JP2001514620A

JP2001514620A - レプチン受容体リガンドによる視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸の調節

Info

Publication number: JP2001514620A
Application number: JP53674898A
Authority: JP
Inventors: ステファンス，トマス，ダブリュ．; ヘイマン，マーク，エル．; クラフト，リベイ，エス．; カロ，ジョセ，エフ．; スリーカー，ロウレンス，ジェイ．
Original assignee: イーライリリーアンドカンパニー
Priority date: 1997-02-25
Filing date: 1998-02-24
Publication date: 2001-09-11
Also published as: EP0991420A1; WO1998036767A1; CA2282341A1; AU6655898A

Abstract

(57)【要約】本発明は一般に、治療上有効量のレプチン受容体リガンドの投与による、治療を必要とする哺乳動物における視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸（ＨＰＡＡＡ）の調節方法に関する。さらに具体的には、本発明は、そのような治療を必要とする、クッシング症候群、飢餓、または肥満した哺乳動物または痩せた哺乳動物における他の誘発されたストレスに関連した、高グルココルチコイド血症を含むＨＰＡＡＡの障害を治療するための、レプチン受容体アゴニストの使用に関する。本発明はまた、慢性関節リウマチのような自己免疫または炎症症状に関連した低グルココルチコイド血症を治療するためのレプチン受容体アンタゴニストまたは特異的な抗レプチン抗体の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】レプチン受容体リガンドによる視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸の調節発明の背景発明の分野本発明は一般に、治療上有効量のレプチン（ｌｅｐｔｉｎ）受容体リガンドの投与による、治療を必要とする哺乳動物における視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸（ＨＰＡＡＡ）の調節方法に関する。さらに具体的には、本発明は、そのような治療を必要とする、クッシング症候群、飢餓、または肥満した哺乳動物または痩せた哺乳動物における他の誘発されたストレスに関連した、高グルココルチコイド血症（ｈｙｐｅｒｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｅｍｉａ）を含むＨＰＡＡＡの障害を治療するための、レプチン受容体アゴニストの使用に関する。本発明はまた、慢性関節リウマチのような自己免疫または炎症症状に関連した低グルココルチコイド血症（ｈｙｐｏｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｄｅｍｉａ）を治療するためのレプチン受容体アンタゴニストまたは特異的な抗レプチン抗体の使用に関する。関連技術の説明視床下部、下垂体、および副腎は、ストレスに対する生理学的応答の手段となる、哺乳動物における神経内分泌系（視床下部−下垂体−副腎軸）を構成する。代謝性ストレス（例えば、低血糖）、神経性ストレス（例えば、不安、疼痛）、および肉体的ストレス（例えば、運動、感染、外傷）を含む多くの型のストレスは、視床下部の傍室ニューロンによる副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）の生合成と放出を刺激する。ＣＲＨは、視床下部−下垂体の門脈循環中に放出され、ここから脳下垂体に移行して副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）の生合成と分泌を刺激する。このホルモンは、末梢循環中を循環して、グルココルチコイドホルモン（すなわち、ヒトにおけるコルチゾールおよびラットにおけるコルチコステロン）の分泌を刺激する。視床下部−下垂体−副腎軸は、迅速にストレスに応答する：多くの研究者は、ストレスから数分以内にグルココルチコイド濃度が２０倍も上昇することを証明している。上昇したグルココルチコイドレベルが、グルコース利用の低下に伴うアミノ酸と脂肪の迅速な動員のような代謝事象を開始させて、エネルギー利用、他の化合物（例えば、グルコース）の合成、および組織の基質（例えば、創傷治癒）のために利用可能な基質を作る。グルココルチコイドはまた、非常に強力な抗炎症性物質である。すなわち、グルココルチコイドの作用は、これらの放出を誘発するストレス刺激を改善する。さらに、循環グルココルチコイドは、視床下部ＣＲＨの生合成と放出、および下垂体前葉でのＡＣＴＨの合成と放出に対して直接の負のフィードバックを発揮する。肥満、特に腹部に分布する脂肪組織に由来する肥満は、ヒトを糖尿病、心臓血管病、および女性では、乳癌や子宮内膜癌に罹りやすくする。抗インスリン血症とインスリン抵抗性、耐糖能障害、および抗脂血症は、そのような肥満に関連したホルモン性および代謝性異常であり、肥満を上述の疾患状態に結びつけることがある。ヒトおよびラットにおける腹部肥満は、視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸活性の上昇および副腎皮質機能冗進症に関連する（パスカリ，アール（Ｐａｓｑｕａｌｉ，Ｒ．）ら、（１９９３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．７７：３４１−３４６；ホータネン，エイ（Ｈａｕｔａｎｅｎ，Ａ．）とアドラークロイツ，エイチ（Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ，Ｈ．）、（１９９３）Ｊ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．２３４：４６１−４６９；ギラーメ−ジェンティル，シー（Ｇｕｉｌｌａｍｅ−Ｇｅｎｔｉｌ，Ｃ．）ら、（１９９０）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１２６：１８７３−１８７９）。驚くべきことに本発明者らは、肥満哺乳動物の視床下部−下垂体−副腎軸が、肥満遺伝子のタンパク質産物（ＯＢタンパク質又は「レプチン」）により供給される視床下部へのフィードバックの欠如のため、高レベル（セットポイント）で調節されることを発見した。すなわち本発明は、初めて視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸（ＨＰＡＡＡ）を記載する。マウス肥満遺伝子は、遺伝子産物を生成しないか、または不活性の端を切ったタンパク質を生成する突然変異ｏｂ遺伝子を持つ肥満マウス（ｏｂ／ｏｂ）からクローン化した（チャン（Ｚｈａｎｇ）ら、（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ３７２：４２５−４３２）。本発明者らは、この遺伝子を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｊ）でクローン化および発現させて、未変性マウスおよびヒトＯＢタンパク質（ｍＯＢおよびｈＯＢ）を産生させた。ｏｂ／ｏｂマウスは、過食症だけでなく非常に上昇したコルチコステロンレベルを示す。ＨＰＡＡの異常な調節は、肥満ｆａ／ｆａズッカー（Ｚｕｃｋｅｒ）ラットにおいて記載されている。実際に突然変異は、上昇した血漿ＡＣＴＨおよびグルココルチコイドレベルに関係している（ギラーメ−ジェンティル，シー（Ｇｕｉｌｌａｍｅ−Ｇｅｎｔｉｌ，Ｃ．）ら、上記文献）。しかし、これらの動物の高い循環コルチコステロンレベルにも関わらず、視床下部ＣＲＨ分泌は痩せた野生型と同様であり、このことはコルチコステロンとＣＲＨのフィードバック調節の間の視床下部の部位での負のフィードバックの少なくとも部分的な欠如を示唆している（プロツキー，ピー（ｐｌｏｔｓｋｙ，ｐ．）ら、（１９９２）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１３０：１９３１−１９４１）。ｆａ／ｆａ脂肪表現型は、これらの視床下部ＯＢ受容体のミスセンス突然変異の結果である（ストリームソン（ｓｔｒｅａｍｓｏｎ）ら、（１９９６）Ｄｉａｂｅｔｅｓ４５：１１４１ −１１４３）。デヴォス（ＤｅＶｏｓ）らは、高用量のグルココルチコイドを正常ラットへ投与すると、脂肪組織によりｏｂ発現が誘導されることを証明した（デヴォス（ＤｅＶｏｓ）ら、（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１５９５９−１５９６１）。本発明者らは、これらの知見を確認し、かつ初代培養脂肪細胞からのグルココルチコイドの放出を含めるまでに拡大させた（図１）。さらに、これらのデータは、ノルエピネフリンと脂肪ｃＡＭＰレベルを上昇させる物質が、ｏｂ発現と脂肪細胞によるＯＢ放出の両方を阻害することを示す（図１）。また今や本発明者らは、ＯＢが低血糖性の灌流ラット視床下部からのＣＲＨ放出を阻害することを証明するデータも有する（図２）。すなわち、今やＨＰＡＡは、脂肪組織を含めるまでに拡大され、ＨＰＡＡＡと改名される。発明の要約本発明の主な目的は、治療上有効量のレプチン受容体アゴニストの投与による、治療を必要とする哺乳動物における視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸（ＨＰＡＡＡ）を調節する方法を提供することである。一般に本発明は、レプチン受容体リガンド、例えば、レプチン受容体アゴニストを投与することによる、ＨＰＡＡＡの調節方法、特にそのような治療を必要とするクッシング症候群、飢餓、または肥満した哺乳動物または痩せた哺乳動物における他の誘発されたストレスに関連した高コルチコイド血症を含むＨＰＡＡＡの障害を治療するためのレプチン受容体アゴニストの使用に関する。本発明はまた、そのような治療を必要とする哺乳動物へのレプチン受容体アンタゴニスト、または特異的な抗レプチン抗体の投与による、例えば慢性関節リウマチのような自己免疫または炎症症状における、高グルココルチコイド血症の治療方法を提供する。本発明はまた、血漿ＡＣＴＨや血漿コルチゾールのような、レプチン療法の初期有効性の代理マーカーを提供する。ＨＰＡＡＡホルモンの測定は、肥満の型の鑑別および肥満治療の決定のための有用な診断法である。神経性食欲不振のような他の摂食障害は、ＣＲＨレベルの上昇に関係しており、ＨＰＡＡＡの調節不全およびレプチンの過剰分泌の結果であろう。前述の目的および他の目的と共に、本発明の利点と特徴は、後述の本明細書から明らかであり、本発明の本質は、以下の本発明の好適な実施態様の詳細な説明および添付した請求の範囲を参照することにより、さらに明瞭に理解されよう。図面の簡単な説明図１．単離したラット脂肪細胞からのレプチンの分泌に及ぼす種々の物質の影響。物質は、組換えヒトインスリン（Ｉｎｓ）：デキサメタゾン（Ｄｅｘ）；ヒドロコルチゾン（Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ）；ジブチリルｃＡＭＰ（Ｂｕｔ２ｃＡＭＰ）；ＬＹ２４６１４９＝；百日咳毒素（Ｐｅｒｔ．Ｔｏｘｉｎ）；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アルファ；アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）；フェニルイソプロピルアデノシン（ＰＩＡ；代謝不可能なアデノシンアゴニスト）；および８−フェニル（８−Ｐｈｅ）テオフィレンを含む。データは１〜３回の実験を表す。図２．灌流ラット視床下部からの低血糖性ＣＲＨ分泌のレプチン阻害。値は、２０個の視床下部の２等分（１０個の視床下部に相当）からの３０分間に分泌された平均ＣＲＨを表す。５．５mMグルコースを含有する緩衝液で２．５時間の灌流後、マウスレプチンを添加したおよび添加していない１．１mMまでの低下するグルコース濃度により視床下部を抗原投与した。１チャンバーの視床下部が、実験を通じて５．５mMグルコースのままであった。４時間の灌流後に初期の灌流緩衝液が回復された。黒丸：５．５mMグルコース；白丸：１．１mMグルコース；黒三角：１．１mMグルコース＋１nMレプチン；白三角：１．１mMグルコース＋３０ nMレプチン。図３．灌流ラット視床下部からの低血糖性ＣＲＨ分泌。値は、２０個の視床下部の２等分（１０個の視床下部に相当）からの３０分間に分泌された平均ＣＲＨを表す。５．５mMグルコースを含有する緩衝液による１５０分灌流時点で、視床下部は、２．８mMまたは１．１mMまでの低下するグルコース濃度により抗原投与した。１チャンバーの視床下部が、実験を通じて５．５mMグルコースままであった。２１０分に初期の灌流緩衝液が回復された。発明の好適な実施態様の詳細な説明本発明は、クッシング症候群、飢餓、または肥満した哺乳動物または痩せた哺乳動物における他の誘発されたストレスに関連した高グルココルチコイド血症を含むＨＰＡＡＡの障害の安全で有効な治療法を提供するという、本発明者らの欲求から生まれた。本明細書に開示および特許請求される本発明の目的のために、以下の用語と略語が以下の通り定義される：塩基対（ｂｐ） − ＤＮＡまたはＲＮＡに関する。略語Ａ、Ｃ、ＧおよびＴはＤＮＡ分子中に存在するとき、それぞれヌクレオチドの（デオキシ）アデニン、（デオキシ）シチジン、（デオキシ）グアニン、および（デオキシ）チミンの５’−モノホスフェート型に対応する。略語Ｕ、Ｃ、Ｇ、およびＴはＲＮＡ分子中に存在するとき、それぞれヌクレオシドのウラシル、シチジン、グアニン、およびチミンの５’−モノホスフェート型に対応する。２本鎖ＤＮＡでは塩基対は、ＡとＴまたはＣとＧの結合を意味することもある。ＤＮＡ／ＲＮＡヘテロ２本鎖では、塩基対は、ＴとＵまたはＣとＧの結合を意味することもある。キレート化ペプチド − 多価金属イオンと錯体を形成することができるアミノ酸配列。ＤＮＡ − デオキシリボ核酸。ＥＤＴＡ − エチレンジアミン四酢酸の略語。ＥＤ５０ − 最大の半値の略語。ＦＡＢ−ＭＳ − 高速原子衝撃質量分析法の略語。視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸（ＨＰＡＡＡ） − 記載される要素（視床下部、下垂体、副腎、および脂肪組織）のそれぞれが、他のものの活性を調節する化学物質を放出する、生理学的調節系。例えば、視床下部により放出されるＣＲＨは、ＡＣＴＨの下垂体分泌を刺激し、そして次にこれがグルココルチコイドの副腎からの分泌を刺激し、次いでこれが、脂肪組織のレプチン放出を調節し、そして最後にこれが、戻って視床下部に作用する。免疫反応性タンパク質 − 抗体、そこから得られる親の抗体分子と同様な性質の抗原に結合することができる抗体の断片、およびＰＣＴ出願Ｎｏ．ＰＣＴ／ＵＳ８７／０２２０８号、国際公開Ｎｏ．ＷＯ８８／０１６４９号に記載される単鎖ポリペプチド結合分子を集合的に記載するために使用される用語。レプチン − ｏｂ遺伝子の内因性発現産物；ＯＢタンパク質。ｍＲＮＡ − メッセンジャーＲＮＡ。ＭＷＣＯ − 分子量カットオフの略語。調節 − 受容体または系の活性を刺激、増強、または阻害すること。プラスミド − 染色体外自己複製遺伝要素。ＰＭＳＦ − フッ化フェニルメチルスルホニルの略語。読み枠 − 翻訳が起こるヌクレオチド配列が、ｔＲＮＡ、リボソームおよび関連因子の翻訳装置によりトリプレット（各トリプレットは特定のアミノ酸に対応する）で「読む」。各トリプレットは識別可能でありかつ同じ長さであるため、コード配列は３の倍数でなければならない。１塩基対の挿入または欠失（フレームシフト突然変異と呼ばれる）によって、同じＤＮＡセグメントによりコードされる２つの異なるタンパク質が生成する。これが起きないことを保証するために、所望のポリペプチドに対応するトリプレットコドンは、開始コドンから３の倍数で整列している、すなわち、正しい「読み枠」が維持される必要がある。キレート化ペプチドを含有する融合タンパク質の作成において、構造タンパク質をコードするＤＮＡ配列の読み枠は、キレート化ペプチドをコードするＤＮＡ配列において維持される必要がある。受容体アゴニスト − 受容体に結合し、かつ受容体の機能（通常、細胞内シグナル生成事象、またはトランスメンブランチャネルを形成する受容体の場合はチャネルの開放または閉鎖）を誘発する任意の化合物。受容体アンタゴニスト − 受容体に結合し、かつ受容体の機能をブロックする任意の化合物（通常、受容体上の結合部位に対して内因性アゴニストと外部から競合することによる）。受容体リガンド − 受容体に結合する任意の化合物。組換えＤＮＡクローニングベクター − １つまたはそれ以上の追加のＤＮＡセグメントが付加できる（してもよい）ＤＮＡ分子を含んでなる、プラスミドおよびファージを含む（これらに限定されない）任意の自律的複製物質。組換えＤＮＡ発現ベクター − プロモーターが取り込まれた任意の組換えＤＮＡクローニングベクター。レプリコン − プラスミドまたは他のベクターの自律的複製を制御し、かつ可能にするＤＮＡ配列。ＲＮＡ − リボ核酸。ＲＰ−ＨＰＬＣ − 逆相高速液体クロマトグラフィーの略語。転写 − ＤＮＡのヌクレオチド配列に含まれる情報が相補的ＲＮＡ配列に移るプロセス。翻訳 − メッセンジャーＲＮＡの遺伝情報を使用して、ポリペプチド鎖の合成を特定および指令するプロセス。トリス − トリス−（ヒドロキシメチル）アミノメタンの略語。治療 − とは、疾患、症状、または障害と戦う目的の患者の管理と介護を説明するものであり、症候または合併症の発症を予防し、症候または合併症を軽減するか、または疾患、症状、または障害を排除するための、本発明の化合物の投与を含む。例えば、肥満の治療は、摂食の阻害、体重増加の阻害、および必要な患者の体重減量の誘導を含む。ベクター − 適切な制御配列と合わせると、形質転換されるホスト細胞に特異的な性質を与える適切なタンパク質分子に対応するポリヌクレオチド配列を運ぶ、遺伝子操作において細胞の形質転換のために使用されるレプリコン。プラスミド、ウイルス、およびバクテリオファージは、それ自体がレプリコンであるため、適切なベクターである。人工ベクターは、制限酵素とリガーゼを使用して、異なる起源のＤＮＡ分子を切断および連結することにより作成される。ベクターは、組換えＤＮＡクローニングベクターおよび組換えＤＮＡ発現ベクターを含む。Ｘ−ｇａｌ − ５−ブロモ−４−クロロ−３−イドリル−ベータ−Ｄ−ガラクトシドの略語。正常なＨＰＡＡＡは、以下のように記載することができる：代謝性、神経性または物理的ストレスは、ＣＲＨ放出を刺激する。これが次にＡＣＴＨ放出を刺激する。後者がグルココルチコイド放出を刺激する。最後に、副腎ステロイドがＯＢ放出を刺激する。グルココルチコイドとＯＢ両方が、負にフィードバックしてＣＲＨ放出を阻害する。本発明者らは、レプチン受容体リガンド、特にレプチン受容体アゴニストまたはレプチン受容体アンタゴニストの投与が、ＨＰＡＡＡを有効に調節することを見いだした。本明細書において使用される「受容体リガンド」、「受容体アゴニスト」、および「受容体アンタゴニスト」という用語は、薬理学的活性化合物、およびその塩を意味するものと理解される。本発明において使用に好ましいレプチン受容体アゴニストは、内因性レプチン（すなわち、内因性ＯＢタンパク質− 転写と翻訳およびイントロンの欠失、タンパク質への翻訳および分泌シグナルペプチドを（例えば、成熟タンパク質のＮ−末端バリン−プロリン〜Ｃ−末端システインから）除去した成熟タンパク質へプロセシングした後に、肥満遺伝子から生成されるタンパク質）を含む。マウスＯＢタンパク質とヒトＯＢタンパク質は、チャン（Ｚｈａｎｇ）ら、Ｎａｔｕｒｅ３７２：４２５−４３２（１９９４）に発表されている。ラットＯＢタンパク質は、ムラカミ（Ｍｕｒａｋａｍｉ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ．２０９：９４４−９５２（１９９５）に発表されている。ブタおよびウシＯＢ遺伝子およびタンパク質は、ＥＰ０７４３３２１に開示されており、その内容は参照することにより本明細書の一部とする。種々の霊長類ＯＢ遺伝子およびタンパク質が、米国出願Ｎｏ．０８／７１０，４８３号に開示されており、その内容は参照することにより本明細書の一部とする。また、本発明における使用に好ましいのは、レプチン類似体、好ましくは１つまたはそれ以上のアミノ酸置換を有するもの、さらに好ましくは５つ未満、そして最も好ましくは３つ未満の置換を有するレプチン類似体である。本発明での使用に特に好ましいレプチン類似体は、式（Ｉ）：配列番号：１の、バシンスキ（Ｂａｓｉｎｓｋｉ）らのＷＯ９６／２３５１５号およびＷＯ９６／２３５１７号（これらの内容は参照することにより本明細書の一部とする）に開示されるタンパク質、または薬剤学的に許容されるその塩を含み、ここで、２８位のＸａａは、Ｇｌｎであるかまたは存在せず；該タンパク質は、少なくとも１つの下記の置換を有する：４位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；７位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；２２位のＡｓｎは、ＧｌｎまたはＡｓｐで置換されている；２７位のＴｈｒは、Ａｌａで置換されている；２８位のＸａａは、Ｇｌｕで置換されている；３４位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；５４位のＭｅｔは、メチオニンスルホキシド、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている；５６位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；６２位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；６３位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；６８位のＭｅｔは、メチオニンスルホキシド、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている；７２位のＡｓｎは、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐで置換されている；７５位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；７７位のＳｅｒは、Ａｌａで置換されている；７８位のＡｓｎは、ＧｌｎまたはＡｓｐで置換されている；８２位のＡｓｎは、ＧｌｎまたはＡｓｐで置換されている；９７位のＨｉｓは、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、またはＰｒｏで置換されている；１００位のＴｒｐは、Ａｌａ、Ｇｌｕ、ＡｓＰ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、またはＬｅｕで置換されている；１０１位のＡｌａは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、またはＶａｌで置換されている；１０２位のＳｅｒは、Ａｒｇで置換されている；１０３位のＧｌｙは、Ａｌａで置換されている；１０５位のＧｌｕは、Ｇｌｎで置換されている；１０６位のＴｈｒは、ＬｙｓまたはＳｅｒで置換されている；１０７位のＬｅｕは、Ｐｒｏで置換されている；１０８位のＡｓｐは、Ｇｌｕで置換されている；１１１位のＧｌｙは、Ａｓｐで置換されている；１１８位のＧｌｙは、Ｌｅｕで置換されている；１３０位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；１３４位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；１３６位のＭｅｔは、メチオニンスルホキシド、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている；１３８位のＴｒｐは、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、またはＬｅｕで置換されている；または１３９位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている。さらに本発明において使用される化合物は、場合により官能基で置換されていてもよい。レプチン受容体に結合する化合物の能力を排除または顕著に減少させることはない当該分野で認識されている任意の官能基（エステル、アミド、酸、アミン、アルコール、エーテル、チオエーテルなどを含むが、これらに限定されない）が意図される。本発明の方法において有用な化合物の溶媒和物、例えば水和物もまた本発明の範囲に含まれる。このような溶媒和物を製造するための溶媒和の方法は、一般に当該分野において公知である。種々の経路により投与するのに適したレプチン受容体アゴニストおよびアンタゴニストの薬剤学的塩は、当該分野において公知であり、本明細書において詳細に説明する必要はない。本発明の薬剤学的に許容される塩およびその誘導体の例は、例えば、適切な塩基から誘導される塩基の塩を含む。酸基またはアミノ基の薬剤学的に許容される塩は、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、イセチオン酸、およびラクトビオン酸のような有機カルボン酸；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびｐ−トリルスルホン酸のような有機スルホン酸；および塩酸、硫酸、リン酸およびスルファミン酸のような無機酸の塩を含むが、これらに限定されない。ヒドロキシ基を含む化合物の薬剤学的に許容される塩は、Ｎａ⁺のような適切なカチオンと組合せた化合物のアニオンを含むが、これらに限定されない。さらなる実施態様において本発明は、治療を必要とする哺乳動物への内因性レプチン受容体アゴニストに対する抗体の投与によるＨＰＡＡＡの調節方法を含む。そのような抗体は、レプチン受容体アゴニスト、またはその抗原性部分に対するモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であってよい。レプチン受容体アゴニストに対するポリクローナル抗体とモノクローナル抗体は両方とも、精製レプチン受容体アゴニスト、精製組換えレプチン受容体アゴニスト、これらのタンパク質の断片、またはレプチン受容体アゴニストと別のタンパク質との精製融合タンパク質で、動物を免疫することにより得られる。モノクローナル抗体の場合は、部分精製タンパク質または断片を免疫原としてよい。両方の型の抗体の入手方法は、当該分野において周知であり、抗体製造の優れたプロトコールは、ハーロー（Ｈａｒｌｏｗ）ら、（１９８８）抗体：実験室マニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ）、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ）、コールド・スプリング．ハーバー（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ）、ニューヨーク州、７２６頁に見い出される（これの内容は、参照することにより本明細書の一部とする）。ポリクローナル血清は、有効量の精製レプチン受容体アゴニストまたはその一部を適切な実験動物に注射し、動物から血清を回収し、そして任意の既知の免疫吸着法により特異的血清を単離することにより、比較的容易に調製される。モノクローナル抗体は、大量にかつ高い均質性で製造することができるため、特に有用である。モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株は、不死化細胞株を、免疫原性調製物に対して感作したリンパ球と融合させることにより調製され、そして当業者に周知の方法により行われる。（例えば、ダイラード，アイ・ワイ（Ｄｏｕｉｌｌａｒｄ，Ｉ．Ｙ．）とホフマン，ティー（Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｔ．）、「ハイブリドーマに関する基本的事実（ＢａｓｉｃＦａｃｔｓＡｂｏｕｔＨｙｂｒｌｄｏｍａｓ）」、ＣｏｍｐｅｎｄｉｕｍｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、II巻、エル．シュワルツ（Ｌ．Ｓｃｈｗａｒｔｚ）（編）（１９８１）；ケーラー，ジー（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ）とミルスタイン，シー（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．）、Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５−４９７（１９７５）およびＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ６：５１１−５１９（１９７６）；ハーロー（Ｈａｒｌｏｗ）ら；コプロウスキー（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ）ら、米国特許第４，１７２，１２４号；コプロウスキー（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ）ら、米国特許第４，１９６，２６５号およびワンズ（Ｗａｎｄｓ）、米国特許第４，２７１，１４５号を参照のこと（これらの教示内容は、参照することにより本明細書の一部とする））。本発明のさらに別の部分は、少なくとも１つの上述のレプチン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、これらの混合物、および／またはこれらの薬剤学的塩と、薬剤学的に許容されるその担体を含んでなる、ＨＰＡＡＡを調節するための薬剤組成物である。このような組成物は、例えば、レミントンの製剤科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ）、第１７版、アルフォンソ・アール・ゲンナロ（ＡｌｆｏｎｓｏＲ．Ｇｅｎｎａｒｏ）編、マック出版社（ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ）、イーストン、ペンシルバニア州（１９８５）（この教示内容は、参照することにより本明細書の一部とする）に記載されるように、一般的な製剤の手順により調製される。ＨＰＡＡＡの調節方法における治療的使用のために、レプチン受容体アゴニストまたはアンタゴニストまたはその塩は、１つまたはそれ以上のレプチン受容体アゴニストまたはアンタゴニストまたはその塩と、薬剤学的に許容されるその担体とを含有する薬剤組成物の形態で投与することが便利である。適切な担体は、当該分野において周知であり、薬剤組成物の所望の剤型と投与の様式によって変化する。例えば、これらは、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤などのような、希釈剤または賦形剤を含む。典型的には、担体は、固体、液体、または揮発性担体、またはこれらの組合せである。１つの好適な実施態様において、本組成物は治療用組成物であり、そして担体は薬剤学的に許容される担体である。本発明において使用される化合物またはその塩は、担体と一緒に所望の単位投与剤型に処方することができる。典型的な単位投与剤型は、錠剤、丸剤、粉剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤を含み、注射用液剤と懸濁剤が特に好ましい。各担体は、処方中の他の成分と適合性であり、かつ患者に対して有害でないという意味で「許容しうる」ものである必要がある。担体は、生物学的に許容しうるものであり、かつ不活性である必要がある（すなわち、本発明の化合物がその阻害活性を発揮するように、担体が細胞にその代謝反応を行わせる必要がある）。処方は、経口、直腸内、鼻内、局所（頬内と舌下を含む）、膣内および非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、および経皮を含む）投与に適した処方を含み、局所用軟膏処方および経口投与に適した処方が好ましい。例えば、注射に適した処方を調製するために、溶液および懸濁液を滅菌して好ましくは血液と等張性にする。注射可能な調製物を作る際に、本分野において通常使用される担体、例えば、水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビテートエステルも使用することができる。これらの例において、塩化ナトリウム、グルコースまたはグリセリンのような適切な量の等張性調整剤を加えて、調製物を等張性にすることができる。水性滅菌注射液剤は、さらに抗酸化剤、緩衝化剤、静菌剤、および非経口処方について許容しうる同様な添加剤を含有してもよい。本処方は、単位投与剤型として提供し、かつ薬学の分野において既知の任意の方法により調製することができ便利である。このような方法は、活性成分を１つまたはそれ以上の補助的成分を包含してもよい担体と一緒にする工程を含む。一般に本処方は、活性成分を液体担体または微細固体担体またはその両方と均一かつ完全に一緒にし、次に必要であれば生成物を成形することにより調製される。当該分野で周知のように、種々の単位投与用および多回投与用容器、例えば、密閉アンプルおよびバイアルを使用することができる。特に上述した成分に加えて、本発明の処方はこの型の薬剤処方に関して当該分野において通常使用される他の物質も含んでよい。本発明において使用するための化合物は、担体に対する広範な割合で組成物中に存在してよい。例えば、本化合物は、０．０１〜９９．９重量％の量で、そしてさらに好ましくは約０．１〜９９重量％で存在してよい。さらに好ましくは、本化合物は、本組成物の約１〜７０重量％の量で存在してよい。本発明により患者に投与されるレプチン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、薬剤学的に許容されるその塩、またはその混合物の用量は、患者の年齢、体重、および種、患者の全身の健康状態、症候の重篤度、本組成物が単独で投与されるか、または他の治療剤と組合せて投与されるかどうか、副作用の発生率を含む（がこれらに限定されない）幾つかの要因に依存して変化する。一般に、ＨＰＡＡＡの調節に適用するために適切な用量は、１日当たり、約０．００１〜１００mg／kg体重／用量、好ましくは約０．０１〜６０mg／kg体重／用量、そしてさらに好ましくは約０．１〜４０mg／kg体重／用量である。所望の用量は、１日中の適切な間隔で１〜６回またはそれ以上の分割用量として投与することができる。本化合物は、数ヶ月または数年にわたって反復投与することができるか、または患者にゆっくりと一定速度で注入することができる。より高用量や低用量も投与することができる。１日用量は、例えば上で明らかにした種々のパラメーターを考慮に入れて調整することができる。典型的には本組成物は、約０．００１〜１００mg／kg体重／日で投与することができる。しかし他の量で投与してもよい。良好な血漿濃度を達成するために活性化合物は、例えば場合により生理食塩水中の活性成分の約０．１〜１％溶液の静脈内注射により投与することができるか、またはボーラスとして経口投与することができる。活性成分は、局所、経印直腸内、鼻内、膣内および非経日（腹腔内、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、および経皮を含む）経路を含む任意の適切な経路により治療のために投与することができる。好ましい経路は、患者の症状と年齢、障害の性質および他の治療剤を含めて選択した活性成分により変化することを理解されたい。好ましいのは経口経路である。また局所経路も好ましい。しかし患者の症状や、治療がどの程度長く続くかによって、他の経路を利用することもできる。活性成分は単独で投与することが可能であるが、好ましくは薬剤処方として存在する。本発明の処方は、少なくとも１つの上述の活性成分と共に１つまたはそれ以上の許容しうるその担体、および場合により他の治療剤を含む。上記方法は、本化合物を単独でまたは薬剤組成物中の治療剤を含む他の活性成分と組合せて投与することにより実施できる。本明細書において使用するのに適切な他の治療剤は、意図する目的に関して同じかまたは他の機作により有効な任意の適合性の薬物、または本発明の薬物に対して相補的な薬物である。これらは、ヒトにおける高コルチコイド血症および／または関連症状の治療に有効な物質を含む。例としては、特にシプロヘプタジン（ｃｙｐｒｏｈｅｐｔａｄｉｎｅ）のような視床下部セロトニンアンタゴニスト、およびバルプロ酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍｖａｌｐｒｏａｔｅ）のようなＧＡＢＡ−トランスアミナーゼインヒビターがある。併用療法に利用される化合物は、別々のまたは一緒の処方のいずれかで、同時にあるいは併用効果が達成されるように、例えば連続して本化合物とは異なる時点で投与することができる。投与の量と投薬法は、好ましくは最初にその標準用量を下げ、そして次に得られた結果を力価測定することによって医師により調整される。本発明の治療法は、医師が決定する他の治療法と共に使用することができる。ここまで本発明を一般的に記載してきたが、これは、ある種の具体例を参照することにより理解がさらに進むと思われる。これらの例は例示目的のためにのみ本明細書に含まれ、他に記載がなければ、本発明またはそのいかなる実施態様も限定するものではない。例１：単離したラット含脂肪細胞からのｏｂタンパク質の分泌に及ぼす種々の物質の影響デヴォス（ＤｅＶｏｓ）らは、高用量のグルココルチコイドを正常ラットに投与すると、脂肪組織によりｏｂ発現が誘導されることを証明した（６）。以下の実験において本発明者らは、これらの知見を確認かつ拡張して初代培養脂肪細胞からのグルココルチコイドの放出を含めた。これらの実験の結果を図１に示す。成熟ラット含脂肪細胞の単離と培養含脂肪細胞は、２５０〜３００ｇのオスラットの精巣上体脂肪体をコラゲナーゼ消化して入手した。細胞懸濁液は、順に５００、２５０、および１００μmメッシュにより濾過して、２０μｇ/mlウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、ＲＩＡ等級、シグマ化学（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．）、セントルイス）、２０ mMヘペス、０．１μｇ/1亜セレン酸ナトリウムおよび４．８８mg/1エタノールアミンを補足したダルベッコー改変イーグル培地／ハムＦ１２（Ｈａｍ’ｓＦ１２）（ＢＳＡ／Ｆ１２、３：１、ギブコ（Ｇｉｂｃｏ））により６回洗浄した。脂肪細胞は、この培地で約５×１０⁵細胞/mlで、コースター（Ｃｏａｓｔａｒ）Ｐ６トレーまたはコーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）Ｔ７５フラスコのいずれかを用いて２４時間培養した。培地は、脂肪細胞層のすぐ下から取り出して、ＲＩＡ分析に使用するまで−２０℃で貯蔵した。脂肪細胞は、以下に記載するようにＲＮＡ単離のために使用した。ジブチリルｃＡＭＰ（Ｂｕｔ２ｃＡＭＰ）、イソプロテレノール、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）、およびヒドロコルチゾン（Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ）は、シグマ化学（セントルイス、ミズーリ州）から入手した。組換えヒトインスリン（Ｉｎｓ）は、リリー（Ｌｉｌｌｙ）（インディアナポリス、インディアナ州）から得た。放射免疫測定法。組換えネズミレプチンは、¹²⁵Ｉ−ボルトン・ハンター（ＢｏｌｔｏｎＨｕｎｔｅｒ）試薬（アマーシャム・ライフ・サイエンシーズ（ＡｍｅｒｓｈａｍＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）、アーリントンハイツ（ＡｒｌｌｎｇｔｏｎＨｅｌｇｈｔｓ）、イリノイ州）によりヨウ素化した。抗体は、組換えネズミレプチンを使用してウサギで調製した。ＲＩＡは、１mg/mlウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と０．１％トリトンＸ−１００を含有するリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中で行った。感受性を増強するための非平衡プロトコールを使用して、試料を１：８０００希釈の抗レプチン抗体と合わせて、４００μlの全量で室温で４時間インキュベートした。約１５，０００〜２０，０００cpmの¹²⁵Ｉ−ネズミレプチンを加えて、インキュベーションを４℃で一晩続けた。各チューブに１００ μlの１：１希釈ヒツジ抗ウサギＩｇＧ（アンチボディーズ社（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、デーヴィス（Ｄａｖｉｓ）、カリホルニア州）、１００μ lの正常ウサギ血清（ギブコビーアールエル（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）、グランドアイランド（ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ）、ニューヨーク州）および１００μlの１００mg/mlポリエチレングリコール（ＰＥＧ８０００）を加えた。１５分インキュベーション後、チューブを遠心分離してデカントした。ペレットを¹²⁵Ｉについて計測して、データをＲＩＡエイド（ＲＩＡＡＩＤ）（ＩＣＮミクロメディック・システムズ（ＩＣＮＭｉｃｒｏｍｅｄｉｃＳｙｓｔｅｍｓ）、ハンツヴィル（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ）、アラバマリ相により分析した。抗マウスレプチン抗体とラットレプチンとの交差反応性を検証するために、肥満ズッカー（Ｚｕｃｋｅｒ）ｆａ／ｆａラットからの血清（２００、１００、５０、２５、１２．５、および６．２５μＬ）を、最終容量が２００μlになるように種々の量のウマ血清で希釈した。２００μlのウマ血清で希釈したマウスレプチン標準液からコンパレーター標準曲線を作成した。例２：ストレスに応答したＨＰＡＡＡのレプチン阻害これらの実験の結果は、レプチンがＨＰＡＡＡのストレス誘導性活性化を鈍らせることができ、そしてＣＲＨ放出を阻害して視床下部レベルでその効果を発揮できることを証明している。このような阻害が、ＨＰＡＡＡのフィードバックループを完了させる。材料と方法拘束ストレスに対するＨＰＡＡ応答のレプチン阻害。８週齢のオスのＣ５７ＢＬマウス（ジャクソン・ラボズ（ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｓ）、バーハーバー（ＢａｒＨａｒｂｏｒ）、メインリ州）を４群に分けて、１２時間の明環境（０６００−１８００）と暗環境（１８００−０６００時）下で収容し、使用までの２週間飼料と水は自由に与えた。これらの試験を行った動物施設は、実験動物保護のアメリカ認可協会（ＡｍｅｒｉｃａｎＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＡｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＣａｒｅ）の完全に認可された施設メンバーであり、使用されるプロトコールを承認した委員会を用意している。マウスを４群（１群Ｎ＝８）に分割して、手で触れるのはケージ清掃だけにした。１つの群には、１００μl生理食塩水を明サイクルの０７００−０８００時の間に腹腔内注射した。他の群には、１００μlの生理食塩水、生理食塩水担体中の２μｇまたは４μｇのマウスレプチン（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において生合成により調製（文献９を参照のこと））を注射して、２時間後後肢を一緒にテープで巻くことによってマウスを２時間の拘束ストレスに曝した。次に注射の４時間後断頭によりマウスを屠殺して、以前に記載されているようにダイアグノスティック・プロダクツ社（ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＰｒｏｄｕｃｔｓＣｏｒｐ．）（ロサンジェルス、カリホルニア州）、ＩＣＮバイオメディカルズ（ＩＣＮＢｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）（コスタメサ（ＣｏｓｔａＭｅｓａ）、カリホルニア州）、およびリンコ・リサーチ（ＬｉｎｃｏＲｅｓｅａｒｃｈ）（セントチャールズ（Ｓｔ．Ｃｈａｒｌｅｓ）、ミズーリ州）からの放射免疫測定法キットにより、ＡＣＴＨ、コルチコステロン、およびレプチンを測定するために、血漿を入手した（ステフェン，ティー・ダブリュー（Ｓｔｅｐｈｅｎｓ，Ｔ．Ｗ．）ら、（１９９５）、肥満遺伝子産物の抗肥満作用におけるニューロペプチドＹの役割、Ｎａｔｕｒｅ３７７：５３０−５３２）。視床下部灌流体重２５０ｇ〜３００ｇのオスのスプレーグ・ドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラット（ハーラン・スプレーグ・ドーリー（ＨａｒｌａｎＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ）、インディアナポリス、インディアナ州）を、上述の環境と同−の環境で少なくとも２週間順化させた。この試験を行った動物施設は、実験動物保護のアメリカ認可協会（ＡｍｅｒｉｃａｎＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＡｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＣａｒｅ）の完全に認可された施設メンバーであり、使用されるプロトコールを承認した委員会を用意している。５匹のラットを、水と餌が連続して利用可能な各ケージ（ラルストン・プリナ（Ｒａｌｓｔｏｎ−Ｐｕｒｉｎａ）、セントルイス、ミズーリ州）に収容した。断頭によりラットを屠殺して、迅速に脳を取り出した。視床から背側に、視交差により頭側に、および乳頭体により尾側に境界された領域を切り出して、第３脳室から矢状に２等分した。片側視床下部切片を、氷上に置いた３mlクレブス・リンガー（Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ）重炭酸緩衝液（ＫＲＢ）を５．５mMグルコースと共に含有する（ＫＲＢｈｉＧ）４つのウェルの１つにランダムに割り当てた。１ウェル当たり全部で２０個の片側切片（２０個の視床下部）をＫＲＢｈｉＧで室温で２回洗浄して、０．８ml ＫＲＢｈｉＧを含有する１．５mlアキュシスト−Ｓ（Ａｃｕｓｙｓｔ−ｓ）マイクロチャンバー（エンドトロニクス（Ｅｎｄｏｔｒｏｎｉｃｓ）、ミネアポリス、ミネソタ州）に移した。この緩衝液を、９５％Ｏ₂：５％ＣＯ₂の雰囲気下で３７℃で１００μl／分で同時に４つのチャンバーのそれぞれにポンプで注入した。緩衝液がチャンバーに到達するまでのタイムラグは１０分である。我々は、グルコース濃度を低下させることによりＣＲＨ放出を刺激した（２．８mMまたは１．１mMグルコースのいずれかを含有するＫＲＢ、ＫＲＢｌｏＧ）。この抗原投与期間にマウスレプチンを加えた。灌流液を３０分間隔で、７５０μlの１Ｍトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ；アルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ）、ミルウォーキー、ウィスコンシン州）を含有するチューブ中に集めて、急速凍結した。画分を解凍してＣＲＨを抽出し、アイソリュート（Ｉｓｏｌｕｔｅ）（登録商標）固相Ｃ−１８カラム（インターナショナル・ソルベント・テクノロジー（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｏｒｂｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ミッドグラモーガン（Ｍｉｄ−Ｇｌａｍｏｒｇａｎ）、英国）を使用して濃縮した。７ ml Ｈ₂Ｏ、７ml ＭｅＯＨおよび７ml ０．１％ＴＦＡでカラムを調整後、灌流液を適用した。次いでカラムを５ml ０．１％ＴＦＡで洗浄して、４mlの０．１％ＴＦＡ中の６０％アセトニトリル（マリンクロット（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ）；パリス（Ｐａｒｉｓ）、ケンタッキー州）でＣＲＨを溶出した。溶離液は、スピードヴァック（ＳｐｅｅｄＶａｃ）（登録商標）濃縮器（サヴァン・インストルメンツ（ＳａｖａｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）；ファーミングデール、ニューヨーク州）で留去した。ニューロペプチドを２５０μl（１６倍濃縮）のＲＩＡ緩衝液［０．０１％ウシ血清アルブミン（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、セントルイス、ミズーリ州）、０．０１％アジ化ナトリウム（シグマ（Ｓｉｇｍａ））および０．００１％トリトンＸ−１００（シグマ（Ｓｉｇｍａ））を含有する、０．０５Ｍリン酸緩衝化生理食塩水］で復元した。このような抽出により、少なくとも９５％のＣＲＨを回収することができた。１００μlの二重測定を各画分について標準的ＲＩＡにより行った。［¹²⁵Ｉ］−ＣＲＨは、デュポン社（ＤｕＰｏｎｔＮＥＮ）（ボストン、マサチューセッツ」相から購入した。ＣＲＨ−次抗血清、正常ウサギ血清、およびヤギ抗ウサギＩｇＧは、ペニンスアル・ラボラトリーズ（ＰｅｎｉｎｓｕａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）（ベルモント、カリホルニア州）から購入して、製造業者の指示に従って希釈した。１セットの標準液について計算した変動係数は、測定内および測定間の両方について１２％未満であった。データと統計量ＣＲＨ放出は、台形法則を用いて積分した（シグマプロット（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ）；ジャンデル・サイエンティフィック（ＪａｎｄｅｌＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、サンラフェル、カリホルニア州）。積分した放出を、平均±標準誤差として表し、処理群を分散分析と次いでシェフェのＦ検定（Ｓｃｈｅｆｆｅ’ｓＦ−ｔｅｓｔ）（スタットビュー（ＳｔａｔＶｉｅｗ）、ブレインパワー社（ＢｒａｉｎＰｏｗｅｒ，Ｉｎｃ．）、カラバサ（Ｃａｌａｂａｓａ）、カリホルニア州）により比較した。血漿レプチン、ＡＣＴＨおよびコルチコステロンレベルは、分散分析とフィッシャーＰＳＬＤ（ＦｉｓｈｅｒＰＳＬＤ）により比較した。Ｐ＜０．０５を有意とした。結果ストレスに対するＨＰＡＡ応答のレプチンによる阻害２時間の後肢の拘束は、ＡＣＴＨとコルチコステロンの両方の劇的な上昇により証明されるように、ＨＰＡＡＡを有意に刺激した（ｐ＜０．０５；表１）。２ μｇのマウスレプチンによる前処理は、ストレスに対する血漿コルチコステロン応答を有意に減衰させたが、血漿ＡＣＴＨとレプチン値は、ストレス負荷対照と異ならなかった。しかし高用量（４μｇ）では、血漿ΛＣＴＨとコルチコステロンの両方のストレス性刺激をブロックすることができた。ＨＰＡＡホルモンを測定した時点（注射の４時間後）の血漿レプチンレベルは、４μｇ用量でのみ有意に上昇した。表１．拘束ストレスに対するＨＰＡＡＡ応答のレプチンによる阻害 ^*拘束ストレス＋生理食塩水に比較したときｐ＜０．０５ＣＲＨ放出のレプチンによる阻害正常血糖に典型的なレベル（５．５mM）から重篤な低血糖に特徴的なレベル（１．１mM）への灌流媒体中のグルコース濃度の低下は、ＣＲＨ放出の強力かつ濃度依存的な刺激因子であった（図３）。この抗原投与期間の刺激された積分放出は、３４±３．１pg／２時間（ｎ＝１４）であり、同じ期間の基礎的積分放出［１４．４±１．６pg／２時間（ｎ＝５）］より有意（ｐ＜０．０５）に大きかった。このような刺激された放出は、レプチンにより用量依存的に阻害された（図２、表２）。積分ＣＲＨ分泌は、３０mMレプチンを加えたとき１．１mMグルコースの存在下で、刺激していない（５．５mMグルコース）条件下で測定した分泌と異ならず（ｐ＞０．０５）、検出限界（８pg ＣＲＨ／２時間）に近かった。表２．低血糖刺激ＣＲＨ放出のレプチンによる阻害値は、３〜１４回の別々の実験（ｎ）の平均±標準誤差（ＳＥＭ）を表す。本発明を種々の具体的な材料、方法および例を参照することにより説明および例示してきたが、本発明は特定の材料、材料の組合せ、およびその目的のために選択した方法に限定されないことを理解されたい。このような詳細の多くの変法は本発明に包含され、そして当業者には理解されるであろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 29/00 １０１Ｃ０７Ｋ 14/47 ＺＮＡ // Ｃ０７Ｋ 14/47 ＺＮＡＡ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者クラフト，リベイ，エス. アメリカ合衆国，インディアナ，インディアナポリス，キオワドライブ 10325 (72)発明者カロ，ジョセ，エフ. アメリカ合衆国，インディアナ，カーメル，ヘザーストーンプレース 12414 (72)発明者スリーカー，ロウレンス，ジェイ. アメリカ合衆国，インディアナ，カーメル，レクシントンボウルバード 28

Claims

【特許請求の範囲】 1. 視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸の活性を変更するのに有効な量のレプチン受容体リガンドを、治療を必要とする哺乳動物に投与することからなる、視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸の調節方法。 2. レプチン受容体リガンドはレプチン受容体アゴニストである、請求の範囲第１項に記載の方法。 3. レプチン受容体アゴニストはヒトＯＢタンパク質である、請求の範囲第２項に記載の方法。 4. レプチン受容体アゴニストは配列番号１のアミノ酸配列を有する、請求の範囲第２項に記載の方法。 5. 請求の範囲第４項に記載の方法であって、２８位のＸａａは、Ｇｌｎであるかまたは存在せず；該タンパク質は、少なくとも１つの下記の置換を有する：４位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；７位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；２２位のＡｓｎは、ＧｌｎまたはＡｓｐで置換されている；２７位のＴｈｒは、Ａｌａで置換されている；２８位のＸａａは、Ｇｌｕで置換されている；３４位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；５４位のＭｅｔは、メチオニンスルホキシド、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている；５６位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；６２位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；６３位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；６８位のＭｅｔは、メチオニンスルホキシド、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている；７２位のＡｓｎは、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐで置換されている；７５位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；７７位のＳｅｒは、Ａｌａで置換されている；７８位のＡｓｎは、ＧｌｎまたはＡｓｐで置換されている；８２位のＡｓｎは、ＧｌｎまたはＡｓｐで置換されている；９７位のＨｉｓは、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、またはＰｒｏで置換されている；１００位のＴｒｐは、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、またはＬｅｕで置換されている；１０１位のＡｌａは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、またはＶａｌで置換されている；１０２位のＳｅｒは、Ａｒｇで置換されている；１０３位のＧｌｙは、Ａｌａで置換されている；１０５位のＧｌｕは、Ｇｌｎで置換されている；１０６位のＴｈｒは、ＬｙｓまたはＳｅｒで置換されている；１０７位のＬｅｕは、Ｐｒｏで置換されている；１０８位のＡｓｐは、Ｇｌｕで置換されている；１１１位のＧｌｙは、Ａｓｐで置換されている；１１８位のＧｌｙは、Ｌｅｕで置換されている；１３０位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；１３４位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている；１３６位のＭｅｔは、メチオニンスルホキシド、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、またはＧｌｙで置換されている；１３８位のＴｒｐは、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＳｅｒＮＴｈｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、またはＬｅｕで置換されている；または１３９位のＧｌｎは、Ｇｌｕで置換されている、上記方法。 6. レプチン受容体リガンドはレプチン受容体アンタゴニストである、請求の範囲第１項に記載の方法。 7. レプチン受容体リガンドは約０．００１〜１００mg／kg体重／用量の量で投与される、請求の範囲第１項に記載の方法。 8. レプチン受容体リガンドは、経口、静脈内、皮下、局所的、経皮、筋肉内または腹腔内に投与される、請求の範囲第１項に記載の方法。 9. レプチン受容体リガンドは経口投与される、請求の範囲第１項に記載の方法。 10．組成物は静脈内投与される、請求の範囲第１項に記載の方法。 11．レプチン受容体リガンドは、薬剤学的に許容される担体をさらに含む薬剤組成物の形で投与される、請求の範囲第１項に記載の方法。 12．視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸に及ぼす内因性レプチンの活性を抑制するのに有効な量のレプチン受容体アゴニストに対する特異抗体を、治療を必要とする哺乳動物に投与することからなる、視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸の調節方法。 13．血漿グルココルチコイドレベルを低下させるのに有効な量のレプチン受容体アゴニストを投与することからなる、高コルチコイド血症の治療方法。 14．血漿グルココルチコイドレベルを上昇させるのに有効な量のレプチン受容体アンタゴニストを投与することからなる、低コルチコイド血症の治療方法。 15．血漿グルココルチコイドレベルを上昇させるのに有効な量の特異的抗レプチン抗体を投与することからなる、低コルチコイド血症の治療方法。 16．血漿グルココルチコイドレベルを低下させるのに有効な量のレプチン受容体アゴニストを投与することからなる、クッシング症候群の治療方法。 17．視床下部−下垂体−副腎−脂肪軸の活性を変更するのに有効な量のレプチン受容体リガンドとその薬剤学的に許容される担体とを含む、視床下部−下垂体 −副腎−脂肪軸を調節するための薬剤組成物。 18．レプチン受容体リガンドはレプチン受容体アゴニストである、請求の範囲第１７項に記載の方法。 19．レプチン受容体リガンドはレプチン受容体アンタゴニストである、請求の範囲第１７項に記載の方法。