JP2001520863A - 無核トマト及びその生産方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、実質的に無核のトマトを包含する。本発明のトマトは、雄性母本として少なくとも１つの単為結果遺伝子を含むトマト株を雄性母本として少なくとも１つの単為結果遺伝子を含む雄性不捻性トマト株と交雑させることにより生産される。この交雑により得られるトマトは実質的に無核である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の技術分野） 本発明は、無核（ｓｅｅｄｌｅｓｓ）トマト及び該トマトの生産方法に関する
。

【０００２】 （発明の背景） 多くの作物は、特定の温度範囲及び特定の環境条件下で結実する。前記した温
度範囲及び環境条件を逸脱すると、十分量の稔性花粉が生ぜず、受粉及び受精が
困難なために通常結実しない。例えば、トマトは１５〜２１℃（夜温）及び３０
〜３５℃（日温）の狭い温度範囲で結実する。Ａ．Ｎ．Ｌｕｋｙａｎｅｎｋｏ，
“Ｐａｒｔｈｅｎｏｃａｒｐｙ ｉｎ Ｔｏｍａｔｏ” Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ
ｏｎ Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
，１４，ｐ．１６７−１７７（１９９１）。

【０００３】 単為結果は受精なしでの果実の生産である。高いまたは低い日温または夜温、
弱い光強度及び高い湿度のようなある環境条件が単為結果にとって好ましい。単
為結果は人工的に誘発され得るか、または自然に起こり得る。単為結果を誘発さ
せる場合、結実を助けるために各種の生長調節物質を使用することができる。例
えば、地中海沿岸で冬から春にかけて生育させるトマト（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃ ｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ ）において結実を助けるためにオーキシンが通常使
用されている。

【０００４】 天然または遺伝単為結果は絶対的または条件的であり得る。絶対的単為結果は
、遺伝的不稔により生じ、外部刺激なしに起こり、栄養繁殖方法を必要とする。
絶対的単為結果は、バナナやパイナップルのような果実で見られる。Ａ．Ｎ．Ｌ
ｕｋｙａｎｃｒｉｋｏ，“Ｐａｒｔｈｅｎｏｃａｒｐｙ ｉｎ Ｔｏｍａｔｏ
Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ ｏｎ Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅ
ｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１４，ｐ．１６７−１７７（１９９１）参照。条件的単
為結果は、受粉及び受精の過程が狭い環境限界に依存するトマト及び他の種で見
られる（前掲）。条件的単為結果では、環境刺激に応じて有核果または無核果が
生産される。例えば、ロシア国モスクワ近くのＧｒｉｂｏｖｓｋｊａ Ｅｘｐｅ
ｒｉｍｅｎｔａｌ Ｖｅｇｅｒａｂｌｅ Ｓｔａｔｉｏｎからの単為結果トマト
系統“Ｓｅｖｅｒｉａｎｉｎ”は、環境条件に依存して同等の重量を有する無核
果または有核果を生産するという優れた能力を有することが判明した。Ｓｐｌｉ
ｔｔｓｔｏｅｓｓｅｒ，Ｗａｌｔｅｒ Ｅ．，“Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｉｎ
ｆｌｕｅｎｃｅｓ Ｐａｒｔｈｅｎｏｃａｒｐｉｃ Ｆｒｕｉｔ Ｐｒｏｄｕｃ
ｔｉｏｎ ｉｎ Ｔｏｍａｔｏ”，Ｐｒｏｃ．Ｐｌａｎｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｒｅ
ｇａｌ．Ｓｏｃ．Ａｍ．（１９８８）。天然の単為結果系統は、子房中に大量の
生育促進物質を有し、その結果受粉の失敗または種子未成熟が果実の発育を妨げ
ないことも公知である。

【０００５】 世界中から単為結果を示す多くの栽培品種が研究されてきた。よって、多数の
単為結果ソースが公知である。単為結果が１つ以上の劣性遺伝子により遺伝的に
コントロールされることは公知である。単為結果をコントロールする多くの劣性
遺伝子が公知である。これらの遺伝子は、ｐａｔ、ｐａｔ−１、ｐａｔ−２、ｐ
ａｔ−３、ｐａｔ−４及びｐａｔ−５である。短葯（ｓｈａ）対立遺伝子が単為
結果果実を生産することも判明している。種子発生サプレッサー（ｓｄｓ）対立
遺伝子が無核のまたは非常に小さい核を微量含む通常の果実を生産することも判
明している。

【０００６】 単為結果果実の問題の１つは、品質が疑わしくなる傾向にあることである。例
えば、単為結果果実のサイズは通常の果実に比して小さくなる傾向にある。また
、単為結果果実の場合、酸度が低くなる傾向にあり、風味が悪くなる。更に、単
為結果果実（特に、トマト）は、低温条件下で生産したときに空洞のような各種
奇形を受けることが多い。

【０００７】 栽培トマト（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）は、米国及
び世界において最も重要な野菜の１つである。米国だけでも、毎年数百万トンの
トマトが生産されている。作物の商品としての重要性から、栽培種の改良に対す
る努力が常に必要とされている。

【０００８】 数種の単為結果無核トマトは公知である。例えば、トマト系統Ｆａｒｔｈｅｓ
ｔ Ｎｏｒｔｈ由来のトマトの３０％は無核である（Ｂａｇｇｅｔｔ，Ｊ．Ｒ．
ら，Ｈｏｒｔｓｃｉ．，１３（５）：５９８（１９７８年１０月）；Ｂａｇｇｅ
ｔｔ，Ｊ．Ｒ．ら，Ｈｏｒｔｓｃｉ．，１３（５）：５９９（１９７８年１０月
））。トマト系統Ｏｒｅｇｏｎ １１及びＧｏｌｄ Ｎｕｇｇｅｔ由来のトマト
の約５０〜７０％は無核である（Ｂａｇｇｅｔｔ，Ｊ．Ｒ．ら，Ｈｏｒｔｉｓｃ
ｉｅｎｃｅ．Ａｌｅｘａｎｄｒｉａ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏ
ｒ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１７（６）：９８４−９８
５（１９８２年１２月）；Ｂａｇｇｅｔｔ，Ｊ．Ｒ．ら，Ｈｏｒｔｉｓｃｉｅｎ
ｃｅ．Ａｌｅｘａｎｄｒｉａ，Ｖａ．：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆ
ｏｒ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０（５）：９５７−９
５８（１９８５年１０月））。更に、これらの無核トマトに関わる問題は、トマ
トを切ってみなければトマトが無核かを調べることができないことである。従っ
て、従来の無核トマトを得るための方法では、無核果の収率が低い。この方法は
、無核果を得るための実際的または商業的に有効な方法ではない。

【０００９】 実質的に無核のトマトは、現在市販されていない。前記トマトは必要とされて
いる。特に種を含む食品を食べることができない厳しい食事制限を受けている人
のために良好な品質を有する前記トマトが特に必要とされている。例えば、胃腸
管の破裂部分を修復するための手術から回復中の人は通常種を含む食品を食べる
ことができない。種が胃腸管の修復部分の縫合に捕捉されて治癒過程を遅らすよ
うになるという問題がある。胃腸管の壁が十分に治癒しないと、また破裂するこ
とがある。

【００１０】 更に、実質的に無核のトマトは、食品製造及び加工製品業界においても有用で
ある。例えば、完全に無核のトマトは、トマトソースやトマトパスタのような食
品をより効率的に且つ低コストで製造することができる。なぜならば、加工前に
種を取り除く必要がないからである。

【００１１】 従って、本発明の第１の目的は、良好な品質を示す実質的に無核の単為結果ト
マトを提供することである。本発明の第２の目的は、前記した無核トマトの生産
方法を提供することである。

【００１２】 （発明の要旨） 本発明は、実質的に無核のトマト（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅ ｎｔｕｍ ）を包含する。本発明のトマトは約１００％の無核である。本発明の無
核トマトは、雄性母本として少なくとも１つの単為結果遺伝子を含むトマト株（ Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ ）を雌性母本として少なくと
も１つの単為結果遺伝子を含む雄性不稔性トマト株（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ ）と交雑させることにより生産される。雄性及び雌性母
本系統は、ｐａｔ、ｐａｔ−１、ｐａｔ−２、ｐａｔ−３、ｐａｔ−４、ｐａｔ
−５、ｓｈａ及びｓｄｓのような単為結果遺伝子を含み得る。雄性及び雌性母本
系統中の単為結果遺伝子は、本発明の無核トマトを確実に生産するためには同一
でなければならない。

【００１３】 本発明の無核トマトは、母本系統の果実サイズを維持し、従って市場で許容さ
れ得るサイズの無核トマトを得るための手段が提供される。本発明の無核トマト
は、良好な風味（糖及び酸バランス）をも有し、空洞のような奇形を示さない。

【００１４】 （発明の詳細な説明） 本発明は、無核トマト（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）
及び無核トマトの生産方法を包含する。本明細書中、用語「無核トマト」は、受
精した成種を含まないトマトを指す。本発明のトマトは受精した成種を含まない
が、小さい白色の未受精子房を含んでいてもよい。こうした未受精子房は真種と
見做さない。

【００１５】 本発明の無核トマトは実質的に無核である。本明細書中、用語「実質的に無核
」は、トマトが少なくとも９０％の無核であることを意味する。好ましくは、本
発明の無核トマトは、好ましくは約９５〜約９９％の無核、最も好ましくは約１
００％の無核である。

【００１６】 本発明の無核トマトは、雄性母本として少なくとも１つの単為結果遺伝子を含
むトマト株（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）を雌性母本と
して少なくとも１つの単為結果遺伝子を含む雄性不稔性トマト株（Ｌｙｃｏｐｅ ｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ ）と交雑させることにより生産される。本
発明の無核トマトを生産するために交雑させる雄株及び雌株はそれぞれ単為結果
遺伝子に対してホモ接合性であり、同一の単為結果遺伝子を含んでいなければな
らない。

【００１７】 本発明の無核トマトを生産するために使用される雄性及び雌性母本系統は、少
なくとも１つの単為結果遺伝子を含んでいなければならない。母本系統は、ｐａ
ｔ、ｐａｔ−１、ｐａｔ−２、ｐａｔ−３、ｐａｔ−４、ｐａｔ−５、ｓｈａ、
ｓｄｓ等のような単為結果遺伝子を含み得る。実質的に無核のトマトを確実に生
産するために、ハイブリダイゼーションにおいて使用する雄性及び雌性母本系統
が同一の単為結果遺伝子を含むことが好ましい。例えば、雄性母本系統がｐａｔ
遺伝子を含むならば、雌性母本系統もｐａｔ遺伝子を含んでいなければならない
。

【００１８】 単為結果遺伝子を含む多くのトマト系統が、本発明の方法において雄性母本系
統として使用するために公に入手可能である。本発明において使用可能な単為結
果遺伝子を含むトマト系統の例を下表にリストする。

【００１９】

【表１】 表中の参考文献はすべて援用により本明細書に含まれるとする。

【００２０】 Ｏｒｅｇｏｎ−１１、Ｇｏｌｄ Ｎｕｇｇｅｔｔ、Ｏｒｅｇｏｎ Ｓｐｒｉｎ
ｇ、Ｏｒｅｇｏｎ Ｓｔａｒ、Ｏｒｅｇｏｎ Ｐｒｉｄｅ及びＳｉｌｅｔｚは、
Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １５７，（９７４２４）オレゴン州カッテージ・グローブに所
在のＴｅｒｒｉｔｏｒｉａｌ Ｓｅｅｄ Ｃｏ．，から市販されている。Ｇｏｌ
ｄ Ｎｕｇｇｅｔｔ及びＯｒｅｇｏｎ Ｓｐｒｉｎｇも、（０４９１０−９７３
１）メーン州アルビオン、Ｆｏｓｓ Ｈｉｌｌ Ｒｏａｄに所在のＪｏｈｎｎｙ
’ｓ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｓｅｅｄｓ及び（９７３２１）オレゴン州オールバニ
ー、Ｎｏｒｔｈ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｈｉｇｈｗａｙ １１９０に所在のＮｉｃｈ
ｏｌ’ｓ Ｇａｒｄｅｎ Ｎｕｒｓｅｒｙから入手可能である。Ｓａｎｔｉａｍ
及びＯｒｅｇｏｎ Ｓｔａｒもオレゴン州オールバニーに所在のＮｉｃｈｏｌ’
ｓ Ｇａｒｄｅｎ Ｎｕｒｓｅｒｙから市販されている。

【００２１】 更に、ホモ接合性トマト系統由来の単為結果遺伝子を戻し交雑により商品とし
て所望の特性を有するトマト系統に転移することもできる。単為結果遺伝子を含
むホモ接合性トマト系統をドナー母本として使用し、商品として所望の特性を有
するトマト系統を反復母本として使用する。反復母本をドナー母本と最初に交雑
させた後、得られたＦ_１後代を自家受粉させる。次いで、Ｆ_２後代を発育させ、
最大の所望園芸形質を併せ持つ無核果実を有する後代のみを選抜する。その後、
更に単為結果遺伝子を保持しながら所望の園芸形質を固定するために選抜物を自
殖するか、または満足なＦ_２分離系が回収されるまで反復母本との更なる戻し交
雑を使用する。このトマト系統は、本発明の交雑において雄性母本系統として使
用され得る。

【００２２】 本発明の無核トマトを生産するために使用される雌性母本系統は少なくとも１
つの単為結果遺伝子を含み、雄性不稔性をも示す。母本系統は細胞質または遺伝
的に雄性不稔性であり得る。本明細書中、株が花粉を生じないかまたは生存不能
な花粉しか生じないならば株は「雄性不稔性」である。雄性不稔性株では自家受
精が起きない。雄性不稔性株であれば、育種業者は株の花における他家受精をコ
ントロールすることによりハイブリッド種子をより経済的に作成することができ
る。雌性母本の自家受精を防ぐことにより他家受精をコントロールすることがで
きる。一旦雄性不稔性としたら、株を所望特性を有する遺伝子ドナー株とハイブ
リダイズすることができる。本発明において、雄性不稔性トマト雌株を、少なく
とも１つの同一単為結果遺伝子対を含む雄性稔性トマト雄株とハイブリダイズす
る。

【００２３】 雄性不稔性をもたらすための１つの方法は細胞質雄性不稔性を利用することで
ある。細胞質雄性不稔性（ＣＭＳ）をコントロールする遺伝因子は細胞質内、特
に一連のミトコンドリアＤＮＡ内にあると考えられている。株中にある２つの共
通する細胞質雄性不稔性は、Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓのＯｇｕｒａ雄
性不稔性細胞質及びＢｒａｓｓｉｃａｓ ｎａｐｕｓのポリマ雄性不稔性細胞質
である。他の細胞質雄性不稔性及び該不稔性を作成する方法も当業界で公知であ
り、本発明で使用するために入手可能である。例えば、欧州特許出願公開第３６
３ ８１９号明細書には、不活性化細胞質要素を含むトマト原形質を不活性化核
要素を含むＳｏｌａｎｕｍ原形質と融合することにより雄性不稔性トマト株に再
生され得る融合産物を得ることを含む雄性不稔性トマト株の生産方法を記載して
いる。

【００２４】 トマトの場合、細胞質雄性不稔性は交雑により伝搬され得る。雌性（卵）母本
は細胞質に寄与し、よってＣＭＳ雌性に交雑するとＣＭＳ子孫が生ずる。しかし
ながら、核遺伝子はヘテロ接合性である。従って、園芸的に望ましい核特性に対
してホモ接合性であるＣＭＳ育種系統を作成するためには６〜８代の戻し交雑が
必要である。

【００２５】 或いは、細胞質雄性不稔性トマト系統は、原形質融合により生産することがで
きる。例えば、商品として望ましい形質を有する株由来の原形質をＣＭＳ系統由
来の原形質と融合して、雄性不稔性株を生産してもよい。

【００２６】 一般的に、融合のための原形質は、一般的な酵素方法により得ることができる
。原形質の酵素的単離は、２ステップ（または逐次）または１ステップ方法を用
いて実施され得る。２ステップ方法の場合、株組織をまず、中層を分解すること
により細胞を分離するマクエロザイムまたはペクチナーゼを用いて処理する。次
いで、遊離した細胞を、原形質を遊離するセルラーゼを用いて処理する。通常、
細胞を異なる酵素に１ステップ方法の場合に比して短期間接触させる。１ステッ
プ方法では、組織をマクエロザイム及びセルラーゼを含めた酵素混合物に接触さ
せる。

【００２７】 原形質は負に帯電しているので、自然には融合しない。従って、原形質の融合
は誘発させなければならない。原形質の融合は、原形質を高ｐＨで高レベルのカ
ルシウムを用いて処理することによりまたはポリエレングリコールを用いること
により化学的に誘発し得る。また、原形質融合を誘発させるために、援用により
本明細書に含まれるとするＶｉｅｎｋｅｎら，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｌａｎｔ，５
３：６４（１９８１）に記載されている電場＋パルス方法のような電気的方法を
使用することもできる。

【００２８】 原形質が細胞質のみを与えるように、融合前にＣＭＳ系統由来の原形質のよう
な１つの原形質の核物質を除去するかまたは不活性化する。核物質の不活性化は
、γ線、ＵＶ線またはＸ線を照射することによりなされ得る。場合により、細胞
質中の遺伝物質を融合前に不活性化すると、原形質は核物質のみを与える。細胞
質物質の不活性化は、原形質をヨード酢酸またはローダミン６−Ｇのような化合
物に接触させることにより化学的になし得る。一般的に、前記化合物は複製を阻
止するかまたはミトコンドリアＤＮＡを破壊する。

【００２９】 一旦原形質を融合したら、原形質生長及びカルス形成のためにバランスのとれ
た栄養素補充物を含む適当な培地で原形質を培養する。培地は、微量要素、多量
要素、ビタミン、アミノ酸及び少量の炭水化物（例えば、グルコースのような各
種糖類）を含む。前記培地は、細胞分裂及び苗条再生を調節することができる植
物ホルモン（オーキシン及びサイトカイン）をも含む。次いで、細胞質雄性不稔
性株を再生させる。

【００３０】 本発明では、任意の雄性不稔性トマト株を使用することができる。例えば、援
用により本明細書に含まれるとする欧州特許出願公開第３６３ ８１９号明細書
に記載されている方法に従って生産される細胞質雄性不稔性トマト株を本発明で
使用することができる。

【００３１】 雌性母本系統として使用される雄性不稔性トマト株は、雄性母本系統中に含ま
れている単為結果遺伝子と同一の単為結果遺伝子を少なくとも１つ含んでいなけ
ればならない。雌性母本系統は、少なくとも１つの単為結果遺伝子に対してホモ
接合性のトマト系統を雄性不稔性トマト株を用いて戻り交雑することにより作成
することができる。この戻し交雑方法は、ＣＭＳ雌性系統に対して単為結果近交
系を直接戻し交雑することを含む雄性近交発生とは異なる。なぜならば、自家受
粉が不可能なので、園芸的に許容できる単為結果系統はＣＭＳ雌性系統の維持系
統として働くからである。ＣＭＳトマト系統が単為結果遺伝子に対してホモ接合
性であるまで戻り交雑を続ける。１００％の株が単為結果果実を結実したなら、
ホモ接合性が達成される。

【００３２】 本発明の無核トマトは、雄性母本を雌性母本とハイブリダイゼーションするこ
とにより得られる。生じた後代は約９０％の無核、好ましくは約９５％〜約９９
％の無核、最も好ましくは１００％の無核である。しかしながら、ミツバチのよ
うな花粉媒介者が雌性母本系統をこの雌性母本系統中の単為結果遺伝子と同一の
単為結果遺伝子を１つも含まない稔性系統からの花粉で受粉させても、後代は約
９０％無核でないことに注目すべきである。

【００３３】 本発明は、ハイブリッドトマト（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎ ｔｕｍ ）の生産方法にも関し、その方法は、雄性母本として少なくとも１つの単
為結果遺伝子を含むトマト株を雌性母本として少なくとも１つの単為結果遺伝子
を含む細胞質雄性不稔性トマト株と交雑させてトマトを生産するステップを含む
。ハイブリッド株は、雄性不稔性の果実（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕ ｌｅｎｔｕｍ ）を与える。最適の結実のために、ハイブリッド株を１３時間以上
の日長条件下で生育させなければならない。

【００３４】 一般的に、株において細胞質雄性不稔性を使用する場合、Ｆ_１子孫において十
分な稔性を確保するために稔性快復遺伝子は雄性花粉媒介業者から転移しなけれ
ばならない。より具体的には、稔性快復遺伝子の機能はハイブリッドにおいて稔
性を快復させることであり、これにより結実できる。雄性母本において単為結果
遺伝子を使用することにより、雄性母本由来の稔性快復遺伝子を必要としない細
胞質雄性不稔性トマトハイブリッドを得ることができる。単為結果遺伝子が子房
を広げ、よってたとえ果実が無核でも実を付けるので、稔性快復遺伝子を必要と
しない。

【００３５】 本発明の数種の無核トマトは、従来のトマトと同一の速度でのトマトの発育中
に大きくならない子房室を有する。これらのトマトの子房室は小さいままである
ので、隔膜融合心皮の表面積は従来のトマトに比して大きい。図１に、２つの異
なるトマトの半分の切断面白黒写真を示す。図１Ａは通常の有核の市販トマトの
半分であり、図１Ｂは本発明方法により生産した無核トマトの半分である。これ
らの写真から分かるように、図１Ｂに示すトマト半分は図１Ａのトマト半分に比
してより多くの果肉を含む。従って、本発明の無核トマトはしばしば従来のトマ
トに比してより多くの果肉を含む。

【００３６】 更に、本発明の無核トマトは、良好な糖−酸バランスを示し、そのために良好
な風味を有するトマトが提供される。また、本発明の無核トマトの糖含量は多く
の従来のトマトに比して多い。

【００３７】 本発明において糖レベルが高いことは、通常ゲル中に存在する遊離糖を同化す
る「シンク」として作用する種子がないという事実に関連していると考えられる
。本明細書中、用語「シンク」は、他の植物部分に比してより多くの光合成産物
（スクロース）を優先的に受容する植物の部分を指す。種子は植物の次の世代、
すなわち子孫を示すので植物上の優勢「シンク」を構成する。種子を有する株は
、特にストレス下で、発育中の種子に対するスクロースの優先的転流をコードす
る遺伝的メーキャップを含む。本発明の単為結果トマトの場合、不受精の小さい
胚珠は子房に転流した糖を吸収できず、よって消費者に喜ばれる遊離糖が残るよ
うである。

【００３８】 本発明の無核トマトは、空洞のような奇形を示さず、商品として許容され得る
サイズを有する。

【００３９】 最後に、本発明の無核トマトは、子房室ゲル面積が小さいので従来のトマトに
比してうまく薄く切ることができる。

【００４０】 本発明の非限定的実施例を示す。

【００４１】 実施例１ 無核トマト９６ ＦＨ ２４１の生産方法の説明 本実施例では、本発明方法による無核トマト９６ ＦＨ ２４１の発生を記載
する。

【００４２】 ９６ ＦＨ ２４１を以下のようにして発生させた。一般的な交雑ハイブリダ
イゼーション方法を用いて、雌性母本としての“ＣＭＳ ＶＦＮ８”と呼ばれる
細胞質雄性不稔性（ＣＭＳ）トマト株を“Ｄｅｔ．Ｐａｒｔｈ １”と呼ばれる
トマト株と交雑させた。ＣＭＳ ＶＦＮ８は、日本国東京に所在のトキタ種苗（
株）から入手した独占権をもつ細胞質雄性不稔性トマト株である。Ｖｅｒｔｉｃ ｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ ｒａｃｅ １、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐ ｏｒｕｍ ｒａｃｅ １及びネコブセンチュウＭｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｉｎｃ ｏｇｎｉｔａ に対して耐性を有するＰｅｔｏｓｅｅｄ近交系統であるハイブリッ
ド母本ＶＦＮ８の種子を、雄性不稔性トマト（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓ ｃｕｌｅｎｕｍ） “ＶＦＮ８”のミトコンドリアの代わりに細胞質雄性不稔性Ｓ ｏｌａｎｕｍ ａｃａｕｌｅ のミトコンドリアを使用したプロトプラスト融合実
験において核ドナー母本として使用した。ＶＦＮ８の株型は活力ある有限であり
、実サイズは超大型（２００〜２５０ｇ）で、良好な風味を有する。

【００４３】 Ｄｅｔ．Ｐａｒｔｈ １は、本発明の譲受人であるＳｅｍｉｎｉｓ Ｖｅｇｅ
ｔａｂｌｅ Ｓｅｅｄｓ． Ｉｎｃ．が独占権をもつ近交系である有限単為結果
トマト株である。Ｄｅｔ．Ｐａｒｔｈ １はｐａｔ−２単為結果遺伝子を含む。
Ｄｅｔ．Ｐａｒｔｈ １は超大型（２００〜２５０ｇ）の実を有する有限低木ト
マトである。この実は緑色の肩を有し、十分な酸度と高い糖含量のために優れた
風味を有する。

【００４４】 交雑により得られた種子を集め、植付けた。次いで、生じた株を雌性母本とし
てＣＭＳ ＶＦＮ８を用いて戻し交雑した。この戻し交雑から得た種子を集め、
植付けた。次いで、生じた株を雌性母本としてＣＭＳ ＶＦＮ８を用いて再び戻
し交雑した。更に３回の戻し交雑を、前回の戻し交雑から得た株及び雌性母本と
してＣＭＳ ＶＦＮ８を用いて実施した。全部で５回の戻し交雑を実施した後生
じた株を“ＣＭＳ ＶＦＮ８／Ｄｅｔ．Ｐａｒｔｈ １^＊４”と呼ぶ。この株は
ｐａｔ−２遺伝子に対してホモ接合性であった。このＣＭＳ ＶＦＮ８／Ｄｅｔ
．Ｐａｒｔｈ １^＊４株を、無核トマト９６ ＦＨ ２４１を発生させるための
交雑において雌性母本として使用した。ＣＭＳ ＶＦＮ８／Ｄｅｔ．Ｐａｒｔｈ
１^＊４株の種子は、１９９７年１０月１３日に（２０８５２）メリーランド州
ロックビル、Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ，１２３０１に所在のアメリカン・
タイプ・カルチャー・コレクション(the American Type Culture Collection)（
ＡＴＣＣ）に寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号は２０９３６１である。この寄託は、
寄託期間が寄託日から３０年間、寄託機関への最新の請求から５年間、またはこ
の出願の米国特許の満了期間のいずれか長い期間というブダペスト条約の要件に
従ってなされた。ＣＭＳ ＶＦＮ８／Ｄｅｔ．Ｐａｒｔｈ １^＊４株の種子は、
寄託機関で生存しなくなったなら補充される。

【００４５】 一般的な交雑ハイブリダイゼーション方法を用いて、本発明の譲受人であるＳ
ｅｍｉｎｉｓ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｓｅｅｄｓから市販されている“Ｄｅｌｉ
ｃｉｏｕｓ”と呼ばれる自然受粉トマト種を、雌性母本としてオレゴン州コーバ
リスに所在のＯｒｅｇｏｎ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙから入手した“
３３”と呼ばれる独占権をもつトマト株と交雑させた。３３は、単為結果遺伝子
ｐａｔ−２を含む。交雑により得られた種子を集め、植付けた。生じた株を雌性
母本としてＤｅｌｉｃｉｏｕｓを用いて戻し交雑した。生じた株を“Ｆ_６（‘Ｄ
ｅｌｉｃｉｏｕｓ’／３３^＊）”と呼ぶ。この株はｐａｔ−２遺伝子に対してホ
モ接合性である。Ｆ_６（‘Ｄｅｌｉｃｉｏｕｓ’／３３^＊）株を、無核トマト９
６ ＦＨ ２４１を発生させるための交雑において雄性母本として使用する。Ｆ _６ （‘Ｄｅｌｉｃｉｏｕｓ’／３３^＊）株の種子は、１９９７年１０月１３日に
（２０８５２）メリーランド州ロックビル、Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ，１
２３０１に所在のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託され、
ＡＴＣＣ寄託番号は２０９３６０である。この寄託は、寄託期間が寄託日から３
０年間、寄託機関への最新の請求から５年間、またはこの出願の米国特許の満了
期間のいずれか長い期間というブダペスト条約の要件に従ってなされた。Ｆ_６（
‘Ｄｅｌｉｃｉｏｕｓ’／３３^＊）植物の種子は、寄託機関で生存しなくなった
なら補充される。

【００４６】 慣用的な交雑ハイブリダイゼーション方法を用い、雌性母本としてのＣＭＳ
ＶＦＮ８／Ｄｅｔ．Ｐａｒｔｈ １^＊４を雄性母本としてのＦ_６（‘Ｄｅｌｉｃ
ｉｏｕｓ’／３３^＊）と交雑させた。生じた種子を集め、その後植付けた。得ら
れたトマト９６ ＦＨ ２４１は１００％無核であった。

【００４７】 実施例２ Ｓｈａｄｙ Ｌａｄｙ及び９６ ＦＨ ２４１の糖含量及び糖：酸比を測定し
た。Ｓｈａｄｙ Ｌａｄｙは、かなり緻密な有限つるを有し、通常大きな実サイ
ズ（１８０〜２２０ｇ）を有する市販種である。９６ ＦＨ ２４１は、本発明
方法により生産した無核ハイブリッドトマトである。前記トマトの各サンプルを
別々に、滑らかなコンシステンシーが得られるまで慣用のフードブレンダーを用
いて均質化した。４℃でＢｅｃｋｍａｎ ＧＳ−６Ｒ遠心分離機において１００
０×ｇで１５分間遠心することにより、各ピューレサンプルからトマト漿液を得
た。

【００４８】 漿液の糖含量は、モデルＲＦＭ９１屈折計（Ｂｅｌｌｉｎｇｈａｍ ＆ Ｓｔ
ａｎｌｅｙ）を用いて測定した。屈折計を水及び１０゜ブリックスグルコース溶
液を用いて較正した。糖含量は゜ブリックス（％糖（ｗｔ／ｗｔ））で表す。２
つのトマトの糖含量を下表に示す。

【００４９】 滴定可能な酸度（Ａ）は、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｄ６７自動滴定装置を用いて測定
した。ｐＨ８．２の終点及びＤ．１０００Ｎ水酸化ナトリウム（ＶＷＲ）滴定剤
を使用した。滴定可能な酸度はミリモルＨ^＋／１００ｇ−漿液で表す。糖：酸比
（Ｓ／Ａ）は、式：Ｓ／Ａ＝（゜ブリックス／１８０．１６）／（Ａ／１０００
）に従う滴定可能なＨ^＋含量に対する糖のモル比である。２つのトマトの糖：酸
比を下表に示す。

【００５０】

【表２】

【００５１】 上表の結果から、本発明の方法により生産された無核トマトの糖含量が一般的
な市販種のトマトに比して高いことが分かる。本発明のトマトの糖：酸比も一般
的なトマトに比して高い。

【００５２】 本発明について明瞭にし理解を助けるための例として幾分詳細に説明してきた
が、添付する請求の範囲によってのみ規定される本発明の範囲で修正及び変更が
可能なことは自明である。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ２つの異なるトマトを半分に切断した切断面の白黒写真である。図１Ａは通常
の有核トマトの半分のトマトであり、図１Ｂは本発明の無核トマトの半分のトマ
トである。

【手続補正書】

【提出日】平成１２年５月８日（２０００．５．８）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，Ｕ Ｇ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 実質的に無核のトマト（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃ ｕｌｅｎｔｕｍ ）。
2. 【請求項２】 約９５％の無核である請求の範囲第１項に記載のトマト。
3. 【請求項３】 約９９％の無核である請求の範囲第１項に記載のトマト。
4. 【請求項４】 約１００％の無核である請求の範囲第１項に記載のトマト。
5. 【請求項５】 実質的に無核のトマトの生産方法であって、雄性母本として
   少なくとも１つの単為結果遺伝子を含むトマト株を雌性母本として少なくとも１
   つの単為結果遺伝子を含む雄性不稔性トマト株と交雑させて実質的に無核のトマ
   トを生産するステップを含む前記方法。
6. 【請求項６】 単為結果遺伝子がｐａｔ、ｐａｔ−１、ｐａｔ−２、ｐａｔ
   −３、ｐａｔ−４、ｐａｔ−５、ｓｈａ及びｓｄｓからなる群から選択される請
   求の範囲第５項に記載の方法。
7. 【請求項７】 雄性母本中の単為結果遺伝子と雌性母本中の単為結果遺伝子
   が同一である請求の範囲第６項に記載の方法。
8. 【請求項８】 雌性母本が雄性不稔性である請求の範囲第５項に記載の方法
   。
9. 【請求項９】 雌性母本が細胞質雄性不稔性である請求の範囲第８項に記載
   の方法。
10. 【請求項１０】 雌性母本が遺伝的雄性不稔性である請求の範囲第８項に記
    載の方法。
11. 【請求項１１】 生産されるトマトが約９５％の無核である請求の範囲第５
    項に記載の方法。
12. 【請求項１２】 生産されるトマトが約９９％の無核である請求の範囲第５
    項に記載の方法。
13. 【請求項１３】 生産されるトマトが約１００％の無核である請求の範囲第
    ５項に記載の方法。
14. 【請求項１４】 請求の範囲第５項に記載の方法により生産される実質的に
    無核のトマト。
15. 【請求項１５】 ハイブリッドトマトの生産方法であって、雄性母本として
    少なくとも１つの単為結果遺伝子を含むトマト株を雌性母本として少なくとも１
    つの単為結果遺伝子を含む細胞質雄性不稔性トマト株と交雑させてハイブリッド
    トマトを生産するステップを含む前記方法。
16. 【請求項１６】 ハイブリッドトマトが細胞質雄性不稔性である請求の範囲
    第１５項に記載の方法。
17. 【請求項１７】 単為結果遺伝子がｐａｔ、ｐａｔ−１、ｐａｔ−２、ｐａ
    ｔ−３、ｐａｔ−４、ｐａｔ−５、ｓｈａ及びｓｄｓからなる群から選択される
    請求の範囲第１５項に記載の方法。
18. 【請求項１８】 雄性母本中の単為結果遺伝子と雌性母本中の単為結果遺伝
    子が同一である請求の範囲第１５項に記載の方法。