JP2001503242A - 少糖類アミノアルジトール及び検定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 当該化合物（たとえば酵素）の存在または当該化合物の試料中の空間的な分布を検出する方法を開示する。この方法は適切な支持材料を当該化合物と反応もしくは相互作用可能なマーカー物質で含浸または被覆する工程を含み、マーカー物質は検出可能な方法（たとえば、蛍光で、放射能でまたは着色されて）でラベルされていて、マーカー物質と当該化合物との反応または相互作用の生成物とは支持材料に対して実質的に異なった親和性を有している。この方法はさらに含浸された支持材料と試験下の試料とを接触させて、ラベルされたマーカー物質と試料中に存在するあらゆる標的化合物と反応または相互作用させる工程、適切な溶媒で未反応のラベルされたマーカー物質またはラベルされた反応生成物のいずれかを除去する工程、及び前記支持材料上の残存するラベルされたマーカー物質の存在を検出するか、または前記支持材料からのラベルされた反応生成物の放出を検出し、当該化合物の存在または不在の表示をもたらす工程を含む。マーカー物質は少糖類でよく、オリゴサッカリジル−１−アミノ−１−デオキシ−アルジトール(OAD)が特に好ましい。OADの製造方法も開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】 少糖類アミノアルジトール及び検定方法 本発明は、化合物、たとえば、酵素、たとえば、グリコシルヒドロラーゼ（グ リコシド結合の加水分解を触媒する酵素）、トランスグリコシラーゼ（トランス グリコシル化を触媒する酵素）及びリアーゼ（グリコシド結合の脱離開裂を触媒 する酵素）の活性の位置を突き止め、測定する方法に関する。 生きている生物は広範囲のグリコシルヒドロラーゼ及びトランスグリコシラー ゼ酵素を有し、それらは、キシログルカン、他のヘミセルロース、セルロース、 デンプン、グリコーゲン、キチン及びペクチン多糖類を包含する炭水化物基質に 作用することにより生物の生命において多数の多様な役割を演じる。これらの酵 素を検出し、測定する実験室的方法は、通常容器（たとえば試験管）中に入れた 適当な基質の水溶液を用い、それらを酵素−触媒化変化、たとえば、測色法、放 射化学法、クロマトグラフ法または粘度法によって監視する。 しかしながら、上記方法は時間がかかる傾向があり、酵素の多数の試料をスク リーニングするのに直ちには役立たない。さらに、上記方法は、標本、たとえば ゲル電気泳動図または生物の部分の内の酵素の分布または位置限定に関する空間 的な情報を直ちにはもたらさない。 １観点では、本発明は当該化合物の存在を検出または当該化合物の試料の内の 空間的な分布を検出する方法を提供し、その方法は当該化合物と反応または相互 作用可能なマーカー物質を適切な支持材料に含浸させるか、被覆する工程を含み 、そのマーカー物質は検出 可能な方法（たとえば蛍光で、放射能でまたは着色されて）でラベルされ、当該 化合物との反応または相互作用生成物とは支持材料に対して実質的に異なる親和 性を有するものであり、該方法はさらに試験すべき試料と前記含浸された支持材 料とを接触させて、試料中に存在するあらゆる標的化合物とラベルされたマーカ ー物質とを反応または相互作用させる工程、未反応のラベルされたマーカー物質 またはラベルされた反応生成物のいずれかを適切な溶媒で除去する工程及び前記 支持材料上に残存するラベルされたマーカー物質の存在または前記支持材料から のラベルされた反応生成物の放出を検出して、当該化合物の存在または不在の表 示を示す工程を含む。 本発明は他のものでない、ある炭水化物の、選択された溶媒における支持材料 に結合する能力を利用する。 好ましくは、当該化合物は酵素であって、マーカー物質はその酵素の基質であ る。その酵素のための前記基質はタンパク質、ペプチド、多糖類または少糖類で あってもよい。特に好ましい方法では、基質はオリゴサッカリジル−１−アミノ −１−デオキシ−アルジトールである。これらの化合物は出願人により開発され 、自体新規であると信じる。それらを本明細書の適当なところでは「OAD」と呼 び、この用語はＯ−グリコシル−１−アミノ−１−デオキシ−アルジトール、Ｏ −オリゴグリコシル−１−アミノ−１−デオキシ−アルジトール、Ｏ−グリコシ ル−６−アミノ−６−デオキシ−アルドン酸、Ｏ−オリゴグリコシル−６−アミ ノ−６−デオキシ−アルドン酸及び／またはそれらのラクトン、並びに関連する 還元的アミノ化の生成物を包含すると解すべきである。 ある場合には、還元炭水化物(reducing carbohydrate)が１つの還元部位を有 するのみならず前記還元炭水化物中にランダムに配置された２以上の還元部位を 有することが有利である。これらの追加 の還元部位は酸化剤、たとえば過沃素酸ナトリウムを用いて得ることができる。 本発明は、還元炭水化物とアンモニウム塩及び還元剤との反応を伴うOADの製 造方法も提供する。好ましくは、アンモニウム塩は炭酸水素アンモニウムであり 、還元剤はシアノ水素化硼素ナトリウムである。本発明のさらに好ましい特徴は 補助請求項に記載されている。 上述のように本発明の方法を酵素活性の検出及び／または、酵素の試料中の空 間的な分布を検出するのに用いることができる。特に（しかしながら排他的では ないが）本発明の方法を次の酵素、すなわち、トランスグリコシラーゼ、たとえ ば、デキストランスクラーゼ、アミノスクラーゼ、イヌロスクラーゼ、グリコー ゲンホスホリラーゼ、デンプンホスホリラーゼ、キシランシンターゼ、グルカン シンターゼ、ペクチンシンターゼ、グリコーゲンシンターゼ、デンプンシンター ゼ、カロース(callose)シンターゼ、キチンシンターゼ、グリコシルヒドロラー ゼ（内部作用性）、たとえばキシラナーゼ、エンドグルカナーゼ、キチナーゼ、 マンナナーゼ、ポリガラクツロナーゼ、β−アミラーゼ、アラビナナーゼ、ガラ クタナーゼ、ラムノガラクツロナーゼ、リアーゼ、たとえばペクチン／ペクテー ト リアーゼ、アルギネート リアーゼ、グリコシルヒドロラーゼ（外部作用性 ）、たとえば、α−アミラーゼ、アミログルコシダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラ ノシダーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ− グルコシダーゼ、α−Ｌ−フコシダーゼ、β−Ｄ−マンノシダーゼ、エキソ−ポ リガラクツロナーゼ、Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサイミダーゼ、α−Ｄ−キ シロシダーゼ、に用いることができる。 本発明の特定の態様を例として記載する。この例中で試験される 酵素は、キシログルカン エンドトランスグリコシラーゼ(XET)〔参照文献１〕 である。 １．ラベルされた少糖類の調製 還元少糖類 ４−Ｏ−〔４−Ｏ−〔４−Ｏ−〔６−Ｏ−α−Ｄ−キシロピラノ シル−β−Ｄ−グルコピラノシル〕−６−Ｏ−（２−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラ ノシル）−α−Ｄ−キシロピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル〕−６−Ｏ− （２−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−キシロピラノシル−β−Ｄ −グルコピラノシル〕−Ｄ−グルコース（「XLLG」、参照文献２の略称を用いて ）を、１ｇのシアノ水素化硼素ナトリウム(NaCNBH₃)を含有する炭酸水素アンモ ニウムの飽和水溶液の25mlに溶解し、暗所で25℃で７日間インキュベートして還 元的アミノ化をさせる。次いで乾燥により炭酸水素アンモニウムを除去し、XLLG の（ニンヒドリン反応性）アミノ化誘導体を、たとえばゲル浸透クロマトグラフ ィーまたはカチオン交換クロマトグラフィーにより精製する。生成物はオリゴサ ッカリジル−１−アミノ−１−デオキシアルジトール、すなわち、還元性末端Ｄ −グルコース成分が１−アミノ−１−デオキシ−Ｄ−グルシトールにより置換さ れた、XLLGの誘導体であると信じられる。 オリゴサッカリジル−１−アミノ−１−デオキシアルジトール（50mg）を３ml の３％硼砂（テトラ硼酸ジナトリウム、pH9.0〜9.5）に溶解し、0.75mlの乾燥し たジメチルホルムアミド(DMF)中の10mgのリサミン ローダミン スルホニルク ロリド〔Molecular Probes Inc.，米国から購入した〕の新たに調製した溶液を 撹拌しながら、徐々に添加し、混合物を暗所で１晩インキュベートする。さらに 10mgのリサミン ローダミン スルホニルクロリドを含有する0.75mlのDMFを加 え、混合物をさらに８時間インキュベートする。鮮や かなピンク色のオリゴサッカリジル−１−アミノ−１−デオキシアルジトール− リサミン−ローダミン複合体（conjugate，XLLGol-SRという）をゲル浸透クロマ トグラフィーに続いてＣ₁₈−シリカゲルカラムでの逆相クロマトグラフィーで精 製する。後者のカラムを水で洗浄した後、メタノールグラジエントを適用し、約 50％メタノール中にXLLGol-SRが溶離する。 ２．キシログルカン含浸紙の調製 ワットマン番号１ フィルターをキシログルカンの１％水溶液で湿らせ、乾燥 させる。XLLGol-SR調製物を0.2の580nm(Ａ₅₈₀)での吸収を示すのに必要なだけの 75％の水性アセトン中に希釈する。次いで、ワットマン番号１紙のキシログルカ ン被覆紙をこの溶液に通し、再乾燥する。この生成物を「XET紙」という。次にX ET紙の適当に寸法を合わせた片（たとえば72×108mm)を非水性接着剤で、非吸収 性媒体、たとえば透明なアセテートのシート上にはりつける。 ３．アッセイの実施 （ａ）水溶液中のXET活性についてのドットーブロット試験 （ｉ）XET活性について試験すべき源（たとえば成長する植物の茎）を適切な 緩衝液、たとえば10mMの塩化カルシウム及び10mMのジチオスレイトールを含有す る、pH5.5の250mMコハク酸塩中で均質化し、ホモジネートを遠心分離して、透明 な上清を得る。XET活性について試験してもよい他の試料は、クロマトグラフィ ーカラムから溶出された分画、植物細胞懸濁培養からの使用済み培地の試料また はXET活性に関する効果を調査すべき物質で処理されたXETの試料を包含する。 （ii）各酵素溶液の点滴をXET紙の片のしるしをつけた位置にピペットで移す 。点滴が４μｌなら、試料の間のスペースは都合良く９mmにすることができる（ 真中−真中、すなわち、標準96−ウエル 試験プレート型のように）。 （iii）次にXET紙をすばやく（点滴が乾く前に）、２枚のプラスチックシート （たとえば、オーバーヘッドプロジェクター上に用いられるようなアセテートシ ート）の間に固定し、たとえば20℃で１時間インキュベートする。 （iv）次にインキュベートされたXET紙及びそのプラスチック裏材を、紙から 未反応XLLGol-SRを除去するが、XET−触媒化トランスグリコシル化によってキシ ログルカン中に取り込まれたいかなるXLLGol-SRをも除去しない溶媒〔たとえば 新たに調製されたエタノール／ぎ酸／水（容積で１：１：１)〕の約150mlを含有 している皿に入れる（紙の側を下にして）。紙を直ちにプラスチック裏材からは がす。 （ｖ）次に紙を流水中で５分間、次に約100mlのアセトンで５分間すすぎ、次 に完全に乾燥させる。所望なら、乾燥を80℃のオーブン中の５分間の処理により 促進することができる。 （vi）次に紙を短波長の紫外線ランプ（たとえば、254nmで放射する。適切 な眼及び皮膚保護を着用すべきである）の下で調べた。活性XETはピンク色（オ レンジ−蛍光）の点滴により表示され、それはたとえば走査分光蛍光計を用いる ことにより量を測ることができる。この検定方法は、XET活性を促進または阻害 する物質の存在を試験するのに有用である。 （ｂ）たとえば、植物組織またはザイモグラム内におけるXET活性の位置を突き 止めるための活性印刷XET紙をたとえば10mMの塩化カルシウム及び10mMのジチオ スレイトールを含有する、pH5.5の500mMコハク酸塩を噴霧することにより緩衝化 する。植物組織をスライスして露出された表面を作る。葉の表面領域上のXET活 性を記録するために、試験紙及び粗表面（たとえばサンドペーパー）の間に葉 をプレスするか、試験紙上で、非常に冷い（たとえば−80℃)、重い平らな金属 部分（これは連続して室温に達するようにさせる）の下に葉をプレスして組織破 壊を促進するのが有利であるかもしれない。次に、XET活性が記録されるべき、 露出された組織表面またはゲル電気泳動図または他の表面を、湿気のある紙上に 、酵素が紙上に移動するように約１分間プレスする。次に酵素源をXET−紙から 取り除き、上記（iii）〜（vi）の工程を行う。 上記例は、トランスグリコシラーゼ、XETに適用するものとして本発明を説明 する。この方法はグリコシルヒドロラーゼ酵素のアッセイにも適用できる。たと えば、XLLGol-SR（及びキシログルカン無し）を含浸させた、ワットマン番号１ 紙を、XLLGolの外(exo)−加水分解をいっしょに触媒する、グリコシルヒドロラ ーゼ（α−キシロシダーゼ、β−グルコシダーゼ及びβ−ガラクトシダーゼ）の 活性について試験するためのドットブロットとして用いることができる。このア ッセイを、工程（iv）において、紙から特定のサイズよりも小さいXLLGol-SRの 加水分解生成物を除去するがXLLGol-SR自身は除去しない溶媒（たとえば90％エ タノール）を選択し、工程（ｖ）がさらなる溶媒を伴なわず、乾燥だけである以 外は、上記３（ａ）に記載したのと同様な方法で行なう。したがって適切なグリ コシルヒドロラーゼ酵素の活性は、蛍光発光紙背景上に非蛍光性の点を生じる。 XLLGol-SRを調製するための上記方法は、蛍光で（または別な風に）ラベルさ れた還元少糖類または多糖類を製造する一般的に価値ある手段を構成するのに直 ちに適用できる。上記ラベルされた糖類（たとえばオリゴ−SR)は、 −デンプン代謝に関係するものを包含する、エンド及びエキソグリコシルヒド ロラーゼ並びにトランスグリコシラーゼについて の種々の酵素アッセイに −当該少糖類を、確実なマーカーとして機能する純粋なグリコシルヒドロラー ゼ、オリゴ−SRの使用と共にHPLCまたはTLCにより、検出し、分離し特徴づける のに、 −蛍光顕微鏡を用いることによって、XET活性の分布を組織化学的に位置づけ るために植物組織に、ラベルしていないキシログルカンを加えまたは加えずに、 適用するのに適切なプローブとして、用いることができる。 任意の還元少糖類から出発して、Ｏ−グリコシル−１−アミノ−１−デオキシ アルジトール及び／またはＯ−オリゴグリコシル−１−アミノ−１−デオキシア ルジトールを記載された（還元的アミノ化）方法により製造できる。類似の生成 物は、還元性末端が修飾された糖である少糖類から得られる。たとえば還元性末 端がヘクスロン酸成分である少糖類の場合には、反応生成物はＯ−オリゴグリコ シル−６−アミノ−６−デオキシ−アルドン酸またはそのラクトンである。任意 の還元性アミノ化反応のこれらの生成物も、たとえばニンヒドリンを用いる染色 により、それらのアミノ基により検出でき、自体 −少糖類のクロマトグラフィー及び電気泳動分析のために −酵素作用の活性調節因子として、 を包含する種々の目的のために利用することができる。 参照文献 〔１〕Fry SC，Smith RC，Renwick KF，Martin DJ，Hodge SK，Matthews KJ（19 92）：キシログルカン エンドトランスグリコシラーゼ、新規な植物からの壁を ゆるめる酵素活性。Biochemical Journal 282：p.821-828. 〔２〕Fry SC，York WS，Albersheim P，Darvill A，Hayashi T，Joseleau J-P ，Kato Y，Lorences EP，Maclachlan GA，McNeil M，Mort AJ，Reid JSG，Seitz HU，Selvendran RR，Voragen AGJ，White AR（1993）：キシログルカン由来の 少糖類由来の少糖類のための明白な命名法。Physiologia Plantarum 89：p.1-3

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】平成９年１１月１３日（１９９７．１１．１３） 【補正内容】 請求の範囲 １．試験下の試料中のトランスグリコシラーゼ酵素の存在を検出する方法であ って、前記方法は適切な支持材料を、トランスグリコシラーゼと相互作用可能な 少糖類を含むマーカー物質で含浸させる工程を含み、前記マーカー物質は検出可 能な方法でラベルされ、前記支持材料はさらにトランスグリコシラーゼ酵素のた めのラベルされていない共−基質を含浸されており、前記マーカー物質は、前記 トランスグリコシラーゼ酵素と前記マーカー物質及び前記共−基質との相互作用 生成物よりも前記支持材料に実質的に親和性が少なく、前記方法はさらに前記含 浸された支持材料を試験下の試料と接触させて、試料中に存在するあらゆるトラ ンスグリコシラーゼ酵素と前記ラベルされたマーカー物質とを相互作用させる工 程、反応しなかったラベルされたマーカー物質を適切な溶媒で除去する工程及び 、前記支持材料上に残存するラベルされたマーカー物質の存在を検出して、トラ ンスグリコシラーゼの存在または不在の表示を示す工程を含む前記方法。 ２．請求項１に記載の方法であって、 (ａ)(ｉ)トランスグリコシラーゼ酵素の活性についてのもしくは（ii）トラン スグリコシラーゼ活性を促進または阻害する物質の存在についての、水溶液のド ット−ブロットアッセイを実施するか、 （ｂ）植物組織内のトランスグリコシラーゼ活性の分布を研究するための組織 印刷を実施するか、または （ｃ）ザイモグラム上のトランスグリコシラーゼ活性の分布を研究するための ゲル電気泳動のブロットを実施するのに適切な前記方法。 ３．キシログルカン エンドトランスグリコシラーゼ(XET)の検出のための請 求項１または請求項２に記載の方法であって、前記マーカー物質はキシログルカ ンから誘導された少糖類であり、前記共−基質がキシログルカンである前記方法 。 ４．試験下の試料中のグリコシルヒドロラーゼ酵素の存在を検出する方法であ って、前記方法は適切な支持材料を検出可能な方法でラベルされた少糖類を含む マーカー物質で含浸させる工程を含み、前記マーカー物質は、その存在を検出す べきグリコシルヒドロラーゼと前記マーカー物質との相互作用生成物よりも、支 持材料に対して、実質的に大きな親和性を有し、前記方法はさらに前記含浸され た支持材料を試験下の試料と接触させて、試料中に存在するあらゆるグリコシル ヒドロラーゼ酵素と前記ラベルされたマーカー物質とを相互作用させる工程、反 応しなかったラベルされたマーカー物質を適切な溶媒で除去する工程及び、前記 支持材料上に残存するラベルされたマーカー物質の存在を検出して、前記グリコ シルヒドロラーゼ酵素の存在または不在の表示をもたらす工程を含む前記方法。 ５．前記マーカー物質が、蛍光で、放射能でまたは着色によりラベルされる請 求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。 ６．前記マーカー物質がオリゴサッカリジル−１−アミノ−１−デオキシ−ア ルジトール(OAD)である請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。 ７．請求項６に記載の方法であって、前記OADが４−Ｏ−〔４−Ｏ−〔４−Ｏ −〔６−Ｏ−α−Ｄ−キシロピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル〕−６−Ｏ −（２−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−キシロピラノシル−β− Ｄ−グルコピラノシル〕−６−Ｏ−（２−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）− α−Ｄ−キシロピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル〕−Ｄ−グルコース（XL LG）の誘導体である前記方法。 ８．前記マーカー物質がリサミン ローダミン スルホニルクロリドでラベル されている請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。 ９．組織化学的にXET活性の分布を記録するために、ラベルされていないキシ ログルカンを加えまたは加えない、植物組織への適用に適切なプローブとしての 、リサミン ローダミン スルホニルクロリドとXLLGから誘導されたOADとの間 に形成されたラベルされた複合体の使用。 10．少糖類の分析における確実な標準としてのニンヒドリン−反応性OADの使 用。 11．少糖類の分析における確実な標準としてのOADのラベルされた複合体の使 用。 12．少糖類の分析がクロマトグラフィーまたは電気泳動により行なわれる、請 求項10または請求項11に記載の使用。 13． OADを含浸させた支持材料を含む、XETを検定するためのキット。 14．４−Ｏ−〔４−Ｏ−〔４−Ｏ−〔６−Ｏ−α−Ｄ−キシロピラノシル−β −Ｄ−グルコピラノシル〕−６−Ｏ−（２−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル） −α−Ｄ−キシロピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル〕−６−Ｏ−（２−Ｏ −β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−キシロピラノシル−β−Ｄ−グルコ ピラノシル〕−Ｄ−グルコースのアミノデオキシアルジトール誘導体。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ， ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｇ Ｅ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ， ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ Ｌ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．当該化合物の存在または当該化合物の試料の内の空間的な分布を検出する 方法であって、該方法は、当該化合物と反応または相互作用可能なマーカー物質 を用いて適切な支持材料を含浸または被覆する工程を含み、該マーカー物質は検 出可能な方法（たとえば蛍光で、放射能でまたは着色されて）でラベルされ、か つ、該マーカー物質と当該化合物との反応または相互作用生成物とは支持材料に 対して実質的に異なった親和性を有しており、該方法はさらに含浸された支持材 料と試験下の試料とを接触させて、試料中に存在するあらゆる標的化合物とラベ ルされたマーカー物質とを反応または相互作用させる工程及び未反応のラベルさ れたマーカー物質またはラベルされた反応生成物のいずれかを適切な溶媒で除去 する工程、及び前記支持材料上に残存するラベルされたマーカー物質の存在を検 出するか、または前記支持材料からのラベルされた反応生成物の放出を検出して 、当該化合物の存在または不在の表示をもたらす工程を含む前記方法。 ２．当該化合物が酵素で、前記マーカー物質が酵素の基質である請求項１に記 載の方法。 ３．前記酵素がグリコシルヒドロラーゼ、トランスグリコシラーゼまたはリア ーゼである請求項２に記載の方法。 ４．前記酵素がキシログルカン、他のヘミセルロース、デンプン、グリコーゲ ン、キチンまたはペクチン多糖類に作用するものである請求項３に記載の方法。 ５．前記マーカー物質が、定義された、オリゴサッカリジル−１−アミノ−１ −デオキシ−アルジトール(OAD)である請求項１〜４のいずれか１項に記載の方 法。 ６．前記マーカー物質がリサミン ローダミン スルホニルクロリドでラベル されている請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。 ７．請求項５または請求項６に記載の方法であって、(ａ)(ｉ)α−キシロシダ ーゼ、β−グルコシダーゼ及びβ−ガラクトシダーゼの活性もしくは（ii）α− キシロシダーゼ、β−グルコシダーゼ及びβ−ガラクトシダーゼの活性を増加ま たは低下させる物質の存在について水溶液のドット−ブロットアッセイを実施す るか、または（ｂ）植物組織内のα−キシロシダーゼ、β−グルコシダーゼもし くはβ−ガラクトシダーゼ活性の分布を研究するために組織印刷を実施するか、 または（ｃ）ザイモグラム上のα−キシロシダーゼ、β−グルコシダーゼまたは β−ガラクトシダーゼ活性の分布を研究するためにゲル電気泳動図のブロットを 実施するのに適切であって、基質がキシログルカンから誘導される少糖類（たと えばXLLG）である前記方法。 ８．前記支持材料がさらに前記酵素のためのラベルされていない共一基質を含 浸されている請求項２またはそれに従属する請求項のいずれか１項に記載の方法 。 ９．請求項８に記載の方法であって、(ａ)(ｉ)キシログルカン エンドトラン スグリコシラーゼ(XET)の活性もしくは（ii）XET活性を促進または阻害する物質 の存在について水溶液のドット−ブロットアッセイを実施するか、または、（ｂ ）植物組織内のXET活性の分布を研究するために組織印刷を実施するか、または （ｃ）ザイモグラム上のXET活性の分布を研究するためにゲル電気泳動図のブロ ットを実施するのに適切であり、基質がキシログルカンから誘導された少糖類（ たとえばXLLG）であって、支持材料がさらにラベルされていないキシログルカン を含浸されている前記方法。 10．定義されたオリゴサッカリジル−１−アミノ−１−デオキシ−アルジトー ル(OAD)。 11．還元炭水化物とアンモニウム塩及び還元剤との反応を含む請求項10に記載 のOADを製造する方法。 12．前記アンモニウム塩が炭酸水素アンモニウムである請求項11に記載の方法 。 13．前記還元剤がシアノ水素化硼素ナトリウムである請求項11または請求項12 に記載の方法。 14．OADをリサミン ローダミン スルホニルクロリドと反応させることを含 む請求項10に記載のOADのラベル化方法。 15．支持材料がろ紙、ニトロセルロースシートまたは電気泳動ゲル（たとえば ポリアクリルアミド、アガロースまたはデンプン）である請求項１〜９のいずれ か１項に記載の方法。 16．請求項１〜９のいずれか１項に従属している請求項15に記載の方法であっ て、前記支持材料は適切なゲル（たとえば、ポリアクリルアミド）であって、ザ イモグラムを作成するために、含浸された基質上で作用可能なグリコシルヒドロ ラーゼ及びトランスグリコシラーゼである、タンパク質の電気泳動分離及びこれ らのタンパク質の原位値での同定を伴う前記方法。 17．組織化学的にXET活性の分布を記録するために、ラベルしていないキシロ グルカンを加えまたは加えずに植物組織への適用に適切なプローブとしての、リ サミン ローダミン スルホニルクロリド及びXLLGから誘導され、請求項10に記 載されたOADの間に形成された、ラベルされた複合体の使用。 18．たとえば（HPLC及びカチオン交換クロマトグラフィーを包含する）クロマ トグラフィーまたは（毛管電気泳動または高電圧濾紙電気泳動）による、少糖類 の分析における確実な標準（マーカー） としての請求項10に記載のニンヒドリン反応性OADの使用。 19．たとえば（HPLC、薄層クロマトグラフィーまたはペーパークロマトグラフ ィーを包含する）クロマトグラフィーまたは電気泳動による少糖類の分析におけ る確実な標準（マーカー）としての請求項10に記載のOADのラベルされた複合体 の使用。 20．請求項10に記載のOADを含浸させた支持材料を含む、たとえばXETのための アッセイキット。