JP2001247593A - インフルエンザウイルス結合能を有するグリセロ糖脂質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】インフルエンザウイルスと結合し、それを中和
させる能力を有する新規な化合物、それらの製造方法、
化合物を生産する能力を有する新規な微生物、それらを
有効成分とする医薬およびそれらの化合物を結合した担
体の提供。 【解決手段】 コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物Ｈ６３２株、Ｓ３６
５株およびＳ３６１株が生産するグリセロ糖脂質Ｈ６３
２Ａ、Ｓ３６５ＡおよびＳ３６１Ａ。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、インフルエンザウ
イルスと結合し、中和する能力を有するグリセロ糖脂
質、それらの製造方法、生産菌株およびそれらの用途に
関する。

【０００２】

【発明の背景】インフルエンザは、インフルエンザウイ
ルスに起因する感染症であり、世界的な流行を幾度とな
く繰り返してきた。被害の大きい年では、１０００万人
以上の人々に死をもたらしたことがあり、そうでない場
合でも社会的損失は大きい。最近、ヒトのインフルエン
ザウイルスの感染機構が解明されてきた。それによると
インフルエンザウイルスは、その表層にある釘状糖蛋白
質ヘマグルチニンを介して宿主細胞上にあるウイルスレ
セプターを特異的に認識し結合する。

【０００３】ウイルスレセプターはその末端にシアル酸
（Ｎ−アセチルノイラミン酸およびＮ−グリコリルノイ
ラミン酸）を含む特徴的な構造をもっており、さらに各
宿主により異なった糖鎖で修飾されている。ヒトのレセ
プターは末端のシアル酸にα２→６結合でガラクトース
が結合した糖鎖であるが、宿主依存性の変異によりα２
→３結合を認識するヒトのウイルスも分離されることが
ある。ウマやブタから分離されたウイルスはＮ−グリコ
リルノイラミン酸を末端に含む糖鎖も認識するが、ヒト
由来のウイルスは主にＮ−アセチルノイラミン酸のみを
認識すると言われている [Suzuki, Y., Prog. Lipid Re
s. 33, 429-457 (1994)]。

【０００４】これらのレセプターを模倣した糖鎖や糖脂
質を用意すれば、ウイルスの宿主感染を阻害することが
期待される。最近シアル酸を含まない糖脂質スルファチ
ドにウイルス結合能が報告されてから、ヘマグルチニン
の結合能にかなりの許容範囲が推測された。シアル酸を
含まない糖脂質はウイルスのシアリダーゼに分解されず
安定であり、インフルエンザ治療剤として期待される。

【０００５】また、インフルエンザウイルスの感染防止
には通常、ガーゼマスクを用いることが多い。ウイルス
の除去効果を向上させるために、最近セラミックフィル
ターを含むガーゼマスクが開発されてきた。しかし、除
去効率を高めるためにマスク層を厚くすると、息苦しく
なり、着用に不快感を感じる人も多い。また、これらの
ガーゼマスクでは、ガーゼに捕らえたウイルスが中和し
ないので、唾液等で湿った時に流出する危険性が伴う。
ウイルスを中和させるためにはカテキンなどを利用する
ことが知られているが、カテキンは水溶性が高く、ガー
ゼに吸着させて利用するには適当でない。これまでにイ
ンフルエンザウイルスに対する結合能と中和能に優れ、
安定性があり、安全で安価に供給できる物質は見出され
ていない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、インフルエ
ンザウイルスと結合し、それを中和させる能力を有する
新規な化合物、それらの製造方法、化合物を生産する能
力を有する新規な微生物、それらを有効成分とする医薬
およびそれらの化合物を結合した担体を提供するもので
ある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するため、各種の微生物を培養し、培養液中に生
産される代謝産物について研究を重ねた結果、コリネバ
クテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属
する微生物が、インフルエンザウイルスに結合する能力
を持つ物質を培養液中に生産していることを見出した。
その培養液から有効物質を分離精製し、その物理化学的
性質を調べたところ、得られた有効物質は、いかなる既
知物質とも相違し、かつ優れたインフルエンザウイルス
結合能と中和能を有することを見出し、本発明を完成し
た。

【０００８】本発明により提供されるインフルエンザウ
イルス結合能を示す新規物質は、グリセロ糖脂質に分類
される、下記一般式（Ｉ）で示される化合物である。

【化８】 （式中、Ｒは、

【化９】 で示される基、式、

【化１０】 で示される基、または式、

【化１１】 で示される基を示す）

【０００９】本発明者らは、一般式（Ｉ）で示される化
合物のうち、下記の式（Ｉ−ａ）、式（Ｉ−ｂ）および
式（Ｉ−ｃ）で示される化合物を、それぞれＨ６３２
Ａ、Ｓ３６５ＡおよびＳ３６１Ａと命名した。以後、本
明細書においてこれらの化合物は上記名称を用いて説明
する。

【００１０】

【化１２】

【００１１】

【化１３】

【００１２】

【化１４】

【００１３】本発明に使用される微生物は、コリネバク
テリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属
し、本発明のグリセロ糖脂質Ｈ６３２Ａ、Ｓ３６５Ａま
たはＳ３６１Ａを生産する能力を有する菌株であれば、
どのようなものでも使用できる。

【００１４】本発明のグリセロ糖脂質を生産する能力を
有する微生物として、例えば、本発明者らが土壌から分
離したコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ）属に属するＨ６３２株、Ｓ３６５株およびＳ３
６１株を挙げることができるが、これらの菌株に限ら
ず、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ）属に属し、グリセロ糖脂質Ｈ６３２Ａ、Ｓ３６５
ＡおよびＳ３６１Ａを生産する能力を有する菌株であれ
ば、それらの変異株、例えば、紫外線、エックス線、放
射線、薬品等の変異処理により取得できる人工変異株な
らびに自然変異株も含めてすべて本発明に使用すること
ができる。

【００１５】以下、生産菌株の菌学的性状を説明する。 １．Ｈ６３２株 （１）形態 コロニーの形態は、偏平で丸く、バター質、半透明で黄
色である。細胞の形態は、長い桿菌で０．６〜０．８μ
ｍの幅を有し、運動性はない。グラム染色陽性で、胞子
形成能はない。 （２）生理学的性質 （ａ）炭素源の発酵性 グルコース、リボース、キシロース、マンニトール、マ
ルトース、ラクトース、スクロース、グリコーゲンのい
ずれについても陰性である。 （ｂ）硝酸塩の還元能 陰性である。 （ｃ）ゼラチンの分解 陰性である。 （ｄ）エスクリンの分解 陽性である。

【００１６】（ｅ）酵素活性 ピラジンアミダーゼ（ｐｙｒａｚｉｎａｍｉｄａｓ
ｅ）、アルカリホスファターゼ（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐ
ｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）、カタラーゼ（ｃａｔａｌａｓ
ｅ）、β−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉ
ｄａｓｅ）、β−グルコシダーゼ（β−ｇｌｕｃｏｓｉ
ｄａｓｅ）およびＮ−アセチル−β−グルコサミニダー
ゼ（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−β−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄ
ａｓｅ）の各酵素活性は、陽性である。ピロリドンアリ
ルアミダーゼ（ｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅａｒｙｌａｍｉ
ｄａｓｅ）、β−グルクロニダーゼ（ｇｌｕｃｕｒｏｎ
ｉｄａｓｅ）およびウレアーゼ（ｕｒｅａｓｅ）の各酵
素活性は、陰性である。

【００１７】２．Ｓ３６５株 （１）形態 コロニーの形態は、偏平で丸く、バター質、不透明で黄
色であり、湿光がかった光沢を有する。細胞の形態は、
長い桿菌で０．６〜０．８μｍの幅を有し、運動性はな
い。グラム染色陽性で、胞子形成能はない。嫌気状態で
若干生育する。 （２）生理学的性質 （ａ）炭素源の発酵性 グルコース、リボース、キシロース、マンニトール、マ
ルトース、ラクトース、スクロース、グリコーゲンのい
ずれについても陰性である。 （ｂ）硝酸塩の還元能 陽性である。 （ｃ）ゼラチンの分解 陽性である。 （ｄ）エスクリンの分解 陽性である。

【００１８】（ｅ）酵素活性 ピラジンアミダーゼ（ｐｙｒａｚｉｎａｍｉｄａｓ
ｅ）、アルカリホスファターゼ（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐ
ｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）、カタラーゼ（ｃａｔａｌａｓ
ｅ）、β−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉ
ｄａｓｅ）、β−グルコシダーゼ（β−ｇｌｕｃｏｓｉ
ｄａｓｅ）およびＮ−アセチル−β−グルコサミニダー
ゼ（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−β−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄ
ａｓｅ）の各酵素活性は、陽性である。ピロリドンアリ
ルアミダーゼ（ｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅａｒｙｌａｍｉ
ｄａｓｅ）、β−グルクロニダーゼ（ｇｌｕｃｕｒｏｎ
ｉｄａｓｅ）およびウレアーゼ（ｕｒｅａｓｅ）の各酵
素活性は、陰性である。

【００１９】３．Ｓ３６１株 （１）形態 コロニーの形態は、偏平で丸く、バター質、不透明で黄
色であり、湿光がかった光沢を有する。細胞の形態は、
長い桿菌で０．６〜０．８μｍの幅を有し、運動性はな
い。グラム染色陽性で、胞子形成能はない。 （２）生理学的性質 （ａ）炭素源の発酵性 グルコース、リボース、キシロース、マンニトール、マ
ルトース、ラクトース、スクロース、グリコーゲンのい
ずれについても陰性である。 （ｂ）硝酸塩の還元能 陰性である。 （ｃ）ゼラチンの分解 陽性である。 （ｄ）エスクリンの分解 陽性である。

【００２０】（ｅ）酵素活性 ピラジンアミダーゼ（ｐｙｒａｚｉｎａｍｉｄａｓ
ｅ）、アルカリホスファターゼ（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐ
ｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）、カタラーゼ（ｃａｔａｌａｓ
ｅ）、β−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉ
ｄａｓｅ）、β−グルコシダーゼ（β−ｇｌｕｃｏｓｉ
ｄａｓｅ）およびＮ−アセチル−β−グルコサミニダー
ゼ（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−β−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄ
ａｓｅ）の各酵素活性は、陽性である。ピロリドンアリ
ルアミダーゼ（ｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅａｒｙｌａｍｉ
ｄａｓｅ）、β−グルクロニダーゼ（ｇｌｕｃｕｒｏｎ
ｉｄａｓｅ）およびウレアーゼ（ｕｒｅａｓｅ）の各酵
素活性は、陰性である。

【００２１】以上の菌学的性質からＨ６３２株、Ｓ３６
５株およびＳ３６１株のいずれの菌株も、コリネバクテ
リウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の菌であ
り、バージェーズ・マニュアル・オブ・システマティッ
ク・バクテリオロジー，ｖｏｌ．１（１９８４）（Ｂｅ
ｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１，１９８
４）を参考に既知菌種を検索したところ、コリネバクテ
リウム・アクアティカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ａｑｕａｔｉｃｕｍ）の性状と一致した。

【００２２】本発明者らは、Ｈ６３２株をコリネバクテ
リウム・アクアティカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ａｑｕａｔｉｃｕｍ）Ｈ６３２株として、平成１
１年８月２日付けで通産省工業技術院生命工学工業技術
研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１７４９８として寄託してい
る。また、Ｓ３６５株をコリネバクテリウム・アクアテ
ィカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑｕａｔ
ｉｃｕｍ）Ｓ３６５株として、平成１１年１月２５日付
けで通産省工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１７１６３として寄託している。さらにＳ３６
１株をコリネバクテリウム・アクアティカム（Ｃｏｒｙ
ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑｕａｔｉｃｕｍ）Ｓ３６
１株として、平成１２年２月１７日付けで通産省工業技
術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１７７３
６として寄託している。

【００２３】本発明のグリセロ糖脂質のうち、Ｈ６３２
Ａは上記のＨ６３２株を、Ｓ３６５ＡはＳ３６５株を、
Ｓ３６１ＡはＳ３６１株をそれぞれ栄養培地に接種し、
好気的に培養することにより製造される。これらの菌株
の培養方法は、原則的には一般微生物の培養方法に準ず
るが、通常は液体培養による振とう培養、通気撹拌培養
などの好気的条件下で行うのが好適である。

【００２４】培養に用いることのできる培地としては、
コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ）属に属する微生物が利用できる栄養源を含有する培
地であればよく、各種の合成培地、半合成培地、天然培
地などいずれも用いることができる。培地組成として
は、例えば、炭素源として、グルコース、シュークロー
ス、水あめ、糖みつ、デキストリン、澱粉、グリセロー
ル、動物油、植物油などを単独または組み合わせて使用
することができ、また窒素源としては、大豆粉、小麦胚
芽、コーンスティープリカー、綿実粕、肉エキス、ペプ
トン、酵母エキス、硫酸アンモニウムなどを単独または
組み合わせて使用することができる。また必要に応じ
て、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウ
ム、リン酸塩、金属塩などの無機塩を加えることができ
る。その他、これらの菌株の生育あるいはグリセロ糖脂
質の生産を促進する有機物、例えば、ビタミン類、アミ
ノ酸類を加えることができる。さらに必要に応じて、消
泡剤、例えば、アデカノール（商品名：旭電化工業
（株）製）、シリコンなどを添加することができる。

【００２５】培養条件は、上記菌株が良好に生育して本
発明のグリセロ糖脂質を生産し得る範囲内で適宜選択す
ればよい。例えば、培地のｐＨは、６〜８程度、通常中
性付近とすることが好ましい。培養温度は、微生物が良
好に生育する温度、通常１５〜３０℃、好ましくは２５
〜２８℃に保つのがよい。培養時間は、２〜１０日間程
度でよく、好ましくは３〜５日間である。もちろん上述
した各種の培養条件は、使用微生物の種類や特性、外部
条件などに応じて適宜変更でき、またそれに応じて上記
範囲から最適条件を選択、調整できる。その際、培養液
中のグリセロ糖脂質の蓄積量が最大になったときに培養
を停止して得た培養液を以下の精製工程に使用すればよ
い。

【００２６】このようにして得た培養液中に蓄積された
グリセロ糖脂質は、培養後、濾過、遠心分離等の一般的
固液分離手段によって菌体を分離し、分離した菌体から
回収可能である。

【００２７】グリセロ糖脂質の分離、精製は、公知の種
々の方法を選択、組み合わせて行うことができる。例え
ば、クロロホルム、酢酸エチル、メタノール、ｎ−ブタ
ノール等を用いた溶媒抽出や、アンバーライトＸＡＤ
（ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤイオンＨＰ−
２０（三菱化学（株）製）等のポリスチレン系吸着樹
脂、シリカゲル、アルミナ、活性炭などの担体を用いる
カラムクロマトグラフィーによる方法を用いることがで
きる。これらの担体から目的物質を溶出させる方法は、
担体の種類、性質によって異なるが、一例として、ポリ
スチレン系吸着樹脂の場合には、溶出溶媒として、含水
アルコール、含水アセトン等を用いることができる。さ
らにセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＬＨ−２０
（ファルマシア社製）、バイオ・ゲルＰ−２（バイオ・
ラッド社製）等によるゲル濾過、シリカゲル、アルミナ
等による薄層クロマトグラフィー、順相あるいは逆相カ
ラムを用いた分取用高速液体クロマトグラフィー（分取
ＨＰＬＣ）等を用いることができ、これらの方法を単独
または適宜組み合せて、場合によっては反復使用するこ
とにより、分離、精製することができる。

【００２８】以上のようにして得られるグリセロ糖脂質
は以下に示す物理化学的性質を有する。 １．Ｈ６３２Ａの物理化学的性質 （１）分子量：８９２．６１ （２）分子式：Ｃ₄₇Ｈ₈₈Ｏ₁₅ （３）マススペクトル（ＦＡＢＭＳ）：図１に示すとお
りである。ｍ／ｚ ９１５［Ｍ＋Ｎａ］⁺、計算値；９
１５．６０２１（Ｃ₄₇Ｈ₈₈Ｏ₁₅Ｎａとして） （４）比旋光度：〔α〕²⁵ _D−２２．５°

【００２９】（５）溶解性：メタノール、クロロホルム
に溶け、水にはほとんど溶けない（０．８ｇ／ｌ）。 （６）呈色反応：硫酸オルシノール試薬で呈色する。 （７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：メルク社製シ
リカゲルプレート５７１５にて０．４５（クロロホル
ム：メタノール：水＝８０：１５：１） （８）色および形状：白色粉末。 （９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，Ｃ₅Ｄ₅
Ｎ）：図２に示すとおりである。

【００３０】２．Ｓ３６５Ａの物理化学的性質 （１）分子量：８９２．６１ （２）分子式：Ｃ₄₇Ｈ₈₈Ｏ₁₅ （３）マススペクトル（ＦＡＢＭＳ）：ｍ／ｚ ９１５
［Ｍ＋Ｎａ］⁺、計算値；９１５．６０２１（Ｃ₄₇Ｈ₈₈
Ｏ₁₅Ｎａとして） （４）比旋光度：〔α〕²⁵ _D＋２８．２°（ｃ ７．
３、クロロホルム）

【００３１】（５）溶解性：メタノール、クロロホルム
に溶け、水にはほとんど溶けない（０．８ｇ／ｌ）。 （６）呈色反応：硫酸オルシノール試薬で呈色する。 （７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：メルク社製シ
リカゲルプレート５７１５にて０．４５（クロロホル
ム：メタノール：水＝８０：１５：１） （８）色および形状：白色粉末。

【００３２】（９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５Ｍ
Ｈｚ，Ｃ₅Ｄ₅Ｎ）：図３に示すとおりである。また主要
なシグナルの化学シフト、多重度は下記のとおりであ
る。δ（ｐｐｍ，ＴＭＳを基準にして）６９．８
（ｔ），６８．６（ｄ），６６．５（ｔ），１０２．４
（ｄ），７０．８（ｄ），８１．０（ｄ），６７．０
（ｄ），７２．６（ｄ），６４．６（ｔ），１０４．０
（ｄ），７２．３（ｄ），７３．１（ｄ），６９．５
（ｄ），７５．５（ｄ），６３．０（ｔ），１７３．７
（ｓ），３４．４（ｔ），２５．３（ｔ），２７．４−
３０．３（ｔ），３６．９（ｔ），３４．６（ｄ），１
９．４（ｑ），２９．８（ｔ），１１．５（ｑ）

【００３３】（１０）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００
ＭＨｚ，Ｃ₅Ｄ₅Ｎ）：主要なシグナルの化学シフト、多
重度は下記のとおりである。δ（ｐｐｍ，ＴＭＳを基準
にして）４．１７（ｄｄ， Ｊ＝１０．４Ｈｚ＆Ｊ＝
５．０Ｈｚ），３．８７（ｄｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ＆
６．７Ｈｚ），４．４３（ｍ），４．５２（ｍ，２
Ｈ），５．３６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），４．９０（ｂ
ｒ ｓ），４．５９（ｍ），４．６７（ｍ），４．４５
（ｍ），４．７８（ｍ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝１１．
６Ｈｚ＆１．８Ｈｚ），５．９４（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈ
ｚ），４．６８（ｂｒ ｓ），４．５８（ｍ），４．５
５（ｍ），４．８０（ｍ），４．２９（ｄｄ，Ｊ＝１
１．６Ｈｚ＆６．７Ｈｚ），４．５６（ｍ），２．３２
（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．６２（ｍ），１．１５−
１．３５（ｍ），１．０７（ｍ），１．２３（ｍ），
０．８３（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．１１（ｍ），
１．２３（ｍ），０．８３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）

【００３４】２．Ｓ３６１Ａの物理化学的性質 （１）分子量：８９２．６１ （２）分子式：Ｃ₄₇Ｈ₈₈Ｏ₁₅ （３）マススペクトル（ＦＡＢＭＳ）：ｍ／ｚ ９１５
［Ｍ＋Ｎａ］⁺、計算値；９１５．６０２１（Ｃ₄₇Ｈ₈₈
Ｏ₁₅Ｎａとして） （４）比旋光度：〔α〕²⁵ _D＋４．４°（ｃ １．７、
クロロホルム）

【００３５】（５）溶解性：メタノール、クロロホルム
に溶け、水にはほとんど溶けない（０．８ｇ／ｌ）。 （６）呈色反応：硫酸オルシノール試薬で呈色する。 （７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：和光純薬社製
シリカゲルプレート７０Ｆ₂₅₄にて０．２５（クロロホ
ルム：メタノール：水＝８０：１５：１） （８）色および形状：白色粉末。

【００３６】（９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５Ｍ
Ｈｚ，Ｃ₅Ｄ₅Ｎ）：図４に示すとおりである。また主要
なシグナルの化学シフト、多重度は下記のとおりであ
る。δ（ｐｐｍ，ＴＭＳを基準にして）６９．８
（ｔ），６８．６（ｄ），６６．４（ｔ），１０２．４
（ｄ），７０．９（ｄ），８３．３（ｄ），６７．２
（ｄ），７２．３（ｄ），６４．４（ｔ），１０２．９
（ｄ），７４．３（ｄ），７５．６（ｄ），７２．１
（ｄ），７４．６（ｄ），６２．７（ｔ），１７３．６
（ｓ），３４．４（ｔ），２５．３（ｔ），２７．４−
３０．３（ｔ），３６．９（ｔ），３４．６（ｄ），１
９．４（ｑ），２９．７（ｔ），１０４．３（ｑ），１
１．６（ｑ）

【００３７】（１０）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００
ＭＨｚ，Ｃ₅Ｄ₅Ｎ）：主要なシグナルの化学シフト、多
重度は下記のとおりである。δ（ｐｐｍ，ＴＭＳを基準
にして）４．１９（ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ＆Ｊ＝５．
２Ｈｚ），３．８８（ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ＆６．４
Ｈｚ），４．４４（ｍ），４．５４（ｍ，２Ｈ），５．
３６（ｂｒ ｓ），４．７９（ｂｒ ｓ），４．４８
（Ｊ＝９．５Ｈｚ＆Ｊ＝３．１Ｈｚ），４．７１（ｔ，
Ｊ＝９．５Ｈｚ），４．４４（ｍ），４．７３（ｍ），
４．９６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ），５．６９
（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝９．４
Ｈｚ＆３．７Ｈｚ），４．６０（ｔ，Ｊ＝９．４Ｈ
ｚ），４．１２（ｔ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），４．７５
（ｍ），４．２６（ｄｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ＆５．５Ｈ
ｚ），４．４４（ｍ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），１．６２（ｍ），１．１５−１．３５（ｍ），
１．０８（ｍ），１．２３（ｍ），０．８４（ｄ，Ｊ＝
６．７Ｈｚ），１．１３（ｍ），１．２３（ｍ），０．
８４（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），０．８３ｔ，Ｊ＝７．０
Ｈｚ）

【００３８】本発明のグリセロ糖脂質は、インフルエン
ザウイルスと比較的強固に結合し、優れたインフルエン
ザウイルスの中和活性を有している。しかも、１）イン
フルエンザウイルスの種類（型）による結合性の差が小
さく、２）水溶性が室温において約０．８ｇ／ｌと低
く、ウイルスの吸着、捕捉材料として利用しやすく、
３）インフルエンザウイルスの失活能力に優れ、４）構
造中にシアル酸を含まないのでインフルエンザウイルス
由来のシアリダーゼによる分解がなく安定であり、５）
微生物による生産と精製が簡単である、等の優れた性質
を有している。

【００３９】特にインフルエンザウイルスとの結合能力
については、ウイルス本来のレセプターの部分構造をも
つ、５−アセチルノイラミン酸−α２，３−パラグロボ
シド（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３ ｐａｒａｇｌｏｂｏｓｉ
ｄｅ）や５−アセチルノイラミン酸−α２，６−パラグ
ロボシド（Ｎｅｕ５Ａｃα２，６ ｐａｒａｇｌｏｂｏ
ｓｉｄｅ）と比べ、約７〜２２％の活性をもち、しかも
ウイルス由来のシアリダーゼに分解されないので、長時
間、作用が継続することが期待される。従って、グリセ
ロ糖脂質を含む医薬製剤は、インフルエンザウイルスが
原因となって引き起される疾患、すなわちインフルエン
ザに対する治療、予防に適用されることが期待される。

【００４０】グリセロ糖脂質を含む医薬製剤は、公知の
充填剤、増量剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、崩壊抑制
剤、表面活性剤、滑沢剤等の希釈剤、あるいは賦形剤を
用いて調製することができ、各種の形態がその治療目的
に応じて選択できる。

【００４１】本発明の医薬製剤に含有されるべきグリセ
ロ糖脂質の量は特に限定されず、広範囲に選択される。
その投与方法は、特に制限はなく、各種製剤形態、患者
の年齢、性別、その他の条件、疾患の程度に応じた方法
で投与される。またその投与量は、用法、患者の年齢、
性別、その他の条件、疾患の程度等により適宜増減する
ことができる。

【００４２】グリセロ糖脂質が結合した担体は、インフ
ルエンザウイルスの除去フィルターあるいはマスクなど
のインフルエンザ予防用の資材に利用可能である。グリ
セロ糖脂質が結合した担体の最も簡単な製造方法は、各
種の繊維あるいは膜などの担体を、グリセロ糖脂質を含
む溶液に浸漬させ、これを乾燥させることにより、担体
表面へグリセロ糖脂質を吸着あるいは付着させて調製す
るものである。後述する実施例に示すようにこのような
簡単な方法により調製した担体であっても、かなりの量
のインフルエンザウイルスを除去することが可能であ
る。さらには、強固にグリセロ糖脂質を担体に結合させ
るためには、グリセロ糖脂質の構造中にあるフリーの水
酸基を利用して公知の方法で共有結合を形成すればよ
い。このようにして調製された担体は、比較的厳しい環
境でも機能しうることが期待される。

【００４３】以下に実施例を挙げ、本発明をさらに詳細
に説明する。

【００４４】

【実施例】実施例１ グルコース１．０％、酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ社製）
０．３％、麦芽エキス（Ｄｉｆｃｏ社製）０．３％、ポ
リペプトン（日本製薬社製）０．５％（ｐＨ７．０）の
組成からなるＹＭＰＧ培地３０ｍｌを２５０ｍｌ容三角
フラスコに入れ殺菌した。これにコリネバクテリウム・
アクアティカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａ
ｑｕａｔｉｃｕｍ）Ｈ６３２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４
９８）を接種し、２８℃で２０時間、ロータリーシェー
カー（２２０ｒｐｍ）上で培養して種母培養液を得た。

【００４５】次に、５００ｍｌ容三角フラスコ５０本
に、グリセロール２％、グルコース１％、酵母エキス
０．４％、大豆粉０．１％、リン酸二カリウム０．１
％、硫酸マグネシウム・７水和物０．１％、塩化ナトリ
ウム０．２％、炭酸カルシウム０．２％の組成からなる
ＹＭＧ培地を７０ｍｌずつ入れ殺菌した。これに種母培
養液を０．７ｍｌずつ接種し、２８℃で４日間、ロータ
リーシェーカー（２２０ｒｐｍ）上で培養した。

【００４６】培養終了後、培養液の一部を分取し、同量
のクロロホルム：メタノール混液（１：１）で抽出し
た。シリカゲル薄層クロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ社
製：Ａｒｔ．５７１５）に抽出液を１０μｌ乗せ、クロ
ロホルム：メタノール：水混液（８０：１５：１）で展
開した。これに硫酸オルシノール試薬（２％オルシノー
ル／１１．４％硫酸）を噴霧し、１００℃で１０分熱し
て着色させ、薄層クロマトスキャナー（島津社製：ＣＳ
−９０００）を用いて、６００ｎｍ（反射モード）にて
定量した。実施例４に示す方法により得た精製品を基準
にして計算したところ、培養液中にＨ６３２Ａが１００
ｍｇ／ｌ生産されていた。

【００４７】実施例２ ＹＭＰＧ培地３０ｍｌを２５０ｍｌ容三角フラスコに入
れ殺菌した。これにコリネバクテリウム・アクアティカ
ム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑｕａｔｉｃ
ｕｍ）Ｓ３６５株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７１６３）を接種
し、２８℃で２０時間、ロータリーシェーカー（２２０
ｒｐｍ）上で培養して種母培養液を得た。次に、５００
ｍｌ容三角フラスコ５０本にＹＭＧ培地を７０ｍｌずつ
入れ殺菌した。これに種母培養液を０．７ｍｌずつ接種
し、２８℃で４日間、ロータリーシェーカー（２２０ｒ
ｐｍ）上で培養した。

【００４８】培養終了後、培養液の一部を分取し、同量
のクロロホルム：メタノール混液（１：１）で抽出し
た。シリカゲル薄層クロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ社
製：Ａｒｔ．５７１５）に抽出液を１０μｌ乗せ、クロ
ロホルム：メタノール：水混液（８０：１５：１）で展
開した。これに硫酸オルシノール試薬（２％オルシノー
ル／１１．４％硫酸）を噴霧し、１００℃で１０分熱し
て着色させ、薄層クロマトスキャナー（島津社製：ＣＳ
−９０００）を用いて、６００ｎｍ（反射モード）にて
定量した。実施例５に示す方法により得た精製品を基準
にして計算したところ、培養液中にＳ３６５Ａが８０ｍ
ｇ／ｌ生産されていた。

【００４９】実施例３ エタノール１５％（ｖ／ｖ）、酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ
社製）０．３％、ポリペプトン（日本製薬社製）０．３
％、リン酸二水素カリウム０．１％、塩化ナトリウム
０．１％、硫酸マグネシウム・７水和物０．０５％（ｐ
Ｈ６．８）の組成からなる培地を５００ｍｌ容坂口フラ
スコ３０本に各１００ｍｌ入れ殺菌した。ただしエタノ
ールは殺菌後に加えた。これにコリネバクテリウム・ア
クアティカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑ
ｕａｔｉｃｕｍ）Ｓ３６１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７７３
６）を接種し、２８℃で３日間、レシプロカルシェーカ
ー（２０００ｒｐｍ）上で培養した。

【００５０】培養終了後、培養液の一部を分取し、同量
のクロロホルム：メタノール混液（１：１）で抽出し
た。シリカゲル薄層クロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ社
製：Ａｒｔ．５７１５）に抽出液を１０μｌ乗せ、クロ
ロホルム：メタノール：水混液（８０：１５：１）で展
開した。これに硫酸オルシノール試薬（２％オルシノー
ル／１１．４％硫酸）を噴霧し、１００℃で１０分熱し
て着色させ、薄層クロマトスキャナー（島津社製：ＣＳ
−９０００）を用いて、６００ｎｍ（反射モード）にて
定量した。実施例６に示す方法により得た精製品を基準
にして計算したところ、培養液中にＳ３６１Ａが５０ｍ
ｇ／ｌ生産されていた。

【００５１】実施例４ 実施例１において得られたコリネバクテリウム・アクア
ティカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑｕａ
ｔｉｃｕｍ）Ｈ６３２株の培養液３５００ｍｌを同量の
クロロホルム：メタノール混液（１：１）で２回抽出し
た。有機層を取得し、ロータリーエバポレーターを用い
て濃縮乾固した。これを少量のクロロホルム：メタノー
ル混液（１：１）に溶解し、シリカゲル薄層クロマトグ
ラフィー（Ｍｅｒｃｋ社製：Ａｒｔ．５７１５、２０×
２０ｃｍ）にチャージし、クロロホルム：メタノール：
水混液（８０：１５：１）にて展開し、活性画分（Ｒｆ
＝０．３５〜０．４）を分取した。

【００５２】これを少量のクロロホルム：メタノール混
液（１：１）に溶解し、シリカゲル薄層クロマトグラフ
ィー（Ｍｅｒｃｋ社製：Ａｒｔ．５７１５、２０×２０
ｃｍ）にチャージし、クロロホルム：メタノール：酢
酸：水混液（８０：１５：１：１）にて展開し、活性画
分（Ｒｆ＝０．４）を分取した。これを１０ｍｌのクロ
ロホルム：メタノール混液（１：１）で溶出し、逆相の
シリカゲル薄層クロマトグラフィー（Ｗｈａｔｍａｎ社
製：ＬＫＣ１８Ｆ、２０×２０ｃｍ）にチャージし、９
０％メタノールで展開し、活性画分（Ｒｆ＝０．６５〜
０．７０）を分取した。１０ｍｌのメタノールで溶出
し、ロータリーエバポレーターを用いて濃縮乾固し、グ
リセロ糖脂質Ｈ６３２Ａを２２０ｍｇ得た。

【００５３】実施例５ 実施例２おいて得られたコリネバクテリウム・アクアテ
ィカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑｕａｔ
ｉｃｕｍ）Ｓ３６５株の培養液３５００ｍｌを同量のク
ロロホルム：メタノール混液（１：１）で２回抽出し
た。有機層を取得し、ロータリーエバポレーターを用い
て濃縮乾固した。これを少量のクロロホルム：メタノー
ル混液（１：１）に溶解し、シリカゲル薄層クロマトグ
ラフィー（Ｍｅｒｃｋ社製：Ａｒｔ．５７１５、２０×
２０ｃｍ）にチャージし、クロロホルム：メタノール：
水混液（８０：１５：１）にて展開し、活性画分（Ｒｆ
＝０．３５〜０．４）を分取した。

【００５４】これを少量のクロロホルム：メタノール混
液（１：１）に溶解し、シリカゲル薄層クロマトグラフ
ィー（Ｍｅｒｃｋ社製：Ａｒｔ．５７１５、２０×２０
ｃｍ）にチャージし、クロロホルム：メタノール：酢
酸：水混液（８０：１５：１：１）にて展開し、活性画
分（Ｒｆ＝０．４）を分取した。これを１０ｍｌのクロ
ロホルム：メタノール混液（１：１）で溶出し、逆相の
シリカゲル薄層クロマトグラフィー（Ｗｈａｔｍａｎ社
製：ＬＫＣ１８Ｆ、２０×２０ｃｍ）にチャージし、９
０％メタノールで展開し、活性画分（Ｒｆ＝０．６５〜
０．７０）を分取した。１０ｍｌのメタノールで溶出
し、ロータリーエバポレーターを用いて濃縮乾固し、グ
リセロ糖脂質Ｓ３６５Ａを１６５ｍｇ得た。

【００５５】実施例６ 実施例３において得られたコリネバクテリウム・アクア
ティカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑｕａ
ｔｉｃｕｍ）Ｓ３６１株の培養液３０００ｍｌを遠心し
て菌体を集め、アセトン：メタノール混液（１：１）２
００ｍｌで抽出し、さらにクロロホルム：メタノール混
液（１：１）２５０ｍｌで２回抽出した。有機層を取得
し、濃縮したのちクロロホルムでさらに抽出した。これ
をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、クロロホルム
−メタノール（３０：１〜１０：１）で活性画分を分取
し、さらにセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＬＨ−
２０によるゲル濾過によって精製し、Ｓ３６１Ａを１０
０ｍｇ得た。このとき、Ｓ３６１Ａは、シリカゲル薄層
クロマトグラフィー（和光純薬社製：７０Ｆ₂₅₄）を用
い、クロロホルム：メタノール−水混液（８０：１５：
１）により展開することにより検出できる（ｐ−アニス
アルデヒド試薬による呈色：緑色、Ｒｆ＝０．２５）。

【００５６】実施例７ 細胞工学別冊実験プロトコールシリーズ（秀潤社刊）
「グライコバイオロジー実験プロトコール：糖タンパク
質・糖脂質・プロテオグリカン」ｐ２２５〜２２９に記
載された方法により、ヒトインフルエンザＡウイルスへ
の結合能を測定した。すなわち、１ｎｇのグリセロ糖脂
質を含むメタノール溶液１０μｌをシリカゲル薄層クロ
マトグラフィー（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ社製：
Ｐｏｌｙｇｒａｍ Ｓｉｌ−Ｇ）に乗せ、クロロホル
ム：メタノール：１２ｍＭ塩化マグネシウム混液（６
０：４０：１０）にて展開した。プレートを風乾した
後、非特異的な結合を防ぐためにブロッキング溶液（１
％卵白アルブミン、１％ポリビニルピロリドン、０．０
２％アジ化ナトリウム）に２時間浸漬した。

【００５７】ＰＢＳ緩衝液（０．８％塩化ナトリウム、
０．０２％塩化カリウム、０．２９％リン酸二ナトリウ
ム・１２水和物、０．０２％リン酸一カリウム、ｐＨ
７．２）で洗浄後、インフルエンザウイルスのＰＢＳ緩
衝液懸濁液（赤血球凝集活性価：２６〜２８ＨＡＵ）に
浸すことによりウイルスを吸着させた。これを抗インフ
ルエンザウイルス抗体（抗ヘマグルチニンモノクローナ
ル抗体）にて処理し、ＰＢＳ緩衝液で洗浄した後、再度
ブロッキング溶液に浸漬した。ＰＢＳ緩衝液で洗浄後、
西洋ワサビペルオキシダーゼ結合２次抗体（抗マウスＩ
ｇＧ Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗体）にて処理した。ＰＢＳ
緩衝液で洗浄した後、発色用基質溶液［２０ｍＭトリス
塩酸緩衝液（ｐＨ７．２）：０．３％４−クロロ−１−
ナフトール：３１％Ｈ₂Ｏ₂（５：１：０．０１）］を加
え、発色したバンドの濃度を２波長クロマトスキャナー
により５７８ｎｍ（対照波長：７８０ｎｍ）で測定し、
結合量を定量した。

【００５８】グリセロ糖脂質Ｈ６３２Ａ、Ｓ３６５Ａお
よびＳ３６１Ａの、各ヒトインフルエンザウイルスＡ／
ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／Ａｉｃｈｉ／２／６
８（Ｈ３Ｎ２）、Ａ／Ｍｅｍｐｈｉｓ／１／７１（Ｈ３
Ｎ２）に対する結合能を図５に示す。なお、対照として
５−アセチルノイラミン酸−α２，３−パラグロボシド
（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３ ｐａｒａｇｌｏｂｏｓｉｄ
ｅ）と５−アセチルノイラミン酸−α２，６−パラグロ
ボシド（Ｎｅｕ５Ａｃα２，６ ｐａｒａｇｌｏｂｏｓ
ｉｄｅ）を使用した。

【００５９】図５に示したとおり、ＮｅｕＡｃ（２→
３）Ｇａｌ糖鎖をもつ５−アセチルノイラミン酸−α
２，３−パラグロボシド（図５中の１）は、インフルエ
ンザウイルスＡ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）に強く結
合したが、Ａ／Ａｉｃｈｉ／２／６８（Ｈ３Ｎ２）とＡ
／Ｍｅｍｐｈｉｓ／１／７１（Ｈ３Ｎ２）にはそれほど
ではなかった。

【００６０】ＮｅｕＡｃ（２→６）Ｇａｌ糖鎖をもつ５
−アセチルノイラミン酸−α２，６−パラグロボシド
（図５中の２）は、Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）に
は全く結合しなかったが、反対にＡ／Ａｉｃｈｉ／２／
６８（Ｈ３Ｎ２）とＡ／Ｍｅｍｐｈｉｓ／１／７１（Ｈ
３Ｎ２）には強く結合した。

【００６１】グリセロ糖脂質Ｈ６３２Ａ（図５中の
３）、Ｓ３６５Ａ（図５中の４）およびＳ３６１Ａ（図
５中の５）はともに３種のウイルスに結合した。Ｈ６３
２Ａは対照物の７〜１２％、Ｓ３６５Ａは１０〜２２
％、Ｓ３６１Ａは１０〜１７％である。特にＳ３６５Ａ
は、どのウイルスに対してもＨ６３２Ａに比べ約２倍強
い結合活性を示した。

【００６２】実施例８ ウイルスに感染したＭＤＣＫ（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ
ｃａｎｉｎｅ ｋｉｄｎｅｙ）単層細胞から放出され
る乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の活性を測定することによ
り、ヒトインフルエンザウイルスの中和能を測定した。
すなわち、約１００ＴＣＩＤ₅₀（５０％組織培養感染
量：５０％ ｔｉｓｓｕｅ−ｃｕｌｔｕｒｅｉｎｆｅｃ
ｔｉｏｕｓ ｄｏｓｅ）のインフルエンザウイルスＡ／
Ｍｅｍｐｈｉｓ／１／７１と０．０５〜５００μｇ／ｍ
ｌのグリセロ糖脂質を含むＥＭＥＭ培地（Ｅａｇｌｅ’
ｓ ｍｉｎｉｍｕｍ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕ
ｍ：１０％牛胎児血清、０．２％牛血清アルブミン）を
直径１０ｃｍのプラスチックシャーレに単層培養したＭ
ＤＣＫ細胞（１×１０⁶個）へ接種し、３４．５℃で５
時間培養した。

【００６３】培養後、液を除去し、集めた細胞を３回Ｅ
ＭＥＭ培地で洗浄し、１００μｌの同培地に懸濁した。
さらに３４．５℃で２０時間培養し、得られた培養液の
１２．５μｌを１００ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．
２）で４倍に希釈し、５０μｌの反応液［２ｍＭＮＡＤ
⁺、２００ｍ−ｕｎｉｔ／ｍｌのディアフォラーゼ、１
９０ｍＭ乳酸リチウム、０．７８ｍＭニトロブルーテト
ラゾリウム、１００ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．
２）］を添加した。３７℃で１０分インキュベートした
後、１００μｌの０．５Ｍ塩酸を添加して反応を停止さ
せた。５５０ｎｍの吸光度（対照は６３０ｎｍ）を測定
してＬＤＨ活性を求めた。結果を図６に示す。図６に示
すとおり、Ａ／Ａｉｃｈｉ／２／６８で対照としたフェ
チュイン（ｆｅｔｕｉｎ）と同程度の濃度（ＩＣ５０：
約９０μｇ／ｍｌ）で中和活性が認められた。

【００６４】実施例９ インフルエンザウイルスを赤血球に作用させると赤血球
が凝集し、引き続いて溶血が起こる。インフルエンザウ
イルスによる赤血球の凝集活性を測定することにより、
ガーゼに固定化されたグリセロ糖脂質による、インフル
エンザウイルスの阻害活性を測定した。

【００６５】グリセロ糖脂質Ｈ６３２ＡおよびＳ３６５
Ａの１０ｍｇ／ｍｌメタノール溶液にガーゼ（２×２ｃ
ｍ）を浸した。余剰の溶液を別のガーゼに吸収させた
後、真空乾燥させ、グリセロ糖脂質が固定化されたガー
ゼを調製した。なお、このようにして調製したガーゼ
は、水または０．９％塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、
洗浄液中のグリセロ糖脂質を薄層クロマトグラフィーに
より分析して、糖脂質がほとんど溶出していないこと
（吸着量の０．２％以下）を確かめ、グリセロ糖脂質が
ガーゼに固定化されことを確認した。また、対照として
グリセロ糖脂質を含まないメタノールを用いて同様の処
理を行った。

【００６６】これらのガーゼにインフルエンザウイルス
Ａ／Ａｉｃｈｉ／２／６８（Ｈ３Ｎ２）の０．９％食塩
水溶液（ＨＡＵ：２⁶〜２¹¹）２００μｌをゆっくりと
万遍なく吸収させ、室温にて３分保持した。その後、
０．９％食塩水１．１ｍｌにてガーゼを洗浄し、洗浄液
に０．１ｍｌの２００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．９）
と、２５μｌのヒト赤血球液（最終濃度２．５％）を添
加した。３７℃で３０分反応後、赤血球の凝集能を観察
した。その結果を表１に示す。対照のメタノール処理ガ
ーゼに比較し、グリセロ糖脂質Ｈ６３２ＡおよびＳ３６
５Ａにより処理したガーゼでは高濃度のウイルス液を作
用させた試験区でも赤血球凝集を阻害できた。

【００６７】

【表１】 表１ ―――――――――――――――――――――――――――――――――― ウイルスユニット数 ２¹¹ ２¹⁰ ２⁹ ２⁸ ２⁷ ２⁶ ―――――――――――――――――――――――――――――――――― 糖脂質なし ＋ ＋ ＋ ＋ − − Ｈ６３２Ａ ＋ ＋ − − − − Ｓ３６５Ａ ＋ − − − − − ―――――――――――――――――――――――――――――――――― ＋：凝集あり −：凝集なし

【００６８】実施例１０ 積み重ねたガーゼを透過したインフルエンザウイルスに
よる赤血球の溶血活性を測定することにより、ガーゼに
固定化されたグリセロ糖脂質による、グリセロ糖脂質Ｈ
６３２ＡおよびＳ３６５Ａの１０ｍｇ／ｍｌメタノール
溶液に各５枚のガーゼ（２×２ｃｍ）を浸した。余剰の
溶液を別のガーゼに吸収させた後、真空乾燥させた。対
照としてグリセロ糖脂質を含まないメタノールを用いて
同様の処理を行った。

【００６９】このように処理した５枚のガーゼを無処理
のガーゼ５枚の上に乗せ、インフルエンザウイルスＡ／
Ａｉｃｈｉ／２／６８（Ｈ３Ｎ２）の０．９％食塩水溶
液（２ ¹³ＨＡＵ）４００μｌをゆっくりと万遍なく吸収
させ、３分保持した後、１枚ずつ剥がし、各々１ｍｌの
０．９％食塩水に浸した。これに０．１ｍｌの２００ｍ
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．９）と、２５ μｌのヒト赤血
球液（最終濃度２．５％）を添加した。氷上で１０分放
置し、３７℃で３０分保持した後、４００×ｇで５分の
遠心を加え、得られた上清中のヘモグロビン量を５４０
ｎｍの吸光度により測定し、赤血球の溶血量を定量し
た。その結果を図７に示す。

【００７０】グリセロ糖脂質Ｈ６３２ＡやＳ３６５Ａで
処理したガーゼでは、コートしたガーゼにウイルス粒子
が捕捉される割合が多く、下方においた無処理ガーゼま
でのウイルス透過が少ない。糖脂質をコートしたガーゼ
を用いた場合では、無処理ガーゼを１０枚重ねた場合に
比べ溶血活性総量が約５０％に減少した。

【００７１】

【発明の効果】本発明のグリセロ糖脂質は、インフルエ
ンザウイルスへの結合活性および中和活性が高く、ウイ
ルスの活性を阻害する効果を有し、インフルエンザの治
療薬あるいは予防用の資材としての利用が期待できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 グリセロ糖脂質Ｈ６３２Ａのマススペクトル
（ＦＡＢＭＳ）である。

【図２】 グリセロ糖脂質Ｈ６３２Ａの重ピリジン溶液
中での¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）であ
る。

【図３】 グリセロ糖脂質Ｓ３６５Ａの重ピリジン溶液
中での¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ）であ
る。

【図４】 グリセロ糖脂質Ｓ３６１Ａの重ピリジン溶液
中での¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ）であ
る。

【図５】 グリセロ糖脂質のヒトインフルエンザウイル
スに対する結合能を示す図である。

【図６】 グリセロ糖脂質のヒトインフルエンザウイル
スに対する中和能を示す図である。

【図７】 グリセロ糖脂質を結合させた担体を通過する
ことによるヒトインフルエンザウイルスの減少を示す図
である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） //(Ｃ１２Ｐ 19/12 Ｃ１２Ｒ 1:15） Ｃ１２Ｒ 1:15） Ａ６１Ｋ 37/20 Ｆターム(参考） 4B064 AF41 BA09 BE07 BE09 BG01 BG09 BH01 BH04 BH05 BH07 BH08 BH10 CA02 DA02 4B065 AA24X AC14 BA22 CA34 CA44 4C057 AA05 BB02 BB03 DD03 HH03 JJ07 4C084 AA02 AA06 BA48 CA04 ZB332

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ）、 【化１】 （式中、Ｒは、式 【化２】 で示される基、式、 【化３】 で示される基または式、 【化４】 で示される基を示す）で表わされるグリセロ糖脂質。
2. 【請求項２】 式（Ｉ−ａ）、 【化５】 で表わされるグリセロ糖脂質Ｈ６３２Ａ。
3. 【請求項３】 式（Ｉ−ｂ）、 【化６】 で表わされるグリセロ糖脂質Ｓ３６５Ａ。
4. 【請求項４】 式（Ｉ−ｃ）、 【化７】 で表わされるグリセロ糖脂質Ｓ３６１Ａ。
5. 【請求項５】 コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａ
   ｃｔｅｒｉｕｍ）に属し、請求項１〜４のいずれかに記
   載のグリセロ糖脂質を生産する能力を有する微生物を培
   養し、培養物から請求項１〜４のいずれかに記載のグリ
   セロ糖脂質を採取することを特徴とする、請求項１〜４
   のいずれかに記載のグリセロ糖脂質の製造方法。
6. 【請求項６】 請求項２に記載のグリセロ糖脂質を生産
   する能力を有するコリネバクテリウム・アクアティカム
   （Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑｕａｔｉｃｕ
   ｍ）Ｈ６３２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４９８）。
7. 【請求項７】 請求項４に記載のグリセロ糖脂質を生産
   する能力を有するコリネバクテリウム・アクアティカム
   （Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑｕａｔｉｃｕ
   ｍ）Ｓ３６１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７７３６）。
8. 【請求項８】 請求項１〜４のいずれかに記載のグリセ
   ロ糖脂質を含む医薬。
9. 【請求項９】 請求項１〜４のいずれかに記載のグリセ
   ロ糖脂質を結合した担体。