【発明の詳細な説明】
Ｎ−(アリール／ヘテロアリール)アミノ酸誘導体、その医薬組成物
および該化合物を用いたβ−アミロイドペプチドの放出
および／またはその合成を阻害する方法
背景技術 発明の技術分野
本発明は、β−アミロイドペプチドの放出および／またはその合成を阻害し、
アルツハイマー病の治療に有用な化合物、並びに該化合物からなる医薬組成物に
関するものであり、併せてβ−アミロイドペプチドの放出を阻害する方法に関す
るものである。引例
以下の刊行物、特許および特許出願を上付き番号にて本出願中に引用する：
1 グレナー(Glenner)らによる、“アルツハイマー病：新規な脳血管のアミロ
イドタンパク質の精製および特徴に関する初期の報告（Alzheimer's Disease:In
itial Report for the Purification and Characterization of a Novel Cerebr
ovascular Amyloid Protein”、Biochem．Biophys．Res．Commun.、120：885−8
90（1984）。
2 グレナー(Glenner)らによる、“アルツハイマー病に対するポリペプチドマ
ーカーおよびその診断への使用（Polypeptide Marker for Alzheimer's Disease
and its Use for Diagnosis）”、米国特許第4,666,829号（1987年5月19日発行
）。
3 セルコー(Selkoe)による、“アルツハイマー病の分子病理学（The Molecul
ar Pathology of Alzheimer's Disease）”、Neuron、6：487−498（1991）。
4 ゴーテ(Goate)らによる、“家族性アルツハイマー病を持つアミロイド前駆
体タンパク質遺伝子中のミスセシス突然変異の分離（Segregation of a
Missense Mutation in the Amyloid Precursor Prote in Gene with Familial A
lzheimer's Disease）”、Nature、349：704−706（1990）。
5 カルティエル（Chartier）−ハーラン（Harlan）らによる、“β−アミロ
イド前駆体タンパク質遺伝子のコドン717での突然変異によって起こる早発型ア
ルツハイマー病（Early−Onset Alzheimer's Disease Caused by Mutations at
Codon 717 of the β-Amyloid Precursor Proteing Gene）”、Nature、353：84
4−846（1989）。
6 ミューレル（Murrell）らによる、“遺伝子性アルツハイマー病に関連する
アミロイド前駆体タンパク質中の突然変異（A Mutation in the Amyloid Precur
sor Protein Associated with Hereditary Alzheimer's Disease）”、Science
、254：97−99（1991）。
7 ミュラン（Mullan）らによる、“β−アミロイドのＮ−末端位でのＡＰＰ
遺伝子中の予想可能なアルツハイマー病に対する病原性突然変異（A Pathogenic
Mutation for Probable Alzheimer's Disease in the APP Gene at the N-Term
inus of a β−Amyloid）”、Nature Genet.、1：345−347（1992）。
8 シェンク（Schenk）らによる、“溶解性β−アミロイドペプチドの検出用
方法および組成物（Methods and Compositions for the Detection of Soluble
β-Amyloid Peptide）”、国際特許出願 WO 94/10569(1994年5月11日公開)。9 セルコー（Selkoe）による、“アミロイドタンパク質とアルツハイマー病
（Amyloid Protein and Alzheimer's Disease）”、Scientific American、p.2-
8(1911年11月)。
10 ヤーテ（Yates）らによる、“Ｎ,Ｎ−ジ置換アミノ酸除草剤（N,N-Disubs
tituted Amino Acid Herbicides）”、米国特許第3,598,859号(1971年8月10日発
行)。11 シトロン（Citron）らによる、“家族性アルツハイマー病のβ−アミロイ
ド前駆体タンパク質の突然変異はβ−タンパク質産生を増加する（Mutation of
the β-Amyloid Precursor Protein in Familial Alzheimer's Disease Increas
es β-Protein Production）”、Nature 360：672−674（1992）。12 ハンセン（Hansen）らによる、“細胞成長／細胞死を測定するための精密
かつ迅速な染色方法の再試験および更なる発展（Reexamination and Further De
velopment of a Precise and Rapid Dye Method for Measuring Cell Growth/Ce
ll Kill）”、J．Immun．Meth．119：203−210（1989）。
各刊行物、特許または特許出願が特定して、かつ個別にそっくりそのまま引例
として盛り込むよう指示されているならば、上記刊行物、特許および特許出願全
てを、同部分についてそっくりそのまま本明細書中に引例として盛り込む。技術水準
アルツハイマー病（ＡＤ）は、臨床的には、記憶、認知、推理、判断、および
感情の安定性の進行性喪失を起こし、徐々に深い痴呆をもたらし、究極的には死
に至ることを特徴とする退行性の脳障害である。ＡＤは年取ったヒトにおける進
行性精神衰弱（痴呆）の非常に一般的な原因であり、米国における四番目に大き
な、一般的な医学的死因であると考えられている。ＡＤは世界中の人種および人
種的グループにおいて観察され、現在および将来の主要な公衆衛生上の問題であ
る。該病気は、米国だけでも約二百万から三百万人に影響を及ぼしていると推測
されている。ＡＤは現在、不治である。ＡＤを効果的に予防またはその症状およ
び経過を転換する治療がないことは広く知られている。
ＡＤを有する患者の脳は、老人（もしくはアミロイド）斑、アミロイド血管症
（血管中のアミロイド沈積）および神経原繊維のもつれと呼ばれる特徴的な病変
を示す。これらの病変の多数、特にアミロイド斑および神経原繊維のもつれは、
ＡＤ患者の記憶および認識の機能にとって重要なヒトの脳のいくつかの領域にお
いて一般にみられる。より制限された解剖学的分布においてこれらの病変の少数
はまた、臨床のＡＤを有しない大多数の年老いたヒトの脳中に見られる。アミロ
イド斑およびアミロイド血管症はまた、トリソミ−２１（ダウン症）およびダッ
チ型のアミロイドーシスでの遺伝的脳出血（Hereditary Cerebral Hemorrhage w
ith Amyloidosis of the Dutch Type:ＨＣＨＷＡ−Ｄ）を有する個体の脳を特徴
付けるものである。現在、ＡＤの最終的な診断は、通常、該病気で死んだ患者の
脳組織における上記の病変、あるいは稀に浸潤性の脳神経外科処置の間に取り出
した脳組織の小さなバイオプシー試料を観察することを要する。
ＡＤおよび上記に述べた他の疾患の特徴である、アミロイド斑および血管のア
ミロイド沈積（アミロイド血管症）の主要な化学的構成物は、β−アミロイドペ
プチド（βＡＰ）あるいは時にはＡβ、ＡβＰもしくはβ／Ａ４を作る約３９〜
４３アミノ酸のおよそ４.２キロダルトン（ｋＤ）のタンパク質である。グレナ
ーら1によって、β−アミロイドペプチドは最初に精製され、かつ一部のアミノ
酸配列が提示された。単離方法および最初の２８アミノ酸に対する配列データは
米国特許第4,666,829号2中に記載されている。
分子生物学およびタンパク化学分析により、β−アミロイドペプチドが非常に
大きな前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の小さなフラグメントであり、通常ヒトを含
めた様々な動物の、多くの組織中の細胞で産生されることが示された。ＡＰＰを
コード化した遺伝子の構造の知識は、β−アミロイドペプチドがプロテアーゼ酵
素によってＡＰＰから切断されるペプチドフラグメントとして生じることを示す
ものである。正確な生化学機構、すなわちβ−アミロイドペプチドフラグメント
がＡＰＰから切断され続いてアミロイド斑として脳組織および脳や脳脊髄膜の血
管壁中に沈積する機構については、よく知られていない。
いくつかの証拠から、β−アミロイドペプチドの進行性脳沈積がＡＤの病理学
上重要な役割を果たしており、また数年間もしくは数１０年間認識の症候が先行
することが示唆されている。例えば、セルコー3を参照。最も重要な証拠によれ
ば、ＡＰＰの７７０−アミノ酸イソ体(isoform)の７１７アミノ酸でのミスセン
スＤＮＡ変異は冒されたメンバー中にはみられるが、遺伝学的に決定された（家
族性）型のＡＤを有するいくつかの家族の冒されていないメンバー中にはみられ
ないことが発見されており（ゴーテらによる4、カルティエル ハーラン（Chart
ier Harlan）らによる5、およびムーレル（Murrell）らによる6）、またスエー
デン変種と称されている。スエーデン人の家族中でみられる、リシン595−メチ
オニン596のアスパラギン595−ロイシン596へ変化する二重変異が、１９９２年
に報告されている（ミューレンら7）。遺伝的な結合分析により、これらの変異
がＡＰＰ遺伝子中の特定の他の変異と同様、該家族の冒されたメンバー中のＡＤ
の特定の分子が原因であることが示唆された。加えて、ＡＰＰの７７０アミノ酸
イソ体のアミノ酸６９３での変異がβ‐アミロイドペプチド沈積病、
ＨＣＨＷＡ−Ｄの原因として同定され、またアミノ酸６９２でのアラニンからグ
リシンへの変化は、何人かの患者ではＡＤと他ではＨＣＨＷＡ−Ｄとみなされる
表現型を引き起こすように思われる。ＡＤを遺伝学に基づいて捉えた場合、ＡＰ
Ｐの該および他の変異の発見により、ＡＰＰの変化および続くβ‐アミロイドペ
プチドフラグメントの沈積がＡＤを引き起こし得ることが証明される。
ＡＤおよび他のβ‐アミロイドペプチド関連疾患の根底にある機構を理解しよ
うとする進展が成されているにも関わらず、該病気の治療方法や治療用組成物の
開発が必要である。理想的には、治療方法としては、β‐アミロイドペプチドの
放出および／またはその合成を阻害することの可能な薬物によって行なうことが
好都合であろう。
本発明の概要
本発明は、β−アミロイドペプチドの放出および／またはその合成を阻害する
一群の化合物の発見に関するものであり、それゆえにＡＤの傾向がある患者にお
いてＡＤの予防および／または更なる容態の悪化を抑制するためにＡＤを有する
患者の治療において有用である。記載した性質を有する一群の化合物は式Ｉ：
［ここで、Ｒ1は、
（ａ）フェニル、
（ｂ）式IIの置換フェニル基：
（式中、Ｒcはアシル、アルキル、アルコキシ、アルキルアルコキシ、アジド
、
シアノ、ハロ、水素、ニトロ、トリハロメチル、チオアルコキシからなる群から
選ばれ、およびＲbおよびＲcは融合してフェニル環を有するヘテロアリールもし
くはヘテロサイクリック環を形成し、
ＲbおよびＲb'は、水素、ハロ、ニトロ、シアノ、トリハロメチル、アルコキ
シおよびチオアルコキシからなる群から独立して選ばれ（但し、Ｒcが水素の場
合、ＲbおよびＲb'共に水素であるか、もしくは共に水素以外の置換基である）
）、
（ｃ）２−ナフチル、
（ｄ）アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、チオ
アルコキシ、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選ばれる１〜５個の
置換基で、４、５、６、７および／または８位が置換された２−ナフチル、
（ｅ）ヘテロアリール、および
（ｆ）アルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、シアノ、ハロ、ニ
トロ、ヘテロアリール、チオアルコキシおよびチオアリールオキシからなる群か
ら選ばれる１〜３個の置換基を含有する置換ヘテロアリール（但し、該置換基は
ヘテロアリールと−ＮＨ基との結合に対してオルト位（隣接）でない）
からなる群から選ばれ；
Ｒ2は水素、炭素数１〜４個のアルキル、炭素数１〜４個のアルキルアルコキ
シ、炭素数１〜４個のアルキルチオアルコキシ、アリール、ヘテロアリール、置
換アリールおよび置換ヘテロアリール（但し、該置換基はアリールもしくはヘテ
ロアリールの原子と炭素原子との結合に対してオルト位（隣接）でない）からな
る群から選ばれ；
Ｒ3は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、シ
クロアルケニル、ヘテロアリール、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキ
ニルおよびヘテロサイクリックからなる群から選ばれ；
Ｘは−Ｃ(Ｏ)Ｙ（ここで、Ｙは
（ａ）アルキル、
（ｂ）置換アルキル（但し、該置換アルキル上の置換基としてはα−ハロアルキ
ル、α−ジアゾアルキルもしくはα−ＯＣ(Ｏ)アルキル基を含有しない）
（ｃ）アルコキシもしくはチオアルコキシ、
（ｄ）置換アルコキシもしくは置換チオアルコキシ、
（ｅ）ヒドロキシ、
（ｆ）アリール、
（ｇ）ヘテロアリール、
（ｈ）ヘテロサイクリック
（ｉ）−ＮＲ'Ｒ''（ここで、Ｒ'およびＲ''は水素、アルキル、置換アルキル、
シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクリックからなる群か
ら独立して選ばれ、およびＲ'およびＲ''は合わさって２〜８個の炭素原子を有
し、さらに酸素、硫黄および窒素からなる群から選ばれた１〜２個のヘテロ原子
を含んでいてもよい環状基を形成し、またその環状基は１個以上のアルキル基も
しくはアルコキシ基で置換されていてもよい）および
Ｒ3が少なくとも３個の炭素原子を含む場合、Ｘは−ＣＲ4Ｒ4Ｙ'（ここで各Ｒ4
は水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロ
サイクリックからなる群から独立して選ばれ、またＹ'はヒドロキシル、アミノ
、チオール、−ＯＣ(Ｏ)Ｒ5、−ＳＳＲ5、−ＳＳＣ(Ｏ)Ｒ5（式中、Ｒ5はアルキ
ル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロサ
イクリックからなる群から選ばれる）からなる群から選ばれる）であり、
但し、Ｒ1が３,４−ジクロロフェニルであって、Ｒ2がメチルで、Ｒ3がＤ−フ
ェニルアラニン由来のベンジルである場合、Ｘは−Ｃ(Ｏ)ＯＣＨ3でない］
で示される化合物で定義されるものである。
したがって、該方法の一態様としては、本発明は、該細胞に上記式Ｉの化合物
もしくは化合物の混合物を、細胞内でのβ−アミロイドペプチドの放出および／
または合成を阻害するのに有効な量だけ投与することからなる、細胞中でのβ‐
アミロイドペプチド放出および／または合成を阻害する方法に関する。
β−アミロイドペプチドのインビボでの発生はＡＤの病原と関連8,9している
ので、式Ｉの化合物はまた、ＡＤを予防的におよび／または治療学的に処理する
ための医薬組成物に使用可能である。したがって、該方法の別の態様としては、
本発明は、ＡＤが発展する危険のある患者に医薬的に不活性な担体および上記式
Ｉの化合物もしくはその混合物の有効量からなる医薬組成物を投与することから
なる、該患者のＡＤの開始を予防する方法に関する。
該方法のさらに別の態様としては、本発明は患者の状態の更なる低下を抑制す
るためにＡＤ患者に医薬的に不活性な担体および上記式Ｉの化合物もしくはその
混合物の有効量からなる医薬組成物を投与することからなる、ＡＤ患者の治療方
法に関する。
上記式Ｉにおいて、Ｒ1の置換フェニルは４−置換、３,５−ジ置換もしくは３
,４−ジ置換フェニル基であることが好ましい（ここで、３および／または５位
の置換基は上記Ｒb、Ｒb'で定義されるもの、４位の置換基は上記Ｒcで定義され
るものである）。特に好ましい３,５−ジ置換フェニルとは例えば、３,５−ジク
ロロフェニル、３,５−ジフルオロフェニル、３,５−ジ（トリフルオロメチル）
フェニル、３,５−ジメトキシフェニルなどが挙げられる。特に好ましい３,４−
ジ置換フェニルとしては、例えば３,４−ジクロロフェニル、３,４−ジフルオロ
フェニル、３−（トリフルオロメチル）−４−クロロフェニル、３−クロロ−４
−シアノフェニル、３−クロロ−４−ヨードフェニル、３,４−メチレンジオキ
シフェニル、３,４−エチレンジオキシフェニルなどが挙げられる。特に好まし
い４−置換フェニルとしては、例えば４−アジドフェニル、４−ブロモフェニル
、４−クロロフェニル、４−シアノフェニル、４−エチルフェニル、４−フルオ
ロフェニル、４−ヨードフェニル、４−(フェニルカルボニル)フェニル、４−(
１−エトキシ)エチルフェニルなどが挙げられる。
他の好ましいＲ1置換基としては、例えば２−ナフチル、キノリン−３−イル
、２−メチルキノリン−６−イル、ベンゾチアゾール−６−イル、ベンゾチアゾ
ール−２−イル、５−インドリル、フェニル、２−ナフチルなどが挙げられる。
好ましいＲ2は、炭素数１〜４個のアルキル、炭素数１〜４個のアルキルアル
コキシ、炭素数１〜４個のアルキルチオアルコキシ、アリール、ヘテロアリール
、置換アリールおよび置換ヘテロアリール（但し、該置換基はアリールもしくは
ヘテロアリールの原子と炭素原子との結合に対してオルト位（隣接）でない）か
らなる群から選ばれる。特に好ましいＲ2置換基としては例えばメチル、エチル
、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、−ＣＨ2ＣＨ2Ｓ
ＣＨ3、フェニルなどが挙げられる。
好ましいＲ3置換基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ
−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルなどのアルキル基；α−ヒドロキシエ
チル、−ＣＨ2−シクロヘキシル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、３−ヨ
ード−４−ヒドロキシベンジル、３,５−ジヨード−４−ヒドロキシベンジル、
−ＣＨ2−インドール−３−イル、フェニル、−(ＣＨ2)4−ＮＨ−ＢＯＣ、−(Ｃ
Ｈ2)4−ＮＨ2、−ＣＨ2−(１−Ｎ−ベンジルイミダゾール−４−イル)、−ＣＨ2
−イミダゾール−４−イル、−ＣＨ2ＣＨ2ＳＣＨ3、−(ＣＨ2)4ＮＨＣ(Ｏ)(ＣＨ2
)4ＣＨ3、−(ＣＨ2)yＮＨＣ(Ｏ)(Ｏ)Ｒ5(式中、ｙは１〜２であり、およびＲ5
は水素、メチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニルなどである）などの置換アルキル
が挙げられる。
好ましいＸ置換基としては−Ｃ(Ｏ)Ｙ基（ここで、Ｙはメトキシ、エトキシ、
ｎ−プロポキシ、イソ−プロピキシ、ｎ−ブトキシ、イソ−ブトキシ、ｔｅｒｔ
−ブトキシ、アミノ(−ＮＨ2)、Ｎ−(イソ−ブチル)アミノ、Ｎ−メチルアミノ
、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ−ベンジルアミノなどである）、並びに−ＣＨ2Ｏ
Ｈなどが挙げられる。
本発明はまた、医薬的に不活性な担体および上記式Ｉの化合物からなる新規な
医薬組成物を提供するものである。
本発明の方法および組成物における使用に特に好ましい化合物（Ｒ2およびＲ3
基の立体化学はＬ−アミノ酸由来であることが好ましい）は、例えば：
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]バリンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]バリンＮ−イソ−ブチルアミ
ド、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]トレオニンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]バリンエチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]バリンｔｅｒｔ−ブチルエス
テル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]バリンアミド、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニン−Ｎ−(１−ヒドロキシ−３−
メチル−２−ブチル)アミド、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]バリンＮ,Ｎ−ジメチルアミド
、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]バリンＮ−メチルアミド、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]アラニンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]ロイシンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]フェニルアラニンメチルエス
テル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]イソロイシンメチルエステル
、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノペンタン酸メチ
ルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサン酸メチ
ルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]トリプトファンメチルエステ
ル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]アスパラギン酸α−メチルエ
ステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]アスパラギン酸β−(ｔｅｒｔ
−ブチルエステル)α−メチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−Ｎ−ＢＯＣ−リシンメチル
エステル、
Ｎ−[Ｎ−(ベンゾチアゾール−６−イル)アラニル]−２−アミノヘキサン酸メ
チルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]リシンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]チロシンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)アラニル]アラニンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノペンタン酸メチ
ルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)アラニル]フェニルアラニンメチルエス
テル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]アスパラギン酸β−(メチルエ
ステル)α−メチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−１−ベンジルヒスチジンメ
チルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]グルタミン酸γ−(ｔｅｒｔ−
ブチルエステル)α−メチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]ロイシンアミド、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]グルタミン酸α−メチルエス
テル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−(３,５−ジヨード)チロシン
メチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−(３−ヨード)チロシンメチ
ルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)グリシル]−２−アミノペンタン酸メチ
ルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−Ｎε−(ヘキサノイル)リシ
ンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]フェニルアラニンアミド、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサン−(Ｎ−
メチル)アミド、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−β−シクロヘキシルアラニ
ンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサンアミド
、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサン−(Ｎ,
Ｎ−ジメチル)アミド、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]メチオニンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサン−(Ｎ,
Ｎ−ジメチル)アミド、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサンアミド
、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサン−(Ｎ−
メチル)アミド、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]ヒスチジンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(キノリン−３−イル)アラニル]−２−アミノヘキサン酸メチルエス
テル、
Ｎ−[Ｎ−(ベンゾチアゾール−２−イル)アラニル]−２−アミノヘキサン酸メ
チルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジフルオロフェニル)アラニル]アラニンメチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジフルオロフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサン酸メ
チルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサンアミド
、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサン−(Ｎ−
ベンジル)アミド、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノ−２−フェニル
エタノール、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)フェニルグリシニル]アラニンメチルエ
ステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサノール、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)アラニル]−２−アミノ−２−フェニル
エタノール、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)アラニル]フェニルグリシンｔｅｒｔ−
ブチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジ−(トリフルオロメチル)フェニル)アラニル]フェニルグ
リシンｔｅｒｔ−ブチルエステル、
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジメトキシフェニル)アラニル]−２−アミノヘキサン酸メ
チルエステル、
およびその医薬的に許容し得る塩が挙げられる。
さらに本発明は、式III：
［ここで、Ｒ1は、
（ａ）フェニル、
（ｂ）式IIの置換フェニル基：
（式中、Ｒcはアシル、アルキル、アルコキシ、アルキルアルコキシ、アジド
、シアノ、ハロ、水素、ニトロ、トリハロメチル、チオアルコキシからなる群か
ら選ばれ、およびＲbおよびＲcは融合してフェニル環を有するヘテロアリールも
しくはヘテロサイクリック環を形成し、
ＲbおよびＲb'は、水素、ハロ、ニトロ、シアノ、トリハロメチル、アルコキ
シおよびチオアルコキシからなる群から独立して選ばれ（但し、Ｒcが水素の場
合、ＲbおよびＲb'共に水素であるか、もしくは共に水素以外の置換基である）
）、
（ｃ）２−ナフチル、
（ｄ）アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、チオ
アルコキシ、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選ばれる１〜５個の
置換基で４、５、６、７および／または８位が置換された２−ナフチル、
（ｅ）ヘテロアリール、および
（ｆ）アルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、シアノ、ハロ、ニ
トロ、ヘテロアリール、チオアルコキシおよびチオアリールオキシからなる群か
ら選ばれる１〜３個の置換基を含有する置換ヘテロアリール（但し、該置換基は
ヘテロアリールと−ＮＨ基との結合に対してオルト位でない）
からなる群から選ばれ；
Ｒ2は水素、炭素数１〜４個のアルキル、炭素数１〜４個のアルキルアルコキ
シおよび炭素数１〜４個のアルキルチオアルコキシ、アリール、ヘテロアリール
、置換アリールおよび置換ヘテロアリール（但し、該置換基はアリールもしくは
ヘテロアリールの原子と炭素原子との結合に対してオルト位でない）からなる群
から選ばれ；
Ｒ3は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、シ
クロアルケニル、ヘテロアリール、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキ
ニルおよびヘテロサイクリックからなる群から選ばれ；
Ｘは−Ｃ(Ｏ)Ｙ（ここで、Ｙは
（ａ）アルキル、
（ｂ）置換アルキル（但し、該置換アルキル上の置換基としてはα−ハロアルキ
ル、α−ジアゾアルキルもしくはα−ＯＣ(Ｏ)アルキル基を含有しない）
（ｃ）アルコキシもしくはチオアルコキシ、
（ｄ）置換アルコキシもしくは置換チオアルコキシ、
（ｅ）ヒドロキシ、
（ｆ）アリール、
（ｇ）ヘテロアリール、
（ｈ）ヘテロサイクリック、
（ｉ）−ＮＲ'Ｒ''（ここで、Ｒ'およびＲ''は水素、アルキル、置換アルキル、
シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクリックからなる群か
ら独立して選ばれ、およびＲ'およびＲ''は合わさって２〜８個の炭素原子を有
し、さらに酸素、硫黄および窒素からなる群から選ばれた１〜２個のヘテロ原子
を含んでいてもよい環状基を形成し、また該環状基は１個以上のアルキルもしく
はアルコキシ基で置換されていてもよい）および
Ｒ3が少なくとも３個の炭素原子を含む場合、Ｘは−ＣＲ4Ｒ4Ｙ'（ここで各Ｒ4
は水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロ
サイクリックからなる群から独立して選ばれ、またＹ'はヒドロキシル、アミノ
、チオール、−ＯＣ(Ｏ)Ｒ5、−ＳＳＲ5、−ＳＳＣ(Ｏ)Ｒ5（式中、Ｒ5はア
ルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテ
ロサイクリックからなる群から選ばれる）からなる群から選ばれる）であり、
但し、Ｒ1が３,４−ジクロロフェニルであって、Ｒ2がメチルで、Ｒ3がＤ−フ
ェニルグリシン由来のベンジルである場合、Ｘは−Ｃ(Ｏ)ＯＣＨ3でない；
さらに以下の公知の化合物を除外する：
Ｒ1がフェニルであって、Ｒ2がメチルで、Ｘが−Ｃ(Ｏ)ＮＨφである場合、Ｒ3
はメチル、イソ−プロピル、イソ−ブチルでない；および
Ｒ1がフェニルであって、Ｒ2がメチルで、Ｘが−Ｃ(Ｏ)ＮＨ2である場合、Ｒ3
はベンジルでない］
で示される新規な化合物を提供する。
上記式IIIの好ましい化合物としては、以下の表Ｉ中に示すものが挙げられる
：
以下の表中、“dichlorophenyl”は“ジクロロフェニル”と訳す。 発明の詳細な説明
上記の通り、本発明はβ−アミロイドペプチドの放出および／またはその合成
を阻害し、アルツハイマー病を治療するのに有用な化合物に関するものである。
しかしながら、より詳細に本発明を記述する前に、まず最初に、以下に語句の定
義を行なう。定義
語句“β−アミロイドペプチド”とは、分子量約４.２ｋＤを有する３９〜４
３アミノ酸ペプチドであって、該ペプチドがグレナーら1により記載のタンパク
質の形態（正常なβ−ペプチドの突然変異および翻訳後修飾を含む）と本質的に
相同であるものを意味する。いかなる形態においても、β−アミロイドペプチド
は広く膜に広がっている糖タンパクの約３９〜４３アミノ酸フラグメントであり
、β−アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）を意味する。該４３アミノ酸配列
は：もしくは、それと実質的に相同な配列である。
“アルキル”とは、好ましくは炭素数１〜１０個、より好ましくは炭素数１〜
６個の一価のアルキル基を意味する。本語句は、メチル、エチル、ｎ−プロピル
、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｎ−ヘキシルなどの群を例示す
るものである。
“置換アルキル”とは、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミノ
、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、シアノ、ハロゲ
ン、ヒドロキシル、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シクロアルキル、オ
キシアシルアミノ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール
、ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、ニトロおよびモノ−およびジ−アルキ
ルアミノ、モノ−およびジ−(置換アルキル)アミノ、モノ−およびジ−シクロア
ルキルアミノ、モノ−およびジ−アリールアミノ、モノ−およびジ−ヘテロアリ
ールアミノ、モノ−およびジ−ヘテロサイクリックアミノおよび非対称ジ置換ア
ミン（アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールお
よびヘテロサイクリックから選ばれる異なる置換基を有する）からなる群から選
ばれる１〜３個の置換基を有するアルキル基（炭素原子数１〜１０個が好ましい
）を意味する。
“アルキレン”とは、好ましくは炭素数１〜１０個、より好ましくは炭素数１
〜６個の二価のアルキレン基を意味する。本語句は、メチレン（−ＣＨ2−）、
エチレン（−ＣＨ2ＣＨ2−）、プロピレン異性体（例えば、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2
−および−ＣＨ(ＣＨ3)ＣＨ2−）などといった群を例示するものである。
“アルカリール”とは、アルキレン部分に好ましくは炭素数１〜１０個、およ
びアリール部分に好ましくは炭素数６〜１０個を有するーアルキレン−アリール
基を意味する。該アルカリール基はベンジル、フェネチルなどを例示するもので
ある。
“アルコキシ”とは、“アルキル−Ｏ−”基を意味する。好ましいアルコキシ
基としては、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロピキシ、イソ−プロポキシ、
ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−
ヘキシオキシ、１,２−ジメチルブトキシなどが挙げられる。
“置換アルコキシ”とは、“置換アルキル−Ｏ−”基（ここで、置換アルキル
とは上記に定義の通りである）を意味する
“アルキルアルコキシ”とは、“−アルキレン−Ｏ−アルキル”（ここで、ア
ルキレンおよびアルコキシは上記に定義した通りである）を意味する。該基とし
ては例えばメチレンメトキシ(−ＣＨ2ＯＣＨ3)、エチレンメトキシ(−ＣＨ2ＣＨ2
ＯＣＨ3)、ｎ−プロピレン−イソ−プロポキシ（−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ(Ｃ
Ｈ3)2）、メチレン−ｔｅｒｔ−ブトキシ（−ＣＨ2−Ｏ−Ｃ(ＣＨ3)3)などが挙
げられる。
“アルキルチオアルコキシ”とは、“−アルキレン−Ｓ−アルキル”（ここで
、アルキレンおよびアルキルは上記に定義した通りである）を意味する。該基と
しては、例えばメチレンチオメトキシ（−ＣＨ2ＳＣＨ3）、エチレンチオメトキ
シ（−ＣＨ2ＣＨ2ＳＣＨ3）、ｎ−プロピレン−イソ−チオプロポキシ(−ＣＨ2
ＣＨ2ＣＨ2ＳＣＨ(ＣＨ3)2)、メチレンチオ−ｔｅｒｔ−ブトキシ(−ＣＨ2ＳＣ(
ＣＨ3)3)などが挙げられる。
“アルケニル”とは、好ましくは炭素数２〜１０個、より好ましくは炭素数２
〜６個およびアルケニル不飽和部位を少なくとも１個、好ましくは１〜２個有す
るアルケニル基を意味する。好ましいアルケニル基としては、エテニル（−ＣＨ
＝ＣＨ2）、ｎ−プロペニル（−ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨ2）、イソ−プロペニル（−Ｃ(
ＣＨ3)＝ＣＨ2）などが挙げられる。
“置換アルケニル”とは、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミ
ノ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、シアノ、シク
ロアルキル、オキシアシルアミノ、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボキシル、カ
ルボキシルアルキル、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリー
ル、ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、ニトロおよびモノ−およびジ−アル
キルアミノ、モノ−およびジ−(置換アルキル)アミノ、モノ−およびジ−シクロ
アルキル、モノ−およびジ−アリールアミノ、モノ−およびジ−ヘテロアリール
アミノ、モノ−およびジ−ヘテロサイクリックアミノおよび非対称ジ置換アミン
（アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよび
ヘテロサイクリックから選ばれる異なる置換基を有する）からなる群から選ばれ
る１〜３個の置換基を有する上記に定義のアルケニル基を意味する。
“アルキニル”とは、好ましくは炭素数２〜１０個、より好ましくは炭素数２
〜６個を有し、およびアルキニル不飽和部位を少なくとも１個、好ましくは１〜
２個有するアルキニル基を意味する。好ましいアルキニル基としては、エチニル
（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ2Ｃ≡ＣＨ）などが挙げられる。
“置換アルキニル”とは、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミ
ノ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、シアノ、シク
ロアルキル、オキシアシルアミノ、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボキシル、カ
ルボキシルアルキル、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリー
ル、ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、ニトロおよびモノ−およびジ−アル
キルアミノ、モノ−およびジ−(置換アルキル)アミノ、モノ−およびジ−シクロ
アルキルアミノ、モノ−およびジ−アリールアミノ、モノ−およびジ−ヘテロア
リールアミノ、モノ−およびジ−ヘテロサイクリックアミノおよび非対称ジ置換
アミン（アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール
およびヘテロサイクリックから選ばれる異なる置換基を有する）からなる群から
選ばれる１〜３個の置換基を有する上記に定義のアルキニル基を意味する。
“アシル”とは、アルキル−Ｃ(Ｏ)−、置換アルキル−Ｃ(Ｏ)−、シクロアル
キル−Ｃ(Ｏ)−、アリール−Ｃ(Ｏ)−、ヘテロアリール−Ｃ(Ｏ)−およびヘテロ
サイクリック−Ｃ(Ｏ)−（ここで、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、
アリール、ヘテロアリールおよびヘテロサイクリックは本明細書中に定義する通
りである）を意味する。
“アシルアミノ”とは、−Ｃ(Ｏ)ＮＲＲ基（ここで、各Ｒは独立して水素、ア
ルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテ
ロサイクリックであり、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、
ヘテロアリールおよびヘテロサイクリックの各々は本明細書中に定義する通りで
ある）を意味する。
“アミノアシル”とは、−ＮＲＣ(Ｏ)Ｒ基（ここで、各Ｒは独立して水素、ア
ルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテ
ロサイクリックであり、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、
ヘテロアリールおよびヘテロサイクリックの各々は本明細書中に定義する通りで
ある）を意味する。
“アシルオキシ”とは、基：−ＯＣ(Ｏ)−アルキル、−ＯＣ(Ｏ)−置換アルキ
ル、−ＯＣ(Ｏ)−シクロアルキル、−ＯＣ(Ｏ)−アリール、−Ｃ(Ｏ)Ｏ−ヘテロ
アリールおよび−Ｃ(Ｏ)Ｏ−ヘテロサイクリック（ここで、アルキル、置換アル
キル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロサイクリックは
本明細書中に定義する通りである）を意味する。
“アミノアシルオキシ”とは、基：−ＮＲＣ(Ｏ)Ｏ−アルキル、−ＮＲＣ(Ｏ)
Ｏ−置換アルキル、−ＮＲＣ(Ｏ)Ｏ−シクロアルキル、−ＮＲＣ(Ｏ)Ｏ−アリー
ル、−ＮＲＣ(Ｏ)Ｏ−ヘテロアリールおよび−ＮＲＣ(Ｏ)Ｏ−ヘテロサイクリッ
ク（ここで、Ｒは水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、
ヘテロアリールおよびヘテロサイクリックであり、アルキル、置換アルキル、シ
クロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロサイクリックの各々は本
明細書中に定義する通りである）を意味する。
“オキシアシルアミノ”とは、基：−ＯＣ(Ｏ)ＮＲ−アルキル、−ＯＣ(Ｏ)Ｎ
Ｒ−置換アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＲ−アリール、−ＯＣ(Ｏ)ＮＲ−ヘテロアリー
ルおよび−ＯＣ(Ｏ)ＮＲ−ヘテロサイクリック（ここで、Ｒは水素、アルキル、
置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロサイク
リックであり、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロア
リールおよびヘテロサイクリックの各々は本明細書中に定義する通りである）を
意味する。
“アリール”とは、単環（例えば、フェニル）もしくは多縮合環（例えば、ナ
フチルもしくはアントリル）を有する、炭素数６〜１４個の不飽和芳香族炭素環
式を意味する。好ましいアリールとしては、例えばフェニル、ナフチルなどが挙
げられる。
アリール置換基に対する定義によって特に拘束されないならば、該アリール基
はヒドロキシ、アシル、アシルオキシ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、
置換アルコキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、
アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミ
ノ、アリール、アリールオキシ、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ
、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、トリハロメチル、チオアルコキシ、置換チオ
アルコキシ、モノ−およびジ−アルキルアミノ、モノ−およびジ−(置換アルキ
ル)アミノ、モノ−およびジ−シクロアルキルアミノ、モノ−およびジ−アリー
ルアミノ、モノ−およびジ−ヘテロアリールアミノ、モノ−およびジ−ヘテロサ
イクリックアミノ並びに非対称ジ置換アミン（アルキル、置換アルキル、シクロ
アルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロサイクリックから選ばれる異
なる置換基を有する）などからなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換され
ていてもよい。好ましい置換基としては、アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ
、ニトロ、トリハロメチルおよびチオアルコキシが挙げられる。そのように置換
されている場合、本明細書中、該アリール基は“置換アリール”を意味すること
がある。
“アリールオキシ”とは、アリール−Ｏ−基（ここで、アリール基は上記にも
定義した任意に置換したアリール置換基をはじめとした上記に定義した通りであ
る）を意味する。
“カルボキシアルキル”とは、−Ｃ(Ｏ)Ｏ−アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)Ｏ−置換
アルキル基（ここで、アルキルおよび置換アルキルは本明細書中に定義した通り
である）を意味する。
“シクロアルキル”とは、１〜３個のアルキル基で置換されていてもよい単環も
しくは多縮合環（シクロアルキル環と縮合した芳香環を含む）を有する炭素数３
〜２０個の環状アルキル基を意味する。該シクロアルキル基としては、例えば、
シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル、１−メチル
シクロプロピル、２−メチルシクロペンチル、２−メチルシクロオクチルなどの
単環構造、あるいはジベンゾスベラン、アダマンタニルなどの多環構造が挙げら
れる。
“シクロアルケニル”とは、単環もしくは多縮合環を有し、１〜３個のアルキ
ル基で置換されていてもよい内部不飽和結合を少なくとも１個有する炭素数４〜
８個の環状のアルケニル基を意味する。適当なシクロアルケニル基の例としては
、例えばシクロブタ−２−エニル、シクロペンタ−３−エニル、シクロオクタ−
３−エニルなどが挙げられる。
“ハロ”もしくは“ハロゲン”とは、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨード
を意味し、好ましくはクロロかブロモである。
“ヘテロアリール”とは、炭素数２〜１０個および環内に酸素、窒素および硫
黄から選ばれるヘテロ原子数１〜４個の一価の芳香環基を意味する。
特にヘテロアリール置換基の定義で特に断らない限りは、該ヘテロアリール基
はヒドロキシ、アシル、アシルオキシ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、
置換アルコキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、
アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミ
ノ、アリール、アリールオキシ、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ
、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、トリハロメチル、チオアルコキシ、置換チオ
アルコキシ、モノ−およびジ−アルキルアミノ、モノ−およびジ−(置換アルキ
ル)アミノ、モノ−およびジ−シクロアルキルアミノ、モノ−およびジ−アリー
ルアミノ、モノ−およびジ−ヘテロアリールアミノ、モノ−およびジ−ヘテロサ
イクリックアミノ、並びに非対称ジ−置換アミン（アルキル、置換アルキル、シ
クロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロサイクリックから選ばれ
る異なる置換基を有する）などからなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換
されていてもよい。該ヘテロアリール基は、単環（例えば、ピリジルもしくはフ
リルなど）または、多縮合環（例えば、インドリジニルもしくはベンゾチエニル
）を
有していてもよい。好ましいヘテロアリールとしては、ピリジル、ピロリルおよ
びフリルが挙げられる。そのように置換されている場合、本明細書中、該ヘテロ
アリール基は“置換ヘテロアリール”を意味することがある。
“ヘテロ環(heterocycle)”もしくは“ヘテロサイクリック(heterocyclic)”
とは、炭素数１〜１２個および、環内に窒素、硫黄もしくは酸素から選ばれるヘ
テロ原子数１〜４個である、単環もしくは多縮合環を有する一価の飽和もしくは
不飽和基を意味する。
ヘテロサイクリック置換基の定義で特に断らない限り、該ヘテロサイクリック
基はヒドロキシ、アシル、アシルオキシ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ
、置換アルコキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル
、アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アミノアシルオキシ、オキシアシルア
ミノ、アリール、アリールオキシ、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シア
ノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、トリハロメチル、チオアルコキシ、置換チ
オアルコキシ、モノ−およびジ−アルキルアミノ、モノ−およびジ−(置換アル
キル)アミノ、モノ−およびジ−アリールアミノ、モノ−およびジ−ヘテロアリ
ールアミノ、モノ−およびジ−ヘテロサイクリックアミノ、並びに非対称ジ−置
換アミン（アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリー
ルおよびヘテロサイクリックから選ばれる異なる置換基を有する）などからなる
群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい。該ヘテロサイクリッ
ク基は、単環もしくは多縮合環を有していてもよい。好ましいヘテロ環としては
、モルホリノ、ピペリジニルなどが挙げられる。
ヘテロ環およびヘテロアリールの例としては、フラン、チオフェン、チアゾー
ル、オキサゾール、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン
、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、ィン
ダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチ
ルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾー
ル、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントリン、イソチアゾ
ール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサゾリン、フェノチアゾリン、
イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、フタル
イミド、
１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン、４,５,６,７−テトラヒドロベンゾ[
ｂ]チオフェン、チアゾール、チアゾリジン、チオフェン、ベンゾ[ｂ]チオフェ
ン、モルホリノ、ピペリジニル、ピロリジン、テトラヒドロフラニルなどが挙げ
られるが、これらに限定されるものではない。
“チオール”とは、−ＳＨ基を意味する。
“チオアルコキシ”とは、−Ｓ−アルキル基を意味する。
“置換チオアルコキシ”とは、−Ｓ−置換アルキル基を意味する。
“チオアリールオキシ”とは、アリール−Ｓ−基（ここで、アリール基とは上
記でも定義した任意に置換したアリール基をはじめとした上記に定義の通りであ
る）を意味する。
“チオヘテロアリールオキシ”とは、ヘテロアリール−Ｓ−基（ここで、ヘテ
ロアリール基とは上記でも定義した任意に置換したアリール基をはじめとした上
記に定義の通りである）を意味する。
式Ｉの化合物において、ＲbおよびＲcは縮合してヘテロアリールもしくはフェ
ニル基を持つヘテロサイクリック環を形成し得る。本様式での縮合により、式：
［ここで、Ｒb'とは上記に定義の通りであり、およびＡは縮合した、ヘテロア
リールまたはヘテロサイクリック基（これらの語句については上記に定義した通
りであり、フェニル環の２個の原子はヘテロアリールもしくはヘテロサイクリッ
ク基中に存在する総原子内に含む）である］；
の縮合した二環構造を生じる。該縮合環系の例としては、例えば、インドール−
５−イル、インドール−６−イル、チオナフテン−５−イル、チオナフテン−６
−イル、イソチオナフテン−５−イル、イソチオナフテン−６−イル、インドキ
サジン−５−イル、インドキサジン−６−イル、ベンゾオキサゾール−５−イル
、ベンゾキサゾール−６−イル、アントラニル−５−イル、アントラニル−６−
イ
ル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル、イソキノリン−６−イル、イソ
キノリン−７−イル、シンノリン−６−イル、シンノリン−７−イル、キナゾリ
ン−６−イル、キナゾリン−７−イル、ベンゾフラン−５−イル、ベンゾフラン
−６−イル、イソベンゾフラン−５−イル、イソベンゾフラン−６−イルなどが
挙げられる。
“医薬的に許容し得る塩”とは、式Ｉの化合物の医薬的に許容しうる塩であり
、該塩は当分野でよく知られた様々な有機および無機カウンターイオン由来のも
のであり、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニ
ウム、テトラアルキルアンモニウムなどが例示でき；また、該分子が塩基性の官
能性を有する場合、塩酸塩、臭化水素塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸
塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩などの有機もしくは無機酸の塩である。
化合物の製造
上記式Ｉの化合物は、化合物の製造の難易度、出発原料の商業的入手性などの
点で相対的に選ばれる特定のルートを有するいくつかのダイバージェント合成ル
ートで容易に製造できる。
一つの合成方法において、第一番目にアミノ酸ＮＨ2ＣＨ(Ｒ2)ＣＯＯＨもしく
はそのエステル中にＲ1基を導入する。その後、該第一番目のＲ1ＮＨＣＨ(Ｒ2)
ＣＯＯＨもしくはそのエステルとＮＨ2ＣＨ(Ｒ3)Ｃ(Ｏ)Ｙとを通常のカップリン
グ反応をさせることで、式Ｉ(Ｘは−Ｃ(Ｏ)Ｙである)の化合物を得る。
同様に、−Ｃ(Ｏ)Ｙ基を通常の還元反応を行なうことで−ＣＨ2ＯＨ基などに
誘導する。
アミノ酸ＮＨ2ＣＨ(Ｒ2)ＣＯＯＨもしくはそのエステル上へのＲ1基の導入は
いくつかの方法を用いることで達成可能である。例えば、ハロ酢酸と一級アミン
とを通常のカップリング反応をさせることで以下の反応式(１)に示すとおり、ア
ミノ酸を形成する：
（式中、Ｒ1およびＲ2は上記に定義した通りであり、Ｘ'はクロロもしくはブ
ロモなどのハロ基が好ましい）。
別法として、ハロ以外の脱離基としてトリフレート、メシレート、トシレートな
どを用いることが可能である。加えて、１の適当なエステルを本反応で使用して
もよい。
反応式（１）は、アミノ酸３を与える条件下、一級アリール／ヘテロアリール
アミン２と適当なハロ酢酸誘導体１とのカップリンング反応からなる。本反応は
、例えばヤーテら10により記載されており、およそ化学量論的当量のハロ酢酸１
と一級アリール／ヘテロアリールアミン２とを組合せて、水、ジメチルスルオキ
シド（ＤＭＳＯ）などの適当な不活性希釈剤下に行なう。該反応では炭酸水素ナ
トリウム、水酸化ナトリウムなどの適当な塩基の過剰量を、反応によって生成す
る酸を除去するために使用する。該反応は、典型的に１〜約２４時間内に起こる
反応が完結するまで、約２５℃〜約１００℃で遂行するのが好ましい。さらに、
本反応は米国特許第3,598,859号中に記載されており、このものはそっくりその
まま本明細書中に引例として盛り込む。反応が完結した際、Ｎ−アリール／Ｎ−
ヘテロアリールアミノ酸３は沈殿、クロマトグラフィー、ろ過などをはじめとし
た従来の方法によって回収される。
反応式(１)において、各試薬（ハロ酢酸１、一級アリール／ヘテロアリールア
ミン２およびアルコール３）は各大量に商業的に入手可能であると、該分野では
よく知られている。
別の実施態様では、Ｒ1基は従来のＮ−アリール化によって、Ｒ1基をアラニン
エステル（または他の適当なアミノ酸エステル）とカップリング反応させること
が可能である。例えば、化学量論的に当量もしくは若干過剰のアミノ酸エステ
ルをＤＭＳＯなどの適当な希釈剤中で溶解し、ハロアリール化合物Ｘ−Ｒ1（こ
こで、Ｘはフルオロ、クロロもしくはブロモなどのハロ基であり、Ｒ1は上記定
義の通りである）とカップリング反応が可能である。該反応は、反応によって発
生する酸を除去するために、水酸化ナトリウムなどの過剰の塩基の存在下遂行さ
れる。該反応は典型的に、１５℃〜約２５０℃で進められ、約１〜２４時間中に
完結する。反応完結時、Ｎ−アリールアミノ酸エステルをクロマトグラフィー、
ろ過などをはじめとした従来の方法によって回収する。
さらに別の実施態様では、上記式Ｉのエステル化アミノ酸を、以下の反応式（
２）：
（式中、Ｒ1およびＲ2は上記に定義した通りである）
に示す方法で、適当な２−オキソカルボン酸エステル（ピルビン酸エステルなど
）の還元的アミノ化反応によって製造可能である。
反応式（２）においては、およそ化学量論的に当量の２−オキソカルボン酸６
およびアリールアミン２を、メタノール、エタノールなどの不活性希釈剤中で組
合せ、該反応溶液をイミン形成（式示さず）をもたらす条件下で処理する。次い
で、形成したイミンを、シアノ水素化ホウ素ナトリウムなどの適当な還元剤、Ｈ2
／パラジウム−炭素などによって従来の条件下で還元して、Ｎ−アリールアミ
ノ酸エステル５を形成する。特に好ましい実施態様では、還元剤はＨ2／パラジ
ウム−炭素であり、このものは開始反応媒体中に入れられ、同一反応容器中でそ
のままイミン還元を行なうことができ、Ｎ−アリールアミノ酸エステル５を得る
。
該反応は、典型的に１〜約２４時間内に反応が完結するまで、約２０℃〜約８
０℃、１〜１０大気圧で遂行されるのが好ましい。反応の完結時、Ｎ−アリール
アミノ酸エステル５をクロマトグラフィー、ろ過などを含めた従来の方法によ
って回収する。
該エステル５を引き続いて加水分解反応することにより、対応するカルボン酸
誘導体に導く。
Ｎ−アリールアミノ酸を製造する更なる実施態様としては、アミノ酸のアミン
基によるフルオロベンゼンの芳香族求核置換反応が挙げられる。
次いで、該カルボン酸誘導体５を当分野でよく知られた従来の条件下、式ＮＨ2
ＣＨ(Ｒ3)Ｃ(Ｏ)Ｙ（ここで、Ｒ3およびＹは上記に定義の通りである）とカッ
プリング反応させる。該カップリング反応により、式Ｉの化合物が導かれる。続
いて、修飾法(例えば、還元反応)を行なうことで、式Ｉの更なる化合物が導かれ
る。
Ｙがエステル基の場合、式Ｉの化合物上の様々に異なるエステル基のものを製
造するのに、従来のエステル交換反応が利用できる。エステル交換反応を有効に
するために多くの技法が該分野で知られ、各技法は単に該エステル基を相当する
アルコールもしくはチオアルコールから誘導される異なるエステル基で置き換え
るものであり、場合によっては、チタン(IV)イソ−プロボキシドといった触媒を
反応の完結を促進するために使用する。一つの技法では、アルコールもしくはチ
オアルコールは最初にトルエンなどの適当な希釈剤中、水素化ナトリウムで処理
され、対応するナトリウムアルコキシドもしくはナトリウムチオアルコキシドを
形成し、次いでエステル交換反応を実現するために使用する。本技法の効率の良
さは、高沸点および／または高価なアルコールを用いる場合特に有用である。
別のエステル交換反反応では、エステル交換されるべき該エステルを、エステ
ル交換反応を実現するアルコールもしくはチオアルコールの大過剰量中に加える
。次いで水素化ナトリウムの触媒量を加え、通常の条件下で急速に反応させて、
目的のエステル交換反応生成物を得る。本プロトコールは大過剰量のアルコール
もしくはチオアルコールの使用を要するため、本製法はアルコールが安価な場合
、特に有用である。
エステル交換反応は、上記式Ｉの化合物上に多重的に異なるエステル置換基を
与える促進手段を提供する。全ての場合において、エステル交換反応を実現する
のに使用するアルコールもしくはチオアルコールとは、商業的に著しい量を入手
可能であると該分野でよく知られるものである。
本発明のエステルを製造するための方法としては、例えば、最初に該エステル
を遊離酸に加水分解し、続いて炭酸カリウムなどの塩基の存在下、例えばハロ−
アルキル基でＯ−アルキル化する方法が挙げられる。
さらに式Ｉの化合物の製造における他の方法としては、以下の実施例中で示す
ものがある。
Ｘが−ＣＲ4Ｒ4Ｙ'である化合物は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、１−ヒ
ドロキシベンゾトリアゾールなどのよく知られた添加物の有無に関わらず、カル
ボジイミドなどのよく知られたカップリング試薬を用いることが可能であるペプ
チドカップリング化学でよく知られた標準カップリング反応条件下、例えばアミ
ノアルコールＨ2ＮＣＨＲ3ＣＲ4Ｒ4ＯＨをＲ1ＮＨＣＨＲ2Ｃ(Ｏ)ＯＨのカルボキ
シル基とカップリング反応させることで容易に製造可能である。必要ならば、カ
ップリング反応の間、Ｙ'基を保護するためにＹ'上によく知られたブロッキング
基を使用可能である。特にＹ'がアミノ基である場合に該ブロッキング基が所望
される。
反応は通常、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、クロロホルム、アセト
ニトリル、テトラヒドロフランなどの不活性非プロトン性希釈剤中行なう。反応
完結時、Ｙ'上のブロッキング基を選択的に除去することにより目的の化合物を
得る。
Ｙ'が−ＯＨもしくは−ＳＨである場合、これらの基の相当するエステル(すな
わち、−ＯＣ(Ｏ)Ｒ5)、ジスルフィド(すなわち、−ＳＳＲ5)および−ＳＳＣ(Ｏ
)Ｒ5基への合成後の変換は、よく知られた化学を用いて達成可能である。例えば
、エステル合成は、適当なエステル化条件下、酢酸(Ｒ7＝メチル)、酸ハライド(
例えば、酸クロリド)もしくは酸無水物等の適当な酸と反応させることを要する
のみである。
Ｒ4基の１つが水素である場合、−ＣＨＲ4ＯＨの合成後の酸化反応によりケト
ン誘導体に導かれる。別法として、適当なアミノケトン・ＨＣｌ塩をアミノ酸の
末端カルボキシル基とカップリング反応させることで、該ケトンを製造可能であ
る。
これらの合成法において、出発物質はキラル中心（例えば、アラニン）を含有
するものがあり、ラセミ体の出発物質を使用する場合、生じる生成物はジアステ
レオマーもしくはＲ、Ｓエナンチオマーの混合物である。別法として、出発物質
のキラル異性体を使用可能であり、また用いた該反応プロトコールが本出発物質
をラセミ化しないならば、キラル生成物が得られる。該反応プロトコールは合成
の間、キラル中心の反転を伴ってもよい。
したがって、もし特に指示がなければ、本発明の生成物はジアステレオマー混
合物(２もしくはそれ以上のキラル中心が存在する場合)もしくは、Ｒ、Ｓエナン
チオマー混合物（キラル中心が１個のみの場合）である。しかしながら、キラル
生成物を望む場合、該キラル生成物はＬ−アミノ酸誘導体に対応することが好ま
しい。別法として、キラル生成物は一方もしくは他方の立体異性体を提供する、
Ｒ、Ｓ混合物からのジアステレオマーもしくはエナンチオマーを分離する精製技
法で得ることができる。医薬処方
医薬品として使用する際、式Ｉの化合物は通常、医薬組成物の形態で投与され
る。これらの化合物は経口、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内および鼻腔内を
はじめとした様々なルートで投与可能である。これらの化合物は、注射および経
口の両成分として有効である。該組成物は医薬品分野でよく知られた様式で製造
され、少なくとも１個の活性化合物からなる。
本発明としてはまた、医薬的に許容し得る担体と関連して活性成分として上記
式Ｉの化合物の１個以上を含有する医薬組成物が挙げられる。本発明の組成物を
作る際、活性成分は通常賦形剤と混合し、賦形剤により希釈またはカプセル、香
粉、紙もしくは他の容器の形態をとり得る該担体中に封入する。該賦形剤が希釈
剤として役立つ場合、固体、半固体もしくは液剤物質であり得、このものは活性
成分のビヒクル、担体もしくは媒質として機能する。したがって、組成物は錠剤
、丸剤、粉末剤、トローチ剤、サッシェ、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳
化剤、溶剤、シロップ剤、エアロゾール（固体もしくは液体媒質）、軟膏（例え
ば、活性化合物の１０重量％以下含有）、軟および硬ゼラチンカプセル剤、坐剤
、減
菌注射溶剤、および減菌パッケージ粉末の形態を取りうる。
医薬品を製造する際、他の活性成分と調合する前に、適当な粒度を得るために
活性化合物を粉砕する必要がある。該活性化合物が本質的に不溶解性ならば、通
常２００メッシュ以下の粒度になるよう粉砕する必要がある。該活性化合物が本
質的に水溶性ならば、粒度は通常医薬品中で本質的に均一に分布、例えば約４０
メッシュになるよう粉砕することで調節する。
適当な賦形剤のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロ
ース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウ
ム、アルギナート、トラガントガム、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セル
ロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、減菌水、シロップおよびメチルセ
ルロースが挙げられる。加えて処方成分（formulations）としては、タルク、ス
テアリン酸マグネシウムおよび鉱油等の潤滑剤；湿潤剤；乳濁および懸濁剤；メ
チル−およびプロピルヒドロキシ−ベンゾエート；甘味剤；および芳香剤を挙げ
ることができる。本発明の組成物は、該分野で公知の方法を用いて患者に投与後
、活性成分を急速に、持続的にもしくは遅延的に放出するよう処方可能である。
該組成物は活性成分を約５〜約１００ｍｇ、より一般的には約１０〜約３０ｍ
ｇ含有する単位投与形で処方するのが好ましい。語句“単位投与形”とは、ヒト
および他の哺乳類に対する単位投与量として適した物理的に分離した単位であり
、各単位は好適な医薬賦形剤と共に所望の治療効果をもたらす所定量の活性物質
を含有するものを意味する。好ましくは、上記式Ｉの化合物は、医薬上不活性の
担体とバランスをとって該医薬組成物の約２０重量％以下、より好ましくは約１
５重量％以下で使用する。
活性化合物は広範囲の薬用量にわたって有効であり、一般的には医薬的に有効
な量を投与する。しかしながら、実際投与される該化合物の量は、治療条件、選
択した投与経路、実際の投与化合物、個々の患者の年齢、体重および応答、患者
の徴候の重度などを含めた適切な環境に照らして、医師によって決定されるもの
である。
錠剤などの固体成分の製造としては、主要な活性成分を医薬賦形剤と混合し、
本発明の化合物の均一な混合物を含有するプレ処方成分を形成させる。これらの
プレ処方成分が均一であるとは、該活性成分が組成物中均一に分散しており、そ
のため、該成分を同等の効力を有する錠剤、丸剤およびカプセル剤などの単位投
与形に容易に分割し得ることを意味する。次いで、本プレ処方固体を、本発明の
活性化成分を、例えば０.１〜約５００ｍｇを含有する上記に記載のタイプであ
る単位投与形態に更に細分する。
本発明の錠剤または丸剤はコーティングするか、または混合して持続作用を有
する投与形態にする。例えば、錠剤もしくは丸剤は、内側調剤構成分と外側調剤
構成分とからなり、後者が前者を包み込んだ形態をとる。該２個の構成分は、胃
の中での崩壊に抵抗し、また内側構成分が十二指腸中にまで無傷で通過し、ある
いは持続放出されるように腸溶層によって仕切られている。様々な物質を該腸溶
層もしくは被膜用に使用可能であり、該物質としてはセラック、セチルアルコー
ルおよび酢酸セルロース等の物質を持つ多くの高分子酸および高分子酸の混合物
が挙げられる。
本発明の新規な組成物を経口もしくは注射用に調製された液剤形態としては、
水溶液、適当に香味付けしたシロップ剤、水性もしくは油性懸濁剤、およびコー
ン油、綿実油、セサミン油、ココナッツ油、もしくはピーナッツ油等の食用油を
有する香味付乳剤、併せてエリキシルおよび同様な医薬製剤が挙げられる。
吸入用組成物としては、医薬的に許容し得る水性または有機溶媒またはそれら
の混合物および粉末中に加えた溶液剤または懸濁剤が含まれる。液体もしくは固
体組成物は、上述した適当に医薬的に許容し得る賦形剤を含んでもよい。該組成
物は局所的もしくは全身的効果のある経口もしくは鼻呼吸経路で投与されるもの
が好ましい。好ましい医薬的に許容し得る溶剤中の組成物は不活性ガスを用いて
噴霧してもよい。噴霧される溶液は噴霧器を通して直接吸入されるようにしても
よく、あるいは噴霧器を顔面マスクテントまたは問欠的陽圧呼吸器に結合させて
もよい。溶液剤、懸濁剤もしくは粉末組成物を該処方成分を適当な方法で送達し
得る装置から好ましくは経口もしくは経鼻投与される。
以下の処方の実施例は、本発明の代表的な医薬組成物を例示するものである。
処方例１
以下の成分を含有した硬ゼラチンカプセル剤を製造した：
量
成分 （ｍｇ／カプセル）
活性成分 ３０.０
デンプン ３０５.０
ステアリン酸マグネシウム ５.０
上記成分を混合し、硬ゼラチンカプセル中に量：３４０ｍｇを充填した。
処方例２
錠剤処方は、以下の成分を用いて製造した：
量成分 （ｍｇ／錠剤）
活性成分 ２５.０
セルロース、微結晶 ２００.０
コロイド状二酸化ケイ素 １０.０
ステアリン酸 ５.０
該成分を混和し、各重量：２４０ｍｇの錠剤を形成するように圧縮した。
処方例３
乾燥粉末吸入器処方は、以下の成分を含めて製造した：成分 重量％
活性成分 ５
ラクトース ９５
該活性化成分をラクトースと混合し、該混合物を乾燥粉末吸入装置中に加えた
。
処方例４
各活性化成分３０ｍｇを含有した錠剤を、以下の通り製造した。
量成分 （ｍｇ／錠剤）
活性成分 ３０.０ｍｇ
デンプン ４５.０ｍｇ
微結晶セルロース ３５.０ｍｇ
ポリビニルピロリドン
（１０％溶液／減菌水として） ４.０ｍｇ
デンプンカルボキシメチルナトリウム塩 ４.５ｍｇ
ステアリン酸ナトリウム ０.５ｍｇ
タルク １.０ｍｇ
総計 １２０ｍｇ
活性化成分、デンプンおよびセルロースを、２０番メッシュＵ.Ｓ.シーブを通
してろ過し、徹底的に混合した。ポリビニルピロリドンの溶液を残りの粉末と混
合し、次いでこのものを１６番メッシュＵ.Ｓ.シーブを通してろ過した。産出し
た顆粒を５０℃〜６０℃で乾燥し、１６番メッシュＵ.Ｓ.シーブを通してろ過し
た。次いで、予め、３０番メッシュＵ.Ｓ.シーブを通してろ過した、デンプンカ
ルボキシメチルナトリウム、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクを、該顆粒
に加え、混合後、錠剤機で圧縮したところ、各重量：１２０ｍｇの錠剤を得た。
処方例５
各薬剤４０ｍｇを含有したカプセル剤を、以下の通りに作った：
量成分 （ｍｇ／カプセル剤）
活性成分 ４０.０ｍｇ
デンプン １０９.０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム １.０ｍｇ
総計 １５０.０ｍｇ
活性成分、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムを混和し、２０番メッシ
ュＵ.Ｓ.シーブを通してろ過、硬ゼラチンカプセル剤中に量：１５０ｍｇを充填
した。
処方例６
各活性成分２５ｍｇを含有する坐剤を以下の通り作った：成分 重量％
活性成分 ２５ｍｇ
飽和脂肪酸グリセリド ２,０００ｍｇ
活性成分を６０番メッシュＵ.Ｓ.シーブを通してろ過、および最小限必要なだ
け加熱して、予め融解させた飽和脂肪酸グリセリド中で懸濁した。次いで、該混
合物をほんのわずかな容量２.０ｇの坐剤鋳型中に注ぎ、冷却した。
処方例７
各、医薬品（５０ｍｇ）／服用量（５.０ｍｌ）を含有した坐剤を、以下の通
りに作った：成分 重量
活性成分 ５０.０ｍｇ
キサントガム ４.０ｍｇ
セルロースカルボキシメチルナトリウム（１１％）
微結晶セルロース（８９％） ５０.０ｍｇ
ショ糖 １.７５ｇ
安息香酸ナトリウム １０.０ｍｇ
芳香剤および染料 適量
精製水 ５.０ｍＬ
活性成分、ショ糖およびキサントガムを混和し、１０番メッシュＵ.Ｓ.シーブ
を通してろ過、次いで予め調製した微結晶セルロースおよびセルロースカルボキ
シメチルナトリウム／水溶液と混合した。安息香酸ナトリウム塩、芳香剤および
染料を少量の水で希釈し、撹拌しながら加えた。次いで、十分な水を加え、必要
な量とした。
処方実施８
量成分 （ｍｇ／カプセル剤）
活性成分 １５.０ｍｇ
デンプン ４０７.０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ３.０ｍｇ
総計 ４２５.０ｍｇ
活性成分、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムを混和し、２０番メッシ
ュＵ.Ｓ.シーブを通してろ過、硬ゼラチンカプセル剤中に量：４２５.０ｍｇだ
け充填した。
処方例９
皮下処方成分を、以下の通りに製造可能である：成分 重量
活性成分 ５.０ｍｇ
コーン油 １.０ｍＬ
処方例１０
局所用製剤を以下の通りに製造する：成分 重量
活性成分 １〜１０ｇ
乳濁ワックス ３０ｇ
液体パラフィン ２０ｇ
白色軟パラフィン １００ｇ
白色軟パラフィンを溶解するまで加熱した。液体パラフィンおよび乳濁ワック
スを入れ、溶解するまで撹拌した。活性成分を加え、分散するまで撹拌を続けた
。混合物を固体になるまで冷却した。
本発明の方法で使用した他方の好ましい処方は、経皮デリバリィ手段（“パッ
チ”）を使用するものである。該経皮パッチは、本発明の化合物を連続的または
非連続的にコントロールされた量だけ与えるように使用することができる。薬物
デリバリィのために経皮パッチを使用し、またそれを構築することは当分野でよ
く知られている。本明細書中で引用した引例、例えば米国特許第5,023,252号(19
91年、6月11日発行）を参照。該パッチは医薬品を連続的に、拍動的に、または
必要時運搬するよう構成され得る。
時に、医薬組成物を脳に直接的もしくは間接的に導入することが望まれもしく
は必要とされる。直接的な技法としては、通常薬物運搬カテーテルを血管−脳バ
リヤーをバイパスするために、宿主の脳室系に設置することからなる。体内の特
定の解剖領域に生体因子を輸送するために使用する該移植可能な運搬系の一つが
、本明細書中に引用した米国特許第5,011,472号中に記載されている。
間接的な技法が一般的に好ましいが、このものは一般に親水性の薬物を脂質に
可溶な薬物に変換することによって薬物を潜在化させるための組成物の処方をも
含む。潜在化は一般に、薬物を一層脂質に可溶に及び血管−脳バリアーを通過し
て輸送しやすくするために、薬物上のヒドロキシ、カルボニル、スルフェートお
よび一級アミン基をブロックすることで達成される。別法として、親水性薬物の
運搬は、血管−脳バリアーを過渡的に開くことが可能な高張性溶液の動脈内注射
によって増大させることも可能である。
本発明において使用する他の適当な処方成分は、レミントンの文献（Remingto
n's Pharmaceutical Sciences）、Mace Publishing Company、Philadelphia、Ｐ
Ａ、１７版（1985）にみられる。
用途
本発明の化合物および医薬組成物は、β−アミロイドペプチド放出および／ま
たはその合成を阻害するのに有用であり、従って、ヒトを含めた哺乳類のアルツ
ハイマー病の治療に有用である。
上述のとおり、本明細書中に記載の化合物は上記様々な薬物のデリバリィシス
テムに適している。加えて、投与した化合物のインビボ血清半減期を増大するた
めに該化合物をカプセルに入れ、リポソームの内腔中に導入し、コロイドとした
り、また化合物の血清半減期を増大しうる他の通常の方法を使用することも可能
である。各本明細書中に引用した、例えばスゾーカ（Szoka）らによる米国特許
第4,325,871、4,501,728および4,837,028号中に記載の通り、様々な方法がリポ
ソームを製造するのに役立つ。
患者に投与される化合物の量は、投与物、予防もしくは治療などの投与目的、
患者の状態、投与形態などにより変化する。治療学的な応用としては、組成物を
、既にＡＤを患っている患者に該病気の症候の開始およびその合併症を少なくと
もいくらかでも遅らせるのに十分な量だけ投与することが挙げられる。本目的を
達成するために十分な量とは、“治療的有効量”と定義される。本使用のために
有効な量は、患者のＡＤの程度もしくは重度、患者の年齢、体重および通常の状
態などの要因に基づいて診察している医師の判断に任せられる。治療に使用する
に
は、本明細書に記載の化合物を約０.１〜約５００ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与
するのが好ましい。
予防的に適用するには、組成物をＡＤが進行する危険のある患者（例えば、遺
伝子スクリーニングもしくは家族性特徴によって決定）に、該病気の症候の開始
を阻害するのに十分な量を投与する。本目的を達成するのに十分な量とは、“予
防的に有効な量”と定義される。本使用に有効な量とは、患者の年齢、体重およ
び通常の状態等の要因に基づいて診察している医師の判断にまかせられる。予防
的な使用には、本明細書に記載の化合物を約０.１〜約５００ｍｇ／ｋｇ／日の
用量で投与するのが好ましい。
上述のとおり、患者に投与する化合物は上記の医薬組成物の形態をとる。これ
らの組成物は従来の減菌技法によって減菌され、または減菌ろ過することも可能
である。水溶液を使用する場合、これらはそのまま使用のためにパッケージされ
もしくは凍結乾燥される。該凍結乾燥製剤はそれらの減菌水性混合物および粉末
と調合される。製剤のｐＨは典型的には３〜１１の間であり、５〜９が好ましく
、７〜８が最も好ましい。前述のある種の賦形剤、担体もしくは安定剤を使用す
ると医薬的塩が形成されるであろうことが理解できる。
以下の合成例および生物学的実施例は、本発明を例示するために供与するもの
であり、とにかく本発明の範囲を限定するものとみなすものではない。特に記述
がなければ、全温度はセ氏温度である。
実施例’
下記の実施例において、下記の略号は下記の意味を有する。略号が定義されて
いないならば、その一般的に許容されている意味を持つものとする。
ＢＯＣ ＝ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ｂｄ ＝ ブロード二重線
ｂｓ ＝ ブロード一重線
Ｃｂｚ ＝ カルボベンジルオキシ
ｃｃ ＝ 立方センチメーター
ＣＤＩ ＝ １,１'−カルボニルジイミダゾール
ｄ ＝ 二重線
ｄｄ ＝ 二重線の二重線
ＤＭＦ ＝ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ＝ ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ ＝ １−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイ
ミド・塩酸塩
ＥＤＴＡ ＝ エチレンジアミン四酢酸
ｅｑ． ＝ 当量
エーテル ＝ ジエチルエーテル
ｇ ＝ グラム
Ｌ ＝ リットル
ｍ ＝ 多重線
Ｍ ＝ モル
ｍａｘ ＝ 最大
ｍｇ ＝ ミリグラム
ｍｉｎ． ＝ 分
ｍＬ ＝ ミリリットル
ｍＭ ＝ ミリモルの
ｍｍｏｌ ＝ ミリモル
Ｎ ＝ 規定
ｎｇ ＝ ナノグラム
ｎｍ ＝ ナノメートル
ＯＤ ＝ 光学密度
ｐｇ ＝ ピコグラム
ｐＭ ＝ ピコモルの
ｐｓｉ ＝ ポンド／平方インチ
ｑ ＝ 四重線
ｑｕｉｎｔ.＝ 五重線
ｒｐｍ ＝ 回転／分
ｒｔ ＝ 室温
ｓ ＝ 一重線
ｓｅｐｔ ＝ 七重線
ｔ ＝ 三重線
ＴＨＦ ＝ テトラヒドロフラン
ｔｌｃ ＝ 薄層クロマトグラフィー
μｇ ＝ マイクログラム
μＬ ＝ マイクロリットル
ＵＶ ＝ 紫外線
ｗ／ｖ ＝ 体積当りの重量
加えて、語句“アルドリッチ”とは、以下の製法中で使用した化合物もしくは
試薬がアルドリッチ社（Aldrich Chemical Company，Inc.，1001 West Saint Pa
ul Avenue，Milwaukee，WI 53233 USA）から商業的に入手可能であることを示し
；語句“バッケム”とは化合物もしくは試薬がバッケム・バイオサイエンス社（
Bachem Biosciences Inc.，3700 Horizon Drive，Renaissance at Gulph Mills
，King of Prussia，PA 19406 USA）から商業的に入手可能であることを示し；
語句“フルカ”とは化合物もしくは試薬がフルカ社（Fluka Chemical Corp.，98
0 South 2nd Street，Ronkonkoma NY 11779 USA）から商業的に入手可能である
ことを示し；語句“ランカスター”とは化合物もしくは試薬がランカスター社（
Lancaster Synthesis，Inc.，P．O．Box 100，Windham，NH 03087 USA）から商
業的に入手可能であることを示し；語句“シグマ”とは化合物もしくは試薬がシ
グマ社（Sigma，P．O．Box 14508，St．Louis，MO 63178 USA）から商業的に入
手可能であることを示し；語句“センケム”とは化合物もしくは試薬がセン社（
Senn Chemicals AG，P.O.Box 267，CH-9157 Dielsdorf，Switzerland）から商業
的に入手可能であることを示す。
以下の実施例中、全温度はセ氏温度であり（特に指示がなければ）、またこれ
らの実施例中に示す化合物の各々は、特に指示がなければ以下の一般的製法の一
つによって製造する。
一般的製法Ａ
還元的アミノ化反応
水素充填フラスコ中、アリールアミン／エタノール溶液に、２−オキソカルボ
ン酸エステル(例えば、ピルビン酸エステル)(１当量)、続いて１０％パラジウム
−炭素（アリールアミンに基づいて２５重量％）を加えた。反応が完結したこと
がｔｌｃによって示されるまで（３０分〜１６時間）、パールシェイカー（Parr
shaker）上、Ｈ2（２０ｐｓｉ）で水素化した。次いで、反応混合物をセライト
パッド545（アルドリッチ社から入手可能）のパッドを通してろ過し、回転エバ
ポレーターで遊離の溶媒を除去した。次いで、粗生成物残渣をさらにクロマトグ
ラフィーで精製した。
一般的製法Ｂ
アラニンのＮ−ヘテロアリール化
Ｌ−アラニン(１.１当量)およびＮａＯＨ(２当量)／ＤＭＳＯ溶液を、室温で
１時間撹拌し、次いで２−クロロベンゾトリアゾール(１当量)を加えた。混合物
を１００℃まで４時間加熱し、次いで室温まで冷却、氷上に注いだ。生成した水
溶液のｐＨを〜２に調節し、沈殿した固体をろ過によって除去した。次いで本固
体を１Ｎ ＮａＯＨ中に溶解し、生成した溶液をセライト545のパッドを通してろ
過した。該ろ液のｐＨを〜２に調節し、白色沈殿をろ過によって除去し、水洗し
て生成物を得た。
一般的製法Ｃ
遊離酸へのエステル加水分解反応
遊離酸へのエステル加水分解反応は従来の方法によって行なった。以下に、従
来の脱エステル化反応の２例を挙げる。
カルボン酸エステル化合物（例えば、一般的製法Ａでの還元的アミノ化により
Ｎ−アリールアミノ酸エステルを製造した）のＣＨ3ＯＨ／Ｈ2Ｏ（１：１）混
合物に、Ｋ2ＣＯ3（２〜５当量）を加えた。ｔｌｃにより反応が完結したことを
示すまで、該混合物を約５０℃まで０.５〜１.５時間加熱した。反応液を室温ま
で冷却し、メタノールを回転エバポレーターで除去した。残りの水溶液をｐＨ〜
２に調節し、生成物を柚出するために酢酸エチルを加えた。次いで、有機層を飽
和ＮａＣｌ水溶液で洗浄してＭｇＳＯ4で乾燥した。該溶液について回転エバポ
レーターで遊離の溶媒を除去して生成物を得た。
アミノ酸エステルをジオキサン／水（４：１）中に溶解し、そこにＬｉＯＨ（
〜２ｅｑ.）を加え、水に溶解し、加えた後の総溶媒がジオキサン：水（約２：
１）となるようにした。反応が完結するまで反応混合物を撹拌し、ジオキサンを
減圧下で除去した。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、層分離し、水層をｐＨ２に酸性
化した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し直し、有機層を併せてＮａ2ＳＯ4で乾燥、ろ
過後溶媒を減圧下で除去した。残渣を従来の方法（例えば、再結晶）によって精
製した。
次に、本後者の例を示す。３−ＮＯ2フェニルアセチルアラニンのメチルエス
テル(９.２７ｇ、０.０３４８ｍｏｌ)をジオキサン(６０ｍＬ)−Ｈ2Ｏ(１５ｍＬ
)に溶解し、ＬｉＯＨ(３.０６ｇ、０.０７３１ｍｏｌ)を加え、Ｈ2Ｏ(１５ｍＬ
）中に溶解した。４時間撹拌後、ジオキサンを減圧下で除去し、残渣をEtＯＡｃ
で希釈、層分離し、水層をｐＨ２に酸性化した。水層をＥｔＯＡｃ（４×１００
ｍＬ）で抽出し直し、有機層を併せてＮａ2ＳＯ4で乾燥、ろ過後溶媒を減圧下で
除去した。残渣を再結晶(ＥｔＯＡｃ／イソオクタンから)して、生成物（７.５
ｇ、８５％）を得た。
元素分析（Ｃ11Ｈ12Ｎ2Ｏ5として）：
理論値：Ｃ、５２.３８；Ｈ、４.８０；Ｎ，１１.１１、
実測値：Ｃ、５２.５４；Ｈ、４.８５；Ｎ，１１.０８。
[α]23＝−２９.９ @５８９ｎｍ。
一般的製法Ｄ
第１のＥＤＣカップリング製法
ＣＨ2Ｃｌ2の目的の酸およびアミノエステル／アミドの１：１混合物に、
０℃でトリエチルアミン(１.５当量)、続いてヒドロキシベンゾトリアゾール・
１水和物(２.０当量)、次いでエチル−３−(３−ジメチルアミノ)プロピルカル
ボジイミド・ＨＣｌ(ＥＤＣ)(１.２５当量)を加えた。反応液を室温で終夜撹拌
し、次いで分液ロウトに移し、水、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、１Ｎ ＨＣｌおよび
飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄、次いでＭｇＳＯ4で乾燥した。該溶液について回転
エバポレーターで遊離の溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。
一般的製法Ｅ
第２のＥＤＣカップリング製法
該カルボン酸をジクロロメタン中に溶解した。該アミノ酸エステル／アミド(
１ｅｑ.)、Ｎ−メチルモルホリン(５ｅｑ.)およびヒドロキシベンゾトリアゾー
ル・１水和物(１.２ｅｑ.)を連続して加えた。溶液が０℃に達するまで、氷浴を
丸底フラスコに対して用いた。温度が達した際、１−(３−ジメチルアミノプロ
ピル)−３−エチルカルボジイミド・塩酸塩(ＥＤＣ)(１.２ｅｑ.)を加えた。溶
液を終夜撹拌し、窒素加圧下室温まで昇温した。硫酸ナトリウムで乾燥する前に
、有機層を飽和炭酸ナトリウム水溶液、０.１Ｍクエン酸および食塩水で洗浄す
ることで反応混合物をワークアップした。次いで、溶媒を除去して粗生成物を得
た。適当な溶媒中、フラッシュカラムクロマトグラフィー精製を行うことで純粋
な生成物を得た。
一般的製法ＦＢＯＣ−およびｔｅｒｔ−ブチルエステルの除去製法
ＢＯＣ−およびｔｅｒｔ−ブチルエステル化合物をＣＨ2Ｃｌ2およびトリフル
オロ酢酸(１：１)混合物中に加え、ｔｌｃにより変換が完結したことを示すまで
、典型的に２時間撹拌した。次いで、溶液を乾固するまで蒸発して残渣を酢酸エ
チルに溶かした。ＢＯＣ保護化合物の場合は、溶液を希ＨＣｌで洗浄した。水層
を塩基性ｐＨに調節し、次いで酢酸エチルで抽出した。ｔｅｒｔ−ブチルエステ
ル化合物の場合は、溶液を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で洗浄した。次いで水層をｐ
Ｈ２に調節し、酢酸エチルで抽出した。次いで、いずれの場合の有機層をも飽
和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。溶液について、回転エバポ
レーターで遊離の溶媒を蒸発して生成物を得た。
一般的製法Ｇ
Ｎ−アルキル化法
３−アミノキノリン／ＣＨ2Ｃｌ2溶液に、トリエチルアミン(１.１当量)、続
いてｐ−ニトロベンゼンスルホニル(ノシル)クロリド／ＣＨ2Ｃｌ2溶液を加えた
。反応液を室温で５時間撹拌し、次いでジ−ノシル化アミノキノリンをろ過する
ことで単離し、酢酸エチルで洗浄した。次いで、本物質をジオキサンおよび１Ｎ
ＮａＯＨ(１：１)混合物に加え、本溶液を６０℃まで４時間加熱すると、その
間全ての固体は溶解した。反応液を室温まで冷却し、ついでｐＨを〜４にまで調
節した。沈殿したモノ−ノシル化アミノキノリンをろ過することで除去し、水洗
した。本化合物／ＴＨＦ溶液を−７８℃のＮａＨ／ＴＨＦ懸濁液に加え、次いで
２−ブロモプロピオン酸エチルを加えた。反応液を室温まで昇温し、次いで４日
間還流した。粗反応混合物について、回転エバポレーターで遊離の溶媒を蒸発し
、該アルキル化、ノシル化アミノキノリンをクロマトグラフィー精製することで
得た。次いで、本生成物をＤＭＦに溶解し、Ｋ2ＣＯ3(３当量)、続いてチオフェ
ノール(１.２当量)を加えた。反応液を室温で終夜撹拌した。次いで水およびエ
ーテルで反応を停止させ、有機層を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液および飽和ＮａＣｌ
水溶液で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4で乾燥した。溶液について、回転エバポレー
ターで遊離の溶媒を蒸発して粗生成物を得、次いでこのものをクロマトグラフィ
ーにより精製した。
一般的製法Ｈ
エステル／アミド交換反応
目的のアミン(３当量)／１,２−ジクロロエタン溶液に、トリエチルアルミニ
ウム(５.２当量)を加え、この際シリンジで該溶液の水面下に加えるようにした
。室温で３０分間撹拌後、１.２−ジクロロエタンに溶解した目的のエステルの
溶液を加えた。ｔｌｃにより変換が完結したことを示すまで、典型的に３時間反
応
液を還流した。次いで、反応液を０℃まで冷却し、１０％ＨＣｌで反応を停止さ
せ（注意：酸を添加する間ある程度発泡が起こるように、酸をゆっくりと加える
べきである）。それらの生成物が水性の酸に溶解しない場合、混合物を分液ロウ
トに移し、層分離した。該水層を酢酸エチルで洗浄し、有機層を飽和ＮａＣｌ水
溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥、減圧下で濃縮すると粗生成物が残った。
水性の酸に可溶な生成物の場合、反応を停止後、反応容量を減圧下で開始容量
の〜１／３にまで減少させた。生成した溶液に、２０％酒石酸ナトリウムカリウ
ム(ロッシェ塩)および酢酸エチルを加えた。溶液のｐＨを〜１３に調節し、該ア
ルミニウム塩を水溶液に溶解させた。有機層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出
した。有機溶液を併せて、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥、減
圧下で濃縮すると粗生成物が残った。
一般的製法Ｉ
アルコールへのエステル還元反応
０℃の出発エステル／無水ＴＨＦ溶液に、ＬｉＢＨ4(１.０当量)／ＴＨＦを加
えた。溶液を室温で終夜撹拌し、次いで水で反応を停止させた。該ＴＨＦを回転
エバポレーターで蒸発させ、酢酸エチルを加え、層分離した。有機層を飽和Ｎａ
Ｃｌ水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥、減圧下で濃縮すると生成物が残った。
一般的製法Ｊ
トリフレート置換反応
０℃のＲ−(＋)−乳酸イソ−ブチル／ＣＨ2Ｃｌ2溶液に、トリフルオロメタン
スルホン酸無水物(１.１当量)を加えた。室温で２０分攪拌後、２,６−ルチジン
(１.１当量)を加え、１０分間攪拌を続けた。次いで、本溶液をアリールアミン(
１当量)およびジイソプロピルエチルアミン(１当量)／ＣＨ2Ｃｌ2もしくはＣＨ3
ＮＯ2を入れたフラスコに０℃で移した。反応液を終夜室温に保ち、次いで回転
エバポレーターで遊離の溶媒を除去した。残渣を酢酸エチルに溶解し、５％クエ
ン酸、続いて飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、次いで溶液について回転エバポレー
ターで遊離の溶媒を除去して粗生成物を得、次いでこのものをクロマト
グラフィーにより精製した。
一般的製法Ｋ
アミノ酸由来のメチルエステルの形成
アミノ酸（アミノ酸もしくはアミノ酸・塩酸塩）をメタノール中に懸濁し、０
℃で冷蔵した。ＨＣｌガスを本溶液に５分間吹込んだ。反応液を室温まで昇温さ
せ、次いで４時間撹拌した。次いで、溶媒を除去して目的のアミノ酸メチルエス
テル・塩酸塩を得た。本化合物は通常、さらに精製せずに用いた。
実施例Ａ
Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンの合成
米国特許第3,598,859中に示した製法（該開示をそっくりそのまま本明細書中
に引用する）を用いて、Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンを製
造した。特に、３,４−ジクロロアニリン(１当量)(アルドリッチ)／イソプロパ
ノール(３,４−ジクロロアニリンのモル当り、約５００ｍＬ)の溶液に、水(イソ
プロパノールのｍＬ当り、約０.０６ｍＬ)および２−クロロプロピオン酸(２当
量)(アルドリッチ)を加えた。本混合物を４０℃まで加温し、４〜５日間加熱還
流する前に、炭酸水素ナトリウム(０．２５当量)を連続して分けて加えた。冷却
後、反応混合物を水に注ぎ、未反応の３,４−ジクロロアニリンをろ過すること
で除去した。ろ液を濃塩酸でｐＨ３〜４に酸性化し、生成した沈殿をろ過、洗浄
し、乾燥して表題化合物（ｍ.ｐ.＝１４８〜１４９℃）を得た。
別法として、上記の一般的製法Ａに続き、３,４−ジクロロアニリン(アルドリ
ッチ)およびピルビン酸エチル(アルドリッチ)を用いて、油状のＮ−(３,４−ジ
クロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンエチルエステルを製造した。反応は、シリカ
ゲルｔｌｃ（Ｒf＝０.４、２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中）により追跡し、プレ
パラティブプレートクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：２５％ＥｔＯＡ
ｃ／ヘキサン）により精製した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ11Ｈ13Ｃｌ2ＮＯ2（ＭＷ＝２６２.１４）；マス分光学（ＭＨ+）２６３。
例えば、一般的製法Ｃで本エステルを加水分解反応することにより、表題化合
物を得る。
実施例Ｂ
Ｎ−(３.５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンの合成
米国特許第3,598,859号中に示す製法（もしくは上記実施例Ａ）を用いて、Ｎ
−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンを３,５−ジクロロアニリン(ア
ルドリッチ)および２−クロロプロピオン酸(アルドリッチ)を用いて製造した。
実施例Ｃ
Ｎ−(３.５−ジフルオロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンの合成
米国特許第3,598,859号中に示す製法（もしくは上記実施例Ａ）を用いて、Ｎ
−(３,５−ジフルオロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンを３,５−ジフルオロアニリ
ン(アルドリッチ)および２−クロロプロピオン酸(アルドリッチ)を用いて製造し
た。
実施例Ｄ
Ｌ−バリンＮ,Ｎ−ジメチルアミドの合成
Ｃｂｚ−Ｌ−バリン(２.５１ｇ、１０ｍｍｏｌ)(バッケム)／ＤＭＦ(２０ｍＬ
)撹拌溶液に、ＣＤＩ(１.４６ｇ、９ｍｍｏｌ)を加え,混合物を５０分間撹拌し
た。本混合物に、ジメチルアミン(６ｍＬ、１２ｍｍｏｌ)(アルドリッチ)／ＴＨ
Ｆ(５ｍＬ)を加え、反応混合物を１８時間撹拌した。該混合物を酢酸エチル(１
００ｍＬ)中に溶かし、１０％ＨＣｌ(３×４０ｍＬ)、食塩水(１０ｍＬ)および
２０％炭酸カリウム(２×５０ｍＬ)で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。混合物を
ろ過、濃縮して、Ｃｂｚ−Ｌ−バリンＮ,Ｎ−ジメチルアミドを得、このも
のを１０％Ｐｄ／Ｃを触媒として用いた標準条件で水素化し、Ｃｂｚ基を除去し
て油状の表題化合物を得た。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
実施例Ｅ
Ｌ−バリンＮ−メチルアミドの合成
実施例Ｄ中に記載の製法に従い、ジメチルアミンの代わりにメチルアミンを用
いて、表題化合物を得た。表題化合物は油状物であった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
実施例Ｆ
ＢＯＣ−ノルロイシンアミドの合成
ＢＯＣ−ノルロイシン(３.４７ｇ、１５ｍｍｏｌ)(バッケム)、１−ヒドロキ
シベンゾトリアゾール・１水和物(３.４４ｇ、２２.５ｍｍｏｌ)およびジクロロ
メタン(５０ｍＬ)の撹拌混合物に０℃で、ＥＤＣ(３.４５ｇ、１.２ｍｍｏｌ)を
加えた。生成した混合物を０℃で１時間撹拌し、次いでアンモニアガスを該混合
物に１０分間吹込んだ。冷浴を用いて室温まで昇温させ、混合物を１８時間撹拌
した。混合物を乾固するまで蒸発させ、トリチュレート(２０％Ｎａ2ＣＯ3を使
用)した。生成した固体をろ過して集め、水洗して表題化合物(２.６９ｇ、１１.
７ｍｍｏｌ、７８％)を得た。
実施例Ｇ
Ｎ−[３,５−ジ(トリフルオロメチル)フェニル]−Ｌ−アラニンの合成
工程Ａ：一般的製法Ｊに従い、３,５−ジ(トリフルオロメチル)アニリン(アル
ドリッチ)およびＲ−(＋)−乳酸イソブチル(アルドリッチ)を用いて、油状のＮ
−[３,５−ジ(トリフルオロメチル)フェニル]−Ｌ−アラニンイソブチルエステ
ルを得た。反応は、シリカゲルｔｌｃ（Ｒf＝０.３８、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキ
サン中）により追跡した。プレパラティブプレート薄層クロマトグラフィー（溶
出液：１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を行うことで精製した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ15Ｈ17Ｆ6ＮＯ2（ＭＷ＝３５７．３０）；マス分光学（ＭＨ+）３５８。工程Ｂ：
次いで、Ｎ−[３,５−ジ(トリフルオロメチル)フェニル]−Ｌ−アラニ
ンイソブチルエステルを一般的製法Ｃに従い、ＴＨＦ中水酸化リチウムを用いて
加水分解した。
実施例Ｈ
Ｎ−(３,５−ジメトキシフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンの合成
表題化合物を米国特許第3,598,859中に記載の製法（もしくは上記実施例Ａ）
に従い、３,５−ジメトキシアニリン(アルドリッチ)および２−クロロプロピオ
ン酸(アルドリッチ)を用いて製造した。
実施例Ｉ
Ｎ−(３,４−ジメトキシフェニル)グリシンの合成
表題化合物を米国特許第3,598,859中に示す製法を用いて、Ｎ−(３,４−ジク
ロロフェニル)グリシンを３,４−ジクロロアニリン(アルドリッチ)および２−ク
ロロ酢酸(アルドリッチ)を用いて製造した。
実施例Ｊ
Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−フェニルグリシンの合成
３,５−ジクロロアニリン(１ｅｑ.)(アルドリッチ)およびα−ブロモフェニル
酢酸メチル(１ｅｑ.)(アルドリッチ)をＮ−メチルモルホリン(アルドリッチ)と
共に、エタノール中３日間還流した。標準ワークアップ後、残渣を結晶化(酢酸
エチル／ヘキサン／エーテル／水から)して、Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−
Ｄ,Ｌ−フェニルグリシンメチルを得た。次いで、該メチルエステルをメタノー
ル中１Ｍ ＮａＯＨ／水を用いて加水分解させて表題化合物を得た。
実施例１
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−バリンメチル
エステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｌ−バリンメチル
エステル・塩酸塩(シグマ)およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニン(上記
実施例Ａ由来)を用いて、表題化合物を製造した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
実施例２
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−バリンＮ−イ
ソ−ブチルアミド
上記一般的製法Ｈに従い、Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−ア
ラニル]−Ｌ−バリンメチルエステル(上記実施例１由来)およびイソブチルアミ
ン(アルドリッチ)を用いて、油状の表題化合物を製造した。反応は、シリカゲル
ｔｌｃ（Ｒf＝０.３、１０％メタノール／ジクロロメタン中）により追跡した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ18Ｈ27Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2（ＭＷ＝３８８.３）；マス分光学（ＭＨ+）３８９。
実施例３
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−トレオニンメ
チルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｎ−(３,４−ジク
ロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)およびＬ−トレオニンメチ
ルエステル・塩酸塩(シグマ)を用いて、油状の表題化合物を製造した。該反応生
成物をシリカゲルクロマトグラフィー(溶出液、５０％酢酸エチル／ヘキサン)に
より精製を行った。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ14Ｈ18Ｎ2Ｏ4Ｃｌ2（ＭＷ＝３４９.２２）；マス分光学（ＭＨ+）３４９。
実施例４
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−バリンエチル
エステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｎ−(３,４−ジク
ロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)およびＬ−バリンエチルエ
ステル・ＨＣｌを用いて、油状の表題化合物を製造した。該反応生成物をシリカ
ゲルクロマトグラフィー(溶出液、３５％酢酸エチル／ヘキサン)により精製を行
った。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ16Ｈ22Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2（ＭＷ＝３６１.２７）；マス分光学（ＭＨ+）３６１。
実施例５
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−バリンｔｅｒ
ｔ−ブチルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｎ−(３,４−ジク
ロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)およびＬ−バリンｔｅｒｔ
−ブチルエステル・塩酸塩(シグマ)を用いて、油状の表題化合物を製造した。該
反応生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(溶出液、２５％酢酸エチル／ヘキ
サン)により精製を行った。
ＮＭＲデータは以下の通りである： Ｃ18Ｈ26Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2（ＭＷ＝３８９.３３）；マス分光学（ＭＨ+）３８９。
実施例６
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−バリンアミド
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｎ−(３,４−ジク
ロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)およびＬ−バリンアミド・
塩酸塩(シグマ)を用いて、固体(融点：１５６〜１５８℃)の表題化合物を製造し
た。該反応生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(溶出液、ＣＨ2Ｃｌ2：Ｍｅ
ＯＨ：ＮＨ4ＯＨ(９０：１０：１))により精製を行った。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ14Ｈ19Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2（ＭＷ＝３３１）；マス分光学（ＭＨ+）３３２。
実施例７
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニンＮ−(１−ヒドロキシ−
３−メチル−２−ブチル)アミド
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｎ−(３,４−ジク
ロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)およびバリノール(シグマ)
を用いて、油状の表題化合物を製造した。該反応生成物をシリカゲルクロマトグ
ラフィー(溶出液、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン(４５：５５)、ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ
：ＮＨ4ＯＨ(９０：１０：１))により精製を行った。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ14Ｈ20Ｎ2Ｏ2Ｃｌ2（ＭＷ＝３１９.２３）；マス分光学（ＭＨ+）３１９。
実施例８
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニル]−Ｌ−バリンＮ,Ｎ−ジ
メチルアミド
一般的製法Ｄに従い、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミド(上記実施例Ｄ由来)およびＮ−(
３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、固
体(融点＝１４５〜１６０℃)の表題化合物を製造した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ16Ｈ23Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2（ＭＷ＝３６０.２９）；マス分光学（ＭＨ+）３６０。
実施例９
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−バリンＮ−メ
チルアミド
一般的製法Ｄに従い、Ｌ−バリンＮ−メチルアミド(上記実施例Ｅ由来)および
Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて
、固体(融点＝１４５〜１６０℃)の表題化合物を製造した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ15Ｈ21Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2（ＭＷ＝３４６.２６）；マス分光学（ＭＨ+）３４６。
実施例１０
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−アラニンメチ
ルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行わない)に従い、Ｌ−アラニンメチル
エステル・塩酸塩(シグマ)およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラ
ニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、油状の表題化合物を製造した。反応は、ｔｌ
ｃ（Ｒf＝０.２４、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１)中）により追跡し、生成物を
フラッシュクロマトグラフィー(溶出液、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１))により
精製した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ13Ｈ16Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2（ＭＷ＝３１９.１９）；マス分光学（ＭＨ+）３１９。
実施例１１
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニル]−Ｌ−ロイシンメチル
エステル
一般的製法Ｄに従い、Ｌ−ロイシンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)およびＮ
−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、
固体(融点＝１２０〜１３２℃)の表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf
＝０.４９、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１)中）により追跡し、生成物をフラッ
シュクロマトグラフィー(溶出液、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１))により精製し
た。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ16Ｈ22Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2（ＭＷ＝３６１.２７）；マス分光学(ＭＨ+)３６１.１。
実施例１２
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニル]−Ｌ−フェニルアラニ
ンメチルエステル
一般的製法Ｄに従い、Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)
およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を
用いて、固体(融点＝１２２〜１２４.５℃)の表題化合物を製造した。反応は、
ｔｌｃ（Ｒf＝０.４７、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１)中）により追跡し、生成
物をフラッシュクロマトグラフィー(溶出液、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１))を
行うことで精製した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ19Ｈ20Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2（ＭＷ＝３９５.２９）；マス分光学（ＭＨ+）３９５。
実施例１３
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−イソロイシン
メチルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｌ−イソロイシン
メチルエステル・塩酸塩(シグマ)およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ
−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、固体(融点＝９５.５〜１０１.５℃)の
表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.６２、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン
(１：１)中）により追跡し、生成物をフラッシュクロマトグラフィー(溶出液、
ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１))により精製した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ16Ｈ22Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝３６１.２７)；マス分光学(ＭＨ+)３６１.１。
実施例１４
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノペ
ンタン酸メチルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｌ−ノルバリンメ
チルエステル・塩酸塩(センケム)およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ
−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、固体(融点＝１５０〜１５３℃)の表題
化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.５７、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１
：１)中）により追跡し、生成物をフラッシュクロマトグラフィー(溶出液、Ｅｔ
ＯＡｃ：ヘキサン(１：１))により精製した。
ＮＭＲデータは以下の通りである： Ｃ15Ｈ20Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝３４７.２４)；マス分光学(ＭＨ+)３４７。
実施例１５
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノヘ
キサン酸メチルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｌ−ノルロイシン
メチルエステル・塩酸塩(シグマ)およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)アラニ
ン(上記実施例Ａ由来)を用いて、固体(融点＝１６３〜１６５℃)の表題化合物を
製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.５５、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１)中）
により追跡し、生成物をフラッシュクロマトグラフィー(溶出液、ＥｔＯＡｃ：
ヘキサン(１：１))を行うことで精製した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ16Ｈ22Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝３６１.２７)；マス分光学(ＭＨ+)３６１。
実施例１６
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−トリプトファ
ンメチルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｌ−トリプトファ
ンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,
Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、固体(融点＝５４〜６６℃)の表題化
合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.４３、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：
１)中）により追跡し、生成物をフラッシュクロマトグラフィー(溶出液、ＥｔＯ
Ａｃ：ヘキサン(１：１))により精製した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ21Ｈ21Ｎ3Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝４３４.３３)；マス分光学(ＭＨ+)４３４。
実施例１７
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−アスパラギン
酸β−(ｔｅｒｔ−ブチルエステル)α−メチルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｌ−アスパラギン
酸β−(ｔｅｒｔ−ブチルエステル)α−メチルエステル・塩酸塩(バッケム)およ
びＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用い
て、表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.５６、ＥｔＯＡｃ：ヘキ
サン(１：１)中）により追跡し、生成物をフラッシュクロマトグラフィー(溶出
液、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１))により精製した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ18Ｈ24Ｎ2Ｏ5Ｃｌ2(ＭＷ＝４１９.３１)；マス分光学(ＭＨ+)４１８。
実施例１８
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−アスパラギン
酸α−メチルエステル
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−アスパラギン
酸β−(ｔｅｒｔ−ブチルエステル)α−メチルエステル(上記実施例１７由来)の
ｔｅｒｔ−ブチルエステル基を一般的製法Ｆで除去して、固体(融点＝５３.５〜
５６℃)の表題化合物を得た。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.５４、ＥｔＯＡｃ：ヘ
キサン(１：１)中）により追跡した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ14Ｈ16Ｎ2Ｏ5Ｃｌ2(ＭＷ＝３６３.２０)；マス分光学(ＭＨ+)３６３。
実施例１９
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｎε−ＢＯＣ−Ｌ
−リシンメチルエステル
一般的製法Ｄに従い、Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上
記実施例Ａ由来)およびＮε−ＢＯＣ−Ｌ−リシンメチルエステル・塩酸塩(バッ
ケム)を用いて、油状の表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.２３
、４５％酢酸エチル／ヘキサン中）により追跡した。
ＮＭＲデータは以下の通りである： 実施例２０
Ｎ−[Ｎ−ベンゾチアゾール−６−イル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノ
ヘキサン酸メチルエステル
工程Ａ：Ｎ−[Ｎ−ベンゾチアゾール−６−イル)−Ｄ,Ｌ−アラニンの合成
６−アミノベンゾチアゾール(１グラム)(ランカスター)／ジクロロメタン(６
０ｍＬ)溶液を、ピリジン(０.６３グラム)、次いでトリフルオロ酢酸無水物(２.
１グラム)を用いて室温で処理した。反応液を３持間撹拌し、その間反応初期の
温かい反応混合物を室温まで冷却した。混合物を５％クエン酸水溶液で洗浄し、
ＭｇＳＯ4で乾燥、溶媒を除去してクリーム色に着色した固体の６−アミノベン
ゾトリアゾールトリフルオロアセトアミドを定量的に得、このものを直ちに以下
の反応に用いた。
一部の６−アミノベンゾトリアゾールトリフルオロアセトアミド(３００ｍｇ)
をＴＨＦ(３５ｍＬ)中に溶解し、ＫＨ(１.２ｅｑ.)を室温で加えた。溶液を５時
間還流し冷却して、１８−クラウン−６(アルドリッチ)を２−ブロモプロピオン
酸エチル(３３１ｍｇ)(アルドリッチ)と共に加え、生成した混合物を３６時間還
流した。反応混合物を冷却し、溶媒を減圧下で除去して残渣を酢酸エチル中に溶
解した。有機物を水洗した。水層のｐＨをｐＨ５に調節し、酢酸エチルで抽出し
た。有機部分を併せてＭｇＳＯ4で乾燥、溶媒を除去した。粗物質をプレパラテ
ィブｔｌｃ(溶出液、ジクロロメタン／メタノール(９４：４))により精製してＮ
−(ベンゾチアゾール−６−イル)−Ｄ,Ｌ−アラニンエチルエステル（Ｒf＝０.
５)を得た。本物質をメタノールおよび炭酸カリウム(５ｅｑ.)で還流下処理し、
次いで冷却して溶媒を除去した。残渣を水および酢酸エチルに溶かした。該水層
をｐＨ２に調節し、酢酸エチルで抽出した。該酢酸エチル抽出液を乾燥し、溶媒
を除去してＮ−(ベンゾトリアゾール−６−イル)−Ｄ,Ｌ−アラニンを得た。
工程Ｂ：Ｎ−[Ｎ−ベンゾトリアゾール−６−イル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)
−２−アミノヘキサン酸メチルエステルの合成
一般的製法Ｄ(反応溶媒としてＤＭＦ、抽出溶媒として酢酸エチルを用いて、
かつ１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行わない)に従い、Ｌ−ノルロイシンメチルエステル
・塩酸塩(シグマ)およびＮ−(ベンゾトリアゾール−６−イル)−Ｄ,Ｌ−アラニ
ン(上記工程Ａ由来)を用いて、表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝
０.２８、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１)中）により追跡し、生成物をフラッシ
ュクロマトグラフィー(溶出液、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１))により精製を行
った。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ17Ｈ23Ｎ3Ｏ3Ｓ2(ＭＷ＝３４９.４６)；マス分光学(ＭＨ+)３５０。
実施例２１
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−リシンメチル
エステル
一般的製法Ｆに従い、Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニ
ル]−Ｎε−ＢＯＣ−Ｌ−リシンメチルエステル(上記実施例１９由来)を用いて
、油状の表題化合物を製造した。反応生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(
溶出液、ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ：ＮＨ4ＯＨ(８９：１０：１))により精製を行な
った。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ16Ｈ23Ｎ3Ｏ3Ｃｌ2（ＭＷ＝３７６.２８）。
実施例２２
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−チロシンメチ
ルエステル
上記一般的製法Ｄに従い、Ｌ−チロシンメチルエステル(シグマ)およびＮ−(
３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、ア
ラニンについての立体異性体混合物である表題化合物を製造した。反応は、ｔｌ
ｃ（Ｒf＝０.２９、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2中）により追跡し、フラッシュ
クロマトグラフィー(溶出液、１０％メタノール／ジクロロメタン)により精製を
行った。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ19Ｈ20Ｎ2Ｏ4Ｃｌ2（ＭＷ＝４１１.２８）。
実施例２３
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−アラニンメチ
ルエステル
一般的製法Ｄに従い、Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上
記実施例Ｂ由来)およびＬ−アラニンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)を用いて
、油状の表題化合物を製造した。該反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー
(溶出液、５０％酢酸エチル／ヘキサン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ13Ｈ16Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝３１９.１９)；マス分光学(ＭＨ+)３１９。
実施例２４
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノペ
ンタン酸メチルエステル
一般的製法Ｄに従い、Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上
記実施例Ｂ由来)およびＬ−ノルバリンメチルエステル・塩酸塩(センケム)を用
いて、表題化合物を製造した。該反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー(
溶出液、５０％酢酸エチル／ヘキサン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ15Ｈ20Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝３４７.２４)；マス分光学(ＭＨ+)３４６。
実施例２５
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニル]−Ｌ−フェニルアラニ
ンメチルエステル
一般的製法Ｄに従い、Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンおよ
びＬ−フェニルアラニンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)を用いて、表題化合物
を製造した。該反応生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(溶出液、５０％酢
酸エチル／ヘキサン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ19Ｈ20Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝３９５.２９)；マス分光学(ＭＨ+)３９４。
実施例２６
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−アスパラギン
酸β−(メチルエステル)α−メチルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行わない)に従い、Ｌ−アスパラギン酸
β−(メチルエステル)α−メチルエステル(シグマ)およびＮ−(３,４−ジクロロ
フェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、固体(融点＝１１３.
５〜１１８℃）の表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.２９、１０
％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中）により追跡し、該生成物をフラッシュクロマトグラ
フィー(溶出液、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン(１：１))により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである： Ｃ15Ｈ18Ｎ2Ｏ5Ｃｌ2(ＭＷ＝３７７.２３)；マス分光学(ＭＨ+)３７７。
実施例２７
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｎ'−１−ベンジ
ル)−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行わない)に従い、１−ベンジル−Ｌ−
ヒスチジンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)およびＮ−(３,４−ジクロロフェニ
ル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、固体(融点＝４９〜５１℃)
の表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.２１、５％メタノール／ジ
クロロメタン中）により追跡し、該生成物をフラッシュクロマトグラフィー(溶
出液、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン(１：１))により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ23Ｈ24Ｎ4Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝４７５.３８)；マス分光学(ＭＨ+)４７５。
実施例２８
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−グルタミン酸
β−(ｔｅｒｔ−ブチルエステル)α−メチルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行わない)に従い、Ｌ−グルタミン酸β
−(ｔｅｒｔ−ブチルエステル)α−メチルエステル・塩酸塩(バッケム)およびＮ
−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、
油状の表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.５２および０.５９、
Ｅｔ０Ａｃ／ヘキサン(１：１)中）により追跡し、該生成物をフラッシュクロマ
トグラフィー(溶出液、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン(１：１))により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ19Ｈ26Ｎ2Ｏ5Ｃｌ2(ＭＷ＝４３３.３４)；マス分光学(ＭＨ+)４３２。
実施例２９
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−グルタミン酸
α−メチルエステル
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]グルタミン酸β−
(ｔｅｒｔ−ブチルエステル)α−メチルエステル(上記実施例２８由来)のｔｅｒ
ｔ−ブチルエステル基を一般的製法Ｆ(ＮａＨＣＯ3での洗浄を省き、生成物を酢
酸エチル層から回収した)で除去して固体(融点＝４２〜４５℃)の表題化合物を
得た。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.４２および０.５０、１０％メタノール／ジク
ロロメタン中）により追跡した。
ＮＭＲデータは以下の通りである： Ｃ15Ｈ18Ｎ2Ｏ5Ｃｌ2(ＭＷ＝３７７.２３)。
実施例３０
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニル]−Ｌ−ロイシンアミド
一般的製法Ｄに従い、Ｌ−ロイシンアミド・塩酸塩(シグマ)およびＮ−(３,
４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、表題化
合物を製造した。次いで、本化合物をカラムクロマトグラフィー(溶出液、最初
にＥｔＯＡｃ／ヘキサン(１：１)、次いで５％ＭｅＯＨ／ジクロロメタン)によ
り精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ15Ｈ21Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2(ＭＷ＝３４６.２６)；マス分光学(ＭＨ+)３４６。
実施例３１
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(３,５−ジヨード
)−Ｌ−チロシンメチルエステル
一般的製法Ｄに従い、３,５−ジヨード−Ｌ−チロシンメチルエステル・塩
酸塩(バッケム)およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記
実施例Ａ由来)を用いて、アラニンについての立体異性体混合物である表題化合
物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.２９、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2中
）により追跡し、フラッシュクロマトグラフィー(溶出液、１０％メタノール／
ジクロロメタン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ19Ｈ18Ｎ2Ｏ4Ｃｌ2Ｉ2(ＭＷ＝６６３.０８)；マス分光学(ＭＨ+)６６３。
実施例３２
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(３−ヨード)−Ｌ
−チロシンメチルエステル
一般的製法Ｄに従い、３−ヨード−Ｌ−チロシンメチルエステル・塩酸塩（
一般的製法Ｋに従い、３−ヨード−Ｌ−チロシン(アルドリッチ)を用いて製造）
およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を
用いて、アラニンについての立体異性体混合物である表題化合物を製造した。反
応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.２９、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2中）により追跡し、
フラッシュクロマトグラフィー(溶出液、１０％メタノール／ジクロロメタン)
により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである： Ｃ19Ｈ19Ｎ2Ｏ4Ｃｌ2I(ＭＷ＝５３７.１８)；マス分光学(ＭＨ+)５３８。
実施例３３
一般的製法および本明細書に記載の実施例に従い、以下の化合物：
Ｎ−[Ｎ−(４−クロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−フェニルアラニンメ
チルエステルを製造可能である。
実施例３４
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)グリシル]−(Ｓ)−２−アミノペンタン
酸メチルエステル
一般的製法Ｄに従い、Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)グリシン(上記実施例
Ｉ由来)およびＬ−ノルバリンメチルエステル・塩酸塩(センケム)を用いて、表
題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.３２、５０％酢酸エチル／ヘキ
サン中）により追跡し、シリカゲルクロマトグラフィー(溶出液、酢酸エチル／
ヘキサン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ14Ｈ18Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝３３３.２２)；マス分光学(ＭＨ+)３３４。
実施例３５
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｎε−(ヘキサノ
イル)−Ｌ−リシンメチルエステル
一般的製法Ｄに従い、Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラ
ニル]−Ｌ−リシンメチルステル(上記実施例２１由来)およびヘキサン酸(アルド
リッチ)を用いて、表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.３８、６
０％ＣＨ2Ｃｌ2／１０％ヘキサン／２７％ＥｔＯＡｃ／３％ＭｅＯＨ中)により
追跡し、フラッシュクロマトグラフィー(溶出液、６０％ＣＨ2Ｃｌ2／１０％ヘ
キサン／２７％ＥｔＯＡｃ／３％ＭｅＯＨ)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ22Ｈ33Ｎ3Ｏ4Ｃｌ2(ＭＷ＝４７４.４３)；マス分光学(ＭＨ+)検出せず。
実施例３６
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−フェニルアラ
ニンアミド
一般的製法Ｄに従い、フェニルアラニンアミド(バッケム)およびＮ−(３,４
−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用いて、固体(融
点＝１７７〜１７９℃)の表題化合物を製造した。次いで、本表題化合物をトリ
チュレート(クロロホルムを使用)することにより精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである： Ｃ18Ｈ19Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2(ＭＷ＝３８０.２８)；マス分光学(ＭＨ+)３８０。
実施例３７
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノ
ヘキサン−(Ｎ−メチル)アミド
一般的製法Ｄに従い、Ｌ−ノルロイシンＮ−メチルアミド(ＢＯＣ−Ｌ−ノ
ルロイシン(バッケム)とメチルアミン(アルドリッチ)とを一般的製法Ｅを用いて
カップリング反応させ、続いて一般的製法Ｆを用いて除去することにより製造し
た）およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンを用いて、表題化
合物を製造した。次いで、本表題化合物を洗浄(炭酸カリウム水溶液を使用)する
ことにより精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ16Ｈ23Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2(ＭＷ＝３６０.２９)；マス分光学(ＭＨ+)３６０。
実施例３８および３９
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−β−シクロヘキシ
ルアラニンメチルエステル
一般的製法Ｄに従い、β−シクロヘキシルアラニンメチルエステル(一般的
製法Ｋを用いて、β−シクロヘキシルアラニン(バッケム)から製造した)および
Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンを用いて、アラニンについて
のジアステレオマー混合物である油状の表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ
（Ｒf＝０.２７(二番目の異性体)および０.３０(一番目の異性体)、３５％Ｅｔ
ＯＡｃ／ヘキサン中）により追跡し、フラッシュクロマトグラフィー(溶出液、
３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである(一番目の異性体--実施例３８)：
ＮＭＲデータは以下の通りである(二番目の異性体--実施例３９)：
Ｃ19Ｈ26Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝４０１.３４)；マス分光学(ＭＨ+)４０１。
実施例４０
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノヘ
キサンアミド
一般的製法Ｄに従い、Ｌ-ノルロイシンアミド(一般的製法Ｆを用いて、ＢＯ
Ｃ−Ｌ−ノルロイシンアミド(上記実施例Ｆ由来)から製造した)およびＮ−(３,
４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンを用いて、固体(融点＝１５６〜１６
１℃)の表題化合物を製造した。
ＮＭＲデータは以下の通りである： Ｃ15Ｈ21Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2(ＭＷ＝３４６.２６)；マス分光学(ＭＨ+)３４６。
実施例４１
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノ
ヘキサン−(Ｎ,Ｎ−ジメチル)アミド
一般的製法Ｄに従い、Ｌ−ノルロイシンＮ,Ｎ−ジメチルアミド(ＢＯＣ−Ｌ
−ノルロイシン(バッケム)とジメチルエチルアミン(アルドリッチ)とを一般的製
法Ｅを用いてカップリング反応させ、続いて一般的製法Ｆを用いてＢＯＣ−基を
除去することにより製造した)およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−
アラニンを用いて、固体(融点＝１３７〜１６０)の表題化合物を製造した。反応
は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.２０および０.２４、５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2中）によ
り追跡し、本化合物を沈降（水から）させることにより精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ17Ｈ25Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2(ＭＷ＝３７４.３１)；マス分光学(ＭＨ+)３７４。
実施例４２
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−メチオニンメ
チルエステル
一般的製法Ｄに従い、Ｌ−メチオニンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)およ
びＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ａ由来)を用い
て、ジアステレオマー混合物である表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf
＝０.３５、４３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中）により追跡し、本化合物をフラッ
シュクロマトグラフィー(溶出液、４３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン)により精製を行
なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ15Ｈ20Ｎ2Ｏ2Ｃｌ2Ｓ(ＭＷ＝３７９.３１)；マス分光学(ＭＨ+)３７９。
実施例４３
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノ
ヘキサン−(Ｎ,Ｎ−ジメチル)アミド
一般的製法Ｅに従い、Ｌ−ノルロイシンＮ,Ｎ−ジメチルアミド(ＢＯＣ−Ｌ
−ノルロイシン(バッケム)とジメチルアミン(アルドリッチ)とを一般的製法Ｅを
用いてカップリング反応させ、続いてＢＯＣ−基を一般的製法Ｆを用いて除去す
ることにより製造した)およびＮ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニ
ン(上記実施例Ｂ由来)を用いて、表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf
＝０.２５−０.３０、３％メタノール／ジクロロメタン中）により追跡し、本化
合物をクロマトグラフィー(溶出液、３％メタノール／ジクロロメタン)により精
製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである： Ｃ17Ｈ25Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2(ＭＷ＝３７４.３１)。
実施例４４
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノ
ヘキサンアミド
一般的製法Ｄに従い、Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(
上記実施例Ｂ由来)およびＬ−ノルロイシンアミド(上記実施例Ｆ由来)を用いて
、表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.１５、３％メタノール／ジ
クロロメタン中）により追跡し、本化合物を薄層クロマトグラフィー(溶出液、
３％メタノール／ジクロロメタン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ15Ｈ21Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2(ＭＷ＝３４６.２６)。
実施例４５
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミ
ノヘキサン−(Ｎ−メチル)アミド
一般的製法Ｄに従い、Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニンお
よびＬ−ノルロイシンＮ−メチルアミド(ＢＯＣ−Ｌ−ノルロイシン(バッケム)
とメチルアミン(アルドリッチ)とを一般的製法Ｅを用いてカップリング反応させ
、続いてＢＯＣ−基を一般的製法Ｆを用いて除去することにより製造した)を用
いて、表題化合物を製造した。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.２５、３％メタノール
／ジクロロメタン中）により追跡し、本化合物を薄層クロマトグラフィー(溶出
液、３％メタノール／ジクロロメタン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ16Ｈ23Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2(ＭＷ＝３６０.２９)。
実施例４６
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−ヒスチジンメ
チルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｌ−ヒスチジン
メチルエステル・塩酸塩(シグマ)およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ
−アラニンを用いて、固体(融点＝５５〜６０℃)の表題化合物を製造した。反応
は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.５２、１０％メタノール／ジクロロメタン中）により追跡
し、本化合物をフラッシュクロマトグラフィー(溶出液、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘ
キサン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ16Ｈ18Ｎ4Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝３８５.２５)；マス分光学(ＭＨ+)３８５。
実施例４７
Ｎ−[Ｎ−(キノリン−３−イル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノヘキ
サン酸メチルエステル
一般的製法Ｇを用い、続いて一般的製法Ｃ中に示す加水分解反応を行ない、
Ｎ−(キノリン−３−イル)−Ｄ,Ｌ−アラニンを製造した。次いで、本化合物を
Ｌ−ノルロイシンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)と一般的製法Ｄを用いてカッ
プリング反応させて、油状の表題化合物を得た。後者の反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝
０.７６、１０％メタノール／ジクロロメタン中；０.０７、ＥｔＯＡｃ：ヘキサ
ン(１：１)中）により追跡し、本化合物をフラッシュクロマトグラフィー(溶出
液、１０％メタノール／ジクロロメタン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ19Ｈ25Ｎ3Ｏ3(ＭＷ＝３４３.４３)。
実施例４８
Ｎ−[Ｎ−(ベンゾチアゾール−２−イル)−Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノ
ヘキサン酸メチルエステル
一般的製法Ｂに従い、２−クロロベンゾチアゾール(アルドリッチ)およびＬ
−アラニン(アルドリッチ)を用いて、Ｎ−(ベンゾチアゾール−２−イル)−Ｌ−
アラニンを製造した。次いで、本化合物をＬ−ノルロイシンメチルエステル・塩
酸塩(シグマ)と一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)を用いて、固
体(融点＝９９〜１２０℃)の表題化合物を得た。後者の反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝
０.４２、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１)中）により追跡し、生成物をプレパラ
ティブプレートクロマトグラフィー(溶出液、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン(１：１)お
よびＭｅＯＨ：ジクロロメタン(５：９５))により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：Ｃ17Ｈ23Ｎ3Ｏ3Ｓ(ＭＷ＝３４９.４６)；マス分光学(ＭＨ+)３５０。
実施例４９
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジフルオロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−Ｌ−アラニンメ
チルエステル
一般的製法Ｅに従い、Ｌ−アラニンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)および
Ｎ−(３,５−ジフルオロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ｃ由来)とを用
いて、固体(融点＝９３〜９５℃)の表題化合物を得た。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝
０.４、３％メタノール／ジクロロメタン中）により追跡し、生成物をフラッシ
ュクロマトグラフィー(溶出液、３％メタノール／ジクロロメタン)により精製を
行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ13Ｈ16Ｎ2Ｏ3Ｆ2(ＭＷ＝２８６.３)；マス分光学(ＭＨ+)２８７。
実施例５０
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジフルオロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミ
ノヘキサン酸メチルエステル
一般的製法Ｅに従い、Ｌ−ノルロイシンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)お
よびＮ−(３,５−ジフルオロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ｃ由来)と
を用いて、固体(融点＝９３〜９５℃)の表題化合物を得た。反応は、ｔｌｃ（Ｒf
＝０.６、３％メタノール／ジクロロメタン中）により追跡し、生成物をフラッ
シュクロマトグラフィー(溶出液、３％メタノール／ジクロロメタン)により精製
を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ16Ｈ22Ｎ2Ｏ3Ｆ2(ＭＷ＝３２８.３)；マス分光学(ＭＨ+)３２９。
実施例５１
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジフルオロフェニル)−Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノ
ヘキサンアミド
一般的製法Ｄ(溶媒としてＤＭＦを、抽出溶媒として酢酸エチルを用い、お
よび１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｌ−ノルロイシンアミド(ＢＯ
Ｃ−Ｌ−ノルロイシンアミド(上記実施例Ｆ由来)から一般的製法Ｆを用いて製造
した)およびＮ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニン(３,４−ジクロロフ
ェニルアラニン(アルドリッチ)およびＲ−(＋)−乳酸イソブチル(アルドリッチ)
とを一般的製法Ｊを用いて反応させ、続いて一般的製法Ｃを用いて加水分解反応
させることによって製造した)を用いて、固体(融点＝１８４〜１８６℃)の表題
化合物を得た。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.４８、１２％メタノール／ジクロロメ
タン中）により追跡し、本化合物をプレパラティブプレートクロマトグラフィー
(溶出液、１２％メタノール／ジクロロメタン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ15Ｈ21Ｎ3Ｏ2Ｃｌ2(ＭＷ＝３４６.２６)；マス分光学(ＭＨ+)３４６。
実施例５２
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノ
ヘキサン−(Ｎ−ベンジル)アミド
上記一般的製法Ｈに従い、Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−
アラニル]−(Ｓ)−２−アミノヘキサン酸メチルエステル(上記実施例１５由来)
およびベンジルアミン(アルドリッチ)を用いて、固体(融点＝１４１〜１４６℃)
の表題化合物を得た。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.３２、５％メタノール／ジクロ
ロメタン中）により追跡し、プレパラティブプレートクロマトグラフィー(溶出
液、５％メタノール／ジクロロメタン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ22Ｈ27Ｃｌ2Ｎ3Ｏ2(ＭＷ＝４３６.３９)；マス分光学(ＭＨ+)４３６。
実施例５３
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノ
−２−フェニルエタノール
上記一般的製法Ｅに従い、Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−
アラニン(上記実施例Ａ由来)および(Ｓ)−(＋)−２−フェニルグリシノール(ア
ルドリッチ)を用いて、固体(融点＝６６〜７０℃)の表題化合物を得た。反応は
、ｔｌｃ（Ｒf＝０.２５、５％メタノール／ジクロロメタン中）により追跡し、
フラッシュカラムクロマトグラフィー(溶出液、５％メタノール／ジクロロメタ
ン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである： Ｃ16Ｈ18Ｃｌ2Ｎ2Ｏ2(ＭＷ＝３４１)；マス分光学(ＭＨ+)３４２。
実施例５４および５５
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−フェニルグリシニル]−Ｌ−ア
ラニンメチルエステル
一般的製法Ｅに従い、Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−フェニルグ
リシン(上記実施例Ｊ由来)およびＬ−アラニンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)
を用いて、表題化合物を得た。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.９５、３％メタノール
／ジクロロメタン中）により追跡し、本化合物を再結晶(ＥｔＯＡｃ、ヘキサン
およびエーテルから)により精製を行なった。２個の部分的に分離したジアステ
レオマー混合物を得た。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ18Ｈ18Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝３８１.２６)；マス分光学(ＭＨ+)３８１。
実施例５６
Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノ
ヘキサノール
上記一般的製法Ｉに従い、Ｎ−[Ｎ−(３,４−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−
アラニル]−(Ｓ)−２−アミノヘキサン酸メチルエステル(上記実施例１５由来)
を用いて、油状の表題化合物を得た。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.１６および０.
１７、５％メタノール／ジクロロメタン中）により追跡し、プレパラティブプレ
ートクロマトグラフィー(溶出液、５％メタノール／ジクロロメタン)により精製
を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ15Ｈ22Ｃｌ2Ｎ2Ｏ2(ＭＷ＝３３３.２６)；マス分光学(ＭＨ+)３３３。
実施例５７
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミノ
−２−フェニルエタノール
上記一般的製法Ｅに従い、Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニ
ン(上記実施例Ｂ由来)および(Ｓ)−(＋)−２−フェニルグリシノール(アルドリ
ッチ)を用いて、表題化合物を得た。
実施例５８
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジクロロフェニル)−Ｌ−アラニル]−Ｌ−フェニルグリシ
ンｔｅｒｔ−ブチルエステル
一般的製法Ｄ(１Ｎ ＨＣｌでの洗浄を行なわない)に従い、Ｎ−(３,５−ジ
クロロフェニル)−Ｌ−アラニン(３,５−ジクロロフェニルアラニン(アルドリッ
チ)およびＲ−(＋)−乳酸イソブチル(アルドリッチ)とを一般的製法Ｊを用いて
反応させ、続いて一般的製法Ｃを用いて加水分解反応させることにより製造した
）およびＬ−フェニルグリシンｔｅｒｔ−ブチルエステル・塩酸塩(バッケム)を
用いて、表題化合物を得た。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.３９、２５％ＥｔＯＡｃ
／ヘキサン中）により追跡し、本化合物をプレパラティブプレートクロマトグラ
フィー(溶出液、２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン)により精製を行なった。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ21Ｈ24Ｎ2Ｏ3Ｃｌ2(ＭＷ＝４２３.３４)；マス分光学(ＭＨ+)４２３。
実施例５９
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジ−(トリフルオロメチル)フェニル)−Ｌ−アラニル]−Ｌ
−フェニルグリシンｔｅｒｔ−ブチルエステル
一般的製法Ｄに従い、Ｎ−[３,５−ジ−(トリフルオロメチル)フェニル]−
Ｌ−アラニン(上記実施例Ｇ由来)およびＬ−フェニルグリシンｔｅｒｔ−ブチル
エステル・塩酸塩(バッケム)を用いて、表題化合物を得た。反応は、ｔｌｃ（Ｒf
＝０.４６、２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中）により追跡した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ23Ｈ24Ｎ2Ｏ3Ｆ6(ＭＷ＝４９０.４５)。
実施例６０
Ｎ−[Ｎ−(３,５−ジメトキシフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニル]−(Ｓ)−２−アミ
ノヘキサン酸メチルエステル
一般的製法Ｅ(希ＨＣｌでの洗浄およびＥｔＯＡｃでの抽出を行なう)に従い
、Ｎ−(３,５−ジメトキシフェニル)−Ｄ,Ｌ−アラニン(上記実施例Ｈ由来)およ
びＬ−ノルロイシンメチルエステル・塩酸塩(シグマ)を用いて、淡黄色油状の表
題化合物を得た。反応は、ｔｌｃ（Ｒf＝０.３、３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中
）により追跡した。
ＮＭＲデータは以下の通りである：
Ｃ18Ｈ28Ｎ2Ｏ5(ＭＷ＝３５２.４３)。
実施例６１
β−アミロイド産生の阻害物質を検出するための細胞スクリーン
上記式Ｉの莫大な化合物について、スエーデン変異を所有している細胞系内で
β−アミロイド産生を阻害する能力についてアッセイした。本スクリーニングア
ッセイは、国際特許出願公開番号９４／１０５６９8に記載されまたシトロン（C
itron）ら11により記載の様式で、Ｌｙｓ651Ｍｅｔ652からＡｓｎ651Ｌｅｕ652
（ＡＰＰ７５１と番号を付ける）への二重変異を含有したアミロイド前駆体タン
パク質７５１（ＡＰＰ７５１）に対する遺伝子で安定にトランスフェクトした細
胞（Ｋ２９３＝ヒト腎臓細胞系）を使用した。本変異体は通常、スエーデン変異
体と呼ばれており、“２９３ ７５１ ＳＷＥ”と表される細胞を、１０％胎児
牛の血清をプラスしたダルベッコ最小必須培地（シグマ、セントルイス、ＭＯ）
中、１.５〜２.５×１０4細胞／穴の割合でコーニング（Corning）９６−穴プレ
ート内にプレートした。細胞数は、β−アミロイドエライザ法（ＥＬＩＳＡ）の
結果をアッセイの直線範囲内（およそ０.２〜２.５ｎｇ／ｍｌ）に達成させるた
めには重要である。
１０％二酸化炭素で平衡に保ったインキュベーター中、３７℃で終夜インキュ
ベートし続いて、培地を除き、２時間の前処理の間培地を含有した式Ｉの化合物
（薬物）(２００μＬ／穴)で置換し、細胞を上記の通りインキュベートした。薬
物のストックは、処理間で用いる最終薬物濃度、ジメチルスルオキシドの濃度が
０.５％を越えないように、実際通常０.１％となるように、１００％ＤＭＳＯ中
で製造した。
前処理の期間の終わりには、該培地を再度除き、上記の培地を含有した新しい
薬物で置換し、細胞をさらに２時間インキュベートした。処理後、該条件培地か
ら細胞破片をペレットするために、プレートをベックマンＧＰＲ（１２００ｒｐ
ｍ）中、５分間室温で遠心分離した。各穴から、条件培地もしくはその適当な希
釈液（１００μＬ）を、国際特許出願公開番号９４／１０５６９8中に記載のβ
−アミロイドペプチドのアミノ酸１３〜２８に対する抗体２６６［Ｐ.ザウバー
ト（Seubert）、Nature(１９９２)３５９：３２５−３２７］でプレコートした
エライザプレート中に移し、４℃で終夜保存した。産生したβ−アミロイドペ
プチドの量を測定するために、β−アミロイドペプチドのアミノ酸１〜１６に対
する標識抗体６Ｃ６［Ｐ.ザウバート、Nature(１９９２)３５９：３２５−３２
７］を使用した該エライザッセイを翌日行なった。
該化合物の細胞毒影響は、ハンセン（Hansen）ら12の方法の改良法によって測
定した。組織培養プレート中に残っている細胞に、３−(４,５−ジメチルチアゾ
ール−２−イル)−２,５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）(２５
μＬ；シグマ、セントルイス、ＭＯ)のストック溶液（５ｍｇ／ｍＬ）を加え、
最終濃度を１ｍｇ／ｍＬとした。細胞を１時間３７℃でインキュベートし、細胞
活性をＭＴＴ溶菌緩衝液（２０％ｗ／ｖ ドデシル硫酸ナトリウム／５０％ジメ
チルホルムアミド、ｐＨ４.７）の等量を加えることで停止させた。完全な抽出
は、室温で終夜シェイクすることで達成した。ＯＤ562nmとＯＤ650nm間の差異を
細胞バイタリティーの指示薬として、分子デバイスＵＶmaxミクロプレート記録
計で測定した。
β−アミロイドペプチドエライザ法の結果は標準曲線と一致し、ｎｇ／ｍＬβ
−アミロイドペプチドとして表した。細胞毒性を規格化するために、これらの結
果をＭＴＴ結果で分け、薬物なしのコントロールから得られた結果のパーセンテ
ージとして表した。全結果は平均であり、また少なくとも６回繰り返したアッセ
イの標準偏差である。
試験化合物を、本アッセイを用いた細胞中のβ−ペプチド産生阻害活性につい
てアッセイした。本アッセイの結果は、実施例１〜６０の各化合物はコントロー
ルと比べて少なくとも３０％だけβ−アミロイドペプチド産生を阻害することを
示した。
実施例６２
β−アミロイド放出のインビボ抑制および／または合成
本実施例では、本発明の化合物についてのβ−アミロイド放出のインビボ抑制
試験および／または合成の方法を例示する。これらの実験用に、ＰＤＡＰＰマウ
ス（年齢：３〜４ヶ月）を使用した［ゲイムス（Games）らによる、Nature ３７
３：５２３−５２７(1995)］。試験を行なった化合物によるが、化合物は通
常５もしくは１０ｍｇ／ｍｌで処方する。該化合物の溶解性因子が低いために、
それらは様々なビヒクル、例えばコーン油（セーフウェイ、南サンフランシスコ
、ＣＡ）；１０％エタノール／コーン油；２−ヒドロキシプロピル−β−シクロ
デキストリン（リサーチ・バイオケミカルズ・インターナショナル、ナティク（
Natick）ＭＡ）；およびカルボキシ−メチル−セルロース（シグマ社(Sigma Che
mical Co.,)、セントルイスＭＯ）などで処方される。
マウスに２６ゲージニードルで皮下投与し、３時間後該動物をＣＯ2麻酔で安
楽死させ、血液をＥＤＴＡ（０.５Ｍ）、ｐＨ８.０の溶液で被覆した１ｃｃ ２
５Ｇ ５/８”ツベルクリンシリンジ／ニードルを用いた心臓穿刺によって取り出
した。該血液を、ＥＤＴＡを含有したベクトン−ディキンソンバキュテューブ中
に置いておき、５℃で１５分間スピンダウン（１５００ｘｇ）させた。次いで、
該マウスの脳を取り出し、皮質および海馬を解剖し、氷上に置いた。
１．脳のアッセイ
酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡｓ）用の海馬および皮質組織を
作るために、各脳領域を１０容量の氷冷グアニジン緩衝液（５.０Ｍグアニジン
−ＨＣｌ、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８.０）中、コンテ（Kontes）モータ
ー化乳棒（フィッシャー、ピッツバーグＰＡ）を用いて均質化した。該ホモジネ
ートを回転プラットホーム（Platform）上、室温で３〜４時間静かに振動させ、
β−アミロイドの定量前−２０℃で保存した。
該脳ホモジネートを氷−冷カゼイン緩衝液［０.２５％カゼイン、ホスフェー
ト緩衝塩水（ＰＢＳ）、０.０５％アジ化ナトリウム、２０μｇ／ｍｌ アプロチ
ニン、５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ８.０、１０μｇ／ｍｌ ロイペプチン］で１：１
０に希釈し、結果４℃で２０分間遠心分離（１６,０００ｘｇ）する前にグアニ
ジンの最終濃度を０.５Ｍにまで低下させた。該β−アミロイド標準液（１〜４
０、もしくは１〜４２アミノ酸）を、最終成分が０.１％ウシ血清アルブミン（
ＢＳＡ）の存在下、０.５Ｍグアニジンと等しくなるように作った。
β−アミロイド（ａａ １〜４０）およびβ−アミロイド（ａａ １〜４２）の
両方を定量する、総β−アミロイドサンドイッチ型エライザ法は、β−アミロイ
ドに対する２個のモノクローナル抗体(ｍＡｂ)からなる。捕捉（capture）抗体
２６６［Ｐ．ザウバート、ネイチャー（１９９２）３５９：３２５−３２７］は
、β−アミロイドのアミノ酸１３〜２８に対して特異的である。抗体３Ｄ６［ジ
ョンソン（Johnson）−ウード（Wood）らによるＰＮＡＳ ＵＳＡ（１９９７）
９４：１５５０〜１５５５］を（このものはβ−アミロイドのアミノ酸１〜５に
対して特異的であるが）ビオチニル化し、該アッセイのレポーター（reporter）
抗体として役立てた。該３Ｄ６ビオチニル化製法では、炭酸水素ナトリウム（１
００ｍＭ）およびｐＨ８.５緩衝液を用いる点を除いて、免疫グロブリンのＮＨ
Ｓ−ビオチン標識化に対する製品（ピアース（Pierce）、ロックフオード ＩＬ
）プロトコールを使用する。該３Ｄ６抗体は、分泌アミロイド前駆体タンパク質
（ＡＰＰ）もしくは全鎖ＡＰＰを認識しないが、アミノ末端アスパラギン酸を持
つβ−アミロイド種のみを検出する。該アッセイは感度の下限：〜５０μｇ／ｍ
ｌ（１１ＰＭ）を有し、また１ｎｇ／ｍｌまでの濃度で外因性マウスβ−アミロ
イドペプチドに対する交配（cross）反応性を示さない。
β−アミロイド（ａａ １〜４２）のレベルを定量するサンドイッチ型エライ
ザ法の配置では、ｍＡｂ ２１Ｆ１２［ジョンソン−ウードらによる、ＰＮＡＳ
ＵＳＡ（１９９７）９４：１５５０−１５５５］（このものはβ−アミロイドの
３３〜４２アミノ酸を認識する）を捕捉抗体として使用する。ビオチニル化３Ｄ
６はまた本アッセイにおいて、感度の下限：〜１２５ｐｇ／ｍｌ（２８ＰＭ）を
有するレポーター抗体である。
２６６および２１Ｆ１２捕捉ｍＡＢｓを、９６穴免疫アッセイプレート（コス
ター(Costar)、ケンブリッジ、ＭＡ）中に室温で終夜、１０μｇ／ｍｌで被膜し
た。次いで、該プレートをアスピレートし、０.２５％ヒト血清アルブミン／Ｐ
ＢＳ緩衝液で少なくとも１時間室温で遮断し、次いで使用するまで４℃で乾燥し
ないよう保存した。該プレートを使用前に、洗浄緩衝液（トリス−緩衝塩液、０
.０５％ツイーン(Tween)２０）で再度水和した。試料と標準物質を該プレートに
加え、４℃で終夜インキュベートした。該プレートをアッセイの各工程の間洗浄
緩衝液で≧３回洗浄した。カゼインインキュベート緩衝液（０.２５％カゼイン
、ＰＢＳ、０.０５％ツイーン２０、ｐＨ７.４）中で０.５μｇ／ｍｌまで
希釈したビオチニル化３Ｄ６を、該穴中１時間室温でインキュベートした。カゼ
インインキュベート緩衝液中、１：４０００に希釈したアビジン−ＨＲＰ(ベク
ター、バーリンゲーム（Burlingame）ＣＡ)を、該穴に室温で１時間かけて加え
た。比色基質、スロー（Ｓｌｏｗ）ＴＭＢ−エライザ法（ピース、ケンブリッジ
ＭＡ）を加え、１５分間反応させ、その後２Ｎ Ｈ2ＳＯ4加えて酵素反応を停止
させた。反応生成物について、４５０ｎｍと６５０ｎｍでの吸光度差を測定する
分子デバイスＶmax（分子デバイス、メンロ・パークＣＡ）を用いて測った。
２．血液アッセイ
ＥＤＴＡ血漿を標品希釈剤（リン酸ナトリウム・Ｈ2Ｏ（一価の塩基）（０.２
ｇｍ／ｌ）、リン酸ナトリウム・７Ｈ2Ｏ（二価の塩基）（２.１６ｇｍ／ｌ）、
チメロサール（０.５ｇｍ／ｌ）、塩化ナトリウム（８.５ｇｍ／ｌ）、トリトン
Ｘ−４０５（０．５ｍｌ）、グロブリン−遊離ウシ血清アルブミン（６.０ｇ／
ｌ；および水）中に希釈した。脳のアッセイを、該標品希釈剤中の試料および標
準物質について、上記に記載のカゼイン希釈剤の代わりに標品の希釈剤を用いる
点を除いては上記に記載の総β−アミロイドアッセイ（２６６捕捉／３Ｄ６レポ
ーター）を用いてアッセイを行なった。
前述の記載から、成分および方法における様々な改良および変化が該技術分野
の同業者により行なわれるであろう。添付した請求の範囲の範囲内にあるそうい
ったあらゆる改良を含むものとする。
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
N- (aryl / heteroaryl) amino acid derivatives, pharmaceutical compositions thereof
And release of β-amyloid peptide using the compound
And / or method for inhibiting its synthesis
Background art TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention inhibits the release of β-amyloid peptide and / or its synthesis,
Compounds useful for the treatment of Alzheimer's disease, and pharmaceutical compositions comprising the compounds
And a method for inhibiting the release of β-amyloid peptide.
Things.Reference
The following publications, patents and patent applications are cited in this application by superscript number:
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itial Report for the Purification and Characterization of a Novel Cerebr
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ar Pathology of Alzheimer's Disease) ", Neuron,6: 487-498 (1991).
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Early-Onset Alzheimer's Disease Caused by Mutations at
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A possible pathogenic mutation in Alzheimer's disease in the gene (A Pathogenic
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line).11 "Β-Amyloid in familial Alzheimer's disease," by Citron et al.
Mutations in precursor proteins increase β-protein production (Mutation of
the β-Amyloid Precursor Protein in Familial Alzheimer's Disease Increas
es β-Protein Production) ”, Nature360: 672-674 (1992).12 “Precision for measuring cell growth / cell death” by Hansen et al.
And rapid development of dyeing methods
velopment of a Precise and Rapid Dye Method for Measuring Cell Growth / Ce
ll Kill) ", J. Immun. Meth.119: 203-210 (1989).
Each publication, patent or patent application is identified and individually cited in its entirety
All publications, patents and patent applications listed above, if indicated.
Is incorporated herein as a reference in its entirety.Technology level
Alzheimer's disease (AD) is clinically associated with memory, cognition, reasoning, judgment, and
Causes a progressive loss of emotional stability, gradually leading to deep dementia and ultimately death
Is a degenerative brain disorder characterized by AD is progression in older humans
It is a very common cause of behavioral mental weakness (dementia) and is the fourth largest in the United States.
Is considered to be a common cause of medical death. AD stands for race and people worldwide
It has been observed in species groups and is a major present and future public health problem.
You. The disease is estimated to affect about 2 to 3 million people in the United States alone
Have been. AD is currently incurable. AD is effectively prevented or its symptoms and
It is widely known that there is no treatment to change the course.
The brain of a patient with AD has senile (or amyloid) plaques, amyloid angiopathy
(Amyloid deposition in blood vessels) and a characteristic lesion called neurofibrillary tangles
Is shown. Many of these lesions, especially amyloid plaques and neurofibrillary tangles,
Several areas of the human brain that are important for the memory and cognitive functions of AD patients
And is commonly seen. Few of these lesions in a more restricted anatomical distribution
Is also found in the brains of most elderly humans without clinical AD. Amiro
Id plaques and amyloid angiopathy also occur in trisomi-21 (Down syndrome) and
Hereditary Cerebral Hemorrhage w
Characterizes the brain of individuals with ith Amyloidosis of the Dutch Type (HCHWA-D)
It is something to attach. Currently, the definitive diagnosis of AD is usually in patients who have died of the disease.
Above lesions in brain tissue, or rarely invasive during neurosurgery
Requires observation of a small biopsy sample of isolated brain tissue.
Amyloid plaques and vascular lesions that are characteristic of AD and other diseases mentioned above.
The major chemical constituent of myloid deposition (amyloid angiopathy) is β-amyloid
About 39- to make peptide (βAP) or sometimes Aβ, AβP or β / A4
It is a protein of approximately 4.2 kilodaltons (kD) of 43 amino acids. Grena
-1Β-amyloid peptide is first purified and some amino acids
The acid sequence was provided. The isolation method and sequence data for the first 28 amino acids are
U.S. Pat.No. 4,666,829TwoIt is described in.
Molecular biology and protein chemistry have shown that β-amyloid peptides
A small fragment of the large precursor protein (APP), usually including humans
Were produced by cells in many tissues of various animals. APP
Knowledge of the structure of the encoded gene indicates that β-amyloid peptide is a protease enzyme.
Occurs as a peptide fragment that is cleaved from APP by element
Things. Precise biochemical mechanism, ie β-amyloid peptide fragment
Is cleaved from APP followed by amyloid plaques in the blood of brain tissue and brain or cerebral meninges
The mechanism of deposition in the tube wall is not well known.
Some evidence indicates that progressive brain deposition of β-amyloid peptide is
Plays an important role and is preceded by cognitive symptoms for years or decades
It has been suggested to. For example, SelcoThreeSee Most important evidence
For example, missen at 717 amino acids of the 770-amino acid isoform of APP
DNA mutations are found in affected members but have been genetically determined (home
It is found in unaffected members of some families with AD
Have not been found.Four, Cartier Harlan (Chart
ier Harlan) et al.FiveAnd Murrell et al.6), Sue again
It is called a den variant. Lysine in Swedish families595−
Onin596Asparagine595-Leucine596Double mutation changing to 1992
(Murren et al.)7). Genetic binding analysis shows that these mutations
, As well as certain other mutations in the APP gene, AD in affected members of the family
Specific molecules were suggested to be the cause. In addition, 770 amino acids of APP
A mutation at amino acid 693 in the iso form is due to β-amyloid peptide deposition disease,
Identified as the cause of HCHWA-D and
Changes to lysine are considered AD in some patients and HCHWA-D in others
Seems to cause a phenotype. When AD is considered based on genetics, AP
The discovery of this and other mutations in P led to changes in APP and subsequent β-amyloid
It is demonstrated that deposition of peptide fragments can cause AD.
Understand the mechanisms underlying AD and other .BETA.-amyloid peptide-related diseases
Despite the progress that has been made, methods and compositions for treating the disease
Development is required. Ideally, the treatment method would be to use β-amyloid peptide.
To be performed by a drug capable of inhibiting release and / or its synthesis
It would be convenient.
Summary of the present invention
The present invention inhibits the release of β-amyloid peptide and / or its synthesis
It relates to the discovery of a group of compounds, and is therefore useful in patients prone to AD.
Have AD to prevent AD and / or suppress further deterioration of the condition
Useful in treating patients. A group of compounds having the described properties is of the formula I:
[Where R1Is
(A) phenyl,
(B) a substituted phenyl group of formula II:
(Where RcIs acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azide
,
From the group consisting of cyano, halo, hydrogen, nitro, trihalomethyl, thioalkoxy
Chosen, and RbAnd RcIs fused to a heteroaryl having a phenyl ring
Or form a heterocyclic ring,
RbAnd Rb 'Is hydrogen, halo, nitro, cyano, trihalomethyl, alkoxy
And independently selected from the group consisting ofcIs a place of hydrogen
If RbAnd Rb 'Both are hydrogen or both are non-hydrogen substituents)
),
(C) 2-naphthyl,
(D) alkyl, alkoxy, halo, cyano, nitro, trihalomethyl, thio
1 to 5 members selected from the group consisting of alkoxy, aryl and heteroaryl
2-naphthyl substituted at positions 4, 5, 6, 7, and / or 8 with a substituent;
(E) heteroaryl, and
(F) alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, cyano, halo, d
Group consisting of toro, heteroaryl, thioalkoxy and thioaryloxy
Substituted heteroaryl containing 1 to 3 substituents selected from the group consisting of
Ortho-position (not adjacent) to the bond between heteroaryl and -NH group
Selected from the group consisting of:
RTwoIs hydrogen, alkyl having 1 to 4 carbons, alkylalkoxy having 1 to 4 carbons
C, alkylthioalkoxy having 1 to 4 carbon atoms, aryl, heteroaryl,
Substituted aryl and substituted heteroaryl, provided that the substituent is aryl or heteroaryl
From the ortho position (not adjacent) to the bond between the aryl and carbon atoms.
Selected from the group
RThreeIs alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, cycloalkyl,
Chloroalkenyl, heteroaryl, substituted alkyl, substituted alkenyl, substituted alkyl
Selected from the group consisting of nil and heterocyclic;
X is -C (O) Y (where Y is
(A) alkyl,
(B) substituted alkyl (provided that the substituent on the substituted alkyl is α-haloalkyl
Containing no α-diazoalkyl or α-OC (O) alkyl group)
(C) alkoxy or thioalkoxy,
(D) substituted alkoxy or substituted thioalkoxy,
(E) hydroxy,
(F) aryl,
(G) heteroaryl,
(H) Heterocyclic
(I) —NR′R ″ (where R ′ and R ″ are hydrogen, alkyl, substituted alkyl,
Group consisting of cycloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclic
And R 'and R' 'together have 2 to 8 carbon atoms.
And one or two heteroatoms selected from the group consisting of oxygen, sulfur and nitrogen
To form a cyclic group which may contain one or more alkyl groups.
Or an alkoxy group)
RThreeContains at least 3 carbon atoms, X is -CRFourRFourY '(where each RFour
Is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and hetero
Independently selected from the group consisting of cyclic, and Y ′ is hydroxyl, amino
, Thiol, -OC (O) RFive, -SSRFive, -SSC (O) RFive(Where RFiveIs archi
, Substituted alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and heterosa
Selected from the group consisting of iclick)),
Where R1Is 3,4-dichlorophenyl, and RTwoIs methyl and RThreeIs D-F
When benzyl is derived from phenylalanine, X is -C (O) OCHThreeNot]
Is defined by the compound represented by
Accordingly, in one aspect of the method, the present invention provides a method for administering a compound of formula I above to the cell.
Alternatively, the mixture of compounds may be used to release β-amyloid peptide within cells and / or
Alternatively, administering β-cells in an amount effective to inhibit synthesis.
A method for inhibiting amyloid peptide release and / or synthesis.
In vivo generation of β-amyloid peptide is associated with AD pathogenesis8,9are doing
The compounds of the formula I therefore also treat AD prophylactically and / or therapeutically
For use in pharmaceutical compositions. Therefore, as another aspect of the method,
The present invention relates to a carrier which is pharmaceutically inert in patients at risk of developing AD,
Administering a pharmaceutical composition comprising an effective amount of the compound of I or a mixture thereof.
Or a method of preventing the onset of AD in said patient.
In yet another aspect of the method, the invention provides for inhibiting further deterioration of the patient's condition.
Pharmaceutically inert carriers for AD patients and compounds of formula I or
A method for treating AD patients, comprising administering a pharmaceutical composition comprising an effective amount of the mixture.
About the law.
In the above formula I, R1Is 4-substituted, 3,5-disubstituted or 3
, 4-disubstituted phenyl groups (where the 3 and / or 5 position
Is a substituent of the above Rb, Rb 'Wherein the substituent at the 4-position is RcDefined by
That is). Particularly preferred 3,5-disubstituted phenyl is, for example, 3,5-dic-phenyl.
Lolophenyl, 3,5-difluorophenyl, 3,5-di (trifluoromethyl)
Phenyl, 3,5-dimethoxyphenyl and the like. Particularly preferred 3,4-
Examples of the disubstituted phenyl include 3,4-dichlorophenyl and 3,4-difluoro
Phenyl, 3- (trifluoromethyl) -4-chlorophenyl, 3-chloro-4
-Cyanophenyl, 3-chloro-4-iodophenyl, 3,4-methylenedioxy
Cyphenyl, 3,4-ethylenedioxyphenyl and the like. Especially preferred
Examples of 4-substituted phenyl include 4-azidophenyl, 4-bromophenyl
, 4-chlorophenyl, 4-cyanophenyl, 4-ethylphenyl, 4-fluoro
Rophenyl, 4-iodophenyl, 4- (phenylcarbonyl) phenyl, 4- (
1-ethoxy) ethylphenyl and the like.
Other preferred R1Examples of the substituent include 2-naphthyl and quinolin-3-yl
, 2-methylquinolin-6-yl, benzothiazol-6-yl, benzothiazo
-2-yl, 5-indolyl, phenyl, 2-naphthyl and the like.
Preferred RTwoIs alkyl having 1 to 4 carbons, alkyl alkyl having 1 to 4 carbons
Coxy, C 1-4 alkylthioalkoxy, aryl, heteroaryl
, Substituted aryl and substituted heteroaryl (provided that the substituent is aryl or
Is not ortho (adjacent) to the bond between the heteroaryl atom and the carbon atom)
Selected from the group consisting of: Particularly preferred RTwoAs the substituent, for example, methyl, ethyl
, N-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, -CHTwoCHTwoS
CHThree, Phenyl and the like.
Preferred RThreeThe substituent is methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n
Alkyl groups such as -butyl, iso-butyl and sec-butyl;
Chill, -CHTwo-Cyclohexyl, benzyl, p-hydroxybenzyl, 3-yo
-4-hydroxybenzyl, 3,5-diiodo-4-hydroxybenzyl,
-CHTwo-Indol-3-yl, phenyl,-(CHTwo)Four-NH-BOC,-(C
HTwo)Four-NHTwo, -CHTwo-(1-N-benzylimidazol-4-yl), -CHTwo
-Imidazol-4-yl, -CHTwoCHTwoSCHThree,-(CHTwo)FourNHC (O) (CHTwo
)FourCHThree,-(CHTwo)yNHC (O) (O) RFiveWherein y is 1-2, and RFive
Is hydrogen, methyl, tert-butyl, phenyl, etc.)
Is mentioned.
Preferred X substituents include -C (O) Y groups, wherein Y is methoxy, ethoxy,
n-propoxy, iso-propoxy, n-butoxy, iso-butoxy, tert
-Butoxy, amino (-NHTwo), N- (iso-butyl) amino, N-methylamino
, N, N-dimethylamino, N-benzylamino and the like);TwoO
H and the like.
The present invention also provides a novel pharmaceutically inert carrier and a novel compound comprising a compound of formula I above.
It provides a pharmaceutical composition.
Particularly preferred compounds for use in the methods and compositions of the present invention (RTwoAnd RThree
Preferably, the stereochemistry of the group is derived from an L-amino acid), for example:
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] valine methyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] valine N-iso-butylamido
Do
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] threonine methyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] valine ethyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] valine tert-butyles
Tell,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] valinamide,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanine-N- (1-hydroxy-3-
Methyl-2-butyl) amide,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] valine N, N-dimethylamide
,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] valine N-methylamide,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] alanine methyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] leucine methyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] phenylalanine methyles
Tell,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] isoleucine methyl ester
,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminopentanoic acid
Ruster,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminohexanoic acid
Ruster,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] tryptophan methyl ester
,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] aspartic acid α-methyl ester
Steal,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] aspartic acid β- (tert
-Butyl ester) α-methyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -N-BOC-lysinemethyl
ester,
N- [N- (benzothiazol-6-yl) alanyl] -2-aminohexanoic acid
Chill ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] lysine methyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] tyrosine methyl ester,
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) alanyl] alanine methyl ester,
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminopentanoic acid
Ruster,
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) alanyl] phenylalanine methyles
Tell,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] aspartic acid β- (methyl
Stel) α-methyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -1-benzylhistidine
Chill ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] glutamic acid γ- (tert-
Butyl ester) α-methyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] leucinamide;
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] glutamic acid α-methyles
Tell,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl]-(3,5-diiodo) tyrosine
Methyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl]-(3-iodo) tyrosinemethyl
Ruster,
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) glycyl] -2-aminopentanoic acid
Ruster,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -Nε− (Hexanoyl) lithi
Methyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] phenylalaninamide,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminohexane- (N-
Methyl) amide,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -β-cyclohexylalani
Methyl ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminohexanamide
,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminohexane- (N,
N-dimethyl) amide,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] methionine methyl ester,
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminohexane- (N,
N-dimethyl) amide,
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminohexanamide
,
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminohexane- (N-
Methyl) amide,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] histidine methyl ester,
N- [N- (quinolin-3-yl) alanyl] -2-aminohexanoic acid methyl ester
Tell,
N- [N- (benzothiazol-2-yl) alanyl] -2-aminohexanoic acid
Chill ester,
N- [N- (3,5-difluorophenyl) alanyl] alanine methyl ester,
N- [N- (3,5-difluorophenyl) alanyl] -2-aminohexanoic acid
Chill ester,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminohexanamide
,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminohexane- (N-
Benzyl) amide,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -2-amino-2-phenyl
ethanol,
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) phenylglycinyl] alanine methyl ester
Steal,
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) alanyl] -2-aminohexanol;
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) alanyl] -2-amino-2-phenyl
ethanol,
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) alanyl] phenylglycine tert-
Butyl ester,
N- [N- (3,5-di- (trifluoromethyl) phenyl) alanyl] phenyl
Lysine tert-butyl ester,
N- [N- (3,5-dimethoxyphenyl) alanyl] -2-aminohexanoic acid
Chill ester,
And pharmaceutically acceptable salts thereof.
Further, the present invention provides a compound of formula III:
[Where R1Is
(A) phenyl,
(B) a substituted phenyl group of formula II:
(Where RcIs acyl, alkyl, alkoxy, alkylalkoxy, azide
, Cyano, halo, hydrogen, nitro, trihalomethyl, thioalkoxy
And RbAnd RcIs fused to a heteroaryl having a phenyl ring.
Or form a heterocyclic ring,
RbAnd Rb 'Is hydrogen, halo, nitro, cyano, trihalomethyl, alkoxy
And independently selected from the group consisting ofcIs a place of hydrogen
If RbAnd Rb 'Both are hydrogen or both are non-hydrogen substituents)
),
(C) 2-naphthyl,
(D) alkyl, alkoxy, halo, cyano, nitro, trihalomethyl, thio
1 to 5 members selected from the group consisting of alkoxy, aryl and heteroaryl
2-naphthyl substituted at positions 4, 5, 6, 7, and / or 8 with a substituent;
(E) heteroaryl, and
(F) alkyl, alkoxy, aryl, aryloxy, cyano, halo, d
Group consisting of toro, heteroaryl, thioalkoxy and thioaryloxy
Substituted heteroaryl containing 1 to 3 substituents selected from the group consisting of
Not ortho to the bond between the heteroaryl and the -NH group)
Selected from the group consisting of:
RTwoIs hydrogen, alkyl having 1 to 4 carbons, alkylalkoxy having 1 to 4 carbons
And alkylthioalkoxy, aryl, and heteroaryl having 1 to 4 carbon atoms
, Substituted aryl and substituted heteroaryl (provided that the substituent is aryl or
Not ortho to the bond between the heteroaryl atom and the carbon atom)
Selected from;
RThreeIs alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, cycloalkyl,
Chloroalkenyl, heteroaryl, substituted alkyl, substituted alkenyl, substituted alkyl
Selected from the group consisting of nil and heterocyclic;
X is -C (O) Y (where Y is
(A) alkyl,
(B) substituted alkyl (provided that the substituent on the substituted alkyl is α-haloalkyl
Containing no α-diazoalkyl or α-OC (O) alkyl group)
(C) alkoxy or thioalkoxy,
(D) substituted alkoxy or substituted thioalkoxy,
(E) hydroxy,
(F) aryl,
(G) heteroaryl,
(H) heterocyclic,
(I) —NR′R ″ (where R ′ and R ″ are hydrogen, alkyl, substituted alkyl,
Group consisting of cycloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclic
And R 'and R' 'together have 2 to 8 carbon atoms.
And one or two heteroatoms selected from the group consisting of oxygen, sulfur and nitrogen
To form a cyclic group which may contain one or more alkyl or
May be substituted with an alkoxy group) and
RThreeContains at least 3 carbon atoms, X is -CRFourRFourY '(where each RFour
Is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and hetero
Independently selected from the group consisting of cyclic, and Y ′ is hydroxyl, amino
, Thiol, -OC (O) RFive, -SSRFive, -SSC (O) RFive(Where RFiveIs
Alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and hete
Selected from the group consisting of cyclocyclic)),
Where R1Is 3,4-dichlorophenyl, and RTwoIs methyl and RThreeIs D-F
When benzyl is derived from enylglycine, X is -C (O) OCHThreeNot;
In addition, the following known compounds are excluded:
R1Is phenyl and RTwoIs methyl and X is —C (O) NHφ,Three
Is not methyl, iso-propyl, iso-butyl; and
R1Is phenyl and RTwoIs methyl and X is -C (O) NHTwoIf RThree
Is not benzyl]
And a novel compound represented by the formula:
Preferred compounds of the above formula III include those shown in Table I below.
:
In the table below, “dichlorophenyl” is translated as “dichlorophenyl”. Detailed description of the invention
As mentioned above, the present invention relates to the release of β-amyloid peptide and / or its synthesis.
And compounds useful for treating Alzheimer's disease.
However, before describing the present invention in more detail, first of all, the following terms are defined.
Do righteousness.Definition
The phrase “β-amyloid peptide” refers to 39-4 having a molecular weight of about 4.2 kD.
A three amino acid peptide, wherein said peptide is1The protein described by
Quality morphology (including normal β-peptide mutations and post-translational modifications) and essentially
Means homologous. In any form, the β-amyloid peptide
Is an approximately 39-43 amino acid fragment of a glycoprotein that is widely spread
, Β-amyloid precursor protein (APP). The 43 amino acid sequence
Is:Alternatively, it is a sequence substantially homologous thereto.
“Alkyl” preferably has 1 to 10 carbon atoms, more preferably 1 to 10 carbon atoms.
It means six monovalent alkyl groups. This phrase is methyl, ethyl, n-propyl
, Iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, n-hexyl, etc.
Things.
“Substituted alkyl” refers to alkoxy, substituted alkoxy, acyl, acylamino
, Acyloxy, amino, aminoacyl, aminoacyloxy, cyano, halogen
, Hydroxyl, carboxyl, carboxylalkyl, cycloalkyl,
Xyacylamino, thiol, thioalkoxy, substituted thioalkoxy, aryl
, Heteroaryl, heterocyclic, nitro and mono- and di-alkyl
Amino, mono- and di- (substituted alkyl) amino, mono- and di-cycloa
Alkylamino, mono- and di-arylamino, mono- and di-heteroaryl
Amino, mono- and di-heterocyclic amino and asymmetric di-substituted amino
Min (alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and
And heterocyclic groups having different substituents).
Alkyl group having 1 to 3 substituents (preferably having 1 to 10 carbon atoms)
).
“Alkylene” is preferably 1 to 10 carbon atoms, more preferably 1 carbon atom.
Means up to 6 divalent alkylene groups. This phrase is methylene (-CHTwo−),
Ethylene (-CHTwoCHTwo-), Propylene isomers (eg, -CHTwoCHTwoCHTwo
-And -CH (CHThree) CHTwo−) And the like.
“Alkaryl” means that the alkylene moiety preferably has 1 to 10 carbon atoms and
Alkylene-aryl having preferably 6 to 10 carbon atoms in the aryl and aryl moieties
Means a group. The alkaryl group is exemplified by benzyl, phenethyl and the like.
is there.
"Alkoxy" means an "alkyl-O-" group. Preferred alkoxy
Groups include, for example, methoxy, ethoxy, n-propoxy, iso-propoxy,
n-butoxy, tert-butoxy, sec-butoxy, n-pentoxy, n-
Hexoxy, 1,2-dimethylbutoxy and the like.
"Substituted alkoxy" refers to a "substituted alkyl-O-" group wherein substituted alkyl
Means as defined above)
“Alkylalkoxy” refers to “-alkylene-O-alkyl” (where a
Alkylene and alkoxy are as defined above). The base
For example, methylene methoxy (-CHTwoOCHThree), Ethylene methoxy (-CHTwoCHTwo
OCHThree), N-propylene-iso-propoxy (-CHTwoCHTwoCHTwoOCH (C
HThree)Two), Methylene-tert-butoxy (—CHTwo-OC (CHThree)Three)
I can do it.
“Alkylthioalkoxy” refers to “-alkylene-S-alkyl” (wherein
, Alkylene and alkyl are as defined above). With the group
For example, methylenethiomethoxy (-CHTwoSCHThree), Ethylene thiomethod
(-CHTwoCHTwoSCHThree), N-propylene-iso-thiopropoxy (-CHTwo
CHTwoCHTwoSCH (CHThree)Two), Methylenethio-tert-butoxy (-CHTwoSC (
CHThree)Three).
“Alkenyl” is preferably 2-10 carbon atoms, more preferably 2 carbon atoms.
Has at least one, preferably at least one, at least one and at least one alkenyl unsaturated site
Alkenyl group. Preferred alkenyl groups include ethenyl (—CH
= CHTwo), N-propenyl (—CHTwoCH = CHTwo), Iso-propenyl (-C (
CHThree) = CHTwo).
“Substituted alkenyl” refers to alkoxy, substituted alkoxy, acyl, acylamido.
No, acyloxy, amino, aminoacyl, aminoacyloxy, cyano, cyclo
Loalkyl, oxyacylamino, halogen, hydroxyl, carboxyl,
Ruboxyl alkyl, thiol, thioalkoxy, substituted thioalkoxy, aryl
, Heteroaryl, heterocyclic, nitro and mono- and dial-
Killamino, mono- and di- (substituted alkyl) amino, mono- and di-cyclo
Alkyl, mono- and di-arylamino, mono- and di-heteroaryl
Amino, mono- and di-heterocyclic amino and asymmetric disubstituted amines
(Alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and
Having different substituents selected from heterocyclic)
Alkenyl group as defined above having one to three substituents.
"Alkynyl" preferably has 2 to 10 carbon atoms, more preferably 2 carbon atoms.
And at least one alkynyl unsaturated site, preferably 1 to
It means an alkynyl group having two. Preferred alkynyl groups include ethynyl
(-C≡CH), propargyl (-CHTwoC≡CH) and the like.
“Substituted alkynyl” refers to alkoxy, substituted alkoxy, acyl, acylamido.
No, acyloxy, amino, aminoacyl, aminoacyloxy, cyano, cyclo
Loalkyl, oxyacylamino, halogen, hydroxyl, carboxyl,
Ruboxyl alkyl, thiol, thioalkoxy, substituted thioalkoxy, aryl
, Heteroaryl, heterocyclic, nitro and mono- and dial-
Killamino, mono- and di- (substituted alkyl) amino, mono- and di-cyclo
Alkylamino, mono- and di-arylamino, mono- and di-hetero
Reelamino, mono- and di-heterocyclic amino and asymmetric disubstitution
Amines (alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl
And different substituents selected from heterocyclic)
An alkynyl group as defined above having one to three substituents selected is meant.
"Acyl" refers to alkyl-C (O)-, substituted alkyl-C (O)-,
Kill-C (O)-, aryl-C (O)-, heteroaryl-C (O)-and hetero
Cyclic-C (O)-(where alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl,
Aryl, heteroaryl and heterocyclic are defined as defined herein.
).
“Acylamino” refers to a —C (O) NRR group, where each R is independently hydrogen,
Alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and hete
Cyclic, alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, aryl,
Each of heteroaryl and heterocyclic is as defined herein.
Means).
“Aminoacyl” refers to the group —NRC (O) R, wherein each R is independently hydrogen,
Alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and hete
Cyclic, alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, aryl,
Each of heteroaryl and heterocyclic is as defined herein.
Means).
“Acyloxy” refers to the group —OC (O) -alkyl, —OC (O) -substituted alkyl.
, -OC (O) -cycloalkyl, -OC (O) -aryl, -C (O) O-hetero
Aryl and -C (O) O-heterocyclic (where alkyl, substituted
Kill, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and heterocyclic
(As defined herein).
"Aminoacyloxy" refers to the group: -NRC (O) O-alkyl, -NRC (O)
O-substituted alkyl, -NRC (O) O-cycloalkyl, -NRC (O) O-ary
, -NRC (O) O-heteroaryl and -NRC (O) O-heterocyclic
(Where R is hydrogen, alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, aryl,
Heteroaryl and heterocyclic; alkyl, substituted alkyl,
Each of cycloalkyl, aryl, heteroaryl and heterocyclic
As defined in the specification).
“Oxyacylamino” refers to the group —OC (O) NR-alkyl, —OC (O) N
R-substituted alkyl, -OC (O) NR-aryl, -OC (O) NR-heteroaryl
And -OC (O) NR-heterocyclic (where R is hydrogen, alkyl,
Substituted alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl and heterocycle
And alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroa
Each of reel and heterocyclic are as defined herein)
means.
“Aryl” refers to a single ring (eg, phenyl) or multiple condensed rings (eg, na
(Futyl or anthryl) having 6 to 14 carbon atoms.
Means an expression. Preferred aryls include, for example, phenyl, naphthyl and the like.
I can do it.
Unless otherwise restricted by the definition for an aryl substituent, the aryl group
Is hydroxy, acyl, acyloxy, alkyl, substituted alkyl, alkoxy,
Substituted alkoxy, alkenyl, substituted alkenyl, alkynyl, substituted alkynyl,
Amino, aminoacyl, acylamino, aminoacyloxy, oxyacylamido
No, aryl, aryloxy, carboxyl, carboxylalkyl, cyano
, Halo, nitro, heteroaryl, trihalomethyl, thioalkoxy, substituted thio
Alkoxy, mono- and di-alkylamino, mono- and di- (substituted alkyl
L) amino, mono- and di-cycloalkylamino, mono- and di-aryl
Amino, mono- and di-heteroarylamino, mono- and di-heterosa
Cyclic amino and asymmetric disubstituted amines (alkyl, substituted alkyl, cyclo
Differences selected from alkyl, aryl, heteroaryl and heterocyclic
Having 1 to 3 substituents selected from the group consisting of
It may be. Preferred substituents include alkyl, alkoxy, halo, cyano
, Nitro, trihalomethyl and thioalkoxy. Replace like that
Where the aryl group is referred to herein as "substituted aryl"
There is.
"Aryloxy" refers to an aryl-O- group wherein the aryl group is also as described above.
As defined above, including the optionally substituted aryl substituents defined above.
).
"Carboxyalkyl" refers to -C (O) O-alkyl and -C (O) O-substituted.
An alkyl group wherein alkyl and substituted alkyl are as defined herein
).
“Cycloalkyl” also refers to a monocyclic ring which may be substituted with 1 to 3 alkyl groups.
Or a polycondensed ring (including an aromatic ring condensed with a cycloalkyl ring) having 3 carbon atoms
Means ~ 20 cyclic alkyl groups. As the cycloalkyl group, for example,
Cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclooctyl, 1-methyl
Such as cyclopropyl, 2-methylcyclopentyl and 2-methylcyclooctyl
A monocyclic structure or a polycyclic structure such as dibenzosuberan or adamantanyl.
It is.
“Cycloalkenyl” refers to a monocyclic or polycondensed ring having 1 to 3 alkyl groups.
Having at least one internal unsaturated bond which may be substituted with
It means eight cyclic alkenyl groups. Examples of suitable cycloalkenyl groups include
For example, cyclobut-2-enyl, cyclopenta-3-enyl, cycloocta-
3-enyl and the like.
“Halo” or “halogen” refers to fluoro, chloro, bromo and iodo
And preferably chloro or bromo.
“Heteroaryl” is defined as having 2-10 carbon atoms and oxygen, nitrogen and sulfur in the ring.
It means a monovalent aromatic ring group having 1 to 4 heteroatoms selected from yellow.
Unless otherwise specified in the definition of the heteroaryl substituent, the heteroaryl group
Is hydroxy, acyl, acyloxy, alkyl, substituted alkyl, alkoxy,
Substituted alkoxy, alkenyl, substituted alkenyl, alkynyl, substituted alkynyl,
Amino, aminoacyl, acylamino, aminoacyloxy, oxyacylamido
No, aryl, aryloxy, carboxyl, carboxylalkyl, cyano
, Halo, nitro, heteroaryl, trihalomethyl, thioalkoxy, substituted thio
Alkoxy, mono- and di-alkylamino, mono- and di- (substituted alkyl
L) amino, mono- and di-cycloalkylamino, mono- and di-aryl
Amino, mono- and di-heteroarylamino, mono- and di-heterosa
Cyclic amino and unsymmetrical di-substituted amines (alkyl, substituted alkyl,
Selected from chloroalkyl, aryl, heteroaryl and heterocyclic
Substituted with 1 to 3 substituents selected from the group consisting of
It may be. The heteroaryl group can be a single ring (eg, pyridyl or phenyl).
Or a polycondensed ring (eg, indolizinyl or benzothienyl)
)
You may have. Preferred heteroaryls include pyridyl, pyrrolyl and
And frills. When so substituted, the heterozygote herein is
Aryl groups may mean "substituted heteroaryl".
“Heterocycle” or “heterocyclic”
Is a group having 1 to 12 carbon atoms and a ring selected from nitrogen, sulfur and oxygen.
A monovalent saturated or mono- or polycondensed ring having 1 to 4 terror atoms
Means an unsaturated group.
Unless otherwise specified in the definition of heterocyclic substituent, the heterocyclic substituent
Groups are hydroxy, acyl, acyloxy, alkyl, substituted alkyl, alkoxy
, Substituted alkoxy, alkenyl, substituted alkenyl, alkynyl, substituted alkynyl
, Amino, aminoacyl, acylamino, aminoacyloxy, oxyacylua
Mino, aryl, aryloxy, carboxyl, carboxylalkyl, shea
No, halo, nitro, heteroaryl, trihalomethyl, thioalkoxy, substituted
Alkoxy, mono- and di-alkylamino, mono- and di- (substituted
Kill) amino, mono- and di-arylamino, mono- and di-heteroaryl
Amino, mono- and di-heterocyclic amino, and asymmetric di-configuration
Substituted amines (alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl
And different substituents selected from heterocyclic and heterocyclic)
It may be substituted with 1 to 3 substituents selected from the group. The heterocyclic
The group may have a monocyclic or polycondensed ring. Preferred heterocycles are
, Morpholino, piperidinyl and the like.
Examples of heterocycles and heteroaryls include furan, thiophene, thiazole
, Oxazole, pyrrole, imidazole, pyrazole, pyridine, pyrazine
, Pyrimidine, pyridazine, indolizine, isoindole, indole, ind
Dazol, purine, quinolidine, isoquinoline, quinoline, phthalazine, naphthy
Pyridine, quinoxaline, quinazoline, cinnoline, pteridine, carbazo
, Carboline, phenanthridine, acridine, phenanthrin, isothiazo
, Phenazine, isoxazole, phenoxazoline, phenothiazoline,
Imidazolidines, imidazolines, piperidines, piperazines, indolines, phthalates
Imide,
1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline, 4,5,6,7-tetrahydrobenzo [
b] thiophene, thiazole, thiazolidine, thiophene, benzo [b] thiophene
, Morpholino, piperidinyl, pyrrolidine, tetrahydrofuranyl and the like.
However, the present invention is not limited to these.
“Thiol” refers to the group —SH.
"Thioalkoxy" refers to the group -S-alkyl.
"Substituted thioalkoxy" refers to the group -S-substituted alkyl.
"Thioaryloxy" refers to an aryl-S- group wherein aryl group is
As defined above, including optionally substituted aryl groups also defined above.
).
"Thioheteroaryloxy" refers to a heteroaryl-S- group (where
A loaryl group is defined as including an optionally substituted aryl group as defined above.
As defined above).
In compounds of formula I, RbAnd RcIs fused to heteroaryl or
It can form a heterocyclic ring having a nyl group. By condensation in this manner, the formula:
[Where Rb 'Is as defined above, and A is fused, heteroaryl
Reel or heterocyclic groups (these terms are as defined above)
And two atoms of the phenyl ring are heteroaryl or heterocyclic.
Within the total atoms present in the group));
To produce a fused bicyclic structure. Examples of such fused ring systems include, for example, indole-
5-yl, indol-6-yl, thionaphthen-5-yl, thionaphthene-6
-Yl, isothionaphthen-5-yl, isothionaphthen-6-yl, indoki
Sazin-5-yl, indoxazin-6-yl, benzoxazol-5-yl
, Benzoxazol-6-yl, anthranyl-5-yl, anthranyl-6
I
Quinolin-6-yl, quinolin-7-yl, isoquinolin-6-yl, iso
Quinolin-7-yl, cinnolin-6-yl, cinnolin-7-yl, quinazoli
N-6-yl, quinazolin-7-yl, benzofuran-5-yl, benzofuran
-6-yl, isobenzofuran-5-yl, isobenzofuran-6-yl and the like
No.
“Pharmaceutically acceptable salt” is a pharmaceutically acceptable salt of a compound of Formula I.
The salts may be derived from various organic and inorganic counterions well known in the art.
For example, sodium, potassium, calcium, magnesium, ammonium
, Tetraalkylammonium, etc .;
Hydrochloride, hydrogen bromide, tartrate, methanesulfonate, acetic acid
Salts of organic or inorganic acids such as salts, maleates and oxalates.
Manufacture of compounds
The compounds of the above formula I can be used for the production of the compounds, the commercial availability of the starting materials, etc.
Some divergent synthetic rules with specific routes relatively chosen in terms of points
It can be easily manufactured with a plate.
In one synthetic method, the first amino acid NHTwoCH (RTwo) COOH or
Represents R in the ester1Introduce a group. Then, the first R1NHCH (RTwo)
COOH or its ester and NHTwoCH (RThree) C (O) Y with normal coupling
A compound of formula I (X is -C (O) Y).
Similarly, by performing a normal reduction reaction of the —C (O) Y group,TwoFor OH group
Induce.
Amino acid NHTwoCH (RTwo) R on COOH or its ester1The introduction of the group
This can be achieved using several methods. For example, haloacetic acid and primary amine
Is subjected to a normal coupling reaction to obtain an amide as shown in the following reaction formula (1).
Forming amino acids:
(Where R1And RTwoIs as defined above, and X ′ is chloro or butyl.
A halo group such as lomo is preferred).
Alternatively, leaving groups other than halo such as triflate, mesylate, and tosylate
It is possible to use any of them. in addition,1Using the appropriate ester of
Is also good.
Reaction formula (1)3Primary aryl / heteroaryl under the conditions giving
Amine2And suitable haloacetic acid derivatives1And a coupling reaction. This reaction
For example, Yate et al.TenAnd approximately stoichiometric equivalents of haloacetic acid1
And primary aryl / heteroarylamine2Combined with water, dimethyl sulfoxide
Perform under a suitable inert diluent such as Sid (DMSO). In the reaction, hydrogen carbonate
An excess of a suitable base, such as thorium or sodium hydroxide, is produced by the reaction.
Used to remove acid. The reaction typically takes place within 1 to about 24 hours
It is preferred to carry out at about 25 ° C to about 100 ° C until the reaction is completed. further,
The reaction is described in U.S. Pat.No. 3,598,859, which
It is incorporated herein by reference as it is. When the reaction is completed, the N-aryl / N-
Heteroaryl amino acids3Means precipitation, chromatography, filtration, etc.
Recovered by conventional methods.
In the reaction formula (1), each reagent (haloacetic acid)1, Primary aryl / heteroarylia
Min2And alcohol3) Are commercially available in large quantities,
well known.
In another embodiment, R1The group is converted to R by conventional N-arylation.1Alanine group
Coupling with an ester (or other suitable amino acid ester)
Is possible. For example, a stoichiometric equivalent or slightly excess amino acid ester
Is dissolved in a suitable diluent such as DMSO, and the haloaryl compound XR1(This
Where X is a halo group such as fluoro, chloro or bromo;1Is the above
And the coupling reaction is possible. The reaction is initiated by the reaction
Performed in the presence of excess base, such as sodium hydroxide, to remove the evolving acid.
It is. The reaction typically proceeds at 15 ° C. to about 250 ° C., in about 1 to 24 hours.
Complete. When the reaction is completed, the N-aryl amino acid ester is chromatographed,
Recover by conventional methods such as filtration.
In yet another embodiment, the esterified amino acid of formula I above is converted to the following reaction scheme (
2):
(Where R1And RTwoIs as defined above)
A suitable 2-oxocarboxylic acid ester (eg, pyruvate)
)).
In the reaction formula (2), an approximately stoichiometric equivalent of 2-oxocarboxylic acid6
And arylamines2In an inert diluent such as methanol or ethanol.
Combined and the reaction solution is treated under conditions that result in imine formation (not shown). Next
With an appropriate reducing agent such as sodium cyanoborohydride, HTwo
/ Reduction under conventional conditions, such as with palladium-carbon,
No acid ester5To form In a particularly preferred embodiment, the reducing agent is HTwo/ Paraj
Carbon, which is placed in the starting reaction medium and in the same reaction vessel.
The imine reduction can be performed as it is, and the N-aryl amino acid ester5Get
.
The reaction is typically conducted at about 20 ° C. to about 8 ° C. until the reaction is complete within 1 to about 24 hours.
It is preferably performed at 0 ° C. and 1 to 10 atmospheres. Upon completion of the reaction, the N-aryl
Amino acid ester5By conventional methods including chromatography, filtration, etc.
To collect.
The ester5Followed by a hydrolysis reaction to give the corresponding carboxylic acid
Lead to derivatives.
Further embodiments for producing N-aryl amino acids include amines of amino acids
Aromatic nucleophilic substitution of fluorobenzene with a group.
Then, the carboxylic acid derivative5Under conventional conditions well known in the art under the formula NHTwo
CH (RThree) C (O) Y (where RThreeAnd Y are as defined above) and
Allow a pulling reaction. The coupling reaction leads to a compound of formula I. Continued
And performing modifications (eg, reduction reactions) to further compounds of Formula I.
You.
When Y is an ester group, the compound of formula I is prepared from various ester groups.
Conventional transesterification can be used to make. Effective transesterification
A number of techniques are known in the art to do so, each technique simply corresponding to the ester group.
Replaced by a different ester group derived from alcohol or thioalcohol
And optionally a catalyst such as titanium (IV) iso-propoxide.
Used to promote completion of the reaction. In one technique, alcohol or
Alcohol is first treated with sodium hydride in a suitable diluent such as toluene
And the corresponding sodium alkoxide or sodium thioalkoxide
Formed and then used to effect transesterification. The efficiency of this technique
Said is particularly useful when using high boiling and / or expensive alcohols.
In another transesterification reaction, the ester to be transesterified is converted to an ester
In a large excess of alcohol or thioalcohol to achieve the exchange reaction
. Then add a catalytic amount of sodium hydride and react rapidly under normal conditions,
The desired transesterification product is obtained. This protocol uses a large excess of alcohol
Or this method requires the use of thioalcohol.
Especially useful.
The transesterification reaction involves the introduction of multiple different ester substituents on the compound of formula I above.
Provide a means of promoting. In all cases, realize transesterification
Alcohol or thioalcohol used in
It is well known in the art that it is possible.
As a method for producing the ester of the present invention, for example,
To the free acid, followed by the presence of a base such as potassium carbonate, e.g., halo-
O-alkylation with an alkyl group may be mentioned.
Further methods for preparing compounds of formula I are set forth in the Examples below.
There is something.
X is -CRFourRFourCompounds represented by Y ′ are N-hydroxysuccinimide, 1-
With or without well-known additives such as droxybenzotriazole,
Peptides that can use well-known coupling reagents such as bodimide
Under standard coupling reaction conditions well known in tide coupling chemistry, for example,
No alcohol HTwoNCHRThreeCRFourRFourOH to R1NHCHRTwoC (O) OH Carboki
It can be easily produced by performing a coupling reaction with a sil group. If necessary,
Well-known blocking on Y 'to protect the Y' group during the coupling reaction
Groups can be used. Particularly when Y ′ is an amino group, the blocking group is desirable.
Is done.
The reaction is usually performed in dimethylformamide, dichloromethane, chloroform,
Performed in an inert aprotic diluent such as nitrile, tetrahydrofuran. reaction
Upon completion, the desired compound is obtained by selectively removing the blocking group on Y '.
obtain.
When Y ′ is —OH or —SH, the corresponding ester of these groups (such as
That is, -OC (O) RFive), Disulfide (ie, -SSRFive) And -SSC (O
) RFivePost-synthesis conversion to groups can be achieved using well-known chemistry. For example
The ester synthesis is carried out under suitable esterification conditions with acetic acid (R7= Methyl), acid halide (
Requires reaction with a suitable acid such as, for example, acid chloride) or acid anhydride.
Only.
RFourWhen one of the groups is hydrogen, -CHRFourKeto by oxidation reaction after synthesis of OH
Led to derivatives. Alternatively, the appropriate aminoketone HCl salt can be
The ketone can be produced by a coupling reaction with a terminal carboxyl group.
You.
In these synthetic methods, the starting material contains a chiral center (eg, alanine)
If a racemic starting material is used, the resulting product
It is a mixture of a rheomer or the R, S enantiomer. Alternatively, the starting material
Can be used, and the reaction protocol used is the starting material
If one does not racemize, a chiral product is obtained. The reaction protocol is synthetic
May be accompanied by inversion of the chiral center.
Thus, unless otherwise indicated, the products of the invention are diastereomeric mixtures.
Compound (if two or more chiral centers are present) or R, S enane
It is a thiomeric mixture (when there is only one chiral center). However, chiral
If a product is desired, the chiral product preferably corresponds to an L-amino acid derivative.
New Alternatively, the chiral product provides one or the other stereoisomer,
A purification technique for separating diastereomers or enantiomers from a mixture of R and S
Can be obtained by law.Pharmaceutical prescription
When used as a medicament, the compound of formula I is usually administered in the form of a pharmaceutical composition.
You. These compounds are administered orally, rectally, transdermally, subcutaneously, intravenously, intramuscularly and intranasally.
It can be administered by various routes including: These compounds are injected and
It is effective as both components of the mouth. The composition is manufactured in a manner well known in the pharmaceutical arts.
And comprises at least one active compound.
The present invention also provides the active ingredient as described above in connection with a pharmaceutically acceptable carrier.
Pharmaceutical compositions containing one or more compounds of formula I are included. The composition of the present invention
In making, the active ingredient is usually mixed with excipients and diluted with excipients or capsules, flavors
Enclosed in the carrier, which can be in the form of a powder, paper or other container. The excipient is diluted
When used as an agent, it can be a solid, semi-solid or liquid material, which is active
Functions as a vehicle, carrier or medium for the components. Therefore, the composition is a tablet
, Pills, powders, troches, sachets, cachets, elixirs, suspensions, milk
Agent, solvent, syrup, aerosol (solid or liquid medium), ointment (eg
, Containing less than 10% by weight of active compound), soft and hard gelatin capsules, suppositories
, Decrease
It may take the form of a sterile injectable solvent and a sterile package powder.
In manufacturing pharmaceuticals, it is necessary to obtain the appropriate particle size before blending with other active ingredients.
The active compound has to be milled. If the active compound is essentially insoluble,
It is always necessary to pulverize to a particle size of 200 mesh or less. The active compound is
If qualitatively water-soluble, the particle size is usually essentially uniformly distributed in the pharmaceutical product, for example, about 40
Adjust by grinding to a mesh.
Some examples of suitable excipients include lactose, dextrose, sucrose
Sorbitol, mannitol, starch, acacia gum, calcium phosphate
Mu, alginate, tragacanth gum, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cell
Loin, polyvinylpyrrolidone, cellulose, sterilized water, syrup and methylcellulose
Lulose. In addition, the formulation ingredients (talc,
Lubricants such as magnesium theatrate and mineral oil; wetting agents; emulsions and suspending agents;
Chill- and propylhydroxy-benzoates; sweeteners; and fragrances.
Can be The composition of the invention may be administered to a patient using methods known in the art.
The active ingredient can be formulated for rapid, sustained or delayed release.
The composition comprises from about 5 to about 100 mg of the active ingredient, more usually from about 10 to about 30 m.
It is preferred to formulate in a unit dosage form containing g. The phrase "unit dosage form" refers to a human
And physically separate units suitable for unit dosage to other mammals.
An amount of the active substance, each unit together with a suitable pharmaceutical excipient, to produce the desired therapeutic effect.
Means those containing Preferably, the compound of formula I above is pharmaceutically inert
Up to about 20% by weight of the pharmaceutical composition, more preferably about 1%, in balance with the carrier.
Use at 5% by weight or less.
Active compounds are effective over a wide range of dosages and are generally pharmaceutically effective
Dose. However, the amount of the compound that is actually administered depends on the therapeutic condition,
Selected route of administration, actual compound administered, age, weight and response of individual patient, patient
Determined by the physician in light of appropriate circumstances, including the severity of symptoms of
It is.
For the production of solid ingredients such as tablets, the main active ingredient is mixed with pharmaceutical excipients,
A pre-formulation component is formed which contains a homogeneous mixture of the compound of the invention. these
A pre-formulated ingredient is homogeneous when the active ingredient is uniformly dispersed in the composition.
For this reason, the ingredients are used in unit dosages such as tablets, pills and capsules having the same efficacy.
It means that it can be easily divided into forms. The pre-formulated solid is then
The active ingredient is of the type described above containing, for example, 0.1 to about 500 mg.
Into sub-unit dosage forms.
The tablets or pills of the present invention can be coated or mixed for long-lasting action.
Dosage form. For example, tablets or pills have an inner preparation component and an outer preparation
It is composed of components, and the latter takes the form wrapping around the former. The two components are stomach
Resist collapse in the inside, and the inner components pass intact into the duodenum
Or an enteric layer for sustained release. Various substances
It can be used for layers or coatings, such as shellac, cetyl alcohol
Many polymeric acids and mixtures of polymeric acids with substances such as cellulose and cellulose acetate
Is mentioned.
The novel composition of the present invention may be in the form of a liquid preparation prepared for oral or injection,
Aqueous solutions, suitably flavored syrups, aqueous or oily suspensions,
Edible oils such as oil, cottonseed oil, sesamin oil, coconut oil, or peanut oil.
Flavored emulsions, as well as elixirs and similar pharmaceutical preparations.
Pharmaceutically acceptable aqueous or organic solvents or their
And solutions or suspensions added in powders. Liquid or solid
The body composition may include a suitable pharmaceutically acceptable excipient as described above. The composition
The substance is administered by the oral or nasal respiratory route with local or systemic effect
Is preferred. Compositions in preferred pharmaceutically acceptable solvents are prepared using inert gases.
It may be sprayed. The solution to be sprayed can be inhaled directly through the nebulizer
Well, or connect the nebulizer to a face mask tent or intermittent positive pressure respirator
Is also good. Delivery of the solution, suspension or powder composition in a suitable manner
It is preferably administered orally or nasally from the resulting device.
The following formulation examples illustrate representative pharmaceutical compositions of the present invention.
Formulation Example 1
Hard gelatin capsules were prepared containing the following ingredients:
amount
component (Mg / capsule)
Active ingredient 30.0
Starch 305.0
Magnesium stearate 5.0
The above ingredients were mixed and filled into hard gelatin capsules in an amount of 340 mg.
Formulation Example 2
A tablet formulation was prepared using the following ingredients:
amountcomponent (Mg / tablet)
Active ingredient 25.0
Cellulose, microcrystal 20.0
Colloidal silicon dioxide 10.0
Stearic acid 5.0
The ingredients were mixed and compressed to form tablets weighing 240 mg each.
Formulation Example 3
A dry powder inhaler formulation was prepared containing the following ingredients:component weight%
Active ingredient 5
Lactose 95
The active ingredient was mixed with lactose and the mixture was added into a dry powder inhaler
.
Formulation Example 4
Tablets containing 30 mg of each active ingredient were produced as follows.
amountcomponent (Mg / tablet)
Active ingredient 30.0mg
Starch 45.0mg
Microcrystalline cellulose 35.0mg
Polyvinyl pyrrolidone
4.0 mg (as 10% solution / sterilized water)
Starch carboxymethyl sodium salt 4.5mg
0.5 mg of sodium stearate
Talc1.0mg
120mg in total
Activating ingredients, starch and cellulose are passed through a No. 20 mesh US sieve.
And filtered and mixed thoroughly. Mix the polyvinylpyrrolidone solution with the remaining powder.
This was then filtered through a No. 16 mesh US sieve. Production
The dried granules are dried at 50 ° C. to 60 ° C. and filtered through a No. 16 mesh US sieve.
Was. Then, the starch was filtered through a mesh 30 US sieve in advance.
Sodium ruboxymethyl, magnesium stearate and talc
In addition, after mixing, the mixture was compressed with a tablet machine to obtain tablets weighing 120 mg each.
Formulation Example 5
Capsules containing 40 mg of each drug were made as follows:
amountcomponent (Mg / capsule)
Active ingredient 40.0mg
Starch 109.0mg
Magnesium stearate 1.0mg
150.0mg in total
Mix the active ingredient, starch and magnesium stearate, and use No. 20 Messi
Filtration through a new US sieve, filling 150mg into hard gelatin capsules
did.
Formulation Example 6
Suppositories containing 25 mg of each active ingredient were made as follows:component weight%
Active ingredient 25mg
Saturated fatty acid glyceride 2,000mg
Filter the active ingredients through a # 60 mesh US sieve and minimal
And suspended in pre-melted saturated fatty acid glyceride. Then,
The mixture was poured into tiny suppository molds of 2.0 g and allowed to cool.
Formulation Example 7
Each suppository containing the drug (50 mg) / dose (5.0 ml) was administered as follows.
I made:component weight
Active ingredient 50.0mg
Xanthog 4.0mg
Sodium cellulose carboxymethyl (11%)
Microcrystalline cellulose (89%) 50.0mg
1.75g sucrose
Sodium benzoate 10.0mg
Air freshener and dye
Purified water 5.0mL
Mix active ingredient, sucrose and xanthan gum, 10th mesh US sieve
And then pre-prepared microcrystalline cellulose and cellulose carboxyl
It was mixed with sodium methylate / water solution. Sodium benzoate, fragrance and
The dye was diluted with a small amount of water and added with stirring. Then add enough water and add
Amount.
Prescription 8
amountcomponent (Mg / capsule)
Active ingredient 15.0mg
407.0mg starch
Magnesium stearate 3.0mg
425.0mg in total
Mix the active ingredient, starch and magnesium stearate, and use No. 20 Messi
Filtration through a new US sieve, 425.0 mg in hard gelatin capsules
Filled.
Formulation Example 9
The subcutaneous formulation components can be manufactured as follows:component weight
Active ingredient 5.0mg
Corn oil 1.0mL
Formulation Example 10
A topical formulation is prepared as follows:component weight
Active ingredient 1-10g
Emulsion wax 30g
Liquid paraffin 20g
100g white soft paraffin
Heat until white soft paraffin dissolves. Liquid paraffin and emulsion wax
And stirred until dissolved. Add active ingredients and continue stirring until dispersed
. The mixture was cooled to a solid.
Another preferred formulation used in the method of the invention is a transdermal delivery means ("Package").
H)). The transdermal patch may be administered with the compound of the present invention either continuously or
It can be used to provide a discontinuously controlled amount. Drug
It is well known in the art to use and construct transdermal patches for delivery.
Well known. The references cited herein, e.g., U.S. Pat.No. 5,023,252 (19
(Issued June 11, 1991). The patch can deliver the drug continuously, beating, or
It can be configured to be transported when needed.
Sometimes it may be desirable to introduce a pharmaceutical composition directly or indirectly into the brain.
Is required. Direct techniques usually involve the delivery of a drug delivery catheter to a vascular-brain bath.
Consists of placement in the host's ventricular system to bypass the rear. Features in the body
One of the implantable delivery systems used to deliver biological factors to a defined anatomical area is
No. 5,011,472, incorporated herein by reference.
While indirect techniques are generally preferred, they generally convert hydrophilic drugs into lipids.
Formulation of compositions to render the drug latent by converting it to a soluble drug
Including. Latentization generally makes the drug more soluble in lipids and crosses the vascular-brain barrier.
Hydroxy, carbonyl, sulfate, etc.
And by blocking primary amine groups. Alternatively, for hydrophilic drugs
Delivery is by intra-arterial injection of a hypertonic solution capable of transiently opening the vascular-brain barrier
Can also be increased by
Other suitable ingredients for use in the present invention are described in Remington's literature (Remingto).
n's Pharmaceutical Sciences), Mace Publishing Company, Philadelphia, P
A, 17th edition (1985).
Use
The compounds and pharmaceutical compositions of the present invention are capable of releasing β-amyloid peptide and / or
Or it is useful for inhibiting its synthesis and is therefore
It is useful for treating Heimer's disease.
As mentioned above, the compounds described herein may be used to deliver the various drugs described above.
Suitable for systems. In addition, it increases the in vivo serum half-life of the administered compound.
The compound was placed in a capsule for introduction into the lumen of the liposome to form a colloid.
Or use other conventional methods that can increase the serum half-life of the compound.
It is. U.S. Patents, for example, by Szoka et al., Each of which are incorporated herein by reference.
As described in 4,325,871, 4,501,728 and 4,837,028, various methods
Helps to make thesomes.
The amount of the compound administered to the patient depends on the administration purpose, such as the dosage, prevention or treatment,
It varies depending on the patient's condition, administration form and the like. For therapeutic applications, the composition
Reduce the onset of symptoms of the disease and its complications in patients already suffering from AD
Administration in an amount sufficient to delay any. This purpose
An amount sufficient to achieve is defined as a "therapeutically effective amount." For book use
Effective amounts include the degree or severity of the patient's AD, the patient's age, weight, and normal conditions.
It is left to the discretion of the physician who is examining based on factors such as condition. Used for treatment
To
Administers a compound described herein at a dose of about 0.1 to about 500 mg / kg / day.
Is preferred.
For prophylactic applications, the compositions may be administered to patients at risk of developing AD (eg,
Onset of symptoms of the disease, as determined by genetic screening or familial characteristics)
Is administered in an amount sufficient to inhibit. An amount sufficient to achieve this objective is
The amount effective for this use is defined as the age, weight and weight of the patient.
It is left to the discretion of the physician who is examining based on factors such as and normal conditions. Prevention
For typical use, the compounds described herein can be administered at about 0.1 to about 500 mg / kg / day.
Preferably it is administered in doses.
As mentioned above, the compound administered to the patient is in the form of a pharmaceutical composition as described above. this
These compositions are sterilized by conventional sterilization techniques or can be sterile filtered.
It is. When using aqueous solutions, these are packaged for use as is.
Alternatively, it is freeze-dried. The lyophilized preparations are prepared from their sterile aqueous mixtures and powders
Is formulated. The pH of the formulation is typically between 3 and 11, preferably between 5 and 9
, 7-8 are most preferred. Use certain excipients, carriers or stabilizers mentioned above.
It can be understood that a pharmaceutical salt will then form.
The following synthetic and biological examples are provided to illustrate the invention.
And is not to be construed as limiting the scope of the invention. Especially described
Without, all temperatures are in degrees Celsius.
Example’
In the following examples, the following abbreviations have the following meanings. Abbreviations defined
If not, it shall have its generally accepted meaning.
BOC = tert-butoxycarbonyl
bd = Broad double line
bs = Broad singlet
Cbz = carbobenzyloxy
cc = cubic centimeter
CDI = 1,1′-carbonyldiimidazole
d = double line
dd = double line of double line
DMF = dimethylformamide
DMSO = dimethyl sulfoxide
EDC = 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodii
Mid / hydrochloride
EDTA = ethylenediaminetetraacetic acid
eq. = Equivalent
Ether = diethyl ether
g = grams
L = liter
m = multiple line
M = mole
max = maximum
mg = milligram
min. = Minutes
mL = milliliter
mM = millimolar
mmol = mmol
N = Regulation
ng = nanogram
nm = nanometer
OD = optical density
pg = picogram
pM = picomolar
psi = pounds per square inch
q = quadruple
quint. = quintuple
rpm = rotations / minute
rt = room temperature
s = singlet
sept = sevenfold line
t = triple line
THF = tetrahydrofuran
tlc = thin layer chromatography
μg = microgram
μL = microliter
UV = UV
w / v = weight per volume
In addition, the term "Aldrich" refers to the compound or compound used in the following process:
The reagent was from Aldrich Chemical Company, Inc., 1001 West Saint Pa.
ul Avenue, Milwaukee, WI 53233 USA)
The phrase "bakchem" means that a compound or reagent is a compound of Bachem Biosciences (
Bachem Biosciences Inc., 3700 Horizon Drive, Renaissance at Gulph Mills
, King of Prussia, PA 19406 USA).
The term “fluca” refers to a compound or reagent that is a compound or a reagent.
0 South 2nd Street, commercially available from Ronkonkoma NY 11779 USA)
The phrase "Lancaster" means that the compound or reagent is a Lancaster company (
Lancaster Synthesis, Inc., P.E. O. Box 100, Windham, NH 03087 USA)
Indicates that the compound or reagent is commercially available; the phrase "sigma"
Commercially available from Guma (Sigma, P.O. Box 14508, St. Louis, MO 63178 USA).
Indicates that the compound or reagent is available;
Commercial from Senn Chemicals AG, P.O.Box 267, CH-9157 Dielsdorf, Switzerland)
Indicates that it is available.
In the following examples, all temperatures are degrees Celsius (unless otherwise indicated) and
Each of the compounds shown in these Examples is one of the following general production methods unless otherwise indicated.
Manufactured by one.
General manufacturing method A
Reductive amination reaction
In a hydrogen-filled flask, add 2-oxocarbo
Acid ester (eg, pyruvate) (1 equivalent) followed by 10% palladium
-Carbon (25% by weight based on arylamine) was added. Reaction completed
Until it is indicated by tlc (30 minutes to 16 hours).
shaker) on, HTwo(20 psi). The reaction mixture is then celite
Filter through pad 545 (available from Aldrich) and spin
Free solvent was removed with a porator. Next, the crude product residue is further chromatographed.
Purified by luffy.
General manufacturing method B
N-heteroarylation of alanine
L-alanine (1.1 eq.) And NaOH (2 eq.) / DMSO solution were added at room temperature
Stir for 1 hour, then add 2-chlorobenzotriazole (1 equivalent). mixture
Was heated to 100 ° C. for 4 hours, then cooled to room temperature and poured on ice. Generated water
The pH of the solution was adjusted to ２2 and the precipitated solid was removed by filtration. Next
Dissolve the body in 1N NaOH and filter the resulting solution through a pad of Celite 545
I have. Adjust the pH of the filtrate to ~ 2, remove the white precipitate by filtration, wash with water
To give the product.
General manufacturing method C
Ester hydrolysis reaction to free acid
The ester hydrolysis reaction to the free acid was performed by a conventional method. Below,
Two examples of conventional deesterification reactions are given.
Carboxylic acid ester compounds (for example, by reductive amination in general production method A)
N-aryl amino acid esters were prepared) CHThreeOH / HTwoO (1: 1) mixture
In the compound, KTwoCOThree(2-5 equivalents) was added. that the reaction was completed by tlc
The mixture was heated to about 50 ° C for 0.5-1.5 hours until indicated. Bring the reaction to room temperature
And the methanol was removed on a rotary evaporator. PH of remaining aqueous solution
Adjusted to 2 and ethyl acetate was added to extract the product. Next, the organic layer is saturated.
Wash with aqueous NaCl solution and wash with MgSOFourAnd dried. Rotate the solution
The free solvent was removed on a rotator to give the product.
The amino acid ester was dissolved in dioxane / water (4: 1), and LiOH (
２2 eq.), Dissolved in water, and the total solvent after the addition was dioxane: water (about 2:
1). Stir the reaction mixture until the reaction is complete and remove dioxane.
Removed under reduced pressure. The residue was diluted with EtOAc, the layers were separated and the aqueous layer was acidified to pH 2
It has become. The aqueous layer was re-extracted with EtOAc and the combined organic layers were combined with NaTwoSOFourAnd dry
After a period of time, the solvent was removed under reduced pressure. The residue is purified by conventional methods (eg, recrystallization).
Made.
Next, the latter example will be described. 3-NOTwoMethyl es of phenylacetylalanine
Ter (9.27 g, 0.0348 mol) in dioxane (60 mL) -HTwoO (15 mL
), And LiOH (3.06 g, 0.0731 mol) was added.TwoO (15 mL
). After stirring for 4 hours, dioxane was removed under reduced pressure and the residue was
, And the aqueous layer was acidified to pH2. The aqueous layer was washed with EtOAc (4 × 100
mL) and the organic layer was combined with NaTwoSOFourAfter drying and filtration, the solvent is removed under reduced pressure.
Removed. The residue was recrystallized (from EtOAc / isooctane) to give the product (7.5
g, 85%).
Elemental analysis (C11H12NTwoOFiveAs):
Theory: C, 52.38; H, 4.80; N, 11.11,
Found: C, 52.54; H, 4.85; N, 11.08.
[α]twenty three= -29.9 @ 589 nm.
General manufacturing method D
First EDC coupling manufacturing method
CHTwoClTwoTo a 1: 1 mixture of the desired acid and aminoester / amide,
At 0 ° C., triethylamine (1.5 equivalents) followed by hydroxybenzotriazole
Monohydrate (2.0 equivalents) followed by ethyl-3- (3-dimethylamino) propyl
Bodiimide.HCl (EDC) (1.25 equivalents) was added. Stir the reaction at room temperature overnight
And then transferred to a separatory funnel, containing water, saturated NaHCOThreeAqueous solution, 1N HCl and
Wash with saturated aqueous NaCl, then MgSOFourAnd dried. Rotate about the solution
The free solvent was evaporated with an evaporator to obtain a crude product.
General manufacturing method E
Second EDC coupling manufacturing method
The carboxylic acid was dissolved in dichloromethane. The amino acid ester / amide (
1 eq.), N-methylmorpholine (5 eq.) And hydroxybenzotriazo
Le monohydrate (1.2 eq.) Was added continuously. Keep the ice bath until the solution reaches 0 ° C
Used for round bottom flasks. When the temperature reaches 1- (3-dimethylaminopro
(Pyr) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) (1.2 eq.) Was added. Dissolution
The solution was stirred overnight and heated to room temperature under nitrogen pressure. Before drying over sodium sulfate
Wash the organic layer with saturated aqueous sodium carbonate, 0.1 M citric acid and brine.
To work up the reaction mixture. Then, the solvent is removed to obtain a crude product.
Was. Purify by flash column chromatography purification in a suitable solvent
Product was obtained.
General manufacturing method FMethod for removing BOC- and tert-butyl ester
The BOC- and tert-butyl ester compounds are converted to CHTwoClTwoAnd trifle
Oroacetic acid (1: 1) mixture and until tlc indicates complete conversion
, Typically for 2 hours. Then the solution was evaporated to dryness and the residue was
Dissolved in chill. In the case of a BOC protected compound, the solution was washed with dilute HCl. Water layer
Was adjusted to basic pH and then extracted with ethyl acetate. tert-butyl ester
Solution, use saturated NaHCO 3ThreeWashed with aqueous solution. Then the aqueous layer is p
Adjusted to H2 and extracted with ethyl acetate. Next, the organic layer in any case was saturated.
Washed with aqueous NaCl solution and dried over MgSOFourAnd dried. For the solution, rotate the evaporator
The free solvent was evaporated on the rotator to give the product.
General manufacturing method G
N-alkylation method
3-aminoquinoline / CHTwoClTwoAdd triethylamine (1.1 eq) to the solution, followed by
And p-nitrobenzenesulfonyl (nosyl) chloride / CHTwoClTwoSolution added
. The reaction is stirred at room temperature for 5 hours, then di-nosylated aminoquinoline is filtered
And washed with ethyl acetate. Then, the substance is treated with dioxane and 1N
NaOH (1: 1) mixture and the solution was heated to 60 ° C. for 4 hours.
During this time all solids dissolved. Cool the reaction to room temperature, then adjust the pH to ~ 4.
Saved. The precipitated mono-nosylated aminoquinoline is removed by filtration and washed with water
did. Add this compound / THF solution to the NaH / THF suspension at −78 ° C.
Ethyl 2-bromopropionate was added. The reaction was warmed to room temperature, then 4 days
Reflux for a while. The free solvent is evaporated from the crude reaction mixture on a rotary evaporator.
, By chromatographic purification of the alkylated, nosylated aminoquinoline
Obtained. The product is then dissolved in DMF andTwoCOThree(3 equivalents) followed by thiophene
Knol (1.2 eq) was added. The reaction was stirred overnight at room temperature. Then water and d
The reaction was stopped with a saturated aqueous solution of NaHCO.ThreeAqueous solution and saturated NaCl
Wash with aqueous solution and then MgSOFourAnd dried. Rotating evaporator for solution
The free solvent is evaporated in a filter to give the crude product, which is then chromatographed.
Purified by
General manufacturing method H
Ester / amide exchange reaction
Add triethylaluminum to the desired amine (3 equivalents) / 1,2-dichloroethane solution.
(5.2 equivalents) was added under the surface of the solution with a syringe.
. After stirring at room temperature for 30 minutes, the target ester dissolved in 1.2-dichloroethane
The solution was added. Typically 3 hours until tlc indicates complete conversion
Yes
The liquid was refluxed. The reaction was then cooled to 0 ° C. and quenched with 10% HCl.
(Note: Slowly add the acid so that some foaming occurs during the addition of the acid
Should be). If the products do not dissolve in the aqueous acid, separate the mixture with a separating wax.
And separated into layers. The aqueous layer was washed with ethyl acetate, and the organic layer was washed with saturated aqueous NaCl.
Washed with solution, MgSOFourAnd concentrated under reduced pressure to leave a crude product.
For products soluble in aqueous acids, stop the reaction and reduce the reaction volume to the starting volume under reduced pressure.
To １ ／ of the total. Add 20% sodium potassium tartrate to the resulting solution
(Roche salt) and ethyl acetate were added. Adjust the pH of the solution to ~ 13 and
The luminium salt was dissolved in the aqueous solution. Separate the organic layer and extract the aqueous layer with ethyl acetate
did. The combined organic solutions were washed with saturated aqueous NaCl,FourDry and reduced
Concentration under pressure left a crude product.
General manufacturing method I
Ester reduction to alcohol
LiBH was added to the starting ester / anhydrous THF solution at 0 ° C.Four(1.0 equivalent) / THF
I got it. The solution was stirred overnight at room temperature and then quenched with water. Rotate the THF
Evaporate with an evaporator, add ethyl acetate and separate the layers. Organic layer is saturated Na
Wash with aqueous ClFourAnd concentrated under reduced pressure to leave the product.
General manufacturing method J
Triflate substitution reaction
R-(+)-iso-butyl lactate / CH at 0 ° CTwoClTwoAdd trifluoromethane to the solution
Sulfonic anhydride (1.1 eq) was added. After stirring at room temperature for 20 minutes, 2,6-lutidine
(1.1 eq) was added and stirring continued for 10 minutes. Next, the solution was treated with an arylamine (
1 equivalent) and diisopropylethylamine (1 equivalent) / CHTwoClTwoOr CHThree
NOTwoWas transferred at 0 ° C. to the flask containing. Keep the reaction at room temperature overnight, then rotate
Free solvent was removed with an evaporator. Dissolve the residue in ethyl acetate and add 5%
Acid, followed by saturated aqueous NaCl, and then the solution is rotary evaporated.
The free solvent is removed with a filter to obtain the crude product, which is then chromatographed.
Purified by chromatography.
General manufacturing method K
Formation of methyl ester derived from amino acids
An amino acid (amino acid or amino acid / hydrochloride) is suspended in methanol,
Refrigerated at ℃. HCl gas was bubbled through the solution for 5 minutes. Allow the reaction to warm to room temperature
And then stirred for 4 hours. Next, the solvent is removed and the desired amino acid methyl ester is removed.
Ter.hydrochloride was obtained. This compound was usually used without further purification.
Example A
Synthesis of N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine
The production method disclosed in U.S. Pat. No. 3,598,859 (the disclosure of
To produce N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine.
Built. In particular, 3,4-dichloroaniline (1 equivalent) (Aldrich) / isopropa
Of methanol (about 500 mL per mole of 3,4-dichloroaniline) in water (iso-
About 0.06 mL per mL of propanol) and 2-chloropropionic acid (2 equivalents)
Amount) (Aldrich) was added. Heat the mixture to 40 ° C and heat it for 4-5 days.
Before running, sodium bicarbonate (0.25 eq) was added in successive portions. cooling
Thereafter, the reaction mixture is poured into water and unreacted 3,4-dichloroaniline is filtered.
Removed. The filtrate is acidified to pH 3-4 with concentrated hydrochloric acid, and the generated precipitate is filtered and washed.
And dried to give the title compound (mp = 148-149 ° C).
Alternatively, following general procedure A above, 3,4-dichloroaniline (al
) And ethyl pyruvate (Aldrich) using oily N- (3,4-di-
(Chlorophenyl) -D, L-alanine ethyl ester was prepared. The reaction is silica
Gel tlc (Rf= 0.4, in 25% EtOAc / hexane).
Parative plate chromatography (silica gel, eluent: 25% EtOA)
c / hexane).
The NMR data is as follows:
C11H13ClTwoNOTwo(MW = 262.14); mass spectroscopy (MH+) 263.
For example, by subjecting this ester to a hydrolysis reaction in general production method C, the title compound can be obtained.
Get things.
Example B
Synthesis of N- (3.5-dichlorophenyl) -D, L-alanine
Using the process shown in U.S. Pat. No. 3,598,859 (or Example A above),
-(3,5-Dichlorophenyl) -D, L-alanine is converted to 3,5-dichloroaniline (A
Aldrich) and 2-chloropropionic acid (Aldrich).
Example C
Synthesis of N- (3.5-difluorophenyl) -D, L-alanine
Using the process shown in U.S. Pat. No. 3,598,859 (or Example A above),
-(3,5-difluorophenyl) -D, L-alanine is converted to 3,5-difluoroanily
(Aldrich) and 2-chloropropionic acid (Aldrich).
Was.
Example D
Synthesis of L-valine N, N-dimethylamide
Cbz-L-valine (2.51 g, 10 mmol) (buckchem) / DMF (20 mL
) To the stirring solution was added CDI (1.46 g, 9 mmol) and the mixture was stirred for 50 minutes.
Was. To this mixture was added dimethylamine (6 mL, 12 mmol) (Aldrich) / TH
F (5 mL) was added and the reaction mixture was stirred for 18 hours. The mixture was treated with ethyl acetate (1
00 mL), 10% HCl (3 × 40 mL), brine (10 mL) and
Wash with 20% potassium carbonate (2 × 50 mL)FourAnd dried. The mixture
After filtration and concentration, Cbz-L-valine N, N-dimethylamide was obtained.
Was hydrogenated under standard conditions using 10% Pd / C as a catalyst to remove the Cbz group.
The title compound was obtained as an oil.
The NMR data is as follows:
Example E
Synthesis of L-valine N-methylamide
Using methylamine instead of dimethylamine according to the procedure described in Example D
To give the title compound. The title compound was an oil.
The NMR data is as follows:
Example F
Synthesis of BOC-norleucinamide
BOC-norleucine (3.47 g, 15 mmol) (Bachem), 1-hydroxy
Cibenzotriazole monohydrate (3.44 g, 22.5 mmol) and dichloro
To a stirred mixture of methane (50 mL) at 0 ° C. was added EDC (3.45 g, 1.2 mmol).
added. The resulting mixture is stirred at 0 ° C. for 1 hour, then ammonia gas is added to the mixture.
I blew the thing for 10 minutes. Warm to room temperature using a cold bath and stir the mixture for 18 hours
did. The mixture was evaporated to dryness and triturated (20% NaTwoCOThreeuse
For). The resulting solid was collected by filtration, washed with water and the title compound (2.69 g, 11.
(7 mmol, 78%).
Example G
Synthesis of N- [3,5-di (trifluoromethyl) phenyl] -L-alanine
Step A:According to General Production Method J, 3,5-di (trifluoromethyl) aniline (Al
Oil) with R-(+)-isobutyl lactate (Aldrich).
-[3,5-di (trifluoromethyl) phenyl] -L-alanine isobutyl ester
I got The reaction is carried out on silica gel tlc (Rf= 0.38, 10% EtOAc / hex
(In San). Preparative plate thin-layer chromatography (solution
(Effluent: 10% EtOAc / hexane).
The NMR data is as follows:
CFifteenH17F6NOTwo(MW = 357.30); mass spectroscopy (MH+) 358.Step B:
Then, N- [3,5-di (trifluoromethyl) phenyl] -L-alanine
Isobutyl ester was prepared according to General Preparation C using lithium hydroxide in THF.
Hydrolyzed.
Example H
Synthesis of N- (3,5-dimethoxyphenyl) -D, L-alanine
The title compound was prepared as described in US Pat. No. 3,598,859 (or Example A above).
3,5-dimethoxyaniline (Aldrich) and 2-chloropropio
Manufactured using acid (Aldrich).
Example I
Synthesis of N- (3,4-dimethoxyphenyl) glycine
The title compound was prepared using the procedure shown in U.S. Pat.
(Rolophenyl) glycine was converted to 3,4-dichloroaniline (Aldrich)
Produced using loroacetic acid (Aldrich).
Example J
Synthesis of N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-phenylglycine
3,5-dichloroaniline (1 eq.) (Aldrich) and α-bromophenyl
Methyl acetate (1 eq.) (Aldrich) was replaced with N-methylmorpholine (Aldrich).
Both were refluxed in ethanol for 3 days. After standard work-up, the residue is crystallized (acetic acid
From ethyl / hexane / ether / water) to give N- (3,5-dichlorophenyl)-
D, L-phenylglycine methyl was obtained. Then, the methyl ester is converted to methanol
Hydrolysis with 1M NaOH / water in toluene gave the title compound.
Example 1
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-valine methyl
ester
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), L-valine methyl
Ester / hydrochloride (Sigma) and N- (3,4-dichlorophenyl) alanine (above
The title compound was prepared using Example A).
The NMR data is as follows:
Example 2
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-valine NI
So-butylamide
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, LA
Ranyl] -L-valine methyl ester (from Example 1 above) and isobutylamido
(Aldrich) was used to produce the title compound as an oil. The reaction is silica gel
tlc (Rf= 0.3, in 10% methanol / dichloromethane).
The NMR data is as follows:
C18H27NThreeOTwoClTwo(MW = 388.3); mass spectroscopy (MH)+) 389.
Example 3
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-threonine
Chill ester
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), N- (3,4-dichloromethane was used.
(Lorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above) and L-threonine methyl
The title compound was prepared as an oil using cholesterol hydrochloride (Sigma). The reaction student
The product was subjected to silica gel chromatography (eluent, 50% ethyl acetate / hexane).
Further purification was performed.
The NMR data is as follows:
C14H18NTwoOFourClTwo(MW = 349.22); mass spectroscopy (MH)+) 349.
Example 4
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-valine ethyl
ester
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), N- (3,4-dichloromethane was used.
(Lorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above) and L-valine ethyl
The oily title compound was prepared using stel.HCl. The reaction product is silica
Purification was performed by gel chromatography (eluent, 35% ethyl acetate / hexane).
Was.
The NMR data is as follows:
C16Htwenty twoNTwoOThreeClTwo(MW = 361.27); mass spectroscopy (MH+) 361.
Example 5
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-valine ter
t-butyl ester
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), N- (3,4-dichloromethane was used.
(Lorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above) and L-valine tert
The title compound was prepared as an oil using -butyl ester hydrochloride (Sigma). The
The reaction product was chromatographed on silica gel (eluent, 25% ethyl acetate / hexane).
Sun).
The NMR data is as follows: C18H26NTwoOThreeClTwo(MW = 389.33); mass spectroscopy (MH+) 389.
Example 6
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-valinamide
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), N- (3,4-dichloromethane was used.
(Lorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above) and L-valinamide
The title compound was prepared using the hydrochloride salt (Sigma) as a solid (melting point: 156-158 ° C).
Was. The reaction product is subjected to silica gel chromatography (eluent, CHTwoClTwo: Me
OH: NHFourOH (90: 10: 1)).
The NMR data is as follows:
C14H19NThreeOTwoClTwo(MW = 331); mass spectroscopy (MH+332).
Example 7
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -L-alanine N- (1-hydroxy-
3-methyl-2-butyl) amide
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), N- (3,4-dichloromethane was used.
(Rolophenyl) -D, L-alanine (from Example A above) and Valinol (Sigma)
Was used to produce the title compound as an oil. The reaction product is subjected to silica gel chromatography.
Raffy (eluent, EtOAc / hexane (45:55), CHTwoClTwo: MeOH
: NHFourOH (90: 10: 1)).
The NMR data is as follows:
C14H20NTwoOTwoClTwo(MW = 319.23); mass spectroscopy (MH)+) 319.
Example 8
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -L-alanyl] -L-valine N, N-di
Methylamide
N, N-dimethylamide (from Example D above) and N- (
Using 3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above),
The title compound was prepared in the form (melting point = 145-160 ° C).
The NMR data is as follows:
C16Htwenty threeNThreeOTwoClTwo(MW = 360.29); mass spectroscopy (MH+) 360.
Example 9
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-valine N-meth
Cylamide
According to General Preparation D, L-valine N-methylamide (from Example E above) and
Using N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above)
To give the title compound as a solid (mp = 145-160 ° C.).
The NMR data is as follows:
CFifteenHtwenty oneNThreeOTwoClTwo(MW = 346.26); mass spectroscopy (MH+) 346.
Example 10
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-alaninemethyl
Ruster
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), L-alanine methyl
Ester / hydrochloride (Sigma) and N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-ara
The title compound was prepared as an oil using nin (from Example A above). The reaction is tl
c (Rf= 0.24, in EtOAc: hexane (1: 1).
By flash chromatography (eluent, EtOAc: hexane (1: 1))
Purified.
The NMR data is as follows:
C13H16NTwoOThreeClTwo(MW = 319.19); mass spectroscopy (MH)+) 319.
Example 11
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -L-alanyl] -L-leucine methyl
ester
L-leucine methyl ester hydrochloride (Sigma) and N
Using-(3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above)
The title compound was prepared as a solid (mp = 120-132 ° C.). The reaction is performed using tlc (Rf
= 0.49 in EtOAc: Hexane (1: 1).
Purified by chromatography (eluent, EtOAc: hexane (1: 1))
Was.
The NMR data is as follows:
C16Htwenty twoNTwoOThreeClTwo(MW = 361.27); mass spectroscopy (MH+) 361.1.
Example 12
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -L-alanyl] -L-phenylalani
Methyl ester
According to General Production Method D, L-phenylalanine methyl ester hydrochloride (Sigma)
And N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above)
The title compound was prepared as a solid (mp = 122-124.5 ° C.). The reaction is
tlc (Rf= 0.47 in EtOAc: Hexane (1: 1)
The product was subjected to flash chromatography (eluent, EtOAc: hexane (1: 1)).
The purification was carried out.
The NMR data is as follows:
C19H20NTwoOThreeClTwo(MW = 395.29); mass spectroscopy (MH)+) 395.
Example 13
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-isoleucine
Methyl ester
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), L-isoleucine
Methyl ester hydrochloride (Sigma) and N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L
Using alanine (from Example A above), a solid (melting point = 95.5-101.5 ° C)
The title compound was prepared. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.62, EtOAc: hexane
(1: 1)) and the product was flash chromatographed (eluent,
(EtOAc: hexane (1: 1)).
The NMR data is as follows:
C16Htwenty twoNTwoOThreeClTwo(MW = 361.27); mass spectroscopy (MH+) 361.1.
Example 14
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -L-alanyl]-(S) -2-aminope
Methyl tantanate
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), L-norvaline
N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L
-Title of solid (melting point = 150-153 ° C) using alanine (from Example A above)
The compound was prepared. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.57, EtOAc: hexane (1
: During 1) and the product was flash chromatographed (eluent, Et
OAc: hexane (1: 1)).
The NMR data is as follows: CFifteenH20NTwoOThreeClTwo(MW = 347.24); mass spectroscopy (MH+) 347.
Example 15
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -L-alanyl]-(S) -2-amino
Xanic acid methyl ester
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), L-norleucine
Methyl ester hydrochloride (Sigma) and N- (3,4-dichlorophenyl) alan
Using the title compound (derived from Example A above) to give the title compound as a solid (melting point = 163-165 ° C).
Manufactured. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.55 in EtOAc: Hexane (1: 1)
And the product was flash chromatographed (eluent, EtOAc:
Hexane (1: 1)).
The NMR data is as follows:
C16Htwenty twoNTwoOThreeClTwo(MW = 361.27); mass spectroscopy (MH+) 361.
Example 16
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-tryptophan
Methyl ester
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), L-tryptopha
Methyl ester hydrochloride (Sigma) and N- (3,4-dichlorophenyl) -D,
Title of solid (melting point = 54-66 ° C.) using L-alanine (from Example A above)
A compound was produced. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.43, EtOAc: hexane (1:
The product was flash chromatographed (eluent, EtO
Ac: hexane (1: 1)).
The NMR data is as follows:
Ctwenty oneHtwenty oneNThreeOThreeClTwo(MW = 434.33); mass spectroscopy (MH+) 434.
Example 17
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-asparagine
Acid β- (tert-butyl ester) α-methyl ester
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), L-asparagine
Acid β- (tert-butyl ester) α-methyl ester hydrochloride (Bakchem) and
And N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above)
To produce the title compound. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.56, EtOAc: hex
The product was flash chromatographed (elution).
Liquid, EtOAc: hexane (1: 1)).
The NMR data is as follows:
C18Htwenty fourNTwoOFiveClTwo(MW = 419.31); mass spectroscopy (MH+) 418.
Example 18
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-asparagine
Acid α-methyl ester
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-asparagine
Of acid β- (tert-butyl ester) α-methyl ester (from Example 17 above)
The tert-butyl ester group was removed by general procedure F to give a solid (mp = 53.5-3.5).
56 ° C.). The reaction is performed using tlc (Rf= 0.54, EtOAc: f
In xane (1: 1).
The NMR data is as follows:
C14H16NTwoOFiveClTwo(MW = 363.20); mass spectroscopy (MH+) 363.
Example 19
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -Nε-BOC-L
-Lysine methyl ester
According to general production method D, N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (top
From Example A) and Nε-BOC-L-lysine methyl ester hydrochloride
The title compound was prepared as an oil using Chem. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.23
, 45% ethyl acetate / hexane).
The NMR data is as follows: Example 20
N- [N-benzothiazol-6-yl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amino
Hexanoic acid methyl ester
Step A:Synthesis of N- [N-benzothiazol-6-yl) -D, L-alanine
6-aminobenzothiazole (1 gram) (Lancaster) / dichloromethane (6
0 mL) solution with pyridine (0.63 grams) followed by trifluoroacetic anhydride (2.
(1 gram) at room temperature. The reaction solution was stirred for 3 hours, during which time
The warm reaction mixture was cooled to room temperature. Washing the mixture with 5% aqueous citric acid,
MgSOFour6-Aminobene, solid colored cream colored by removing solvent
Zotriazole trifluoroacetamide was obtained quantitatively and immediately
Was used for the reaction.
Some 6-aminobenzotriazole trifluoroacetamide (300 mg)
Was dissolved in THF (35 mL) and KH (1.2 eq.) Was added at room temperature. Solution at 5 o'clock
Reflux and cool 18-crown-6 (Aldrich) with 2-bromopropion
Ethyl acetate (331 mg) (Aldrich) and the resulting mixture was refluxed for 36 hours.
Shed. The reaction mixture is cooled, the solvent is removed under reduced pressure and the residue is dissolved in ethyl acetate
I understand. The organics were washed with water. Adjust the pH of the aqueous layer to pH 5 and extract with ethyl acetate.
Was. MgSO combined with organic partFourAnd the solvent was removed. Preparing crude material
Purified by E. tlc (eluent, dichloromethane / methanol (94: 4))
-(Benzothiazol-6-yl) -D, L-alanine ethyl ester (Rf= 0.
5) was obtained. This substance is treated under reflux with methanol and potassium carbonate (5 eq.),
It was then cooled to remove the solvent. The residue was dissolved in water and ethyl acetate. The water layer
Was adjusted to pH 2 and extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate extract is dried and the solvent
Was removed to obtain N- (benzotriazol-6-yl) -D, L-alanine.
Step B:N- [N-benzotriazol-6-yl) -D, L-alanyl]-(S)
Synthesis of methyl 2-aminohexanoate
General production method D (using DMF as a reaction solvent and ethyl acetate as an extraction solvent,
And without washing with 1N HCl), L-norleucine methyl ester
-Hydrochloride (Sigma) and N- (benzotriazol-6-yl) -D, L-alani
The title compound was prepared using the compound (from Step A above). The reaction is performed using tlc (Rf=
0.28 in EtOAc: hexane (1: 1) and flashed the product.
Purification was performed by flash chromatography (eluent, EtOAc: hexane (1: 1)).
Was.
The NMR data is as follows:
C17Htwenty threeNThreeOThreeSTwo(MW = 349.46); mass spectroscopy (MH+) 350.
Example 21
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-lysinemethyl
ester
According to the general production method F, N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-arani
Le] -NεUsing -BOC-L-lysine methyl ester (from Example 19 above)
The title compound was prepared as an oil. The reaction product is subjected to silica gel chromatography (
Eluate, CHTwoClTwo: MeOH: NHFourOH (89: 10: 1)).
Was.
The NMR data is as follows:
C16Htwenty threeNThreeOThreeClTwo(MW = 376.28).
Example 22
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-tyrosinemethyl
Ruster
According to General Procedure D above, L-tyrosine methyl ester (Sigma) and N- (
Using 3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above),
The title compound, a stereoisomer mixture for lanine, was prepared. The reaction is tl
c (Rf= 0.29, 10% MeOH / CHTwoClTwoTracked by flash)
Purification by chromatography (eluent, 10% methanol / dichloromethane)
went.
The NMR data is as follows:
C19H20NTwoOFourClTwo(MW = 411.28).
Example 23
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-alaninemethyl
Ruster
According to general production method D, N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-alanine (top
From Example B) and L-alanine methyl ester hydrochloride (Sigma)
The title compound was prepared as an oil. The reaction mixture is chromatographed on silica gel.
(Eluent, 50% ethyl acetate / hexane) was used for purification.
The NMR data is as follows:
C13H16NTwoOThreeClTwo(MW = 319.19); mass spectroscopy (MH+) 319.
Example 24
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) -L-alanyl]-(S) -2-aminope
Methyl tantanate
According to general production method D, N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-alanine (top
Example B) and L-norvaline methyl ester hydrochloride (Sengchem)
To produce the title compound. The reaction mixture is subjected to silica gel chromatography (
Purification was performed using an eluate (50% ethyl acetate / hexane).
The NMR data is as follows:
CFifteenH20NTwoOThreeClTwo(MW = 347.24); mass spectroscopy (MH+) 346.
Example 25
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) -L-alanyl] -L-phenylalani
Methyl ester
According to general production method D, N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-alanine and
And L-phenylalanine methyl ester hydrochloride (Sigma) to give the title compound
Was manufactured. The reaction product is subjected to silica gel chromatography (eluent, 50% vinegar).
(Ethyl acetate / hexane).
The NMR data is as follows:
C19H20NTwoOThreeClTwo(MW = 395.29); mass spectroscopy (MH+) 394.
Example 26
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-asparagine
Acid β- (methyl ester) α-methyl ester
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), L-aspartic acid
β- (methyl ester) α-methyl ester (Sigma) and N- (3,4-dichloro
Using phenyl) -D, L-alanine (from Example A above), solid (melting point = 113.
5-118 ° C). The reaction is performed using tlc (Rf= 0.29, 10
% EtOAc / hexane) and the product was flash chromatographed.
Purification was carried out with a feed (eluent, EtOAc / hexane (1: 1)).
The NMR data is as follows: CFifteenH18NTwoOFiveClTwo(MW = 377.23); mass spectroscopy (MH+) 377.
Example 27
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(N'-1-benzyl
) -L-histidine methyl ester
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), 1-benzyl-L-
Histidine methyl ester hydrochloride (Sigma) and N- (3,4-dichlorophenyl)
Solid) (melting point = 49-51 ° C.) using -D, L-alanine (from Example A above)
The title compound was prepared. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.21, 5% methanol / di
(In chloromethane) and purify the product by flash chromatography (solvent).
Purification was performed by effluent, 5% EtOAc / hexane (1: 1).
The NMR data is as follows:
Ctwenty threeHtwenty fourNFourOThreeClTwo(MW = 475.38); mass spectroscopy (MH+) 475.
Example 28
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-glutamic acid
β- (tert-butyl ester) α-methyl ester
According to general procedure D (without washing with 1N HCl), L-glutamic acid β
-(Tert-butyl ester) α-methyl ester hydrochloride (Bachem) and N
Using-(3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above)
The title compound was prepared as an oil. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.52 and 0.59,
Et0Ac / hexane (1: 1)) and the product was flash chromatographed.
Purification was performed by chromatography (eluent, EtOAc / hexane (1: 1)).
The NMR data is as follows:
C19H26NTwoOFiveClTwo(MW = 433.34); mass spectroscopy (MH+) 432.
Example 29
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-glutamic acid
α-methyl ester
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] glutamic acid β-
(tert-Butyl ester) α-methyl ester (from Example 28 above)
The t-butyl ester group was prepared by a general production method F (NaHCOThreeThe product with vinegar
(Recovered from the ethyl acid layer) to give the title compound as a solid (mp = 42-45 ° C.).
Obtained. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.42 and 0.50, 10% methanol / dic
(In dichloromethane).
The NMR data is as follows: CFifteenH18NTwoOFiveClTwo(MW = 377.23).
Example 30
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -L-alanyl] -L-leucinamide
According to General Production Method D, L-leucinamide hydrochloride (Sigma) and N- (3,
Titled using 4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above).
A compound was produced. Then, the compound is subjected to column chromatography (eluate,
EtOAc / hexane (1: 1) followed by 5% MeOH / dichloromethane).
Purification.
The NMR data is as follows:
CFifteenHtwenty oneNThreeOTwoClTwo(MW = 346.26); mass spectroscopy (MH+) 346.
Example 31
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(3,5-diiodo
) -L-Tyrosine methyl ester
According to General Production Method D, 3,5-diiodo-L-tyrosine methyl ester salt
Acid salt (Bachem) and N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (as described above)
Example A) (from Example A) using the title compound which is a mixture of stereoisomers for alanine.
Was manufactured. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.29, 10% MeOH / CHTwoClTwoDuring ~
) And flash chromatography (eluent, 10% methanol /
(Dichloromethane).
The NMR data is as follows:
C19H18NTwoOFourClTwoITwo(MW = 663.08); mass spectroscopy (MH+) 663.
Example 32
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(3-iodo) -L
-Tyrosine methyl ester
According to General Production Method D, 3-iodo-L-tyrosine methyl ester hydrochloride (
According to general manufacturing method K, manufactured using 3-iodo-L-tyrosine (Aldrich))
And N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above)
Was used to produce the title compound, which is a mixture of stereoisomers for alanine. Anti
The response is tlc (Rf= 0.29, 10% MeOH / CHTwoClTwoMedium)
Flash chromatography (eluent, 10% methanol / dichloromethane)
Was used for purification.
The NMR data is as follows: C19H19NTwoOFourClTwoI (MW = 537.18); mass spectroscopy (MH+) 538.
Example 33
Following general procedures and the examples described herein, the following compounds:
N- [N- (4-chlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-phenylalanine
A chill ester can be produced.
Example 34
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) glycyl]-(S) -2-aminopentane
Acid methyl ester
According to the general production method D, N- (3,4-dichlorophenyl) glycine (Example described above)
I) and L-norvaline methyl ester hydrochloride (Senghem)
The title compound was prepared. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.32, 50% ethyl acetate / hex
Tracking) and silica gel chromatography (eluent, ethyl acetate /
(Hexane).
The NMR data is as follows:
C14H18NTwoOThreeClTwo(MW = 333.22); mass spectroscopy (MH+) 334.
Example 35
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -Nε− (Hexano
Yl) -L-lysine methyl ester
According to general production method D, N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-ara
Nil] -L-lysine methylster (from Example 21 above) and hexanoic acid (aldo
To produce the title compound. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.38, 6
0% CHTwoClTwo/ 10% hexane / 27% EtOAc / 3% MeOH)
Follow up and flash chromatography (eluent, 60% CH)TwoClTwo/ 10%
Purification was performed with (xan / 27% EtOAc / 3% MeOH).
The NMR data is as follows:
Ctwenty twoH33NThreeOFourClTwo(MW = 474.43); mass spectroscopy (MH+) Not detected.
Example 36
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-phenylara
Ninamide
According to general procedure D, phenylalanine amide (Bachem) and N- (3,4
-Dichlorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above) to give a solid
(Point = 177-179 ° C.). The title compound is then
Purification was performed by churating (using chloroform).
The NMR data is as follows: C18H19NThreeOTwoClTwo(MW = 380.28); mass spectroscopy (MH+) 380.
Example 37
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amino
Hexane- (N-methyl) amide
According to General Production Method D, L-norleucine N-methylamide (BOC-L-NO
Luleucine (Bakchem) and methylamine (Aldrich) are prepared using general process E
Prepared by coupling reaction followed by removal using general procedure F
) And N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine.
A compound was produced. Next, the present title compound is washed (using an aqueous potassium carbonate solution).
Thus, purification was performed.
The NMR data is as follows:
C16Htwenty threeNThreeOTwoClTwo(MW = 360.29); mass spectroscopy (MH+) 360.
Examples 38 and 39
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -β-cyclohexyl
Lualanine methyl ester
According to general production method D, β-cyclohexylalanine methyl ester (general
Prepared from β-cyclohexylalanine (Bachem) using process K) and
Using N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine,
The title compound was prepared as an oil, which was a mixture of diastereomers. The reaction is tlc
(Rf= 0.27 (second isomer) and 0.30 (first isomer), 35% Et
OAc / in hexane) and flash chromatography (eluent,
Purification was performed by (35% EtOAc / hexane).
The NMR data is as follows (first isomer-Example 38):
The NMR data is as follows (second isomer-Example 39):
C19H26NTwoOThreeClTwo(MW = 401.34); mass spectroscopy (MH+) 401.
Example 40
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -L-alanyl]-(S) -2-amino
Xanamide
According to general production method D, L-norleucinamide (using general production method F
CL-norleucinamide (prepared from Example F above) and N- (3,
Using 4-dichlorophenyl) -D, L-alanine, solid (mp = 156-16)
1 ° C.) to give the title compound.
The NMR data is as follows: CFifteenHtwenty oneNThreeOTwoClTwo(MW = 346.26); mass spectroscopy (MH+) 346.
Example 41
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amino
Hexane- (N, N-dimethyl) amide
According to general production method D, L-norleucine N, N-dimethylamide (BOC-L
-Norleucine (Bachem) and dimethylethylamine (Aldrich)
The coupling reaction is carried out using Method E, and then the BOC-group is
Prepared by removal) and N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-
The title compound was prepared using alanine as a solid (mp = 137-160). reaction
Is tlc (Rf= 0.20 and 0.24, 5% MeOH / CHTwoClTwoMiddle)
Purification was performed by sedimentation (from water) of the compound.
The NMR data is as follows:
C17Htwenty fiveNThreeOTwoClTwo(MW = 374.31); mass spectroscopy (MH+) 374.
Example 42
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-methionine
Chill ester
According to General Production Method D, L-methionine methyl ester hydrochloride (Sigma) and
And N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanine (from Example A above)
The title compound was prepared as a mixture of diastereomers. The reaction is performed using tlc (Rf
= 0.35 in 43% EtOAc / hexane) and flashed the compound.
Purification was performed by chromatography (eluent, 43% EtOAc / hexane).
became.
The NMR data is as follows:
CFifteenH20NTwoOTwoClTwoS (MW = 379.31); mass spectroscopy (MH+379).
Example 43
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amino
Hexane- (N, N-dimethyl) amide
According to general production method E, L-norleucine N, N-dimethylamide (BOC-L
-Norleucine (Bachem) and dimethylamine (Aldrich) were prepared according to the general process E.
And then the BOC-group is removed using general procedure F
And N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-arani
The title compound was prepared using the compound (from Example B above). The reaction is performed using tlc (Rf
= 0.25-0.30 in 3% methanol / dichloromethane)
The mixture was purified by chromatography (eluent, 3% methanol / dichloromethane).
Was manufactured.
The NMR data is as follows: C17Htwenty fiveNThreeOTwoClTwo(MW = 374.31).
Example 44
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amino
Hexanamide
According to general production method D, N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-alanine (
(From Example B above) and L-norleucinamide (from Example F above)
The title compound was prepared. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.15, 3% methanol / di
The compound was analyzed by thin-layer chromatography (eluent,
(3% methanol / dichloromethane).
The NMR data is as follows:
CFifteenHtwenty oneNThreeOTwoClTwo(MW = 346.26).
Example 45
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amido
Nohexane- (N-methyl) amide
According to General Production Method D, N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-alanine and
And L-norleucine N-methylamide (BOC-L-norleucine (Bachem)
And methylamine (Aldrich) by a coupling reaction using general production method E
, Followed by removal of the BOC-group using general procedure F).
To produce the title compound. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.25, 3% methanol
/ In dichloromethane) and purify this compound by thin layer chromatography (elution).
Liquid, 3% methanol / dichloromethane).
The NMR data is as follows:
C16Htwenty threeNThreeOTwoClTwo(MW = 360.29).
Example 46
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl] -L-histidine
Chill ester
Following general procedure D (without washing with 1N HCl), L-histidine
Methyl ester hydrochloride (Sigma) and N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L
The title compound was prepared as a solid (melting point = 55-60 ° C) using -alanine. reaction
Is tlc (Rf= 0.52 in 10% methanol / dichloromethane)
The compound was purified by flash chromatography (eluent, 50% EtOAc /
(Xan).
The NMR data is as follows:
C16H18NFourOThreeClTwo(MW = 385.25); mass spectroscopy (MH+) 385.
Example 47
N- [N- (quinolin-3-yl) -D, L-alanyl]-(S) -2-aminohex
Sanic acid methyl ester
Using the general production method G, the hydrolysis reaction shown in the general production method C is carried out,
N- (quinolin-3-yl) -D, L-alanine was produced. Then, the compound is
Using L-norleucine methyl ester hydrochloride (Sigma) and general production method D,
The pulling reaction yielded the title compound as an oil. The latter reaction is tlc (Rf=
0.76 in 10% methanol / dichloromethane; 0.07, EtOAc: hexa
(1: 1)) and flash chromatography of the compound (elution)
Liquid, 10% methanol / dichloromethane).
The NMR data is as follows:
C19Htwenty fiveNThreeOThree(MW = 343.43).
Example 48
N- [N- (benzothiazol-2-yl) -L-alanyl]-(S) -2-amino
Hexanoic acid methyl ester
According to general procedure B, 2-chlorobenzothiazole (Aldrich) and L
N- (benzothiazol-2-yl) -L- using alanine (Aldrich)
Alanine was produced. Next, the present compound is treated with L-norleucine methyl ester salt
Using acid salt (Sigma) and general procedure D (without washing with 1N HCl), solidification
The title compound was obtained in the form (melting point = 99-120 ° C). The latter reaction is tlc (Rf=
0.42 in EtOAc: hexane (1: 1) and the product was purified
Active plate chromatography (eluent, 1: 1 EtOAc: hexane)
And MeOH: dichloromethane (5:95)).
The NMR data is as follows:C17Htwenty threeNThreeOThreeS (MW = 349.46); mass spectroscopy (MH+) 350.
Example 49
N- [N- (3,5-difluorophenyl) -D, L-alanyl] -L-alanine
Chill ester
According to General Production Method E, L-alanine methyl ester hydrochloride (Sigma) and
Using N- (3,5-difluorophenyl) -D, L-alanine (from Example C above)
The title compound was obtained as a solid (melting point = 93-95 ° C). The reaction is performed using tlc (Rf=
0.4 in 3% methanol / dichloromethane) and flash the product.
Purification by liquid chromatography (eluent, 3% methanol / dichloromethane)
Done.
The NMR data is as follows:
C13H16NTwoOThreeFTwo(MW = 286.3); mass spectroscopy (MH+) 287.
Example 50
N- [N- (3,5-difluorophenyl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amido
Nohexanoic acid methyl ester
According to General Production Method E, L-norleucine methyl ester hydrochloride (Sigma) and
And N- (3,5-difluorophenyl) -D, L-alanine (from Example C above)
Was used to give the title compound as a solid (mp = 93-95 ° C.). The reaction is performed using tlc (Rf
= 0.6, in 3% methanol / dichloromethane).
Purified by chromatography (eluent, 3% methanol / dichloromethane)
Was performed.
The NMR data is as follows:
C16Htwenty twoNTwoOThreeFTwo(MW = 328.3); mass spectroscopy (MH+) 329.
Example 51
N- [N- (3,4-difluorophenyl) -L-alanyl]-(S) -2-amino
Hexanamide
General production method D (using DMF as a solvent and ethyl acetate as an extraction solvent,
And L-norleucinamide (BO)
Manufactured from CL-norleucinamide (derived from Example F above) using general manufacturing method F
) And N- (3,4-dichlorophenyl) -L-alanine (3,4-dichlorophenyl).
Enylalanine (Aldrich) and R-(+)-isobutyl lactate (Aldrich)
Are reacted using a general production method J, followed by a hydrolysis reaction using a general production method C.
The title of the solid (mp = 184-186 ° C.)
The compound was obtained. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.48, 12% methanol / dichloromethane
The compound in preparative plate chromatography
(Eluent, 12% methanol / dichloromethane) for purification.
The NMR data is as follows:
CFifteenHtwenty oneNThreeOTwoClTwo(MW = 346.26); mass spectroscopy (MH+) 346.
Example 52
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amino
Hexane- (N-benzyl) amide
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-
Alanyl]-(S) -2-aminohexanoic acid methyl ester (from Example 15 above)
Using benzylamine (Aldrich) and solid (melting point = 141-146 ° C.)
The title compound was obtained. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.32, 5% methanol / dichloro
In methane and prepared by preparative plate chromatography (elution
Liquid, 5% methanol / dichloromethane).
The NMR data is as follows:
Ctwenty twoH27ClTwoNThreeOTwo(MW = 436.39); mass spectroscopy (MH+) 436.
Example 53
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amino
-2-phenylethanol
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-
Alanine (from Example A above) and (S)-(+)-2-phenylglycinol (A
(Ludrich) to give the title compound as a solid (mp = 66-70 ° C.). The reaction is
, Tlc (Rf= 0.25 in 5% methanol / dichloromethane),
Flash column chromatography (eluent, 5% methanol / dichlorometa)
).
The NMR data is as follows: C16H18ClTwoNTwoOTwo(MW = 341); mass spectroscopy (MH+) 342.
Examples 54 and 55
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-phenylglycinyl] -L-A
Lanin methyl ester
According to general production method E, N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-phenyl
Lysine (from Example J above) and L-alanine methyl ester hydrochloride (Sigma)
Was used to give the title compound. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.95, 3% methanol
/ In dichloromethane) and recrystallize the compound (EtOAc, hexane
And from ether). Two partially separated diasters
A rheomer mixture was obtained.
The NMR data is as follows:
C18H18NTwoOThreeClTwo(MW = 381.26); mass spectroscopy (MH+) 381.
Example 56
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amino
Hexanol
N- [N- (3,4-dichlorophenyl) -D, L-
Alanyl]-(S) -2-aminohexanoic acid methyl ester (from Example 15 above)
Was used to give the title compound as an oil. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.16 and 0.1.
17, 5% methanol / dichloromethane)
Purified by column chromatography (eluent, 5% methanol / dichloromethane)
Was performed.
The NMR data is as follows:
CFifteenHtwenty twoClTwoNTwoOTwo(MW = 333.26); mass spectroscopy (MH+) 333.
Example 57
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amino
-2-phenylethanol
According to the above general production method E, N- (3,5-dichlorophenyl) -D, L-arani
(From Example B above) and (S)-(+)-2-phenylglycinol (Aldoli
To give the title compound.
Example 58
N- [N- (3,5-dichlorophenyl) -L-alanyl] -L-phenylglycyi
Tert-butyl ester
Following general procedure D (no washing with 1N HCl), N- (3,5-di-
Chlorophenyl) -L-alanine (3,5-dichlorophenylalanine (Aldrich
H) and R-(+)-isobutyl lactate (Aldrich) using general production method J
Reaction, followed by hydrolysis using General Preparation C
) And L-phenylglycine tert-butyl ester hydrochloride (Bachem)
Used to give the title compound. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.39, 25% EtOAc
/ In hexane) and purify this compound by preparative plate chromatography.
Purification was carried out by fee (eluent, 25% EtOAc / hexane).
The NMR data is as follows:
Ctwenty oneHtwenty fourNTwoOThreeClTwo(MW = 423.34); mass spectroscopy (MH+) 423.
Example 59
N- [N- (3,5-di- (trifluoromethyl) phenyl) -L-alanyl] -L
-Phenylglycine tert-butyl ester
According to General Production Method D, N- [3,5-di- (trifluoromethyl) phenyl]-
L-alanine (from Example G above) and L-phenylglycine tert-butyl
The title compound was obtained using the ester hydrochloride salt (Bachem). The reaction is performed using tlc (Rf
= 0.46 in 25% EtOAc / hexane).
The NMR data is as follows:
Ctwenty threeHtwenty fourNTwoOThreeF6(MW = 490.45).
Example 60
N- [N- (3,5-dimethoxyphenyl) -D, L-alanyl]-(S) -2-amido
Nohexanoic acid methyl ester
Follow general procedure E (wash with dilute HCl and extract with EtOAc)
, N- (3,5-dimethoxyphenyl) -D, L-alanine (from Example H above) and
And L-norleucine methyl ester hydrochloride (Sigma) to give a pale yellow oil
The title compound was obtained. The reaction is performed using tlc (Rf= 0.3, in 30% EtOAc / hexane
).
The NMR data is as follows:
C18H28NTwoOFive(MW = 352.43).
Example 61
Cell screen for detecting inhibitors of β-amyloid production
For the vast compounds of formula I above, in cell lines harboring the Swedish mutation
Assayed for ability to inhibit β-amyloid production. This screening
U.S.A. has published International Patent Application Publication No. 94/10569.8And citron (C
itron) et al.11Lys in the manner described by651Met652From Asn651Leu652
Amyloid precursor tan containing double mutation (numbered APP751)
Cells stably transfected with the gene for protein 751 (APP751)
Vesicles (K293 = human kidney cell line) were used. This mutant is usually a Swedish mutation
Cells called the body and designated "293 751 SWE"
Dulbecco's minimum essential medium supplemented with bovine serum (Sigma, St. Louis, MO)
Medium 1.5-2.5 × 10FourCorning 96-well plate at cell / well ratio
Plated in a plate. The cell number was determined by the β-amyloid ELISA method (ELISA).
Results were achieved within the linear range of the assay (approximately 0.2-2.5 ng / ml).
Is important for
Incubate overnight at 37 ° C in an incubator equilibrated with 10% carbon dioxide.
The compound of formula I containing the medium for 2 hours of pretreatment followed by removal of the medium
(Drug) (200 μL / well) and the cells were incubated as above. medicine
Product stock is the final drug concentration used between treatments, dimethylsulfoxide concentration.
0.5% in 100% DMSO so as not to exceed 0.5%, in practice usually 0.1%
Manufactured by.
At the end of the pretreatment period, the medium is removed again and a new medium containing the above medium is removed.
The drug was replaced and the cells were incubated for an additional 2 hours. After the treatment,
Plates to pellet cell debris from Beckman GPR (1200 rpm).
m) and centrifuged at room temperature for 5 minutes. From each well, conditioned medium or its appropriate dilution
The diluent (100 μL) was applied to International Patent Application Publication No. 94/10569.8Β described in
-Antibody 266 against amino acids 13-28 of the amyloid peptide [P. Sauber
(Seubert), Nature (1992) 359: 325-327].
Transferred to an ELISA plate and stored at 4 ° C. overnight. Β-amyloidope produced
To determine the amount of peptide, the amino acids 1-16 of the β-amyloid peptide were
Labeled antibody 6C6 [P. Saubert, Nature (1992) 359: 325-32].
7] was performed the next day.
The cytotoxic effects of the compounds are described by Hansen et al.12Measured by an improved method of
Specified. Cells remaining in the tissue culture plate were treated with 3- (4,5-dimethylthiazo
2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) (25
μL; Sigma, St. Louis, MO) stock solution (5 mg / mL)
Final concentration was 1 mg / mL. Incubate the cells for 1 hour at 37 ° C.
Activity was measured in MTT lysis buffer (20% w / v sodium dodecyl sulfate / 50% dim.
It was stopped by adding an equal volume of tilformamide, pH 4.7). Complete extraction
Was achieved by shaking overnight at room temperature. OD562nmAnd OD650nmThe difference between
Molecular device UV as indicator of cell vitalitymaxMicroplate recording
It was measured with a meter.
The result of the β-amyloid peptide ELISA method was consistent with the standard curve, and ng / mL β
-Expressed as amyloid peptide. These results should be used to normalize cytotoxicity.
The results were divided by the MTT results and the percentage of results obtained from the no drug control
Page. All results are average, and assays performed at least 6 times
It is the standard deviation of b.
The test compound was tested for its activity in inhibiting β-peptide production in cells using this assay.
Assayed. The results of this assay indicate that the compounds of Examples 1 to 60
Inhibiting β-amyloid peptide production by at least 30% as compared to
Indicated.
Example 62
In vivo inhibition and / or synthesis of β-amyloid release
In this example, in vivo inhibition of β-amyloid release for compounds of the invention
The method of testing and / or synthesis is illustrated. For these experiments, PDAPP mouse
(Age: 3-4 months) [Nature 37 by Games et al.
3: 523-527 (1995)]. Depending on the compound tested,
It is usually prescribed at 5 or 10 mg / ml. Due to the low solubility factor of the compound,
They are available in a variety of vehicles, such as corn oil (Safeway, South San Francisco
, CA); 10% ethanol / corn oil; 2-hydroxypropyl-β-cyclo
Dextrin (Research Biochemicals International, Natik (
Natick) MA); and carboxy-methyl-cellulose (Sigma Che
mical Co.,), St. Louis MO).
The mice were subcutaneously administered with a 26 gauge needle, and after 3 hours the animals wereTwoCheap with anesthesia
1 cc 2 euthanized and blood coated with a solution of EDTA (0.5 M), pH 8.0
Removed by cardiac puncture using a 5G 5/8 "tuberculin syringe / needle
did. The blood is placed in a Becton-Dickinson vacuum containing EDTA.
And spun down (1500 × g) at 5 ° C. for 15 minutes. Then
The mouse brain was removed and the cortex and hippocampus were dissected and placed on ice.
1.Brain assays
Hippocampal and cortical tissues for enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs)
To make each brain region 10 volumes of ice cold guanidine buffer (5.0 M guanidine)
-HCl, 50 mM Tris-HCl, pH 8.0) in Kontes motor
Homogenized using a modified pestle (Fisher, Pittsburgh PA). The homogene
Gently shake the plate on the rotating platform at room temperature for 3-4 hours,
Before quantification of β-amyloid, it was stored at -20 ° C.
The brain homogenate was added to an ice-cold casein buffer [0.25% casein, phosphate
Buffered saline (PBS), 0.05% sodium azide, 20 μg / ml
Nin, 5 mM EDTA, pH 8.0, 10 μg / ml leupeptin]
Prior to centrifugation (16,000 × g) at 4 ° C. for 20 minutes.
The final concentration of gin was reduced to 0.5M. The β-amyloid standard solution (1 to 4)
0 or 1-42 amino acids) with the final component being 0.1% bovine serum albumin (
It was made equal to 0.5 M guanidine in the presence of BSA).
β-amyloid (aa 1-40) and β-amyloid (aa 1-42)
The total β-amyloid sandwich-type ELISA method, which quantifies both,
Consists of two monoclonal antibodies (mAbs) to the antibody. Capture antibody
266 [P. Saubert, Nature (1992) 359: 325-327]
, Specific for amino acids 13-28 of β-amyloid. Antibody 3D6 [di
PNAS USA (1997) by Johnson-Wood et al.
94: 1550-1555] (which are substituted with amino acids 1-5 of β-amyloid).
Biotinylated (although specific for) the reporter of the assay
Served as an antibody. In the 3D6 biotinylation process, sodium bicarbonate (1
00 mM) and the pH 8.5 buffer, except that a pH 8.5 buffer was used.
Products for S-biotin labeling (Pierce, Rockford IL)
) Use the protocol. The 3D6 antibody is a secreted amyloid precursor protein
(APP) or does not recognize full-chain APP but has an amino-terminal aspartic acid
Only one β-amyloid species is detected. The assay has a lower limit of sensitivity: ５０50 μg / m
1 (11 PM) and at concentrations up to 1 ng / ml exogenous mouse β-amylo.
No cross-reactivity to the id peptide.
Sandwich-type ELISA for quantifying β-amyloid (aa 1-42) levels
In the method configuration, mAb 21F12 [PNAS, by Johnson-Oud et al.
USA (1997) 94: 1550-1555] (this is the β-amyloid
(Recognizing 33-42 amino acids) is used as the capture antibody. Biotinylated 3D
6 also sets the lower limit of sensitivity in this assay: ~ 125 pg / ml (28 PM).
Reporter antibody.
266 and 21F12 captured mAbs were transferred to 96-well immunoassay plates (Cos
(Costar, Cambridge, Mass.) At room temperature overnight at 10 μg / ml.
Was. The plate was then aspirated and 0.25% human serum albumin / P
Block with BS buffer for at least 1 hour at room temperature, then dry at 4 ° C. until use.
Saved as not. Prior to using the plate, wash buffer (Tris-buffered saline, 0
Rehydrated with .05% Tween 20). Samples and standards on the plate
And incubated overnight at 4 ° C. Wash the plate between each step of the assay
Washed ≧ 3 times with buffer. Casein incubation buffer (0.25% casein
, PBS, 0.05% Tween 20, pH 7.4) up to 0.5 μg / ml
Diluted biotinylated 3D6 was incubated in the wells for 1 hour at room temperature. Case
Avidin-HRP (vector) diluted 1: 4000 in in-incubation buffer
, Burlingame CA) was added to the hole at room temperature for 1 hour.
Was. Colorimetric Substrate, Slow TMB-Elizer Method (Peace, Cambridge)
MA) and allowed to react for 15 minutes, followed by 2N HTwoSOFourIn addition, stop the enzymatic reaction
I let it. The absorbance difference between the 450 nm and 650 nm of the reaction product is measured.
Molecular device Vmax(Molecular Device, Menlo Park CA).
2.Blood assay
EDTA plasma is used as a standard diluent (sodium phosphate / HTwoO (monovalent base) (0.2
gm / l), sodium phosphate 7HTwoO (divalent base) (2.16 gm / l),
Thimerosal (0.5 gm / l), sodium chloride (8.5 gm / l), triton
X-405 (0.5 ml), globulin-free bovine serum albumin (6.0 g /
l; and water). Brain assays were performed on samples and standards in the standard diluent.
For the reference material, use the standard diluent instead of the casein diluent described above
Except for the differences described above, the total β-amyloid assay (266 capture / 3D6 repo)
Assay).
From the foregoing description, various modifications and variations in the components and methods may be found in the art.
Will be performed by those skilled in the art. It is within the scope of the attached claims
And any improvements made.
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ
Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ
，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，
ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ
Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ
，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ
，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，
ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，Ｆ
Ｉ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ
，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，
ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，Ｍ
Ｗ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ
，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，
ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ
(72)発明者 オーディア，ジェイムズ・イー
アメリカ合衆国46278インディアナ州イン
ディアナポリス、レイクサイド・ウッズ・
サークル6449番
(72)発明者 フォルマー，ビバリー・ケイ
アメリカ合衆国19702デラウェア州ニュー
アーク、カラント・ドライブ26番
(72)発明者 ジョン，バーゲス
アメリカ合衆国94122カリフォルニア州サ
ン・フランシスコ、エイティーンス・アベ
ニュー1722番
(72)発明者 ラティマー，リー・エイチ
アメリカ合衆国94618カリフォルニア州オ
ークランド、シェリダン・ロード56番
(72)発明者 ニッセン，ジェフリー・エス
アメリカ合衆国46268インディアナ州イン
ディアナポリス、オイル・クリーク・ドラ
イブ4348番
(72)発明者 ポーター，ウォーレン・ジェイ
アメリカ合衆国46260インディアナ州イン
ディアナポリス、リーバー・ロード8037番
(72)発明者 ソーセット，ユージーン・ディ
アメリカ合衆国94038カリフォルニア州モ
ス・ビーチ、ブエナ・ビスタ・ストリート
571番
(72)発明者 ウ，ジン
アメリカ合衆国94402カリフォルニア州サ
ン・マテオ、デ・サブラ・ロード10番、ア
パートメント502────────────────────────────────────────────────── ───
Continuation of front page
(81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE,
DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, L
U, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF)
, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE,
SN, TD, TG), AP (GH, KE, LS, MW, S
D, SZ, UG, ZW), EA (AM, AZ, BY, KG)
, KZ, MD, RU, TJ, TM), AL, AM, AT
, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA,
CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, F
I, GB, GE, GH, HU, ID, IL, IS, JP
, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR,
LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, M
W, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD
, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR,
TT, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZW
(72) Inventor Odia, James E
United States46278IndianaIndiana
Dianapolis, Lakeside Woods
Circle 6449
(72) Inventor Former, Beverly Kay
United States 19702 New Delaware
Arc, Currant Drive No. 26
(72) Inventor John Burgess
United States 94122 California
Francisco, Eighteens Abe
New 1722
(72) Inventors Latimer, Lee H
United States 94618 California Oh
Kerland, Sheridan Road 56
(72) Inventor Nissen, Jeffrey S
United States46268Indiana, Indiana
Dianapolis, Oil Creek Dora
Eve 4348
(72) Inventor Porter, Warren Jay
United States46260IndianaIndiana
Dianapolis, Reaver Road 8037
(72) Inventor Sawset, Eugene Day
United States 94038 California
Su Beach, Buena Vista Street
No. 571
(72) Inventor C, Jin
United States 94402 California
Mateo, De Sabra Road No. 10, A
Part 502