JP2001501197A

JP2001501197A - 抗―腫瘍剤としての置換された複素環式化合物類

Info

Publication number: JP2001501197A
Application number: JP10515004A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．ラボワ，エドモンド; フォンリウ，リロイ; ビー．マッキー，ダーシャン
Original assignee: ルトガーズ，ザステイトユニバーシティオブニュージャージー
Priority date: 1996-09-23
Filing date: 1997-09-23
Publication date: 2001-01-30
Also published as: BR9711296A; CZ102499A3; AU725938B2; TR199900636T2; PL332416A1; NZ334954A; NO991384D0; IL129096A0; KR20000048537A; WO1998012181A1; CA2266321A1; AU4589797A; NO991384L; EP0950054A1; US5981541A

Abstract

(57)【要約】本発明は、下記式（Ｉ）：〔式中、Ｒ₁〜Ｒ₇，Ｗ，Ｘ，Ｙ及びＺは、明細書に定義された値のいづれかである〕で表わされる化合物、及び医薬的に許容されるその塩（抗癌剤として有用である）を提供する。また、１又は複数の式（Ｉ）の化合物を含んで成る医薬組成物、式（Ｉ）の化合物の調製方法、及び式（Ｉ）の化合物の調製のために有効な中間体が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】抗−腫瘍剤としでの置換された複素環式化合物類発明の背景 DNA−トポイソメラーゼは、DNA鎖の切断及び再結合を触媒し、そしてDNAのトポロジー状態を制御する酵素である。最近の研究はまた、トポイソメラーゼがまた、RNA転写の間、鋳型スーパーコイルを調節することにも関与していることを示唆する。２種の主要種類の哺乳類トポイソメラーゼが存在する。DNA−トポイソメラーゼＩ型は、過渡的一本鎖切断−結合サイクルを実施することによって二本鎖DNAのトポロジー状態の変化を触媒する。対照的に、哺乳類トポイソメラーゼII型は、過渡的酵素架橋された二本鎖切断を引き起こし、続いて鎖の通過及び再封止によりDNAのトポロジーを変更する。哺乳類トポイソメラーゼIIはさらに、II型α及びII型βとして分類される。トポイソメラーゼ毒素である剤に関係する抗腫瘍活性は、酵素−DNA切断複合体を安定化するそれらの能力に関係している。酵素−DNA切断可能複合体のこの薬素−誘発された安定化は、酵素を細胞毒素に効果的に転換する。臨床学的使用でのいくつかの抗腫瘍剤は、哺乳類トポイソメラーゼII型毒素としての有力な活性を有する。それらは、アドリアマイシン、アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン、VP-16及びVM-26を包含する。トポイソメラーゼII型毒素として作用する臨床学的及び実験的薬物の数に比較して、トポイソメラーゼＩ型毒素として同定されている剤に関して、現在限定された数のみが存在する。カンプトセシン（Camptothecin）及びその構造的に関連している類似体は、最とも多数研究されたトポイソメラーゼＩ型毒素間のものである。最近、ビー及びテルベンズイミダゾール（Chenなど.，Cancer Res．1993，53 ，1332-1335;Sunなど.，J.Med.Chem．1995，38，3638-3644;Kimなど.，J.Med.Ch em．1996，39，992-998）、一定のベンゾ〔ｃ〕フェナントリジン及びプロトベルベリンアルカロイド、及びそれらの合成類似体(Makheyなど.，Med.Chem.Res． 1995，5，1-12；Janinなど.，J.Med.Chem．1975，18，708-713;Makheyなど.，Bi oorg．& Med.Chem．1996，4，781-791)、並びに菌類代謝物、すなわちブルガレイン(bulgarein)(Fujiiなど.，J.Biol.Chem．1993，268，13160−13165)及びサイントピン(saintopin)(Yamashitaなど.，Biochemistry 1991，30，5838-5845) 及びインドールカルバゾール(Yamashitaなど.，Biochemistry 1992，31，12069- 12075)が、トポイソメラーゼＩ型毒素として同定されている。コラリン（coralyne）、ニチジン（nitidine）、５，６−ジヒドロ−８−デスメチルコラリン及び関連する類似体により観察される例外的なトポイソメラーゼ毒素は、トポイソメラーゼＩ型又はII型の毒素として特別に作用するそれらの能力と関連するそれらの構造的特徴に基づいてのいくつかの最近の研究を促進した (Gattoなど.，Cancer Res．1996，56，2795-2800;Wangなど.，Chem.Res.Toxicol ．1996，9，75-83;Wangなど.，Chem.Res.Toxicol.，1993，6，813-818)。すべての３種のそれらの剤に関連する共通する特徴は、それらの構造体内での３−フェニルイソキノリニウム成分の存在である。それらの化合物のいくつかはトポイソメラーゼＩ型毒素としてのカンプトセシンに類似する効能又はトポイソメラーゼII型毒素としてのVM-26に類似する効能を有したにもかかわらず、それらは単に控えめな細胞毒性活性を有した。トポイソメラーゼ毒素としてのそれらの効能とのより直接的な関連性の不在は、カンプトセシン又は VM-26のいづれかとして細胞中に効果的に吸収されそうもない見込みに一部寄与した。第四アンモニウム基の存在は、細胞摂取を最ともおそらく妨害する。剤、たとえばコラリン及びニチジンは、効果的な輸送を可能にするために加水分解を受ける必要があり、そして第四アンモニウム親化合物を再形成するために続く脱水又はシクロ脱水を受ける必要があることが推定されている。これは、剤、たとえばコラリン又はニチジンに関してインビボで観察される比較的低い抗腫瘍活性を説明することができる。改良された活性を有する抗癌剤のための必要性があることが明白である。発明の要約本発明は、下記式（Ｉ）：〔式中、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₅及びＲ₆は独立して、Ｈ，OH，NO₂，NH₂、ハロ、NHC O(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；Ｒ₁及びＲ₂は一緒に−O CH₂O−であり；Ｒ₂及びＲ₃は一緒に−OCH₂O−であり；あるいはＲ₅及びＲ₆は一緒に−OCH₂O−であり；Ｒ₄及びＲ₇は独立してＨ、(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル又は不在であり；ＷはＣ又はＮであり；ＸはＣ又はＮであり；Ｙは−Ｃ＝，−Ｎ＝又は直接的な結合であり、但し、Ｙが−Ｃ＝である場合、ＸはＮであり；そしてＺは−CH＝CH−，−(CH₂)₂-又は不在である〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるその塩を供給する。本発明の１つの好ましい態様によれば、ＷはＮであり、そしてＹは直接的な結合である。もう１つの好ましい態様においては、ＷはＣであり、そしてＹは−Ｃ＝又は−Ｎ＝である。本発明のもう１つの好ましい態様によれば、Ｚは−CH＝CH−又は−(CH₂)₂−である。もう１つの好ましい態様において、Ｒ₅及びＲ₆はそれぞれ(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシ、好ましくは−OCH₃であり、又は一緒に−OCH₂O−である。好ましくは、Ｒ₃はＨである。好ましい態様において、Ｒ₁及びＲ₂の１つ又は両者は、（Ｃ₁− Ｃ₈）アルコキシ、好ましくはOCH₃であり、又は一緒に−OCH₂O−である。もう１つの好ましい態様において、Ｒ₂及びＲ₃は一緒に−OCH₂O−である。好ましくは、ＸがＣである場合、Ｃ₇はＨ、メチル又はエチルであり；又はＸがＣである場合、Ｒ₇はＨである。好ましくは、ＸがＮである場合、Ｒ₇は不在か又はCH₃である。同様に、好ましくは、Ｙが−Ｃ＝である場合、Ｒ₄はＨであり；そしてＹが−Ｎ＝である場合、Ｒ₄は不在か又はCH₃である。Ｘ又はＹが置換されたＮである場合、そのＮは正の電荷を有するであろうことが理解されるであろう。式Ｉの化合物の好ましいグループは、下記式（II）：〔式中、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₅，Ｒ₆及びＲ₇は、式Ｉの化合物について本明細書に定義される値又は好ましい値のいづれかを有する〕で表わされる化合物；又は医薬的に許容できるその塩である。式（Ｉ）の化合物は、癌細胞、たとえば耐薬物性癌細胞に対して効果的な細胞毒性剤であることが示されている。さらに、式Ｉの一定の化合物は、トポイソメラーゼＩ型に対する阻害活性を示す。従って、本発明はまた、前記癌細胞の増殖を阻害するのに効果的な量の式（Ｉ）の化合物を、癌を有する哺乳類に投与することを含んで成る、癌細胞増殖をインビトロ又はインビボで阻害するための方法も提供する。本発明によれば、前記化合物又はその塩は、医薬的に許容できるキャリヤーと組合して投与され得る。本発明はまた、医薬的に許容できるキャリヤーと組合して本発明の化合物を含んで成る医薬組成物、及び本発明の化合物の調製方法、並びに本発明の化合物の合成のために有用な新規中間体を供給する。図面の簡単な説明図１は、式Ｉの代表的なベンズ〔ｃ〕アクリジンの合成を示す。図２は、式Ｉの代表的なベンズ〔ａ〕アクリジンの合成を示す。図３は、本発明の代表的な化合物の合成を示す。図４は、式Ｉの化合物の調製のために有用な中間体の合成を示す。特定の記載本発明によれば、癌細胞は、有効量の式（Ｉ）の化合物の癌を有する哺乳類への投与によりインビトロ又はインビボで阻害される。本明細書において使用される場合、“有効量”とは、標的癌細胞の増殖の阻害をもたらす量である。本明細書において記載される場合、適切な用量は、約0.5〜約100mg／kg体重／日の範囲であろう。本明細書に記載される化合物及び組成物は、哺乳類固形腫瘍又は血液学的悪性疾患の処理において効果的であると思われる。それらの固形腫瘍は、頭及び首、肺、中皮腫、縦隔、食道、胃、膵臓、肝担管システム、小腸、結腸、直腸、肛門、腎臓、尿管、膀胱、前立腺、尿道、陰茎、精巣、婦人科器官、卵巣、乳房、内分泌系、皮膚中枢神経系；柔組織及び骨の肉腫；及び皮膚及び眼内起源の黒色腫を包含する。血液学的悪性疾患は、小児性白血病及びリンパ腫、Hodgkin病、リンパ球及び皮膚起源のリンパ腫、急性及び慢性白血病、血漿細胞新生物及びAIDS に関連する癌を包含する。処理のための好ましい哺乳類種は、ヒト及び家畜動物である。式Ｉのべンズ〔ｃ〕アクリジン（ＸはＮであり、そしてＹは−Ｃ＝である）は、便利には、図１に示される経路により調製され得る。２−アミノ−４，５−ジメトキシアセトフェノン（４）と６，７−ジメトキシ−１−テトラロン（５）との反応は、５，６−ジヒドロ−２，３，９，10−テトラメトキシベンズ〔ｃ〕アクリジン（６）を付与し、これは、Pd／Ｃの存在下で190℃でデカリンにおける懸濁液として加熱される場合、２，３，９，10−テトラメトキシベンズ〔ｃ〕アクリジン（７）に転換され得る。６及び７の両者は、それぞれ第四アンモニウム塩（８及び９）を形成するために、硫酸ジメチルとの反応によりそれらの12−メチル誘導体に転換され得る。ベンズ〔ａ〕アクリジン類似体（ＸはＣであり、そしてＹは−Ｎ＝である）は、図２に示される方法に類似する方法を用いて便利に調製され得る。適切なｏ− ニトロベンズアルデヒドと５，６−又は６，７−二置換されたβ−テトラロンとのクネーフェナーゲル縮合は、１−（２’−ニトロベンジリデン）−２−テトラロン（12ａ〜ｆ及びｊ）を供給する。Pd／Ｃの存在下で190℃でのデカリンにおける加熱は、それらのジヒドロ化合物のそれらのベンズ〔ａ〕アクリジン誘導体（14ａ〜ｄ及びｊ）への転換をもたらした。塩化メチレン中、BBr₃による13ａ又は14ａのいづれかの処理は、それぞれのテトラヒドロキシ類似体（13ｇ及び14ｇ）を供給した。硫酸ジメチルと13ａ又は14ａとの反応は、それらの７−メチル誘導体（15ａ及び16ａ）の形成をもたらした。出発材料２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンズアルデヒド及び２−ニトロ− ４，５−メチレンジオキシベンズアルデヒドは市販されている。６−クロロ−β −テトラロンの調製は、Rosowsky、など.，J.Org.Chem．1968，33，4288-4290により記載のようにして実施され得る。７−ニトロ−β−テトラロンは、図３に示されるように、Nicholsなど.（Orga nic Preparations and Procedures 1977，277-280）により報告される方法に類似する方法を用いて、７−ニトロ−α−テトラロンから調製された。７−ニトロ −β−テトラロンは、図３に示されるように、20，21，22及び23の調製において中間体として作用する。５，６−メチレンジオキシ−２−テトラロン（11ｅ）は、５，６−ジヒドロ− ９，10−ジメトキシ−３，４−メチレンジオキシベンズ〔ａ〕アクリジン（13ｅ）の調製のための必要な中間体として使用された。このテトラロンは、図４に示されるように６段階で調製される。２，３−メチレンジオキシベンズアルデヒドが、２，３−メチレンジオキシケイ皮酸を付与するためにマロン酸により縮合された(J.Kooなど．Org.Synt hesis Coll．Vol．IV，1963，327-329)。２−３−メチレンジオキシケイ皮酸がジヒドロケイ皮酸誘導体を付与するために10％ Pd／Ｃを用いて水素付加され、次に前記誘導体はそのエチルエステル（17）に転換された(M.A.Brook;T.N.Chan ，Synthesis Comm.，1983，201-203)。次に、エチル−２，３−メチレンジオキシジヒドロシンナメートがそのβ−ケトスルホキシド（18）に転換された(J.G.C annonなど.，J.Med.Chem.，1977，20，1111-1116)。β−ケトスルホキシド誘導体（18）は、トリフルオロ酢酸による処理によるPummerer転換にゆだねられる場合、１，２，３，４−テトラヒドロ−１−メチルチオ−５，６−メチレンジオキシ−２（１Ｈ）−ナフタレノン（19）を生成した（Y.Oikawk，Tetrahedron，197 4，30，2653-2660）。氷酢酸中、10％ Pd／Cを用いての19の水添分解が11eを付与した（D.E.Nicholes，J.Med.Chem.，1990，33，703-710）。式Ｉの化合物の医薬的に許容できる塩は、本発明の方法の実施において同様に使用され得る。医薬的に許容できる塩は、有機又は無機塩基、たとえばNaOH，Na (CO₃)₂，NaHCO₃，KOH及び同様のもの；及び酸、たとえば塩酸及びスルホ酢酸及び同様のものを用いて形成され得る。本明細書に記載される化合物及び／又はそれらの塩は純粋な化学物質として投与され得るが、医薬組成物として活性成分を提供することが好ましい。従って、本発明はさらに、１又は複数の化合物及び／又は医薬的に許容できるその塩、及び１又は複数の医薬的に許容できるキャリヤー、並びに任意には、他の治療及び／又は予防成分を含んで成る医薬組成物の使用にも関する。前記キャリヤーは、組成物中の他の成分と適合でき、そしてその受容体に対して有害ではない点で“許容できる”べきである。医薬組成物は、経口又は非経口（筋肉内、皮下及び静脈内も包含する）投与のために適切な組成物を包含する。組成物は、適切な場合、別々の単位投与形で便利には提供され得、そして薬学の業界において良く知られている方法のいづれかにより調製され得る。そのような方法は、液体キャリヤー、固体キャリヤー、半固体キャリヤー、細かく分割された固体キャリヤー又はそれらの組合せと活性成分とを会合せしめる段階、及び次に、必要なら、所望する供給システムに生成物を形状化する段階を包含する。経口投与のために適切な医薬組成物は、予定された量の活性成分を含む別々の単位投与形、たとえば硬質又は軟質ゼラチンカプセル、カシェ剤、錠剤として；粉末又は顆粒として；溶液、懸濁液又はエマルジョンとして提供され得る。活性成分はまた、ボーラス、舐剤又はペースとしても提供され得る。経口投与のための錠剤及びカプセルは、従来の賦形剤、たとえば結合剤、充填剤、滑剤、砕解剤又は湿潤剤を含むことができる。錠剤は、当業界に良く知られている方法に従って、たとえば腸用皮膜により被覆され得る。経口液体調製物は、たとえば水性又は油状懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ又はエリキシルの形で存在することができ、又は使用の前、水又は他の適切なビークルによる構成のための乾燥生成物として提供され得る。そのような液体調製物は、従来の添加剤、たとえば懸濁剤、乳化剤、非水性ビークル（食用油を含むことができる）、又は保存剤を含むことができる。化合物はまた、非経口投与（たとえば注射、ボーラス注射又は連続的注入による）のためにも配合され得、そして添加される保存剤を有する、アンプル、予備 −充填された注射器、小ボーラス注入容器又は複数−用堡容器において単位投与形で提供され得る。組成物は、油状又は水性ビークル中、懸濁液溶液又はエマルジョンのような形を取ることができ、そして配合剤、たとえば懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤を含むことができる。他方では、活性成分は、使用の前、適切なビークル、たとえば滅菌した、発熱物質を有さない水による構成のために、滅菌した固体の無菌単離又は溶液からの凍結乾燥により得られる粉末形で存在することができる。皮膚への局部投与のためには、化合物は、軟膏、クリーム又はローションとして、又は経皮用パッチの活性成分として配合され得る。適切な経皮供給システムは、たとえばFisherなど.（アメリカ特許第4,788,603号）又はBawasなど.（アメリカ特許第4,931,279号、第4,668,504号及び第4,713,224号）に開示される。軟膏及びクリームは、適切な増粘剤及び／又はゲル化剤の添加を伴って、水性又は油状基材により配合され得る。ローションは、水性又は油状基材により配合され得、そして一般的に、１又は複数の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、又は着色剤を含むであろう。活性成分はまた、たとえばアメリカ特許第4,140,12 2号、第4,383,529号又は第4,051,842号に開示されるように、イオン導入法を通しても供給され得る。口への局部投与のために適切な組成物は、単位投与形、たとえば風味のある基材、たとえばスクロース、及びアカシア又はタングステンに活性成分を含んで成るロゼンジ；不活性基材、たとえばゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアに活性成分を含んで成る香錠；及び適切な液体キャリヤーに活性成分を含んで成るうがい薬を包含する。所望する場合、上記組成物は、たとえば天然ゲル、合成ポリマーゲル又はその組合せを含んで成る一定の親水性ポリマーマトリックスとの組合せにより使用される活性成分の持効性開放を付与するよう適合され得る。本発明の医薬組成物はまた、他のアジュバント、たとえば風味剤、着色剤、抗微生物剤又は保存剤も含むことができる。処理への使用のために必要とされる、化合物又はその活性塩又は誘導体の量は、選択される特定の塩のみならず、また投与の経路、処理される状態の性質、及び患者の年齢及び状態によって変化し、そして究極的には、医者又は臨床医の考えしだいであることがさらに理解されるであろう。しかしながら、一般的に、適切な用量は、約0.5〜約100mg／kg体重／日〜約10 〜約75mg／kg体重／日の範囲、たとえば３〜約50mg／kg体重／日、好ましくは6 〜90mg／kg／日、最とも好ましくは15〜60mg／kg／日の範囲で存在するであろう。化合物は、たとえば単位投与形当たり５〜1000mg、便利には10〜750mg、最とも便利には50〜500mgの活性成分を含む単位投与形で投与される。理想的には、活性成分は、約0.5〜約75μＭ、好ましくは約１〜50μＭ、最とも好ましくは約２〜約30μＭの活性成分のピーク血漿濃度を達成するよう投与されるべきである。これは、任意には塩溶液中、活性成分のO.05〜５％溶液の静脈内注射により達成され得、又は約1〜l00mgの活性成分を含むボーラスとして経口投与され得る。所望する血液レベルは、約0.01〜5.0mg／kg／時を付与するために連続した注入により、又は約0.4〜15mg／kgの活性成分を含む断続的注入により維持され得る。所望する用量は、便利には、一回の用量で、又は適切な間隔で投与される分割された用量として、たとえば１日当たり２回、３回、４回又はそれ以上の回数の副用量として提供され得る。その副用量自体はさらに、たとえば多くの別々の不正確に間隔を開けられた投与、たとえば注入器からの複数回の吸入又は眼への多くの液滴の適用により分割され得る。油の例は、例示的であって、本発明を制限するものではない。例例Ｉ−一般融点を、Thomas-Hoover単一溶融細管融点装置により決定した。赤外スペクトルデータ（IR）を、Perkin-Elmer 1600 Fourier Transform分光計上で得、そしてcm^-1で報告する。プロトン（¹H NMR）及び炭素(¹³C NMR)核磁気共鳴を、Varia n Gemini-200 Fourier Transform分光計上で記録した。NMRスペクトル（200MHz ¹ Ｈ及び50MHz ¹³Ｃ）を、CDCl₃(特にことわらない限り)で記録し、そして化学シフトはテトラメチルシラン(TMS)からダウンフィールドされるδ単位で報告された。カップリング定数は、ヘルツで報告される。質量スペクトルは、Washington University Resource for Biomedical and Bio-Organic Mass Spectrometryから得られた。カラムクロマトグラフィーは、示される溶媒系を用いて、Silitech 32-63μｍ（ICN Biomedicals，Eschwegge，Ger.）上で実施されるフラッシュクロマトグラフィーを言及する。燃焼分析は、Atlantic Micrdabs，Inc.，Noreros s，GAにより実施され、そして±0.4％以内であった。２，３，９，10−テトラメトキシ−７−メチル−５，６−ジヒドロベンズ〔ｃ〕アクリジン（６）。２−アミノ−４，５−ジメトキシアセトフェノン(1.0ｇ、 5.1mモル)をl0mlのCH₂Cl₂に溶解し、そして塩化水素(1.0M溶液、エーテルにおいて無水)を、室温で激しく撹拌しながら添加した。アミノアセトフェノンの塩酸塩が沈殿した。溶媒を真空下で除去し、そして得られる固体残留物を真空下で１時間、乾燥せしめた。次に、塩酸塩を、６，７−ジメトキシ− １−テトラロン（1.59ｇ、7.68ｍモル）と共に粉砕し、そして次にその混合物を密封された管に移し、そして140℃で１時間、加熱した。次に、その得られる融合されたプラグを煮沸メタノール(300ml)に溶解した。この溶液を200mlに濃縮し、そして一晩放置し、針形状の結晶を得た。それらの結晶を濾過し、そして３回の５mlアセトンにより洗浄し、そして乾燥せしめ、99％の収率でベンズ〔ｃ〕アクリジン塩酸塩誘導体の鮮黄色の針状物を得た。その塩酸塩を200mlの煮沸メタノールに溶解した。その溶液を室温に冷却した後、濃NH₄OHを、pH10を得るまで滴下した。明るい黄色の結晶が形成し始めた。次に、その懸濁液を200mlの水により希釈し、そして100mlのCH₂Cl₂により３度抽出した。組合された抽出物を50m lのブラインにより１度洗浄し、無水Na₂SO₄を用いて乾燥せしめ、濾過し、そして溶媒を真空下で除去し、遊離塩基を付与した；５，６−メチレンジオキシ−２−テトラロン（11e）:0.669ｇ（2.83mM）の19 を、水素添加フラスコにおける10mlの氷酢酸に取った。10％ Pd-C0.46ｇを添加し、そしてこの混合物を、40時間、40psigの水素下でParr装置において振盪した。その反応混合物をセライト層を通して濾過し、氷酢酸５mlにより３度洗浄した。氷酢酸を回転蒸発し、粗テトラロン（11ｅ）を得た。次に、その粗テトラロンを亜硫酸水素ナトリウムにより処理し、それをより安定した亜硫酸水素アダクトに転換した。純粋なテトラロンを、必要な場合、10％炭酸ナトリウム溶液による処理、続くジクロロメタンによる抽出によりその亜硫酸水素アダクトから生成した；例II−１−（２’−ニトロベンジリデン）−２−テトラロン誘導体の合成のための一般的な方法（図２）。それぞれ2.45ｍモルの２−テトラロン、２−ニトロベンズアルデヒド及び酢酸ナトリウムの氷酢酸（10ml）溶液を、窒素雰囲気下で３〜８時間、還流した。その反応混合物を室温に冷却した。その混合物を注意してシリカゲル（75ｇ）ゲル上に負荷し、そしてエチルエーテル及びヘキサンの１：１混合物を用いてクロマトグラフィー処理した。カラムから４番目に一般的に溶出する黄色の化合物を集め、それぞれのテトラロン誘導体を20〜25％の収率で得た。１−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジリデン）−６，７−ジメトキシ−２−テトラロン（12ａ）。６，７−ジメトキシ−２−テトラロン及び６ −ニトロベラトラアルデヒドから調製された；１−（２’−ニトロ−４’，５’−メチレンジオキシベンジリデン）−６，７ −ジメトキシ−２−テトラロン（12ｂ）。６，７−ジメトキシ−２−テトラロン及び６−ニトロピペロナールから調製された；１−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジリデン）−２−テトラロン（12ｃ）。２−テトラロン及び２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンズアルデヒドから調製された：１−（２’−ニトロ−ベンジリデン）−６，７−ジメトキシ−２−テトラロン（12ｄ）。６，７−ジメトキシ−２−テトラロン及び２−ニトロベンズアルデヒドから調製された：１−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジリデン）−５，６−メチレンジオキシ−２−テトラロン（12ｅ）。５，６−メチレンジオキシ−２−テトラロン及び２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンズアルデヒドから調製された；１−（２'−ニトロ−４'，５'−ジメトキシベンジリデン）−５，６−ジメトキシ−２−テトラロン（12ｆ）。５，６−ジメトキシ−２−テトラロン及び２− ニトロ−４，５−ジメトキシベンズアルデヒドから調製された；１−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジリデン）−６−クロロ− ２−テトラロン（12ｊ）。６−クロロ−２−テトラロン及び２−ニトロ−４，５ −ジメトキシベンズアルデヒドから調製された；１−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメキシベンジリデン）−７−ニトロ−２ −テトラロン（図３）。７−ニトロ−２−テトラロン及び２−ニトロ−４，５− ジメトキシベンズアルデヒドから調製された；例III−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン誘導体の合成のための一般的方法（図２）。１−（２’−ニトロベンジリデン）−２−テトラロン誘導体(0.3ｍモル）を10 mlの氷酢酸に溶解し、そして窒素雰囲気下で１〜４時間、亜鉛ダスト（1.64ｍモル）により還流した。その反応混合物を室温に冷却し、そして次に、全混合物を、シリカゲル(100ｇ)カラム上に注意して負荷し、そして酢酸を除去するためにまず、500mlのエチルエーテルによりクロマトグラフィー処理し、続いてヘキサン／酢酸エチルにより溶出した。移動相の極性を、必要なら、適切な割合のヘキサンを混合することによって低めた。適切な画分をプールし、そして真空下で濃縮し、83〜95％の対応する５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジンを得た。２，３，９，10−テトラメトキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン（13ａ）。１−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジリデン）−６，７−ジメトキシ−２−テトラロンから調製された：２，３−ジメトキシ−９，10−メチレンジオキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン（13ｂ）。１−（２’−ニトロ−４’，５’−メチレンジオキシベンジリデン）−６，７−ジメトキシ−２−テトラロンから調製された；９，10−ジメトキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン（13ｃ）。１ −（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジリデン）−２−テトラロンから調製された：２，３−ジメトキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン（13ｄ）。１−（２’−ニトロ−ベンジリデン）−６，７−ジメトキシ−２−テトラロンから調製された：５，６−ジヒドロ−９，10−ジメトキシ−３，４−メチレンジオキシベンズ〔ａ〕アクリジン（13ｅ）。１−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジリデン）−５，６−メチレンジオキシ−２−テトラロンから調製された：５，６−ジヒドロ−３，４，９，10−テトラメトキシベンズ〔ａ〕アクリジン（13ｆ）。１−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジリデン）−５，６−ジメトキシ−２−テトラロンから調製された；２−アミノ−９，10−ジメトキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン（図３，20）。１−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジリデン）− ７−アミノ−２−テトラロンから調製された；３−クロロ−９，10−ジメトキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン（13ｊ）。１−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジリデン）−６− クロロ−２−テトラロンから調製された；例IV−ベンズ〔ａ〕アクリジン及びベンズ〔ｃ〕アクリジンのそれらの５，６− ジヒドロ誘導体からの合成のための一般的な方法（図２）。それぞれ0.22mモルの５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン又は５，６− ジヒドロベンズ〔ｃ〕アクリジン誘導体を、窒素雰囲気下で２〜９時間、炭素上10％パラジウム76mgにより15mlのデカリンにおいて還流した。その反応混合物を、ガラス漏斗を用いてのセライト層を通しての吸込み下ですばやく濾過した。フィルター層を３回の煮沸クロロホルム20ml、続いて２回の20mlの煮沸酢酸エチルを用いて十分に洗浄した。組合された濾液を真空下で濃縮し、そして真空下で乾燥せしめ、ベンズ〔ａ〕アクリジン誘導体を得た。２，３，９，10−テトラメトキシ−７−メチルベンズ〔ｃ〕アクリジン（図１，７）。６から調製された；２，３，９，10−テトラメトキシベンズ〔ａ〕アクリジン（14ａ）。13ａから調制された；２，３−ジメトキシ−９，10−メチレンジオキシベンズ〔ａ〕アクリジン（14 ｂ）。13bから調製された；９，10−ジメトキシベンズ〔ａ〕アクリジン（14ｃ）。13ｃから調製された；２，３−ジメトキシーベンズ〔ａ〕アクリジン（14ｄ）。13ｄから調製された；３−クロロ−９，10−ジメトキシベンズ〔ａ〕アクリジン（14ｊ）。13ｊから調製された；例Ｖ−ベンズ〔ａ〕アクリジン及びベンズ〔ｃ〕アクリジンのＮ−メチル化のための一般的方法。硫酸ジメチル（４ml）を、0.27mモルのベンズ〔ａ〕アクリジン又はベンズ〔ｃ〕アクリジンに添加し、そしてその混合物を油状槽において、150℃で20分〜5 時間、窒素雰囲気下で加熱した。無水エチルエーテル（10ml）を、室温に冷却した後、激しく撹拌しながら、前記反応混合物に添加した。沈殿された第四塩を吸引下で濾過し、そして無エチルエーテル1Omlにより３度洗浄し、そして乾燥せしめた。第四塩を煮沸メタノールから90％の収率で結晶化した。２，３，９，10−テトラメトキシ−７，12−ジメチル−５，６−ジヒドロベンズ〔ｃ〕アクリジニウムメトスルフェート（図１，８）。６から調製された；２，３，９，l0−テトラメトキシ−７，12−ジメチルベンズ〔ｃ〕アクリジニウムメトスルフェート（図１，９）。７から調製された；２，３，９，10−テトラメトキシ−７−メチル−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジニウムメトスルフェート（15ａ）。13ａから調製された；２，３，９，10−テトラメトキシ−７−メチルベンズ〔ａ〕アクリジニウムメトスルフェート（16ａ）。14ａから調製された；例VI−２，３，９，10−テトラヒドロキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン（図２，13ｇ）及び２，３，９，10−テトラヒドロキシベンズ〔ａ〕アクリジン（図２，14ｇ）の合成のための一般的方法。それぞれのベンズ〔ａ〕アクリジン誘導体(0.195ｍモル)を２mlのCH₂Cl₂に溶解し、そしてその溶液を、イソプロパノール及びドライアイスの冷却槽を用いて冷却した。CH₂Cl₂中、三臭化硼素1.95ｍモルの溶液(1.0Ｍ）を窒素雰囲気下で添加した。その反応混合物を−50℃で１時間、撹拌し、そして次に、４時間にわたって、ゆっくりと室温にした。次に、その反応混合物を−10℃に冷却し、そして５mlの飽和塩化アンモニウム溶液の添加により急冷せしめた。得られる溶液を蒸発乾燥せしめ、そして得られる残留物を、煮沸アセトン20mlにより３度、抽出した。得られる黄色の懸濁液をそれぞれ濾過した。溶解されなかった沈殿物を５ml の煮沸メタノールに溶解し、そして一晩、放置した。針のような形状のテトラヒドロキシベンズ〔ａ〕アクリジンの結晶が95％の収率で形成された。２，３，９，10−テトラヒドロキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン（13ｇ）。13ａから調製された：２，３，９，10−テトラヒドロキシベンズ〔ａ〕アクリジン（14ｇ）。14aから調製された：例VII−７−ニトロ−１−テトラロンからの７−ニトロ−２−テトラロンの合成（図３）。７−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレノール。60m1の無水エタノール中、2.88ｇ（15ｍモル）の７−ニトロ−１−テトラロンのスラリーに、硼水素化ナトリウム0.58g（15ｍモル）を添加した。次に、その反応混合物を室温で２時間、撹拌した。次に、その得られる混合物を回転蒸発乾燥せしめ、そして得られる残留物を水100mlに懸濁した。３Ｎの塩酸を、反応混合物がpH７になるまで滴下した。次に、その得られる懸濁液を、50mlのエチルエーテルにより５度抽出し、そして組合されたエーテル層を100mlの水により１度洗浄した。エーテル層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥せしめ、濾過し、そして回転蒸発し、オフホワイト色の残留物を得、それを無水エタノール及び水の１：１混合物から再結晶化し、2.68g（92％）のナフタレノールを得た；７−ニトロ−３，４−ジヒドロナフタレン。１−ナフタレノール2.89g（14.9 ｍモル）、Amberlyst-15カチオ−交換樹脂3.5ｇ及びベンゼン120mlの混合物を、窒素雰囲気下で２時間、還流した。次に、その反応混合物を室温に冷却し、そして無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥せしめ、そして濾過した。次に、濾液を回転蒸発乾燥せしめ、油状物として生成物を92％の収率で得た。生成物は十分に純粋であり、そしてさらなる精製を伴わないで次の段階に使用された；１，２−エポキシ−７−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン。クロロホルム９ml中、７−ニトロ−３，４−ジヒドロナフタレン0.5g（2.85ｍモル）に、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸0.677gを一回で添加した。得られる溶液を還流下で45分間、加熱した。次に、その混合物を０℃に冷却し、そして沈殿されたｍ−クロロ安息香酸を濾過により除去した。クロロホルム層を回転蒸発し、淡黄色個体を得、これをシリカゲル（50ｇ）上でクロマトグラフィー処理し、そしてジクロロメタンにより溶出した。適切な画分を組合し、そして回転蒸発し、エポキシド0.487g（89.5％）を得た；７−ニトロ−２−テトラロン。５mlの無水ベンゼン中、上記エポキシド0.5ｇ( 2.6ｍモル)の溶液に、無水ヨウ化亜鉛0.37ｇ(1.1ｍモル)を添加した。その混合物を暗室において、窒素雰囲気下で、室温で撹拌した。濾過及び減圧下での溶媒の除去の後、得られる黄色の油状物を、生成物が結晶化される場合、冷無水エタノール３ml中に取った。濃縮された母液からの反復した結晶化は0.415g（85％）の全生成物を付与した；例VIII−アッセイ−材料。酵素発現のために使用されるプラスミドpET11a及びＥ．コリ株BL21(DE3)を、N ovagenから購入した。IPTGをSigmaから購入した。細菌溶解物のウェスターンブロット分析のために使用されるECLシステムは、Amersham（UK）からであった。すべての制限酵素及びVentポリメラーゼは、New England Biolabsからであった。哺乳類トポイソメラーゼII型は、公開された方法(Halliganなど.，J.Biol.Che m．260:2475-2482(1985))に従って、ウシ胸腺から単離された。JN2-134酵母株において種々のトポイソメラーゼＩ型遺伝子を発現する単一コピーの酵母プラスミドYCpGALlは、Dr．M-A.Bjornsti（Thomas Jefferson University，Philadelphia ，PA）の贈り物であった。すべての細菌及び酵母培地は、Difco（Detroit，MI）からであり、そして細胞培養培地は、Gibco-BRL(Gaithersburg，MD)から購入された。例IX−Ｅ．コリにおけるトポイソメラーゼＩ型の発現多量のヒトトポイソメラーゼＩ型を得るために、ヒトトポイソメラーゼＩ型cD NAをpET-11aベクター中にクローン化し、ここで前記cDNAの転写は、誘発性Ｔ７プロモーター(Studierなど.，Methods in Enzymol.，Vol.185:60-89，San Diego :A cademic Press（1990）)の制御下にある。手短に言及すれば、ヒトトポイソメラーゼＩ型の完全なコード配列及び停止コドンの下流の約１kbの未翻訳領域を含む3.4kbのDNAフラグメントを、BamHＩ及びEcoRＩ部位で切断することによって、プラスミドYCpGALl-hTOP1(Bjornstiなど.，Cancer Res．49:6318-6323(1989)) から単離した。ベクターpET-11aを同じ制限酵素により切断し、脱リン酸化し、そしてベクタークローニング部位の下流で適切な読み取り枠と整合して挿入体に連結した。その連結混合物を用いて、Ｅ．コリを形質転換し、正しいクローンpE T1Bを単離し、そしてその正体を制限マッピングにより確かめた。pETにおける翻訳開始は上流のNdeＩ部位に位置するので、発現されたトポイソメラーゼＩ型はそのＮ−末端で15個のアミノ酸融合体を有する。次に、pET1Bを用いて、Ｅ．コリBL21(DE3)を形質転換し、そして0.4mMのIPTGによる１時間の誘発に基づいて、細菌溶解物を10％SDS-PAGEにより分析した。発現を、ヒトトポイソメラーゼＩ型に対するウサギ抗体を用いてウェスターンブロットにより確かめた。発現されたタンパク質の単離を単純な方法により行なった。手短に言及すれば、Ｅ．コリ細胞を、反復した音波破壊により溶解した。音波抽出物を、１ＭのNaCl及び６％ポリエチレングリコール(PEG)において製造し、核酸を除去した。PEG上清液を、ヒドロキシアパタイトカラム上で直接的にクロマトグラフィー処理した。発現されたヒトDNAトポイソメラーゼＩ型を、0.6Ｍのリン酸カリウム段階で溶出した。溶出された酵素を、50％グリセロール、30mMのリン酸カリウム（pH7.0）、１mMのジチオトレイトール(DTT）及び0.1mMのEDTAに対して透析し、そして−20℃で貯蔵した。精製された酵素の緩和活性は、ウシ胸腺トポイソメラーゼＩ型よりも約２倍低い比活性を有した。例Ｘ−Ｅ．コリにおけるカンプトテシン耐性（CPT-K5）トポイソメラーゼＩ型の発現。 CPT-K5において耐性表現型を担当する点突然変異CAG(Asp533)→ CGG（Gly）を含む２種の相補的オリゴヌクレオチドを、合成し、そして連続的PC R方法(Current Protocols in Molecular Biology，Ausubelなど．(eds.)，Vol.1 ，pp.8.5.7．Boston:Wiley Interscience(1991))を用いてトポイソメラーゼコード配列において構築した。前記２種のオリゴヌクレオチドは、５’−CTTCCTCGGG AAGGGCTCCATCAGATAC−３’(プライマーＸ１)(配列番号１)及び５’−GTATCTGATG GAGCCCTTCCCGAGGAAG−３’(プライマーＸ２)(配列番号２)であり、ここで下線の配列は変異誘発されたコドンを表わす。個々のオリゴヌクレオチドを、それぞれ、Ｘ１及びＸ２のための関連するプライマ一対として、オリゴヌクレオチド５’ −ACTGTGATCCTAGGG−３’(“Ａ”)(配列番号３)及び５’−CTTCATCGACAAGCTTGCT CTGAG−３’(“Ｈ”)(配列番号４)を用いて、突然変異部位に隣接する２種のDNA セグメントを増幅するために別々のPCR反応に使用した。“Ａ”及び“Ｈ”は、ユニーク制限部位AvrII及びHindIIIのまわりのヒトトポイソメラーゼＩ型に対して相補的である。最初の回のPCRの後、２種の増幅された生成物X1-H及びX2-Aを、オリゴヌクレオチドＸ１及びＸ２のオーバーラップのために、変性し、そしてそれらの15塩基対相補的配列によりアニーリングした。次に、二本鎖DNAセグメントのこの短い延長部を、748個の塩基対の十分な長さの生成物に、72℃で２分間、Ventポリメラーゼにより延長した。次に、２種の外部プライマー“Ａ”及び “Ｈ”を用いて、突然変異誘発されたトポイソメラーゼＩ型フラグメントを含む十分な長さのDNAフラグメントを増幅した。その増幅された変異体トポイソメラーゼＩ型cDNAを、AvrII及びHindIIIにより消化し、そしてトポイソメラーゼＩ型 cDNA配列におけるその対応するAvrII／HindIIIフラグメントを置換することによってpET1B中にクローン化した。野生型ヒトトポイソメラーゼＩ型cDNAの代わりに変異体CPT-K5トポイソメラーゼＩ型cDNAを含むプラスミドpET1B-CPTK5を用いて、発現のためのＥ．コリ肚21(DE3)を形質転換した。IPTGによる誘発に基づいて、溶解物におけるタンパク質を、ウェスターンブロットにより確かめた。次に、CPT-K5トポイソメラーゼＩ型を、野生型酵素について記載されるようにして、細菌溶解物から精製した。例ＸＩ−トポイソメラーゼＩ型及びII型分解アッセイ。組換えトポイソメラーゼＩ型及びウシ胸腺トポイソメラーゼＩ型及びII型についての分解アッセイを、記載の通りに実施した(Liuなど.，J.Biol.Chem．258:15 365-15370(1983))。分解アッセイのために使用されるブラスミドYEpGDNAを、公開された方法を用いて、調製し、そしてその３’−末端でラベルした。例ＸII−酵母細胞毒性アッセイ。酵母は、トポイソメラーゼＩ型機能が失なわれる場合、生存することができ、そしてトポイソメラーゼＩ型毒素は単に、機能的トポイソメラーゼＩ型を有する細胞を殺すことは、確立されている(Bjornstiなど.，Callcer Res．49:6318-632 3(1989))。従って、種々の薬物の存在下での試験株の個々の増殖の相対的程度と、薬物を含まない対照プレート上でのそれらの増殖の程度との比較は、１）薬物が酵母に対していづれかの細胞毒性効果を有するかどうか、２）細胞毒性がトポイソメラーゼＩ型特異的であるかどうか、及び３）ヒトトポイソメラーゼＩ型と比較される酵母のための薬物のいづれかの示差特異性が存在するかどうかを示す。トポイソメラーゼＩ型−特異性インビボ細胞毒性アッセイは、Knabなど.(Knab など.，J.Biol.Chem．268:22322-22330(1993))から適合された。このシステムにおいては、単一コピーの酵母プラスミドベクターYCpGAL1(Knabなど.，J.Biol.Ch em．268:22322-22330(1993))中にクローン化される種々のトポイソメラーゼＩ型遺伝子は、Ｓ．セレビシアエ(S．cerevisiae)のJN2-134株におけるGAL1プロモーターの制御下で発現される(MATa，rad52::LEU2，trpl，ade2-1，his7，ura3-52，isel，t opl-1，leu2)(Bjornstiなど.，Cancer Res．49:6318-6323(1989))。ベクターにおけるトポイソメラーゼＩ型構造体は、それぞれ野生型酵母トポイソメラーゼＩ型(YCpGAL-ScTOP1)、非機能的酵母トポイソメラーゼＩ型（活性チロシン−727がフェニルアラニンに突然変異誘発されている)(YCpGAL-Sctop1 Y727F)(Knabなど. ，J.Biol.Chem．268:22322-22330(1993))、及び野生型トポイソメラーゼＩ型(YC pGAL-hTOP1)(Bjornstiなど.，Cancer Res．49:6318-6323(1989))である。薬物の細胞毒性及びトポイソメラーゼＩ型特異性を定性的に試験するために、特定のプラスミドを含む酵母細胞を連続的に希釈し（５倍）、そしてウラシル及び２％ガラクトースにより補充されたドロップアウム培地において増殖せしめた。さらに、陽性及び陰性制御プレートは、Ａ：対照、プレートに薬物を含まない；Ｂ：カンプトテシン(CPT)、0.5μＭ；Ｃ：コラリン、１μＭ；Ｄ：メチレンジオキシ− ジヒドロ−デメチル−コラリン(MDD−コラリン）、１μＭ；Ｅ：ニチジン、１μ Ｍを含んだ。ブレートを30℃で３日間、増殖し、Ｓ．セレビシアエにおいて発現される種々のトポイソメラーゼＩ型酵素に対する異なった化合物の致死効果を評価し、そして薬物を試験した。例ＸIII−細胞毒性アッセイ。試験される薬物のIC₅₀を、MTT−マイクロタイタープレートテトラゾリウム細胞毒性アッセイ(MTA)(Mosmann，T.，J．Immunol.Methods 65:55-63(1983);Deniz otなど.，J．Immunol.Methods89:271-277(1986))により決定した。ヒトリンパ芽球RPMI 8402細胞及びそれらのカンプトテシン耐性CPT-K5細胞(Andohなど.，Proc .Natl.Acad.Sci．USA 84:5565-5569(1987))は、Dr．Toshiwa Andoh（Aic hi Cancer Center Research Institute，Nagoya，Japan）により提供された。細胞系A2780及びそのカンプトテシン耐性誘導体CPT-2000は、Dr．Jaulang Hwang（ Institute of Molecular Biology，Academic sinica，Taiwan）の贈り物であった。細胞（2000個の細胞／ウェル、200mlの増殖培地に接種された）を、５％のC O₂において37℃で、懸濁液において増殖し、そして10％熱不活性化された胎児ウシ血清、Ｌ−グルタミン（2mM）、ペニシリン(100Ｕ／ml)及びストレプトマイジン(0.1mg／ml)により補充されたRPMI培地において規則的な継代により維持した。細胞を、10倍希釈度で、100μｇ／ml−1.0ng／mlの範囲の薬物濃度に連続して４日間、暴露し、そして４日目の最後にアッセイした。個々の濃度及び薬物を有さない対照を、６個のレプリカウェルにおいて少なくとも２度くり返した。結果をプロットし、そして次にIC₅₀を測定した。薬物感受性ヒト類表皮癌KB3-1細胞系及びそのビンブラスチン−選択された複数薬物−耐性変異体KB-V1細胞(Akiyam aなど.，Genetics 11:117-126(1985))は、Dr．Michael Gottesmann(National Ca ncer Institute)により提供された。それらは５％CO₂において37℃で単層培養物として増殖され、そして10％熱不活性化されたウシ胎児血清により補充されたダルベッコ最少必須培地において規則的な継代により維持された。KB-V1細胞を、１mg/mlのビンブラスチンの存在下で維持した。表１．コラリン誘導体及び関連する化合物のトポイソメラーゼＩ型及びII型介在されたDNA分解ａ）IC₅₀は、４日間の連続した薬物暴露の後に計算された。N.D.＝決定されなかった。ｂ）トポイソメラーゼＩ型分解値は、REC(相対的効果的濃度)、すなわちカンブトテシンに対する濃度(CPT)として報告され、この値は、ヒトトポイソメラーゼＩ型の存在下でプラスミドDNAに対して同じ分解を生成することができる１として任意には推定される。ｃ）トポイソメラーゼII型分解値は、REC(相対的効果的濃度)、すなわちVM-26に対する濃度として報告され、この値は、ウシ胸腺トポイソメラーゼII型の存在下でプラスミドDNAに対して同じ分解を生成することができる１として任意に推定される。ｄ）細胞毒性の表示は、アッセイされる最初の用量よりも実質的に高いIC₅₀値の表示であるとは思われなかった。式Ｉの一定の化合物、特に化合物13ｅは、有力なトポイソメラーゼＩ型毒素である。さらに、式Ｉの化合物は一般的に、RPMI 8402癌細胞及びカンブトテシン耐性CPT-K5細胞に対する細胞毒性活性を有する。従って、式Ｉの化合物は、癌、特に上記で同定された哺乳類固体腫瘍又は血液学的悪性疾患の処理のために、細胞毒性剤として有用であり得る。ベンズ〔ａ〕アクリジンがコラリンに関連する非電荷の類似体である事実は、それらの剤が細胞吸収を増強することを示唆する。それらがインビボで、荷電された化合物よりも容易にクリアランスしない可能性が存在する。さらに、コラリン及びコラリン類似体の構造内に存在するベンズイソキノリニウム成分の不在は、低い神経毒性を有するそれらの類似体をもたらすことができる。すべての出版物、特許及び特許書類は、引用により個々に組込まれているかのように、引用により本明細書中に組込まれる。本発明は、種々の特定の及び好ましい態様及び技法により記載されて来た。しかしながら、多くの変更及び修飾が本発明の範囲内で行なわれ得ることが理解されるべきである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１０年１１月１６日（１９９８．１１．１６）【補正内容】請求の範囲１．下記式（II）：〔式中、Ｒ₁及びＲ₂は独立してOH，NO₂，NH₂、ハロ、NHCO(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；又はＲ₁及びＲ₂は一緒に−OCH₂O−であり；Ｒ₃はＨであり：Ｒ₅及びＲ₆は独立してＨ，OH，NO₂，NH₂、ハロ、NHCO(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル、又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；又はＲ₅及びＲ₆は一緒に−OCH₂O−であり；そしてＲ₇はＨ、又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキルである〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるその塩。２．下記式：〔式中、Ｒ₁及びＲ₂は独立してNO₂、ハロ、NHCO(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル又は(Ｃ₁− Ｃ₈)アルコキシであり；又はＲ₁及びＲ₂は一緒に−OCH₂O−であり；Ｒ₃はＨであり；Ｒ₅及びＲ₆は独立してＨ，OH，NO₂，NH₂、ハロ、NHCO(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル、又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；又はＲ₅及びＲ₆は一緒に−OCH₂O−であり；そしてＲ₇はＨ、又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキルである〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるその塩。３．Ｒ₁及びＲ₂の１つ又は両者が(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシである請求の範囲第１又は２項記載の化合物。４．Ｒ₁及びＲ₂の両者が(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシである請求の範囲第１又は２項記載の化合物。５．Ｒ₁及びＲ₂の１つ又は両者がメトキシである請求の範囲第１又は２項記載の化合物。６．Ｒ₁及びＲ₂が両者ともメトキシである請求の範囲第１又は２項記載の化合物。７．Ｒ₁及びＲ₂が一緒に−OCH₂O−である請求の範囲第１又は２項記載の化合物。８．Ｒ₅及びＲ₆が一緒に−OCH₂O−である請求の範囲第１又は２項記載の化合物。９．Ｒ₅及びＲ₆がそれぞれ独立してOH又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキシであり；又はＲ₅ 及びＲ₆が一緒に−OCH₂O−である請求の範囲第１又は２項記載の化合物。 10．Ｒ₇が水素、メチル、又はエチルである請求の範囲第１又は２項記載の化合物。 11．下記式（II）：〔式中、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₅及びＲ₆は独立してＨ，OH，NO₂，NH₂、ハロ、NHCO( Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；Ｒ₁及びＲ₂は一緒に−OCH₂ O−であり；Ｒ₂及びＲ₃は一緒に−OCH₂O−であり；Ｒ₅及びＲ₆は一緒に−OCH₂O −であり；そしてＲ₇はＨ又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキルであり；但し、Ｒ₁及びＲ₂の１つが(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり又はＲ₁及びＲ₂が一緒に −OCH₂O−である〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるその塩。 12．下記式：〔式中、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₅及びＲ₆は独立してＨ，OH，NO₂，NH₂、ハロ、NHCO( Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；Ｒ₁及びＲ₂は一緒に−OCH₂ O−であり；Ｒ₂及びＲ₃は一緒に−OCH₂O−であり；Ｒ₅及びＲ₆は一緒に−OCH₂O −であり；そしてＲ₇はＨ又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキルであり；但し、Ｒ₁及びＲ₂の１つが(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり又はＲ₁ 及びＲ₂が一緒に−OCH₂O−である〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるその塩。 13．Ｒ₅及びＲ₆がそれぞれ独立してOH又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；又はＲ₅及びＲ₆が一緒に−OCH₂O−である請求の範囲第11又は12項記載の化合物。 14．Ｒ₇が水素、メチル又はエチルである請求の範囲第11又は12項記載の化合物。 15．Ｒ₂及びＲ₃が一緒に−OCH₂O−である請求の範囲第11又は12項記載の化合物。 16．下記式（II）：〔式中、Ｒ₁，Ｒ₅及びＲ₆は独立してＨ，OH，NO₂，NH₂、ハロ、NHCO(Ｃ₁−Ｃ₈) アルキル又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；Ｒ₂及びＲ₃は一緒に−OCH₂O−であり，そしてＲ₇はＨ又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキルである〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるその塩。 17．下記式：〔式中、Ｒ₁，Ｒ₅及びＲ₆は独立してＨ，OH，NO₂，NH₂、ハロ、 NHCO(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；Ｒ₂及びＲ₃は一緒に−OCH₂O−であり；そしてＲ₇はＨ又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキルである〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるその塩。 18．Ｒ₅及びＲ₆がそれぞれ独立してＨ、又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシである請求の範囲第16又は17項記載の化合物。 19．Ｒ₅及びＲ₆がそれぞれメトキシである請求の範囲第16又は17項記載の化合物。 20．Ｒ₇が水素、メチル、又はエチルである請求の範囲第16又は17項記載の化合物。 21．化合物２，３，９，10−テトラメトキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン、２，３−ジメトキシ−９，10−メチレンジオキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン、９，10−ジメトキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン、２，３−ジメトキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン、５，６−ジヒドロ−９，10−ジメトキシ−３，４−メチレンジオキシベンズ〔ａ〕アクリジン、５，６−ジヒドロ−３，４，９，10−テトラメトキシベンズ〔ａ〕アクリジン、２−アミノ−９，10−ジメトキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン、３−クロロ−９，10−ジメトキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン、２，３，９，10−テトラメトキシベンズ〔ａ〕アクリジン、２，３−ジメトキシ−９，10−メチレンジオキシベンズ〔ａ〕アクリジン、９，10 −ジメトキシベンズ〔ａ〕アクリジン、２，３−ジメトキシ−ベンズ〔ａ〕アクリジン、３−クロロ−９，10−ジメトキシベンズ〔ａ〕アクリジン、２，３，９，10−テトラメトキシ−７−メチル−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジニウムメトスルフェート、２，３，９，10−テトラメトキシ−７−メチルベンズ〔ａ〕アクリジニウムメトスルフェート、２，３，９，10−テトラヒドロキシ−５，６−ジヒドロベンズ〔ａ〕アクリジン、２，３，９，10−テトラヒドロキシベンズ〔ａ〕アクリジン（14ｇ）；及び医薬的に許容できるその塩。 22．化合物５，６−ジヒドロ−９，10−ジメトキシ−３，４−メチレンジオキシベンズ〔ａ〕アクリジン；又は医薬的に許容できるその塩。 23．請求の範囲１〜22のいづれか１項記載の化合物、及び医薬的に許容できるキャリヤーを含んで成る医薬組成物。 24．医学療法又は診断への使用のための請求の範囲１〜22のいづれか一項記載の化合物。 25．前記医学療法が癌の処理である請求の範囲第24項記載の化合物。 26．癌の処理のために有用な医薬を調製するためへの請求の範囲第１〜22のいづれか１項記載の化合物の使用。 27．請求の範囲第１〜22のいづれか１項記載の化合物の一定量を、癌を有する哺乳類に投与することを含んで成る、癌細胞増殖を阻害するための治療方法。 28．前記哺乳類がヒトである請求の範囲第27項記載の方法。 29．前記癌が白血病又は黒色腫である請求の範囲第27項記載の方法。 30．前記癌が固形癌である請求の範囲第27項記載の方法。 31．前記腫瘍が乳、肺、結腸又は卵巣腫瘍である請求の範囲第30項記載の方法。 32．前記化合物が医薬的に許容できるキャリヤーと組合して投与される請求の範囲第27項記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者リウ，リロイフォンアメリカ合衆国，ニュージャージー 08807，ブリッジウォーター，フェアエイカーズドライブ５ (72)発明者マッキー，ダーシャンビー. アメリカ合衆国，カンザス 66210，レネクサ，リチャーズコート 10928

Claims

【特許請求の範囲】１．下記式（Ｉ）：〔式中、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₅及びＲ₆は独立して、Ｈ，OH，NO₂，NH₂、ハロ、NHC O(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；Ｒ₁及びＲ₂は一緒に−O CH₂O−であり；Ｒ₂及びＲ₃は一緒に−OCH₂O−であり；あるいはＲ₅及びＲ₆は一緒に−OCH₂O−であり；Ｒ₄及びＲ₇は独立してＨ、(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル又は不在であり；ＷはＣ又はＮであり；ＸはＣ又はＮであり；Ｙは−Ｃ＝，−Ｎ＝又は直接的な結合であり、但し、Ｙが−Ｃ＝である場合、ＸはＮであり；そしてＺは−CH＝CH−，−(CH₂)₂−又は不在である〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるその塩。２．ＷがＣである請求の範囲第１項記載の化合物。３．Ｙが−Ｎ＝であり、そしてＸがＣである請求の範囲第２項記載の化合物。４．Ｚが−CH＝CH−又は−(CH₂)₂−である請求の範囲第３項記載の化合物。５．Ｒ₅及びＲ₆が−OCH₃である請求の範囲第４項記載の化合物。６．Ｒ₃がＨである請求の範囲第５項記載の化合物。７．Ｒ₁が−OCH₃である請求の範囲第６項記載の化合物。８．Ｒ₂が−OCH₃である請求の範囲第７項記載の化合物。９．ＸがＮであり、そしてＹが−Ｃ＝である請求の範囲第２項記載の化合物。 10．Ｚが−CH＝CH−又は−(CH₂)₂−である請求の範囲第９項記載の化合物。 11．Ｒ₅及びＲ₆が−OCH₃である請求の範囲第10項記載の化合物。 12．Ｒ₃がＨである請求の範囲第11項記載の化合物。 13．Ｒ₁が−OCH₃である請求の範囲第12項記載の化合物。 14．Ｒ₂が−OCH₃である請求の範囲第13項記載の化合物。 15．一定量の請求の範囲第１項記載の化合物を、癌を有する哺乳類に投与することを含んで成る、癌細胞増殖を阻害するための治療方法。 16．前記哺乳類がヒトである請求の範囲第15項記載の方法。 17．前記癌が白血病又は黒色腫である請求の範囲第15項記載の方法。 18．前記癌が固形腫瘍である請求の範囲第15項記載の方法。 19．前記腫瘍が乳、肺、結腸又は卵巣腫瘍である請求の範囲第18項記載の方法。 20．前記化合物が、医薬的に許容できるキャリヤーと組合して投与される請求の範囲第15項記載の方法。 21．前記キャリヤーが液体ビークルである請求の範囲第20項記載の方法。 22．前記キャリヤーが非経口投与のために適合される請求の範囲第21項記載の方法。 23．前記キャリヤーが錠剤又はカプセルである請求の範囲第20項記載の方法。 24．下記式（II）：〔式中、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₅及びＲ₆は独立して、Ｈ，OH，NO₂，NH₂、ハロ、NHC O(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキル又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；Ｒ₁及びＲ₂は一緒に−O CH₂O−であり；Ｒ₂及びＲ₃は一緒に−OCH₂O−であり；又はＲ₅及びＲ₆は一緒に −OCH₂O−であり；そしてＲ₇はＨ、又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルキルである〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるその塩。 25．Ｒ₅及びＲ₆がOH又は(Ｃ₁−Ｃ₈)アルコキシであり；又はＲ₅及びＲ₆は一緒に−OCH₂O−である請求の範囲第24項記載の化合物。 26．Ｒ₇が水素、メチル又はエチルである請求の範囲第24項記載の化合物。 27．Ｒ₂及びＲ₃が一緒に−OCH₂O−である請求の範囲第１項記載の化合物。 28．化合物５，６−ジヒドロ−９，10−ジメトキシ−３，４−メチレンジオキシベンズ〔ａ〕アクリジン；又は医薬的に許容できるその塩。 29．有効量の請求の範囲第１項記載の化合物、及び医薬的に許容できるキャリヤーを含んで成る医薬組成物。