JP2001517604A - ドラスタチン１５から誘導された合成アンチネオプラスチック剤とその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 １２ａ−ｒと命名され下記の構造式を有する組成物、及びその製造方法

Description

【発明の詳細な説明】 ドラスタチン１５、インド洋無殻軟体動物ドラベラ アウリキュリアの周知に
して有力なアンチネオプラスチック成分、は、一連の新規な誘導体が開発された
先導物質として利用された。本発明は、これらの新規薬剤を合成的に製造する方
法に関し、種々のネズミ科動物及び人のガン細胞ラインに対する、そして選択さ
れたバイ菌および真菌類に対するインビトロ評価を提供する。これらの誘導体の
チューブリン重合の抑制についての効果もまた開示される。驚くべきことには、
この新しい化合物のすべては、ドラスタチン１５のＣ−末端（Ｓ）−ドラピロリ
ジノン単位（Ｄｐｙ，５）が一連の構造的に雑多でより容易に利用性があり所要
費用の少ないアミドで置き換えられ、ドラスタチン１５に全く匹敵できるガン細
胞生長抑制活性を示す（参照：ＵＳＰ．４，８７９，２７８）。しかしながら、
この新しい化合物のすべてはチューブリン重合の抑制剤としてドラスタチン１５
より力が低い。構造的に変成されたペプチド類もまた培養細胞に分裂阻止を起こ
し、そしてグラム−ネガチブ細菌の生長を抑止した。 この研究のあるものは、ＤＩＶＩＳＩＯＮ ＯＦ ＣＡＮＣＥＲ ＴＲＥＡＴ
ＭＥＮＴ，ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＣＡＮＣＥＲ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ，ＤＨＨＳに
授与されたＯＵＴＳＴＡＮＤＩＮＧ ＩＮＶＥＳＴＩＧＡＴＯＲ ＧＲＡＮＴ
ＣＡ−４４３４４−０１−０８よって援助された。合衆国政府は本発明の権利を
有することができる。 海洋生物は、特異の構造を持った生物学的に活性で医薬的に重要な物質の例外
的に生産的な資源である（参照：ＦＡＵＬＫＮＥＲ，Ｄ．Ｊ．１９９４，Ｍａｒ
ｉｎｅ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔ
ｓ Ｒｅｐｏｒｔｓ，１１，３５５；ＫＯＢＡＹＡＳＨＩ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．
１９９４，Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆ
ｒｏｍ ｍａｒｉｎｅ ｓｐｏｎｇｅ，ａ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ ｃｏｎｇｌｏ
ｍｅｒａｔｅ ｏｆ ｖａｒｉｏｕｓ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ，Ｐｕｒｅ ａｎｓ
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，８１９；Ｋｏｅｎｉｇ，Ｇ．ｅｔ ａ
ｌ．１９９４，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｓｅｌｅ
ｃｔｅｄ ｍａｒｉｎｅ ｎａｔｕｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｐｌａｎｔａ
Ｍｅｄｉａ，６０，５３２−５３７）。 インド洋（参照：ＰＥＴＴＩＴ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｔｈｅ ｉｓｏｌ
ａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｏｌａｓｔｉｎｓ １０−１５ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍａ
ｒｉｎｅ ｍｏｌｌｕｓｋ Ｄｏｌａｂｅｌｌａ ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ，Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４９，９１５１）および日本海（参照：ＮＡＫＡＭＵＲ
Ａ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｔｏ
ｔａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ Ｅ，Ｔｅｔｒａｈ
ｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３６，５０５９，およびそこに引用された参考文
献）は、そこから、ドラスタチンと命名された多数のアンチネオプラスチックお
よび／またはシトスタチックの線状及び環状ペプチドが分離された種々の海ウサ
ギ ドラベラアウリキュラリアを例証している。これらの有効な重要なペプチド
類の大部分は先例のないアミノ酸単位を含む。これらのうち、線状ペプチド類、
ドラスタチン１５（１）（参照：ＰＥＴＴＩＴ ｅｔ ａｌ．，１９８９ａ，Ｉ
ｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｔｏｓｔ
ａｔｉｃ ｌｉｎｅａｒ ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ ｄｏｌａｓｔｉｎ １５
，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５４，６００
５）およびドラスタチン１０（２）（参照：ＰＥＴＴＩＴ ｅｔ ａｌ．，１９
８７，Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａ
ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ ｍａｒｉｎｅ ａｎｉｍａｌ ａｎｔｉ−ｎｅｏｐｌａ
ｓｔｉｃ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ：Ｄｏｌａｓｔｉｎ １０，Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，１０
９，６８８３）は最も強力なアンチネオプラスチック活性を発揮し（参照：Ｕ．
Ｓ．Ｐａｔｅｎｔｓ ４，８１６，４４４；４，８７９，２７８；４，９７８，
７４４および５，５５４，７２５；およびＨｕ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｅｆ
ｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ ｏｎ ｈｕｍａｎ Ｂ−ｌｙｍｐｈ
ｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７，３３３）、そして臨床医学的開発のため選ばれた。事
実、ドラスタチン１０（２）のフェース１臨床試験は１９９５年１１月以来アメ
リカ国立ガン研究所（Ｕ．Ｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔ
ｕｔｅ）の後援の下で前進中であった。 １９８４年以来、多くの研究努力は、新しい有力な抗ガン剤を開発する目的で
、ドラスタチン１０（２）（参照：ＰＥＴＴＩＴ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ａ
ｎｔｉｐｌａｓｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ３３７，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｄ
ｏｌａｓｔａｔｉｎ １０ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｓ，Ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，１０，５２９）および
ドラスタチン１５（１）の構造改良に向けられた。これらのペプチド類の多くの
構造改良は、親分子のアンチネオプラスチック活性を変え、そして可能比のある
各ペプチドからより合成的チャレンジング単位、特にフェニルアラニン−誘導Ｃ
−末端セグメントを除去するために、調査された。ドラスタチン１０（２）に基
づく構造／活性の予備的研究は、チアゾール−含有Ｃ−末端単位はある他の変成
はアンチ変成活性のある程度の、或いはよりドラスチックな損失に導く（参照：
ＰＥＴＴＩＴ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ａｎｔｉｐｌａｓｔｉｃ Ａｇｅｎｔ
ｓ ３３７，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ １０ Ｓｔｒ
ｕｃｔｕｒａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕ
ｇ Ｄｅｓｉｇｎ，１０，５２９）活性の重大な損失なしに、チューブリン ア
ッセンブリーの抑制効果に重大な変化なしに、β−フェネチルアミンで適当に置
換できたことを示唆した。この場合、ドラスタチン１５の一連の構造変成がなさ
れ、Ｃ−末端ドラピロリジノン単位（５）は種々のアミドによって置換された。
ドラスタチン１０とは反対に、ドラスタチン１５のＣ−末端アミド単位における
大部分の構造変化は、チュープリン細胞成長に対するデプシペプチドの抑制効果
に本質的に逆影響を有しないが、チューブリン重合の抑制に適度の減少を生じた
。 本研究を駆動する一つの大きな要素は、遊離されるべき有効成分の充分な量を
商業的に可能な態様でガンで苦しむ人々のニーズに応えるだけ充分な量のドラベ
ラ アウリキュラリアが世界にはないという不可避の事実から起っている。した
がって、苦しむ人体中のガン細胞の拡がりを制御し、阻止し、または軽減するに
有効なこれらの置換基のみを含む分子を反復試験することのできる商業的に有効
な合成が開発されねばならない。それが本発明の向かう所のゴールである。 物質と方法 ここで論じられる全てのアミノ酸（Ｓ−形態）および誘導体はＳＩＧＭＡ−Ａ
ＬＤＲＩＣＨ Ｃｏ．から得られたものが使用された。その他の試薬（ＤＥＰＣ
，ＤＣＣ，ＥＤＣ−ＨＣｌ，ＨＯＢｔ，ＮＭＲ，Ｅｔ_３Ｎ，４−ピロリジノピリ
ジン，ＴＦＡ，など〔使用略語：ＤＥＰＣ（ジエチルフォスフォロシアニデイト
），ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ−ジシクローヘキシルカーボジイミド），ＥＤＣ−ＨＣｌ（
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カ−ボジイミド塩酸塩），
ＷＲＫ（ウッドワド試薬Ｋ，２−エチル−フェニルイソキサゾリウム−３−スル
フォネート），ＢｒｏＰ（トリス（ジメチルアミノ）フォスフォニュームブロマ
イド ヘキサフルオロフォスフェート），ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリ
アゾール），ＮＭＭ（４−メチルモルフォリン），Ｅｔ_３Ｎ（トリエチルアミン
），ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸），ＴＨＦ（テトラヒドロフラン），ＥｔＯＡｃ
（エチル酢酸），ＡｃＯＨ（酢酸），Ｚ（ベンジロキシカルボニル），Ｂｏｃ（
ｔｅｒｔ−ブチロキシカルボニル）〕もＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ Ｃｏ．か
ら得られさらに精製することなしに使用された。アミン類６ａ−ｒは再蒸留か再
結晶された。溶媒はすべて再蒸留し、水溶液からの抽出物は無水の硫酸マグネシ
ウムまたは硫酸ソーダ上で乾燥した。ＴＨＦはＬｉＡｌＨ_４から蒸留した。反応
は、ＵＶ照射か、または３ＮＨ_２ＳＯ_４溶液中３％硫酸第二セリウムの何れかに
よって視えるようにされたＡＮＡＬＴＥＣＨシリカゲルＧＦ（０．２５ｍｍ）板
を用いて、薄層クロマトグラフィーによってモニターされた。粗生成物はシリカ
ゲル（Ｅ．ＭＥＲＫ，ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，７０−２３０メッシュ）上フラッシ
ュクロマトグラフィによって精製された。最終のペプチド生成物（１２ａ−ｒ）
はリポフィリックＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０の塔でメタノール中を急速ゲル
透過クロマトグラフィによってさらに精製された。 融点はＥＬＥＣＴＲＯＴＨＥＲＭＡＬジジタル融点装置、モデルＬＡ９２００
で測定された。旋光性測定は２５℃においてメタノール中ＰＥＲＫＩＮ−ＥＬＭ
ＥＲ２４１旋光計に記録しされた。ＩＲスペクトルはＮＩＣＯＬＥＴ ＦＴＩＲ
モデルＭＸ−１装置を用いて得られた。全ての^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは溶剤と
してＣＤＣｌ_３またはＤＭＳＯ−ｄ_６でＶＡＲＩＡＮ ＧＥＭＩＮＩ３００ＭＨ
ｚ装置で観測された。^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルはＣＤＣｌ_３中ＵＮＩＴＹ５０
０ＭＨｚ装置で得られた。ＥＩＭＳデータはＭＡＴマス スペクトロメータで記
録された。元素分析はＫｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮに所在のＧａｌｂｒａｉｔｈ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．によって決定された。 合成した全ての化合物は、最初に、Ｈａｍｅｌ ＆ Ｌｉｎによって記載され
た技術を用いて、ネズミ科動物Ｐ３８８リンパ球白血病細胞に対する、そしてネ
ズミ科動物Ｌ１２１０白血病細胞およびヒトＣＡ４６Ｂｕｒｋｉｔｔ白血病細胞
に対するインビトロ制ガン活性が評価された（参照：ＨＡＭＥＬ，Ｅ．およびＬ
ＩＮ，Ｃ．Ｍ．，１９９３，コンブレタスタチン−新しい植物起源の抗分裂剤−
とチューブリンとの相互作用，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａ−ｃｏｌ
ｏｇｙ，３２，３８６４）。この化合物もまた、Ｍｏｎｋｓ ｅｔ ａｌによっ
て記載されたごとくＮＣｌ_ｓヒトのガン６０−細胞−ラインにおいてインビトロ
プライマリースクリーンで評価した（参照：ＭＯＮＫＳ，Ａ，ＳＣＵＤＩＥＲＯ
，ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎｅｗ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｃｙｔｏｔｏ
ｘｉ−ｃｉｔｙ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇ ｓｃ
ｒｅｅｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，８３，７３７）。データ分析はＢｏｙｄ ＆ Ｐａｕｌに
記載された方法を用いて行われた（参照：ＢＯＹＤ，Ｍ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，
１９９５，Ｓｏｍｅ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ ａ
ｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅ
ｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇ
ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｓｃｒｅｅｎ，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ，３４，９１）。チューブリン重合抑制アセイは、細胞微小管ア
ッセンブリーでドラスタチン１５の効果を評価するためＭｕｚａｆｆａｒ ｅｔ
ａｌによって予め使用され記載された方法の変性バージョン（参照：ＭＵＺＡ
ＦＦＡＲ，Ａ．，ｅｔ ａｌ，．１９９０，Ａｎｔｉｔｕｂｕｌｉｎ ｅｆｆｅ
ｃｔｓ ｏｆ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｏｆ ３−ｄｉｍｅｔｈ ｙｌｔｈｉ
ｏｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ，ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏ ｅｓｔｅｒｓ ｏｆ ｎａｔ
ｕｒａｌ ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｏｉｄｓ，ａｎｄ ｔｈｉｏｋｅ−ｔｏｎｅｓ
ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｉｏｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ，Ｃｏｍｐａｒｉｓ
ｏｎ ｗｉｔｈ ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉ
ｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３３，５６７）に従って行われた。これらの化合
物に対する新しいアセイは、３０℃において０．８Ｍグルタメート中 １０μＭ
チューブリンでドラッグ−チューブリンのプレインキュベイション（１５分）を
使用し、続いてＧＴＰを添加し３０℃において培養（２０分）、ＧＩＬＦＯＲＤ
レコージングスペクトロフォトメータで比濁的にモニターされたチューブリン重
合を行った。 抗微生物ディスク感受性は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ
Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄ（ＮＣＣＬＳ，
１９９７）によって定められた方法によって行われた。ＭＵＥＬＬＥＲ−ＨＩＮ
ＴＯＮ寒天がＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，Ｅｎｔｅｒｏｃｏ
ｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ，Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ，Ｅｓｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，Ｅｎｔｅｒｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ，
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉ
ｎｏｓａ およびＥｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａの感受性テストに使用
された。Ｎｅｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅにはＧｏｎｏｃｏｃｃａｌ
型寒天が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓおよびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓにはＹＭ寒天が使用された。感受性アセイの直前に、化
合物は無菌ＤＭＳＯ中で再構成され、そして二倍の希釈液が無菌６ｍｍディスク
に適用された。抑制帯域は細菌株（Ｍ．ｌｕｔｅｕｓを除く）に対しては１６時
間、真菌株およびＭ．ｌｕｔｅｕｓに対しては４２時間において読まれた。ＭＩ
Ｃ測定は二度行われた。 α−ヒドロキシアミド７ａ−ｒの合成の一般方法 方法Ａ（アミド７ｂ−ｏ） Ｎ−（２−フェニル）エチル−（２Ｓ）−２−ヒドロキシイソバレルアミド
（７ｃ）。 ３０ｍＬの乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２中（Ｓ）−（＋）−Ｈｉｖａ（３，２．０ｇ，１６
．９ｍｍｏｌ）、新しく再蒸留した２−フェニルエチルアミン（６ｃ，２．１０
ｍＬ，１６．９ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（１．８６ｍＬ，１６．９ｍｍｏｌ）の
攪拌し冷却した溶液に、ＤＥＰＣ（２：５６ｍＬ，１６．９ｍｍｏｌ）を滴下し
て加える。次に、混合物を２時間室温に放置しそしてＡｒ下連続的に攪拌する。
溶液を等量の蒸留Ｈ_２Ｏで洗浄し（３回）、乾燥する。溶媒は真空除去して結晶
した黄色の油を得た。生成物はトルエン−ヘキサンから再結晶（３回）して無色
の針状物として分析的に純粋のアミド（７ｃ）を得る（２．１４ｇ，５８％）。 ｍｐ１００．２−１００．５℃；Ｒ_ｆ０．２８（ヘキサン−アセトン２：１）； 方法Ｂ（アミド７ａ，７ｐ−ｒ） Ｎ−（２−ベンゾチアゾリル）−（２Ｓ）−２−ヒドロキシイソバレルアミ
ド（７ｑ）。 乾燥ＴＨＦ（１５ｍｌ）中（Ｓ）−（＋）−Ｈｉｖａ（３，１．０ｇ，８．５
ｍｍｏｌ）、２−アミノベンゾチアゾール（６ｑ，１．２７ｇ，８．５ｍｍｏｌ
）およびＨＯＢｔ（２．２９ｇ，１７ｍｍｏｌ，２ｅｑ）の溶液を攪拌しながら
Ｎ_２下０℃に冷却する。この溶液にＮＭＭ（０．９３ｍＬ，８．５ｍｍｏｌ）お
よびＴＨＦ（５ｍＬ）中ＤＣＣ（１．７５ｇ，８．５ｍｍｏｌ）の溶液を加える
。反応は２時間以上室温に達するまでさせる。溶液は濾過し乾燥まで濃縮する。
油状の残渣はＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍｌ）に溶解し飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（５０ｍ
Ｌ）、Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）、１０％Ｉクエン酸溶液（５０ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（
２Ｘ５０ｍＬ）で連続的に洗浄する。有機抽出物は乾燥し、溶剤は減圧下で蒸発
して粗白色固体を得る。尿素副生成物は氷冷したＥｔＯＡｃからの反復沈殿によ
って除去し、生成物はアセトン−ヘプタンから再結晶（３回）して無色のマイク
ロ針状結晶体として純アミド（１．８ｇ，８５％）を得る。 アミド７ａ−ｒの物理的性質は下記の表Ｉを見ること。 Ｂｏｃ−デプシペプチド８ａ−ｔの合成の一般的法 Ｎ−［（２Ｓ）−Ｏ−［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチロキシカルボニル）プロピル
イソバレリル−２−フェニルアミド（８ｃ）。 ＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍｌ）中アミド７ｃ（０．５０ｇ，２．２６ｍｍｏｌ）の溶液
を、ｔ−Ｂｏｃ−Ｓ−プロリン（０．５８ｇ２．７１ｍｍｏｌ，１，２ｅｑ）、
−ピロリジノピリジン（０．３３５ｇ，２．７１ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ）とＣＨ
_２Ｃｌ_２中ＤＣＣ（０．５６ｇ，２．７１ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ）の攪拌乾燥し
た溶液に徐々に加える。溶液はＡｒ下室温で２０時間攪拌し、濾過し、減圧下で
濃縮して油状物を得る。この油状残渣は次にシリカゲル（２５％アセトン−ヘキ
サン）でクロマトグラフして、無色のガム（真空乾燥の後）として０．９５ｇ（
１００％）のエステル８ｃが得られる。化合物８ａ−ｒの物理的性質は下記の表ＩＩを見ること。 Ｂｏｃ−デプシペプチド８ａ−ｒのデプロテクションの一般的方法 ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）中適当なジペプチド誘導体（８ａ−ｒ，１ｍｍｏｌ）
の冷却（０℃）し攪拌した溶液に、不活性ガス雰囲気下で、ＴＦＡ（５ｍＬ）を
加える。溶液はこの温度で１時間攪拌し、溶媒は減圧で除去する。残渣ＴＦＡは
トルエン（３Ｘ２０ｍＬ）で共沸的に除去し得られた油状のトリフルオロアセテ
ート塩（９ａ−ｒ）は真空で乾燥し、直接次の反応に使用する。 Ｚ−およびＢｏｃ−バリル−Ｎ−メチルバリル−プロリン（１０ａ，
ｂ） Ｚ−Ｖａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ（１０ａ，ｂ）のスケールアップ製造
は、Ｄｒ．Ｐｅｔｔｉｔによって報告された早期方法の一つに基づいた（参照：
ＰＥＴＴＩＴ，Ｇ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．１９９１，Ａｎｔｉｎｅｏ−ｐｌａｓｔ
ｉｃ ａｇｅｎｔｓ２２０，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ（−）
−ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１５，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃｎ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，１１３，６６９２）。Ｂｏｃ−Ｖａｌ−
Ｎ−Ｍｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ（１０ｂ）を合成するのに使用された方法はこに記載
されたものと同じである。 Ａｒ下−２３℃に冷却した乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）中ｔ−Ｂｏｃ−バリ
ン（６．６４ｇ，３０．５ｍｍｏｌ，２ｅｑ）の溶液に、ＮＭＭ（６．７０ｍＬ
，６１．１ｍｍｏｌ，４ｅｑ）とピバロイルクロライド（３．７６ｍＬ，３０．
５ｍｍｏｌ，２ｅｑ）を加える。この温度で３時間後、乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２（１５
ｍＬ）中Ｍｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｏｍｅ（５．３ｍｍｏｌ；３，７ｇ）の冷却（
−２３℃）した溶液を徐々に加える。反応は、この温度で４時間、室温で２４時
間行われる。次に、反応混合物は、飽和クエン酸溶液（３Ｘ１００ｍＬ）、水（
１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２Ｘ１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ
）で洗う。有機相は乾燥し、溶剤は蒸発して淡黄色の油が得られる。フラッシュ
クロマトグラフィ（リカゲル，２．５”Ｘ１８”カラム、溶離剤として１５％ア
セトン−ヘキサン）により無色の油として純ジペプチド６．５ｇ（９７％）：［
α〕_Ｄ ^２５＝−１８７℃（ｃ＝０．２）が得られる。純生成物４．５ｇ（１０．
５ｍｍｏｌ）分を１：１ＥｔＯＨ−Ｈ_２Ｏ１００ｍＬに溶解し、１Ｎ ＮａＯＨ
（１７ｍＬ）を加える。混合物は、ＴＬＣ（２時間）によって判断されるように
けん化が完了するまで激しく攪拌し、透明な溶液を減圧下で容積半分まで濃縮す
る。溶液は、次に１Ｎ ＨＣｌでｐＨ３まで酸性化し、生成物はＥｔＯＡｃ（３
Ｘ６０ｍＬ）で抽出する。混合溶剤抽出物は乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し真空濃縮し
て無色のガラス状として純トリペプチド（４．２６ｇ９８％）を得る。Ｒｆ０．
２４（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ−ＡｃＯＨ，８：２：１）； Ｚ−またＢｏｃ−デプシペプチド１１ａ−ｒの合成の一般的方法 Ｎ−［（２Ｓ）−Ｏ−［（Ｎ−（ベンジロキシカルボニル）−バリル］−（Ｎ
−メチル−バリル）−プロリル−プロリル−２−ヒドロキシイソバレリル］−２
−フェネチルアミド（１１ｃ）アミド８ｃ（０．３５ｇ，０．８４ｍｍｏｌ）は
１時間０℃で１：１ＴＦＡ：ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）中でデプロテクトしてト
リフルオロアセテート塩９ｃを油として得た（真空乾燥１時間後）。乾燥ＣＨ_２
Ｃｌ_２（１０ｍＬ）中アミド９ｃ（０．２７ｇ，０．８４ｍｍｏｌ）とＺ−トリ
ペプチド１０ａ（０．３７ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）の冷却（氷浴）した混合物に
、Ｅｔ_３Ｎ（０．２３ｍＬ，１．６８ｍｍｏｌ）とＤＥＰＣ（０．１３ｍＬ，０
．８８ｍｍｏｌ）を加える。透明溶液は０℃で２時間、室温で１８時間攪拌し、
次に濃縮する。生成物は溶離剤として１：３アセトン−ヘキサンでシリカゲルク
ロマトグラフィ（１”Ｘ１６”カラム）によって分離する。適当なフラクション
は混合し濃縮して無色のガラス物質としてテトラペプチド（１１ｃ）（０．６１
ｇ，１００％）が得られる。 Ｒ_ｆ０．４３（ヘキサン−アセトン，１：１）： 化合物１１ａ−ｒの物理的性質は下記の表ＩＩＩを見ること。 Ｚ−またはＢｏｃ−デプシペプチド１１ａ−ｒのデプロテクションの一般的
方法 方法Ａ（Ｚ−デプシペプチド） ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）中適当なＺ−デプシペプチド（０．１ｍｍｏｌ）の溶
液を作り、Ａｒノルバスク服用ブランケット下で１０％Ｐｃ／Ｃ触媒０．８ｍｍ
ｏｌを加える。次に、溶液は水素下で１８時間激しく攪拌し、触媒はＣＥＬＩＴ
Ｅを通しろ過によって除去する。得られた透明溶液は真空濃縮して粘稠な油とし
て対応する種々の遊離アミンが得られる。これは次のカップリングステップに直
接使用される。 方法Ｂ（Ｂｏｃ−デプシペプチド） ＣＨ_２Ｃｌ_２（２．５ｍＬ）中Ｂｏｃ−テトラペプチドプチ誘導体の冷却（０
℃）し攪拌した溶液にＡｒ下でＴＦＡ（２．５ｍＬ）を加える。溶液はこの温度
で１時間攪拌する。減圧下での溶媒除去で油が得られる。残渣ＴＦＡはトルエン
（３Ｘ２０ｍＬ）で共沸的に除去してトリフルオロアセテート塩をガラス状固体
として得る。これは真空乾燥し次の反応ステップに使用される。 方法Ｃ（Ｚ−デプシペプチド１１ｅを使用） 化合物１１ｅのサンプル０．４８ｇを氷酢酸０．５ｍＬにけん濁し、３３％Ｈ
Ｂｒ／ＡｃＯＨ試薬１．５ｍＬを攪拌しながら徐々に加える。ＣＯ_２の発生が止
んだ後（３０分）、エチルエーテル（１５ｍＬ）を加え、そして溶液を冷却する
。数分の後、溶液からデプロテクトしたペプチドと未変化の出発物質の混合物で
ある油を分離する。生成物を単離し、エーテル性溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３でｐＨ
〜に調節し、次いでＥｔＯＡｃ（３Ｘ５０ｍＬ）で抽出する。有機相は濃縮して
黄色ガラス状固体を得、真空乾燥し、次の反応にはさらに精製することなしに使
用される。 ドラバリン４をデプロテクトしたデプシペプチドとカップリングして 新しいドラスタチン１５誘導体１２_ａ−ｒを得る一般的方法 Ｎ−［（２Ｓ）−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジメチル−バリル）−バリル−（Ｎ−メチル
−バリル）−プロリル−プロリル］−２−ヒドロキシイソバレリル］−２−フェ
ネチルアミド（１２ｃ）。 デプシペプチド１１ｃ（０．３７ｇ，０．４９ｍｍｏｌ）は接触加水分解（方法
Ａ）によってデプロテクトして一つの油を得、これをＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）
に溶解しＡｒ下で０℃に冷却する。この溶液に、ドバリン（４，７１ｍｇ，０．
５８ｍｍｏｌ）、Ｅｔ_３Ｎ（０．０８１ｍＬ，０．５８ｍｍｏｌ）、およびＤＥ
ＰＣ（０．０８８ｍＬ，０．５８ｍｍｏｌ）を点滴添加する。２時間後、溶媒を
減圧で除去し油を得る。フラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル，１”Ｘ１６
”コラム，３：２ヘキサン−アセトン）による精製に続いてＳＥＰＨＡＤＥＸ
ＬＨ−２０（ＣＨ_３ＯＨ溶離）で急速ゲル透過クロマトグラフィを行って無色の
泡状物（０．２６ｇ，７１％）を得る。Ｒ_ｆ０．２１（ヘキタン−アセトン，２
：１）；化合物１２ａ−ｒの物理的性質は下記の表ＩＶを見ること。 ドラスタチン１０（参照：ＢＡＬ，Ｒ．，ｅｗｔ ａｌ．，１９９０ａ，Ｄｏ
ｌａｓｔａｔｉｎ１０，ａ ｐｏｗｅｒｆｕｌ ｃｙｔｏｓｔａｔｉｃ ｐｅｐ
ｔｉｄｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ａ ｍａｒｉｎｅ ａｎｉｍａｌ：Ｉｎ
ｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｂｌｉｎ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｍｅ
ｄｉａｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｖｉｎｃａ ａｌｋａｌｏｉｄ ｂｉ
ｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ，Ｂｉｏ−ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏ
ｇｙ，３９，１９４１）とドラスタチン１５（参照：ＢＡＬ ｅｔ ａｌ．，１
９９２，Ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１５，ａ ｐｏｉｎｔ ａｎｔｉｍｉｔｏｔｉｃ
ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ Ｄｏｌａｂｅｌｌａ
ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ：Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｕｂｌｉｎ
ｅ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｉｃｒｏ−ｔｕｂｌ
ｅｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４３，２６３７）
の両方ともチューブリンと相互反応し細胞有糸分裂の阻止を起こす。インビトロ
でドラスタチン１０でのチューブリンについての効果は詳細に研究されている（
参照：ＢＡＬ ｅｔ ａｌ．，１９９０ｂ；Ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｄｌａｓｔ
ａｔｉｎ１０ｔｏ ｔｕｂｌｉｎ ａｔ ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｓｉｔｅ ｆ
ｏｒ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｔｉｍｉｔｏｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ ｎｅａｒ ｔ
ｈｅ ｅｘｃｈａｎｇｅａｂｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎｄ ｖｉｎｃａ
ａｌｋａｌｏｉｄ ｓｉｔｅｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６５，１７１４１；ａｎｄ ＢＡＬ ｅｔ ａｌ．，
１９９５；Ｉｎｔｅｒ−ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１０ｗｉｔ
ｈ ｔｕｂｌｉｎ：Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ａｎ
ｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｓｓｏｃｏａｔｉｏｎ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ
，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４７，９６５）。ドラスタ
チン１５のチューブリンとの相互反応はかなり弱いので、このデプシペプチドの
生物学的性質に注目が注がれることは少なかった。それにも係わらず、ネズミ科
動物の骨髄の先祖細胞（参照：ＪＡＣＯＢＳＥＮ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ａ
ｎｔｉｐｌａｓｔｉｃ ｄｏｌａｓｔａｔｉｎｓ：Ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉ
ｔｏｒｓ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｒｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌ
ｌｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓ
ｔｉｔｕｔｅ，８３，１６７２）および急性ミエロイド白血病を伴う親からの有
害な周辺細胞（参照：ＳＴＥＵＢＥ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｄｏｌａｓｔａ
ｔｉｎ１０ａｎｄ ｄｏｌａｓｔａ−ｔｉｎ１５：Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｗ
ｏ ｎａｔｕｒａｌ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ，Ｌｅｕｋｅ
ｍｉａ，６，１０４８）に関しヒトのリンパ細胞（参照：ＢＥＣＫＷＩＴＨ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９３，Ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａ
ｎ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｂｙ ｔｈｅ ｍａｒｉｎｅ
ｎａｔｕｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１０ａｎｄ１５，Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔ
ｕｔｅ，８５，４８３）に対するドラスタチン１５の抗増殖性効果について多く
の研究が報告された。 これらの調査のすべては、どこでも利用できるペプチドの最初の合成実例を提
供したアリゾナ州テンペのガン研究所（ＣＡＮＣＥＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮ
ＳＴＩＴＵＴＥ）において、ドラスタチン１５の合成（参照：ＰＥＴＴＩＴ ｅ
ｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ２２０，Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ（−）−ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１５，Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ
，１１３，６６９２）によって可能になった。続いての修正した合成方法（参照
：ＰＥＴＴＩ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｔｈｅ ｄｏｌａｓｔａｔｉｎｓ，２
０，Ａ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｒｏｕｔｅ ｔｏｄｏｌ
ａｓｔａｔｉｎ１５，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５０，１２０９７）は、この有
望な抗ガン剤の大規模製造が極めて実際的であることを明らかにした。ＰＥＴＴ
ＩＴのオリジナル合成に引き続いてこれに起源するドラスタチン１５のなおもう
一つの合成がＰａｔｉｎｏ ｅｔ ａｌによって報告されている（参照：ＰＡＴ
ＩＮＯ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｔｏｔａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｔ
ｈｅ ｐｒｏ−ｐｏｓｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ
１５，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４８，４１１５−４１２２）。ドラスタチン１
５のＤｐｙユニットに対する適当な代替を認める可能性ある利点が、商業的に育
ち得る代替を合成する努力の出発において明らかになった。最も重要なのは、６
合成ステップの可能な除外と予言できないドラピロリジノン循環順序の除去であ
る。かくして、変性アミノ酸ユニットをβ−フェネチルアミンに基づいた容易に
利用できるアリルアルキルアミンで、そして種々の他の基で置換することが決定
された。 α−ヒドロキシアミド７ａ−ｒの製造に対しては、ヒドロキシ基の保護なしに
これらの物質を得ることが最も効率的であると決定された。脂肪族アミン６ｂ−
ｏに対しては、この目的物はＰｅｔｔｉｔのオリジナル合成アプローチ（ｏｐ．
ｃｔ．）を用いることによって容易に達する。かくして、２−（Ｓ）−ヒドロキ
シイソバレリン酸（Ｈｉｖａ，３）とその適当なアミンはＮＭＭをベースとしＤ
ＥＰＣの使用によって濃縮してスケム１に示されるごとく良好な収率で化合物７
ｂ−ｏが得られた。アミノ成分の減少した求核性のために、芳香族アミン（６ａ
，６ｐ−ｒ）の活性Ｈｉｖａでのアシル化がより促進された。ＤＥＰＣ（参照：
ＹＡＭＡＤＡ ｅｔ ａｌ．，１９７５，Ｄｉｐｈｅｎｙｌ ｐｈｏｓｐｈｏｒ
ｏｃｙａｎｉｄａｔｅ（ＤＥＰＣ），Ｔｗｏ ｎｅｗ ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏ
ｒ ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔ ｈｅｓｉｓ ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｍｏｔｉｌｉｎ，Ｊｏｕｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅ
ｎｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，９７，７１７４）；ＷＲＫ
（参照：ＰＥＴＴＩＥ ｅｔ ａｌ．，１９６６，Ｓｔｒｕｃｔｕａｌ ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＩＩ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ３β−Ｈｙｄｒｏｘｙ
−１７β−（Ｌ−ｐｒｏｌｙｌ−Ｌ−ｐｒｏｌｙｌ）ａｍｉｎｏ−５α−ａｎｄ
ｒｏ−ｓｔａｎｅ，Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ，４４，２０２３；ＰＥＴＴＩＥ ｅｔ ａｌ．，１９６７，Ｓｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ ｏｆ ３β−Ａｘｅｔｏｘｙ−１７β−（Ｌ−ａｒｇｉｎｙｌ−Ｌ−ａ
ｒｇｉｎｙｌ−Ｌ−ｐｒｏｌｙｌ）ａｍｉｎｏ−５α−ａｎｄｒｏｓｔａｎｅ，
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，（１０，１４５）のごときマイルドカップリング剤は反
応を生じなかったが、ＤＣＣ，ＢｒＯＰ（参照：ＣＯＳＴＥ ｅｔ ａｌ．，１
９９０，Ａ ｎｅｗ ｒｅａｇｅｎｔ ｆｏｒ ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｎ−ｍｅｔ
ｈｙｌａｔｅｄ ａｍｉｎ ｏ ａｃｉｄｓ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ｌｅｔ
ｔｅｒｓ，３１，６６９）または種々のクロロフォーメートとは強い活性化を有
し，その保護されてないα−ヒドロキシ基の競争的エステル化を起こし複雑な混
合物を生じる。しかしながら、無水ＴＨＦ中０℃においてＤＯＣでその場におい
て製造されたＨｉｖａのＨＯＢｔエステルは、このような芳香族アミンの選択的
アシル化に極めて適当であることが発見された。事実、その結果は、痕跡のエス
テル化サイドプロダクトもなく、所望のアミドを好収率が得られた。次のステッ
プにおいて、Ｂｏｃ−プロリンは、触媒として４−ピロリジノピリジンとＣＨ_２
Ｃｌ_２中ＤＣＣの使用によってアルコール７ａ−ｒでエステル化（室温、１８時
間）して種々の油としてエステル７ａ−ｒが優れた収率で得られた。それから、
水溶性カルボジイミドＥＤＣ−ＨＣｌが等しく良く働きＤＣＣよりも精製問題が
少ないことが分かった。Ｂｏｃ保護基はＴＦＡで除去され対応するトリフルオロ
アセテート９ａ−ｒを生じた。デプシペプチド１１ａ−ｒの合成と続いてのデプ
ロッキングに対しては、ドラスタチン１５のオリジナルの合成（参照：Ｕ．Ｓ．
Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．４，８７９，２７８）最初に記載されＺ−保護スキムを使
用することが考えられた。しかしながら、この基を除くために用いられる触媒水
添分解の条件は、下記に報告のごとく、あるペプチド中間物には不適当であるこ
とを証明した。従ってＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ（１０ｂ）は
、触媒水添分解を出し抜くためには、通常のトリペプチド中間物に加えて合成さ
れた。適当なトリペプチ（１０ａ又は１０ｂ）のトリフルオロアセテート９ａ−
ｒとのＤＥＰＣ−中間セグメント縮合は、スキム２に示すごとく、常に対応する
デプシペプチド誘導体（１１ａ−ｒ）の高収率を与えた。 Ｚ−保護基を除去するために予め用いられる温和な触媒水添分解条件は、化合
物１１ｅ定量的脱塩素化を起こすことが発見され、したがってハロゲン化芳香族
アミド（９ｄ−ｈ）にたいする別なルートの開発が強いられた。通常の条件下中
３３％臭化水素でのペプチド１１ｅのデプロテクチョンはハロゲンの損失は起こ
さなかったけれはども、少なくとも一つのアミノ酸ユニットの広範なラセミ化が
観察された。それはＢｅｎｏｉｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（参照：ＢＥＮＯＩＴＯ
Ｎ ｅｔ ａｌ．，１９７３．Ｎ−ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｉｎ
ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＩＩＩ，Ｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｎ ｄ
ｕｒｉｎｇ ｄｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｓａｐｏｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄ ａｃｉｄｏｌｙｓｉｓ，Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５１，２５５５）によって報告されたごとく強力な酸感受
性のＮ−メチルアミノ酸である。かくして、ハロゲン化した芳香族環を含む全て
の残りのペプチドはＢｏｃ−保護デプシペプチド（１１ｄ，１１ｆ−ｈ）として
製造される。 これらのペプチドの０℃でのＴＦＡ−ＣＨ_２Ｃｌ_２（１：１）中
の１時間のデプロテクションはスムースに進行し対応するトリフルオロアセテー
ト塩（次のカップリング反応で直接使用される）の定量的収率を上げた。Ｂｏｃ
−戦略は、欲しくないニトロ基還元、あるいは硫黄含有ペプチドによる触媒毒を
さけるため、ｐ−ニトロ−フェネチルアミン（１１ｉ）、Ｍｅｔ−ＯＭｅ（１１
ｎ）、チアゾール（１１ｐ）およびベンゾチアゾールアミド（１１ｑ）に対して
利用された。触媒水添分解（１０％Ｐｄ／Ｃ，ＥｔＯＡｃ，１８時間）による他
の全てのペプチド中間物のデプロテクションは対応するアミンを優れた収率で与
えた。 各ペプチドのＮ−末端ドラバリン残渣との最終カップリングは、スキム３に示
すごとくＣＨ_２Ｃｌ_２中ＤＥＰＣ／Ｅｔ_３Ｎで好収率で達成された。ある場合に
おいては、最終ペプチドの基本性質のため、さらに精製、続いてシリカゲルクロ
マトグラフィが必要である。このような場合、急速ゲル透過クロマトグラフィ（
ＳＥＰＨＡＤＥＸ ＬＨ−２０メタノール溶離）が極めて満足な結果を与え、無
色の泡、または無定形粉末として最終ペプチドが得られた。 ネズミ科動物白血病細胞ラインＰ３８８およびＬ１２１０およびヒトのバーキ
ットリンパ種ＣＡ４６Ｙラインに対する合成誘導体（１２ａ−ｒ）のインビトロ
テストの結果は、並対応するチューブリンの抗重合結果と共に、下記の表Ｖに報
告した。 誘導体の全ては親ドラスタチン１５（１）の性能に全く比較し得る抗増殖活性
を示した、そしてバーキット細胞において、全ての類似体は分裂指数において注
目すべき上昇を起こした。同様に、ＮＣｌ_ｓ６０−細胞ラインのヒト腫瘍の最初
のスクリーンにおける１２ａ−ｒの繰り返しテストは、一貫して、下記の表ＶＩ
に示すごとき、ドラスタチン１５標準のそれに同様の発生能の平均パネルＧＩ_５
０値を生じた。 さらに、Ｂｏｙｄ ａｎｄ Ｐａｕｌに記載された比較分析（参照：ＢＯＹＤ
，ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｓｏｍｅ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｃｏｎｓｉｄｅｒ
ａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉｃａ
ｎｃｅｒ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｓｃｒｅｅｎ，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅ
ｌｏｐｍｅｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３４，９１）を用いて、ＮＣｌスクリーン
中１２ａ−ｒの平均グラフのフィンガーブリントはドラスタチン１５のそれと全
て高く相関した（ｅ．ｇ．，≧０．７）。かくして、ドラスタチン１５の抗増殖
および抗分裂活性はＣ−末端残渣における変化に著しく許容的であるが、それら
の抗チューブリン性質はこのような変化にはより敏感である。これらの結果は、
Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．によって報告された類似の研究に対照的である（参
照：ＰＥＴＴＩＴ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ
Ａｇｅｎｔｓ３３７，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１０Ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄ
ｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，１０，５２９）。ここでは、β−フェネチルアミンの炭
素骨格を含まない基で置換されたＣ−末端ドラフェニン単位を有するドラスタチ
ン１０の誘導体は抗チューブリン発生能で少しの相違を発揮するが、シトトキシ
チー（ｃｙｔｏｔｏｘｉｔｙ）において１００重の減少まで達した。 ドラスタチン１５と精製されたチューブリンとの相互作用は、そのセルラー微
小管に対する強力な抗増殖効果にも係わらず、ドラスタチン１０のそれよりも相
当に弱い（約１０倍）（活性はドラスタチン１０の１／４であるが抗腫瘍剤ビン
ブラスチンよりも１０倍活性）（参照：ＢＡＬ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｄｏ
ｌａｓｔａｔｉｎ１５，ａ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ−ｍｉｔｏｔｉｃ ｄｅｐ
ｓｉｐｅｐｔｉｄｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ Ｄｏｌａｂｅｌｌａ ａｕｒ
ｉｃｕｌａｒｉａ：Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｕｂｌｉｎ ａｎｄ
ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ，Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４３，２６３７）。Ｂａｉ
ｅｔ ａｌによって報告されたドラスタチン１５のアンチチューブリン性質につ
いての以前の基本研究においては、１Ｍモノソジュームグルタメート−１ｍＭ
ＭｇＣｌ_２における１０μＭチューブリンの重合についてこのデペプシペプチド
の効果が試験され、２３μＭのＩＣ_５０値が得られた（３７℃において２０分後
重合の範囲の５０％抑制）。この結果は、１９±０．３（Ｓ．Ｄ．）μＭの値が
得られた新しい実験で確かめられた。しかしながら、アセンブリーレートの明ら
かな抑制はこれらの化合物（使用した最大濃度４０μＭ）で起こったけれども、
記載した反応条件の下でここに提供されたドラスタチン１５誘導体のいづれに対
してもＩＣ_５０値は得られなかった。 多量の抗分裂剤、特にコルキシンサイトに結合する抗分裂剤で、形成されたチ
ューブリン重合体は、１Ｍグルタメート−１ｍＭ ＭｇＣｌ_２中で極めて異常な
形態を有した（参照：例えば、ＨＡＭＥＬ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｌｏｍｉ
ｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｔｕｂｌｉｎ ｐｏｌｙｍｅｒ
ｉｓａｔｉｏｎ ａｓｓａｙｓ ａｓ ａ ｓｃｒｅｅｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉ
ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｗ ａｎｔｉ−ｍｉｔｏｔｉｃ ａｇ
ｅｎｔｓ：Ｔｈｅ ｍａｒｉｎｅ ｎａｔｕｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔ ｃｕｒａ
ｃｉｎ Ａ ａｓ ａｎ ｅｘａｍｐｌｅ，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３）。微小管のごときこれらの高分子重合体は光を散らす
ので、比濁または遠心分離によって薬剤効果を定量することが不可能である。こ
のような化合物に対する交代する試験条件の探究において、３０℃で０．８Ｍグ
ルタメートにおいては異常な重合体は一般に形成されないことが発見された。こ
の反応条件お下では、正常のアセンブリー反応は減少した反応率でなお起こり、
そして両反応条件下で試験できた試薬で得られたＩＣ_５０値における実質的減少
があった。 異常な重合体形成は、ドラスタチン１０では起こるけれども、ドラスタチン１
５では観察されなかった（参照：ＢＡＬ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｉｎｔｅｒ
ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１０ ｗｉｔｈ ｔｕｂｌｉｎ：
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ
ａｎｄ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｒｅ−ａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４７，９６５）。それにもかかわらず、ドラ
スタチン１５は、３０℃で０．８Ｍグルタメートにおいてアセンブリー抑制に対
して評価した時、減少したＩＣ_５０値効果が再び観察された。５．２±０．６μ
Ｍの値が得られた。もっと重要なことには、この反応条件で、ここに記載（表Ｖ
を参照）されたドラスタチン１５類似シリーズの定量的比較を行うことが可能で
あった。評価した１６化合物のいづれにもドラスタチン１５のごとく低いＩＣ_５
０値はなかったけれども、試験したすべての薬剤で明白な抑制効果が観察された
。得られたＩＣ_５０値は化合物１２ｐに対する８．４μＭから１２ａに対する２
６μＭの範囲にわたった。ドラスタチン１５を含み、この連続実験で得られたＩ
Ｃ_５０値において５倍の範囲があった。 ドラスタチン１５とチューブリンとの相互反応の研究は、ネズミ科動物のＬ１
２１０白血病細胞およびヒトのＣＡ４６バーキットリンパ種細胞の生長における
この薬剤の効果の評価と関連して行われた（参照：ＢＡＬ ｅｔ ａｌ．，１９
９２，Ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１５，ａｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｍｉｔｏｔｉｃ
ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ ｄｅｒｉｖｅ ｆｒｏｍ Ｄｏｌａｂｅｌｌａ ａ
ｕｒｉｃｕｌａｌｒａ：Ｉｎｔｅｒ−ａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｕｂｌｉｎ
ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ
，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４３，２６３７）。こ
れらの新しいドラスタチン１５誘導体の大部分の効果はこれらの細胞ラインにつ
いて試験され、そして表Ｖに報告されたごとき化合物の間に差異はほとんど見ら
れなかった。 Ｌ１２１０細胞では細胞生長に対するＩＣ_５０値は１−４ｎＭ範囲であり、バ
ーキット細胞ではＩＣ_５０値の範囲は０．３−４ｎＭであった。観察された値の
範囲はチューブリン重合に対するＩＣ_５０値における５倍の変動に類似していた
けれども、特定の化合物に対して得られた値の間にほとんど相互関係はなかった
。かくして、例えば、ドラスタチン１５はチューブリンアセンブリーの最も強力
な抑制剤であったが、Ｌ１２１０およびバーキット細胞では活性の最も小さい化
合物の間にあった。 この化合物の全シリーズはチューブリン機能と干渉することによって細胞的に
作用していると言う仮定をさらに証明するために、分裂阻止のための薬剤処理さ
れたバーキット細胞を分析した。ドラスタチン１５に対して先に観察されたごと
く（参照：ＢＡＬ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１５，ａ
ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｍｉｔｏｔｉｃ ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅｄｅｒｉｖ
ｅｄ ｆｒｏｍ Ｄｏｌａｂｅｌｌａ ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ：Ｉｎｔｅｒａ
ｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｕｂｌｉｎ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｃｅｌ
ｌｕｌａｒ ｍｉｃｒｏｔｕｂｌｅｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａ
ｃｏｌｏｇｙ，４３，２６３７）、８０ｎＭにおいてすべての化合物で処理した
細胞には、明らかな形而上的阻止における多数のバーキット細胞の集積が起こっ
た（表Ｖ）。 ドラスタチン１５の強力なシトトキシチーおよびチューブリン抑制効果は親分
子によるのではなく、それから誘導されたより活性な代謝物によることが示唆さ
れた。例えば、デプシペプチドのエステル結合の細胞内加水分解は、より強力な
ペプチドフラグメント、またはより活性の種にさらに代謝されるフラグメントを
生成するかもしれない。この可能性は、ドラスタチン１５活性のＣ−末端の構造
的変性に明らかな不感受性およびＲｏｕｘ，ｅｔ ａｌによるＨｉｖａ−Ｄｐｙ
ユニットの立体化学における変化がシストトキシチーの最小のロスを伴うと言う
最近の観察（参照：ＲＯＵＸ ｅｔ ａｌ，１９９４，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａ
ｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｄｉａｓｔｅｒｅ
ｏｍｅｒｉｃａｌ−ｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１５ａｎａ
ｌｏｇｕｅ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，４，１９４７）と一致するように見える。ここに、
Ｄｅａｒｒｕｄａ ｅｔ ａｌによって報告された合成ドラスタチン１５誘導体
ＬＵ１０３７９３（参照：ＤＥＡＲＲＵＤＡ ｅｔ ａｌ．，１９９５，ＬＵ１
０３７９３（ＮＳＣ Ｄ−６６９３５６）：Ａ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐｅｐｔ
ｉｄｅ ｔｈａｔ ｉｎｔｅｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ ｍｉｃｒｏ− ｔｕｂｕｌ
ｅｓ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｃｈ，５５，３０８５），Ｄｏｖ−Ｖａｌ−Ｍ
ｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ｂｅｎｚａｍｉｄｅ（ＮＳＣ ６６９３５６）は
、極めてシトトキシック（ＩＣ_５０，Ｌ１２１０白血病細胞に対し３ｎＭ）で、
そしてドラスタチン１５が５．２μＭＡにおいて５０％抑制であった同じ反応条
件下でチューブリン重合（ＩＣ_５０，４．０±０．６μＭ）の強力抑制剤である
が、ペプチドセグメント Ｄｏｖ−Ｖａｌ−Ｍｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏは明
らかに不活性である観察は特に興味がある。一方、ベンザミド誘導体ＬＵ１０３
７９３はこのペプチドの活性のサイトへの適当な転移のため必要である。 ドラスタチン１５の構造的にユニークなＤｐｙユニットはドラスタチン１５に
に対して観察された細胞生長抑制効果における極めて限定された役割を演じ、そ
して多分ドラスタチン１５の活性サイトの危険成分ではないことが今や明らかで
ある。この事実は、極めて簡単でコスト効果的な態様でドラスタチン１５の利益
を達成する能力をさらに高め、且つこれらのユニークな化合物のインビボ制ガン
効果を最適化し、あるいは開発する機会を提供する。かくして、ドラスタチン１
５のコンプレックスＤｐｙユニットは、より容易に利用できるフェネチルアミン
、２−アミノチアゾールおよび２−アミノベンゾチアゾールから誘導されるアミ
ドによって、あるいは他の比較的利用できそして無害な置換基によって、得られ
た誘導体のガン細胞生長抑制活性の著しい減少なしに、容易に代えられることが
できることが明らかである。 スクリーンした九つのバクテリアと二つの真菌のうち、ここに記載したドラス
タチン１５と八つの誘導体は、腸のバクテリアＥｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖ
ｏｒａ（表ＶＩＩ）の生長を特に抑制した。親化合物はＥ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒ
ａに対して最も活性があった。ここに使用のごとく、数字１，２等は下記の構造の化合物を示す。デプシジペプチド誘導体９ａ−ｒの合成は下記スキム１に示される。Ｚ−またはＢｏｃ−ペンタペプチド誘導体１１ａ−ｒの合成は下記スキム２に示
される。ドラスタチン１５の誘導体１２ａ−ｒの合成は下記スキム３に示される。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．下記の構造式を有する１２ａ−ｒと命名される組成物。 ２．ａ）２−ヒドロキシイソバレリン酸（Ｈｉｖａ）をアミン類（６ａ−ｒ）か
   ら成る群から選ばれたアミンとカップリングしてアミド（７ａ−ｒ）を生成し、 （ｂ）該アミド（７ａ−ｒ）をｔ−Ｂｏｃ−Ｓ−プロリンとカップリングして
   エステル（８ａ−ｒ）を生成し、 （ｃ）該エステル（８ａ−ｒ）をデプロテクトしてトリフルオロアセテート（
   ９ａ−ｒ）を生じ、 （ｄ）該トリフルオロアセテート（９ａ−ｒ）をトリペプチド酸（１０ａ，ｂ
   ）とカップリングしてテトラペプチド（１１ａ−ｒ）を生成し、 （ｅ）該テトラペプチド（１１ａ−ｒ）をデプロテクトして遊離ペプチドを生
   成し、 （ｆ）該遊離ペプチドをドラバリンとカップリングしてドラスタチン１５誘導
   体（１２ａ−ｒ）を生ずる 段階から成る請求項１に依る組成物の合成方法。 ３．２−ヒドロキシイソバレリン酸（Ｈｉｖａ）をアミン（６ａ−ｒ）とカップ
   リングする該段階はＮＭＭとＤＥＰＣを加えるサブステップを含む請求項２に依
   る方法。 ４．２−ヒドロキシイソバレリン酸（Ｈｉｖａ）をアミン（６ａ−ｒ）とカップ
   リングする該段階はＨＯＢｔ、ＮＭＭとＤＣＣを加えるサブステップを含む請求
   項２に依る方法。 ５．該アミド（７ａ−ｒ）をｔ−Ｂｏｃ−Ｓ−プロリンとカップリングする該段
   階はＤＣＣと４−ピロリジノピリジンを加えるサプステップを含む請求項２に依
   る方法。 ６．該アミド（７ａ−ｒ）をｔ−Ｂｏｃ−Ｓ−プロリンとカップリングする該段
   階はＥＤＣ−ＨＣｌと４−ピロリジノピリジンを加えるサブステップを含む請求
   項２に依る方法。 ７．該エステル（８ａ−ｒ）をデプロテクトしてトリフルオロアセテート（９ａ
   −ｒ）を生ずる該段階はＴＦＡを加えるサブステップを含む請求項２に依る方法
   。 ８．該トリフルオロアセテート（９ａ−ｒ）をトリペプチド酸（１０ａ，ｂ）と
   カップリングする該段階はトリペプチド酸１０ａの使用を含む請求項２に依る方
   法。 ９．該トリフルオロアセテート（９ａ−ｒ）をトリペプチド酸（１０ａ，ｂ）と
   カップリングする該段階はトリペプチド酸１０ｂの使用を含む請求項２に依る方
   法。 １０．該トリフルオロアセテート（９ａ−ｒ）をトリペプチド酸（１０ａ，ｂ）
   とカップリングする該段階はＥｔ_３ＮとＤＥＰＣを加えることを含む請求項２に
   依る方法。 １１．該テトラペプチド（１１ａ−ｒ）をデプロテクトする該段階は該テトラペ
   プチド（１１ａ−ｒ）のＥｔＯＡｃ溶液を作り１０％Ｐｄ／Ｃ触媒を加えるサブ
   ステップを含む請求項２に依る方法。 １２．該テトラペプチド（１１ａ−ｒ）をデプロテクトする該段階は該テトラペ
   プチド（１１ａ−ｒ）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液を作り１０％Ｐｄ／Ｃ触媒を加えるサ
   ブステップを含む請求項２に依る方法。 １３．該テトラペプチド（１１ａ−ｒ）をデプロテクトする該段階は該テトラペ
   プチド（１１ａ−ｒ）を氷酢酸にけん濁する段階と３３％ＨＢｒ／ＡｃＯＨを加
   えるサブステップを含む請求項２に依る方法。 １４．該遊離ペプチドをドラバリンとカップリングする該段階はＥｔ_３ＮとＤＥ
   ＰＣを加えるサブステップを含む請求項２に依る方法。