JP2001514751A

JP2001514751A - 胎児診断方法

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Publication number: JP2001514751A
Application number: JP53933798A
Authority: JP
Inventors: バーチェル・アン; ヒューム・ロバート
Original assignee: ザ・ユニバーシティー・オブ・ダンディー
Priority date: 1997-03-08
Filing date: 1998-03-03
Publication date: 2001-09-11
Also published as: BR9808219A; CA2283416A1; ATE308755T1; DK0974056T3; EP0974056A1; GB2326943A; GB2326943B; DE69832161T2; DE69832161D1; NO994358D0; ES2255150T3; WO1998040746A1; CN1260046A; AU6630398A; PL335543A1; EP0974056B1; GB9820505D0; US6331395B1; NO994358L; AU738401B2

Abstract

(57)【要約】母方の血球細胞と胚又は胎児赤血球細胞又はその両方を含んだ試料中における胚又は胎児赤血球細胞を同定する方法であって、この方法は、どちらの細胞又は細胞群が成人肝臓成分を含んでいるか又は発現しているかを決定することを含む。母方の血球細胞と胚又は胎児赤血球細胞又はその両方を含んだ試料中における胚又は胎児赤血球細胞を分離する方法であって、この方法は、成人肝臓成分を含んでいるか又は発現している前記細胞を分離することを含む。胎児の異常性を決定する方法であって、この方法は、前記請求項のいずれか一つに記載の方法に基づいて胚又は胎児細胞を同定又は分離すること、そして前記胎児の異常性について胚又は胎児細胞を分析することを含む方法。細胞が胚または胎児赤血球細胞を特定または分離するための成人肝細胞成分を含んでいるか、または発現しているかどうかを決定するための手段の使用。

Description

【発明の詳細な説明】胎児診断方法本発明は、診断方法、特に胎児診断の方法とこのような方法に使用する試薬に関する。胎児診断は世界中の病院において広く実行されている。嚢胞性繊維症を含む単一遺伝子欠陥と同様にダウン症候群を含む染色体障害の診断のために、胎児、肝臓または絨毛膜の生体組織検査のような既存の手法がかなり蔓延し、その胎児にかなりの危険を与え、そして幾ばくかの危険をその母親に与えている。例えば、羊水穿刺は胚組織又は体液から細胞を集めるために子宮に差し込まれる針を使う。ダウン症候群を検出できるそのテストは、１％と見積もられる流産の危険を引き起こす。胎児診断は随分と初期の段階にあり、そして広い範囲での障害についてかなり早期の試験の可能性が疑いなくこの分野の研究速度を増加させるであろう。現在の外科技術は進歩し、脊椎分裂や口蓋骨二分裂のようないくつかの遺伝子上の問題の胎児治療をかなり可能にできるようになった。加えて、例えば、検出が十分早期にできるだけでなく、２１−ハイドロキシラーゼ（デキサメタゾンでの治療）やホロカルボキシラーゼシンターゼ（ビオチンでの治療）不全の他の障害についても比較的簡単で効果的な胎児治療が現在では利用できる。このように、比較的広まってはいない胎児診断方法は、かなり広まっている既存の手法に対して魅力的な代替法である。両親と産科医のための選択の幅を増やしながら（なぜなら、遺伝子障害がより早く、かつ、安全に検出され得るから）、そして特殊な胎児治療の絶え間ない進歩とともに、母体への静脈穿刺に基づく方法が妊娠最初の３ヵ月内において早期の診断をより早くすることを可能とするはずである。母方の循環系からの胎児細胞の帰還の可能性は、胎児に対しては広まっていない胎児奇形診断の可能な方法として、一般的な興味を刺激してきた(Ｓｉｍｐｓｏｎ＆Ｅｌｉａｓ（１９９３）Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．２７０，２３５７−２３６１)。初期の関心は栄養芽細胞検出システムに向けられたが、母方リンパ球が栄養芽細胞によって放出されるたんぱく質を吸収するらしいため、流動血球計算法によるこれらの細胞の分離は信頼されていなかった(ミュラー等（１９９０）Ｌａｎｃｅｔ３３６，１９７−２００；コボン等（１９８４）Ｌａｎｃｅｔ１３１０月号、８４１−８４３)。さらに最近、母体の循環系中では特に白血球よりも多い有核胎児赤血球の細胞遺伝子分析のために胎児赤血球細胞を分離するための方法の開発に注意が向けられてきた。母方の血液中の胎児赤血球細胞の同定は、即ち胎児細胞を同定するためのＹ染色体セントロメアプローブを持つオス胎児中又はＹ染色体特異的ＤＮＡ配列増幅（プライス等（１９９６）Ａｍ．Ｊ．０ｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．１６５，１７３１−１７３５；ツェン等（１９９３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．３０，１０５１−１０５６；ハマダ等（１９９３）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．９１，４２７−４３２ｖ；チュン等（１９９６）ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ１４，２３９−２４９）又は３染色体状態中での核型同定（例えば、ビアンチ等（１９９２）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．９０，３６８−３７０及びその他参照）中において示されている。ヒューム等（１９９５）ＥａｒｌｙＨｕｍａｎＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ４２、８５〜９５において、グルコース−６−ホスファターゼたんぱく質がヒト胚及び胎児赤血球細胞中に存在していることが示されている。ペズーキ等は（１９９６）Ａｃｔａｈｉｓｔｏｃｈｅｍ（Ｊｅｎａ）９８、２９−３７においてヒト胎児ヘモグロビン抗体とＸとＹ染色体プローブを使ったｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーション法を使う複合免疫細胞化学を使いながら胎児有核赤血球細胞を同定することを試みている。ヒューム等は（１９９６）Ｂｌｏｏｄ８７，７６２−７７０においてヒト胚及び胎児赤血球前駆体中の細胞内網上たんぱく質の発現の研究を記している。ワクテル等は（１９９１）ＨｕｍａｎＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ６，１４６６−１４６９において、トランスフェリン受容体抗体及びグライコフォリンＡ抗体で分別した細胞によって分離した母方細胞中でＹ染色体特異的ＤＮＡ配列を同定するためのＰＣＲの使用を記載している。イェオ等はＰｒｅｎａｔａｌＤｉａｇｎｏｓｉｓ１１，１１７−１２３において、胎児特異的だった単一複写遺伝子の酵素的増幅によって母方循環系中での胎児細胞の検出を記載している。ホルツグレブ等は（１９９２）Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｍｅｄ．３７，４１０−４１８においてトランスフェリン受容体抗体のみでは胎児有核赤血球の増菌には十分ではないことを示し、且つ主に極めて特異的な細胞標識の不足によりこの技術の再生産性及び確実性は未だ限られているということを指摘している。ツェン等は（１９９３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．３０，１０５１−１０５６において母方血液から白血球を枯渇させるためのＣＤ４５及びＣＤ３２に特異的なマウスモノクローナル抗体を使いながら胎児有核赤血球を増殖させるための磁気的活性化細胞分別（ＭＡＣＳ）の使用を記載している。母方の雑菌混入は間期蛍光ｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）による胎児細胞の正確な分析を妨害しつつ、そしてＭＡＣＳ増殖の後でさえも十分な母方の雑菌混入はあったということをその論文で指摘している。トモダ等は（１９６４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．３０，１０５１−１０５６において免疫蛍光染色によって胎児赤血球の実証を記載している。生まれる前の診断を実行するためには母方血液中の胎児細胞を同定するための方法を向上させる必要性がある。白血球細胞取り除くための配列的なアンチＣＤ４５とアンチＣＤ１８抗体及び同時に有核赤血球を増殖させるためのアンチＣＤ７１抗体（トランスフェリン受容体）を使う確立された免疫磁化分取法を用いて母方血液から胚及び胎児有核赤血球細胞を分離することを私達は試している。アンチＣＤ７１抗体を用いた免疫磁化分取法が巨大赤芽球系の胚赤血球細胞を精製しなかったことを発見し、とても残念だった。巨大赤芽球細胞を精製することの利点は、それらが胚及び初期胎児中で主な赤血球細胞型で且つそれは有核であり、それに対して成人赤血球細胞の広範な大多数は正常赤血球で且つ非有核であることである。次の従来免疫組織化学では、巨大赤芽細胞とＣＤ７１との相互作用はとても弱く、おそらくこの抗体での胚細胞の低精製性を説明しているということを私達は発見した。これが初期診断のための母方血液の現在の使用における大変主要な問題である。私達は初期成長段階ではこの有核巨大赤芽球系が有核正常赤芽球よりも優勢であることを示してきた。これは、この従来の抗体即ちアンチＣＤ７１を用いながら初期受胎産物から現れる純粋な有核で血液学的に理想的な細胞を手に入れることはとても困難だということを意味している。アンチＣＤ７１は、通常の営業試験場では現実的ではないが特別の所員と設備を備えた特別の研究施設ではこの技術を可能とするこれらの初期細胞の大部分とは免疫反応をしない。アンチＣＤ７１の使用方法はチェン等の（１９９６）ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ１４，２６４−２６８に記載され、且つウィリアムソンの（１９９６）ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ１４，２３９−２４０において再検査されている。スライド上の２，３の胎児細胞を見つけるために数千の細胞を見なくてはならないことはこの手法の問題点であり、同様にアンチＣＤ７１抗体は胎児細胞に対して十分に選択的ではなく且つ胚細胞とは反応しないという事実もある。本発明の一つの目的は母方血液中の胎児細胞を同定しそれらを母方血液から分離するための改良された方法を提供することである。特に、この発明の一つの目的は、胚又は初期胎児赤血球細胞を同定し分離し、且つ胎児異常についてその細胞を分析する方法を提供することである。この発明の第１の側面によれば、母方血球細胞と、胚又は胎児の赤血球細胞、又はその両方を含んだ試料中の胚又は胎児赤血球細胞を同定する方法を提供するものであり、この方法は成人肝臓細胞成分を含む又は発現するその細胞を決定することを含んでいる。この発明の第２の側面によれば、母方血球細胞と、胚又は胎児の赤血球細胞、又はその両方を含んだ試料中の胚又は胎児赤血球細胞を分離する方法を提供するものであり、この方法は成人肝臓細胞成分を含む又は発現するその細胞を分離することを含んでいる。今まで、血管中を循環する間に胚又は初期胎児有核細胞が成人肝臓細胞として機能しているということが提案されたことはなかった。適切には、この母方血液細胞と胚又は胎児赤血球細胞又はその両方を含んでいる試料は妊娠したメス由来の血液試料である。好ましくは、その胎児赤血球細胞は初期胎児赤血球細胞である。この妊娠したメスはあらゆる哺乳類で良くそして特には経済的又は農業的重要性を持つ哺乳類又は家畜哺乳類である。適切には、この哺乳類はウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、イヌ、ネコ他はその様な哺乳類である。胚又は胎児の血液学的な進化の基本的なパターンは全ての哺乳類で同じである。好ましくは、この妊娠したメスはヒトである。この発明の特別な利点は、この方法が懐妊の初期段階で胚又は初期胎児赤血球細胞を同定し、かつ、分離されるためにも使われ得るということである。それで、妊娠の初期段階の妊娠したメスからこの母方血液試料が採取されるならば望ましい。妊娠したヒト女性の場合、妊娠３ヵ月以内にこの試料が採取されるならば望ましい。一般に妊娠の初期であるほど、潜在的な胎児治療あるいは終了の選択にとって、より好ましい(望ましくは懐妊後１０週間以内)。更なる実際的な理由は、この妊娠の終了の手段が、懐妊より初期においてより少ない肉体的心理的副作用で、技術的により簡単なことである。胎児異常についての子宮内の診断について上限は無くそしてさらに遅い妊娠期中の診断も生前又は新生児期直後においていまだ有益といえる。有核胚又は胎児細胞の個体発生は、胚／胎児中のこれらの細胞の割合が妊娠後期よりも妊娠後最初の３ヵ月内におけるほうが高いということを明らかに示している。しかしながら、全体としての胎児血液量は妊娠とともに増加しそして比例して胎児から母方への移動融合量は多くなるかもしれない。ヒト受胎産物の成長の正確な構造は、日を追って正確な日数計測するのに十分に、排卵後５６日まで正確に記載のみされてきた。そしてその記載用語、胚、はこの成長段階化過程にとって従来通りに使われるだろう(オー‘ライリー＆ミュラー（１９８７）ヒト胚における成長段階、Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ６３７、ワシントン：ワシントンカーネギー研究所)。その記述用語、胎児、は、成長年齢をもって、例えば、かかと、尻肉そしてかかと一つま先間の計測（胎児期の人体の外部診断の進歩、ミネアポリス：ミネソタ大学出版）を含むサイズ、月経歴及び妊娠の超音波日数測定に基づいた評価を名づけるために（＞妊娠後３７週）ヒト子宮内の成長の残りの部分に対して使われるだろう。この発明の方法は、初期成長段階では有核正常が細胞よりも優勢な有核巨大赤芽細胞系の胚及び胎児赤血球細胞を分離するために特に適合されたものであり、そして同定するために使われ得る。しかしながら、有核正常芽細胞は同等の有利性をもった方法で分離又は同定される。巨大赤芽細胞の割合は、妊娠初期の段階であればあるほど高い。胚／初期胎児巨大赤芽細胞の形態は基本的に循環系に存在しうる胚／胎児正常芽細胞及び小数の母方正常芽細胞とは異なる。母方の巨大赤芽球と巨赤血球は極めて少数だが、しかしビタミン１２及び葉酸欠損中では発生しない。これらの理由で胚／初期胎児巨大赤芽球が好まれる、しかし胚／初期胎児正常芽球を使うことができるかもしれない。母方血球細胞と、胚又は胎児赤血球細胞、又はその両方を含んだ試料は、ある母方赤血球細胞が除かれた試料であって良い。例えば、比較的低効率であったとしても、配列的なアンチＣＤ４５とアンチＣＤ１８抗体を用いて母方血液から成人白血球が取り除かれ得る。試料の濃縮は、濃度遠心分離によって達成されても良い（たとえば、フィコール勾配）が、成人及び胎児有核細胞は分離しない。その試料は胎児細胞を濃縮したもので良い。たとえば、それはチェン等（１９９６）ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ１４，２６４−２６８に記載されたアンチトランスフェリン受容体抗体の使用によって濃縮された試料であり得る。この試料は(特にそれが胎児又は胚細胞が分離されるためというよりはむしろ同定されるためのものであるとき)、血液学的、生化学的、組織化学的又は分子生物学的分析又はその様なことを実行するために処理されたものであってよい。例えば、この試料は血液試料又は、免疫細胞化学的分析又は蛍光ｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）分析のために用意された、又は顕微鏡のスライド上でほとんど広げられていない血液の分画試料（胎児細胞を濃縮された／母方細胞を枯渇されたようなもの）であり得る。母方血液細胞と、胚又は胎児赤血球細胞、又はその両方を含んだ試料は、そのような細胞を含んだあらゆる適当な試料（体液を含んだ）でよい。例えば、この試料は血尿、羊水又は胎児血液を有する患者からの尿でよい。 “成人肝臓成分”によって、私達は主に成人肝臓に関係のある成人肝臓成分を意味している、もしそれが成人の他の組織で見つかったとしても、それはその他の組織においては肝臓に比べて低い程度で見つかるかさもなくば前記成分が見つかったその組織の総量が肝臓の総量に比べて低く、従ってこの成人肝臓成分の全肝臓成分中における総量がその他の組織中における総量と比べて高い。その成人肝臓成分が低い程度で他の組織で見つけられたとき、それは他の組織と比べて少なくとも肝臓中で１０倍高く、好ましくは少なくとも肝臓中で１００倍高い。成人肝臓成分が他の組織において肝臓と同等の程度で見つかったなら、その他の組織は肝臓の重量の１／１０、さらに好ましくは肝臓の重量の１／２５を持つ。腎臓は肝臓に関係の無いたくさんの機能を持っているが、腎臓はより狭い範囲で糖新生のようないくつかの肝臓機能をすることができる。上記の成人肝臓成分の定義において、その“他の組織”が腎臓で無ければ特に好ましい。例えば、グルコース−６−ホスファターゼは成人肝臓成分である。肝臓中のグルコース−６−ホスファターゼ値は全膵臓中のグルコース−６−ホスファターゼ値よりも高い。しかしながら、島細胞（単なる膵臓中の小さな細胞の塊）中でのグルコース−６−ホスファターゼ値は肝臓中より高くなり得る。同様に、ＧＬＵＴ２は島細胞中で発現されうる成人肝臓成分である。人体中では島細胞の全体量は肝臓の全体量に比べて微小であるという意味で、両方とも主に肝臓たんぱく質である考えられている。成人肝臓成分は単位細胞分画毎又は単位細胞毎又は単位組織毎に測定される。このため、成人肝臓成分は典方的に成人肝臓選択的又は成人肝臓特異的である。この成人肝臓成分はあらゆる適当なその様な成分で良く、且つたんぱく質、ＲＮＡ、炭水化物体、代謝物ただしこれらは主に成人肝臓に関連していて、もしそれが成人の他の組織で見つかったとしても、それはその他の組織においては肝臓に比べて低い程度で見つかるか、又は前記成分が見つかったその組織の総量が肝臓の総量に比べて低く、この成人肝臓成分の全肝臓成分中における総量がその他の組織中における総量と比べて高い。この胚又は胎児細胞は、定義された１つ又はそれ以上の成人肝臓成分の検出又は結合による本発明の方法に基づき、その胚又は胎児細胞は同定又は分離される。この成人肝臓成分は実質的に母方血液の母方細胞が実質的に無いのであれば特に好ましい。胚又は胎児赤血球細胞と比較して、母方血液の母方細胞は細胞毎に１％未満の成人肝臓成分を含むことが好ましい。これらが細胞毎に０．１％より少ない量しか含まれないのであればさらに好ましい。肝臓が実際に外傷によって激しく損傷を受けたなら、細胞又は凝集塊は血液中に撒き散らされ得るであろう。そのため、この試料は、肝臓細胞を血液中に放出するためには肝臓が損傷されたメスからの血液試料ではないことが好ましい。しかも、この試料は成人肝臓細胞を含むあらゆる他の試料ではないことが好ましい。肝臓障害は、例えばアラニンアミノトランスフェラーゼ活性のような通常の肝臓機能試験の細胞評価によって評価される。形態学上、循環成人肝臓細胞や胚有核赤血球細胞の外見は十分識別可能に明確である。成人肝臓成分は、タンパク質であることが好ましい。好ましくは、成人肝臓成分は、ミクロソームのグルコース−６−ホスファターゼ酵素、リン酸又はグルコースを含むグルコース−６−ホスファターゼ系あるいはグルコース−６−ホスフェイトトランスポーターの他のタンパク質成分、ウリジンジホスフェイト−グルクロノシルトランスフェラーゼ(ＵＤＰＧＴ)、シトクロームＰ４５０アイソザイム(Ｐ４５０)、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェイト（ＮＡＰＤ）シトクロームＰ４５０還元酵素(Ｐ４５０還元酵素)、グルコース運搬体２(ＧＬＵＴ２)、Ｐ−グライコプロテイン、ＭＤＲＰ(多薬剤耐性たんぱく質)、ＭＲＰ(多薬剤耐性様たんぱく質)、γ−グルタミルトランスペプチターゼ、リポプロテイン受容体、アルカリホスファターゼ、胆汁塩運搬体、胆汁酸運搬体、ホルモン受容体、多有機イオン運搬体(ＭＯＡＴ；ＭＲＰと同等)、ビリルビン運搬体(ビリトランスロカーゼ)、あるいはビリルビン複合体（例えば、ビリルビングルクロニド）運搬体（ＭＲＰと同等）のいずれか一つである。肝臓細胞膜は、広い種類の薬、生体異物、そして内因性物質のための運搬体を含んでいる。なぜなら、それらは、それらの主な代謝領域である肝臓で吸収されているからである。同様に、その複合された代謝は、それから、肝臓細胞膜を通して、逆に拡散される。上述したように、運搬体の多くは成人肝臓成分であり、その運搬体は発明方法の実施の対象として適している。さらに、このタイプの運搬体が精製され、それらに対応するｃＤＮＡ及び遺伝子がクローン化されることになることは察せられるであろう。その発明は、さらに、未だ知られていない運搬体であっても対象に適しているであろうことも意図している。特異タンパク質あるいはタンパク質クラスのアイソザイムが、成人肝臓選択的、又は成人肝臓特異的でない場合には、成人肝臓選択的又は成人肝臓特定特異的アイソザイムが使用される。たとえば、あるＰ４５０が、成人肝臓選択的、又は成人肝臓特定的ではないときには、発明の実施において、適している他のＰ４５０が、成人肝臓を選択し、又は成人肝臓を特定する。概して、生体異物-代謝中のＰ４５０は肝臓選択的あるいは肝臓特異的である。適切には、特に前記胚又は胎児赤血球細胞が試料から分離されるならば、成人肝臓成分は細胞表面上の成分である。それにもかかわらず、前記細胞表面上の成分は分離及び同定目的のために有効で、且つ細胞表面上の成分は分離及び同定には好ましいと評価されるだろう。細胞表面上成分は、主に成人肝臓細胞膜と関連づけられる細胞膜タンパク質であることが好ましく、そもそも、もし成人の他の組織において発見されるとしても、低レベルでの発見にすぎない。好都合なことに、成人肝臓細胞膜タンパク質は、ＧＬＵＴ２、Ｐ−グライコプロテイン、ＭＤＲＰ、ＭＲＰ、γ−グルタミルトランスペプチターゼ、リポプロテイン受容体、アルカリホスファターゼ、胆汁塩運搬体、胆汁酸運搬体、ホルモン受容体、ＭＯＡＴ、ビリルビン運搬体、あるいはビリルビン複合運搬体の、上述したような全ての中のいずれかである。もし、トランスフェリン受容体が、上述したような成人肝臓成分であるならば、成人肝臓成分はトランスフェリン受容体でないことが好ましい。胚又は胎児赤血球細胞を同定あるいは分離するためには、前記試料が前記成人肝臓成分と結合する結合部分と接触され、結合部分と結合されることによる効果によって、前記胚又は胎児細胞が試料において認識されるか、あるいは試料から分離されることが好ましい。胚又は胎児赤血球細胞が他の方法で同定されるかもしれないことは察せられるであろう。たとえば、成人肝臓成分の多くは酵素なので、細胞は酵素の存在によって同定されることが可能である。グルコース−６−ホスファターゼのための組織化学的染色は、適当に使用されるかもしれない。また、ＵＤＰグルクノロシルトランスフェラーゼの分析は、適切に役立つ。また、その発明は、例えば、逆転写酵素ポリメラーゼチェインリアクション（ＲＴ−ＰＳＲ）を使用し、ｍＲＮＡである成人肝臓成分を検出することによって、細胞を同定しようとしている。さらに好適な実施例においては、成人肝臓成分は細胞間で検出される。例えば、成人肝臓成分が酵素である場合には、基質を使用することが都合よい(その酵素は、その基質に依存して浸透性があるかもしれないしあるいはないかもしれない細胞に進入する)。そして、前記成人肝臓成分が前記酵素によって代謝される場合には、酵素が蛍光又は着色された生成物、あるいは容易に同定される生成物を生成する。この実施例において、胚又は初期の胎児赤血球細胞は、前記酵素により生成される前記生成物の存在効果によって、蛍光あるいは着色される（あるいは他の方法によってマークされる）ことになると認識されるであろう。蛍光細胞は、ＦＡＣＳ分別装置を使用している非蛍光細胞から分離可能である。着色された生成物を生成するグルコース−６−ホスファターゼの基質は、その技術分野において知られている。個々に確立された成人肝臓のタンパク質成分に加えて、胚及び胎児細胞分離及び／又は同定のための抗体の潜在的原料として、以下の方法もまた役に立つ。ヒト及び／又は哺乳類の肝臓細胞膜は、分画遠心分離によって、同質化された肝臓から分離される(あるいは、その技術分野において知られている他の技術によって)。そして、抗体あるいは肝臓細胞膜の（ａ）抗体を直接見つけるために直接使われる、あるいは（ｂ）肝臓細胞膜の２次分別が、特定の成分に対して抗体を見つける前に実行されている。このような抗体は、成人肝臓細胞膜に、そして発明に応じて胚及び胎児の赤血球細胞の細胞膜に結合する多重特異性抗体であるだろう。成人肝臓細胞膜成分において指向され、限定された抗体の混合物は又本発明のこの方法において役に立つと評価されるだろう。その抗体は、細胞の表面上に露出されている成人肝臓細胞膜成分の一部に結合するのが好ましい。前記結合部分は抗体、あるいはその断片か派生物であることが好ましい。これらの抗原（タンパク質抗原あるいは非タンパク質抗原）の多くと結合するであろうモノクローナル抗体は、既に知られているが、どんな場合でも、モノクローナル抗体技術に関する今日の技術で、抗体はほとんどの抗体に対して生成可能である。抗原結合部は、抗体（例えば、Ｆａｂ断片）の一部かもしれないし、合成抗体断片（例えば、一本鎖Ｆｖ断片[ＳｃＦｖ]）かもしれない。抗原を選択するためのモノクローナル抗体は、知られている技術によって生成されるかもしれない。例えば、それらは、“モノクローナル抗体：技術マニュアル”、Ｈゾラ (ＣＲＣＰｒｅｓｓ、１９８８)、及び、“モノクローナルハイブリドーマ抗体：技術及び応用”、ＪＧＲヒューレル（ＣＲＣＰｒｅｓｓ、１９８２）において発表された。キメラ抗体は、ニュウベルガー等（１９８８，８回国際生物工学シンポジウムＰａｒｔ２、７９２−７９９）によって、議論される。ポリクローナル抗体は、発明の方法において役立つ。複数の特徴を持つポリクローナル抗体は好ましい。適したポリクローナル抗体は、その技術分野においてよく知られている方法を使用することによって生成され得る。抗体の断片が、遺伝子学的に処理された抗体及び抗体断片であり得るように、Ｆａｂ及びＦａｂ₂断片もまた使用され得る。抗体の可変重（Ｖ_H）及び可変軽（Ｖ_L）領域は、抗原認識に関係しており、第１の事実は初期のタンパク質消化実験において認識されている。さらに、確証は、ゲッ歯類抗体の“ヒト化”によって発見された。ゲッ歯類（ｒｏｄａｎｔ）起源の可変領域は、人間の起源の固定領域と融合して、そのような結果の抗体は、ゲッ歯類由来抗体の抗原特異性を記憶しているかもしれない。(モリソン等（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１，６８５１ −６８５５)。抗原の特異性は、様々な領域によって与えられ、そして、その一定の領域の影響を受けないことは、抗体断片のバクテリア発現を伴う実験で知られている。これらの分子は、Ｆａｂ様分子(ベッター等（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０、１０４１)；Ｆｖ分子（スケラ等（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０、１０３８)；Ｖ_HとＶ_Lの一対の領域がフレキシブルなオリゴタンパク質を介して連結される、一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）分子(バード等（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２、４２３；ヒューストン等（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５、５８７９)；そして分離されたＶ領域を含んでいる単一領域抗体（ｄＡｂｓ）(ワード等（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４１、５４４)である。特定の結合位置を維持する抗体断片の分析に関係する技術の一般的な批評は、ウィンターとマイルストン（１９９１）(Ｎａｔｕｒｅ３４９、１９３−２９９)で見られる。 “ＳｃＦｖ分子”で、私達は、Ｖ_HとＶ_Lの一対の領域がやわらかなオリゴタンパク質を介して連結される分子を意味する。Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖ、そしてｄＡｂの全ての抗体断片は、大腸菌で発現し、大腸菌から分泌されるので、前記断片の容易な多量生成を可能としている。全抗体とＦ（ａｂ'）₂断片は、“２価”である。“２価”で、私達は、前記抗体とＦ（ａｂ'）₂断片が２つの抗原結合部位を持つことを意味する。対称的に、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖ、そしてｄＡｖ断片は、唯一の抗体結合位部位を持つ、 1価である。成人肝臓成分が受容体であるとき、その受容体、そしてそれから、胚又は胎児の赤血球細胞は、その受容体のためにリガンドを使用することを同定されることが可能であろう。例えば、同族ホルモンは、ホルモン受容体のリガンドである。一般的に、胚又は胎児の赤血球細胞を同定する方法において、結合部分は発見されるように標識されているか、すくなくとも発見の可能性がある。例えば、結合部分は、放射活性原子あるいは着色された分子で標識されているか、あるいは、他の方法で容易に発見されうる蛍光の分子かある分子で標識されている。結合部分は、発見可能な標識で、直に標識されるかもしれないし、あるいは間接的に標識されるかもしれない。例えば、結合部分は、それ自身で標識されている他の抗体によって検出されうる、標識されていない抗体かもしれない。あるいは、第２の抗体は、ビオチンと結合してしまっているかもしれないし、標識されたストレプトアビジンとビオチンの結合は、間接的に、第１の抗体に標識するのに使用されている。一般的に、胚又は胎児の赤血球細胞を分離する方法において、結合部分は個体の支持体に固定されているので、胚あるいは初期の胎児の赤血球細胞は、アフィニティ結合によって、分離されることが可能である。好都合なことに、個体の支持体は、アガロース、アクリルアミド、セフアロース(商標)、そしてセファデックス（商標）のような適したマトリックスを含んでいる。その固体の支持体はまた、極小滴定プレート又はその様な固体基盤で良い。好都合に、結合部分は、磁気作用によって標識されている（直接あるいは間接的に）ので、結合されている時には、胚又は胎児の細胞は、適した磁場の供給にある試料の残余から分離されることが可能である。磁気的な細胞の分別のために使用されるマイクロビーズは、しばしばＭＡＣＳコロイド状の超常磁性マイクロビーズといわれる。この方法で標識された胎児あるいは胚細胞は、磁気活性された細胞の分別すること（ＭＡＣＳ）によって、分別されるかもしれない。適切には、結合部分は蛍光分子で標識され(直接あるいは間接的に)、そして胚あるいは胎児の赤血球細胞は、蛍光活性分別装置（ＦＡＣＳ）を使用して分離される。したがって、私達は適切な細胞のタイプを明確に同定し、そして探しているものをあなた達に示す、道具や方法を開発してきた(すなわち、胚又は胎児の赤血球細胞)。本発明の第３の側面は、胎児の異常を測定する方法を提供するものである。その方法は、本発明の第１及び第２の側面の方法によって、胚又は胎児細胞を同定または分離すること、及び、前記胎児異常の前記胚又は胎児細胞を分析することを含む。１つの実施例において、上述したように、細胞は結合部分を使って同定されるか、あるいは前記酵素の存在の効果によって同定される。そして、前記胎児異常の分析は、同定された細胞において、直接実行される。例えば、細胞は、適当な結合部分又は適当な酵素検出システムを使って免疫組織化学的に、同定されることが可能であり、そして、その胎児異常の分析は、同定されたその細胞上で、染色体異常を発見するための蛍光ｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼイゼーション（ＦＩＳＨ）等の技術を使って実行される。ポリメラーゼチェインリアクションは使用されるかもしれない。蛍光検出システムがうまく動作している間は、標識プローブや酵素結合検出システムを使用することは可能である。特に好適な実施例において、胚又は胎児細胞は、本発明の第２の側面に応じて、分離される。この手順によって分離された細胞は、実質的には全ての胚あるいは胎児細胞であり、特に、実質的には母方の細胞は存在しない。胎児異常の分析は、潜在的な異常が研究されるべきであることによって、前記胚又は胎児細胞の分析を必要とする。この方法は本発明によって使用可能であるが、グルコース−６−ホスファターゼにおいて家族性欠損は検出されず、あるいは、グルコース−６−ホスファターゼのような細胞間の成人肝臓成分と結合する結合部分を使って、細胞が同定されるとき、肝臓タンパク質発現は検出されないことが好ましい。この方法は本発明によって使用可能であるが、細胞間の成人肝臓細胞成分と結合する結合部分を使って、細胞が同定されるとき、内質網状タンパク質の遺伝子欠陥は検出されないことが好ましい。胎児細胞異常は、遺伝子データの分析によって決定されるほうが好ましい。特に、本発明の第２の側面の方法によって分離された胎児細胞を補うゲノムＤＮＡは、胎児の体細胞を補うジェネティックＤＮＡと同じであろう。１つ好適な実施例において、染色体異常が検出される。“染色体異常”により、我々は染色体または染色体数における全ての異常を包括する。例えば、これは、個々の遺伝子における、ダウン症候群を表している第２１染色体の３染色体状態、第１８染色体の３染色体状態、第１３染色体の３染色体状態、クリネフェルタ症候群(４７、ＸＸＹ)、ＸＹＹ又はターナ症候群のような性染色体異常、染色体転座及び欠損、少数の割合のダウン症候群患者は転座及びともに第１５染色体の部分の欠損を含むパラダールーウィリ症候群やアンジェルマン症候群、そして、突然変異の欠損（欠損、挿入、転位、転換、そして他の突然変異のような）の検出を含む。ＤＮＡ分析によって検出可能なフレージェルＸ症候群のような、他のタイプの染色体問題もまた、存在する。次の表では、いくつかの遺伝子を表示しており、その表において、突然変異が特定の遺伝子的病気を導いている。、ＤＮＡ分析により検出できる他の遺伝子障害としては、２１−ハイドロキシラーゼ欠損症、ハロカルボシキラーゼシンセターゼ欠損症、アスパチルグルコサミヌリア、メタクロマチック白質ジストロフィー、ウィルソン病、ステロイドサルファターゼ欠損症、Ｘ結合副腎白質ジストロフィー、ホスフォリラーゼキナーゼ欠損症(VI型グリコーゲン蓄積症)、および枝切り酵素欠損（III型グリコーゲン蓄積症）が知られている。これら及びその他の遺伝病は、「遺伝病の代謝的および分子的基礎」（第７版、第１、２および３巻、スクライバー(Ｓｃｒｉｖｅｒ，Ｃ．Ｒ.)、ビューダー(Ｂｅａｕｄｅｒ，Ａ．Ｌ.)、スライ（Ｓｌｙ，Ｗ．Ｓ.）およびバレ（Ｖａｌｌｅ，Ｄ.）(ｅｄｓ)、マグローヒル、１９９５)に記載されている。明らかに、クローンとして発生した遺伝子が有する全ての遺伝病や検出された変異は、本発明の方法の実施例により分析できる。遺伝子分析方法は、以下に記載された他の方法だけでなく、制限断片長多型分析やＰＣＲに基づく分析といった標準的な技術も包含する。前記遺伝子分析方法は、ＤＮＡの１カ所あるいは複数の関連箇所における配列決定；天然体や変異体の配列の関連箇所における交配のために設計されたオリゴヌクレオチドのプローブのディファレンシャルハイブリダイゼーション；、好ましくは関連するＤＮＡ領域の増幅の後に続いて行う、適切な制限酵素による消化の後に行われる変性ゲル電気泳動、Ｓ１ヌクレアーゼの配列分析；好ましくは関連するＤＮＡ領域の増幅の後に続いて行う、非変性ゲル電気泳動；従来のＲＦＬＰ（制限断片長多型）分析；天然体の配列に対応し且つ変異体の配列に適合しない、あるいはこの逆様であるオリゴヌクレオチドを用いた、選択的ＤＮＡ増幅；あるいは制限消化の前に行われる、天然体や変異体の遺伝子型に対応したＰＣＲ（又は類似の）プライマーを用いる制限部位の選択的な導入、といった変異や多型を同定するための全ての好適な方法を包含してよい。この遺伝子分析方法は間接的であってもよく、すなわち、ある別の１カ所における変異、あるいは１またはそれ以上の変異箇所に関連していることが知られている遺伝子の検出が可能である。ここでのプローブおよびプライマーは、天然から分離されたＤＮＡの断片や、または合成されたものでもよい。非変性ゲルは、適切な制限酵素による消化から得られた断片の異なる長さを決定することに使われてもよい。このＤＮＡは、通常、たとえば、ポリメラーゼチェインリアクション（ＰＣＲ）やそれを修正した方法を用いた消化の前に、増幅される。ＤＮＡの増幅は、サイキ等によってＳｃｉｅｎｃｅ２３９号（４８７−４９１、１９８８）において開示されているような確立されたＰＣＲ方法や、その方法を改良した方法、又はリガーゼチェインリアクション、ＱＢレプリカーゼ、核酸配列基礎増幅のような他の方法により達成されてもよい。 “適切な制限酵素”により、天然体の配列を認識しそして切断するが変異体の配列はそうしない、又はその逆である酵素である。制限酵素（又はそうではなく、その様な場合も構わないので）によって認識され切断される配列は、変異の結果として存在し得るか、又それはＰＣＲ反応において適合しないオリゴヌクレオチドを用いて、正常または変異した対立遺伝子中に導入され得る。この酵素がまれにしかＤＮＡを切断しないこと、言い換えればこの酵素がまれにしか発生しない配列を認識することは、好都合なことである。もう１つの方法においては、天然型の遺伝子型あるいは変異型の遺伝子型の一方にのみ対応するが、しかし両方にはしない（すなわち、ハイブリダイズする）、１対のＰＣＲプライマーが使用される。増幅されたＤＮＡが産生れたか否かということが、天然型又は変異型の遺伝子型（ゆえに表現型である）かを示す。しかしながら、この方法は、ある程度、技術的な不足により消極的な結果（言い換えれば、増殖したＤＮＡの不足）に頼るものである。それゆえ、この方法は、あまり頼り信頼性が無く、および／または、付加的な対照実験が要求される。１つの好ましい方法は類似のプライマーを使うことだが、しかし、天然型や変異型の配列のうちの一方のみとハイブリダイズするだけでなく、それらは天然体または変異体配列の何れかには存在しない制限部位を導入している。次の増殖した配列をクローン化することを促進するために、プライマーは、それらの５’末端に付加された制限酵素部位を有していてよい。したがって、プライマーの全てのヌクレオチドは、制限酵素部位を形成するために必要である少数のヌクレオチド以外のその遺伝子に近接する遺伝子配列や対象の遺伝子配列から得られる。このような酵素や部位は、技術的に従来からよく知られている。前記プライマーは、技術分野において従来周知の技術を使って合成される。一般的に、プライマーは、商業的に利用できる合成装置を用いて作れる。本発明の第４の側面は、（ａ）細胞が成人肝臓成分を含んでいる又は発現しているかどうかを決定するための手段と、（ｂ）細胞の異常性を分析する手段とを含む胎児異常性を決定するための設備一式を提供することである。前記細胞が成人肝臓成分を含んでいる又は発現しているかどうかを決定するための手段は、成人肝臓成分が１種類の酵素であるときに前記酵素を検出するための上述の結合部部と試薬（えば、基質）と成人肝臓成分がｍＲＮＡであるときに上記ｍＲＮＡを検出するためのＰＣＲプライマー、デオキシヌクレオチド、およびＤＮＡポリメラーゼのような試薬と、を含む。抗体あるいはその断片あるいは派生物は、成人肝臓成分に対して好ましい。もし成人肝臓成分が上記で記載したような細胞表面の成分であれば特に好ましい。前記の細胞の異常性を分析する手段は、いかなるそのような手段をも含む。この手段が遺伝的異常を検出するための手段であれば特に好ましい。したがって、この適当な分析手段は、ＰＣＲプライマーやプローブのような、対象となる遺伝子と選択的にハイブリダイズする核酸分子、すなわち遺伝的異常が見つかる、核酸分子を含む。本発明の更なる側面は、結合部分の使用を提供することであり、その結合部分は、胎児異常を決定する方法において成人肝臓成分に結合するもので、その方法とは、本発明の第１または第２の側面において提供された前記方法における胚または胎児の細胞を同定または分離することと、前記胎児異常性の為に前記の胚または胎児の細胞を分析することを含むものである。好ましくは、前記結合部分は、例えば、ＤＮＡ中の染色体異常や変異のような胎児細胞の異常が遺伝物質を分析することで決定される方法において用いられる。本発明のさらに別の側面は、細胞が胚または胎児赤血球細胞を同定または分離するための成人肝臓成分を含んでいるか、または発現しているかどうかを決定するための手段の使用を提供することである。細胞が成人肝臓成分を含んでいるか、または発現しているかどうかを決定するための前記手段は、本発明の第４の側面において記載されているそれらの手段である。以下の実施例と図面に基づいて，本発明をより詳細に説明する。図１（９５絨毛膜ａＧＬＵＴ２１；１００Ｘ４０ＲＨ）は、胎児絨毛膜血管（ｂｖ）の中で、巨大赤芽細胞（矢印）における強いアルファＧＬＵＴ２免疫活性を示し、正常芽細胞(矢先)において活性がないことを示す排卵５６日後の人間の絨毛膜絨毛を示している。シン−細胞栄養芽層(ｓｙｎｃｙｔｒｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ(ｓ))および細胞栄養芽層(ｃｙｔｒｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ(ｃ))が最小限度の免疫反応性である。実施例１：成人肝臓成分において指向される抗体精製されたラットの肝臓のテストステロン／４−ニトロフェノールＵＤＰＧＴに対して指向される抗体は、皮内および皮下注射の組み合わせによりサフォルククロスブラックフェースヒツジの中で発現される。免疫グロブリンＧは、アンモニア硫酸沈殿とジエチル−アミノエチル−セルロースクロマトグラフィー（バーチェル等、１９８４、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．１２，５０）を組み合わせた手法により、抗血清から得られる。ヒツジの抗ラット肝臓テストステロン／４−ニトロフェノールＵＤＰＧＴ抗体の調整液（ＲＡＬ１）は、ビリルビン、テストステロン、１−ナフトール、アンドロステロン、エステロン、およびモルフィネに対するＵＤＰＧＴ活性を阻害し、免疫ブロッティングが、ラットと人間の成人および胎児の肝臓のミクロソームの中の多系交雑イソ体に対しての交雑反応の広いスペクトルを確証する。ミクロソームのグルコース−６−ホスフェイト系であるＴ２およびＴ３に対する単一特異的ポリクローナル抗血清は、それぞれ、精製されたタンパク質を８０ μｇずつ３回皮下注射することと、以下の文献に記載されているフロインドの補充補助的手段により、シェビオットヒツジの中で発現する。前記補助的手段については、バーチェルおよびワッデルによる「肝臓のミクロソームのグルコース −６−ホスファターゼ系の遺伝的欠陥」、ランデル等(ｅｄｓ)、「遺伝子および人間の栄養学」、ロンドン、ＵＫ、Ｌｉｂｂｅｙ、１９９０，ｐ９３、およびワッデル等(１９９１)、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７５、３６３、およびバーチェルおよびカイン(１９８５)、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ２８、８５２に記載されている。プレイムネ（ｐｒｅｉｍｍｕｎｅ）血清は、抗原を注射する前の各々のヒツジから得られる。抗原として用いられる前記グルコース−６−ホスファターゼ酵素であるＴ２およびＴ３は、飢えた状態のフィスターラットの肝臓のミクロソームから全て分離される。抗血清は、（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄分別とプロテインＧカラムを使用したアフィニティー精製により更に精製される。ラット肝臓タンパク質に対して発現された前記抗体の調整液は、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動後の免疫ブロットにより診断されるようなヒトのタンパク質に対して、良好な交雑反応することを何回も示した。抗血清は、ウサギにおいてウシ血清アルブミン（ケリー等、１９８６、ＰｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓＬｅｕｋｏｔ．Ｍｅｄ．２４、１）に結合されたメチル−モキサメトされたＰＧＥＭ（ＰＧＥＭ−ＭＯＸ）に対して発現される。ラジオインモノアッセイにおいて、前記ＰＧＥＭ−ＭＯＸの抗血清は、わずか０．０５％のＰＧＥ₂への交雑反応性を有する。他のメチル−モキサメトされたＰＧｓに対してＰＧＥＭ−ＭＯＸの抗血清の交雑反応は、１５−ケト−ＰＧＥ₂（１２％）と１５−ケト−ＰＧＥ₂ _α（０．９％）を除いて、典型的には０．０２％より少ない。他のＰＧｓに対してのＰＧＥＭ−ＭＯＸ抗血清の交雑反応性の割合は、６，１５−ジケト−１３，１４−ジヒドロ−ＰＧＥ₂ _α(０．３５％)；１３，１４−ジヒドロ−ＰＧＥ₂ _α(２％)；そして１５−ケト−ＰＧＦ₂ _α（４％）を除いて、典型的には０．０２％より少ない。ＰＧＥＭ−ＭＯＸ抗血清に対するゲメプロスト（Ｇｅｍｅｐｒｏｓｔ）の交雑反応性（Ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ）は、典型的には０．０３％よりも少なく、かつ、ＰＧＦＭ−ＭＯＸ抗血清に対するゲメプロストの交雑反応性は０．０３％である。免疫組織学のためのＰＧＥＭ−ＭＯＸ抗血清の抗体特異性は、ＰＧＥＭ−ＭＯＸによる免疫染色の選択的な吸収により示される(ヒューム等、１９９３、Ｅｘｐ．ＬｕｎｇＲｅｓ．１９，３６１)。多くの哺乳類から得られる、ＰＧＨＳ−２に対するほんの僅かの反応性の他に、ＰＧＨＳ−１に対する交雑反応性を有するポリクローナルヤギ免疫グロブリンＧの断片であるアンチ−ＰＧＨＳ−１と、モノクローナル１５ −ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ抗体とはオックスフォードバイオメディカルリサーチ（ＯｘｆｏｒｄＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ(Ｏｘｆｏｒｄ，ＭＩ)）より入手できる。ＰＧＥ₂は、キーホールツタノハガイ（ｌｉｍｐｅｔ）ヘモシアニンに接合されて、ヒツジの皮内に注射される。その生成物ＰＧＥ₂抗血清は、ＰＧｓのＦ種およびＥ種間の最小限度の交雑反応性によるラジオ免疫アッセイにおいて、高いグループ選択性を有する。ＰＧＥ₂抗血清に対するゲメプロストの交雑反応性は、典型的には１％より少ない。免疫組織化学での抗血清特異性は、人間の胎児の肺の中のＰＧＥ₂による免疫着色の吸収の選択性によりテストされる(ヒューム等、１９９２、Ｅｘｐ．ＬｕｎｇＲｅｓ．１８，２５９)。精製されたシトクロームＰ４５０に対しての抗体は、ウォルフ等によりＣａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ５，９９３（１９８４）に記載された方法で、分離される。この方法で作られた抗血清の酵素特異性は、発現されたヒト組換えシトクロームＰ４５０タンパク質を用いた免疫ブロット分析により示された(フォレスター等、１９９２、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２８１，３５９)。ＮＡＤＰＨシトクロームＰ４５０オキサイドレダクターゼは精製され(ウォルフ等、１９８４、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ５、９９３)、ウサギの中で発現した抗体は、ドデシルサルフェイトポリアクリルアミドナトリウムのゲル電気泳動において人間の酵素と交雑反応することが示された(スミス等、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１，８７１０)。抗原として分離されたタンパク質を用いて作られた抗体に加えて、抗タンパク質抗体も有用である。抗タンパク質抗体は、既に知られている配列情報、および／または、ｃＤＮＡの一部を用いて生成されたタンパク質のより大きな一部分、あるいは、適切な系（例えば、バクテリア）において過剰発現後分離を促進する適切な配列に結合された遺伝子に基づいて合成される。ヒトのグルコース−６−ホスファターゼ酵素（ＣＳＨＩＨＳＩＹＮＡＳＬＫＫＹ(ＳＥＱＩＤＮｏ：１)；ＣＭＮＶＬＨＤＦＧＩＱＳＴＨＹ(ＳＥＱＩＤＮｏ：２)；ＣＬＡＱＶＬＧＱＰＨＫＫＳＬ( ＳＥＱＩＤＮｏ：３)；およびＣＬＳＲＩＹＬＡＡＨＦＰＨＱ(ＳＥＱＩＤＮｏ：４)）の一部に対する抗タンパク質抗体の種類は以下のように作られる。これらのタンパク質は、キーホールツタノハガイヘモシアニンに対して接合され、かつヒツジの皮内および皮下経路に注射された。この生成物抗タンパク質抗血清は、交雑反応することを示し、胎児や胚の細胞を含む細胞の中のグルコース−６−ホスファターゼの免疫組織化学的な検出のために使用することができる。実施例２：第２１染色体が３本あることを検出するための、免疫細胞化学と蛍光ｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーションとが複合された、母方血液試料分析血液試料と細胞調製。末梢静脈血液試料（ＥＤＴＡ）は、妊娠最初の３ヶ月内の妊娠メスから得られる。血液の５ｍｌ分割量は、１５ｍｌチューブ中のポリモルフォプレップ（ニコムド、ノルウェー）３．５ｍｌ分割量上に注意深く積層され、その後、室温にて３０分間、５００ｇで遠心分離される。細胞／ポリモルフォプレップ界面（得られた二つの帯のうち上の方）における単核細胞は、パスツールピペットを用いて回収され、クリーンチューブ内へ分配される。細胞は、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と５ｍＭエチレンジアミンテトラーアセティックアシッド（ＥＤＴＡ）とを含んだ冷たいリン酸緩衝液（ＰＢＳ）５ｍｌを用いて、三回洗浄され、その度に、続いて４００ｇで１０分間遠心分離される。細胞の小球は、最終的に、濃度が１０⁶ ｃｅｌｌｓ／ｍｌになるように、ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＥＤＴＡ溶液中に再懸濁される。スライド調製。血液単核細胞の分割量（１００μｌ）は、スライドガラス（サイトスピン、シャンドン(Ｃｙｔｏｓｐｉｎ，Ｓｈａｎｄｏｎ)）上にサイト遠心分離され、一晩中、空気乾燥される。免疫細胞化学。以下のポリクローナル及びモノクローナル抗体は、免疫細胞化学的手法に用いられる：（ａ）グルコース−６−ホスファターゼ酵素に対するマウスモノクローナル抗体（ｂ）１：２５のウサギアンチーマウス免疫グロブリンＧ(ディーエーケーオー(ＤＡＫＯ))、及び（ｃ）１：１００のマウスＰＡＰ(ディーエーケーオー(ＤＡＫＯ))。全ての抗体は、２０％正常ウサギ血清（セロテック(Ｓａｒｏｔｅｃ)）を含んだＴＢＳに希釈され、抗体培養は、室温で、保湿チャンバーの中で行われる。乾燥サイトスピン（ｄｒｙｃｙｔｏｓｐｉｎ）は、アセトン中で３分間固定され、トリス−緩衝溶液（ＴＢＳ）の二回交換で５分間洗浄される。標準ＰＡＰ技術（スターンバーガー等、１９７０、Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．１８、３１５−３３３）は、修正される。簡単に言うと、内因性ペルオキシターゼ活性は、スライドが５分間ＴＢＳの二回交換ですすがれた後に、３０分間、ＴＢＳ中０．３％過酸化水素を用いて、止められる。非特異的結合位置をブロックするために、サイトスピンは、５分間、ＴＢＳ中２０％正常ウサギ血清を用いて、培養される。正常ウサギ血清のほとんどを取り除いた後、サイトスピンは、３０分間、アンチ−Ｇ６Ｐアーゼモノクローナル抗体を用いて、培養される。前述のようにＴＢＳ中でスライドを洗浄した後、続いて、５分間、ＴＢＳ中２０％正常ウサギ血清を用いて培養され、サイトスピンは、３０分間、ウサギアンチーマウス免疫グロブリンＧを用いて培養される。スライドは、上述のように洗浄され、５分間、ＴＢＳ中２０％正常ウサギ血清を用いて、続いて３０分間、マウスＰＡＰを用いて培養される。そして、スライドは上述のように洗浄され、２〜３滴の３、３ −ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）基質溶液が加えられ、７分間、室温で培養される。ＤＡＢ溶液は、５ｍｌのＴＢＳ中に２．５ｍｇのＤＡＢ（シグマ）を溶解し、続いて、使用前に直ちに、新たに調製された１％過酸化水素０．１ｍｌを加えることにより、調製される。スライドは、流水中で、２分間洗浄され、続いて、硫酸銅溶液（０．４ｇ硫酸銅、０．７２ｇ塩化ナトリウム、１００ｍｌ蒸留水）中で５分間培養され、再び流水中ですすがれる。免疫細胞化学後の細胞の形態を調査するために、スライドは、２０分間、メイヤー（Ｍａｙｅｒ）のヘマトキシリン（シグマ）を用いて対比染色され、高級アルコールを通して脱水され、そして、軽量顕微鏡ツァイスアキシオスコップ２０を用いて調査される。組織細片における免疫細胞化学は、アンチ−Ｇ６Ｐアーゼモノクローナル抗体と標準ＰＡＰ技術（スターンバーガー等、１９７０、Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．１８、３１５−３３３）とを用いて行われる。細片は、ヘマトキシルイン（ｈａｅｍｏｔｏｘｌｙｉｎ）を用いて軽く対比染色され、高級アルコールに通して脱水され、合成樹脂中にカバーガラスをかける前にキシレン中で洗浄される。蛍光ｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーション(ＦＩＳＨ)。免疫細胞化学に続いて、サイトスピンは、室温で３０分間、３：１（ｖ／ｖ）メタノール：氷酢酸中に固定される。固定は、さらに３０分間、同様の固定が新たに調製されて行われ、そして、９０秒間、７０：３０（ｖ／ｖ）氷酢酸：水を用いて行われて、繰り返される。スライドは、ＰＢＳの二回の交換で、５分間洗浄され、そして、７０％、８５％、１００％アルコールに通して脱水され、室温で空気乾燥される。ＦＩＳＨは、蛍光インイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を用いて直接標識されたヒトの第２１染色体に対するヒト特異的プローブを用いて行われる。簡単に言うと、ハイブリダイゼージョン溶液は、それぞれのサイトスピンの上にピペットで置かれ、蛍光プローブを用いて塗られたカバーガラスは最も上に置かれて、ラバー溶液を用いて密封される。ハイブリダイゼーション溶液の存在下では、プローブはカバーガラスから溶離され、７０ ℃にスライドを熱することによりカバーガラス下で発生するプローブとターゲットＤＮＡとの両方の変性の後、プローブは、３７℃で２５分間、ターゲットへ交配するのが許される。数回のポストハイブリダイゼーション洗浄の後、スライドは、ジアミジノ−２−フェニル−インドールジハイロクロライド（ＤＡＰＩ）を含んだアンチフェードソリューション（ａｎｔｉｆａｄｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）中に据えられる。顕微鏡。スライドは、水銀蒸気ショート−アークランプＨＢＯ５０Ｗを用いた顕微鏡照明と、適当なツァイスフィルターコンビネーション（ＤＡＰＩに対しては０２；ＦＩＴＣに対しては０９）とを備えた、ツァイスアキシオスコップ２０顕微鏡を用いて分析される。免疫陽性細胞は、可視光モードでの顕微鏡を用いて場所が見つけられ、その後、可視光源が遮断され、顕微鏡が蛍光モードに切り替えられ、スライドはそれぞれのフィルターセットを用いて分析される。細胞は、可視光モード及び蛍光モードの両方で、フジクロムプロビア４００カラーフィルム（富士写真フィルム株式会社、東京、日本）上に、写真が撮られる。そして、黒及び白のネガとプリントは、カラーフィルムによって作られる。結果第２１染色体からの三つの蛍光活性点が、病気に犯された胎児から得られた胚又は胎児細胞に存在する。対照的に、正常な母方の細胞と正常な胎児細胞は、第２１染色体に対応する二つの蛍光活性点を与えている。胎児及び母方の細胞は、グルコース−６−ホスファターゼへの免疫活性により区別される、すなわち、胎児赤血球細胞は免疫陽性であり、母方赤血球細胞は免疫陰性である。実施例３：胎児細胞の分離および鎌型細胞貧血およびサラセミアのためのＰＣＲ分析図１（９５絨毛膜ａＧＬＵＴ１；１００Ｘ４０ＲＨ）は、胎児絨毛膜血管（ｂｖ）の中で、巨大赤芽細胞（矢印）における強いアルファＧＬＵＴ２免疫活性を示し、正常赤血球(矢先)において再活性がないことを示す排卵５６日後のヒトの絨毛膜絨毛を示している。シン−細胞栄養芽層(ｓｙｎｃｙｔｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ(ｓ))および細胞栄養芽層(ｃｙｔｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ (ｃ))は最小の免疫反応性がある。妊娠最初の３ヶ月以内に取り出された母方の血から胎児細胞が次の方法で分離され、そして、鎌型細胞貧血およびサラセミアのためのＰＣＲ分析がなされる。血液の試料と細胞分離。妊娠最初の３ヶ月の女性から末梢血（１６〜１８ｍｌ）がＥＤＴＡバキュテイナチューブ（ベクトンディッキンソン、ラザフォード、ＮＪ）内に集められる。その後，この血は、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）と１：２に希釈され、それぞれ１５ｍｌが１０ｍｌのフィコールーパクプラス（密度１．０７７ｇ／ｌ、ファルマシアバイオテック、ピスカタワ、ＮＪ）上に積層され、その後、室温で３０分間、４００ｇで遠心分離される。その後，間期の細胞が注意深く除去され，５ｍＭのＥＤＴＡと０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を加えられたＰＢＳで２回洗浄され、各１０⁷個の細胞あたり８０μｌのＰＢＳ／ＥＤＴＡ／ＢＳＡに再懸濁される。磁気活性化された細胞の分別。有核赤血球は次の製造者のプロトコルに従うＭｉｎｉＭＡＣＳ（ミルテンイバイオテックインク、サニーベール、ＣＡ）によって豊富化された。アンチ-ＧＬＵＴ２抗体複合化ＭＡＣＳミクロビーズが、それぞれ１０⁷個の細胞あたり２０μｌの割合で前記再懸濁された細胞に加えられる。その後，この混合物は冷蔵庫で６〜１２℃、１５分間培養される。磁気ビーズで標識された細胞懸濁液がＭｉｎｉＭＡＣＳカラムの頂部にピペットで置かれた後、標識されてない細胞が、ｌｍｌの緩衝溶液およびプランジャーを用いて、これらをこのカラムから押し出すことによって集められる。このように分離された細胞は、ほぼすべて早期の胎児または胚の有核赤血球である。ＰＣＲが、（サイキ等（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９、４８７〜４９１）に記載されているように、パーキン・エルマーＤＮＡサーマルサイクラーを用いて５０μｌの反応ボリューム内でなされる。それぞれ適用されたサイクルは９５ ℃で１分、５５℃で１分、７２℃で１分、最後のサイクルにおける最終伸長反応が７２℃で１０分からなる。ＭｉｎｉＭＡＣＳカラムから流れ出す胎児もしくは胚からのＤＮＡはまず４０サイクル増幅され、生成物の１／５が８％のアクリルアミドゲル上で調べられる。もしも特異的なＰＣＲ生成物が見られない又は非常に濃度の薄いＰＣＲ生成物が見られるのであれば、最初の段階のＰＣＲ生成物の分割量１０μｌを同一条件でさらに２０〜３０サイクル増幅する。β−グロビン配列を増幅するために用いられるプライマーは、ビオチン化された‘ｐｃｏ３’ (５‘−ビオチン−ＡＣＡＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＣＡＣＴＡＧＣ−３’(ＳＥＱＩＤＮｏ：５))、ビオチン化された‘β１１０’（５‘−ビオチン−ＡＡＡＡＴＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＧＣＡＧＡ−３’(ＳＥＱＩＤＮｏ：６))，およびビオチン化された‘Ｃｈｉｎａ２’（５‘−ビオチン−ＴＧＣＡＧＣＴＴＧＴＣＡＣＡＧＴＧＣＡＧＣＴＣＡＣＴ−３’(ＳＥＱＩＤＮｏ：７)）である。 ‘ｐｃｏ３’および‘１１０’によって増幅された２４８−塩基対ＤＮＡは鎌型遺伝子検出のために用いられる。‘ｐｃｏ３’および‘Ｃｈｉｎａ２’によって増幅された４６０−塩基対ＤＮＡはβ−サラセミア検出のために用いられる。逆ドットブロットハイブリダイゼーション。 β−グロビン配列の固定された正常体および変異体オリゴヌクレオチドプローブの複数のドットを含む膜片が、（マッジオ等（１９９３）Ｂｌｏｏｄ８１，２３９〜２４２、カイ等（１９９４）ＨｕｍａｎＭｕｔａｔｉｏｎ３，５９〜６３）に記載されているように調整される。変異を検出するためのこれらのオリゴヌクレオチドプローブの配列は次の通りである。鎌型遺伝子を検出するための、正常体プローブは５‘ −ＴＧＡＣＴＣＣＴＧＡＧＧＡＧＡＡＧＴ−３’（ＳＥＱＩＤＮｏ：８）、変異体プローブは５‘−ＣＡＧＡＣＴＴＣＴＣＣＡＣＡＧＧＡ−３’（ＳＥＱＩＤＮｏ：９）であり、β３９変異を検出するための、正常体プローブは５‘ −ＣＴＴＧＧＡＣＣＣＡＧＡＧＧＴＴＣＴＴ−３’(ＳＥＱＩＤＮｏ：１０) 、変異体プローブは５‘−ＡＧＡＡＣＣＴＣＴＡＧＧＴＣＣＡＡＧＧ−３’（ＳＥＱＩＤＮｏ：１１）であり、β１１０変異を検出するための、正常体プローブは５‘−ＧＡＡＡＡＴＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＧＣＡＧＡ−３’(ＳＥＱＩＤＮｏ：１２)、変異体プローブは５‘−ＣＴＧＣＣＴＡＴＴＡＧＴＣＴＡＴＴＴＴＣ−３’（ＳＥＱＩＤＮｏ：１３）である。胎児細胞のＰＣＲ生成物が２ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤＳを含む０．８ｍｌ溶液に加えられる。オリゴヌクレオチドプローブを含む断片が加えられ、ＤＮＡが５分間沸騰水中で変性される。ハイブリダイゼーションが、４２℃の水槽中で一晩行われる。この断片は、その後、４２℃の２ｘＳＳＣ０．１％ＳＤＳ中で１０分間洗浄され、室温で１５分間ストレプトアビジン−ＨＲＰと複合化され、そして胎児細胞が鎌型細胞またはサラセミア変異をこの方法によって検出できるかどうかの色が見えるまで、テトラメチルベンジジン溶液、クエン酸ナトリウムおよびＨ₂Ｏ₂を含む色素産生性基質によって室温で色を発現させる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１１年２月２２日（１９９９．２．２２）【補正内容】特許請求の範囲１．母方の血球細胞と胚又は胎児赤血球細胞又はその両方を含んだ試料中における胚又は胎児赤血球細胞を同定する方法であって、この方法は、どちらの細胞又は細胞群が成人肝臓成分を含んでいるか又は発現しているかを決定することを含み、前記成人肝臓成分がトランスフェリン受容体ではないことを特徴とする方法。２．母方の血球細胞と胚又は胎児赤血球細胞又はその両方を含んだ試料中における胚または胎児赤血球細胞を分離する方法であって、この方法は、成人肝臓成分を含んでいるか又は発現している前記細胞を分離することを含み、前記成人肝臓成分はトランスフェリン受容体ではないことを特徴とする方法。３．前記試料は、妊娠メス由来の血液試料である請求項１または２記載の方法。４．前記妊娠メスはヒト女性であり前記試料は妊娠３ヵ月内に採取されたものである請求項３記載の方法。５．前記胚又は胎児赤血球細胞は有核巨大芽細胞系である請求項１または２記載の方法。６．前記成分はたんぱく質である請求項１〜５のいずれか一つに記載の方法。７．前記母方血液の母方細胞には実質的に前記成分が無い請求項１〜６のいずれか一つに記載の方法。２１．染色体の異常が検出される請求項２０に記載の方法。２２．前記ＤＮＡ中の突然変異が検出される請求項２０に記載の方法。２３．（ａ）細胞が成人肝臓成分を含んでいるか又は発現しているかどうかを決定するための手段と、（ｂ）細胞の異常性を分析する手段とを有する胎児異常性検定のための設備一式。２４．請求項１９〜２２のいずれか一つによる方法において請求項１２に定義される結合部分の使用。２５．細胞が胚または胎児赤血球細胞を同定または分離するための成人肝細胞成分を含んでいるか、または発現しているかどうかを決定するための手段の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ヒューム・ロバートイギリス、ディーディー１９エスワイ、ダンディー、ナインウエルズホスピタルアンドメディカルスクール、オブステトリックスアンドガイナコロジー、ユニバーシティーオブダンディー

Claims

【特許請求の範囲】１．母方の血球細胞と胚又は胎児赤血球細胞又はその両方を含んだ試料中における胚又は胎児赤血球細胞を同定する方法であって、この方法は、どちらの細胞又は細胞群が成人肝臓成分を含んでいるか又は発現しているかを決定することを含む方法。２．母方の血球細胞と胚又は胎児赤血球細胞又はその両方を含んだ試料中における胚又は胎児赤血球細胞を分離する方法であって、この方法は、成人肝臓成分を含んでいるか又は発現している前記細胞を分離することを含む方法。３．前記試料は、妊娠メス由来の血液試料である請求項１または２記載の方法。４．前記妊娠メスはヒト女性であり前記試料は妊娠３ヵ月内に採取されたものである請求項３記載の方法。５．前記胚又は胎児赤血球細胞は有核巨大芽細胞系である請求項１または２記載の方法。６．前記成分はたんぱく質である請求項１〜５のいずれか一つに記載の方法。７．前記母方血液の母方細胞には実質的に前記成分が無い請求項１〜６のいずれか一つに記載の方法。８．前記たんぱく質は、ミクロソームのグルコース−６−ホスファターゼ酵素、前記リン酸又はグルコース又はグルコース−６−ホスフェイトランスポーター、ウリジンジホスフェイトグルクロノシル転移酵素、シトクロームＰ４５０イソ酵素、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェイトシトクロームＰ４５０還元酵素、グルコーストランスポーター２、Ｐ−グライコプロテイン、ＭＤＲＰ、ＭＲＰ、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ、リポプロテイン受容体、アルカリホスファターゼ、胆汁塩運搬体、胆汁酸運搬体、ホルモン受容体、多有機イオン運搬体、ビリルビン運搬体、又はビリルビン複合運搬体を含むグルコース −６−ホスフェイト系の他のたんぱく質成分のうちいずれか一つである請求項１または２のいずれかに記載の方法。９．前記成人肝臓成分が細胞表面に露出された成分である先行する請求項のいずれか一つに記載の方法。１０．前記細胞表面に露出された成分は成人肝臓細胞膜たんぱく質である請求項９記載の方法。１１．成人肝臓細胞膜たんぱく質はグルコーストランスポーター２、Ｐ−グライコプロテイン、ＭＤＲＰ、ＭＲＰ、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ、リポプロテイン受容体、アルカリホスファターゼ、胆汁塩運搬体、胆汁酸運搬体、ホルモン受容体、多有機イオン運搬体、ビリルビン運搬体、又はビリルビン複合運搬体のいずれかである請求項１０記載の方法。１２．前記試料は、前記成人肝臓成分に結合する結合部分に接触し、前記胚又は胎児細胞は、前記結合部分に結合される効果によって前記試料中から同定され又は分離される先行する請求項のいずれか一つに記載の方法。１３．前記試料は酵素の基質に接触されていて、前記酵素は成人肝臓成分であり、前記胚又は胎児細胞は前記基質上の前記酵素の働きによって形成される生成物によって試料から同定され、または分離される請求項１〜１１のいずれか一つに記載の方法。１４．前記結合部分は抗体、またはその断片もしくは派生物である請求項１２記載の方法。１５．前記結合部分は固形支持体に固定されている請求項１２または１４に記載の試料から胚又は胎児赤血球細胞を分離する方法。１６．前記結合部分は検出可能に標識されている又は検出可能である請求項１２または１４に記載の方法。１７．前記標識は前記細胞の分離を促進する請求項１６に記載の試料から胚又は胎児赤血球細胞を分離する方法。１８．前記生成物は蛍光又は着色されている請求項１３に記載の方法。１９．胎児の異常性を決定する方法であって、この方法は、前記請求項のいずれか一つに記載の方法に基づいて胚又は胎児細胞を同定又は分離すること、そして前記胎児の異常性について胚又は胎児細胞を分析することを含む方法。２０．遺伝物質の分析によって前記胎児細胞の異常性を決定する請求項１９記載の方法。２１．染色体の異常が検出される請求項２０に記載の方法。２２．前記ＤＮＡ中の突然変異が検出される請求項２０に記載の方法。２３．（ａ）細胞が成人肝臓成分を含んでいる又は発現しているかどうかを決定するための手段と、（ｂ）細胞の異常性を分析する手段とを含む胎児異常性検定のための設備一式。２４．請求項１９〜２２のいずれか一つによる方法において請求項１２に定義される結合部分の使用。２５．細胞が胚または胎児赤血球細胞を同定または分離するための成人肝細胞成分を含んでいるか、または発現しているかどうかを決定するための手段の使用。２６．ここに記載される母方血液中の胚又は胎児細胞を分析することによって胎児異常性を検出するあらゆる新規な方法。２７．ここに記載される胚もしくは胎児細胞を分離または同定するあらゆる新規な方法。