏ）_mアリール；アミノ、 モノ＆ジ−Ｃ_1-10アルキル置換アミノ；Ｃ_1-10アルキル；ＣＦ₃のようなハロ置 換Ｃ_1-10アルキル；ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）Ｃ_1-10アルキル、Ｃ（Ｏ）アリール、Ｃ（ Ｏ）₂Ｒ₈（ここに、Ｒ₈はＣ_1-10ルキル、アリールまたはアリールアルキルであ る）；Ｃ（Ｏ）ＮＲ₉Ｒ₁₁；シアノ；Ｓ（Ｏ）₂ＮＲ₉Ｒ₁₁；Ｎ（Ｒ₁₀）Ｃ（Ｏ） Ｒ₆；Ｎ（Ｒ₁₀）Ｃ（Ｏ）ＮＲ₉Ｒ₁₁；Ｎ（Ｒ₁₀）Ｃ（Ｏ）ＯＲ₆；またはＮ（Ｒ_{1 0} ）Ｓ（Ｏ）₂Ｒ₆によって１〜３回置換されていてもよい。 適当には、Ｒ₄は置換されていてもよいＣ_1-10アルキル、（ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_n−Ｃ ≡Ｃ−Ｒ₅、（ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_nＣ（Ｒ₁₀）＝Ｃ（Ｒ₇）₂（ここに、ｎは１〜４の整 数である）である。好ましくは、ｎは１である。 Ｒ₄が置換されていてもよいＣ_1-10アルキルである場合、アルキル部分は直鎖 または分子鎖であってもよく、独立して、フッ素のようなハロゲン；ヒドロキシ ；Ｃ_1-10アルコキシ；Ｓ（Ｏ）_mアルキル（ここに、ｍは０、１または２であ る）；ＮＲ₉Ｒ₁₁基（ここに、Ｒ₉およびＲ₁₁は下記と同意義であるか、またはＲ₉ およびＲ₁₁はそれらが結合している窒素と一緒になって、Ｏ／Ｎ／Ｓから選択 される付加的なヘテロ原子を包含してもよい５〜７員環を形成するよう環化する ）のようなアミノ、モノ＆ジ−置換アミノ；−Ｏ（ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_sＯ−（ここに 、ｓは２〜４の整数であり、酸素は両方とも、Ｒ₄において同じ炭素に結合して いる）；−Ｓ（ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_sＳ−（ここに、ｓは上記と同意義であり、硫黄は 両方とも、Ｒ₄において同じ炭素に結合している）；シクロアルキルまたはシク ロアルキルアルキル基；ＣＦ₃のようなハロ置換Ｃ_1-4アルキル；フェニルのよう な置換されていてもよいアリールまたはベンジルもしくはフェネチルのような置 換されていてもよいアリールアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールア ルキル（ここに、これらのアリールまたはヘテロアリール部分もまた、ハロゲン ；ヒドロキシ；ヒドロキシ置換アルキル；Ｃ_1-10アルコキシ；Ｓ（Ｏ）_mアルキ ル；ＮＲ₉Ｒ₁₁基（ここに、Ｒ₉およびＲ₁₁は下記と同意義である）のようなアミ ノ、モノ＆ジ−Ｃ_1-4アルキル置換アミノ；Ｃ_1-10アルキルまたはＣＦ₃によって １〜２回置換されていてもよい）によって、１回以上置換されていてもよい。 好ましくは、Ｒ₄はイソブチルのようなＣ_1-4アルキル、またはイソブテニルの ようなアルケニルである。 適当には、Ｒ₉およびＲ₁₁は、独立して水素、Ｃ_1-10アルキル、アリールまた はアリールアルキルである。 適当には、Ｒ₁₀およびＲ₂₀は、独立して水素またはＣ_1-4アルキルである。 適当には、Ｒ₅は水素、Ｃ_1-10アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテ ロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ（Ｏ）₂Ｒ₆、Ｃ（Ｏ）Ｒ₆である。好 ましくは、Ｒ₅は水素、Ｃ（Ｏ）₂Ｒ₆またはヘテロアリール環であり、ここに好 ましくは、Ｒ₆はメチルのようなＣ_1-4アルキルである。Ｒ₅がヘテロアリール環 ならば、好ましくは、それは２−、３−または４−ピリジルである。アルキル、 アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキルは 、本明細書に定義されるように置換されていてもよい。 適当には、Ｒ₆はＣ_1-10アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロア リール、ヘテロアリールアルキル、複素環式または複素環式アルキルである。ア リール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環 式および複素環式アルキル部分は、本明細書で定義されるように置換されていて もよい。 適当には、Ｒ₇は、独立して水素、Ｃ_1-10アルキル、アリール、アリールアル キル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環式または複素環式アル キルである。アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロ アリールアルキル、複素環式および複素環式アルキル部分は、本明細書に定義さ れるように置換されていてもよい。 適当な医薬上許容される塩は、当業者によく知られており、塩酸、臭化水素酸 、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酢酸、リンゴ酸、酒石 酸、クエン酸、乳酸、蓚酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サリ チル酸、フェニル酢酸およびマンデル酸のような無機および有機酸の塩基性塩を 包含する。 以下の用語は本明細書で使用する場合、下記のことを示す。 「ハロ」なる語は、全てのハロゲン、すなわち、クロロ、フルオロ、ブロモお よびヨードを示す。 「Ｃ_1-10アルキル」または「アルキル」なる語は、鎖の長さを別に限定しない かぎり、１〜１０個の炭素原子の直鎖および分子鎖の両方の基を示し、メチル、 エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓ ｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなどを包含するが、それらに限定されるものでは ない。 「シクロアルキル」なる語は、好ましくは３〜８個の炭素の環式基を意味する ために本明細書で使用され、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル などを包含するが、それらに限定するものではない。 「アルケニル」なる語は、鎖の長さを限定しないかぎり、２−１０個の炭素原 子の直鎖または分子鎖基を意味する全ての場合に本明細書で使用され、エテニル 、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニ ル、２−ブテニルなどを包含するが、それらに限定されるものではない。 「アリール」なる語は、フェニルおよびナフチルを示す。 「ヘテロアリール」（それ自体またはいずれかの組み合わせで、例えば、「ヘ テロアリールオキシ」または「ヘテロアリールアルキル」）なる語は、１以上の 環がＮ、ＯまたはＳよりなる群から選択される１以上のヘテロ原子を含有する５ −１０員芳香族環系、例えば、ピロール、ピラゾール、フラン、チオフェン、キ ノリン、イソキノリン、キナゾリニル、ピリジン、ピリミジン、オキサゾール、 チアゾール、チアジアゾール、トリアゾール、イミダゾールまたはベンゾイミダ ゾールを示すが、それらに限定されるものではない。 「複素環式」（それ自体かまたはいずれかの組み合わせ、例えば、「複素環式 アルキル」）なる語は、１以上の環がＮ、ＯまたはＳよりなる群から選択された １以上のヘテロ原子を含有する飽和または部分的不飽和の４−１０員環系、例え ば、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロピランま たはイミダゾリジンを示すが、それらに限定されるものではない。 「アラルキル」または「ヘテロアリールアルキル」または「複素環式アルキル 」なる語は、別記しないかぎり、本明細書に定義される通りのアリール、ヘテロ アリールまたは複素環式部分に結合した上記で定義された通りのＣ_1-4アルキル を意味するために、本明細書で使用される。 「スルフィニル」なる語は、対応する硫化物の酸化物Ｓ（Ｏ）を示し、「チオ 」なる語は硫化物を示し、「スルホニル」なる語は、完全に酸化したＳ（Ｏ）₂ 部分を示す。 「アロイル」なる語は、Ｃ（Ｏ）Ａｒ（ここに、Ａｒはフェニル、ナフチルま たは上記で定義された通りのアリールアルキル誘導体である）を示し、かかる基 は、ベンジルおよびフェネチルを包含するがそれらに限定されるものではない。 「アルカノイル」なる語は、Ｃ（Ｏ）Ｃ_1-10アルキル（ここに、アルキルは上 記で定義された通りである）を示す。 「置換されていてもよい」なる語は、特記しないかぎり、フッ素、塩素、臭素 またはヨウ素のようなハロゲン；ヒドロキシ、ヒドロキシ置換Ｃ_1-10アルキル； メトキシまたはエトキシのようなＣ_1-10アルコキシ；メチルチオ、メチルスルフ ィニルまたはメチルスルホニルのようなＳ（Ｏ）_mアルキル（ここに、ｍ は０、１または２である）；ＮＲ₉Ｒ₁₁基のようなアミノ、モノ＆ジ−置換アミ ノ；メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル等またはシクロプロ ピルメチルのようなＣ_1-10アルキル、シクロアルキルまたはシクロアルキルアル キル基；ＣＦ₃のようなハロ置換Ｃ_1-10アルキル；フェニルのような置換されて いてもよいアリールまたはベンジルもしくはフェネチルのような置換されていて もよいアリールアルキル（ここに、アリール部分もまた、ハロゲン；ヒドロキシ ；ヒドロキシ置換アルキル；Ｃ_1-10アルコキシ；Ｓ（Ｏ）_mアルキル；ＮＲ₉Ｒ₁₁ 基におけるようなアミノ、モノ＆ジ−Ｃ_1-4アルキル置換アミノ；Ｃ_1-10アルキ ルまたはＣＦ₃によって１〜２回置換されていてもよい）のような基を意味する 。 本明細書で使用される場合、「アルキルリゾリン脂質」（ＡＬＰ）、「アルキ ルリゾリン脂質類似体」および「エーテル結合リン脂質およびその類似体」なる 語は、当業者によく知られた用語であり、付加的な定義は必要ではない。一般に 、これらの用語は、グリセロール骨格のｓｎ−１位にアルキル鎖を有するエーテ ル結合リン脂質である化合物を包含するであろう。これらの化合物は、１−Ｏ− アルキル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンの誘導体、１ −Ｏ−ヘキサデシル−２−アセタール−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｐ ＡＦ）の誘導体、エステル−リゾリン脂質（２−ＰＬＣ）の誘導体、またはリゾ ホスファチジルコリン（２−ＬＰＣ）の誘導体であってもよい。エーテル−リゾ リン脂質はまた、アルキルリゾＰＣまたはＡＬＰともいい；アルキルホスホコリ ンはまた、ＡＰＣともいい；ヘキサデシルホスホコリンはＨＰＣと称する。概要 語によって包含される適当な化合物は、その開示が出典明示により完全に本明細 書の一部とされる、Schickら，Lipids，22（11）904-910(1987)に記載される化 合物；Morris-Natschkeら.，J．Med．Chem.，29（10）2114-2117(1986);Gotoら ，Anticancer Research，14:357362(1994);Langenら，Anticancer Research，12 :2109-2112(1992);Volgerら，Lipids，28(6)511-516(1993);Workmanら，Biochem ．Pharm.，41(2)319-22(1991);Kohlerら，Inflammation，17(3)，245-261(1993) ;Brachwitzら，Lipids，22（11）897-903(1987);Berdel，W.，Lipids，22(11)97 0-973(1987);Danhauserら，Lipids，22(11)911-915 (1987);Danhauser-Riedlら，J．Lipid Metabolism，2，271-280(1990);Lohmeyer ら，Biochem．Pharm.，45（1）77086(1993);Riesら，Chemistry andPhysics of Lipids，61，225-234（1992）に記載される化合物;ならびにGuivisdalskyら，J ．Med．Chem，33(9)，2614-2621(1990)およびPignolら，Anti-Cancer Drugs，3 ，599-608(1992)のような硫黄および窒素結合を有する誘導体を包含するが、そ れらに限定されるものではない。 本発明の化合物は立体異性体、位置異性体またはジアステレオ異性体として存 在してもよい。これらの化合物は、１以上の不斉炭素原子を含有していてもよく 、ラセミ化合物および光学活性形態で存在していてもよい。これらの化合物の全 ては、本発明の範囲内に包含される。 式（Ｉ）の特に例示される化合物は： （３ＲＳ，４ＲＳ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミ ノ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｒ，４Ｒ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ） アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ） アゼチジン−２−オン、 （３Ｒ，４Ｒ）−４−（イソブチルチオ）−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｒ，４Ｒ）−４−（イソブチルスルホニル）−３−（トリフェニルメチル アミノ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ） アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−（プロポキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）ア ゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−（プロポキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）ア ゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−（ベンジルオキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−（ベンジルオキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−メトキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジ ン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−（イソブテニルオキシ）−３−（トリフェニルメチルア ミノ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−オクチルオキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）ア ゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−フェノキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチ ジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−フェノキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチ ジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−３−［［（４−ヨードフェニル）ジフェニルメチル］アミノ ］−４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−［３−（メトキシカルボニル）プロポキシ］−３−（ト リフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−［［２−（３−ピリジルメチル）−１，３−ジチアン− ２−イル］メトキシ］−３−（トリフェニルメチルアミノ）−アゼチジン−２− オン、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−（プロパ−２−イニルオキシ）−３−（トリフェニルメ チルアミノ）アゼチジン−２−オン、 メチル４−［（３Ｓ，４Ｓ）−２−オキソ−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−４−イルオキシ］ブタ−２−イノエート、 メチル４−［（３Ｓ，４Ｒ）−２−オキソ−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−４−イルオキシ］ブタ−２−イノエート、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−［（２（５Ｈ）フラノン−４−イル）メトキシ］−３− （トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン、 （Ｓ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン、 （ＲＳ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｒ，４Ｒ）−４−（メチルスルホニル）−３−（トリフェニルメチルアミ ノ）アゼチジン−２−オン である。 ４−（Ｘ−Ｒ⁴）が４−（Ｏ−Ｒ⁴）または４−（Ｓ−Ｒ⁴）である式（Ｉ）の 化合物は、スキームＩにしたがって、１（ここに、Ｒ³は式（Ｉ）に定義された 通りであり、Ｙはメチルスルホニル、アシルオキシまたはクロロのような適当な 脱離基である）から調製できる。Ｙがメチルスルホニルである化合物１は、その 開示が出典明示により本明細書の一部とされるJ．Chem．Soc．Perkin I，447，1 976に記載のように得られる。１における基ＹのＨＯ−Ｒ⁴またはＨＳ−Ｒ⁴での 置換は、トルエンのような適当な溶媒中、９０℃などの適温にて、酢酸亜鉛のよ うな適当な触媒を用いて行ってもよい。別法では、フェノールを用いて、水酸化 ナトリウム水溶液のような適当な塩基の存在下、アセトンのような適当な溶媒中 で置換を行ってもよい。 ４−（Ｘ−Ｒ⁴）が４−（ＳＯ−Ｒ⁴）または４−（ＳＯ₂−Ｒ⁴）であって、Ｒ³ 、Ｒ⁴が式（Ｉ）に定義された通りである化合物３は、ジクロロメタンのような 適当な溶媒中、ｍ−クロロ過安息香酸、過酢酸等のような適当な有機酸化剤を用 いる４−（Ｘ−Ｒ⁴）が４−（Ｓ−Ｒ⁴）である２のさらなる酸化によって、ある いは水、アセトンまたは酢酸のような溶媒中、過ヨウ素酸ナトリウムまたは過マ ンガン酸カリウムのような適当な無機酸化剤を用いるさらなる酸化によって得る ことができる。 スキームI 別法では、式（Ｉ）の化合物は、スキームＩＩにしたがって、４から調製し てもよい。化合物４（ここに、ＸはＯ−Ｒ⁴またはＳ−Ｒ⁴であって、Ｒ⁴は式（ Ｉ）に定義された通りであり、Ｒ¹は水素である）は、その開示が出典明示によ り本明細書の一部とされるSynthetic Communications，24，131-135(1994)に記 載のように、４−アセトキシまたは４−ベンゾイルオキシ−アゼチジン−２−オ ンから調製できる。テトラヒドロフランのような適当な溶媒中、４（Ｒ¹が水素 である）をｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドのような適当なシリル化基 およびトリエチルアミンのような適当な塩基と反応させ、４（Ｒ¹がｔｅｒｔ− ブチルジメチルシリルである）を得る。テトラヒドロフランのような適当な溶媒 中、−５０℃などの適温にて、４（Ｒ¹がｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルであ る）をリチウムジイソプロピルアミドのような適当な塩基と反応させ、次いで、 テトラヒドロフランのような適当な溶媒中のアジ化トシルのような適当なアジ化 試薬の溶液に加え、次いで、塩化トリメチルシリルで処理することにより、５（ Ｒ¹がｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルである）を得る。トリエチルアミンのよ うな適当な塩基を含有するジクロロメタンのような適当な溶媒中、硫化水素のよ うな適当な還元剤を用いて、５（Ｒ¹がｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルである ）におけるアジド基を還元して、６（Ｒ¹がｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルで ある）を得る。ジイソプロピルエチルアミンのような適当な塩基を含有するジメ チルホルムアミドのような適当な溶媒中、適当なアルキル化剤Ｒ³Ｚ（ここに、 Ｒ³は式（Ｉ）に定義された通りであり、Ｚはクロロのような適当な脱離基であ る）を用いて６（Ｒ¹がｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルである）を処理し、２ （Ｒ¹がｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルである）を得る。テトラヒドロフラン および酢酸のような適当な溶媒中、２（Ｒ¹がｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル である）をテトラブチルアンモニウムフルオリドのような適当な無機フルオリド で処理し、２（Ｒ¹が水素である）を得る。 スキームII 別法では、化合物ＩＩ−５は、［２＋２］付加環化反応を用いて、例えば、そ の開示が出典明示により本明細書の一部とされるCamaら、Tetrahedron Letters ，4233，1978に記載された一般的な手法にしたがって調製してもよい。 合成化学 本発明は、ここに、以下の実施例を参照に記載され、これらの実施例は、単に 例示であって、本発明の範囲を制限しようとするものではない。別記しないかぎ り、全ての温度は摂氏であり、全ての溶媒は入手可能な最高純度のものであり、 全ての反応はアルゴン雰囲気下、無水条件下で行われる。 実施例中、全ての温度は摂氏（℃）である。別記しないかぎり、マススペクト ルは、高速原子衝撃を用いるＶＧ Ｚａｂ質量分析計で行われた。¹Ｈ−ＮＭＲ （以後、「ＮＭＲ」という）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＭ２５０またはＡ ｍ４００スペクトロメーターを用いて２５０ＭＨｚで記録された。示される多重 度は：ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｍ＝多重線であり、 ｂｒは幅の広いシグナルを示す。Ｓａｔ．は飽和溶液を示し、ｅｑは主要反応物 に相対的な試薬のモル当量の割合を示す。 フラッシュクロマトグラフィーは、ＭｅｒｃｋＳｉｌｉｃａ ｇｅｌ６０（２ ３０−４００メッシュ）で行う。 実施例１ （３Ｒ，４ＲＳ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ） アゼチジン−２−オンの調製 ａ）４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オン ４−（ベンジルオキシ）アゼチジン−２−オン（１５．２ｇ、８０ミリモル） のトルエン（５０ｍＬ）中混合物をイソブタノール（１２ｇ、０．１６モル）、 トリエチルアミン（１６ｇ、０．１６モル）および酢酸パラジウム（３．６ｇ、 １６ミリモル）で処理し、氷浴中で数時間攪拌し、室温に温め、１６時間攪拌し た。混合物をＳｕｐｅｒｃｅｌで濾過し、濃縮し、残渣をシリカゲル上のクロマ トグラフィーに付し、１０−３５％酢酸エチル：ヘキサンで溶出した。生産物を 含有するフラクションを合わし、濃縮し、再びシリカゲル上のクロマトグラフィ ーに付し、１０−２５％酢酸エチル：ヘキサンで溶出して、標記化合物を得た（ ４．９ｇ）。 ｂ）１−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−（イソブトキシ）アゼチジン −２−オン ４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オン（４．８ｇ、３３ミリモル）のテ トラヒドロフラン（５０ｍＬ）中溶液を氷浴中で攪拌し、トリエチルアミン（６ ．６ｍＬ、６６ミリモル）で処理し、次いでｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルク ロリド（６．５ｇ、４３ミリモル）のテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）中溶液を 滴下した。混合物を冷やしながら５時間攪拌し、冷蔵庫で６４時間保管した。混 合物を冷水に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出し、合わした有機層をブラインで洗浄 し、乾燥させ（硫酸マグネシウム）、濃縮した。残渣をシリカゲル上のクロマト グラフィーに付し、１０％酢酸エチル：ヘキサンで溶出した。生産物を含有する フラ クションをプールし、濃縮して、標記化合物を得た（６．６ｇ、７９％）。 ｃ）（３ＲＳ，４ＲＳ）−３−アジド−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリ ル）−４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オンの調製 Ｎ−（イソプロピル）シクロヘキシルアミン（１．５ｇ、１０ミリモル）のテ トラヒドロフラン（１８ｍＬ）中溶液を−１５℃に冷却し、２Ｍブチルリチウム （４８ｍＬ、１０ミリモル）を滴下した。反応混合物を４０分間攪拌し、温度を −７０℃に下げ、１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−４−（イソブトキ シ）−アゼチジン−２−オン（１．８ｇ、７ミリモル）のテトラヒドロフラン（ ７ｍＬ）中溶液を１０分にわたって滴下して、混合物を処理した。混合物を一時 間攪拌し、−７０℃に維持されたジャケット付き添加漏斗に移し、４０分にわた り、−７０℃に維持されたヘキサメチルホスホルアミド（２ｍＬ）を含有するテ トラヒドロフラン（８ｍＬ）中におけるｐ−トルエンスルホニルアジド（１．８ ｇ、９ミリモル）の溶液に加えた。反応物を１時間攪拌し、−５０℃で４．５時 間攪拌した。混合物を−２８℃で１６時間攪拌し、トリメチルシリルクロリド（ ５ｍＬ）を加え、混合物を室温で４５分攪拌した。混合物を水で希釈し、酢酸エ チルで抽出した。合わした有機層をブラインで洗浄し、乾燥し（硫酸マグネシウ ム）、濃縮した。残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、１０％酢酸 エチル：ヘキサンで溶出して、標記化合物を得た（０．６ｇ、３０％）。ＭＳ（ ＥＳ）ｍ／ｅ２９９［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｄ）（３ＲＳ，４ＲＳ）−３−アミノ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリ ル）−４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オン （３ＲＳ，４ＲＳ）−３−アジド−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル） −４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オン（０．２ｇ、０．６７ミリモル） のトリエチルアミン（０．０７ｇ、０．７ミリモル）を含有するジクロロメタン （１５ｍＬ）中溶液を氷浴中で冷却し、硫化水素を溶液に通して穏かに１０分間 バブルした。混合物を冷却しながら４時間攪拌し、濃縮し、次いで、ジクロロメ タンで処理し、４倍濃縮して標記化合物を得た。 ｅ）（３ＲＳ，４ＲＳ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−４−（ イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン （３ＲＳ，４ＲＳ）−３−アミノ−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル） −４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オン（０．２ｇ）の溶液をジメチルホ ルムアミド（８ｍＬ）中に溶解し、氷浴中で冷却し、ジイソプロピルエチルアミ ン（０．１ｍＬ）、次いで塩化トリチル（１６７ｍｇ、０．６ミリモル）で処理 した。混合物を１８時間攪拌し、水（４０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチルで抽出し た。合わした有機層を乾燥させ（硫酸マグネシウム）、濃縮し、残渣をシリカゲ ル上のクロマトグラフィーに付し、２０％酢酸エチル：ヘキサンで溶出して、標 記化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ５１５［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｆ）（３ＲＳ，４ＲＳ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチル アミノ）アゼチジン−２−オン （３ＲＳ，４ＲＳ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−４−（イソ ブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン（１６０ ｍｇ、０．３ミリモル）のテトラヒドロフラン（４ｍＬ）中の溶液を氷浴中で冷 却し、酢酸（２５ｍｇ、０．４ミリモル）で処理し、次いで１Ｍテトラブチルア ンモニウムフルオリド（０．６ｍＬ、０．６ミリモル）を滴下した。混合物を２ ０分間攪拌し、酢酸エチルで溶出してシリカゲル（１０ｇ）を通過させた。溶出 液を濃縮し、残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、２０％酢酸エチ ル：ヘキサンで溶出して、標記化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ４２３［Ｍ＋ Ｎａ］⁺ 実施例２ （３Ｒ，４Ｒ）−および（３Ｓ，４Ｓ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフ ェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オンの調製 （３ＲＳ，４ＲＳ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミ ノ）アゼチジン−２−オンをＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒａｃｅｌ ＯＤ，２１Ｘ２５０ ｍｍ、１０ｍＬ／分、勾配Ａ：エタノールＢ：ヘキサン、０．５−２．５％Ａ２ ０分間、２５４ｎｍにてＵＶ検出）によって分離し、標記化合物を得た。 （３Ｒ，４Ｒ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ） アゼチジン−２−オン、^tＲ３５分。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ８０１［２Ｍ＋Ｈ］⁺ および （３Ｓ，４Ｓ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ） アゼチジン−２−オン、^tＲ３９．９分。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ８０１［２Ｍ＋Ｈ ］⁺ 実施例３ （３Ｒ，４Ｒ）−４−（イソブチルチオ）−３−（トリフェニルメチルアミノ） アゼチジン−２−オンの調製 酢酸亜鉛（０．７ｇ、３ミリモル）のトルエン（１５ｍＬ）中溶液および２− メチル−プロパンチオール（０．７２ｇ、８ミリモル）を、水を共沸留去するた めのＤｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップを備え付けた装置中で４５分間還流した。（ ３Ｒ，４Ｒ）−４−（メチルスルホニル）−３−（トリフェニルメチルアミノ） アゼチジン−２−オン（１．５ｇ、３６ミリモル）を加え、混合物を９０℃に２ 時間加熱した。混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルでトリチュレートし、不溶性 物質を濾過によって除去した。濾液を濃縮し、残渣をシリカゲル上のクロマトグ ラフィーに付し、２０％酢酸エチル：ヘキサンで溶出した。生産物を含有するフ ラクションを合わし、濃縮して標記化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ４１７［ Ｍ＋Ｈ］⁺ 実施例４ （３Ｒ，４Ｒ）−４−（イソブチルスルホニル）−３−（トリフェニルメチルア ミノ）アゼチジン−２−オンの調製 （３Ｒ，４Ｒ）−４−（イソブチルチオ）−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−２−オン（５０ｍｇ、０．１２ミリモル）のジクロロメタン（２ ｍＬ）中溶液を氷浴中で冷却し、ｍ−クロロ過安息香酸（４４ｍｇ、０．２５ミ リモル）で処理した。混合物を冷却しながら２．５時間攪拌し、５％炭酸ナトリ ウム（５ｍＬ）およびジクロロメタンの間に分配した。有機層を５％炭酸ナトリ ウムおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（硫酸マグネシウム）、濾過し、濃縮し た。残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、２０％酢酸エチル： ヘキサンで溶出し、生産物を含有するフラクションをプールし、濃縮して、標記 化合物（２５ｍｇ、４７％）を得た。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ４４７[Ｍ−Ｈ]⁺ 実施例５−１３ 以下の化合物は、イソブタノール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタ ノール、イソブテノールまたはオクタノールを２−メチル−プロパンチオールの 代わりに用いる以外は、実施例３の手法を用いて調製した。 実施例５：（３Ｓ，４Ｓ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチ ルアミノ）アゼチジン−２−オン ：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ８０１［２Ｍ＋Ｈ］⁺ 実施例６：（３Ｓ，４Ｒ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチ ルアミノ）アゼチジン−２−オン ：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ４０１［Ｍ＋Ｈ］⁺ 実施例７：（３Ｓ，４Ｒ）−４−（プロポキシ）−３−（トリフェニルメチル アミノ）アゼチジン−２−オン :ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ３８７［Ｍ＋Ｈ］⁺ 実施例８：（３Ｓ，４Ｓ）−４−（プロポキシ）−３−（トリフェニルメチル アミノ）アゼチジン−２−オン ：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ７７３［２Ｍ＋Ｈ］⁺ 実施例９：（３Ｓ，４Ｒ）−４−（ベンジルオキシ）−３−（トリフェニルメ チルアミノ）アゼチジン−２−オン ：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ４３５［Ｍ＋Ｈ］⁺ 実施例１０：（３Ｓ，４Ｓ）−４−（ベンジルオキシ）−３−（トリフェニル メチルアミノ）アゼチジン−２−オン ：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ４３５［Ｍ＋Ｈ］⁺ 実施例１１：（３Ｓ，４Ｒ）−４−メトキシ−３−（トリフェニルメチルアミ ノ）アゼチジン−２−オン ：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ３５９［Ｍ＋Ｈ］⁺ 実施例１２：（３Ｓ，４Ｒ）−４−（イソブテニルオキシ）−３−（トリフェ ニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン ：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ３９９［Ｍ＋Ｈ ］⁺ 実施例１３：（３Ｓ，４Ｒ）−４−オクチルオキシ−３−（トリフェニルメチ ルアミノ）アゼチジン−２−オン ：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ４５７［Ｍ＋Ｈ］⁺ 実施例１４−１５ （３Ｓ，４Ｒ）−４−フェノキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジ ン−２−および（３Ｓ，４Ｓ）−４−フェノキシ−３−（トリフェニルメチルア ミノ）アゼチジン−２−オンの調製 フェノール（０．３ｇ、３．２ミリモル）のアセトン（３ｍＬ）中溶液を１Ｎ 水酸化ナトリウム（３．２ｍＬ、３．２ミリモル）で処理し、１０分攪拌し、（ ３Ｒ，４Ｒ）−４−メチルスルホニル−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼ チジン−２−オン（１．２ｇ、３ミリモル）のアセトン（２ｍＬ）中溶液を滴下 処理した。混合物を１．５時間攪拌し、水およびジエチルエーテルの間に分配し 、有機層を合わし、ブラインで洗浄し、乾燥させ（硫酸マグネシウム）、濃縮し た。残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、２０％酢酸エチル：ヘキ サンで溶出して、標記化合物を得た。 （３Ｓ，４Ｒ）−４−フェノキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチ ジン−２−オン：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ４４３［Ｍ＋Ｎａ］⁺；４２１［Ｍ＋Ｈ］⁺ （３Ｓ，４Ｓ）−４−フェノキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチ ジン−２−オン：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ８４１［２Ｍ＋Ｈ］⁺；４１９［Ｍ−Ｈ］ − 実施例１６ （３Ｓ，４Ｒ）−３−［［（４−ヨードフェニル）ジフェニルメチル］アミノ］ −４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オンの調製 ａ）（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オ ンパラートルエンスルホネート パラートルエンスルホン酸水和物（１９０ｍｇ）のアセトン（２０ｍＬ）中溶 液を（３Ｓ，４Ｒ）−４−イソブトキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）ア ゼチジン−２−オン（４００ｍｇ、１ミリモル）のアセトン（２０ｍＬ）中溶液 に加え、１時間攪拌し、濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし 、得られた固体を濾過によって単離して、標記化合物を得た（１８０ｍｇ、５５ ％）。 ｂ）（３Ｓ，４Ｒ）−３−［［（４−ヨードフェニル）ジフェニルメチル］ア ミノ］−４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オン （３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オンパ ラ−トルエンスルホネート（１８０ｍｇ、０．５４ミリモル）のジイソプロピル エチルアミン（１．１ミリモル）を含有するアセトン（８ｍＬ）中溶液を（４− ヨードフェニル）ジフェニルメチルクロリド（２１８ｍｇ、０．５４ミリモル） の溶液で処理し、Tschitschibabin，Chem．Ber．44，450(1911)に記載のように 、アセトン(９８mL)中で調製した。溶液を６時間攪拌し、水およびジクロロメタ ンの間に分配した。合わした有機層を乾燥させ（硫酸マグネシウム）、濃縮し、 残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、１５％酢酸エチルで溶出して 、標記化合物を得た（１９０ｍｇ、６７％）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ５２７［Ｍ＋ Ｈ］⁺ 実施例１７ （３Ｓ，４Ｓ）−４−［３−（メトキシカルボニル）プロポキシ］−３−（トリ フェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン ａ）（３Ｓ，４Ｓ）−３−アミノ−４−［３−（メトキシカルボニル）プロポ キシ］アゼチジン−２−オン メチル４−［（３Ｓ，４Ｓ）−２−オキソ−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−４−イルオキシ］ブタ−２−イノエート（７５ｍｇ、０．１７ミ リモル）の無水エタノール（６ｍＬ）中溶液を炭素上の１０％パラジウム（３５ ｍｇ）で処理し、水素下で一晩攪拌した。触媒を濾過によって除去し、濾液を 濃縮した。残渣油状物を分取薄層クロマトグラフィー（Whatman，シリカゲル６ ０Ａ、２０ｘ２０ｃｍ、１０００μｍ、２０％酢酸エチル：ヘキサン）によって 精製した。原点のバンドが標記化合物を含有した（３０ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ ／ｅ２０３．０［Ｍ＋Ｈ］ ｂ）（３Ｓ，４Ｓ）−４−［３−（メトキシカルボニル）プロポキシ］−３− （トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン （３Ｓ，４Ｓ）−３−アミノ−４−［３−（メトキシカルボニル）プロポキシ ］アゼチジン−２−オン（３０ｍｇ、０．１４８ミリモル）を乾燥ジクロロメタ ン（２ｍＬ）中に溶解し、トリフェニルメチルクロリド（４１ｍｇ、０．１４８ ミリモル）、次いでジイソプロピルエチルアミン（１９ｍｇ、０．１４８ミリモ ル）で処理した。溶液をアルゴン下、室温で５時間攪拌し、水で希釈し、ジクロ ロメタンで抽出した。有機層を合わし、水およびブラインで洗浄し、乾燥させ（ 硫酸マグネシウム）、濾過し、濃縮した。残渣を分取薄層クロマトグラフィー（ Whatman，シリカゲル６０Ａ、２０ｘ２０ｃｍ、１０００μｍ、４０％酢酸エチ ル：ヘキサン）によって精製して、標記化合物（７ｍｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳ） ｍ／ｅ４４５．２［Ｍ＋Ｈ］ 実施例１８−２１ 実施例１８および１９：メチル４−ヒドロキシ−２−ブチノエート（Zh.Obshc h．Khim．66，106，1996）、実施例２０：４−ヒドロキシメチル−２（５Ｈ）− フラノン（J．Chem．Res.，Synop．222，1986）または実施例２１：２−（３− ピリジルメチル）−１，３−ジチアニル−２−メタノールを２−メチル−プロパ ンチオールの代わりに用いる以外は、実施例３の一般的手法を用いて、以下の化 合物を調製した。 実施例１８：メチル４−［（３Ｓ，４Ｓ）−２−オキソ−３−（トリフェニル メチルアミノ）アゼチジン−４−イルオキシ］ブタ−２−イノエートの調製 メチル４−「（３Ｓ，４Ｓ）−２−オキソ−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−４−イルオキシ］ブタ−２−イノエート： 実施例１９：メチル４−[(3Ｓ，４Ｒ）−２−オキソ−３−（トリフェニルメ チルアミノ）アゼチジン−４−イルオキシ］ブタ−２−イノエートの調製 メチル４−［（３Ｓ，４Ｒ）−２−オキソ−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−４−イルオキシ］ブタ−２−イノエート： 実施例２０：（３Ｓ，４Ｒ）−４−［２（５Ｈ）フラノン−４−イル）メトキ シ］−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オンの調製 （３Ｓ，４Ｒ）−４−［２（５Ｈ）フラノン−４−イル）メトキシ］−３−（ トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン： 実施例２１：（３Ｓ，４Ｒ）−４−［［２−（３−ピリジルメチル）−１，３ −ジチアン−２−イル］メトキシ］−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチ ジン−２−オンの調製 （３Ｓ，４Ｒ）−４−［［２−（３−ピリジルメチル）−１，３−ジチアン− ２−イル］メトキシ］−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オ ン:IR(CHCl₃)3370，1775cm^-1 上記と類似の手法を用いて、または上記のように、以下の化合物を合成した。 実施例２２：（３Ｓ，４Ｓ）−４−（プロパ−２−イルオキシ）−３−（トリ フェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン：J．Chem．Soc．Perkin Trans． I 2268，1979 実施例２３：（３Ｒ，４Ｒ）−４−（メチルスルホニルオキシ）−３−（トリ フェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン ：J．Chem．Soc．Perkin Trans． I 2268，1979 実施例２４：（３Ｓ，４Ｒ）−４−（イソブテニルオキシ）−３−（トリフェ ニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン ：J．Chem．Soc．Perkin Trans．I226 8，1979 実施例２５：（Ｓ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オ ン ：Tetr．Letters 30，3219，1989 実施例２６：そこに記載の手法と類似の手法を用いて、（ＲＳ）−３−（トリ フェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オンのラセミ混合物を製造した。 治療法 式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を、哺乳動物、好ましくはヒ トにおける増殖性病態の予防的または治療的処理のための医薬の製造に用いるこ とができる。細胞増殖の阻害から利益を得ることができる病態は、慢性関節リウ マチ、乾癬、アテローム性動脈硬化症、および白血病または充実性腫瘍のような 癌を包含するがそれらに限定するものではない。 疾患に罹った細胞における本発明のＣｏＡ−ＩＴの阻害および増殖の遮断は、 幅広い範囲の疾患または障害において治療的利益がある。したがって、本明細書 において本発明は、ヒトおよび他の哺乳動物の両方において、かかる病態の治療 に有用である。 式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩は、単独の治療としてまたは 増殖を阻害する他の治療と組み合わせて、増殖性疾患の治療に使用することがで きる。かかる治療の例は、癌化学療法薬および放射線治療を包含するが、それら に限定するわけではない。多数の癌の標準的な療法におけるように、多くの増殖 抑制薬は、他の増殖抑制薬と併用する場合、付加的効力を示すかまたは効力を増 す。 式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を治療に用いるために、通常 、標準的な製薬の習慣にしたがって、医薬組成物中に処方する。したがって、本 発明は、また、有効な非毒性量の式（Ｉ）の化合物および医薬上許容される担体 または希釈剤を含んでなる医薬組成物にも関する。 式（Ｉ）の化合物、その医薬上許容される塩およびかかる化合物を混合した医 薬組成物は、都合のよいことには、薬物投与に通常使用されるいずれかの経路、 例えば、経口、局所、非経口または吸入によって投与してもよい。式（Ｉ）の化 合物は、慣用的な手法にしたがって式（Ｉ）の化合物を標準的な医薬担体と混合 することによって調製される慣用的な投与形態で投与してもよい。かかる医薬上 許容される担体または希釈剤および製造方法は、当業者によく知られており、参 考のために、Remington's Pharmaceutical Sciences，第１８版，Alfonso R．Ge narao編，1990，Mack Publishing Co.およびHandbook of Pharmaceutical Excip ents，APhA Publications，1986のようなテキストを見ることができる。 式（Ｉ）の化合物はまた、既知の第二の治療上活性な化合物、例えば、抗癌剤 または増殖抑制薬と組み合わせて、慣用的な投与量で投与してもよい。これらの 手法は、所望の調製物に適当な成分の混合、造粒および圧縮または溶解を含んで もよい。医薬上許容される担体または希釈剤の形態および特徴は、混合されるべ き活性成分の量、投与経路および他のよく知られた変数によって決定される。担 体は、製剤の他の成分と適合し、その受容者に有害でないという意味で「許容」 されなければならない。 使用される医薬担体は、例えば、固形または液状のいずれかであってもよい。 固形担体の例は、ラクトース、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペ クチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などであって もよい。液状担体の例は、シロップ、落花生油、オリーブ油、水などである。同 様に、担体または希釈剤は、当該分野でよく知られた遅延性物質、例えば、単独 あるいはワックスと一緒になったモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリ ン酸グリセリルを包含してもよい。 多種の医薬形態を用いることができる。したがって、固形担体を用いる場合、 調製物は錠剤にするか、粉末またはペレット形態でハードゼラチンカプセル中に 入れるか、あるいはトローチまたはロゼンジの形態にすることができる。固形担 体の量は幅広く変化するが、好ましくは、約２５ｍｇ〜約１ｇである。液状担体 を用いる場合、調製物は、シロップ、エマルジョン、ソフトゼラチンカプセル、 アンプルのような滅菌注射用液体または非水性液体懸濁液の形態であろう。 式（Ｉ）の化合物は、局所的に、すなわち、非全身投与によって投与してもよ い。これは、化合物が著しく血流に侵入しないような、式（Ｉ）の化合物の皮膚 または口腔への外部からの塗付およびかかる化合物の耳、目および鼻への滴下を 包含する。対照的に、全身投与は、経口、静脈内、腹膜内および筋内投与をいう 。 局所投与に適当な製剤は、皮膚を通って炎症部位への浸透に適当な液体または 半液体調製物、例えば、リニメント、ローション、クリーム、軟膏またはパスタ 剤、および目、耳または鼻への投与に適する滴剤を包含する。活性成分は、局所 投与の場合、製剤の０．００１％〜１０％ｗ／ｗ、例えば、１重量％〜２重量％ を含んでもよい。しかしながら、製剤の１０％ｗ／ｗほどの多くの量を含んでも よいが、好ましくは、製剤の５％ｗ／ｗ未満、より好ましくは０．１％〜１％ｗ ／ｗを含む。 本発明に係るローションは、皮膚または目への塗布に適するローションを包含 する。眼用ローションは、殺菌剤を含有していてもよい滅菌水溶液を含んでいて もよく、滴剤の調製法と類似の方法によって調製してもよい。皮膚に塗布するた めのローションまたはリニメントはまた、乾燥を促進し、皮膚を冷やすための薬 剤、例えば、アルコールまたはアセトン、および／またはグリセロールなどの加 湿剤またはヒマシ油もしくは落花生油のような油を含んでもよい。 本発明係るクリーム、軟膏またはパスタ剤は、外用の活性成分の半固体製剤で ある。それらは、微粉または粉末形態で活性成分を単独であるいは水性または非 水性液体中の溶液もしくは懸濁液中で、適当な機械補助剤と共に、脂肪性または 非脂肪性基剤と共に混合することによって製造してもよい。基剤は、ハード、ソ フトまたは液状パラフィン、グリセロール、蜜蝋、金属石鹸のような炭化水素； 粘漿剤；アーモンド、コーン、落花生、ヒマシまたはオリーブ油のような天然起 源の油；羊毛脂またはその誘導体あるいはステアリン酸またはオレイン酸のよう な脂肪酸をプロピレングリコールのようなアルコールまたはマクロゲルと一緒に 含んでもよい。製剤は、アニオン性、カチオン性または非イオン性界面活性剤の ようないずれかの適当な界面活性剤、例えば、ソルビタンエステルまたはそのポ リオキシエチレン誘導体を混合していてもよい。天然ゴム、セルロース誘導体ま たは無機物質、例えば、珪素質シリカのような懸濁化剤およびラノリンのような 他の成分もまた、包含され得る。 本発明による滴剤は、滅菌水性または油性溶液もしくは懸濁液を含んでもよく 、活性成分を殺菌剤および／または殺真菌剤および／またはいずれか他の適当な 保存剤の適当な水溶液中に溶解することによって調製してもよく、好ましくは界 面活性剤を含む。次いで、得られた溶液を濾過によって浄化し、適当な容器に移 し、次いで、密封し、オートクレーブまたは９８−１００℃で半時間維持するこ とによって滅菌してもよい。別法では、溶液を濾過によって滅菌し、吸引技術に よって容器に移す。滴剤に含ませるのに適当な殺菌剤および殺真菌剤の例は、硝 酸フェニル水銀または酢酸フェニル水銀（０．００２％）、塩化ベンザルコニウ ム（０．０１％）および酢酸クロルヘキシジン（０．０１％）である。油性溶液 の調製に適当な溶媒は、グリセロール、希釈アルコールおよびプロピレングリコ ールを包含する。 経口投与のための各投与単位は、好ましくは、１〜２５０ｍｇ（非経口投与の 場合、好ましくは．０．１〜２５ｍｇ）の式（Ｉ）の化合物または遊離塩基とし て算出されたその医薬上許容される塩を含有する。 本発明の医薬上許容される化合物は、通常、一日の投与計画において対象に投 与されるであろう。成人患者の場合、例えば、１ｍｇ〜５００ｍｇ、好ましくは １ｍｇ〜２５０ｍｇの式（Ｉ）の化合物または遊離塩基として算出されたその医 薬上許容される塩の経口投与、あるいは０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは０ ．１ｍｇ〜２５ｍｇの式（Ｉ）の化合物または遊離塩基として算出されたその医 薬 上許容される塩の静脈内、皮下または筋内投与であってもよく、該化合物は一日 に１〜４回投与される。 投与形態ならびに有効投与量の選択は、とりわけ、治療の条件によって変化す るであろう。投与様式および投与量の選択は、当該分野の技術内である。 生物学的方法： 式（Ｉ）の化合物の活性を測定するために、種々の細胞アッセイを用いてイン ・ビトロでの活性を測定することができる。本明細書には、ＣｏＡ−ＩＴ酵素活 性に対するイン・ビトロアッセイを記載する。イン・ビボおよびエクス・ビボの 両方の細胞増殖および／またはアポトーシスを測定するためのいくつかのアッセ イもまた記載する。 イン・ビトロアッセイ アッセイ：ＣｏＡ−ＩＴ活性 下記は、ＣｏＡ−ＩＴ活性およびＣｏＡ−ＩＴ活性に対する化合物の影響を測 定するための方法である。アッセイは、ＣｏＡ−ＩＴ活性を含有する細胞物質を 安定なリゾリン脂質、例えば、１−アルキル−２−アシル−ＧＰＣと混合し、Ｃ ｏＡまたはＣｏＡ−脂肪酸の添加なしに生じるリン脂質産物、例えば、１−アル キル−２−アシル−ＧＰＣの生産を測定することに基づく。 細胞調製物 高レベルのＣｏＡ−ＩＴ活性を含有するいずれかの炎症性細胞、例えば、好中 球、マクロファージまたはＵ９３７細胞のような細胞系統を用いることができる 。Ｕ９３７細胞は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(American Type Culuture Collection）から入手し、１０％胎仔ウシ血清（Hyclone，Logan ，UT）で補足したＲＰＭＩ−１６４０培地（Gibco，Grand Island，New York） 中、３７℃で、５％ＣＯ₂中で生育させた。ジメチルスルホキシドのようないず れかの薬剤によって分化なしに（基底状態）細胞を生育させた。本明細書で用い る場合、「炎症性細胞」なる語は、好中球、マクロファージ、単球、リンパ球、 好酸 球、好塩基球およびマスト細胞を包含するが、それらに限定するものではない。 ミクロソーム調製物 ミクロソームは、標準的な技法を用いて調製した。この場合、細胞を２５０ｍ Ｍシュークロース、１０ｍＭトリス、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂、 ｐＨ７．４のバッファーで洗浄し、Ｎ₂キャビテーション（７５０ｐｓｉ、１０ 分）によって破壊した。破壊した細胞を１０００Ｘｇ、５分遠心分離した。得ら れた上清を２０，０００Ｘｇ、〜２０分遠心分離した。１００，０００Ｘｇ、６ ０分の遠心分離によって、ミクロソームを該上清から調製した。得られたペレッ トをアッセイバッファー（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｎａ₂ＫＰＯ₄、１ ｍＭ ＥＧＴＡ、ｐＨ７．４）で一回洗浄し、再び遠心分離し、アッセイバッフ ァー中にペレットを再懸濁し（４−２０ｍｇタンパク質／ｍｌ）、アッセイまで −８０℃で保管した。 ＣｏＡ−ＩＴ活性 ＣｏＡ−ＩＴ活性を１．５ｍｌ遠心管中で、全量１００μｌで測定した。ミク ロソームを所望のタンパク質濃度（６−２０μｇ／遠心管）までアッセイバッフ ァー中で希釈した。［３Ｈ］１−アルキル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホ スホコリン（ＧＰＣ）（〜０．１μＣｉ／遠心管）および０．２５ｍｇ／ｍｌ脂 肪酸欠乏ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Calbiochem，La Jolla，CA）を含有す るアッセイバッファー中１μＭの最終的な低温１−アルキル−２−リゾ−ＧＰＣ の添加によって、反応を開始した。およそ５０Ｃｉ／ミリモルの［３Ｈ］１−ア ルキル−２−リゾ−ＧＰＣをNEN-Dupont（Boston，Massachusetts）から入手し 、低温１−アルキル−２−リゾ−ＧＰＣをBiomol(PlymouthMeeting,Pennsylvani a）から入手した。［３Ｈ］１−アルキル−２−リゾ−ＧＰＣの添加前に、ミク ロソームを所望の薬剤で所望の時間（１０分）前処理した。３７℃で所望の時間 （１０分）、反応を行った。反応を止め、１００μｌのクロロホルム：メタノー ル（１：２、ｖ／ｖ）、次いで１００μｌのクロロホルムおよび１００μｌの１ ＭＫＣｌの添加によって脂質を抽出した。試料を攪拌し、微量遠 心機中、高速で２−３分間遠心分離した。クロロホルム抽出物質のアリコートを 、通常、クロロホルム／メタノール／酢酸／水（５０：２５：８：４、ｖ／ｖ） におけるＴＬＣによって分離し、放射能スキャニング（Bioscan）によって視覚 化し、生産物［３Ｈ］１−アルキル−２−アシル−ＧＰＣを削り、液体シンチレ ーション分光法によって定量した。該ＴＬＣシステムを用いて、１−アルキル− ２−リゾ−ＧＰＣおよび１−アルキル−２−アシル−ＧＰＣの合成標準物は、各 々、およそ０．２５および０．６５のＲｆ値でよく分離された。他の方法を用い て、生産物から基質を分離することができ、それらは、カラムクロマトグラフィ ー、アフィニティークロマトグラフィーおよび反応後誘導体化を包含するが、そ れらに限定するものではない タンパク質濃度は、BioRad（Richmond，California）から入手したタンパク質 アッセイ試薬を用いて測定した。 結果 種々の化合物を該アッセイにおいて試験して、その選択性および無能力を決定 して、平凡な非選択的インヒビターを検出した。インドメチシン、ナプロキセン 、６−（４’−フルオロフェニル）−５−（４−ピリジル）−２，３−ジヒドロ イミダゾ−［２，１−ｂ］チアゾールおよび６−（４’−フルオロフェニル）− ５−（４−ピリジル）２，３−ジヒドロイミダゾ−［２，１−ｂ］チアゾール− ジオキシドのような５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）およびシクロオキシゲナ ーゼ（ＣＯ）のインヒビターは、１００μＭまでの濃度でＣｏＡ−ＩＴ活性に対 して影響を及ぼさなかった。抗酸化物質ＢＨＴもまた、１００μＭまでの濃度で 影響を及ぼさない。リン脂質と複合体を形成し、ＰＬＡ₂活性を阻害する化合物 、例えば、キナクリンおよびアリストロキン酸は、５００μＭまでの濃度でＣｏ Ａ−ＩＴ活性に対して影響を及ぼさない。ＰＡＦ放出を阻害すると報告されてい る化合物であるドクサピンは、１００μＭまでの濃度でＣｏＡ−ＩＴを阻害しな かった。アラキドン酸代謝を変化させることによってロイコトリエン生産を減少 させることが報告されたジクロフェナクナトリウムは、５００μＭまでの濃度で ＣｏＡ−ＩＴ活性に対して影響を及ぼさなかった。これらの結果は、ＣｏＡ−Ｉ Ｔ活性についてのアッセイが感受性であり、選択的であることを示す。 図２は、式（Ｉ）の代表的化合物、実施例２４、（３Ｓ，４Ｒ）−４−（イソ ブテニルオキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オンを 用いるＣｏＡ−ＩＴ活性の時間依存性の阻害を示す。 上記のミクロソームＣｏＡ−ＩＴアッセイにおいて、時間依存性インヒビター としてＣｏＡ−ＩＴ活性を阻害した式（Ｉ）の他の代表的化合物は（一般に、１ ０分のプレインキュベーション時間で、ＩＣ₅₀が＜５０μＭ）： （３ＲＳ，４ＲＳ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミ ノ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｒ，４Ｒ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ） アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ） アゼチジン−２−オン、 （３Ｒ，４Ｒ）−４−（イソブチルチオ）−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｒ，４Ｒ）−４−（イソブチルスルホニル）−３−（トリフェニルメチル アミノ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−（イソブトキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ） アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−（プロポキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）ア ゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−（プロポキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）ア ゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−（ベンジルオキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−（ベンジルオキシ）−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−メトキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジ ン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−（イソブテニルオキシ）−３−（トリフェニルメチルア ミノ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−オクチルオキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）ア ゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−フェノキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチ ジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−フェノキシ−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチ ジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−３−［［（４−ヨードフェニル）ジフェニルメチル］アミノ ］−４−（イソブトキシ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−［［２−（ピリダ−３−イル）−１，３−ジチアン−２ −イル］メトキシ］−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン 、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−（プロパ−２−イニルオキシ）−３−（トリフェニルメ チルアミノ）アゼチジン−２−オン、 メチル４−［（３Ｓ，４Ｓ）−２−オキソ−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−４−イルオキシ］ブタ−２−イノエート、 メチル４−［（３Ｓ，４Ｒ）−２−オキソ−３−（トリフェニルメチルアミノ ）アゼチジン−４−イルオキシ］ブタ−２−イノエート、 （３Ｓ，４Ｒ）−４−［（２（５Ｈ）フラノン−４−イル）メトキシ］−３− （トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン、 （Ｓ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン、 （ＲＳ）−３−（トリフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｓ，４Ｓ）−４−［３−（メトキシカルボニル）プロポキシ］−３−（ト リフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン、 （３Ｒ，４Ｒ）−４−（メチルスルホニル）−３−（トリフェニルメチルアミ ノ）アゼチジン−２−オン である。以下の化合物は、高濃度μＭまたはより長時間の前処理時間のいずれか で活性が見られた。 （３Ｓ，４Ｓ）−４−［３−（メトキシカルボニル）プロポキシ］−３−（ト リフェニルメチルアミノ）アゼチジン−２−オン アポトーシスアッセイ： 材料：化合物 化合物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の貯蔵液（５−１００ｍＭ） として調製し、濃度範囲０．１−１％のＤＭＳＯを用いて最終濃度を提供するよ うＤＭＳＯ中に希釈した。 細胞の調製物 ＨＬ−６０細胞をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから入手し 、１０％胎仔ウシ血清を補足したＲＰＭＩ−１６４０培地中、３７℃、５％ＣＯ₂ 中で生育させた。細胞をＴフラスコ中に０．０３〜０．０８ｘ１０⁶細胞／ｍｌ で播種し、０．５〜０．６ｘ１０⁶細胞／ｍｌで実験に用いた。他の増殖性細胞 を用いることができる。さらに、エクス・ビボで使用するために、白血病細胞を 白血病患者から単離できる。 増殖およびアポトーシス 細胞の機能的状態を１以上の方法で測定した。第一に細胞生存率は、トリパン ブルー染色を排除できる細胞の能力によって評価した。 第二に、より感度の高い定量方法は、合成の指標として新たに形成されるＤＮ Ａへの［³Ｈ］チミジンの取り込みを用いて、ＤＮＡ合成を測定することであっ た。これらのアッセイにおいて、細胞を種々の濃度の化合物またはビヒクルで処 理し、種々の時間（１〜３日）、細胞培養基中に維持した。次いで、典型的な実 験において、細胞に［³Ｈ］チミジン（０．１−１μＣｉ）を加え、次いで、培 養６−４８時間後に取り出し、ＰＢＳで２回洗浄し、次いで、０．２Ｎ ＮａＯ Ｈで３０分間処理した後、１５％トリクロロ酢酸を添加して２時間処理した。各 ウェル由来の全試料は、真空下、ＧＦ／Ｃ Watmanガラスミクロフィルターによ って濾過し、５％トリクロロ酢酸で３回洗浄した。フィルターに結合したＤＮＡ への［³Ｈ］チミジンの取り込みを、液体シンチレーション分光法を用いて測定 した。 ＤＮＡ断片化の測定は、細胞死の量を決定するだけでなく、メカニズムの洞察 も提供する。細胞がネクロシスではなく、プログラム化された細胞死またはアポ トーシスを行う場合、細胞ＤＮＡは破壊されて、ゲル上で識別できるオリゴヌク レオソームフラグメントになる（Kerrら、Cancer 73:2013-2026，(1994)）。細 胞を、種々の濃度の化合物またはビヒクルで種々の時間（３−２４時間）処理し た。洗浄した細胞を２００μLの冷却した滅菌界面活性バッファー（１０ｍＭト リス−ＨＣｌ，ｐＨ７．５，１ｍＭＥ ＤＴＡ，０．２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１０ ０）中に再懸濁することによって溶菌し、氷上で３０分インキュベートした。細 胞タンパク質およびＲＮＡは、７５μｇ／ｍＬＲＮＡｓｅ Ａと一緒に３７℃で １時間、次いで、２００μｇ／ｍＬプロテイナーゼＫおよび０．５％ＳＤＳ（最 終濃度）で３７℃で１時間インキュベーションすることによって、酵素的に分解 した。ＤＮＡの内部標準は、細胞溶菌およびその回収の間に加えられ、細胞ＤＮ Ａフラグメントの効率のよい抽出の確認として用いられた。試料を等量の冷却バ ッファー飽和フェノールで２回、フェノール／クロロホルム／イソアミルアルコ ール（２５：２４：１，ｖ／ｖ）で１回、クロロホルムで１回抽出した。ＮａＣ ｌ（３００ｍＭ最終濃度）および冷エタノールを加え、溶液を攪拌し、一晩静置 させた。エタノールを除去し、試料およびＤＮＡ塩基対標体（Sigma）を１％ア ガロースゲル上にエチジウムブロミドを含有するＴＢＥバッファー（４５ｍＭト リス，ｐＨ８．０，４５ｍＭホウ酸，１ｍＭ ＥＤＴＡ）を用いて流した。ＤＮ ＡをＵＶ線（UVP Gel Documentation system）下で視覚化し、ＤＮＡフラグメン トのサイズを分子量標準と比較して記録した。 タンパク質分析 タンパク質濃度は、Bradford M.，Anal．Biochem．72:248-254，(1976)の方法 を用いて、Bio-Rad（Hercules，CA）から購入した試薬で測定した。 結果 「発明の背景」に記載のように、発明者らは、近年、ＣｏＡ−ＩＴインヒビタ ーがいくつかの新生細胞系統の増殖を遮断し、アポトーシスを誘発することを 明らかにした。下記のデータは、式Ｉの化合物が同じ効果を有することを示す。 例えば、図３は、式Ｉの化合物が培養されたＨＬ−６０細胞の細胞生存率におい て時間および投与量に依存する減少を引き起こすことを示す。５０μＭ濃度の化 合物１、実施例２４は、添加後２４および４８時間での細胞生存率において、各 々、７０％および９７％の減少を引き起こした。次の研究は、式Ｉの化合物が他 の新生細胞に対して同様の効果を有するかどうかを決定するために設定された。 ２つの他の新生細胞型を試験した。第一はＰ３８８ネズミ白血病細胞であった。 これらの細胞は、癌化学療法スクリーニング研究においてナショナル・キャンサ ー・インシティチュート（National Cancer Institute）によって、抗腫瘍活性 の鍵となる試験として用いられる。Ｐ３８８細胞において、発明者らは、細胞増 殖の測定として、ＤＮＡへのチミジンの取り込みを測定することによって、新た なＤＮＡの合成をモニターした。化合物１は、新たに形成されたＤＮＡへチミジ ンを取りこむこれらの細胞の能力において、著しい減少（５０μＭ、７２時間に て）を引き起こした（図４）。細胞増殖を遮断し、細胞数を減少させる主要なメ カニズムは、アポトーシスの誘発である。アポトーシスは、これらの研究におい て、ヌクレオソーム間ＤＮＡ断片化を試験することによって決定した。化合物１ は、化合物の添加後、ヌクレオソーム間ＤＮＡフラグメント（ＤＮＡラダー（la dder））の顕著な出現によって決定されるように、Ｐ３８８細胞のアポトーシス を誘発した（図５）。 最終的に、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者由来の細胞において、新たなＤＮ Ａ合成およびＤＮＡ断片化に影響を及ぼすその能力について、化合物１を試験し た。図６は、化合物１がＡＭＬ細胞へのチミジンの取り込みを妨害したことを示 す。同様な濃度および時点で、該化合物は、患者由来のＡＭＬ細胞におけるＤＮ Ａ「ラダー」形成を引き起こした（図７）。ひとまとめにしたこれらのデータは 、式Ｉの化合物が種々の新生細胞の細胞増殖を阻害し、アポトーシスを誘発する ことを示す。さらに、これらの研究は、これらの化合物の増殖性障害における化 学療法薬としての有用性を指摘する。 本明細書で使用される種々の略語および説明は以下のとおりである： ［³Ｈ］、放射性異性体である三重水素原子を含有する分子；Ａ２３１８７、細 胞内へのカルシウムの自由な侵入を可能にする化合物；ＡＡ、アラキドン酸、５ −８−１１−１４エイコサテトラエン酸；アラキドン酸塩、リン脂質内に含有さ れたアラキドン酸；遊離アラキドン酸、リン脂質内に含有されていないアラキド ン酸；［²Ｈ₈］アラキドン酸、安定異性体である二重水素原子８個で標識された アラキドン酸の形態；１−アルキル、１−Ｏ−アルキル；１−アルケニル、１−Ｏ −アルカ−１’−エニル；ＢＳＡ、ウシ血清アルブミン；ＣｏＡ、補酵素Ａ； ＣｏＡ−ＩＴ、ＣｏＡ−非依存性トランスアシラーゼ；ＣＯＸ、シクロオキシゲ ナーゼ；ＤＴＴ、ジチオトレイトール；ＥＧＴＡ、カルシウムキレート化剤であ る［エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］四酢酸；ＧＰＣ、ｓｎ−グリセ ロ−３−ホスホコリン；ＥＤＴＡ、金属イオンキレート化剤；ＧＰＥ、ｓｎ−グ リセロ−３−ホスホエタノールアミン；ＧＣ／ＭＳ、ガスクロマトグラフィーお よび質量分析計；５ＨＥＴＥ、５（Ｓ）−ヒドロキシエイコサ−６，８，１１， １４−テトラエン酸；１５ＨＥＴＥ、１５（Ｓ）−ヒドロキシエイコサ−５，８ ，１１，１３−テトラエン酸；ＨＬ−６０、アメリカン・タイプ・ティッシュー ・カルチャーが指定した単球に類似の細胞系統；５ＬＯ、５−リポキシゲナーゼ ；ＬＴＢ₄、ロイコトリエンＢ₄；ＬＴＣ₄、ロイコトリエンＣ₄；ＬＴＤ₄、ロイ コトリエンＤ₄；リゾＰＡＦ、１−アルキル−２−リゾ−ＧＰＣ、リゾ血小板活 性化因子；ＰＬＡ₂、ホスホリパーゼＡ₂；ＰＢＳ、リン酸緩衝化セーライン；Ｐ ＡＦ、血小板活性化因子、１−アルキル−２−アセチル−ＧＰＣ；ＰＬ、リン脂 質；ＰＣ、ホスファチジルコリン；ＰＥ、ホスファチジルエタノールアミン、Ｐ Ｉ、ホスファチジルイノシトール；ＰＭＮ、ポリ多形核好中細胞、好中球；ＰＳ 、ホスファチジルセリン；Ｒｆ、溶媒先端のフラクションとして化合物が移動す る距離；ＴＬＣ、薄層クロマトグラフィー；Ｕ９３７、アメリカン・タイプ・テ ィッシュー・カルチャーが指定した単球に類似の細胞系統。 限定するものではないが、特許および特許出願を包め、本明細書中に引用され た全ての出版物は、個々の刊行物が特別におよび個々に、出典明示によりまるで 完全に記載されたかのごとく本明細書の一部とされることが指示されたかのよう に、出典明示により本明細書の一部とされる。 上記の記載は、完全に、その好ましい具体例を包含する本発明を開示する。本 明細書に特別に開示された具体例の修飾および改善は、下記の請求の範囲の範囲 内である。さらに工夫することなく、上記の記載を用いて、当業者が本発明をそ の完全な範囲まで利用することができると確信する。したがって、本明細書の実 施例は、単なる例示として解釈され、いかなる手段においても、本発明の範囲を 限定するものではない。限定的な特徴または特典が請求される本発明の具体例は 、次のとおり定義される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 29/00 １０１ Ａ６１Ｐ 35/00 35/00 35/02 35/02 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 401/12 Ｃ０７Ｄ 205/095 205/08 Ｑ 401/12 Ｖ (72)発明者 ウィンクラー，ジェイムズ・デイビッド アメリカ合衆国19034ペンシルベニア州フ ォート・ワシントン、ハートランフト・ア ベニュー701番 (72)発明者 チルトン，フロイド・ハロルド・ザ・サー ド アメリカ合衆国27041ノースカロライナ州 パイロット・マウンテン、ペイターソン・ ファーム・ロード134番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． かかる治療を必要とする哺乳動物において細胞増殖を阻害または減少させ る方法であって、ヒトまたは哺乳動物に有効量のＣｏＡ非依存性トランスアシラ ーゼ（ＣｏＡ−ＩＴ）阻害量の式： ［式中、 ＹはＮＨであり； ＸはＯまたはＳ（Ｏ）_mであり； ｍは０または１もしくは２の整数であり； Ｒ₃は置換されていてもよいトリフェニルメチルであり； Ｒ₄は置換されていてもよいＣ_1-10アルキル、(ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_n−Ｃ≡Ｃ−Ｒ₅ま たは（ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_nＣ（Ｒ₁₀）＝Ｃ（Ｒ₇）₂であり； ｎは１〜４の整数であり； Ｒ₁₀およびＲ₂₀は独立して水素またはＣ_1-4アルキルであり； Ｒ₅は水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテ ロアリールアルキル、Ｃ（Ｏ）₂Ｒ₆またはＣ（Ｏ）Ｒ₆であり（ここに、アルキ ル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキ ル部分は置換されていてもよい）； Ｒ₆はＣ_1-10アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテ ロアリールアルキル、複素環式または複素環式アルキル部分であり（ここに、ア ルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキ ル、複素環式または複素環式アルキル部分は置換されていてもよい）； Ｒ₇は独立して水素、Ｃ_1-10アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロ アリール、ヘテロアリールアルキル、複素環式または複素環式アルキル部分であ る（ここに、アルキル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールア ルキル、複素環式または複素環式アルキル部分は置換されていてもよい）］ で示される化合物またはその医薬上許容される塩を投与することからなる方法。 ２． ＣｏＡ−ＩＴインヒビターが有効量のＥＴ−１８−Ｏ−ＣＨ₃またはアル キルリゾリン脂質類似体、あるいは他の増殖抑制または化学療法薬と共同投与さ れる請求項１記載の方法。 ３． 哺乳動物が乾癬、慢性関節リウマチまたはアテローム性動脈硬化症あるい は異常な細胞増殖が特徴の他の疾患に罹患している請求項１記載の方法。 ４． その治療を必要とする哺乳動物において、癌細胞成長を治療する方法であ って、該哺乳動物に有効量の式： ［式中、 ＹはＮＨであり； ＸはＯまたはＳ（Ｏ）_mであり； ｍは０または１もしくは２の整数であり； Ｒ₃は置換されていてもよいトリフェニルメチルであり； Ｒ₄は置換されていてもよいＣ_1-10アルキル、（ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_n−Ｃ≡Ｃ−Ｒ₅ または（ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_nＣ（Ｒ₁₀）＝Ｃ（Ｒ₇）₂であり； ｎは１〜４の整数であり； Ｒ₁₀およびＲ₂₀は独立して水素またはＣ_1-4アルキルであり； Ｒ₅は水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテ ロアリールアルキル、Ｃ（Ｏ）₂Ｒ₆またはＣ（０）Ｒ₆であり（ここに、アルキ ル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキ ル部分は置換されていてもよい）； Ｒ₆はＣ_1-10アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテ ロアリールアルキル、複素環式または複素環式アルキル部分であり（ここに、ア ルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキ ル、複素環式または複素環式アルキル部分は置換されていてもよい）； Ｒ₇は独立して水素、Ｃ_1-10アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロ アリール、ヘテロアリールアルキル、複素環式または複素環式アルキル部分であ る（ここに、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロ アリールアルキル、複素環式または複素環式アルキル部分は置換されていてもよ い）］ で示される化合物またはその医薬上許容される塩を投与することからなる方法。 ５． インヒビターが有効量のＥＴ−１８−Ｏ−ＣＨ₃またはアルキルリゾリン 脂質類似体、あるいは他の増殖抑制または化学療法薬と共同投与される請求項４ 記載の方法。 ６． 哺乳動物が白血病または他の癌に罹患している請求項４記載の方法。 ７． かかる治療を必要とする哺乳動物においてアポトーシスを誘発する方法で あって、ヒトまたは哺乳動物に有効なＣｏＡ非依存性トランスアシラーゼ（Ｃｏ Ａ−ＩＴ）阻害量の式： ［式中、 ＹはＮＨであり； ＸはＯまたはＳ（Ｏ）_mであり； ｍは０または１もしくは２の整数であり； Ｒ₃は置換されていてもよいトリフェニルメチルであり； Ｒ₄は置換されていてもよいＣ_1-10アルキル、（ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_n−Ｃ≡Ｃ−Ｒ₅ または（ＣＲ₁₀Ｒ₂₀）_nＣ（Ｒ₁₀）＝Ｃ（Ｒ₇）₂であり； ｎは１〜４の整数であり； Ｒ₁₀およびＲ₂₀は独立して水素またはＣ_1-4アルキルであり； Ｒ₅は水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテ ロアリールアルキル、Ｃ（Ｏ）₂Ｒ₆またはＣ（Ｏ）Ｒ₆であり（ここに、アルキ ル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキ ル部分は置換されていてもよい）； Ｒ₆はＣ_1-10アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテ ロアリールアルキル、複素環式または複素環式アルキル部分であり（ここに、ア ルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキ ル、複素環式または複素環式アルキル部分は置換されていてもよい）； Ｒ₇は独立して水素、Ｃ_1-10アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロ アリール、ヘテロアリールアルキル、複素環式または複素環式アルキル部分であ る（ここに、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロ アリールアルキル、複素環式または複素環式アルキル部分は置換されていてもよ い）］ で示される化合物またはその医薬上許容される塩を投与することからなる方法。