JP2001258557A - 蛋白質ｐａｐｉｎ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 シナプスの組織化等に関係するNPRAP/δ−カ
テニンと結合する新規蛋白質と、この蛋白質の遺伝子工
学材料および抗体を提供する。 【解決手段】 配列番号のアミノ酸配列を有する蛋白質
ＰＡＰＩＮ、配列番号１の塩基配列を有するポリヌクレ
オチド、これらのポリヌクレオチドを保有する組換えベ
クター、並びに前記の蛋白質ＰＡＰＩＮに対する抗体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この出願の発明は、神経プラ
コフィリン関連armadillo反復蛋白質（neural plakophi
lin-related armadillo-repeat protein：NPRAP）／δ
−カテニンに結合する新規の蛋白質ＰＡＰＩＮと、この
蛋白質を取得、利用するための遺伝子工学材料等に関す
るものである。

【０００２】

【従来の技術】ヒトをはじめとする多細胞生物の正常な
機能維持には、秩序ある細胞接着とそれに引き続く細胞
間の情報を支える細胞間結合の成立、さらにその細胞間
結合を通じて受け渡しされる情報に基づいて引き起こさ
れる細胞の分化といった一連の生命現象の時系制御が極
めて重要である。

【０００３】多細胞生物に認められる細胞間結合には多
くの共通性が存在する。細胞間結合は小腸の吸収上皮細
胞にみられるようにほとんどの上皮細胞間の内腔面に近
いものから密着帯（zonula occludens）、密着結合（ti
ght junction）、接着帯（zonula adherens）、接着斑
（desmosome）と名付けられて研究が進展してきたが、
一方で、神経シナプス結合が他の細胞間結合とは異なる
ように、細胞の種類の違いによる特異性も存在する。

【０００４】細胞間結合を担う細胞間接着装置の構造お
よびそれを構成する蛋白質については、近年の研究進展
により多くの知見が蓄積されつつあり、蛋白質が生体内
で果たす役割についても検討されてきている。細胞間接
着装置に関しては、形態学的研究とともに、分子生物学
的手法の進展につれ接着分子の同定が進み、接着帯と接
着斑にはカドヘリン−スーパーファミリーが局在し、細
胞間の強い結合を果たしていることが明らかになってい
る。

【０００５】armadillo反復配列は、元来ショウジョウ
バエ（Drosophilla）の体節極性決定遺伝子armadilloに
おいて同定された約40個のアミノ酸の反復するモチーフ
である（文献１に総説）。この反復配列を含んでいる蛋
白質のリストには、β−カテニン、プラコグロビン、腺
腫性結腸ポリポーシス症遺伝子産物、smg GDP解離刺激
因子（smg GDP Dissociation Stimulator（GDS）)と名
付けられた小型Ｇ蛋白質の制御蛋白質、およびsmg GDS
結合蛋白質（smg GDS-associated protein（SMAP）)が
含まれる（文献１および２に総説）。それらのうち、p1
20^ctnとその関連蛋白質はファミリーを形成している。p
120^ctnファミリーは、p120^ctn、B6P／プラコフィリン
１、プラコフィリン２、ヴェロ・カーディオ・フェイシ
ャル症候群において欠失するarmadillo反復遺伝子（arm
adillo-repeat gene deleted in velo-cardio-facial s
yndrome（ARVCF））、p0071、および神経プラコフィリ
ン関連armadillo反復蛋白質/δ−カテニンからなる（文
献３−10）。p120^ctnは、接着結合（adherens junctio
n）に多いチロシンキナーゼリン酸化の主要な基質とし
て同定されており、10個のarmadillo反復を含んでいる
（文献３、11−13）。p120^ctnはＥ−カドヘリンと直接
相互作用する。B6P／プラコフィリン１は、接着斑に局
在する蛋白質であり、ケラチンと相互作用する（文献
４、５）。プラコフィリン２もまた接着斑に局在する
（文献６）。ARVCFは、咽頭弓および咽頭嚢に関連する
組織の発生に影響を及ぼすヒトの疾患に関係する遺伝子
として単離されており、10個のarmadillo反復を含む蛋
白質をコード化している（文献10）。p0071も１０個のa
rmadillo反復を有しており、Hela細胞およびA431細胞で
はデスモプラキンと共に局在するが、マディンダービー
・ウシ腎臓細胞では接着結合に局在する(文献８）。NPR
AP／δ−カテニンは二つのグループにより、B6P／プロ
コフィリン１に相同な蛋白質として、またプレセニリン
1と相互作用する蛋白質として各々独自に発見されてい
る（文献９、10）。

【０００６】NPRAP/δ−カテニンはＮ−末端に高次コイ
ルであるαヘリックスを、中央部に10個のarmadillo反
復を、またＣ−末端領域にはPSD−95／Dlg−A／ZO−1
（PDZ)結合モチーフを有する。この分子構造はp0071の
それと類似しており、NPRAP/δ−カテニンはp0071の神
経でのアイソフォームであると考えられている。NPRAP/
δ−カテニンは、中央のarmadillo反復を介してプレセ
ニリン1の親水性のループと相互作用する（文献10、1
4、15）。マディンダービー・イヌ腎臓細胞にトランス
フェクトすると、NPRAP/δ−カテニンは接着結合に局在
し、Ｅ−カドヘリンおよびβ−カテニンと相互作用する
（文献16）。また、この出願の発明者らは、NPRAP/δ−
カテニンが、シナプスの構成要素の集合に役割を果たす
シナプスのスカフォルディング分子（S−SCAM）と相互
作用することを報告している（文献17）。これらの発見
は、NPRAP/δ−カテニンがシナプスの組織化に関係する
ことを示唆している。最近の研究では、プレセニリン1
がノッチ（Notch）の細胞質ドメインを切り離すことに
よりノッチ経路のシグナルを促進すること、β−カテニ
ンを安定化することによりWnt/ウィングレス経路に関係
するかもしれないことが示されている（文献18−22）。
したがって、NPRAP/δ−カテニンとプレセニリン1なら
びにS−SCAMとの相互作用は、高度に関わりあっている
と考えられる。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】細胞接着の分子機構を
解明することは、例えば、癌腫の浸潤、転移のメカニズ
ムの解明につながる可能性があり、癌腫をはじめとし
て、様々なヒト疾患の診断やその治療法、治療薬等の開
発への応用も期待される。そして、そのなような解明の
ためには、細胞接着に関与する分子の全貌を明らかにす
る必要がある。

【０００８】この出願の発明は、以上のとおりの事情に
鑑みてなされたものであって、NPRAP/δ−カテニンと結
合する新規な蛋白質を提供することを課題としている。

【０００９】また、この発明は、この蛋白質を遺伝子工
学的に生産するための材料を提供することも課題として
いる。

【００１０】

【課題を解決するための手段】この出願は、上記の課題
を解決するものとして、以下の(1)から(5)の発明を提供
する。 (1) 配列番号２のアミノ酸配列を有する蛋白質ＰＡＰ
ＩＮ。 (2) 前記発明(1)の蛋白質ＰＡＰＩＮをコードするポリ
ヌクレオチド。 (3) 配列番号１の塩基配列を有する前記発明(2)のポリ
ヌクレオチド。 (4) 前記発明(3)のポリヌクレオチドを保有する組換え
ベクター。 (5) 前記発明(1)の蛋白質ＰＡＰＩＮに対する抗体。

【００１１】発明(1)の蛋白質ＰＡＰＩＮは、プラコフ
ィリン関連armadillo反復蛋白質と相互作用するPDZ蛋白
質（Plakophilin-related armadillo-repeat protein-i
nteracting PDZ protein（PAPIN）)により命名された。
この蛋白質ＰＡＰＩＮはラット由来の蛋白質であり、発
明(2)のポリヌクレオチド（ゲノム遺伝子）から発現さ
れる。また、このゲノム遺伝子から転写されるｍＲＮＡ
からは、発明(3)のポリヌクレオチド（ｃＤＮＡ）が合
成される。なお、この蛋白質ＰＡＰＩＮは全ての哺乳動
物細胞に存在する蛋白質であることから、配列番号２の
アミノ酸配列と相同の他の動物由来の蛋白質もこの発明
の範囲に含まれる。

【００１２】以下、前記の各発明について実施の形態を
詳しく説明する。

【００１３】

【発明の実施の形態】発明(1)の蛋白質ＰＡＰＩＮは、
配列番号１に塩基配列を示した8301bpのｃＤＮＡ（発明
(3)のポリヌクレオチド）にコードされた蛋白質であ
り、配列番号２に示した2766個のアミノ酸配列を有して
いる。

【００１４】この蛋白質ＰＡＰＩＮは公知の方法によ
り、ラットやその他の哺乳動物組織から単離する方法、
この発明によって提供されるアミノ酸配列に基づき化学
合成によってペプチドを調製する方法、あるいは発明
(3)によって提供されるポリヌクレオチドを用いて組換
えＤＮＡ技術で生産する方法などにより取得することが
できる。例えば、組換えＤＮＡ技術によってＰＡＰＩＮ
を取得する場合には、発明(3)のポリヌクレオチドを有
するベクターからインビトロ転写によってＲＮＡを調製
し、これを鋳型としてインビトロ翻訳を行なうことによ
りインビトロで発現できる。また各ポリヌクレオチドを
公知の方法により適当な発現ベクターに組換えれば（発
明(4)）、大腸菌、枯草菌、酵母、動物細胞等で、ポリ
ヌクレオチドがコードするＰＡＰＩＮを大量に発現させ
ることができる。

【００１５】この発明の蛋白質ＰＡＰＩＮを大腸菌など
の微生物で発現させる場合には、微生物中で複製可能な
オリジン、プロモーター、リボソーム結合部位、ＤＮＡ
クローニング部位、ターミネーター等を有する発現ベク
ターに、この発明のポリヌクレオチドを挿入結合して組
換えた発現ベクターを作成し、この発現ベクターで宿主
細胞を形質転換したのち、得られた形質転換体を培養す
れば、ポリヌクレオチドがコードしているＰＡＰＩＮを
微生物内で大量生産することができる。あるいは、他の
蛋白質との融合蛋白質として発現させることもできる。
得られた融合蛋白質を適当なプロテアーゼで切断するこ
とによって、ポリヌクレオチドがコードする蛋白質部分
のみを取得することもできる。

【００１６】この発明の蛋白質ＰＡＰＩＮを動物細胞で
発現させる場合には、この発明のポリヌクレオチドを、
動物細胞用プロモーター、スプライシング領域、ポリ
(A)付加部位等を有する動物細胞用発現ベクターに組換
え、動物細胞内に導入すれば、この発明の蛋白質ＰＡＰ
ＩＮを動物細胞内で発現できる。

【００１７】以上のとおり方法によって得られる蛋白質
ＰＡＰＩＮは、例えば、この蛋白質を特異的に認識する
抗体を作成するための抗原として使用することができ
る。

【００１８】発明(1)の蛋白質ＰＡＰＩＮには、配列番
号２のアミノ酸配列のいかなる部分アミノ酸配列を含む
ペプチド断片（５アミノ酸残基以上）も含まれる。これ
らのペプチド断片もまた抗体を作製するための抗原とし
て用いることができる。

【００１９】発明(2)のポリヌクレオチドは、前記の蛋
白質ＰＡＰＩＮをコードする哺乳動物のゲノム遺伝子で
あって、例えば、配列番号１の塩基配列を有する発明
(3)のポリヌクレオチドまたはその一部配列をプローブ
として、既存のゲノムライブラリー等から単離すること
ができる。

【００２０】発明(3)のポリヌクレオチドは、配列番号
１の塩基配列を有することを特徴とするｃＤＮＡであ
り、前記蛋白質ＰＡＰＩＮをコードしている。このポリ
ヌクレオチドは、配列番号１の塩基配列に基づいて合成
したオリゴヌクレオチドプローブを用いて、ラットやそ
の他の哺乳動物ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニング
することにより、この発明のポリヌクレオチドと同一の
クローンを容易に得ることができる。あるいは、これら
のオリゴヌクレオチドをプライマーとして、ポリメラー
ゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法を用いて、目的ポリヌクレオチ
ドを合成することもできる。

【００２１】一般に哺乳動物の遺伝子は個体差による多
型が頻繁に認められる。従って配列番号１において、１
または複数個のヌクレオチドの付加、欠失および／また
は他のヌクレオチドによる置換がなされているポリヌク
レオチドもこの発明に含まれる。

【００２２】同様に、これらの変更によって生じる１ま
たは複数個のアミノ酸残基の付加、欠失および／または
他のアミノ酸残基による置換がなされている蛋白質も、
配列番号２のアミノ酸配列を有する蛋白質の活性を有す
る限り、この発明に含まれる。

【００２３】発明(3)のポリヌクレオチドには、配列番
号１の塩基配列のいかなる部分塩基配列を含むｃＤＮＡ
断片（１０ｂｐ以上）、あるいはそれらのアンチセンス
鎖からなるポリヌクレオチドも含まれる。

【００２４】発明(5)の抗体は、蛋白質ＰＡＰＩＮそれ
自体、またはその部分ペプチドを抗原として、公知の方
法により、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗
体として得ることができる。

【００２５】以下、この発明のＰＡＰＩＮの構造とその
機能確認について行った実験結果を説明する。 １．材料および方法 １．１ 酵母のtwo-hybridスクリーニングおよびｃＤＭ
Ａスクリーニング two-hybridスクリーニングは、ラット脳ｃＤＮＡライブ
ラリーを用いて文献23の記載に従って行なった。ｃＤＮ
Ａスクリーニングは、ラット脳ｃＤＮＡライブラリー
（Stratagene)を用いたプラークハイブリッド法により
おこなった（文献23）。 １．２ 発現ベクターの構築 種々の発現ベクターは、pCMV Myc、pClneo Myc、および
pGex5X−3（AmershamPharmacia Biotech）を用いて通常
の分子生物学的方法とＰＣＲ法とにより構築した。pCln
eo Myc δ−カテニンは、文献（17）に記載されたもの
と同様である。各発現ベクターにおけるＰＡＰＩＮアミ
ノ酸配列（配列番号２の位置）とは以下のとおりであ
る： pGex5X−3 5001−2（526−623）；pGex5X−3 5001
−3（526−794）；pGex5X−3 5001−9（1−422）；pCln
eo Myc 5001−1（1−176）；pClneo Myc 5001−2（1−4
22）；pClneo Myc 5001−3（1−604）；pClneo Myc 500
1−4（1−749）；pClneo Myc 5001−5（1−1131）；pCl
neo Myc 5001−6（641−1131）；pClneo Myc 5001−7
（2340−2766）；pClneo Myc 5001−9（329−623）；pC
lneo Myc 5001−10（329−749)；およびpClneo Myc 500
1−11（526−749）。また、p0071の部分ペプチドを含む
以下の発現ベクターも構築した：pGex5X−3p0071−1（1
−507）；pGex5X−3 p0071−3（988−1211）； pClneo
Myc p0071−1（1−1211）；pClneo Myc p0071−2（1−1
192）；pClneo Myc p0071−3（1−1189）；およびpClne
o p0071−1（1−1211）。 １．３ 抗体 ウサギ抗PAPINおよび抗p0071ポリクローナル抗体を、発
現ベクターpGex5X−35001−2、3およびpCex5X−3 p0071
−1の発現産物を抗原として作成した。マウス抗Myc−ta
gモノクローナル抗体は、American Type Culture Colle
ctionから取得した。ローダミン結合、およびフルオレ
セインイソチオシアネート結合した二重標識法用の第二
抗体は、Chemicon社より入手した。 １．４ ラット脳シナプトソームの尿素／界面活性剤抽
出物からの ＰＡＰＩＮとグルタチオンS−トランスフェラーゼ（GS
T） 融合蛋白質を用いたプルダウン実験 ラットの脳より、文献（24）の記載に従って粗シナプト
ソームを調製した。２匹のラット脳からの粗シナプトソ
ームを、１％（w／v）トリトンX-100および６M尿素を含
む４mlの２０mM Hepes／NaOH pH7.4中でホモジナイズ
し、次いで100.000 x gで再度遠心した。上清を、100mM
NaClを含む２リットルの20mM Hepes／NaOHpH8.0に一晩
透析し、100,000 x gにて３０分間遠心した。上清２ml
を、グルタチオンセファロース４Bビーズ上に固定したp
Gex5X−３−PAPIN−９の発現産物またはGSTと共にイン
キュベートした。100mM NaClおよび0.5％（w／v）トリ
トンX-100を含む20mM Hepes／NaOH pH 7.4を用いて４回
洗浄した後、ビーズに付着した蛋白質をイムノブロット
法により検出した。 １．５ GST融合蛋白質とCOS細胞抽出物を用いたin vit
ro結合実験 COS細胞は、10％ウシ胎児血清を含むDMEM培地中で、10
％CO₂下、37℃で培養し、DEAE−デキストラン法（文献2
5）を用いて種々のMyc−tag標識ベクターｗｐトランス
フェクトした。10cm培養皿２枚のCOS細胞を、６M尿素お
よび１％（w／v）トリトンX-100を含む1.6mlの10mM Hep
es／NaOH pH 7.4中でホモジナイズし、100,000 x gにて
１５分間遠心した。上清を100mM NaClを含む20mM Hepes
／NaOH pH8.0に透析し、100,000 x gにて１５分間遠心
した。上清を尿素／界面活性剤抽出物として用いた。こ
のCOS抽出物の各々0.5mlのアリコートを、２０μlのグ
ルタチオンセファロース４Bビーズ上に固定した200pmol
の種々のGST融合蛋白質と共にインキュベートした。100
mM NaClおよび0.5％（w／v）トリトンX-100を含む20mM
Hepes／NaOH pH 8.0を用いてビーズを洗浄した後、ビー
ズ上の蛋白質を抗Myc抗体を用いたイムノブロット法を
用いて検出した。 １．６ 細胞の免疫染色法 CHO細胞に、TransFast Transfection Reagent（Promeg
a）を用い、3.5 cm培養皿当り５μgの種々のpClneo Myc
PAPIN発現ベクター構築物をトランスフェクトした。48
時間の培養の後、細胞を固定し、免疫染色し、共焦点顕
微鏡(Bio-Rad Laboratories）により画像化した。 １．７ その他の方法 ラット脳の細胞分画法、SDS−PAGE、および蛋白質濃度
の測定は、文献（23−25）の記載に従って行った。ウェ
スタンブロット分析およびノーザンブロット分析は、各
々ECL試薬（Amersham Parmacia Biotech）およびMultip
le Tissue Northern Blots（Clontech）を用いて行なっ
た。 ２．結果 NPRAP/δ−カテニンと相互作用する蛋白質を同定するた
め、NPRAP/δ−カテニンの種々のバイト（bait）コンス
トラクトを用いて、酵母two-hybridスクリーニングを行
なった。１x10⁶個の形質転換細胞から、わずかに一つの
陽性クローンpPrey 5001が得られた。このpPrey 5001の
配列分析から、このクローンが３つのPDZドメインを含
むことが確認された。完全長のクローンを得るため、プ
ローブとしてpPrey 5001からのインサートを用いて、ラ
ンダムプライム法によりラット脳ｃＤＮＡライブラリー
をスクリーニングした。開始コドンと終止コドンの両方
を含んでいる単一クローンは得られなかったが、いくつ
かの重複しているクローンの分析から、2,766個のアミ
ノ酸からなる蛋白質を試験的に同定し（図１A）、この
蛋白質をＰＡＰＩＮと名付けた。ＰＡＰＩＮは、N−末
端に４個のPDZドメインと、C−末端に２個のPDZドメイ
ンを有する。４番目と５番目のPDZドメインの間の中間
領域は、既知の蛋白質との有意な相同性を示さなかった
（図１Ba）。pPrey 5001は２番目から４番目までのPDZ
ドメインにわたるアミノ酸配列（231から811まで）を含
んでいた（図１A、下線部）。一つのクローンp5001−52
は、２番目と３番目のPDZドメインの間に52アミノ酸の
インサートを有していた（図１Bb）。もう一つのクロー
ンp5001−61もまたインサートを有しており、４番目のP
DZドメインの後で終止していた（図１Bc）。これらのク
ローンは、ＰＡＰＩＮがいくつかのスプライシングバリ
アントを有することを示している。

【００２６】pPrey 5001は、pBTM116δ−カテニン−１
とのみ結合し、NPRAP/δ−カテニンのC−末端領域を含
まないpBTM116δ−カテニン−３または−4とは相互作用
しなかった（データは示さず）（文献９、10）ことか
ら、ＰＡＰＩＮのPDZドメインは、NPRAP/δ−カテニン
のC−末端PDZドメイン結合モチーフに結合するものと考
えられる。実際、ＰＡＰＩＮの１番目および２番目のPD
Zドメインを含むGST−融合蛋白質は、ラットの粗シナプ
トソームからのNPRAP/δ−カテニンと結合した（図
２）。

【００２７】次に、ラットの種々の組織を用いてノーザ
ンブロット分析を行なった結果、12kbpのバンドが心
臓、脳、脾臓、肺、肝臓、骨格筋、腎臓、および精巣に
おいて検出された（図３A）。また、ＰＡＰＩＮの組織
分布は、p0071のそれと類似していた（図３B）が、文献
（10）で報告されたように脳に特異的に発現されたNPRA
P/δ−カテニンのそれとは類似していなかった（データ
は示さず）。従って、脳以外の組織におけるＰＡＰＩＮ
のリガンドはp0071である可能性がある。p0071は、NPRA
P/δ−カテニンのものと類似したPDZ−結合モチーフを
有しているが、このモチーフはp0071のＣ−末端には存
在しない（図４A）。そこで、ＰＡＰＩＮがこのモチー
フに結合するかどうかを調べた。すなわち、Myc標識し
た種々のp0071発現ベクターを調製した（図４B）。pCln
eo Myc p0071−１および−２の発現産物は、ＰＡＰＩＮ
の１番目および２番目のPDZドメインを含んでいるGST融
合蛋白質と結合したが、pClneo Myc p0071−3の発現産
物は結合しなかった（図４C）。これらの結果は、p0071
のPDZ結合モチーフがＰＡＰＩＮとの結合に必要である
ことを示している。ＰＡＰＩＮのどのPDZドメインがp00
71との相互作用に関与するのかをさらに決定するため、
Myc標識したＰＡＰＩＮ発現ベクターを調製した（図５
A）。pClneo Myc PAPIN−２および−９の発現産物は、p
0071のＣ−末端を含んでいるGST融合蛋白質に結合した
が、他の発現産物は結合せず（図５B）、ＰＡＰＩＮの
２番目のPDZドメインがp0071結合ドメインであることが
確認された。

【００２８】最後に、トランスフェクトした細胞におけ
るp0071とＰＡＰＩＮの間の相互作用を確認した。発現
ベクターpClneo Myc PAPIN−6および−7の発現産物は、
CHO細胞において過剰発現された場合には形質膜に局在
していたが、pClneo Myc PAPIN−1、−2および−9の発
現産物は細胞質ゾル中に局在していた（図６A）。ま
た、過剰発現されたp0071は、CHO細胞の形質膜中に検出
された。p0071と共にＰＡＰＩＮを発現させると、pClne
o Myc PAPIN−2および−9の発現産物は形質膜に移行し
たが、pClneo Myc PAPIN−1のそれは移行しなかった
（図６B）。従って、細胞ではＰＡＰＩＮの２番目のPDZ
ドメインがp0071と結合することが確認された。

【００２９】

【発明の効果】以上詳しく説明したとおり、この出願の
発明によって、シナプスの組織化等に関係するNPRAP/δ
−カテニンと結合する新規蛋白質ＰＡＰＩＮが提供され
る。この蛋白質は、細胞結合の分子機構の全容を解明す
るための重要な情報を提供するばかりか、例えば癌腫を
はじめとする種々のヒト疾患の診断やその予防・治療
法、治療薬等の開発に有用である。

【００３０】

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2, 11943-11951.

【００３１】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Japan Science and Technology Corporation <120> Protein Papin <130> <140> <141> <160> 2 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 8301 <212> DNA <213> Rattus norvegicus <220> <221> CDS <222> (1)..(8301) <300> <308> GenBank Accession No. AF169411 <309> 1999-09-21 <400> 1 atg ccc atc acc cag gac aat gcc ttg ctg cac ctg ccc ctc ctg tac 48 Met Pro Ile Thr Gln Asp Asn Ala Leu Leu His Leu Pro Leu Leu Tyr 1 5 10 15 gag tgg ctg cag aac agc ctg agg gag ggt ggg gac agt ccg gag cag 96 Glu Trp Leu Gln Asn Ser Leu Arg Glu Gly Gly Asp Ser Pro Glu Gln 20 25 30 cgg ctc tgc cag gcg gcc atc cag aag ctg cag gag tac atc caa ctg 144 Arg Leu Cys Gln Ala Ala Ile Gln Lys Leu Gln Glu Tyr Ile Gln Leu 35 40 45 aac ttg gct gtg gat gag agt aca gtt ccc cct gat cac agt ccc ccg 192 Asn Leu Ala Val Asp Glu Ser Thr Val Pro Pro Asp His Ser Pro Pro 50 55 60 gag atg gag atc tgt acg gtg tat ctc acc aag cag ctg ggg gac act 240 Glu Met Glu Ile Cys Thr Val Tyr Leu Thr Lys Gln Leu Gly Asp Thr 65 70 75 80 gag act gtg ggg ctc agt ttt ggc aac atc cct gtt ttc ggg gac tac 288 Glu Thr Val Gly Leu Ser Phe Gly Asn Ile Pro Val Phe Gly Asp Tyr 85 90 95 ggt gaa aag cgt cga ggg ggt aag aag agg aaa acc cac cag ggg cca 336 Gly Glu Lys Arg Arg Gly Gly Lys Lys Arg Lys Thr His Gln Gly Pro 100 105 110 gtg ctg gac gtg ggc tgc atc tgg gtg aca gag ctg agg aag aac agc 384 Val Leu Asp Val Gly Cys Ile Trp Val Thr Glu Leu Arg Lys Asn Ser 115 120 125 cca gcg ggg aag agc gga aaa gtt cgg ctc cgg gat gag att ctt tcc 432 Pro Ala Gly Lys Ser Gly Lys Val Arg Leu Arg Asp Glu Ile Leu Ser 130 135 140 ctg aat gga cag ctg atg gtc gga gtt gat gtc act ggg gcc agt tac 480 Leu Asn Gly Gln Leu Met Val Gly Val Asp Val Thr Gly Ala Ser Tyr 145 150 155 160 ctc gct gag cag tgc tgg aat ggc ggc ttc atc tac ctg atc atg ctg 528 Leu Ala Glu Gln Cys Trp Asn Gly Gly Phe Ile Tyr Leu Ile Met Leu 165 170 175 cgg cgc ttc aag cag aaa gcc cac gtg act tac aat ggc aac agt ggc 576 Arg Arg Phe Lys Gln Lys Ala His Val Thr Tyr Asn Gly Asn Ser Gly 180 185 190 aac agc tca gaa ccc gga gag aca ccg acc ttg gag ctg ggt gac cag 624 Asn Ser Ser Glu Pro Gly Glu Thr Pro Thr Leu Glu Leu Gly Asp Gln 195 200 205 act tca aaa aag gga aaa aga aca aga aag ttt ggg gtc att tcc aga 672 Thr Ser Lys Lys Gly Lys Arg Thr Arg Lys Phe Gly Val Ile Ser Arg 210 215 220 ccc tct atc agc aag acc cct gaa gac tcc aag agc agc agt ggc tgt 720 Pro Ser Ile Ser Lys Thr Pro Glu Asp Ser Lys Ser Ser Ser Gly Cys 225 230 235 240 gac aca gcc gat gat ccc aat tcg gag ttg gag aac ggc gca gac ccc 768 Asp Thr Ala Asp Asp Pro Asn Ser Glu Leu Glu Asn Gly Ala Asp Pro 245 250 255 gaa ctt gga aat ggc cat gcc ttt gag cta gaa aat ggc ccg cat tct 816 Glu Leu Gly Asn Gly His Ala Phe Glu Leu Glu Asn Gly Pro His Ser 260 265 270 ctc aag gat gtg gct gga ccc cat ctg gag agg tca gaa gcg gac agt 864 Leu Lys Asp Val Ala Gly Pro His Leu Glu Arg Ser Glu Ala Asp Ser 275 280 285 gag gta gag ctc aga gtt cca aag aca gaa gcc cct ctg agt gac agc 912 Glu Val Glu Leu Arg Val Pro Lys Thr Glu Ala Pro Leu Ser Asp Ser 290 295 300 aat gac aaa cgc cgc ttc tca aaa act ggg aag aca gac ttc cag tcc 960 Asn Asp Lys Arg Arg Phe Ser Lys Thr Gly Lys Thr Asp Phe Gln Ser 305 310 315 320 agt gac tgt ctg gcg cgg gag gaa gtt ggc cgg ata tgg aag atg gag 1008 Ser Asp Cys Leu Ala Arg Glu Glu Val Gly Arg Ile Trp Lys Met Glu 325 330 335 ctg ctc aaa gaa tca gat ggg ctg gga att cag gtt agt gga ggc cga 1056 Leu Leu Lys Glu Ser Asp Gly Leu Gly Ile Gln Val Ser Gly Gly Arg 340 345 350 gga tca aag cgc tca cct cac gct atc gtt gtc acc caa gtg aag gaa 1104 Gly Ser Lys Arg Ser Pro His Ala Ile Val Val Thr Gln Val Lys Glu 355 360 365 gga ggt gcc gct cac agg gat ggc agg ctg tcc tta gga gac gaa ctg 1152 Gly Gly Ala Ala His Arg Asp Gly Arg Leu Ser Leu Gly Asp Glu Leu 370 375 380 ctg gtg atc aat ggt cac tta ctg gtc ggg ctg tcc cac gag gaa gct 1200 Leu Val Ile Asn Gly His Leu Leu Val Gly Leu Ser His Glu Glu Ala 385 390 395 400 gtg gcc att ctg cgc tca gcc act ggg atg gta cag ctg gta gtg gcc 1248 Val Ala Ile Leu Arg Ser Ala Thr Gly Met Val Gln Leu Val Val Ala 405 410 415 agc aag atg ccc ggg tca gaa gaa tcc cag gac gta ggc agc tct gag 1296 Ser Lys Met Pro Gly Ser Glu Glu Ser Gln Asp Val Gly Ser Ser Glu 420 425 430 gaa tcc aaa ggg aac ttg gaa agt ccc aaa cag ggc aac tgt aag acg 1344 Glu Ser Lys Gly Asn Leu Glu Ser Pro Lys Gln Gly Asn Cys Lys Thr 435 440 445 aaa ctc aag agc cga ctc tca gga ggt gtc cac cgc ctg gag tct gtt 1392 Lys Leu Lys Ser Arg Leu Ser Gly Gly Val His Arg Leu Glu Ser Val 450 455 460 gaa gaa tat aat gaa ctg atg gta cga aat ggg gac ccc cgg atc agg 1440 Glu Glu Tyr Asn Glu Leu Met Val Arg Asn Gly Asp Pro Arg Ile Arg 465 470 475 480 atg ctg gag gtc tcc cga gat ggc cgg aag cac tct ctt ccg cag ctg 1488 Met Leu Glu Val Ser Arg Asp Gly Arg Lys His Ser Leu Pro Gln Leu 485 490 495 ctg gac tct act ggg aca tct cag gaa tac cac atc gtg aag aag tct 1536 Leu Asp Ser Thr Gly Thr Ser Gln Glu Tyr His Ile Val Lys Lys Ser 500 505 510 acc cgc tcc ctg agc acc acc cac gtg gaa tca ccg tgg agg ctc atc 1584 Thr Arg Ser Leu Ser Thr Thr His Val Glu Ser Pro Trp Arg Leu Ile 515 520 525 cga cct tct gtc att tcc atc atc ggg cta tac aaa gag aaa ggc aag 1632 Arg Pro Ser Val Ile Ser Ile Ile Gly Leu Tyr Lys Glu Lys Gly Lys 530 535 540 ggc ctt ggc ttt agc att gct gga ggg cga gac tgc att cga ggc cag 1680 Gly Leu Gly Phe Ser Ile Ala Gly Gly Arg Asp Cys Ile Arg Gly Gln 545 550 555 560 atg gga att ttt gtc aag acc att ttc cca aac gga tca gcc gca gag 1728 Met Gly Ile Phe Val Lys Thr Ile Phe Pro Asn Gly Ser Ala Ala Glu 565 570 575 gac ggc agg ctc aaa gaa gga gat gaa atc cta gat gta aat gga ata 1776 Asp Gly Arg Leu Lys Glu Gly Asp Glu Ile Leu Asp Val Asn Gly Ile 580 585 590 cca atc aag ggc ttg acg ttt caa gag gct att cac acc ttc aag caa 1824 Pro Ile Lys Gly Leu Thr Phe Gln Glu Ala Ile His Thr Phe Lys Gln 595 600 605 atc cga agt ggg ctg ttt gtc ctc acc gtg cgc acc aag ctc ctc agc 1872 Ile Arg Ser Gly Leu Phe Val Leu Thr Val Arg Thr Lys Leu Leu Ser 610 615 620 ccc agt ctc acg ccc tgc tcc act ccc acg cac atg agc aga tcg agc 1920 Pro Ser Leu Thr Pro Cys Ser Thr Pro Thr His Met Ser Arg Ser Ser 625 630 635 640 tcc cca agc ttc aac acc aac agt ggg gga acc cca gca gga gga ggc 1968 Ser Pro Ser Phe Asn Thr Asn Ser Gly Gly Thr Pro Ala Gly Gly Gly 645 650 655 caa gag gaa ggt ggc tct tca tcc ctg ggt cgg aag gct ccc ggg ccc 2016 Gln Glu Glu Gly Gly Ser Ser Ser Leu Gly Arg Lys Ala Pro Gly Pro 660 665 670 aaa gac agg att gtc atg gaa gtc aca ctc aac aaa gag cca aga gtt 2064 Lys Asp Arg Ile Val Met Glu Val Thr Leu Asn Lys Glu Pro Arg Val 675 680 685 gga ctg ggc att ggt gcc tgc tgc ttg gcc ttg gaa aac agc cct cca 2112 Gly Leu Gly Ile Gly Ala Cys Cys Leu Ala Leu Glu Asn Ser Pro Pro 690 695 700 ggt ata tac att cac agc ctt gcc cct gga tcc gtg gcc aag atg gag 2160 Gly Ile Tyr Ile His Ser Leu Ala Pro Gly Ser Val Ala Lys Met Glu 705 710 715 720 agc aac ctg agc cgg gga gac caa atc ctg gaa gtg aat tct gtg aac 2208 Ser Asn Leu Ser Arg Gly Asp Gln Ile Leu Glu Val Asn Ser Val Asn 725 730 735 gtg cgt cat gcg gct tta agc aaa gtg cat gcc atc tta agt aaa tgt 2256 Val Arg His Ala Ala Leu Ser Lys Val His Ala Ile Leu Ser Lys Cys 740 745 750 ccc cca ggg cct gtt cgc ctg gtc atc ggc cga cac cct aat cca aag 2304 Pro Pro Gly Pro Val Arg Leu Val Ile Gly Arg His Pro Asn Pro Lys 755 760 765 gtc tcg gag cag gaa atg gac gaa gtg ata gca cgc agc act tac cag 2352 Val Ser Glu Gln Glu Met Asp Glu Val Ile Ala Arg Ser Thr Tyr Gln 770 775 780 gaa agc aga gaa gcc aac tcc tcc ccc ggc ctc ggt acc ccc ttg aag 2400 Glu Ser Arg Glu Ala Asn Ser Ser Pro Gly Leu Gly Thr Pro Leu Lys 785 790 795 800 agc ccc tct ctg gcc aaa aag gac tca ctc ctc tct gaa tct gag ctc 2448 Ser Pro Ser Leu Ala Lys Lys Asp Ser Leu Leu Ser Glu Ser Glu Leu 805 810 815 tcc caa tac ttt gtc cat gat ggc cag ggc tcc ctg tca gac ttt gtg 2496 Ser Gln Tyr Phe Val His Asp Gly Gln Gly Ser Leu Ser Asp Phe Val 820 825 830 gtg gct ggc tct gag gat gag gat cac cct gga agt gga tat gag acc 2544 Val Ala Gly Ser Glu Asp Glu Asp His Pro Gly Ser Gly Tyr Glu Thr 835 840 845 tcg gag gat ggc agc ctg ctt cct gtc ccc tca gct cac aaa gcc agg 2592 Ser Glu Asp Gly Ser Leu Leu Pro Val Pro Ser Ala His Lys Ala Arg 850 855 860 gcc aac agc ctt gtg acc ctt gga agc cag agg act tct ggg ctc tta 2640 Ala Asn Ser Leu Val Thr Leu Gly Ser Gln Arg Thr Ser Gly Leu Leu 865 870 875 880 cac aag cag gtg aca gtt gcc agg caa gcc agt ctc ccc gga agc ccc 2688 His Lys Gln Val Thr Val Ala Arg Gln Ala Ser Leu Pro Gly Ser Pro 885 890 895 cag gtc ctc agg aac cct ctt ctc cgc cag agg agg gtg cgt tgc tat 2736 Gln Val Leu Arg Asn Pro Leu Leu Arg Gln Arg Arg Val Arg Cys Tyr 900 905 910 gac agc aat ggt ggc agc gat gat gaa gac ttc gat ggt gaa ggg gac 2784 Asp Ser Asn Gly Gly Ser Asp Asp Glu Asp Phe Asp Gly Glu Gly Asp 915 920 925 tgc atc tcc ctc ccg gga gtc ctc cca ggt ccc ggc aag cct ctg gta 2832 Cys Ile Ser Leu Pro Gly Val Leu Pro Gly Pro Gly Lys Pro Leu Val 930 935 940 gaa gat gac acg agg cct gcc ttg aca acc tct tcc aaa agt att gat 2880 Glu Asp Asp Thr Arg Pro Ala Leu Thr Thr Ser Ser Lys Ser Ile Asp 945 950 955 960 gtg aac aag cag gag gaa aga ctc cag aaa cca ctg gtc agc aag gcc 2928 Val Asn Lys Gln Glu Glu Arg Leu Gln Lys Pro Leu Val Ser Lys Ala 965 970 975 tgc tcc gtg cct ctc ctc ggc agc tcg ctg gac tca gag cac agc atc 2976 Cys Ser Val Pro Leu Leu Gly Ser Ser Leu Asp Ser Glu His Ser Ile 980 985 990 ctc aat gga gca ggg ggt acc cct ccc aag gta gcc agc ctg cca ggt 3024 Leu Asn Gly Ala Gly Gly Thr Pro Pro Lys Val Ala Ser Leu Pro Gly 995 1000 1005 tct gga gaa acc ccc aag aat ggg ccc aga ggc tct ggg aga aaa gaa 3072 Ser Gly Glu Thr Pro Lys Asn Gly Pro Arg Gly Ser Gly Arg Lys Glu 1010 1015 1020 atg tca ggg tca aga agc tca cca aag ctg gaa tac aga gtc cct aca 3120 Met Ser Gly Ser Arg Ser Ser Pro Lys Leu Glu Tyr Arg Val Pro Thr 1025 1030 1035 1040 gac acc cag agc cca agg agc ccg gaa aac cat acc tcc cca cca cag 3168 Asp Thr Gln Ser Pro Arg Ser Pro Glu Asn His Thr Ser Pro Pro Gln 1045 1050 1055 aag agt gaa aat ctg gtg tcc agg cac aag ccc gtg gcc agg atc agc 3216 Lys Ser Glu Asn Leu Val Ser Arg His Lys Pro Val Ala Arg Ile Ser 1060 1065 1070 cca cac tac aag agg tct gat gca gag gag gcc cca ggt gga aca gcc 3264 Pro His Tyr Lys Arg Ser Asp Ala Glu Glu Ala Pro Gly Gly Thr Ala 1075 1080 1085 aat gga ccg tgt gct caa gac ttg aaa gtc cag gcg tct ccc gtg aaa 3312 Asn Gly Pro Cys Ala Gln Asp Leu Lys Val Gln Ala Ser Pro Val Lys 1090 1095 1100 gat cct gtc acc agc cgt cag cca ggt gga acc gca gag aag gaa ctt 3360 Asp Pro Val Thr Ser Arg Gln Pro Gly Gly Thr Ala Glu Lys Glu Leu 1105 1110 1115 1120 cgg gga aat ccc acc ccg ggg gac agc tct gtc ccc acc aac tgt gga 3408 Arg Gly Asn Pro Thr Pro Gly Asp Ser Ser Val Pro Thr Asn Cys Gly 1125 1130 1135 cca gcc agt acc cca tgc cac cca aac att gga ctc ccc aca gag aac 3456 Pro Ala Ser Thr Pro Cys His Pro Asn Ile Gly Leu Pro Thr Glu Asn 1140 1145 1150 ccg cag gga gct gca cca gag tgc ggg cca cac cct ggg act gga tgg 3504 Pro Gln Gly Ala Ala Pro Glu Cys Gly Pro His Pro Gly Thr Gly Trp 1155 1160 1165 gac ggg tcc tca gag cat ctc tgt tcc cca ggg aag agc agg gag gtt 3552 Asp Gly Ser Ser Glu His Leu Cys Ser Pro Gly Lys Ser Arg Glu Val 1170 1175 1180 cat cct gac tcc agc gag act cct aca gtc gcc gag caa gtc cac cag 3600 His Pro Asp Ser Ser Glu Thr Pro Thr Val Ala Glu Gln Val His Gln 1185 1190 1195 1200 cct gag agc ctc agc cag cca gtg tct ccc aga acc tca gag cct gag 3648 Pro Glu Ser Leu Ser Gln Pro Val Ser Pro Arg Thr Ser Glu Pro Glu 1205 1210 1215 tcc cag ggc ata tct aaa atg aag cca ccc agt cag aga tgt gtg tct 3696 Ser Gln Gly Ile Ser Lys Met Lys Pro Pro Ser Gln Arg Cys Val Ser 1220 1225 1230 ccc agg gag aag gcc tca act cct ccc gac tcc agc agg gct tgg gcc 3744 Pro Arg Glu Lys Ala Ser Thr Pro Pro Asp Ser Ser Arg Ala Trp Ala 1235 1240 1245 gct cct ggg gac agc tct cct agc act agg aga ata gct gtc ccc atg 3792 Ala Pro Gly Asp Ser Ser Pro Ser Thr Arg Arg Ile Ala Val Pro Met 1250 1255 1260 agc aca gga gca gca cca gct act gcc atc cca cag gcc tcc ctt gtg 3840 Ser Thr Gly Ala Ala Pro Ala Thr Ala Ile Pro Gln Ala Ser Leu Val 1265 1270 1275 1280 tcc cag gaa agg agc aga ggc ctc tca ggt ccc agc aag ggc ctg gga 3888 Ser Gln Glu Arg Ser Arg Gly Leu Ser Gly Pro Ser Lys Gly Leu Gly 1285 1290 1295 act aaa gaa ctc tgc ata cct aaa agc ttg aag gac ggt gct ctg ctc 3936 Thr Lys Glu Leu Cys Ile Pro Lys Ser Leu Lys Asp Gly Ala Leu Leu 1300 1305 1310 gaa gac aca gct cct gca tct gga aag atg tca cat gcc agc agc ccc 3984 Glu Asp Thr Ala Pro Ala Ser Gly Lys Met Ser His Ala Ser Ser Pro 1315 1320 1325 tct ggg cca gtg gct act gaa agg acc ctg tca gga agc cca gag aac 4032 Ser Gly Pro Val Ala Thr Glu Arg Thr Leu Ser Gly Ser Pro Glu Asn 1330 1335 1340 cct gtg aca gac atc gac aac ttc att gag gag gcc tct gag gcc agg 4080 Pro Val Thr Asp Ile Asp Asn Phe Ile Glu Glu Ala Ser Glu Ala Arg 1345 1350 1355 1360 ctt tct cag tct cct cag aaa gca gac tgc agg gct cac ggg gac act 4128 Leu Ser Gln Ser Pro Gln Lys Ala Asp Cys Arg Ala His Gly Asp Thr 1365 1370 1375 ttt gaa agt cag cca cca ggt gga gct ggg agc agc agt tcc cac cat 4176 Phe Glu Ser Gln Pro Pro Gly Gly Ala Gly Ser Ser Ser Ser His His 1380 1385 1390 gct cag atg gtc agg agt gac cag aca tcc tcc cca agg aag act gga 4224 Ala Gln Met Val Arg Ser Asp Gln Thr Ser Ser Pro Arg Lys Thr Gly 1395 1400 1405 ggc aca ggc tcg ccc cca ccc cag cag tgg gcc ctc cag cct tcc gtc 4272 Gly Thr Gly Ser Pro Pro Pro Gln Gln Trp Ala Leu Gln Pro Ser Val 1410 1415 1420 ctg gat tcc atc cat cct gac aaa cat ttg gct gtg aac aaa acc ttc 4320 Leu Asp Ser Ile His Pro Asp Lys His Leu Ala Val Asn Lys Thr Phe 1425 1430 1435 1440 ttg aac aac tac tct aga aat ttt agc aat ttc cac gaa gac agt att 4368 Leu Asn Asn Tyr Ser Arg Asn Phe Ser Asn Phe His Glu Asp Ser Ile 1445 1450 1455 tcc ctt tca ggc ccg ggc ggc agt tca gag ccg tcg ccc tca tcc atg 4416 Ser Leu Ser Gly Pro Gly Gly Ser Ser Glu Pro Ser Pro Ser Ser Met 1460 1465 1470 tat ggt aac gct gaa gac tca tcg tca gac cct gag tct ctt gct gaa 4464 Tyr Gly Asn Ala Glu Asp Ser Ser Ser Asp Pro Glu Ser Leu Ala Glu 1475 1480 1485 gac cca gga gca gct gcc agg aac aac tgg tca cct cct ctg tct cct 4512 Asp Pro Gly Ala Ala Ala Arg Asn Asn Trp Ser Pro Pro Leu Ser Pro 1490 1495 1500 gag tcc tcc cct aaa gaa ggt agc agt gag tct gag gac gag cga ata 4560 Glu Ser Ser Pro Lys Glu Gly Ser Ser Glu Ser Glu Asp Glu Arg Ile 1505 1510 1515 1520 gaa atc tgt tcc aca gat ggc tgc cct ggg acc cca gtg act gcc cct 4608 Glu Ile Cys Ser Thr Asp Gly Cys Pro Gly Thr Pro Val Thr Ala Pro 1525 1530 1535 cct cct acc cag gtt gca ctc tgc cca gtt ctg cca gta cag cag agg 4656 Pro Pro Thr Gln Val Ala Leu Cys Pro Val Leu Pro Val Gln Gln Arg 1540 1545 1550 gct gtg tgc aag cca gtg ggg gac atc tgt gag aga gcc tgc ttc gtg 4704 Ala Val Cys Lys Pro Val Gly Asp Ile Cys Glu Arg Ala Cys Phe Val 1555 1560 1565 cca gga gcc tca cgc act tcc atc ccg gac tct tct cag cca ttt tcc 4752 Pro Gly Ala Ser Arg Thr Ser Ile Pro Asp Ser Ser Gln Pro Phe Ser 1570 1575 1580 ttc ctg gat gta agc tct gag gag ccg gag aca tgg gcc agc ata aat 4800 Phe Leu Asp Val Ser Ser Glu Glu Pro Glu Thr Trp Ala Ser Ile Asn 1585 1590 1595 1600 gct tca cag aac cac atg ccc gtg tgc aca gaa gga atc atg gac gtc 4848 Ala Ser Gln Asn His Met Pro Val Cys Thr Glu Gly Ile Met Asp Val 1605 1610 1615 act agc aca agc tca aac atg gga gac agc cag tct tcc caa atg acc 4896 Thr Ser Thr Ser Ser Asn Met Gly Asp Ser Gln Ser Ser Gln Met Thr 1620 1625 1630 aga cat tgt cga aac gca cca ttc gtg ctt ggg aac cca gat atg gta 4944 Arg His Cys Arg Asn Ala Pro Phe Val Leu Gly Asn Pro Asp Met Val 1635 1640 1645 aat gat ttg gga cgt gac ctg ctg gat gag gga gcc cca aag gaa gga 4992 Asn Asp Leu Gly Arg Asp Leu Leu Asp Glu Gly Ala Pro Lys Glu Gly 1650 1655 1660 gca gct gct gcg agt gtg atg cgc agt gtg ttt gcc ctg ggg gcc gag 5040 Ala Ala Ala Ala Ser Val Met Arg Ser Val Phe Ala Leu Gly Ala Glu 1665 1670 1675 1680 ggc cct aag aac gga gag gcg gtc ttg gca gat cta cac att gcc gag 5088 Gly Pro Lys Asn Gly Glu Ala Val Leu Ala Asp Leu His Ile Ala Glu 1685 1690 1695 cgc ggc aac ctg gaa gac ttg cta cag aaa cca aaa aca atc tcc agg 5136 Arg Gly Asn Leu Glu Asp Leu Leu Gln Lys Pro Lys Thr Ile Ser Arg 1700 1705 1710 agg cct atc ctg acc tgg ttt aaa gaa ata aat aaa gac agc caa ggc 5184 Arg Pro Ile Leu Thr Trp Phe Lys Glu Ile Asn Lys Asp Ser Gln Gly 1715 1720 1725 tca cat ttg cgg agc aca tct gag aaa gaa cag tcc tcg atg ctg gct 5232 Ser His Leu Arg Ser Thr Ser Glu Lys Glu Gln Ser Ser Met Leu Ala 1730 1735 1740 ctg ggt cct ggc tcg aaa gct aac atg gtg aac acc ggc cac aga aag 5280 Leu Gly Pro Gly Ser Lys Ala Asn Met Val Asn Thr Gly His Arg Lys 1745 1750 1755 1760 ggg gtg act gtg cct aag agt cct cct tca cgg cag aag agt cag gaa 5328 Gly Val Thr Val Pro Lys Ser Pro Pro Ser Arg Gln Lys Ser Gln Glu 1765 1770 1775 aat aaa gac ctg ccc ccc aaa agt cca gtg gaa aca cta ggt aac tgt 5376 Asn Lys Asp Leu Pro Pro Lys Ser Pro Val Glu Thr Leu Gly Asn Cys 1780 1785 1790 cag aaa ccc aag tgc agc cct aaa ctg aag aga cta aac agc aaa ggc 5424 Gln Lys Pro Lys Cys Ser Pro Lys Leu Lys Arg Leu Asn Ser Lys Gly 1795 1800 1805 aaa gcc agt cct gag gta ccc gtg gcc att tcc act aag ggc agc agg 5472 Lys Ala Ser Pro Glu Val Pro Val Ala Ile Ser Thr Lys Gly Ser Arg 1810 1815 1820 aac gac cac agg aag acc ttg cct tca ccc cag gcc tcc cat aaa atg 5520 Asn Asp His Arg Lys Thr Leu Pro Ser Pro Gln Ala Ser His Lys Met 1825 1830 1835 1840 ttt tct aag gca gtg tca cac agg ctc cac ata gct gac cag gaa gaa 5568 Phe Ser Lys Ala Val Ser His Arg Leu His Ile Ala Asp Gln Glu Glu 1845 1850 1855 cct aag aac act gct ggg gac acc ccc aag cct ccc cag tgc gtg ccg 5616 Pro Lys Asn Thr Ala Gly Asp Thr Pro Lys Pro Pro Gln Cys Val Pro 1860 1865 1870 gag agc aag cca ccc cag gct gcc tta ggg tcg ctg agg acc tcc gca 5664 Glu Ser Lys Pro Pro Gln Ala Ala Leu Gly Ser Leu Arg Thr Ser Ala 1875 1880 1885 tcc gac aca agc att aga acc ttt act tcg ccc ctg acc tcc ccc aag 5712 Ser Asp Thr Ser Ile Arg Thr Phe Thr Ser Pro Leu Thr Ser Pro Lys 1890 1895 1900 ctt ctc cct gag cag ggt gca aac agt agg ttc cac atg gct gtc tac 5760 Leu Leu Pro Glu Gln Gly Ala Asn Ser Arg Phe His Met Ala Val Tyr 1905 1910 1915 1920 ttg gaa tct gac aca agc tgt cca acc acc tcc agg tcc cct agg agt 5808 Leu Glu Ser Asp Thr Ser Cys Pro Thr Thr Ser Arg Ser Pro Arg Ser 1925 1930 1935 gga ccg gag ggc aag gcg ccc cat gct aac tct ggg tca gcg agt ccc 5856 Gly Pro Glu Gly Lys Ala Pro His Ala Asn Ser Gly Ser Ala Ser Pro 1940 1945 1950 cca gca tcg agg gcc agc cta gcc ttg gca ggg atc agg cag agc aag 5904 Pro Ala Ser Arg Ala Ser Leu Ala Leu Ala Gly Ile Arg Gln Ser Lys 1955 1960 1965 cag ttc aca ccg ggc cga gca gac ttg tta gta tca gaa gca acc cag 5952 Gln Phe Thr Pro Gly Arg Ala Asp Leu Leu Val Ser Glu Ala Thr Gln 1970 1975 1980 ccc cag ggc atc tgt gag aaa gga gct gaa aaa aag gtt agt gat cct 6000 Pro Gln Gly Ile Cys Glu Lys Gly Ala Glu Lys Lys Val Ser Asp Pro 1985 1990 1995 2000 cca caa agg aca aac cag cta aaa ata gtt gag att tct tct gaa aga 6048 Pro Gln Arg Thr Asn Gln Leu Lys Ile Val Glu Ile Ser Ser Glu Arg 2005 2010 2015 gtg cca aag aat gca tgt ggt gac agg cca ccc gaa agt gac aga aag 6096 Val Pro Lys Asn Ala Cys Gly Asp Arg Pro Pro Glu Ser Asp Arg Lys 2020 2025 2030 gga ggg ttc ttg acc cag aac aac tgt cag gag aag agt gca atc aga 6144 Gly Gly Phe Leu Thr Gln Asn Asn Cys Gln Glu Lys Ser Ala Ile Arg 2035 2040 2045 ctc cgg cag tcg gag gaa tcg tcc cca gag cat aca ccc ttc cct ccc 6192 Leu Arg Gln Ser Glu Glu Ser Ser Pro Glu His Thr Pro Phe Pro Pro 2050 2055 2060 tct cag gcc tcc caa gtg gaa cgg gaa att cga tgg tct ttc agc atg 6240 Ser Gln Ala Ser Gln Val Glu Arg Glu Ile Arg Trp Ser Phe Ser Met 2065 2070 2075 2080 gcc aaa ccg gcc acc tct tcc tcc tcc tcc ctg cag ctg cct gcc aaa 6288 Ala Lys Pro Ala Thr Ser Ser Ser Ser Ser Leu Gln Leu Pro Ala Lys 2085 2090 2095 ttg cca gag tcc ttc cag ggc aaa tca agc caa atg cca gcc tcc gtt 6336 Leu Pro Glu Ser Phe Gln Gly Lys Ser Ser Gln Met Pro Ala Ser Val 2100 2105 2110 ggg gtg ccc aag aat ggg gta ccc ata ggc ctg gcc gga gaa gag agc 6384 Gly Val Pro Lys Asn Gly Val Pro Ile Gly Leu Ala Gly Glu Glu Ser 2115 2120 2125 ccc tac ttc aca ccg agg cca gcc acc agg acc tat tcc atg cca gcc 6432 Pro Tyr Phe Thr Pro Arg Pro Ala Thr Arg Thr Tyr Ser Met Pro Ala 2130 2135 2140 cag ttc tcg agc cac ttt gga cga gaa ggt cct tcc cca cac agc cca 6480 Gln Phe Ser Ser His Phe Gly Arg Glu Gly Pro Ser Pro His Ser Pro 2145 2150 2155 2160 agt cac tcg cct cag gac ccg cag gtc cct gcg atg ggt ggt aag ctc 6528 Ser His Ser Pro Gln Asp Pro Gln Val Pro Ala Met Gly Gly Lys Leu 2165 2170 2175 tct gag aag aca gcc aag ggc gtg act aat gga cag ggc gta tat agt 6576 Ser Glu Lys Thr Ala Lys Gly Val Thr Asn Gly Gln Gly Val Tyr Ser 2180 2185 2190 gtg aag cct ctg ctg gaa aca tcg aag aac ctg tca cca gtg gac gga 6624 Val Lys Pro Leu Leu Glu Thr Ser Lys Asn Leu Ser Pro Val Asp Gly 2195 2200 2205 cgg gat gtc agt gca gac ccc gag acg agc tgc ctc atc cca gac aag 6672 Arg Asp Val Ser Ala Asp Pro Glu Thr Ser Cys Leu Ile Pro Asp Lys 2210 2215 2220 gtc aaa gtc acc agg aga cag tac tgc tgt gag cag agt tgg ccc cat 6720 Val Lys Val Thr Arg Arg Gln Tyr Cys Cys Glu Gln Ser Trp Pro His 2225 2230 2235 2240 gaa tct acc tcg ttt ttc tct gtg aag cag aga atc aag tct ttt gag 6768 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Val Ala Gly Gly Ala Asp Val Glu Pro Lys Ser Val 2565 2570 2575 atg gtc cac agg gtg ttt tct cag ggc gtg gct tct cag gaa ggg act 7776 Met Val His Arg Val Phe Ser Gln Gly Val Ala Ser Gln Glu Gly Thr 2580 2585 2590 gtg agc cga ggg gac ttc ctt ctc tcc gtc aat ggc acc tcc tta gct 7824 Val Ser Arg Gly Asp Phe Leu Leu Ser Val Asn Gly Thr Ser Leu Ala 2595 2600 2605 ggc tta gcc cac agt gag gtc acg aag gtt ctg cac cag gca gag ctg 7872 Gly Leu Ala His Ser Glu Val Thr Lys Val Leu His Gln Ala Glu Leu 2610 2615 2620 cac aaa cac gcc ctc atg att atc aag aaa ggg aat gac caa ccc ggg 7920 His Lys His Ala Leu Met Ile Ile Lys Lys Gly Asn Asp Gln Pro Gly 2625 2630 2635 2640 ccc tcc ttc aag cag gag cct ccc tca gcc aat ggg aaa ggc cct ttc 7968 Pro Ser Phe Lys Gln Glu Pro Pro Ser Ala Asn Gly Lys Gly Pro Phe 2645 2650 2655 ccc aga agg acc ttg ccg ctg gag cct gga gct ggg aga aat gga gct 8016 Pro Arg Arg Thr Leu Pro Leu Glu Pro Gly Ala Gly Arg Asn Gly Ala 2660 2665 2670 gct cac gat gcg ctg tgt gtt gaa gtg ctg aaa 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Ala Ala Ala Ser Val Met Arg Ser Val Phe Ala Leu Gly Ala Glu 1665 1670 1675 1680 Gly Pro Lys Asn Gly Glu Ala Val Leu Ala Asp Leu His Ile Ala Glu 1685 1690 1695 Arg Gly Asn Leu Glu Asp Leu Leu Gln Lys Pro Lys Thr Ile Ser Arg 1700 1705 1710 Arg Pro Ile Leu Thr Trp Phe Lys Glu Ile Asn Lys Asp Ser Gln Gly 1715 1720 1725 Ser His Leu Arg Ser Thr Ser Glu Lys Glu Gln Ser Ser Met Leu Ala 1730 1735 1740 Leu Gly Pro Gly Ser Lys Ala Asn Met Val Asn Thr Gly His Arg Lys 1745 1750 1755 1760 Gly Val Thr Val Pro Lys Ser Pro Pro Ser Arg Gln Lys Ser Gln Glu 1765 1770 1775 Asn Lys Asp Leu Pro Pro Lys Ser Pro Val Glu Thr Leu Gly Asn Cys 1780 1785 1790 Gln Lys Pro Lys Cys Ser Pro Lys Leu Lys Arg Leu Asn Ser Lys Gly 1795 1800 1805 Lys Ala Ser Pro Glu Val Pro Val Ala Ile Ser Thr Lys Gly Ser Arg 1810 1815 1820 Asn Asp His Arg Lys Thr Leu Pro Ser Pro Gln Ala Ser His Lys Met 1825 1830 1835 1840 Phe Ser Lys Ala Val Ser His Arg Leu His Ile Ala Asp Gln Glu Glu 1845 1850 1855 Pro Lys Asn Thr Ala Gly Asp Thr Pro Lys Pro Pro Gln Cys Val Pro 1860 1865 1870 Glu Ser Lys Pro Pro Gln Ala Ala Leu Gly Ser Leu Arg Thr Ser Ala 1875 1880 1885 Ser Asp Thr Ser Ile Arg Thr Phe Thr Ser Pro Leu Thr Ser Pro Lys 1890 1895 1900 Leu Leu Pro Glu Gln Gly Ala Asn Ser Arg Phe His Met Ala Val Tyr 1905 1910 1915 1920 Leu Glu Ser Asp Thr Ser Cys Pro Thr Thr Ser Arg Ser Pro Arg Ser 1925 1930 1935 Gly Pro Glu Gly Lys Ala Pro His Ala Asn Ser Gly Ser Ala Ser Pro 1940 1945 1950 Pro Ala Ser Arg Ala Ser Leu Ala Leu Ala Gly Ile Arg Gln Ser Lys 1955 1960 1965 Gln Phe Thr Pro Gly Arg Ala Asp Leu Leu Val Ser Glu Ala Thr Gln 1970 1975 1980 Pro Gln Gly Ile Cys Glu Lys Gly Ala Glu Lys Lys Val Ser Asp Pro 1985 1990 1995 2000 Pro Gln Arg Thr Asn Gln Leu Lys Ile Val Glu Ile Ser Ser Glu Arg 2005 2010 2015 Val Pro Lys Asn Ala Cys Gly Asp Arg Pro Pro Glu Ser Asp Arg Lys 2020 2025 2030 Gly Gly Phe Leu Thr Gln Asn Asn Cys Gln Glu Lys Ser Ala Ile Arg 2035 2040 2045 Leu Arg Gln Ser Glu Glu Ser Ser Pro Glu His Thr Pro Phe Pro Pro 2050 2055 2060 Ser Gln Ala Ser Gln Val Glu Arg Glu Ile Arg Trp Ser Phe Ser Met 2065 2070 2075 2080 Ala Lys Pro Ala Thr Ser Ser Ser Ser Ser Leu Gln Leu Pro Ala Lys 2085 2090 2095 Leu Pro Glu Ser Phe Gln Gly Lys Ser Ser Gln Met Pro Ala Ser Val 2100 2105 2110 Gly Val Pro Lys Asn Gly Val Pro Ile Gly Leu Ala Gly Glu Glu Ser 2115 2120 2125 Pro Tyr Phe Thr Pro Arg Pro Ala Thr Arg Thr Tyr Ser Met Pro Ala 2130 2135 2140 Gln Phe Ser Ser His Phe Gly Arg Glu Gly Pro Ser Pro His Ser Pro 2145 2150 2155 2160 Ser His Ser Pro Gln Asp Pro Gln Val Pro Ala Met Gly Gly Lys Leu 2165 2170 2175 Ser Glu Lys Thr Ala Lys Gly Val Thr Asn Gly Gln Gly Val Tyr Ser 2180 2185 2190 Val Lys Pro Leu Leu Glu Thr Ser Lys Asn Leu Ser Pro Val Asp Gly 2195 2200 2205 Arg Asp Val Ser Ala Asp Pro Glu Thr Ser Cys Leu Ile Pro Asp Lys 2210 2215 2220 Val Lys Val Thr Arg Arg Gln Tyr Cys Cys Glu Gln Ser Trp Pro His 2225 2230 2235 2240 Glu Ser Thr Ser Phe Phe Ser Val Lys Gln Arg Ile Lys Ser Phe Glu 2245 2250 2255 Asn Leu Ala Asn Ser Asp Arg Pro Thr Ala Lys Cys Ala Thr Ser Pro 2260 2265 2270 Phe Leu Ser Val Ser Ser Lys Pro Pro Ile Asn Arg Arg Ser Ser Gly 2275 2280 2285 Ser Ile Pro Ser Gly Ser Pro Ser Asp Met Thr Ser Arg Ser Leu Arg 2290 2295 2300 Arg Ser Leu Ser Ser Cys Ser Glu Ser Gln Ser Glu Ala Ser Ser Leu 2305 2310 2315 2320 Leu Pro Gln Met Thr Lys Ser Pro Ser Ser Met Thr Leu Thr Val Ser 2325 2330 2335 Arg Gln Asn Pro Pro Asp Thr Ser Asn Lys Gly Pro Ser Pro Asp Pro 2340 2345 2350 Lys Lys Ser Leu Val Pro Val Gly Ile Pro Thr Ser Thr Val Ser Pro 2355 2360 2365 Ala Ser Pro Ser Lys Arg Asn Lys Ser Ser Val Arg His Ala Gln Pro 2370 2375 2380 Ser Pro Val Ser Arg Ser Lys Leu Gln Glu Arg Arg Thr Leu Ser Met 2385 2390 2395 2400 Pro Asp Leu Asp Lys Leu Cys Asn Gly Glu Asp Asp Ser Ala Ser Pro 2405 2410 2415 Gly Ala Val Leu Phe Lys Thr Gln Leu Glu Ile Thr Pro Arg Arg Ser 2420 2425 2430 Lys Gly Ser Gln Ala Thr Ser Pro Ala Gly Ser Pro Ala Arg Gly His 2435 2440 2445 Ala Asp Phe Asn Gly Ser Thr Phe Leu Ser Cys Pro Met Asn Gly Gly 2450 2455 2460 Thr Arg Ala Tyr Thr Lys Gly Asn Ser Pro Pro Ala Ser Glu Pro Ala 2465 2470 2475 2480 Ile Ala Thr Gly Ser Arg Glu Glu Gly Glu Ser Val Trp Ala Thr Pro 2485 2490 2495 Ser Gly Lys Ser Trp Ser Val Ser Leu Asp Arg Leu Leu Ala Ser Val 2500 2505 2510 Gly Asn Gln Gln Arg Leu Gln Gly Ile Leu Ser Leu Val Gly Ser Lys 2515 2520 2525 Ser Pro Ile Leu Thr Leu Ile Gln Glu Ala Lys Ala Gln Ser Glu Thr 2530 2535 2540 Lys Glu Asp Ile Cys Phe Ile Val Leu Asn Lys Lys Glu Gly Ser Gly 2545 2550 2555 2560 Leu Gly Phe Ser Val Ala Gly Gly Ala Asp Val Glu Pro Lys Ser Val 2565 2570 2575 Met Val His Arg Val Phe Ser Gln Gly Val Ala Ser Gln Glu Gly Thr 2580 2585 2590 Val Ser Arg Gly Asp Phe Leu Leu Ser Val Asn Gly Thr Ser Leu Ala 2595 2600 2605 Gly Leu Ala His Ser Glu Val Thr Lys Val Leu His Gln Ala Glu Leu 2610 2615 2620 His Lys His Ala Leu Met Ile Ile Lys Lys Gly Asn Asp Gln Pro Gly 2625 2630 2635 2640 Pro Ser Phe Lys Gln Glu Pro Pro Ser Ala Asn Gly Lys Gly Pro Phe 2645 2650 2655 Pro Arg Arg Thr Leu Pro Leu Glu Pro Gly Ala Gly Arg Asn Gly Ala 2660 2665 2670 Ala His Asp Ala Leu Cys Val Glu Val Leu Lys Thr Ser Ala Gly Leu 2675 2680 2685 Gly Leu Ser Leu Asp Gly Gly Lys Ser Ser Val Ser Gly Glu Gly Pro 2690 2695 2700 Leu Val Ile Lys Arg Val Tyr Lys Gly Gly Ala Ala Glu Arg Ala Gly 2705 2710 2715 2720 Thr Ile Glu Ala Gly Asp Glu Ile Leu Ala Ile Asn Gly Lys Pro Leu 2725 2730 2735 Val Gly Leu Val His Phe Asp Ala Trp Asn Ile Met Lys Ser Val Pro 2740 2745 2750 Glu Gly Pro Val Gln Leu Val Ile Arg Lys His Arg Asp Ser 2755 2760 2765

【図面の簡単な説明】

【図１】Ａはこの発明の蛋白質ＰＡＰＩＮのアミノ酸配
列（１文字記号）である。囲みは各PDZドメインのアミ
ノ酸配列、下線は最初のpPreyクローンに含まれている
アミノ酸配列である。ＢはＰＡＰＩＮのスプライスバリ
アントである。ａはＰＡＰＩＮおよびライブラリースク
リーニングから得られたクローンの構成図であり、PDZ
ドメインには番号を付し、かつ長方形で示した。左の数
字はクローン数を示す。三角印はp5000-52および-61の
インサート位置である。ｂはp5001-52のインサートのア
ミノ酸配列であり、ｃはp5001-61のインサートのアミノ
酸配列である。星印は終止コドンを示す。

【図２】ＰＡＰＩＮとNPRAP/δ−カテニンとの結合を調
べた結果である。ラットの粗シナプトソームの尿素／界
面活性剤抽出物を、グルタチオンセファロース４Bビー
ズに固定したGSTか、またはＰＡＰＩＮの１番目と２番
目のPDZドメインを含んでいるGST-PAPIN-9のいずれかと
共にインキュベートし、ビーズに結合した蛋白質を抗δ
カテニン抗体を用いてイムノブロットした。レーン1は
インキュベーション前の最初の抽出物；レーン２はGS
T；レーン３はGST-PAPIN-9。

【図３】ＰＡＰＩＮおよびp0071の組織分布を調べた結
果である。ラットの各組織からの２μgのmRNAを用いた
ブロットを、PAPINのアミノ酸231-811か、またはp0071
の1-1211のいずれかに対応する均一に標識したプローブ
とハイブリダイズさせ、一晩露出させた。パネルAはPAP
IN、パネルBはp0071の結果である。レーン１は心臓；レ
ーン２は脳；レーン３は脾臓；レーン４は肺；レーン５
は肝臓；レーン６は骨格筋；レーン７は腎臓；レーン８
は精巣。

【図４】in vitroでのＰＡＰＩＮとp0071の相互作用を
調べた結果である。パネルAはp0071とNPRAP/δ−カテニ
ンのC-末端配列の比較。数字はp0071またはNPRAP/δ−
カテニンのアミノ酸残基数を示す。PDZ結合モチーフに
相当するアミノ酸に下線を付している。星印は終止コド
ンを示す。パネルBはp0071の種々のMyc標識ベクターの
説明図であり、armadillo反復を囲みで示す。DSWVはPDZ
結合モチーフである。パネルCはp0071の種々のMyc標識
ベクターと、PAPINの１番目と２番目のPDZドメインを含
んでいるGST-PAPIN-9との相互作用を調べた結果であ
る。Myc p0071-1、-2または-3のいずれかを用いてトラ
ンスフェクトしたCOS細胞の抽出物を、グルタチオンア
セファロース４Bビーズに固定したGSTまたはGST-PAPIN-
9と共にインキュベートし、ビーズに結合した蛋白質を
抗Myc抗体を用いてイムノブロットした。レーン１はイ
ンキュベーション前の最初の抽出物；レーン２はGST；
レーン３はGST-PAPIN-9。ａはpClneo Myc p0071-1、ｂ
はpClneo Myc p0071-2、ｃはpClneo Myc p0071-3であ
る。

【図５】p0071と相互作用するPAPINのドメインである。
パネルAは種々のMyc-標識PAPIN発現ベクターの構成図で
あり、PDZドメインを長方形で示す。パネルBはp0071のC
-末端領域を含んでいるGST-p0071-3と、種々のMyc-標識
PAPIN発現ベクターとの相互作用を調べた結果である。P
APIN発現ベクターの一つを用いてトランスフェクトした
COS細胞の抽出物を、グルタチオンアセファロース４Bビ
ーズに固定したGSTまたはGST-p0071-3のいずれかと共に
インキュベートし、ビーズに結合した蛋白質を抗Myc抗
体を用いてイムノブロットした。ａはpClneo Myc PAPIN
-1、ｂはpClneo Myc PAPIN-2、ｃはpClneo Myc PAPIN-
6、ｄはpClneo Myc PAPIN-7、ｅはpClneo Myc PAPIN-
9、ｆはpClneo Myc PAPIN-11である。レーン１はインキ
ュベーション前の最初の抽出物；レーン２はGST；レー
ン３はGST-p0071-3である。

【図６】CHO細胞におけるPAPINとp0071との相互作用を
調べた結果である。パネルAはCHO細胞におけるMyc-標識
PAPIN発現ベクターの細胞内局在である。CHO細胞をPAPI
N発現ベクターの一つを用いてトランスフェクトし、抗M
yc抗体により免疫染色した。ａはpClneo Myc PAPIN-1、
ｂはpClneo Myc PAPIN-2、ｃはpClneo Myc PAPIN-6、ｄ
はpClneo Myc PAPIN-7、ｅはpClneo Myc PAPIN-9であ
る。パネルBはp0071による形質膜へのPAPINの局在変化
を示す。CHO細胞にpClneo p0071と、pClneo Myc PAPIN-
1、-2、または-9のいずれかをトランスフェクトし、抗M
yc抗体を用いて免疫染色した。上下のパネルは、各々p0
071およびPAPIN発現ベクターの局在を示す。ａはpClneo
Myc PAPIN-1、ｂはpClneo Myc PAPIN-2、ｃはpClneo M
yc PAPIN-9である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 出口 真紀 兵庫県神戸市西区大津和２丁目８番地の９ シティガーデン神戸伊川谷208号 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA43 BA80 CA04 DA02 EA04 GA11 HA01 HA15 HA20 4B064 AG26 AG27 CA10 CA19 CC24 DA01 DA14 4H045 AA10 AA11 BA10 CA40 EA51 FA40 FA71 FA74

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２のアミノ酸配列を有する蛋白
   質ＰＡＰＩＮ。
2. 【請求項２】 請求項１の蛋白質ＰＡＰＩＮをコードす
   るポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 配列番号１の塩基配列を有する請求項２
   のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 請求項３のポリヌクレオチドを保有する
   組換えベクター。
5. 【請求項５】 請求項１の蛋白質ＰＡＰＩＮに対する抗
   体。