JP2001507578A

JP2001507578A - 白血病関連遺伝子

Info

Publication number: JP2001507578A
Application number: JP54705998A
Authority: JP
Inventors: バレン，ニコラバン; クーリー，ピエール，ジェイ．; デスメ，シャルル; ルカ，ソフィー; ブーン−ファルール，ティエリー
Original assignee: Ludwig Institute for Cancer Research Ltd
Current assignee: Ludwig Institute for Cancer Research New York
Priority date: 1997-04-25
Filing date: 1998-04-22
Publication date: 2001-06-12
Also published as: US5879892A; AU7130798A; US6130052A; WO1998049299A1; ZA983487B; EP0977849A1; US6271019B1

Abstract

(57)【要約】本発明は、フラグメント及び生物学的に機能的なそれらの誘導体を含む、白血病関連遺伝子を記載する。またそのような遺伝子によりコードされるポリペプチド及びそれらの断片、及びそれらに関連する抗体も含まれる。プレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1遺伝子産物の発現により特徴付けられる診断及び治療条件のための方法及び生産物をも提供する。

Description

【発明の詳細な説明】白血病関連遺伝子技術分野本発明は、白血病において発現している核酸分子及びコードされているポリペプチドに関する。この核酸分子とコードされるポリペプチドは、とりわけ診断及び治療用途に有用である。発明の背景ガン細胞をその対応する正常細胞から区別するフェノタイプ変化は、通常、細胞のゲノムへの１又は２以上の変化の結果による。腫瘍細胞中では発現しているが、対応する正常細胞では発現していない遺伝子は、“腫瘍特異的”遺伝子と呼ぶことができる。これらの腫瘍特異的遺伝子は、腫瘍フェノタイプのためのマーカーである。腫瘍特異的遺伝子の発現は、腫瘍形成の過程における本質的な現象でもある。典型的には、ホストは、正常の非腫瘍形成細胞において発現されていない腫瘍特異的遺伝子を、異物として認識する。従って、腫瘍特異的遺伝子の発現は、ホストによる腫瘍細胞に対する免疫応答を引き起こす。また、腫瘍特異的遺伝子は、免疫応答を引き起こすことなく、いくつかの組織内で正常細胞で発現され得る。そのような組織内では、遺伝子の発現及び／又は細胞表面上のタンパク産物の通常に免疫学的に認識可能なフラグメントの存在は、免疫系がこれらの免疫学的な特権組織内の細胞を“見ない”ので、免疫応答を引き起こすことができない。免疫学的な特権組織の例は、脳及び睾丸を含む。遺伝子の腫瘍特異的発現の発見は、腫瘍細胞のような細胞の識別の手段を提供する。診断用化合物は、腫瘍特異的遺伝子を基本とすることができ、そして腫瘍細胞の存在と場所を同定するために使用することができる。さらに、腫瘍特異的遺伝子が腫瘍フェノタイプ(例えば無制御な増殖又は転移)に寄与する場合には、腫瘍特異的遺伝子は、そのような遺伝子発現を減少させるか、又は実質的に除去し、その結果、特定の腫瘍特異的遺伝子の発現に依存するフェノタイプの態様を減少させるか、又は実質的に除去するアンチセンスのような治療薬を提供するために使用することができる。以前から知られているように、腫瘍特異的遺伝子のポリペプチド産物は、ホストの免疫監視のターゲットとなることができ、腫瘍特異的遺伝子産物に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球の１又は２以上のクローンの選択及び増殖を引き起こす。この現象の例には、以下に詳述するように、MAGEファミリーの遺伝子群、チロシナーゼ遺伝子、Melan-A遺伝子、BAGE遺伝子、GAGE遺伝子、RAGEファミリーの遺伝子群、PRAME遺伝子及び脳グリコーゲンホスホリラーゼ遺伝子によりコードされるタンパク及びそれらのフラグメントが含まれる。従って、遺伝子の腫瘍特異的発現は、そのような遺伝子が、異物として免疫系により認識されるであろうタンパクをコードすることができることを示唆しており、そしてこのため腫瘍拒絶のためのターゲットを提供する。そのような遺伝子は、そのような遺伝子及びタンパクを発現している腫瘍に対する免疫系の応答の増強のための治療薬を製造するために使用することができる“腫瘍拒絶抗原前駆体”、又はTRAPをコードする。異物又は外来物質を認識し、そして応答するほ乳動物の免疫系のプロセスは、複雑なプロセスである。免疫系の重要なファセットは、T細胞応答である。この応答は、T細胞が、ペプチドとヒト白血球付随抗原("HLA")又は主要組織適合性遺伝子複合体("MHCs")と呼ばれる細胞表面分子との複合体を認識し、それと相互作用することを必要とする。該ペプチドは、HLA/MHC分子を提示する細胞により切断される、より大きな分子に由来する。この点については、Male等によるAdvanc ed Immunology(J．P．Lipincott Company，1987)、特に６章から10章を参照されたい。T細胞とHLA／ペプチドの複合体の相互作用は厳密であり、HLA分子とペプチドの特定の組み合わせに対して特異的なＴ細胞を必要とする。特異的Ｔ細胞が存在しない場合には、そのパートナー複合体が存在したとしてもＴ細胞応答は起こらない。同様に、特異的複合体が存在しないが、T細胞が存在する場合にも応答は起こらない。そのメカニズムは、自己免疫疾患、細胞の異常に対する応答における、及び外部物質に対する免疫システムの応答にも関与する。タンパクが、 HLA結合ペプチドに切断されるメカニズムに焦点を当てた多くの研究がなされてきた。この点に関しては、Barinaga，Science 257:880，1992;Fremont et al.，Scienc e 257:919，1992;Matsumura et al.，Science 257:927，1992;Latron et a l.,Science 257:964，1992を参照されたい。細胞の異常を認識するT細胞によるメカニズムは、癌にも関連する。例えば199 2年５月22日に出願され、1992年11月26日に公開され、引用により本開示に取り込まれるPCT出願PCT/US/92/04354には、ペプチドに切断され、順次、細胞表面に提示され、特異的CTLにより腫瘍細胞の溶解を導くことができる遺伝子のファミリーが開示されている。該遺伝子は、“腫瘍排除抗原前駆体”又は“TRAP”分子をコードするといわれ、そしてこれらから誘導されるペプチドは、“腫瘍排除抗原”又は“TRAs”と呼ばれる。このファミリーの遺伝子群のさらなる情報に関しては、Traversari等によるJ．Exp．Med．176;1453-1457 1992;van der Bruggen 等によるScience 254:1643，1991;De Plaen等によるImmunogenetics 40:360-369 ,1994を参照されたい。又1991年12月12日に出願された米国特許出願第807,043号、米国特許第5,342,774号も参照されたい。引用により本開示に取り込まれる、米国特許出願第938,334号、米国特許5,405 ,940号には、HLA-A1分子により提示されるノナペプチドが教示されている。特定のHLA分子に対する特定のペプチドの特異性が知られている場合、あるHLA分子に結合し、他のHLA分子に結合しない特定のペプチドを知ることができる。これは、異なる個体が、異なるHLA表現型を有することから重要である。結果として、ある特異的HLA分子のパートナーになるような特定のペプチドの同定は診断及び治療的用途を有するものの、その特定のHLA表現型を有する個体にのみ意味があることになる。細胞の異常は、１つの特定のHLA表現型に拘束されないので、この分野ではさらなる研究が必要であり、またターゲットセラピーは、組織における異常細胞の表現型についての知識を必要としている。 1993年１月22日に出願され、引用により取り込まれる米国特許出願第008,446 号では、MAGE-1発現産物が第二のTRAに切断されるという事実が開示されている。この第二のTRAは、HLA-C^*1601としても知られるHLA-Cw16分子により提示される。この開示は、得られたTRAPは複数のTRAを生じることを示している。 1992年12月22日に出願され、ここに引用により取り込まれる米国特許出願第 994,928号では、チロシナーゼが、腫瘍排除抗原前駆体として、記載されている。この文献は、いくつかの正常細胞(例えばメラノサイト)により産生される分子が、HLA-A2分子により提示される腫瘍排除抗原を生成するように、腫瘍細胞中で切断されることを開示している。そのすべてが引用によりここに取り込まれる、米国特許出願第08/032,978号、米国特許5,620,886号では、チロシナーゼから誘導されない、第二のTRAがHLA-A2 分子により提示されていることを教示している。該TRAは、TRAPから誘導されるが、公知のMAGE遺伝子によりコードされていない。この開示は、特定のHLA分子は異なる源から誘導されるTRAを提示することができることを示している。 “BAGE腫瘍排除抗原前駆体をコードする単離された核酸分子”という名称の米国特許出願第079,110号、現在の米国特許5,571,711号及び1994年２月15日に出願され、“MHC分子HLA-C-クローン10と複合体を形成する単離されたペプチド及びそれらの使用”という名称で、引用によりその全ての開示がここに取り込まれる出願番号第196,630号には、“BAGE”前駆体と呼ばれる関連のない腫瘍排除抗原が記載されている。TRAがTRAPから誘導されることも記載されている。それらはM HC分子HLA-C-クローン10と複合体を形成する。 1993年７月22日に出願され、“GAGE腫瘍排除抗原前駆体をコードする単離された核酸分子”という名称の米国特許出願第096,039号及び“GAGE腫瘍排除抗原前駆体の発現を同定することにより疾病を診断するための方法”という名称で、引用によりその全開示がここに取り込まれる、出願番号第250,162号、米国特許第5 ,610,013号では、“GAGE”前駆体と呼ばれる他の関連しない腫瘍排除抗原前駆体が記載されている。GAGE前駆体は、BAGE又はMAGEファミリーと関連しない。 1995年３月21日に出願され、“RAGE腫瘍排除抗原前駆体”という名称で、その全てが引用によりここに取り込まれる米国特許出願08/408,015号では、前記遺伝子のいずれからも誘導されない他のTRAPを教示している。該TRAPは、RAGEと呼ばれる。1995年９月20日に出願され、“HLA-B7分子と複合体を形成する単離された RAGE-1由来のペプチド及びその使用”という名称であり、引用によりここに取り込まれる米国特許出願第08/530,015号では、RAGEファミリーの遺伝子から誘導されたTRAは、HLA-B7により提示されることを教示する。この開示は、異なる源からさらなるTRAPs及びTRAsを誘導することができることを示している。引用によりその全てがここに取り込まれる米国特許出願第08/253,503号、現在の米国特許第5893334号“HLA-B44によって提示される抗原に切断される腫瘍排除抗原前駆体をコードする、単離された核酸分子”には、前記遺伝子のいずれにも由来しない他のTRAPが教示されている。TRAPをコードするこの遺伝子は、MUM-1と呼ばれる。この出願には腫瘍排除抗原、LB-33Bが記載されている。 1995年１月17日に出願され、“HLA分子により提示される抗原に切断される腫瘍排除抗原前駆体をコードする単離された核酸分子及びそれらの使用”という名称であって、その全てが引用によりここに取り込まれる、米国特許出願第08/373 ,636号には、、LB33から誘導され、そしてHLA-B13、HLA-Cw6、HLA-A28及びHLA-A 24により提示される他のTRAPが教示されている。 1996年４月11に公開され、“腫瘍排除抗原前駆体DAGE及びそれらの使用”という名称であり、その全てが引用によりここに取り込まれるPCT出願公開WO96/1057 7には、いかなる前記の遺伝子にも由来しない他のTRAPが、教示されている。該T RAPは、DAGEと呼ばれていたが、現在ではPRAMEと呼ばれている。腫瘍排除抗原は、HLA-A24により提示されることが明細書中に記載されている。 1995年６月７日に出願され、“単離された核酸分子、MHC分子HLA-A2と複合体を形成するペプチド及びそれらの使用”という名称であり、その全てが引用によりここに取り込まれる、米国特許出願第08/487,135号では、いかなる前記の遺伝子からも由来しないこと他のTRAPを教示している。該TRAPは、NAGと呼ばれる。種々のTRAがNAGから誘導され、HLA-A2により提示されることを本明細書中で教示している。 “MAGE-Xpファミリーのメンバーである単離された核酸分子及びそれらの使用 ”という名称であり、その全てが引用によりここに取り込まれる米国特許出願第 08/403,388号、現在の米国特許第5,587,289号では、いかなる前記の遺伝子にも由来しない３つのTRAPが、教示されている。これらのTRAPは、MAGE-Xp2、MAGE-X p3及びMAGE-Xp4と呼ばれる。上記の文献、特許、特許明細書により示される仕事は、大部分が、MAGEファミリーの遺伝子、BAGE遺伝子、GAGE遺伝子及びRAGEファミリーの遺伝子に関する。 1996年６月25に出願され、“脳グリコーゲンホスホリラーゼ癌抗原”という名称であり、その全てが引用によりここに取り込まれる米国特許出願第08/672,351 号には、いかなる前記の遺伝子にも由来しない他のTRAPが教示されている。この TRAは、脳内及びレチナール色素上皮で正常に発現している遺伝子であった。脳グリコーゲンホスホリラーゼ遺伝子が、メラノーマ細胞中で発現され、そして腫瘍排除抗原及びそれらの前駆体をコードしていることが見出された。ここにさらなる遺伝子が、白血病細胞中に、腫瘍に関連するパターンで同様に発現していることが見出された。腫瘍排除抗原前駆体をコードすると信じられているこれら３つの遺伝子は、一般に白血病関連遺伝子と呼ばれる。これらの遺伝子は、MAGEファミリーの遺伝子、BAGE遺伝子、GAGE遺伝子、RAGEファミリーの遺伝子、LB33/MUM-1遺伝子、NAG 遺伝子、MAGE-Xpファミリーの遺伝子又はグリコーゲンホスホリラーゼ遺伝子に対してホモロジーを示さない。遺伝子のうち２つは、白血病関連の細胞で発現することが今まで知られていなかった、公知の遺伝子である。遺伝子の１つは、未知の遺伝子である。従って本発明は、特定の白血病細胞で特異的に発現している遺伝子、そのような遺伝子によりコードされている腫瘍排除抗原前駆体に関し、並びに関連する分子及びこれらの種々の実体の応用にも関する。本発明は、以下の開示でさらに詳述される。発明の要約本発明は、白血病関連ポリペプチドをコードする単離された核酸を提供する。本発明はまた、これらの分子を含む発現ベクター及びこれらの分子でトランスフェクトしたホストセル、並びに白血病関連核酸分子によりコードされる単離されたポリペプチド及び単離されたポリペプチドのフラグメントにも関する。前記の分離された核酸分子及びポリペプチドは、白血病関連遺伝子の発現により特徴付けられる状態の診断又は治療に使用することができる。本発明の１つの側面によると、白血病関連核酸及び白血病関連ポリペプチドの発現により特徴付けられる疾病を診断する方法が提供される。該方法は、対象から単離された生物学的サンプルを、白血病関連核酸分子又はそれらの発現産物に特異的な試薬と接触させることを含む。いくつかの態様では、白血病関連核酸分子は、配列番号：1、配列番号：3、配列番号：5、及び配列番号：7からなる群から選択される１つのヌクレオチド配列を有する分子に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。これらのいくつかの態様では、白血病関連核酸は、任意に白血病関連ポリペプチドをコードする。他の態様では、該試薬は、抗体、細胞傷害性Tリンパ球、ポリペプチド、及びそれらに類するもののように、白血病関連遺伝子に対して選択的に結合する結合試薬である。該方法は、疾病の同定として、試薬と核酸分子又はそれらの発現産物との相互作用又は結合を同定することをさらに含む。好適な態様では、該試薬は、配列番号：1、配列番号：3 、配列番号：5、配列番号：7、それらのフラグメント、及びそれらの相補鎖からなる群から選択される１つのヌクレオチド配列を有する分子を含む核酸である。いくつかの態様では、該試薬と該核酸分子との相互作用は、該核酸分子の少なくとも一部を増幅することにより同定される。他の好ましい態様では、白血病関連ポリペプチドは、配列番号：2、配列番号：4、配列番号：6、配列番号：8及びそれらのフラグメントからなる群から選択される１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。特に好適な態様では、白血病関連ポリペプチドに結合する試薬は、抗体である。前記態様では、生物学的サンプルは、好ましくは非胎児脳組織、非肥満細胞組織、又は非胎児睾丸組織から分離される。前記態様のいくつかでは、白血病関連核酸及びポリペプチドは、前記配列の断片である。白血病関連ポリペプチドから誘導されるペプチドがHLA分子により提示され、そしてCTLにより認識されることができるという認識は、いくつかの疾病の診断を可能にする。従って本発明の他の側面によると、白血病関連ポリペプチドに由来する腫瘍排除抗原の発現により特徴付けられる疾病を診断するための方法を提供する。該方法は、対象から分離された生物学的サンプルを、白血病関連遺伝子に由来する腫瘍排除抗原に特異的な試薬と結合させることを含む。そして該方法は、疾病の同定として、試薬と白血病関連ポリペプチドに由来する腫瘍排除抗原との相互作用を同定することを提供する。いくつかの態様では、白血病関連ポリペプチドに由来する腫瘍排除抗原は、配列番号：2、配列番号：4、配列番号：6 又は配列番号：8のフラグメントのアミノ酸配列を含む。好適な態様では、腫瘍排除抗原は、前記配列の７から100の間の連続アミノ酸を含む。好ましくは、生物学的サンプルは、非胎児脳、非肥満細胞又は非胎児睾丸組織から分離される。ある態様では、試薬は抗体である。上記の方法は、白血病関連TRAの存在に基づく、疾病の診断を提供する。本発明の他の側面は、HLA分子と複合体を形成する白血病関連ポリペプチドに由来する腫瘍排除抗原の発現により特徴付けられる疾病を診断する方法を提供する。該方法は、疾病の同定として、対象から単離された生物学的サンプルを、複合体を結合する試薬と接触させ、そして複合体と試薬の間の結合を同定することを含む。一態様では、白血病関連ポリペプチドに由来する腫瘍排除抗原は、配列番号： 2、配列番号：4、配列番号：6又は配列番号：8のフラグメントのアミノ酸を含むペプチドである。好適な態様では、腫瘍排除抗原は、前記配列の７から100の間の連続アミノ酸を含む。好ましくは、生物学的サンプルは、非胎児脳、非肥満細胞、又は非睾丸組織から分離される。ある態様では、試薬は抗体である。疾病の診断に加えて、いくつかの疾病の治療も望ましい。本発明の他の側面によると、白血病関連核酸又はポリペプチドの発現により特徴付けられる疾病を有する対象を治療するための方法を提供する。該方法は、疾病を緩和するために、白血病関連核酸又はポリペプチドの発現を減少させる試薬を、対象に投与することを含む。試薬は適用量で投与される。いくつかの態様では、白血病関連核酸又はポリペプチドは、腫瘍排除抗原であり、そして該方法は、疾病を緩和するのに十分な、HLAと配列番号：1、配列番号：3、配列番号：5及び配列番号：7からなる群から選択される１つの核酸分子によりコードされる白血病関連ポリペプチドに由来する腫瘍排除抗原の複合体の存在を、対象の中で選択的に増殖させる試薬の量を対象に投与することを含む。好ましくは白血病関連ポリペプチドから誘導される腫瘍排除抗原は、配列番号：2、配列番号：4、配列番号：6又は配列番号：8のポリペプチドに由来するペプチドである。他の方法は、疾病を緩和するために十分な量の自己細胞傷害性T細胞を、そのような治療が必要な対象に投与することを含み、ここで自己細胞傷害性T細胞は、HLA分子と白血病関連ポリペプチドに由来する腫瘍排除抗原の複合体に特異的である。好ましくは、複合体はHLA と上記のようないくつかの白血病関連ペプチドから形成される。他の態様では、白血病関連核酸又はポリペプチドは核酸であり、そして試薬はアンチセンス核酸である。アンチセンス核酸は、好ましくは配列番号：1、配列番号：3、配列番号：5、配列番号：7及びそれらのフラグメントからなる群から選択される白血病関連遺伝子に対してハイブリダイズする。本発明の他の側面によると、組成物が提供される。組成物は、配列番号：1、配列番号：3、配列番号：5、配列番号：7及びそれらのフラグメントからなる群から選択される１つの白血病関連核酸に結合するアンチセンス核酸を含む。アンチセンス核酸は、白血病関連遺伝子の発現を減少させる。組成物は、医薬的に受容可能な担体をも含む。他の側面における本発明は、白血病関連ポリペプチド前駆体の発現の存在を同定するためのキットを含む。そのようなキットは、分離したコンテナに単離された上記の核酸の１又は２以上を使用し、そして単一パッケージに詰められる。そのようなキットの１つにおいて、単離された核酸分子のペアが提供され、ペアのそれぞれは、配列番号：1の12-32ヌクレオチド連続セグメント及びそれらの相補鎖、配列番号：3の12-32ヌクレオチド連続セグメント及びそれらの相補鎖、配列番号：5の12-32ヌクレオチド連続セグメント及びそれらの相補鎖、配列番号：の 12-32ヌクレオチド連続セグメント及びそれらの相補鎖であり、該連続セグメントはオーバーラップしていない。好ましくは、単離された核酸分子のペアは、配列番号：1の核酸配列、配列番号：3の核酸配列、配列番号：5の核酸配列、配列番号：7の核酸配列、遺伝コードの縮重による上記のコドン配列とは異なる核酸分子及びそれらの相補鎖からなる群から選択される分子に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする単離された核酸分子の少なくとも一部を選択的に増幅するために、構成され、そして配列される。いくつかの態様では、単離された核酸のペアはPCRプライマーである。好ましくはプライマーの一方は、配列番号：1の連続セグメントであり、そしてプライマーの他方は、配列番号：1の他の連続セグメントの相補鎖である。他の好適態様では、プライマーの一方は、配列番号：3の連続セグメントであり、そしてプライマーの他方は、配列番号:３の他の連続セグメントの相補鎖である。さらに他の態様では、プライマーの一方は、配列番号：5の連続セグメントであり、そしてプライマーの他方は、配列番号：5の他の連続セグメントの相補鎖である。さらに他の好適な態様では、プライマーの一方は、配列番号：7の連続セグメントであり、そしてプライマーの他方は、配列番号：7の他の連続セグメントの相補鎖である。他の側面における本発明は、前記パラグラフの試薬及び／又は細胞を含む医薬製剤を提供する。一態様では、製剤は、医薬的に許容される希釈剤、担体又は補助剤を伴うプレプロTR H、トリプターゼ-L、Oct-1又はそれらのフラグメントを、医薬的に適用量で含む。他の態様では、製剤は、HLA分子とプレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-1から誘導される腫瘍排除抗原の複合体に特異的な自己細胞傷害性Ｔ細胞を、医薬的に適用量で含む。本発明の他の側面によると、薬剤の製造における単離されたプレプロTRH、トリプターゼ-L、Oct-1又はそれらのフラグメントの使用を提供する。本発明の他の側面によると、癌の治療のための薬剤の製造において、アンチセンスを含む、単離されたプレプロTRH、トリプターゼ-L、Oct-1又はそれらのフラグメントの使用が提供される。本発明のさらに他の側面によると、単離された核酸分子が提供される。該分子は、配列番号：3又は配列番号：5からなる群から選択される１つのヌクレオチド配列を有する核酸に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。単離された核酸分子は、白血病関連ポリペプチド前駆体であり、そしてトリプターゼ-L白血病関連ポリペプチドをコードする。本発明は、遺伝コードの縮重に対するコドン配列について、前記の単離された核酸とは異なる核酸分子を包含する。本発明は、前記核酸の相補鎖をも包含する。好適な態様では、単離された核酸は、配列番号：3又は配列番号：5の核酸を含む。特に好適な態様では、単離された核酸分子は、前記核酸のコード領域を含む。本発明の他の側面によると、単離された核酸分子は、配列番号：3の487-1499 ヌクレオチドのユニークフラグメント又は長さが12から1012の間の配列番号:5のヌクレオチド、長さが12から109の間のヌクレオチドの配列番号：5の1665-1774 ヌクレオチドのユニークフラグメント及びそれらの相補鎖からなる群から選択される１つの分子を含むものを提供する。好適な態様では、ユニークフラグメントは、前記の少なくとも14、15、16、17、18、20又は22連続ヌクレオチドである。他の態様では、単離された核酸分子は、前記の12から32の間のヌクレオチドからなる。本発明のさらに他の側面によると、本発明は、発現ベクター、及び上記の核酸分子を含むそのような発現ベクターでトランスフォーム又はトランスフェクトされたホストセルを含む。発現ベクターは、HLA分子をコードする核酸分子を任意に含む。当然、HLAをコードする核酸分子を、分離発現ベクター中に含んでいることもできる。前記発現ベクターでトランスフォーム又はトランスフェクトされたホストセルも提供する。本発明の他の側面によると、単離されたトリプターゼ-Lポリペプチドは、配列番号：3の核酸配列、配列番号：5の核酸配列、遺伝コードの縮重により前記の核酸分子から誘導される核酸分子、及び前記核酸分子のいずれかの相補鎖を有する分子に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるものを提供する。本発明のさらに他の側面によると、単離されたポリペプチドは、配列番号：4 のユニークフラグメント又は長さが９から189の間の配列番号：6のアミノ酸を含むものを提供する。好ましくは単離されたポリペプチドのユニークフラグメントは、ポリペプチド結合試薬に対して結合する。他の好適態様では、単離されたポリペプチドのユニークフラグメントは、抗体又は細胞傷害性Tリンパ球に対して結合する。本発明はまた、トリプターゼ-Lタンパク又はそれらのフラグメントに選択的に結合する単離されたポリペプチドを提供する。単離された結合ポリペプチドは、抗体及び抗体のフラグメント(例えばFab、F(ab)₂、Fd及び本発明のトリプターゼ -Lタンパクに選択的に結合するCDR3領域を含む抗体フラグメント)を含む。単離された結合ポリペプチドは、モノクローナル抗体を含む。上記のような白血病関連ポリペプチド、特に白血病関連ポリペプチドに由来する腫瘍排除抗原をコードするいずれかの核酸に関連して、本発明は、遺伝コードの縮重によってのみコドン配列において単離された核酸と異なる縮重核酸又は前記核酸のいずれかの相補鎖をも包含する。本発明は、上記分子の全ての機能的誘導体及び均等体をも包含する。本発明のこれらの課題及び他の課題は、発明の詳細な説明において、さらに詳細に記載されるであろう。図面の簡単な説明図１は、プレプロTRHの配列を示す簡略図である。図２は、トリプターゼ-Lクローンの配列を示す簡略図である。図３は、トリプターゼ-LクローンとトリプターゼＩ遺伝子の関連を示す簡略図である。図４は、Oct-T1/SIAX DP2-64 cDNAクローンを示す簡略図である。図５は、Oct-T1/SIAX DP2-64のCHM 329-2/15クローンを示す簡略図である。図６は、Oct-T1/SIAX DP2-64のCHM 329-2/15クローンの配列を示す簡略図である。配列の簡単な説明配列番号：1は、プレプロTRH遺伝子のヌクレオチド配列である。配列番号：2は、プレプロTRHによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列である。配列番号：3は、トリプターゼ-L遺伝子クローンNVB352/1のヌクレオチド配列である。配列番号：4は、トリプターゼ-L遺伝子クローンNV352/1によりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列である。配列番号：5は、トリプターゼ-L遺伝子クローンNVB352/3のヌクレオチド配列である。配列番号：6は、トリプターゼ-L遺伝子クローンNV352/3によりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列である。配列番号：7は、SIAX DP2-64(Oct-T1)遺伝子のヌクレオチド配列である。配列番号：8は、SIAX DP2-64(Oct-T1)遺伝子によりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列である。配列番号：9は、プレプロTRHの特異的PCR増幅のためのセンスプライマーである。配列番号：10は、プレプロTRHの特異的PCR増幅のためのアンチセンスプライマーである。配列番号：11は、トリプターゼ-Lの特異的PCR増幅のためのセンスプライマーである。配列番号：12は、トリプターゼ-Lの特異的PCR増幅のためのアンチセンスプライマーである。配列番号：13は、SIAX DP2-64(Oct-T1)の特異的PCR増幅のためのセンスプライマーである。配列番号：14は、SIAX DP2-64(Oct-T1)の特異的PCR増幅のためのアンチセンスプライマーである。配列番号：15は、β-アクチンの特異的PCR増幅のためのセンスプライマーである。配列番号：16は、β-アクチンの特異的PCR増幅のためのアンチセンスプライマーである。発明の詳細な説明以下の例は、ポリペプチドをコードし、そして悪性白血病で特異的に発現している、すなわち白血病関連遺伝子である核酸分子の単離を示す。これらの単離された核酸分子は、プレプロTRH、トリプターゼ-L及びOct-T1をコードする核酸分子を含む。特にトリプターゼ-L核酸は、上記の配列をコードしている以前に開示されたトリプターゼ-Lとは異なる。従って、本発明の１つの側面は、配列番号： 3又は配列番号:5に記載のヌクレオチド配列の全て又はユニーク部分を含む単離された核酸である。この配列、及び他の白血病関連遺伝子は、MAGE、BAGE、GAGE 、RAGE、LB33/MUM-1、PRAME、NAG、MAGE-Xp又は脳グリコーゲンホスホリラーゼ配列のような、それらと引用文献中に記載された遺伝子配列を比較すればわかるように、以前より認識されていた腫瘍排除抗原前駆体をコードしない。従って、本発明は、プレプロTRH、トリプターゼ-L及びOct-T1核酸、コードされるポリペプチド、機能的修飾体及び前記のものの誘導体、前記のものの有用なフラグメント、並びにそれらの関連する治療及び診断を含む。本発明の１つの側面によると、白血病関連核酸及びポリペプチドの発現により特徴付けられる疾病を診断するための方法が提供される。該方法は、生物学的サンプル中の白血病関連核酸又はポリペプチドの存在を同定するために、対象から分離された生物学的サンプルを白血病関連核酸又はポリペプチドに特異的な試薬と接触させることを含む。ここで使用される、“接触させる”とは、生物学的サンプル中に存在する白血病関連核酸又はポリペプチドと試薬との間の特異的な相互作用を起こさせるために、試薬に対して十分近くに生物学的サンプルを配置し、例えば濃度、温度、時間、イオン強度を適切な条件下に置くことを意味する。一般に、試薬を生物学的サンプルと接触させるための条件は、分子とその同族( 例えばタンパクとその同族リガンド、抗体とその同族タンパク抗原、核酸とその同族相補的配列)の間の特異的な相互作用を促進するために、当業者により周知の条件である。分子とその同族物の特異的な相互作用を促進するための例示的な条件は、Low等により公開された、米国特許第5,108,921号に記載されている。該生物学的サンプルは、インビボ又はインビトロのいずれの状態におかれていてもよい。例えば生物学的サンプルは、インビボの造血組織であることができ、そして白血病関連核酸又はペプチドに特異的な試薬は、造血組織中のそのような分子の存在を同定ために使用することができる(例えば白血病関連遺伝子産物が発現している造血組織の部位を画像化するため)。一方、生物学的サンプルをインビトロ(例えば血液サンプル、骨髄生検、組織抽出物)の状態であってもよい。特に好適な態様では、生物学的サンプルは、細胞含有サンプルであることができ、より好ましくは造血細胞を含有しているサンプルである。また本発明の一部は、プレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1ポリペプチドをコードする核酸配列及び配列番号：1、配列番号：3、配列番号：5又は配列番号：7に記載のヌクレオチド配列それぞれからなる核酸分子に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列でもある。そのような核酸は、白血病関連ポリペプチド前駆体と呼ばれ、そしてDNA、RNA、デオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドの混合された構成であることができる。該白血病関連ポリペプチド前駆体は、合成非天然ヌクレオチドをも含む。従って本発明は、正常組織で以前に同定されているいくつかの他の白血病関連核酸を包含する。白血病関連核酸又はポリペプチドは、白血病及びリンパ腫のような悪性白血病細胞で特異的に発現されている。正常及び白血病細胞で核酸及び／又はポリペプチドの発現を同定するための種々の方法は、当業者に周知であり、そしてさらに以下に記載される。ここで使用される、白血病関連ポリペプチドは、タンパク、タンパクフラグメント及びペプチドを包含する。特に白血病関連ポリペプチドは、TRAPs及びTRAsを含む。ここでいう“ストリンジェントな条件(stringent condition)”という語は、当該技術で周知のパラメーターを意味する。より具体的にはここで使用されるストリンジェントな条件とは、ハイブリダイゼーションバッファー(3.5×SSC、0.0 2％フィコール、0.02％ポリビニルピロリドン、0.02％牛血清アルブミン、25mMN aH₂PO₄(pH7)、0.5％SDS、2mM EDTA)中、65℃でのハイブリダイゼーションを意味する。SSCは、0.15M塩化ナトリウム/0.15Mクエン酸ナトリウム、pH7であり;SDS は、ドデシル硫酸ナトリウムであり；そしてEDTAは、エチレンジアミン４酢酸である。ハイブリダイゼーション後、DNAを転写するメンブランを室温で２×SSCで洗浄し、そして65℃で0.1×SSC/0.1×SDSで洗浄する。SSCは、0.15M塩化ナトリウム/0.15Mクエン酸ナトリウム、pH7であり；SDSは、ドデシル硫酸ナトリウムであり；そしてEDTAは、エチレンジアミン４酢酸である。同程度のストリンジェントな条件となる、使用できる他の条件、試薬等がある (例えばMolecular Cloning:A Laboratory Manual，J．Sambrook等、eds.，Secon d Edition，Cold Spring Houbor Laboratory Press Cold Spring Harbor，New Y ork，1989又はCurrent Protcols in Molecular Biology，F．M．Ausubel等、eds .，John Wiley & Sons，Inc.，New Yorkを参照されたい)。当業者は、そのような条件に習熟しているであろう、したがってそれらはここでは示さない。しかしながら、当業者は、本発明のトリプターゼ-L核酸分子のホモログ及び対立遺伝子の明確な同定がなされる限り、条件を操作することができることが理解されよう。当業者は、そのような分子の発現に対し、細胞、好ましくは癌細胞、及びライブラリーをスクリーニングする方法に習熟しており、そのような分子は、次に、定法により単離され、関連する核酸分子の単離と核酸分子のシーケンスが続いて行われる。一般的にホモログ及び対立遺伝子は、典型的には白血病関連核酸のコーディング領域に対して、少なくとも40％のヌクレオチド同一性及び／又は少なくとも50 ％のアミノ酸同一性を有し、いくつかの例では、少なくとも50％のヌクレオチド同一性及び／又は少なくとも65％のアミノ酸同一性を有し、さらに他の例では少なくとも60％のヌクレオチド同一性及び／又は少なくとも75％のアミノ酸同一性を有するであろう。前記核酸のワトソン-クリック相補鎖も本発明に包含される。ここに開示された核酸は、標準的なハイブリダイゼーション法によるプレプロ TRH、トリプターゼ-L及びOct-T1遺伝子の発現を同定するために有用である。該核酸は、インビトロ又はインビボで白血病関連ポリペプチドを発現させるために使用することもできる。該核酸はまた、例えば抗体の製造のために有用なポリペプチドのフラグメントを製造するために使用することもできる。他の多くの用途は、当業者にとって自明であろう。トリプターゼ-Lファミリーメンバーのような関連遺伝子のスクリーニングでは、サザンブロットは、放射活性プローブと共に、前記条件を使用して行うことができる。核酸が最終的に転写されているメンブランを洗浄した後、メンブランを、放射活性シグナルを同定するためにＸ線フィルムに対しておくことができる。本発明は、天然材料中に存在するものに対して変更されたコドンを含む縮重核酸をも含む。例えばセリン残基は、TCA、AGT、TCC、TCG、TCT及びAGCコドンによりコードされる。６コドンのそれぞれは、セリン残基をコードすることについて均等である。従ってセリン残基を組み込むために、いかなるセリンをコードするヌクレオチドトリプレットを、インビトロ又はインビボでタンパク合成機器に採用させてもよいことは、一当業者にとっては自明であろう。同様に、他のアミノ酸残基をコードするヌクレオチド配列トリプレットは、CCA、CCC、CCG及びCCT( プロリンコドン)；CGA、CGC、CGG、CGT、AGA及びAGG(アルギニンコドン)；ACA、 ACC、ACG及びACT(スレオニンコドン)；AAC及びAAT(アスパラギンコドン)；及びA TA、ATC及びATT(イソロイシンコドン)を含むが、これに限定されない。他のアミノ酸残基は、多数のヌクレオチド配列により同様にコードされることができる。従って、本発明は、遺伝コードの縮重により、コドン配列中に生物学的に単離された核酸と異なる縮重核酸を包含する。本発明は、配列番号：1、配列番号：3、配列番号：5、配列番号：7又はそれらの相補鎖の単離されたユニークフラグメントを提供する。ユニークフラグメントは、より大きな核酸のための‘サイン’であるものである。例えば、その正確な配列が、ここで定義のようなトリプターゼ-L以外の分子中に見出されないことを保証するために十分な長さである。ユニークフラグメントは、ファミリーメンバーを識別するためのサザンブロットアッセイのプローブとして使用することができ、またはPCRを使用するような増幅アッセイで使用することができる。当業者にとって周知のように、200ヌクレオチド又はそれ以上のような大きなプローブはサザンブロットのようないくつかの使用のために好適であり、一方より小さなフラグメントはPCRのような用途のために好適であろう。ユニークフラグメントは、抗体を生成するため又は免疫アッセイ成分を生成するための融合タンパクを製造するために使用することができる。ユニークフラグメントは、さらに本発明の白血病関連核酸及びコードされるタンパクの発現を阻害するために、アンチセンス分子として使用することができ、特に以下により詳細に記載されるような治療目的に使用することができる。当業者により認識されるであろうように、ユニークフラグメントのサイズは、遺伝コードの保存性に依存する。従って、配列番号：1、配列番号：3、配列番号：5、配列番号：7及びそれらの相補鎖のいくつかの領域は、ユニークであるためにはより長いセグメントである必要があるであろう。一方、他の領域は典型的には、12から32の間のヌクレオチド(例えば12、13、14、15、16、17、18、19、20 、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31及び32ヌクレオチド長)の短い領域のみが必要であろう。当業者は、非-ファミリーメンバーから興味ある配列を選択的に区別するために、典型的にはユニークフラグメントの能力に基づいて、そのような配列を選択するための方法に精通している。フラグメントの配列を既知のデータベースのものと比較することが、必要なことのすべてであるが、インビトロ確認ハイブリダイゼーション及び配列分析を行うこともできる。特異的な増幅のために構成され、配列されたPCRプライマーのいかなるペアについても、例えばトリプターゼ-L核酸、トリプターゼ-L特異的プライマーを使用することができる。そのようなプライマーは、トリプターゼ-Lに選択的にハイブリダイズし、他のトリプターゼ核酸にハイブリダイズしない、トリプターゼ-Lの連続ストレッチである。そのような特異的プライマーは、トリプターゼ-Lのヌクレオチドの連続ストレッチのみに対して完全にハイブリダイズするが、トリプターゼ-L特異的プライマーが結合するヌクレオチドを有さないトリプターゼ遺伝子に対しても一部がハイブリダイズする。十分なPCRプライミング及びトリプターゼ-L識別のために、トリプターゼ-L特異的プライマーは、トリプターゼ-L以外のトリプターゼ遺伝子に対してその3’末端で全くハイブリダイズしないように構成し、配列すべきである。好ましくは非-識別の領域が、全長の少なくとも１から４ヌクレオチドであり、そしてトリプターゼ-Lプライマーの3’末端を形成する。そしてハイブリダイゼーションのキネティックは、5’末端でのハイブリダイゼーションを強く推奨する。この例では、3’開始PCR伸長は、5’及び3’末端両方が核酸にハイブリダイズする場合にのみ起こるであろう。トリプターゼ-Lの選択的増幅のためのプライマーは、好ましくはトリプターゼ-L以外のトリプターゼとより少ししかホモロジーを有さない配列番号：3の一部から選択される。そのような場合には、トリプターゼ-Lの選択的増幅は、１つのトリプターゼ-L特異的プライマーと１つの一般的にトリプターゼ類にハイブリダイズするプライマーで達成することができる。しかしながら、好ましくは両方のプライマーが、本明細書中に記載されているトリプターゼ-L特異的プライマーである。プライマーの例としては、配列番号：3から誘導された、それぞれ、配列番号：11及び配列番号：12を含む。他の例示的プライマーは、プライマーの5’末端からの1、2、3、 4、5又は６以上のヌクレオチドの付加又は欠失により上記のものと異なることができる。同様に、当業者は、プレプロTRH又はOct-T1 mRNA配列の選択的増幅のために配列番号：1又は配列番号：7のそれぞれのヌクレオチド配列からプライマーを選択することができる。例えばプレプロTRHに特異的なプライマーの例には、配列番号：1から誘導される配列番号：9及び配列番号：10が含まれる。Oct-T1に特異的なプライマーの例には、配列番号：７から誘導される配列番号：13及び配列番号：14が含まれる。トリプターゼ-Lの増幅については、プライマーは、それぞれのクローン(すなわち、配列番号：3か、又は配列番号：5の一部を増幅したもの)に特異的なもの、又は両方のクローン(すなわち、配列番号：3及び配列番号：5)を増幅するものをデザインすることができる。以下の例に示すように、プレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1に特異的なプライマーペアは、細胞及び組織中の遺伝子の発現を区別するために使用することができる。他の例示的なプライマーは、上記プライマーの5’末端から1、2、3、4、5又は６以上のヌクレオチドの付加又は欠失により上記のものと異なることができる。当業者は、特定の白血病関連遺伝子の選択的な増幅のための好適なプライマーを、慣用の実験のみで決定することができる。リガーゼ連鎖反応("LCR")及び他の方法のような、実質的にホモロジーの配列を区別できるさらなる方法は、当業者にとって自明であろう。核酸についてのここでの使用として、“単離された”という用語は、(I)例えばポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によるインビトロ増幅;(ii)クローニングによる組み換え産物；(iii)切断及びゲル分離によるような精製；又は(iv)例えば化学合成による合成を意味する。単離された核酸は、当該技術に周知の組み換えDNA 技術により、かなり操作することができるものである。従って、5’及び3’制限部位が公知であるベクター中に含まれるヌクレオチド配列又は開示されているポリメラーゼ連鎖反応(PCR)プライマー配列のためのヌクレオチド配列は、単離されたと考えられるが、天然ホスト中に天然状態で存在する核酸配列はそうではない。単離された核酸は、実質的に精製することができるが、その必要はない。例えばクローニング又は発現ベクター中の単離されている核酸は、純粋ではない、つまり、存在している細胞中の物質を非常にわずかなパーセンテージで含んでいるかもしれない。しかしながら、用語がここで使用されるように、当業者に周知の標準的なテクニックによりかなり操作されているので、そのような核酸は単離されている。本発明は、配列番号：2、配列番号：4、配列番号：6及び配列番号：8のユニークフラグメントを含む単離されたポリペプチドを提供する。そのようなポリペプチドは、例えばプレプロTRH、トリプターゼ-L及びOct-T1タンパクに関して、単独又は抗体を製造するための融合タンパクとして、免疫アッセイの成分として、又はHLA分子及び／又はCTLクローンの結合特異性を同定するために有用である。例えばトリプターゼ-Lタンパクのユニークフラグメントは、一般に核酸に関してされた上記の議論のようなユニークフラグメントの形態及び特徴を有する。当業者に認識されるであろうように、ユニークフラグメントのサイズは、フラグメントが保存タンパク領域の一部を構成しているかどうかのような要因に依存するであろう。従って、配列番号：4(又は配列番号：6)のいくつかの領域は、ユニークであるためにより長いセグメントを必要とするであろうし、一方、その他は典型的には５から12の間のアミノ酸(例えば5、6、7、8、9、10、11及び12アミノ酸長)のほんの短いセグメントを必要とするであろう。ポリペプチドのユニークフラグメントは、好ましくはポリペプチドの明確な機能的な能力を保持しているフラグメントである。ポリペプチドのユニークフラグメントに保持されることが可能な機能的な能力は、抗体との相互作用、他のポリペプチド及びそれらのフラグメントとの相互作用、核酸の選択的な結合、及び酵素活性である。腫瘍排除抗原は、HLA結合及び細胞傷害性Tリンパ球との相互作用の機能的な能力を保持している腫瘍特異的ポリペプチドのユニークフラグメントの例である。HLAクラスＩ分子により提示される腫瘍排除抗原は、典型的には長さが９アミノ酸であるが、8、９のペプチド及び10及び11以上のアミノ酸も、細胞傷害性Ｔリンパ球応答を引き起こすために効果的な程度にHLA及び細胞傷害性Ｔリンパ球と相互作用する能力を保持する(例えばVan den Eynde & Brichard,Cu rr．Opin．Immunol．7:674-681，1995;Coulie et al.,Stem Cells 13:393-403,1 995を参照されたい)。非ファミリーメンバーと興味ある配列を選択的に区別するために、典型的にはユニークフラグメントの能力に基づいて、ユニークアミノ酸配列を選択するための方法について、当業者はかなり精通している。フラグメントの配列と公知のデータベースのものとの比較は、典型的には完全に必要である。当業者は、保存的アミノ酸置換を、ポリペプチドの機能的に活性なホモログ、すなわちプレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1ポリペプチドの機能的な能力を保持しているホモログを、得るために、トリプターゼ-Lポリペプチド中に行うことができることも、認識するであろう。ここで用いられている、“保存的アミノ酸置換”とは、アミノ酸置換がおきているタンパクの相対的電荷又はサイズ特性を変化させないアミノ酸置換を示す。アミノ酸の保存的置換は、以下の群内:( a)M、 I、L、V；(b)F、Y、W；(c)K、R、H；(d)A、G；(e)S、T；(f)Q、N；及び(g)E、D のアミノ酸間になされる置換を含む。プレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1ポリペプチドの機能的な均等誘導体、すなわち天然ポリペプチドの機能を保持しているポリペプチドの誘導体は、例えばMolecular Cloning．A Laboratory Manual，J．Sambrook等、eds.，S econd Edition，Cold Spring Houbor Laboratory Press Cold Spring Harbor，N ew York，1989又はCurrent Protcols in Molecular Biology，F．M．Ausubel等、eds.，John Wiley & Sons，Inc.，New Yorkのような方法を編集した文献中に見出せるような当業者にとって周知のポリペプチド配列を改変するための方法により、調製することができる。例えばトリプターゼ-Lペプチドの機能的な均等誘導体の例は、配列番号：4又は及び配列番号：6の保存的アミノ酸置換を含む。トリプターゼ-Lポリペプチドの機能的な均等誘導体を製造するためのトリプターゼ -Lポリペプチドのアミノ酸配列中の保存的アミノ酸置換は、トリプターゼ-Lをコードする核酸(配列番号：3、配列番号：5)の改変により、典型的になされる。そのような置換は、当業者に周知の種々の方法により行うことができる。例えばアミノ酸置換はPCRダイレクトミューテーション、Kunkelの方法(Kunkel，Proc．Na t．Acad．Sci.U.S.A．82:488-492,1985)、又はトリプターゼ-Lポリペプチドをコードする遺伝子の化学合成により行うことができる。アミノ酸置換が、９アミノ酸ペプチドのようなトリプターゼ-Lポリペプチドの小ユニークフラグメントになされる場合には、置換はペプチドを直接的に合成することにより行うことができる。トリプターゼ-Lポリペプチドの機能的に均等なフラグメントの活性は、細菌又は哺乳動物発現ベクター中に改変トリプターゼ-Lポリペプチドをコードしている遺伝子をクローニングすること、適当なホストセル中にベクターを導入すること、改変トリプターゼ-Lポリペプチドを発現させること、及び本明細書中に開示のようにトリプターゼ-Lポリペプチドの機能的な能力を試験することにより、試験することができる。プレプロTRH及びOct-T1ポリペプチドの機能的に均等な誘導体は、同様にして製造することができる。上記のように、本発明は、白血病関連遺伝子の転写及び／又は翻訳を減少させるために、プレプロTRHタンパク、トリプターゼ-Lタンパク又はOct-T1タンパクをコードするものを含む、白血病関連遺伝子核酸分子に選択的に結合するアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。これは、白血病関連遺伝子産物発現の減少が好ましいようないかなる医学的状況においても望ましく、これはプレプロTRH 、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1の発現のような白血病関連遺伝子に特徴的な悪性白血病細胞フェノタイプを減少させることを含む。この場合、アンチセンス分子は、とりわけ白血病や、リンパ腫のような固形形態で見出されるような悪性白血病細胞フェノタイプを、遅延又は阻害するために使用することができる。ここで用いられている、“アンチセンスオリゴヌクレオチド”又は“アンチセンス”という用語は、特定の遺伝子を含むDNA又は該遺伝子のmRNA転写体に対して生理学的条件下でハイブリダイズするオリゴリボヌクレオチド、オリゴデオキシリボヌクレオチド、修飾オリゴリボヌクレオチド、又は修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドを意味し、それにより遺伝子の転写及び／又はそのmRNAの翻訳を阻害する。アンチセンス分子は、標的遺伝子とハイブリダイズして標的遺伝子の転写又は翻訳を妨害するようにデザインされる。当業者は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの正確な長さ及びその標的との相補性の程度が、選択した標的に依存する、すなわち、標的の配列や標的に含まれる特異的な塩基等に依存することを認識しているであろう。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生理学的条件下で標的に選択的に結合するように、すなわち生理学的条件下で標的細胞中のいかなる他の配列に対してよりも標的配列に対してより実質的にハイブリダイズするように、構成され、そして配列されることが好ましい。配列番号：1、配列番号：3、配列番号：5及び／又は配列番号：7、又は対立的又は相同的ゲノム及び／又はDNA配列に基づいて、本発明と一致する使用のためのいかなる多くの適切なアンチセンスも容易に選択及び合成することができる。十分な選択及び阻害の能力のためには、そのようなアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的に対して相補的な少なくとも７個(Wagner等.，Nature Biotechnology 14:640-844，1996)、より好ましくは少なくとも15連続塩基を含む。最も好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、20-30塩基の相補的配列を含む。オリゴヌクレオチドとして、遺伝子又はmRNA転写体のいかなる領域に対するアンチセンスも選択することができるが、好適な態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、翻訳開始部位、転写開始部位又はプロモーター部位のようなN末端又は5’上流部位に相当する。加えて、3’未翻訳領域も標的になりうる。mRNAスプライシング部位に対する標的化も、当該技術において使用されるが、選択的mRNAスプライシングがおきる場合には、好ましくないかもしれない。加えて、アンチセンスは、好ましくはmRNA 2 次構造が予想されていない部位(例えばSainio等.,Cell Mol．Neurobiol.14(5):4 39-457，1994を参照されたい)及びタンパクが結合することが予想されていない部位に標的化される。結局、配列番号：1、3、５及び７は、cDNA配列を開示するが、当業者は、配列番号：1、3、５及び７に相当するゲノムDNAを容易に誘導することができる。従って、本発明はまた、配列番号：1、3、５及び７に相当するゲノムDNAに相補的なオリゴヌクレオチドをも提供する。同様に、対立的又は相同的DNA及びゲノムDNAに対するアンチセンスを、不当な実験を行うことなく、得ることができる。一群の態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、“天然”デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、又はこれらのいかなる組み合わせからも構成されることができる。つまり、ある天然ヌクレオチドの5’末端と他の天然ヌクレオチドの3’末端が、ホスホジエステルヌクレオチド内結合を介して、自然状態でのように、共有結合することができる。これらのオリゴヌクレオチドは、手動又は自動シンセサイザーにより行われる当業者に周知の方法により調製することができる。これらは、ベクターにより組み換え的に製造することもできる。好適な態様では、しかしながら、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、“修飾された”オリゴヌクレオチドを含むことができる。つまり、オリゴヌクレオチドは、ターゲットへのハイブリダイズを妨げることなく、安定性を増強するか、又は標的性又はそれらの治療的有効性を増強する方法の多くで修飾されることができる。ここで使用される“修飾されたオリゴヌクレオチド”という用語は、(1)そのヌクレオチドの少なくとも２つが、合成ヌクレオシド間結合(すなわち、一方のヌクレオチドの5’末端と他方のヌクレオチドの3’末端の間のホスホジエステル結合以外の結合)を介して、共有結合している、(2)通常、核酸に関連しない化学基がオリゴヌクレオチドに共有結合している、オリゴヌクレオチドを示す。好適な合成オリゴヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート、アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、ホスフェートエステル、アルキルホスホノチオエート、ホスホラミデート、カルバメート、カルボネート、ホスフェートトリエステル、アセトアミデート、ペプチド、及びカルボキシメチルエステルである。 “修飾されたオリゴヌクレオチド”という用語は、共有的に修飾される塩基及び／又は糖を有するオリゴヌクレオチドをも示す。例えば修飾されたオリゴヌクレオチドは、3’位置でヒドロキシル基以外の低分子量有機基及び5’位置でホスフェート基以外に共有的に結合するバックボーン糖を有するオリゴヌクレオチドを含む。従って、修飾されたオリゴヌクレオチドは、2’-O-アルキル化リボース基を含むことができる。加えて、修飾されたオリゴヌクレオチドは、リボースの代わりにアラビノースのような糖を含むことができる。修飾されたオリゴヌクレオチドは、C-5プロピン修飾塩基のような塩基アナログを含むこともできる(Wagn er等、Nature Biotechnology 14:840-844，1996)。従って、本発明は、医薬的に許容される担体と一緒になって、白血病関連タンパクをコードする核酸に相補的であり、そして生理学的条件下でハイブリダイズする、修飾されたアンチセンス分子を含む医薬製剤を想定する。本発明には、発現ベクター中のみならず、原核細胞(例えばE．Coli)又は真核細胞(例えばCHO細胞、COS細胞、酵母発現系及び昆虫細胞中の組み換えバキュロウイルス発現)のようなトランスフェクトされたホストセル及びセルライン中のプレプロTEH、トリプターゼ-L及びOct-T1配列の使用も含まれることが実施例からも認識されるであろう。特に有用なものは、マウス、ハムスター、ブタ、ヤギ、霊長類等のようなほ乳類細胞である。これらは、肥満細胞、フィブロブラスト、卵母細胞及びリンパ球を含む、様々な種類の組織タイプであることができ、そしてこれらはプライマリーセル又はセルラインであることができる。特別な例は、樹状細胞、U293細胞、末梢血白血球、骨髄幹細胞及び胚幹細胞を含む。発現ベクターは、適切な配列、すなわちこれらの上記核酸は、プロモーターに作動的に結合されている必要がある。ヒトHLAクラスＩ分子がプレプロTRH、トリプターゼ-L及びOct-T1遺伝子から誘導された腫瘍排除抗原を提示する場合には、発現ベクターは、これらの遺伝子及びポリペプチドに由来するいずれかの腫瘍排除抗原も提示するHLA分子をコードする核酸配列を含むこともできる。代わりに、そのようなHLA分子をコードする核酸配列が、分離発現ベクター中に含まれていてもよい。ベクターが両方のコード配列を含む状況では、単一のベクターを通常いずれか一方を発現しない細胞をトランスフェクトするために使用することができる。ここで腫瘍排除抗原前駆体及びそれを提示するHLA分子のコード配列を、分離発現ベクター上に含むことができ、発現ベクターはコトランスフェクトされることができる。腫瘍排除抗原前駆体コード配列は、単独で使用することができ、ここで例えばホストセルは、プレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1 TRAPsから誘導されるTRAを提示するHLA分子をすでに発現している。当然、使用することができる特定のホストセルに限定はない。所望ならば、２つのコード配列を含むベクターを、いかなる抗原提示細胞中でも使用することができるように、腫瘍排除抗原前駆体のための遺伝子を、プレプロTRH、トリプターゼ- L及び／又はOct-t1 TRAを提示するHLA分子を発現しないホストセル中で使用することもできる。さらに、無細胞転写系を細胞の代わりに使用することができる。ここで使用されるように、“ベクター”は、異なる遺伝環境間の転移のため又はホストセル中での発現のため、所望の配列を制限及びライゲーションにより挿入することができる、多くの核酸のいずれかであり得る。ベクターは、典型的にはDNAから構成されるが、RNAベクターも入手できる。ベクターは、特に限定されないが、プラスミド及びファージミドを含む。クローニングベクターは、ホストセル中で複製されるものであり、最終形態に切断されることができる１又は２以上のエンドヌクレアーゼ制限部位により特徴付けられる。そして所望のDNA配列は、新しい組み換えベクターがホストセル中での複製能を保持するように結合させることができる。プラスミドの場合には、所望の配列の複製は、プラスミドがホストバクテリア内でののコピー数を増加するとき、又はホストが細胞分裂により再生される前にホストあたりちょうど１回起こすことができる。ファージの場合には、複製は、溶菌相の間は活発に、溶原相の間は不活発に起こすことができる。発現ベクターは、所望のDNA配列が、調節配列に作動的に連結されるように制限及びライゲーションにより挿入されることができるものであり、そしてRNA転写体として発現させることができるものである。ベクターは、ベクターでトランスフォームされているか、又はトランスフェクトされている細胞の識別に使用するのに適当なマーカー配列を１又は２以上さらに含むことができる。マーカーは、例えば抗生物質又は他の化合物に対する耐性か感受性を増加又は減少させるタンパクをコードする遺伝子、活性が当業者に公知の標準的なアッセイにより同定できる酵素(例えばβ-ガラクトシダーゼ又はアルカリホスファターゼ)をコードする遺伝子、及びトランスフォーム又はトランスフェクトされた細胞、ホスト、コロニー又はプラークに可視的な影響を与える遺伝子を含む。好適なベクターは、自立的な複製が可能なものであり、そして構造遺伝子産物の発現が、作動的に連結されているDNAセグメント中に向けられている。ここで使用されるように、コード配列及び調節配列は、それらが調節配列の影響又は制御下でコード配列の発現又は転写を起こさせる様な態様で共有結合されている場合には、“作動的に”結合されているといわれる。コード配列が機能的タンパクに翻訳されることが所望ならば、5’調節配列中のプロモーターの導入がコード配列の転写を結果として引き起こした場合、そして２つのDNA配列間結合の性質が、(1)フレームシフト変異の導入を引き起こさず、(2)コード配列の転写を指揮するプロモーター領域の能力を妨害せず、又は(3)タンパクに翻訳される相当するRNA転写体の能力を妨害しない場合には、２つのDNA配列は、作動的に結合されたといわれる。従って、プロモーター領域は、結果として転写体が所望のタンパク又はポリペプチドに翻訳される結果として、プロモーター領域がDNA 配列の転写に影響を与えることができる場合に、コード配列に作動的に連結されている。遺伝子発現に必要な調節配列の正確な性質は、種又は細胞タイプ間で多様であることができるが、TATAボックス、キャップ配列、CAAT配列、及びそれに類するもののように、必要なものとして、転写及び翻訳の開始に関与する5’非転写配列及び5’非翻訳配列のそれぞれを一般に含むべきである。特に5’非転写調節配列は、作動的に結合された遺伝子の転写制御のためのプロモーター配列を含むプロモーター領域を含むであろう。調節配列は、記載されたようなエンハンサー配列又は上流アクチベーター配列を含むこともできる。本発明のベクターは、5’リーダー又はシグナル配列5’又は3’を任意に含むことができる。適切なベクターの選択及びデザインは、当業者の能力及び裁量の範囲内である。発現のために必要な要素を全て含む発現ベクターは、市販されており、当業者に公知である。Molecular Cloning:A Laboratory Manual，J．Sambrook，et al. ,eds.，Second Edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor,New york，1989を参照されたい。細胞は、プレプロTRH、トリプターゼ-L 又はOct-T1腫瘍特異的ポリペプチド又はフラグメント又はそれらの誘導体をコードする異種DNA(RNA)の細胞中への導入により遺伝的に操作される。異種DNA(RNA) は、ホストセル中で異種DNAの発現をさせるために転写要素の作動的な制御下に置かれる。ほ乳類細胞中でのmRNA発現のための好適な系は、G418耐性(安定なトランスフェクトされたセルラインの選択を容易にする)を与える遺伝子のような選択マーカー及びヒトサイトメガロウイルス(CMV)エンハンサー-プロモーターを含むpRc/ CMVのようなもの(Invitrogen，Carlsbad，CAより入手可能)である。さらに、霊長類又はイヌセルラインでの発現に好適なものは、エプステインバールウイルス (EBV)複製開始点を含み、多コピークロモソーム外因子のようなプラスミドの維持を容易にするpCEP4ベクター(Invitrogen)である。他の発現ベクターは、インビトロで効果的に転写を刺激する、ポリペプチド伸長因子1αのプロモーターを含むpEF-BOSプラスミドである。このプラスミドは、Mishizuma及びNagata(Nuc.A cids Res．18:5322，1990)により記載され、そのトランスフェクション実験での使用が、例えばDemoulin(Mol．Cell．Biol．16:4710-4716，1996)により開示されている。さらに他の好適な発現ベクターは、E1及びE2タンパクに欠陥があり(J ．Clin．Invest．90:626-630，1992)、Stratford-Perricaudetにより記述されているアデノウイルスである。Adeno.P1A組み換え体としてのこのアデノウイルスの使用は、Warnier et al.，in intradermal injection in mice for immunizat ion against P1A(Int．J Cancer，67:303-310，1996)により開示されている。本発明はまた、当業者に所望の発現ベクター又はベクターを製造させる、いわゆる発現キットも包含する。そのような発現キットは、前記のコード配列のそれぞれの少なくとも分離部分を含む。所望により、他の成分を加えることができ、必要なできるだけ長い前記配列が含まれる。本発明は、プレプロTRH、トリプターゼ-L及びOct-T1、及びいくつかの態様では、好ましくはプレプロTRH、トリプターゼ-L及びOct-T1のユニークフラグメントを含む白血病関連ポリペプチドに結合する試薬をも含む。そのような結合パートナーは、プレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1ポリペプチドの存在又は不在を同定するためのスクリーニングアッセイ及びプレプロTRH、トリプターゼ-L 又はOct-T1ポリペプチドを単離するための精製プロトコルにおいて使用することができる。同様に、そのような結合パートナーは、標的薬品、毒素又他の分子を選択的にプレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1白血病関連ポリペプチドを発現する白血病細胞に送り込むために使用することができる。この場合、プレプロ TRH、トリプターゼ-L又はOct-T1白血病関連ポリペプチドを発現する固形又は非固形腫瘍中に存在する細胞は、細胞傷害性化合物で治療することができる。従って、本発明は、プレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1白血病関連ポリペプチド、及び好ましくはそれらのユニークフラグメントに対して選択的に結合するための能力を有する抗体又は抗体のフラグメントを含む。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル抗体を含み、従来の方法論で製造される。従って、本発明の抗体は、タンパク、タンパクのフラグメント、タンパク又はそのフラグメントを投与すること及び動物にポリクローナル抗体を導入するようなことを含む多種の方法により製造される。モノクローナル抗体の製造は、当業者に周知の技術による。ここで詳細に示すように、そのような抗体は、例えばタンパクを発現している組織を識別するため又はタンパクを精製するために使用することができる。抗体は、画像化のための特異的ラベル試薬又は、特に限定されないが、メトトレキセート、放射ヨウ素化化合物、リシンのような毒素、他の静細胞又は細胞溶解薬等を含む抗ガン剤と結合することもできる。本発明により製造される抗体は、好ましくはここに示したTRA/HLA複合体について特異的でもある。当業者によく知られているように、抗体分子の小片であるパラトープは、そのエピトープへの抗体の結合に関与している(一般に、Clark，W.R．(1986)TheExpe rimental Foundations of Modern Immunology Wiley & Sons，Inc.，New York; Roitt，I．（1991）Essential Immunology，7th Ed.,Blackwell Scientific Publications，Oxford)。例えばpFc'及びFc領域は、補体カスケードのエフェクターであるが、抗原結合には関与しない。pFc'領域が酵素的に分割されている抗体又はF(ab')₂フラグメントと呼ばれる、pFc'領域なしで製造される抗体は、完全な抗体の抗原結合部位を両方維持している。同様にFc領域が酵素的に分割されている抗体又はFabフラグメントと呼ばれるFc領域なしで製造される抗体は、完全な抗体分子の抗原結合部位の１つを保持している。さらに続いて、Fabフラグメントは、共有結合している抗体L鎖及びFdと表される抗体H鎖の一部からなる。 Fdフラグメントは、抗体特異性の主要な決定部位であり(単一Fdフラグメントは、改変されている抗体特異性のない10までの異なるL鎖に関与することができる) 、Fdフラグメントは、単独で、エピトープ結合能を保持している。抗体の抗原結合部位内には、当業者に周知なように、抗原のエピトープに直接的に相互作用する補体決定領域(complementarity determining regions)(CDRs) 、及びパラトープの３次元構造を維持しているフレームワーク領域(FRs)(一般に、Clark，1986;Roitt，1991を参照されたい)が存在する。IgG免疫グロブリンのH 鎖Fdフラグメント及びL鎖の両方には、３つの補体決定領域(CDR1からCDR3)により、それぞれ分離される４つのフレームワーク領域(FR1らFR4)がある。CDRs、及び特にCDR3領域、及びさらに特にH鎖CDR3は、抗体特異性に大きく寄与する。ほ乳類の抗体の非CDR領域は、オリジナルの抗体のエピトープ特異性を保持したままで、同種又は異種の抗体の同様の領域と置き換えることができることは、当業者に周知である。このことは、機能的な抗体を製造するために、非ヒトCDRs がヒトFR及び／又はFc/pFc'領域に共有的に連結されている“ヒト化”抗体の生成及び使用において、最も明確に示されている。従って、PCT国際公開番号WO92/ 04381は、マウスFR領域の少なくとも一部がヒト由来のFR領域により置き換えられているヒト化マウスRSV抗体の製造及び使用を教示する。抗原結合能を有する完全な抗体のフラグメントを含むそのような抗体は、“キメラ”抗体と通常呼ばれる。従って、当業者に明らかなように、本発明は、F(ab')₂、Fab、Fv及びFdフラグメント;Fc及び／又はFR及び／又はCDR1及び／又はCDR2及び／又はL鎖CDR3 が相同ヒト又は非ヒト配列により置き換えられているキメラ抗体;FR及び／又はC DR1及び／又はCDR2及び／又はL鎖CDR3領域が、相同ヒト又は非ヒト配列により置き換えられているキメラF(ab')2フラグメント抗体；FR及び／又はCDR1及び／又はCDR2及び／又はL鎖CDR3領域が、相同ヒト又は非ヒト配列により置き換えられているキメラFabフラグメント抗体；及びFR及び／又はCDR1及び／又はCDR2領域が、相同ヒト又は非ヒト配列により置き換えられているキメラFdフラグメント抗体をも提供する。本発明は、いわゆる単鎖抗体をも含む。従って、本発明は、プレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1を含む白血病関連ポリペプチドに対して特異的に結合する多くの種及びサイズのポリペプチドを含む。これらのポリペプチドは、抗体技術以外の起源からも誘導される。例えば、そのようなポリペプチド結合試薬は、溶液、固形又はファージディスプレイライブラリ中にすでに調製されている、縮重ペプチドライブラリにより提供される。結合ライブラリ(combi natorial libraries)は、１又は２以上のアミノ酸を含むペプチドより合成することができる。ライブラリは、さらにペプチド及び非ペプチド合成部分より合成することができる。ファージディスプレイは、本発明による有用な結合ペプチドを識別する点で特に効果的である。要するに、当業者は、ファージライブラリを調製し(例えばm13 、fd、又はラムダファージを使用して)、慣用の方法を使用して４から80アミノ酸残基のインサートをディスプレイする。このインサートは、完全な縮重又はバイアス(biased)配列を示すかもしれない。そして当業者は、プレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1白血病関連ポリペプチドに結合するファージ生成インサートを選択することができる。このプロセスは、プレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1ポリペプチドに結合するファージの再選択を数サイクルを通じて繰り返すことができる。繰り返した回数は、特定の配列を生じるファージの濃縮を導く。DNA配列分析は、発現されるポリペプチドの配列を同定するために行われる。プレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1に結合する配列の最小直線部分を同定することができる。当業者は、最小直線部分の一部又は全て及び１又は２以上の付加的な縮重残基をその上流又は下流に含むインサートを含有するバイアスライブラリを使用して、この方法を繰り返すことができる。従って、本発明の白血病関連ポリペプチドは、ファージディスプレイライブラリを含むペプチドライブラリをスクリーニングするため、本発明の白血病関連ポリペプチドのパートナーが結合するペプチドを識別及び選択するために使用することができる。そのような分子は、上記のように、スクリーニングアッセイのため、診断アッセイのため、精製プロトコルのため又は細胞の表面でプレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T 1ポリペプチドを提示する白血病細胞のような白血病関連遺伝子を発現する細胞に対するターゲッティング薬、毒素及び／又はラベル試薬(例えばラジオアイソトープ、蛍光分子等)のために使用することができる。そのような結合試薬分子は、複合体を使用して結合試薬を選択することにより、プレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1ポリペプチド及びHLA分子の複合体に結合するように製造することができる。そのような複合体又はプレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1 ポリペプチドを発現する白血病細胞を無力化するか破壊する薬剤分子は、当業者にとって周知であり、そして市販されている。例えば免疫毒素の技術は、抗体又はそのフラグメントにより細胞に運ばれる時に効果的である毒素の例を提供する。毒素の例は、リシン、アブリン、サポリン、Pseudomonasエンドトキシン、ジフテリア毒素、A鎖毒素、ブロック化リシン(blocked ricin)等のような植物又は細菌から誘導されるリボソーム傷害毒素を含む。当業者は、例えば特異的に個々のHLAクラスI分子を阻害する抗体を用いた実験により、プレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1腫瘍排除抗原前駆体から誘導される腫瘍排除抗原に結合するHLA分子を同定することができる。例えばH LA-A2に選択的に結合する抗体は、HLA-A2により特異的に提示されるTRAsの十分な提示を阻害するであろう。従って、プレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はO ct-T1のような白血病関連遺伝子から誘導されるTRAsが、HLA-A2により提示される場合には、インビトロアッセイでの抗HLA-A2の封入がこれらのTRAsの提示を阻害するであろう。HLA分子の性質を同定するためのアッセイは、米国特許出願第0 8/530,569号に見出すことができる。要するに、HLA分子タイプの同定において、阻害実験は、細胞傷害性(CTL)クローン263/17による腫瘍壊死因子(TNF)の生成を、HLA分子に対する又はCD4/CD8アクセサリー分子に対するモノクローナル抗体の存在下でテストするように、行われる。４つのモノクローナル抗体が、CTL263/17によるTNFの生成を阻害することが見出された：すなわち、全てのHLAクラスI分子に対するモノクローナル抗体W6/32(Parham et al.,J．Immunol ．123:342，1979)、HLA-B及びC分子を認識する抗体B1.23.2(Rebai et al.，tiss ue Antigens 22:107，1983)、HLA-B7を特異的に認識する抗体ME-1(Ellis et al. ，Hum．Immunol．5:49，1982)及びCD8に対する抗体B9.4.1である。HLAクラスIID R分子(L243:Lampson et al.,J．Immunol．125:293、1980)、HLA-A3(GAPA3:Berge r et al.,Hybridoma 1:87，1982)又はCD4(13B.8.82)に対する抗体での阻害は、見出されていない。この結果は、CTL263/17がCD8タイプのものであり、そしてHL A-B7によって提示される抗原を認識することを示す。HLA分子の性質を同定するために、幅広く入手可能な抗HLA抗体を使用して、同様の実験を行うことができる。ここに記載されるように本発明は、多くの使用を含み、そのいくつかはここに記載される。第一に、本発明は、当業者にTRAPの発現により特徴付けられる疾病を診断することを可能にする。これらの方法は、HLA-A2、HLA-A26、HLA-B7等により提示されるTRAのようなTRAP遺伝子、及び／又はこれらから誘導されるTRAs の発現を同定することを含む。前者の状況では、そのような同定は、ポリメラーゼ連鎖反応、又は標識ハイブリダイゼーションプローブでのアッセイを含む、いかなる標準的な核酸同定アッセイを介しても行うことができる。後者の状況では、抗体のような、TRA及びHLAの複合体に関する結合パートナーでのアッセイが、特に好適である。同定のための代わりの方法は、上記のタイプのTNFリリースアッセイである。 TRAP遺伝子の単離は、TRAP分子自身、特に配列番号：2、配列番号：4、配列番号：6又は配列番号：8により示されるアミノ酸配列を含むTRAP分子を単離することを可能にする。白血病関連遺伝子によってコードされ、そして他のCTLクローンにより認識され、及び／又は他のHLA分子により提示される他のTRAPs又はTRAs を、この詳細な方法により単離することができる。(特に限定されないが、HLA-A 、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F及びHLA-G遺伝子によりコードされるものを含む、当業者に公知の多くのHLA分子がある。)単離されたTRA分子を得るために、当業者に周知の種々の方法論を利用することができる。タンパクは、タンパクを自然に生成する細胞から精製することができる。代わりに、タンパクの生成を引き起こすために、発現ベクターを細胞内に導入することができる。他の方法では、コードされるタンパクの生成を引き起こすために、mRNA転写体をマイクロインジェクションするか、又は他の方法で細胞中に導入することができる。網状赤血球溶解系のような無細胞抽出物中でのmRNAの翻訳も、タンパクを生成するために使用することができる。本発明のTRAsを含むペプチドをインビトロ合成することもできる。単離されたTRAPs及び／又はそれらから誘導されたTRAsを得るために、当業者は、タンパクを単離するための公知の方法に従うこともできる。これらは、特に限定されないが、免疫クロマトグラフィー、HPLC、サイズ-排除クロマトグラフィー、イオン-交換クロマトグラフィー及び免疫-アフィニティークロマトグラフィーを含む。これらの単離された分子は、切断されTRAとして、又はTRAとHLA-A2、HLA-A26 又はHLA-B7等のようなHLAの複合体として提示された場合、TRAP分子の発現により特徴付けられる疾病を治療するために有用なワクチンを製造するためにアジュバントのような材料と結合させることができる。加えて、ワクチンは、非増殖化ガン細胞、非増殖化トランスフェクタント等のようなその表面にTRA/HLA複合体を提示している細胞から調製することができる。細胞がワクチンとして使用される全ての場合において、これらは、CTL応答を引き起こすために必要な１又は両方の成分のためのコード配列でトランスフェクトされた細胞、又はトランスフェクションを必要としないで両方の分子をすでに発現している細胞であることができる。ワクチンには、白血病関連TRA又はそれらの前駆体をコードするむき出しのDNA又はRNAも含まれ、このようなワクチンはインビトロで製造することができ、注射、粒子衝撃、鼻腔吸入及び他の方法により投与される。“むき出しの核酸 ”タイプのワクチンは、むき出しの核酸によりコードされるペプチドに特異的な CTLの生成を含む、免疫学的応答の誘起を示す(Science 259:1745-1748，1993)。 “疾病”がここで使用される場合には、腫瘍排除抗原前駆体が発現しているいかなる病理学的症状をも意味する。そのような疾病の例は、特にガン、白血病及びリンパ腫である。加えて、ワクチンは、非増殖化ガン細胞、非増殖化トランスフェクタント等のような、その表面にTRA/HLA複合体を提示する細胞から製造することができる。細胞がワクチンとして使用される全ての場合において、これらは、CTL応答を引き起こすために必要な１又は両方の成分のためのコード配列でトランスフェクトされた細胞、又はトランスフェクションを必要としないで両方の分子をすでに発現している細胞であることができる。本開示に基づく治療的アプローチは、HLA- B7細胞のようなTRA提示細胞の溶解を導く、対象の免疫システムによる応答を前提とする。そのようなアプローチは、本論のフェノタイプの異常細胞を有する対象に対する、複合体に特異的な自己CTLsの投与である。インビトロでそのような CTLsを開発することは、当業者の技術の範囲内である。一般に、対象から採取された血球のような細胞のサンプルは、複合体を提示している細胞と接触させ、そしてCTLs増殖を引き起こすことができる。標的細胞は、上記タイプのCOS細胞のようなトランスフェクタントであることができる。トランスフェクタントは、所望のCTLと結合し、その増殖を刺激する場合に、それらの表面に所望の複合体を提示する。ここで使用されるCOS細胞は、他の好適なホストセルと同様に、広く入手可能である。CTLの特異的な生成は、当業者に周知である。そして、クローン的に増殖させた自己CTLは、対象に投与される。プレプロTRH、トリプターゼ-L 及び／又はOct-T1に特異的な他のCTLは、同様の方法により単離し、そして投与することができる。治療的な方法論を詳細にするため、養子免疫伝達(Greenberg，J Immunol.136( 5):1917，1986;Riddel et al.，Science 257:238，1992;Lynch et al，Eur.J．I mmunol．21:1403-1410，1991;Kast et al.,Cell 59:603-614，1989)と呼ばれる治療方法を詳しく述べると、所望の複合体を提示する細胞をCTLと結合させ、それに特異的なCTLの増殖を導く。そして増殖CTLsを特定の複合体を提示しているいくつかの異常細胞により特徴付けられる細胞性異常を有する対象に投与する。そして異常細胞は溶解し、これにより所望の治療目標を達成する。前記の治療は、対象の異常細胞の少なくともいくつかが関連HLA/TRA複合体を提示することを仮定する。これは、当業者が特定のHLA分子を提示する細胞を識別するための方法、並びにこの場合白血病関連遺伝子配列である、適切な配列の DNAを発現する細胞を識別する方法に習熟しているので、非常に容易に識別できる。一度、関連複合体を提示している細胞を前記スクリーニング方法論により識別すると、それらは対象からのCTLsを含むサンプルと結合することができる。複合体提示細胞が、混合CTLサンプルにより溶解される場合には、TRAを誘導する白血病関連遺伝子が存在し、そして対象は前記の治療的アプローチの適当な候補であると仮定することができる。養子免疫伝達は、本発明に従う治療の唯一の形態のみではない。CTLsは、多くのアプローチを使用して、インビボで刺激することができる。１つのアプローチは、複合体を発現している非増殖化細胞の使用である。このアプローチで使用される細胞は、放射線照射された腫瘍細胞又は複合体の提示に必要な１つ又は両方の遺伝子をトランスフェクトされた細胞のように、複合体を通常に発現するものであることができる。Chen et al.,Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:110-114(19 91)は、このアプローチを例示し、治療様式においてHPV E7ペプチドを発現するトランスフェクトされた細胞の使用を示している。種々の細胞種が使用できる。同様に、所望の１つ又は両方の遺伝子を含むベクターを使用できる。ウイルス又は細菌ベクターが特に好適である。例えばプレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct -T1TRAをコードする核酸を、いくつかの組織又は細胞種中にプレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1 TRAを発現させるプロモーター又はエンハンサー配列に作動的に結合することができる。この核酸を発現ベクター中に導入することができる。発現ベクターは、修飾されていないクロモソーム外核酸やプラスミドであってもよく、またプレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1 TRAsをコードする核酸のような外来核酸の挿入を可能にするために、構築され、又は修飾されたウイルスゲノムであってもよい。プレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1 TRAをコードする核酸をレトロウイルスゲノム中に挿入することができ、これにより標的組織又は細胞種のゲノム中に核酸の統合を促進する。これらの系では、所望の遺伝子は、例えばワクシニアウイルス、レトロウイルス又はバクテリアBCG、及び事実上の“感染”ホストセル材料のような微小器官により運搬される。結果として得られる細胞は、所望の複合体を提示し、増殖した自己CTLにより認識される。同様の効果は、インビボでHLA提示細胞中への導入を促進するためにTRAP又はそれらの刺激性フラグメントとアジュバントを組み合わせることにより達成することができる。このTRAPは、HLA分子のペプチドパートナーを生成するために切断されるが、TRAはさらなる切断を必要とすることなく提示される。一般に、対象は、TRAPをコードするプレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1、及び／又はこれらから誘導されるTRAsの適用量の皮内注射を受けることができる。開始用量は、ブースター用量に従うことができ、当該技術の免疫プロトコル標準に従う。免疫プロトコルの一部としては、免疫応答を増強する物質は、ガンワクチンの核酸又はペプチド成分と共に投与することができる。そのような免疫応答を増強する化合物は、アジュバントかサイトカインいずれかに区分することができる。アジュバントは、抗原の貯蔵所(細胞外又はマクロファージ内)を提供することにより免疫学的応答を増強し、マクロファージを活性化し、そしてリンパ球の特異的なセットを刺激することができる。多くの種類のアジュバントは、当該技術において公知である；すなわち特定の例は、MPL(SmithKline Beecham)、Salmonell aminnesota Re 595リポ多糖の精製及び酸加水分解後に得られるコンジナー(cong ener)、QS21(SmithKline Beecham)、Quillja saponaria抽出物から精製された純粋QA-21サポニン、及びスクアレン及び／又はトコフェロールのような生分解オイルから調製される種々の油中水型(water-in-oil)エマルジョンを含む。サイトカインは、リンパ球刺激性により、ワクチン化プロトコルにおいても有用である。ワクチンの保護効果の増強を示すインターロイキン-12(IL-12)を含む(Science 268:1432-1434，1995)、そのような性質のために有用な多くのサイトカインは当業者にとって周知であろう。投与時には、本発明の治療用成分は、医薬的に許容される製剤で投与される。そのような製剤は、通常、医薬的に許容される濃度の塩、緩衝試薬、保存剤、互換性担体、アジュバント及びサイトカインのような補助的な免疫増強剤及び任意に他の治療用薬剤を含んでいてもよい。 “医薬的に許容される”という用語は、活性成分の生物学的活性の効果を阻害しない非-毒性材料を意味する。“生理学的に許容される”という用語は、細胞、細胞培養、組織、又は器官のような生物学的な系と互換性のある非-毒性材料をあらわす。担体の特徴は、投与の経路に依存するであろう。生理学的及び医薬的に許容される担体は、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、溶解剤、及び当該技術において周知の他の材料を含む。本発明の治療法は、例えば注射又は点滴(gradual infusion over time)による注射を含むいかなる慣用の経路によっても投与することができる。投与は、例えば経口、静脈内、腹膜内、筋内、窩内、皮下、又は皮間であることができる。抗体が治療に使用される場合には、投与の好適な経路は、肺エアロゾルである。抗体を含むエアロゾル送達システムの製造のための技術は、当業者に周知である。一般に、そのようなシステムは、パラトープ結合能のような抗体の生物学性質を、全く損なわないような成分を利用すべきである(例えばSciarra and Cutie,"Ae rosols,"in Remington's pharmaceutical Sciences，18th edition，1990，pp16 94-1712を参照されたい)。当業者は、不適切な実験に頼ることなく抗体エアロゾルを製造するために、種々のパラメーター及び条件を容易に決定することができる。本発明のアンチセンス製剤を使用する場合には、低速静脈内投与が好適である。非経口投与のための製剤は、滅菌水性又は非水性溶液、懸濁液、及びエマルジョンを含む。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物油、エチルオレアートのような注射可能な有機エステルである。水性担体は、水、アルコール/水溶液、エマルジョン又は塩水及び緩衝媒体を含む懸濁液を含む。非経口ビークルは、塩化ナトリウム溶液、リンゲルのブドウ糖、ブドウ糖及び塩化ナトリウム、乳酸化リンゲル又は不揮発性油を含む。静脈内ビークルは、液体(fluid)及び栄養補充剤、電解質補充剤(リンゲルのブドウ糖を基本としたもののような)、及びそれに類するものである。保存料及び他の添加物は、例えば抗菌剤、抗オキシダント剤、キレート試薬、及び不活性ガス及びそれに類するようなものが存在してもよい。本発明は、遺伝子治療をも想定している。生体外遺伝子治療を実施するための方法は、米国特許第5,399,346号、及びその特許の出願経過において提出された書類に概略が示され、これらは全て公開され入手可能である。一般に、遺伝子の欠陥コピーを含む対象の細胞内への遺伝子の機能的なコピーのインビトロ導入、そして対象に遺伝子操作された細胞を戻すことを含む。遺伝子の機能的なコピーは、遺伝子操作された細胞中に遺伝子を発現させる調節因子の作動的な制御下にある。多くのトランスフェクション及び形質導入技術、並びに適切な発現ベクターは、当業者に周知であり、そのいくつかは、PCT出願WO95/00654に記載されている。インビボ遺伝子治療で使用されるアデノウイルスのようなベクターも本発明により想定されている。本発明の製剤は、適用量で投与される。適用量とは、単一又はさらなる用量と一緒に所望の応答を刺激する医薬製剤の量である。ガン治療の場合には、所望の応答は、ガンの進行を阻害する。これは一時的に疾病の進行を遅延させることのみを含むことができるが、より好ましくは恒久的に疾病の進行を停止することを含む。これは慣用の方法により観察することができるか、又はここで議論された本発明の診断方法により観察することができる。ここで本発明の治療用組成物を使用して免疫応答を刺激することが好ましい状況においては、本発明は、これは、血清中の抗体力価の増加、細胞傷害性リンパ球のクローン的増殖、又はその他の所望の免疫学的応答を導く体液性抗体応答の刺激を含む。１ナノグラム/キログラムから100ミリグラム/キログラムの範囲の免疫原の量が、投与の形態に依存して、効果的であると信じられている。好適な範囲は、キログラムあたり500ナノグラムから500マイクログラムの間であると信じられている。絶対量は、投与のために選択された材料、投与は単一用量か又は多用量か、及び年齢、健康状態、身長、体重、及び疾病の段階を含む個人的な患者のパラメーターを含む種々の要因に依存する。これらのパラメーターは当業者に周知であり、そして慣用の実験のみで得ることができる。例例１：代表的差異分析-白血病白血球及び正常白血球間のサブトラクティブcDNA ハイブリダイゼーション 1. 方法試験群：(細胞遺伝的解析により検出した)クロモソーム転位t(8;21)(q22;q22)を有する、新たに急性骨髄性白血病(FAB-M2サブタイプ)と診断された女性患者 (SIAX、LB-1079)からのPBLを、このPBLをケモセラピーを開始する前に、leukaph eresisにより集め(PBLの約70％が白血病ブラスト細胞であった)、Lymphoprep(Fi coll)勾配で精製し、洗浄し、-80℃で培養培地及びDMSO中に凍結した。RNA調製のために、6X10⁸個の細胞を解凍し、洗浄し、遠心して(4.6X10⁸個の細胞を含む) 乾燥細胞ペレットとした。ドライバー群：健常人からのPBLをleukapheresisにより集め、これらをLymphopr ep(Ficoll)勾配で精製し、洗浄し、-80℃で凍結し、遠心後に(5X10⁸個の細胞を含む)乾燥細胞ペレットとした。トータルRNA調製：グアニジンイソチアネート/塩化セシウム法を使用した[L.G.D avis,M.D.Dibner,J.F.Battey，Basic Methods in Molecular Biology Elsevier, New York，1986，p．130-135]。試験群及びドライバー群からそれぞれ、390μg 及び50μgが得られた。mRNA 精製：オリゴ-dTカラム(Pharmacia mRNA精製キット、Pharmacia，Uppsala,S weden)を、製造者によるプロトコルに従って、使用した。cDNA 調製：cDNAは、製造者によるプロトコル従い、作製された(Amersham，cDNA 合成モジュール)。試験群及びドライバー群それぞれから、６μg及び２μgが得られた。差異分析 :Hubank及びSchatz(Nucleic acids Res．22:5640-5648，1994)cDNA差異分析プロトコルは、試験群の表現(tester representation)(TR)、ドライバー群の表現(driver representation)(DR)、差異産物１及び差異産物２の調製に対して適用した。試験群の表現の調製に関するいくつかの特徴について述べねばならない；1)600ngのみ(1.2μgではない)をアダプターの開始ライゲーションで使用した;2)PCR反応物は、40等量に分割した。差異産物1(DP1)の調製に関するいくつかの特徴を述べねばならない:0.2μgTR及び20μgDRのみ(0.4及び40μｇではない )を５μlハイブリダイゼーションバッファー中で使用した。差異産物2(DP2)の調製に関するいくつかの特徴を述べねばならない：2.5ngTR及び20μgDRのみ(50ng 及び40μｇではない)を５μlハイブリダイゼーションバッファー中で使用した。結局、第三の差異産物は得られなかった。試験群の表現及び差異産物１及び２のクローニング： DpnIIでの消化後に得られた試験群の表現及び差異産物１及び２を、ベクターp TZ18RのBamHIクローニングサイト中にコモンライゲーションによりクローン化し、BamHIで消化して(DpnII及びBamHI結合末端は、相互に互換性がある)、子牛腸管ホスファターゼで脱リン酸化した。このライゲーション産物を、エレクトロポレーションによりコンピテントTop10F'細菌をトランスフォームするために使用した。トランスフォームされた細菌は、アガープレート上アンピシリンで選択され、それらのプラスミドDNAはminiprep DNA extraction(Qiaprep，Qiagen)により精製し、BamHI消化及びDNAシーケンスにより解析した。 2. 結果DP2 産物を有する16クローンのシーケンス：いくつかのクローンは１以上のインサートを含んでいた。１シングルmRNAは、増幅されたDpnII制限フラグメント１以上を提供することができることにも注意されたい。それぞれのインサートの3/ 2は、ミエロペルオキシダーゼ(MPO)mRNAから誘導されるので、さらなる細菌コロニーがミエロペルオキシダーゼ特異的オリゴヌクレオチドプローブとのハイブリダイゼーション後に単離される。48のMPO-ネガティブコロニーが選択され、そしてアンピシリンと共に生長させ、それらのプラスミドDNAをminiprep DNA抽出(Qi aprep、Qiagen)により精製して、DNAシーケンスにより解析した。結論：試験群の白血病細胞、及びドライバー群の正常PBLを使用して、RDA法により増幅したcDNAフラグメントの大部分は、ミエロペルオキシダーゼmRNAから誘導されていた。MPO遺伝子は、正常及び白血病骨髄性幼若細胞で高発現しているが、白血球細胞では異なっている。これは誘導されたcDNAフラグメントがRDAにより増幅されたからである。これは、正常PBLがドライバー群として使用された場合に、RDAにより増幅されたCD34の存在を説明している。高発現している普遍的なRNAs(28S及び40SリボソームRNA)に由来するcDNAフラグメントの存在は、おそらくディファレンシャルハイブリダイゼーション２サイクル後の残留バックグラウンドの結果、引き起こされたものである。いくつかのcDNAフラグメントは、公知の遺伝子に由来していた。最後の２つのカテゴリーのために、我々は、クローン化されたフラグメントから得られた配列から誘導された特異的PCRプライマーペアをデザインした。いくつかの白血病、正常PBL及び正常骨髄サンプルでRT-PCRを行った。白血病サンプルでのみ発現していたこの遺伝子は、正常及び白血病組織のより大きな範囲でそれらの発現についてさらに試験された。３つの遺伝子のみが、白血病特異的発現パターンを示した： -プレプロTRH遺伝子 -5つの公知のトリプターゼ遺伝子と強い(完全ではないが)ホモロジーを有するmR NAをコードする遺伝子である。この遺伝子をトリプターゼ-L(Lはleukemia)と呼ぶことにする。 -さらにSIAX DP2-64と表される全く新規な遺伝子これら３つの遺伝子のcDNAは、同一の白血病(SIAX、LB-1079)から得られたcDN Aライブラリからクローン化され、シーケンスされた。我々は、正常組織、白血病及び固形腫瘍サンプルにおいてRT-PCRにより、それらの発現を試験した。これらのデータを以下のページにさらに詳細に示す例２：プレ-プロ-チロトロピン-放出ホルモン遺伝子(プレプロTRH) 1．cDNAクローニング：cDNAライブラリNVB32を以下のように作製した：トータル RNAは、患者SIAX、LB-1079から得られた解凍した白血病PBLから抽出された(試験群、RDAプロトコル、例１を参照されたい)。ポリ-A RNAは、製造者のプロトコルに従って、オリゴ-dTカラム(Pharmacia mRNA精製キット)で精製された。cDNAは、製造者のプロトコルに従い、ランダムプライマーを使用して、Superscriptキット(Gibco-BRL)で作製された。cDNAフラグメントは、EcoRIアダプターに結合され、クロマトグラフィーカラムで分別され(4フラクション:A、B、C、及びDが得られた)、EcoRI消化物中に結合され、そして脱リン酸化したpcDSRアルファベクターに結合された。このライゲーション産物は、エレクトロポレーションにより Top10F'コンピテント細菌をトランスフォームするために使用された。トランスフォームされた細菌コロニーは、アンピシリンとの選択的生育後に得られ、フラクションについてプールされ、そして-80℃で凍結された。フラクションBが、もっとも大きなインサートを示した。 NVB329 cDNAライブラリのBフラクションは、12,000コロニーをSIAX cDNAから増幅された³²P-ラベルPCRプローブとハイブリダイズさせることによりプレプロT RHクローンについてスクリーニングされた。ポジティブである16コロニーが見出され、予想されていたmRNAサイズに相当する、〜1.6kbインサートを有するプラスミドを含む２つのものが見出された。両方の組み換えプラスミドのただ１つ(C HM327-3A/8)が、正しい方向に配向されたインサートを有していた。 2．シーケンス:クローンCHM327-3A/8は、Delta-Taqシーケンスキット(Amersham) を使用して、完全にシーケンスされた(配列番号：1：図１を参照されたい)。その配列は、3'非翻訳領域での、白血病cDNA中のさらなるグアノシンの存在を除き (このタンパクの配列はこの差異による影響を受けない)、プレプロTRHの公表されている配列と完全に一致している。 3．遺伝子の発現：正常、白血病及び固形腫瘍組織中でのプレプロTRH遺伝子の発現は、ここでのプロトコルで詳細に示したように、RT-PCRにより試験された。 a. 正常組織での発現：ポジティブシグナルは、胎児脳サンプルで見出された。 PCR増幅なしでは、以下のサンプル：成人脳、大腸、肝臓、卵巣、皮膚、胎盤、肺、腎臓、睾丸、子宮内膜、膀胱、正常末梢血白血球、正常骨髄中で見出された。これらの結果は、文献に見出される発現パターンと同一であり、プレプロTRH 遺伝子は、視床下部及び中枢神経系の他の部分での発現がみられる。 b. 固形腫瘍での発現：以下の腫瘍組織：悪性メラノーマ、乳ガン、咽頭ガン、肺NSCLC、膀胱ガン、胃ガン、肺SCLC、精巣腫瘍、子宮ガン、直腸ガン、大腸ガン、舌ガン、食道ガン、卵巣ガン、肉腫、皮膚ガンが試験され、そしてプレプロ TRHの発現についてネガティブであることが見出された。免疫反応性TRHは、神経稜から誘導されたヒト腫瘍で同定されていることに留意されたい(Wilber,J.F.， Clin．Endocr．59:3，1984)。 c. 悪性血症での発現：要約急性骨髄性白血病： 11ポジティブサンプル(49テスト) 慢性骨髄性白血病：ポジティブサンプルなし(5テスト) 急性リンパ性白血病：４ポジティブサンプル(15テスト) 慢性リンパ性白血病：ポジティブサンプルなし(2テスト) 多発性ミエローマ：ポジティブサンプルなし(1テスト) 従って、プレプロTRH遺伝子の発現は、急性白血病サンプルの23％で見出された。この結果は、急性白血病で見られる最も頻発するクロモソーム異常についても示すことができる： t(9;22)(q34;q11)：１ポジティブサンプル(3テスト) t(8;21)(q22;q22)： 11ポジティブサンプル(12テスト) t(3;21)(q26;q22)：１ポジティブサンプル(2テスト) t(12;21)(p13;q22)：２ポジティブサンプル(2テスト) Inv(16)(p13;q22)：２ポジティブサンプル(8テスト) t(15;17)(q22;q21)：ポジティブサンプルなし(4テスト) 11q23転位：ポジティブサンプルなし(3テスト) トリソミー８：ポジティブサンプルなし(4テスト) del 5/5q又はdel 7/7q：３ポジティブサンプル(8テスト) 21q22に位置するAML1遺伝子の転位を有し、AML1転写因子をコードする、プレプロTRH遺伝子と急性白血病の間には明白な関連がある。 4. 結論プレプロTRH遺伝子は、ヒト急性白血病細胞で発現している。これは新しい概念である。この遺伝子の発現は、白血病誘発に関連するAML1遺伝子を含むクロモソーム転位に関する。この遺伝子は、中枢神経系に位置する正常組織で発現する。しかしながら、プレプロTRHタンパクは、修飾されたトリペプチド神経ホルモンTRHを生成するために、神経視床下部細胞で特異的な酵素経路を通じて切断される。プレプロTRHは、白血病細胞中で異なる切断をされる。それは細胞コンパートメント内に蓄積され、ここでペプチドは効率的に切断され、そしてHLAクラスI分子へ提示される。この場合、白血病細胞は強い抗原性を有することになる、一方、神経ではそうではない。さらにCNSからの細胞は、細胞-仲介免疫系に対して保護されている。プレプロTRH遺伝子は、白血病細胞で発現するが、正常骨髄ばかりか正常PBLでも発現しない。従って、RT-PCRによるその特異的かつ鋭敏な同定又はその他の方法は、白血病特異的腫瘍マーカーとして、最小の疾病の痕跡(minimal residual diseaseの同定のため、又は化学療法施行後の治療に対する応答の定量的評価のために、潜在的に有用である。例３：トリプターゼ-L 1. cDNAクローニング：cDNAライブラリNVB329を上記例２の詳細のように作製した。NVB329 cDNAライブラリのBフラクションは、40,000コロニーを増幅したフラグメントSIAX DP2-04の配列から誘導された³³P-ラベルオリゴヌクレオチドプローブとハイブリダイズさせることにより、トリプターゼ-Lクローンについてスクリーニングされた。3コロニーがポジティブであることが見出され、それぞれが、正しい方向に配向された±2.2-2.5kbインサートを有するプラスミド(NVB352/1 、2、3)を含んでいた。 2. シーケンス：３つのうち２つの独立インサートNVB352/1とNVB352/3は、Delta-Taqシーケンスキット(Amarsham)を使用して、シーケンスされ、そしてクローンNVB352/2の部分配列が決定された(配列番号：５；図２及び３を参照されたい)。この３つのcDNA は、同一の一次RNA転写体から得られ、その配列は５つの公表されているトリプターゼmRNAs(トリプターゼアルファ、ベータ、I、II、III)の配列と強いホモロジーを有する。３つのcDNAクローンは、トリプターゼmRNA配列中に存在しない１又は２以上のセグメントを含み、しかもイントロンの開始及び終末で見出されるものと同様のコンセンサスヌクレオチドを含む。５つの公知のトリプターゼ遺伝子のゲノムDNAは、同じ位置でイントロンを含む。従って我々は、3cDNAクローン中のこれらの付加的配列は未切断のイントロンであると思料する。未切断のイントロン配列を除外する場合には、推定されるタンパク配列は、トリプターゼタンパクとかなり同一であり、そしてセリンプロテアーゼ活性のためのコンセンサスアミノ酸は保存されている。タンパク配列は、mRNA中で未切断イントロンにより修飾されていることに留意されたい。 3. 遺伝子の発現：正常、白血病及び固形腫瘍組織中でのトリプターゼ-L遺伝子の発現は、ここでのプロトコルで詳細に示したように、RT-PCRにより試験された。 a. 正常組織での発現：ポジティブシグナルは、以下の正常組織サンプル：胎児及び成人脳、大腸、肝臓、卵巣、皮膚、胎盤、肺、腎臓、睾丸、子宮内膜、膀胱、正常末梢血白血球、正常骨髄中で見出されなかった。トリプターゼは、肥満細胞中で特異的に発現している遺伝子であることに留意されたい。我々は、RT-PCRによる、正常肥満細胞中のトリプターゼ-L発現をまだ行っていない。 b. 固形腫瘍での発現：以下の腫瘍組織：悪性メラノーマ、乳ガン、咽頭ガン、肺NSCLC、膀胱ガン、胃ガン、肺SCLC、精巣腫瘍、子宮ガン、直腸ガン、大腸ガン、舌ガン、食道ガン、卵巣ガン、肉腫、皮膚ガンが試験され、そしてトリプターゼ-Lの発現についてネガティブであることが見出された。 c. 悪性血症での発現：現在のところ13サンプルが試験された(詳細なデータは別添する)。６つが、トリプターゼ-Lの発現についてポジティブであり、それらの全てが、AMLsであった。サンプルサイズが小さかったため、我々は統計的結論を出すことができなかったが、３つのポジティブサンプルが、t(8;21)転位を有するAMLsである。 4. 結論トリプターゼ-L遺伝子は、急性ヒト白血病細胞細胞で発現しているが、正常骨髄ばかりか、正常PBLにおいても発現していない。その発現は、試験された正常組織では見出されていないが、正常肥満細胞はこの遺伝子を発現することができる。この遺伝子の発現は、t(8;21)クロモソーム転位に関係しているといえる。トリプターゼ-L遺伝子は、白血病細胞で発現するが、正常骨髄ばかりか正常PB Lでも発現しない。従って、RT-PCRによるその特異的かつ鋭敏な同定又はその他の方法は、白血病特異的腫瘍マーカーとして、もっとも小さい疾病の痕跡の同定のため、又は化学療法施行後の治療に対する応答の定量的評価のために有用である。例4:SIAX DP2-64/Oct-T1 1．cDNAクローニング：cDNAライブラリNVB329を上記例２の詳細のように作製した。NVB329 cDNAライブラリのBフラクションは、40,000コロニーを、フラグメントSIAX cDNAから増幅された³²P-ラベルPCRプローブとハイブリダイズさせることにより、SIAX DP2-64クローンについてスクリーニングされた。１コロニーがポジティブであることが見出された(クローンCHM329/2-15)。同一ライブラリは、4 0,000コロニーを、フラグメントSIAX cDNAから増幅された³²P-ラベルPCR プローブとハイブリダイズさせることにより、SIAX DP2-64クローンについてスクリーニングされた。11コロニーがポジティブであることが見出された(クローンCHM363/3、5、8)。 2．シーケンス：クローンCHM329/2-15は、Delta-Taqシーケンスキット(Amersham )を使用して、完全にシーケンスされた(配列番号：7；図4-6を参照されたい)。その3'の半分は、公知の遺伝子とホモロジーを有さないが、一方でその5'は転写因子のPOUファミリーのメンバーであるOct-T1遺伝子の3'末端と完全に一致している。(Bhargava A.K．et al.，Differential expression of 4 members of the POU family of proteins in activated and PMA-treated Jurkat T c ells.Proc.Natl.Acad.Scj．90:10260-10264，Nov．1993) クローンCHM363/3、CHM363/5及びCHM363/8は、それらの5'末端でシーケンスされ、それぞれは完全にOct-T1 mRNA配列と相同的であった(図４参照)。クローンC HM363/5は、ほとんど完全にシーケンスされ(図５参照)、そして3'未翻訳領域での小さな差異を伴うが、Oct-T1配列にほとんど完全に一致する。従って我々のSI AX DP2-64は、すでに同定されているOct-T1 mRNAと同一であると結論できる。公表された配列は3'末端を欠失していることが明らかである。我々は、ポリ-Aテールと一緒になった失われていた600塩基対をクローン化し、そしてシーケンスした。 3. 遺伝子の発現：正常、白血病及び固形腫瘍組織中でのOct-T1遺伝子の発現は、ここでのプロトコルで詳細に示したように、RT-PCRにより試験された。 a. 正常組織での発現：ポジティブシグナルは、以下のサンプル：成人脳、大腸、肝臓、卵巣、皮膚、胎盤、肺、腎臓、子宮内膜、膀胱、正常末梢血白血球、正常骨髄中では見出されなかった。ポジティブシグナルは、胎児睾丸サンプルを除く、睾丸サンプル全てで同定された。 b. 固形腫瘍での発現：以下の腫瘍組織：悪性メラノーマ、乳ガン、咽頭ガン、肺NSCLC、膀胱ガン、胃ガン、肺SCLC、精巣腫瘍、子宮ガン、直腸ガン、大腸ガン、舌ガン、食道ガン、卵巣ガン、皮膚ガンが試験され、そしてOct-T1遺伝子の発現についてネガティブであることが見出された。ポジティブシグナルは、未分化の肺肉腫で得られたが、４つの他の肉腫ではネガティブであることが見出された。 c. 悪性血症での発現：要約：急性骨髄性白血病：６ポジティブサンプル(49テスト) 慢性骨髄性白血病：ポジティブサンプルなし(5テスト) 急性リンパ性白血病： 11ポジティブサンプル(15テスト) 慢性リンパ性白血病：ポジティブサンプルなし(2テスト) 多発性ミエローマ：ポジティブサンプルなし(1テスト) 従って、Oct-T1遺伝子の発現は、急性骨髄性白血病サンプル11％及び急性リンパ性白血病サンプル73％で見出された。この結果は、急性白血病で見られる最も頻発するクロモソーム異常についても示すことができる： t(9;22)(q34;q11)：１ポジティブサンプル(3テスト) t(8;21)(q22;q22)： 10ポジティブサンプル(11テスト) t(3;21)(q26;q22)：ポジティブサンプルなし(2テスト) t(12;21)(p13;q22)：２ポジティブサンプル(2テスト) Inv(16)(p13;q22)：ポジティブサンプルなし(8テスト) t(15;17)(q22;q21)：ポジティブサンプルなし(4テスト) 11q23転位：ポジティブサンプルなし(3テスト) トリソミー８：ポジティブサンプルなし(4テスト) del 5/5q又はdel 7/7q：３ポジティブサンプル(8テスト) 21q22に位置するAML1遺伝子の転位を有し、AML1転写因子をコードする、Oct-T1 遺伝子発現と急性白血病の間には明白な関連がある。 4. 結論 Oct-T1遺伝子は、ヒト急性白血病細胞細胞で発現している。この遺伝子は、全てにおいて特に頻発的に発現している。この遺伝子の発現は、白血病誘発に関係するAML1遺伝子を含むクロモソーム転位に関係する。従って、HLAクラスI分子により提示されるペプチドの形態でOct-T1タンパクから誘導される抗原に対して、白血病患者を免疫すること、そして遺伝子を発現する白血病細胞の表面で発現することを可能にする。これらの抗原が睾丸胚細胞では提示されないのは、これらがHLAクラスI分子を発現しないからである。 Oct-T1遺伝子は、白血病細胞で発現するが、正常骨髄ばかりか、正常PBLでも発現しない。従って、RT-PCRによるその特異的かつ鋭敏な同定又はその他の方法は、白血病特異的腫瘍マーカーとして、もっとも小さい疾病の痕跡の同定のため、又は化学療法施行後の治療に対する応答の定量的評価のために、潜在的に有用である。例５：プレプロTRH、トリプターゼ-L及びOct-T1/SIAX DP2-64遺伝子の発現のためのRT-PCRアッセイ腫瘍サンプルからのトータルRNAの単離(-80℃での急速凍結)は、グアニジンイソチアネート/塩化セシウム法(Davis et al、上記)により行われた。cDNA合成は、オリゴ(dT)₁₅との延伸により達成される。そしてcDNAは、それぞれ試験された遺伝子にかなり特異的なオリゴヌクレオチドプライマーのペアと共にPCRにより増幅される。RNAが分解しないことを確実にするために、β-アクチンに特異的なプライマーと共にPCRアッセイを行った。 1. cDNA合成試験されるRNAの濃度は、トータルRNA/3.25μlを水で1μlに調節した。以下の試薬を試験管中で混合した：逆転写酵素バッファー5X (Life Technologies Inc.，Gaiththersburg，MD) 4μl dATP10mM 1μl dCTP10mM 1μl dGTP10mM 1μl dTTP10mM 1μl ジチオスレイトール100mM 2μl オリゴ(dT)₁₅20μM 2μl Rnasin40単位/μl(Promega Corp.) 0.5μl M-MLV逆転写酵素200単位/μl (Life Technologies Inc.) 1μl テンプレートRNA2μgを添加 6.5μl 全量： 20μl 反応成分は混合され、42℃で60分間インキュベートされた。そして混合物を氷上で冷却した。最終量を100μlにするために水を80μl加えた。混合物を、PCRで使用するまで、-20℃で保存した。 2. PCR増幅 a. プライマー b. PCR反応以下の試薬を氷中におかれた反応チューブで混合した： H₂O： 18.5μl PCRバッファー10X(Dynazyme)： 2.5μl dNTP(それぞれ10mM)： 0.25μl センスプライマー(20μM)： 0.5μl アンチセンスプライマー(20mM)： 0.5μl Dynazyme： 0.25μl cDNAを加え(50ngのトータルRNAに相当する2.5μl)、反応混合物を混合した。ミネラルオイル(Sigma M-3516)1滴をPCR溶液の表面に重層した。反応チューブを、増幅のためサーマルサイクラーに移した。ポジティブコントロール：SIAX/LB-1079 cDNA;ネガティブコントロール：水サーマルサイクル :PCR反応は以下のサイクルで行われた：第一変性： 94°５分間変性： 94°１分間アニーリング：プレプロTRH プレプロTRHの増幅について72°１分間 28サイクル：トリプターゼ-L トリプターゼ-Lの増幅について59°２分間35サイクル：Oct-T1 Oct-Tlの増幅について63°２分間27サイクル：β-アクチン β-アクチンの増幅について68°２分間2 3サイクル延伸： 72°３分間最終延伸： 72°15分間反応産物は、アガロースゲル電気泳動で使用されるまで４℃で保存された。 3. ゲル電気泳動等量(10μl)のPCR反応産物をエチジウムブロマイドで染色された１％アガロースゲルで電気泳動した。表1: 悪性血症での遺伝子発現注記結果は、ポジティブコントロール(SIAX)と比較して、アガロースゲルの相対的輝度として示し、任意に+++を割り当てた。(+、++、+++はポジティブとみなし、- 、+/-はネガティブとみなす) 例６：腫瘍排除抗原をコードする白血病関連遺伝子の部分の同定第一の方法では、白血病関連遺伝子の１又は２以上の発現を示す自己腫瘍細胞により提示される抗原に対する入手可能なCTLクローンは、プレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1遺伝子及びBrichard et al(Eur．J．Immunol.26:224- 230，1996)により記載されたような自己HLA対立遺伝子でトランスフェクトされたCOS細胞に対する特異性についてスクリーニングされた。プレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1のCTL認識は、細胞傷害性Tリンパ球からのTNFの放出を測定すること、又は⁵¹Crリリースアッセイ(Herin et al.，Int．J．Cancer 39 :390-396，1987)により同定することができる。CTLクローンがトランスフェクトされたCOS細胞を特異的に認識する場合には、CTLにより認識されるペプチドをコードする遺伝子の領域を同定するために、コード配列のより短いフラグメントが作製され、そして試験される。プレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1 のフラグメントは、エキソヌクレアーゼIII消化又はPCRのような他の標準的な分子生物学的方法により作製される。合成ペプチドは、抗原の正確な配列を確認するために、作製され、そして試験される。また、CTLクローンは、患者の末梢血リンパ球(PBLs)をプレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1ポリペプチドをコードするDNAクローン(例えば、配列番号1、3、5及び／又は7)でトランスフェクトされた自己正常細胞又は想定されるタンパクに相当する合成ペプチドを有する放射線照射されたPBLsで刺激し、そしてプレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1クローン内で抗原性ペプチドを局在させるための適当なHLAクラスI分子に対して一致させることにより生成される(例えば、van der Bruggen et al.，Eur．J．Immunol.24:3038-3043,1994;M AGE3 peptides presented by HLA.A2を参照されたい)。プレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1が単離された白血病細胞の患者のHLAタイプは、A2、A26 、B7、B56、Cw1、DR1、DR8、DQ4、DQ5である。プレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1 cDNAの任意により短いフラグメントは、PCRにより作製することができる。より短いフラグメントは、上記のようなTNFリリース又は⁵¹Crリリースを引き起こすために使用することができる。例７：腫瘍排除抗原をコードする白血病関連遺伝子の識別 TNF放出を引き起こすプレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOct-T1の最も短いフラグメントの部分に相当する合成ペプチドが作製された。漸次、より短いペプチドが、得られたHLA分子に最適なプレプロTRH、トリプターゼ-L及び／又はOc t-T1腫瘍排除抗原ペプチドを決定するために合成された。合成ペプチドは、公知の方法によりHLA発現細胞の溶解に関して試験された。例えば、所望のペプチドを提示するHLAがHLA-A2であると決定される場合には、T 2細胞を使用することができる。T2細胞は、抗原プロセシングの欠損の結果として外来ペプチドを提示するための増加された容量を有するHLA-A2⁺細胞である。T 2細胞をプレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1のCTL応答部分に相当する合成ペプチドと混合した。CTL細胞を添加し、ペプチドがHLA-A2を生じているT2細胞の溶解を効率的に刺激することを決定するために、溶解を４時間後に測定する。他のHLAを発現している細胞は当該技術で周知であるか、又は特異的なHLAクローンでトランスフェクションにより作製することができる。合成ペプチドの最適サイズを決定するために、減少したサイズのペプチドを、ペプチドのアミノ末端又はカルボキシ末端から１アミノ酸を逐次除去することにより、上記で決定されたペプチドの配列に基づいて、合成する。これらのペプチドは、用量応答アッセイにより、CTL細胞による適当なHLA発現細胞の細胞溶解を誘導するための能力について試験される。凍結乾燥ペプチドをDMSO中に20mg/ml で溶解し、10mM酢酸中2mg/mlに希釈して、-80℃で保存した。標的細胞、例えばH LA-A2⁺T2細胞を上記のように⁵¹Crで37℃で１時間ラベルし、次いで未結合ラベルを除去するために、連続的に洗浄する。ペプチドとHLAの相互作用の必 24:759-764，1994)のような抗HLA-A2抗体で前処理することもでき、そして37℃ で30分間、様々な濃度のペプチドの存在下、96ウェルマイクロプレートでインキュベートされる。HLAにより提示されるペプチドを認識するCTLsは、30：１のエフェクター：標的比率で、等量の培地に添加される。クロミウム-51リリースは４時間後に測定される。例８:CTLsによる白血病関連遺伝子に関する遺伝子の相同ペプチドの認識の同定上記で認識されるように、Oct-T1及びトリプターゼ-Lは、他のOctファミリー転写因子及び他のトリプターゼに対して高いアミノ酸ホモロジーを有する。Oct- T1及び／又はトリプターゼ-Lから誘導される腫瘍排除抗原がこれらの遺伝子に特異的であることを示すために、Oct-T1及びトリプターゼ-Lそれぞれのタンパクでの位置に相当する他のOct及びトリプターゼタンパクのペプチドを合成し、上記のような用量応答-クロミウムリリースアッセイで使用することができる。この実験は、TRAsから誘導されるOct-T1及び／又はトリプターゼ-Lの特異的な同定を可能にし、Oct-T1及び／又はトリプターゼ-Lを発現するが、相同的な遺伝子を発現しない、細胞の溶解を選択的に引き起こすTRAsを選択することができる。例９:正常細胞は白血病関連遺伝子を発現する細胞を溶解するCTLsにより溶解されないこの例は、上記で決定されたペプチドを誘導する白血病関連遺伝子とのインキュベーションを行った場合と行わなかった場合における、種々のセルラインでのCT L溶解実験を記載する。EBV(SIAX-EBV)でトランスフォームされた患者SIAXからの SIAX白血病細胞、正常B細胞及び同一患者(SIAX-PBL)からの正常末梢血リンパ球を、用量応答アッセイでCTL細胞による溶解について試験した。これらの細胞を、上記で詳細に示した用量応答アッセイにおいて最適になるように決定されたエフェクター/標的比率でCTLsとインキュベートし、そして上記のような溶解に関してアッセイした。CTLsによるSIAX白血病細胞のみの溶解は、SIAX-EBV及びSIAX -PBL細胞がCTLsにより認識されないことを示すので、そのような細胞はプレプロ TRH、トリプターゼ-L又はOct-T1タンパクから誘導された腫瘍排除抗原は通常発現していない。プレプロTRH、トリプターゼ-L又はOct-T1から誘導されたペプチドを適用した場合に、これらの細胞がCTLにより溶解されるかどうかを次に決定する。上記の実験を基本として選択されたペプチドが、CTLにより、適当なHLAを発現するSIAX 白血病細胞、SIAX-EBV細胞、及び非自己細胞の細胞溶解を誘発する能力を有するか否かについて、前記の例のような用量応答アッセイにおいて試験した。好適なペプチドを適用したSIAX-EBVとSIAX-PBLは、CTLsにより溶解されないが、好適なペプチドを適用したSIAX白血病細胞と非自己細胞は、CTLsにより溶解される。本発明の他の側面は、当業者にとって自明であり、ここで繰り返す必要はないであろう。使用された用語と表現は、記述のための用語として使用されたものであって、これに限定されるものではない。そのような用語と表現の使用により、記載された特徴の均等物及びその一部を除外する意図はなく、本発明の範囲内で様々な改良が可能であることを認識すべきである。配列表の後に請求の範囲が続く。

【手続補正書】【提出日】平成１２年３月２８日（２０００．３．２８）【補正内容】Ｉ．請求の範囲別紙のとおり II．明細書１）明細書１４頁１８行の「同定ために」の記載を「同定するために」と訂正します。２）同、２９頁１３行及び１６行（計２ケ所）の「補体」の記載を「相補性」と訂正します。別紙請求の範囲１．白血病関連核酸分子の発現により特徴づけられる疾病の診断方法であって、対象から分離した生物学的サンプルを白血病関連核酸分子に特異的な試薬と接触させる工程、及び疾病の同定として、試薬と白血病関連核酸分子との間の相互作用を測定する工程を含む、前記診断方法。２．白血病関連核酸分子が、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５および配列番号：７からなる群より選択される１のヌクレオチド配列を有する分子に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、請求項１に記載の診断方法。３．試薬が、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５および配列番号：７、ならびにそれらのフラグメントならびにそれらの相補鎖からなる群より選択される１のヌクレオチド配列を有する分子を含む核酸分子である、請求項２に記載の診断方法。４．生物学的サンプルが非胎児脳組織、非肥満細胞組織又は非胎児睾丸組織から分離されたものである、請求項２に記載の診断方法。５．相互作用が、核酸分子の少なくとも一部を増幅することにより測定される、請求項１に記載の診断方法。６．白血病関連ポリペプチドの発現により特徴づけられる疾病の診断方法であって、対象から分離した生物学的サンプルを白血病関連ポリペプチドに結合する試薬と接触させる工程、および疾病の同定として、試薬と白血病関連ポリペプチドとの間の結合を測定する工程を含むことを特徴とする、前記診断方法。７．白血病関連ポリペプチドが、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６および配列番号：８ならびにそれらのフラグメントからなる群より選択される１のアミノ酸配列を有するポリペプチドである、請求項６に記載の診断方法。８．白血病関連ポリペプチドが配列番号：２のアミノ酸配列を有し、かつ生物学的サンプルが非胎児脳組織から分離されたものであるか、又は白血病関連ポリペプチドが配列番号：４または配列番号：６のアミノ酸配列を有し、かつ生物学的サンプルが非肥満細胞組織から分離されたものであるか、又は白血病関連ポリペプチドが配列番号：６のアミノ酸配列を有し、かつ生物学的サンプルが非胎児睾丸組織から分離されたものである、請求項７に記載の診断方法。９．試薬が抗体である、請求項６に記載の診断方法。１０．白血病関連核酸の発現を減少させる試薬を含むことを特徴とする、白血病関連核酸の発現により特徴づけられる疾病の治療薬。１１．白血病関連核酸の発現を減少させる試薬がアンチセンス核酸であり、アンチセンス核酸が、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５および配列番号：７からなる群より選択される１の白血病関連核酸とハイブリダイズする、請求項１０に記載の治療薬。１２．白血病関連核酸分子の発現を減少させる試薬の、白血病関連核酸分子の発現により特徴づけられる疾病の治療薬としての使用。１３．白血病関連核酸の発現を減少させる試薬がアンチセンス核酸であり、アンチセンス核酸が、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５および配列番号：７からなる群より選択される１の白血病関連核酸とハイブリダイズする、請求項１２に記載の治療薬の使用。１４．配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５および配列番号：７からなる群より選択される１の白血病関連核酸と結合し、かつ白血病関連核酸の発現を減少させるアンチセンス核酸、および薬学的に許容される担体を含む、組成物。１５．白血病関連ポリペプチド前駆体の発現の存在を検出するためのキットにおいて、一組の単離された核酸分子であって、該一組の単離された核酸分子のそれぞれは本質的に、（ａ）配列番号：１の１２−３２のヌクレオチド連続セグメント、（ｂ）配列番号：３の１２−３２のヌクレオチド連続セグメント、（ｃ）配列番号：５の１２−３２のヌクレオチド連続セグメント、（ｄ）配列番号：７の１２−３２のヌクレオチド連続セグメント、（ｅ）“（ａ）”の相補鎖、（ｆ）“（ｂ）”の相補鎖、（ｇ）“（ｃ）”の相補鎖および（ｈ）“（ｄ）”の相補鎖からなる群より選択される１の分子からなり、これらの連続セグメントは重複しない、前記核酸分子、を含む、前記キット。１６．一組の単離された核酸分子が、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５および配列番号：７からなる群より選択される１の単離された核酸分子の少なくとも一部を選択的に増幅するように構築され、配列されている、請求項１５に記載のキット。１７．（ａ）ストリンジェントな条件下で配列番号：３および配列番号：５からなる群より選択される１のヌクレオチド配列を有する核酸分子とハイブリダイズし、かつトリプターゼ−Ｌ（tryptase-L）白血病関連ポリペプチドをコードする核酸分子、（ｂ）遺伝コードの縮重によりコドン配列において（ａ）の核酸分子と異なる核酸分子、及び（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の相補鎖、からなる群より選択される１の単離された核酸分子。１８．配列番号：３または配列番号：５の核酸配列を含有する、請求項１７に記載の単離された核酸分子。１９．（ａ）ヌクレオチド長が１２から１０１２の間であり、配列番号：３の４８７から１４９９のヌクレオチドのユニークフラグメント、（ｂ）ヌクレオチド長が１２から１０１２の間であり、配列番号：５の４８７から１４９９のヌクレオチドのユニークフラグメント、（ｃ）ヌクレオチド長が１２から１０９の間であり、配列番号：５の１６６５から１７７４のヌクレオチドのユニークフラグメント、および（ｄ）（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の相補鎖であって、１２個から３２個の間の連続ヌクレオチドである上記相補鎖、からなる群より選択される１の単離された核酸分子。２０．プロモーターに作動的に結合された、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の単離された核酸分子を含有する、発現ベクター。２１．請求項２０に記載の発現ベクターでトランスフォームまたはトランスフェクトされている、ホストセル。２２．請求項１７または１８に記載の単離された核酸分子によりコードされている、単離されたポリペプチド。２３．長さが９アミノ酸から１８９アミノ酸の間であり、配列番号：４または配列番号：６のユニークフラグメントを含み、ユニークフラグメントがポリペプチド結合試薬に結合してもよい、単離されたポリペプチド。２４．ユニークフラグメントが抗体または細胞傷害性Ｔリンパ球に結合する、請求項２３に記載の単離されたポリペプチド。２５．請求項１７又は１８に記載の単離された核酸分子によりコードされるタンパクに選択的に結合する、単離されたポリペプチド。２６．抗体のＦａｂフラグメント若しくはＦ（ａｂ）₂フラグメントであるか、又は抗体のフラグメントであって、該タンパクに選択的なＣＤＲ３領域を含む該フラグメントである、請求項２５に記載の単離されたポリペプチド。２７．モノクローナル抗体である、請求項２５に記載の単離されたポリペプチド。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 16/00 Ｃ０７Ｋ 16/00 Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＭＧ０１Ｎ 33/53 33/566 33/566 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (72)発明者デスメ，シャルルベルギー王国Ｂ―1200 ブリュッセル、アブニューイッポクラット 7459 (72)発明者ルカ，ソフィーベルギー王国Ｂ―1200 ブリュッセル、アブニューイッポクラット 7459 (72)発明者ブーン−ファルール，ティエリーベルギー王国Ｂ―1200 ブリュッセル、アブニューイッポクラット 7459

Claims

【特許請求の範囲】１．白血病関連核酸分子の発現により特徴づけられる疾病の診断方法であって、対象から分離した生物学的サンプルを白血病関連核酸分子に特異的な試薬と接触させる工程であって、白血病関連核酸分子が、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５および配列番号：７からなる群より選択される１のヌクレオチド配列を有する分子に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする前記工程、及び疾病の同定として、試薬と白血病関連核酸分子との間の相互作用を測定する工程を含む、前記診断方法。２．試薬が、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５および配列番号：７、ならびにそれらのフラグメントならびにそれらの相補鎖からなる群より選択される１のヌクレオチド配列を有する（分子を含む）核酸分子である、請求項１に記載の診断方法。３．試薬が、配列番号：１またはそのフラグメントのヌクレオチド配列を有する核酸分子を含む、請求項１に記載の診断方法。４．生物学的サンプルが非胎児脳組織から分離されたものである、請求項３に記載の診断方法。５．試薬が、配列番号：３、配列番号：５またはそれらのフラグメントのヌクレオチド配列を有する核酸分子を含む、請求項１に記載の診断方法。６．生物学的サンプルが非肥満細胞組織から分離されたものである、請求項５に記載の診断方法。７．試薬が、配列番号：７またはそのフラグメントのヌクレオチド配列を有する核酸分子を含む、請求項１に記載の診断方法。８．生物学的サンプルが非胎児睾丸組織から分離されたものである、請求項７に記載の診断方法。９．相互作用が、核酸分子の少なくとも一部を増幅することにより測定される、請求項１に記載の診断方法。１０．白血病関連ポリペプチドの発現により特徴づけられる疾病の診断方法であって、対象から分離した生物学的サンプルを白血病関連ポリペプチドに結合する試薬と接触させる工程、および疾病の同定として、試薬と白血病関連ポリペプチドとの間の結合を測定する工程を含むことを特徴とする、前記診断方法。１１．白血病関連ポリペプチドが、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６および配列番号：８ならびにそれらのフラグメントからなる群より選択される１のアミノ酸配列を有するポリペプチドである、請求項１０に記載の診断方法。１２．白血病関連ポリペプチドが配列番号：２のアミノ酸配列を有し、生物学的サンプルが非胎児脳組織から分離されたものである、請求項１１に記載の診断方法。１３．白血病関連ポリペプチドが配列番号：４または配列番号：６のアミノ酸配列を有し、生物学的サンプルが非肥満細胞組織から分離されたものである、請求項１１に記載の診断方法。１４．白血病関連ポリペプチドが配列番号：６のアミノ酸配列を有し、生物学的サンプルが非胎児睾丸組織から分離されたものである、請求項１１に記載の診断方法。１５．試薬が抗体である、請求項１０に記載の診断方法。１６．白血病関連核酸の発現により特徴づけられる疾病を有する対象を治療する方法であって、白血病関連核酸の発現を減少させる効果的な量であって、疾病を改善するのに十分な量の試薬を対象に投与する工程を含むことを特徴とする、前記方法。１７．白血病関連核酸の発現を減少させる試薬がアンチセンス核酸である、請求項１６に記載の方法。１８．アンチセンス核酸が、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５および配列番号：７からなる群より選択される１の白血病関連核酸とハイブリダイズする、請求項１７に記載の方法。１９．配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５および配列番号：７からなる群より選択される１の白血病関連核酸と結合し、かつ白血病関連核酸の発現を減少させるアンチセンス核酸、および薬学的に許容される担体を含む、組成物。２０．白血病関連ポリペプチド前駆体の発現の存在を検出するためのキットであって、一組の単離された核酸分子であって、該一組の単離された核酸分子のそれぞれは本質的に、（ａ）配列番号：１の１２−３２のヌクレオチド連続セグメント、（ｂ）配列番号：３の１２−３２のヌクレオチド連続セグメント、（ｃ）配列番号：５の１２−３２のヌクレオチド連続セグメント、（ｄ）配列番号：７の１２−３２のヌクレオチド連続セグメント、（ｅ）“(ａ)”の相補鎖、（ｆ）“(ｂ)”の相補鎖、（ｇ）“(ｃ)”の相補鎖および（ｈ）“(ｄ)”の相補鎖からなる群より選択される１の分子からなり、これらの連続セグメントは重複しない、前記核酸分子、を含む、前記キット。２１．一組の単離された核酸分子が、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５および配列番号：７からなる群より選択される１の単離された核酸分子の少なくとも一部を選択的に増幅するように構築され、配列されている、請求項２０に記載のキット。２２．一組の単離された核酸分子がＰＣＲプライマーであり、プライマーの一方が配列番号：１の連続セグメントであり、プライマーの他方が配列番号：１の連続セグメントの相補鎖である、請求項２０に記載のキット。２３．一組の単離された核酸分子がＰＣＲプライマーであり、プライマーの一方が配列番号：３の連続セグメントであり、プライマーの他方が配列番号：３の連続セグメントの相補鎖である、請求項２０に記載のキット。２４．一組の単離された核酸分子がＰＣＲプライマーであり、プライマーの一方が配列番号：５の連続セグメントであり、プライマーの他方が配列番号：５の連続セグメントの相補鎖である、請求項２０に記載のキット。２５．一組の単離された核酸分子がＰＣＲプライマーであり、プライマーの一方が配列番号：７の連続セグメントであり、プライマーの他方が配列番号：７の連続セグメントの相補鎖である、請求項２０に記載のキット。２６．（ａ）ストリンジェントな条件下で配列番号：３および配列番号：５からなる群より選択される１のヌクレオチド配列を有する核酸分子とハイブリダイズし、かつトリプターゼ−Ｌ（tryptase-L）白血病関連ポリペプチドをコードする核酸分子、（ｂ）遺伝コードの縮重によりコドン配列において（ａ）の核酸分子と異なる核酸分子、及び（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の相補鎖、からなる群より選択される１の単離された核酸分子。２７．配列番号：３または配列番号：５の核酸配列を含有する、請求項２６に記載の単離された核酸分子。２８．（ａ）ヌクレオチド長が１２から１０１２の間であり、配列番号：３の４８７から１４９９のヌクレオチドのユニークフラグメント、（ｂ）ヌクレオチド長が１２から１０１２の間であり、配列番号：５の４８７から１４９９のヌクレオチドのユニークフラグメント、（ｃ）ヌクレオチド長が１２から１０９の間であり、配列番号：５の１６６５から１７７４のヌクレオチドのユニークフラグメント、および（ｄ）（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の相補鎖、からなる群より選択される１の単離された核酸分子。２９．少なくとも１４個の連続ヌクレオチドである、請求項２８に記載の単離された核酸分子。３０．少なくとも１５個の連続ヌクレオチドである、請求項２８に記載の単離された核酸分子。３１．少なくとも１６個の連続ヌクレオチドである、請求項２８に記載の単離された核酸分子。３２．少なくとも１７個の連続ヌクレオチドである、請求項２８に記載の単離された核酸分子。３３．少なくとも１８個の連続ヌクレオチドである、請求項２８に記載の単離された核酸分子。３４．少なくとも２０個の連続ヌクレオチドである、請求項２８に記載の単離された核酸分子。３５．少なくとも２２個の連続ヌクレオチドである、請求項２８に記載の単離された核酸分子。３６．１２個から３２個の間の連続ヌクレオチドである、請求項２８に記載の単離された核酸分子。３７．プロモーターに作動的に結合された、請求項２６〜３６のいずれか１項に記載の単離された核酸分子を含有する、発現ベクター。３８．請求項３７に記載の発現ベクターでトランスフォームまたはトランスフェクトされている、ホストセル。３９．請求項２６または２７に記載の単離された核酸分子によりコードされている、単離されたポリペプチド。４０．長さが９アミノ酸から１８９アミノ酸の間であり、配列番号：４または配列番号：６のユニークフラグメントを含む、単離されたポリペプチド。４１．ユニークフラグメントがポリペプチド結合試薬に結合する、請求項４０に記載の単離されたポリペプチド。４２．ユニークフラグメントが抗体または細胞傷害性Ｔリンパ球に結合する、請求項４１に記載の単離されたポリペプチド。４３．請求項２６又は２７に記載の単離された核酸分子によりコードされるタンパクに選択的に結合する、単離されたポリペプチド。４４．抗体のＦａｂフラグメントまたはＦ（ａｂ）₂フラグメントである、請求項４３に記載の単離されたポリペプチド。４５．抗体のフラグメントである、請求項４３に記載の単離されたポリペプチドであって、該フラグメントはタンパクに選択的なＣＤＲ３領域を含んでいる、前記ポリペプチド。４６．モノクローナル抗体である、請求項４３に記載の単離されたポリペプチド。