JP2001183374A - コンジュゲート保存液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】凍結や乾燥といった操作を要することなく、液
体状態のコンジュゲートを４〜１０℃という温度条件
下、溶液状態のままで長期間に渡って活性を保持したま
まで保存し得る保存液を提供すること。 【解決手段】抗体とシグナル発生物質との複合体を、液
体状態でその活性を維持したまま保存するための保存液
であって、０．１〜１５％（重量／容量）の蛋白質又は
蛋白質加水分解物を含み、かつ、そのｐＨが５〜７であ
ることを特徴とする保存液。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本願発明は、例えば免疫診断
等の分野における測定法において使用されている、抗体
とシグナル発生物質との複合体（以下コンジュゲートと
略す）を液体状態でその活性を保持したまま長期に保持
し得る保存液に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】コンジュゲートは、免疫反応を利用して
ヒト血清等の試料中に極微量に存在する抗原性物質を測
定する、いわゆるイムノアッセイにおいて使用される、
前記抗原性物質量を反映したシグナルを発生させるため
の重要な構成試薬の一つである。一般にコンジュゲート
は、測定対象物に対して特異的に結合し得る抗体と、酵
素や化学発光化合物等のシグナル発生物質とを化学的な
方法により架橋して調製する。

【０００３】コンジュゲートは、抗体とシグナル発生物
質とが両方とも前記機能を発揮し、かつ、結合された一
つの分子として挙動する場合にのみ所定の目的を達成し
得るものである。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】コンジュゲートを構成
する抗体とシグナル発生物質のそれぞれの機能部分の安
定性は、本来それぞれの性質に依存する。抗体等の機能
性蛋白質は、生理的条件下では一般的に、水溶液中であ
っても長期に安定である場合が多い。一方、シグナル発
生物質はケース・バイ・ケースであり、化学発光化合物
等は一般に不安定である。一方、酵素や蛍光物質等は比
較的安定であるが、これらを架橋剤等により抗体と結合
すると不安定化することがある。

【０００５】不安定な試薬を安定的に保存する方法とし
て、例えば凍結保存法、冷却保存法、凍結乾燥法等が一
般に用いられている。凍結保存法は溶液を氷点下（好ま
しくは−２０℃以下）の温度で凍結し保存することで蛋
白質の変性等による失活を防ぎ、長期の保存を可能とす
る方法であるが、凍結融解を繰り返すことにより蛋白質
の変性が起こることがある。冷却保存法はグリセリン等
の添加剤を加え、凍結保存と同様に氷点下（好ましくは
−２０℃以下）で凍結し保存する方法であるが、酵素等
の活性に対して添加剤が影響する例が報告されている。
凍結保存法や冷却保存法では、上記に加え、コンジュゲ
ートを常に凍結又は冷却しておかなければならないとい
う課題があるため、コンジュゲートを含むイムノアッセ
イ用試薬の製造から消費地までの流通や消費地での保存
に際して大きな負担となってしまう。

【０００６】凍結保存法や冷却保存法に比べ、凍結乾燥
法は、凍結乾燥後は４〜１０℃程度で安定に長期間の保
存が可能となることから、現在広く用いられている方法
である。しかし、凍結乾燥法においても凍結及び乾燥の
条件によっては抗体又はシグナル発生物質が失活する場
合があり、これを回避するため、通常は事前に凍結乾燥
に適した溶液組成や温度条件等を検討する必要があっ
た。

【０００７】凍結乾燥法に適した溶液組成として一般に
知られているのは、賦形剤としての糖、多糖類、親水性
ポリマー等や、凍結乾燥によるコンジュゲートの変性等
を防止するための血清等の生体成分である（生体成分
は、固相を使用する、いわゆるヘテロジニアスイムノア
ッセイの場合、該固相への非特異的な吸着（以下ＮＳＢ
と略す）への低減効果をも目的とする）。しかし、大量
のコンジュゲート液を凍結乾燥に供する場合は厳密な温
度管理が必要で、長時間を要するという課題や、設備が
大規模となるためにコストが大きくなるという課題もあ
る。そしてまた、液体状態のコンジュゲートについて、
変性失活させることなく水分子を蒸発又は昇化させるた
めに、大きなエネルギーの消費及び時間を要するという
課題がある。

【０００８】近年では、糖や蛋白存在下で風乾を行い、
コンジュゲートを硝子化して安定化する方法が提案され
ている（例えば特開平２−２６５９８４号公報）。しか
し、これらの方法では、ＮＳＢが上昇するという課題を
生じることがある。また、液体状態のコンジュゲートに
ついて、変性失活させることなく水分子を蒸発又は昇化
させるために、大きなエネルギーの消費及び時間を要す
るという、凍結乾燥法と同様の課題もある。

【０００９】そこで本願発明の目的は、凍結や乾燥とい
った操作を要することなく、液体状態のコンジュゲート
を４〜１０℃という温度条件下、溶液状態のままで長期
間に渡って活性を保持したままで保存し得る保存液を提
供することにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】前記目的を達成するため
に成された本願請求項１の発明は、前記式１又は式２で
表されるコンジュゲートを液体状態でその活性を維持し
たまま保存するための保存液に係り、０．１〜１５％
（重量／容量）の蛋白質又は蛋白質加水分解物を含み、
かつ、そのｐＨが５〜７であることを特徴とする。また
本願請求項２の発明は、前記請求項１の発明に係り、前
記シグナル発生物質がアルカリフォスファターゼ（以下
ＡＬＰと略す）であることを特徴とする。そして本願請
求項３の亜発明は、前記請求項１の発明に係り、前記保
存液が更に０．０１〜１ｍＭの亜鉛イオン及び／又は
０．１〜５ｍＭのマグネシウムイオンを含むことを特徴
とする。以下、本願発明を詳細に説明する。

【００１１】本願発明は、式１又は式２で表されるコン
ジュゲートが、全体として不安定で、長期間の保存中に
劣化する主な原因が抗体とシグナル発生物質との架橋部
分の開裂にあり、しかもｐＨ依存性であるという、新た
な知見に基づき成されたものである。

【００１２】本願発明の保存液により４℃〜１０℃の温
度条件下、液体状態でその活性を維持したまま保存し得
るコンジュゲートは、抗原性物質に対して特異的に結合
し得る抗体と酵素や化学発光化合物等のシグナル発生物
質との、機能の異なる２つの材料が共有結合等の化学的
な方法により架橋されたコンジュゲートである。コンジ
ュゲートを構成する抗体は、インタクト抗体に限定され
ず、蛋白分解酵素により部分消化して調製されたＦ（ａ
ｂ’）₂や、これを更に還元して調製されたＦａｂ’等
であっても良い。

【００１３】シグナル発生物質は、酵素や化学発光化合
物等であるが、具体的には、例えば酵素としては牛小腸
や微生物由良のＡＬＰ、西洋わさび由来のペルオキシダ
ーゼ、微生物由来のβガラクトシダーゼ、グルコースオ
キシダーゼ等を例示できる。本願発明の保存液による保
存効果は、特にシグナル発生物質として牛小腸や微生物
由良のＡＬＰと抗体とを結合したコンジュゲートに対し
て効果的である。また例えば化学発光化合物としては、
抗体中に本来存在するＳＨ基か人工的に導入されたＳＨ
基を利用することで、前記式１又は式２のような形態の
コンジュゲートを形成し得る官能基を有しているもので
あれば何ら制限はない。具体的にはルミノール誘導体、
ルシゲニン誘導体、アクリニジウムエステル誘導体等を
例示できる。

【００１４】前記式１又は式２で表されるコンジュゲー
トは、シグナル発生物質と抗体とを架橋させる試薬（架
橋剤）として、一方はアミノ基に対する反応性が高く、
他方はＳＨ基に対して反応性の高い、反応性が異なる２
つの官能基を同一分子上に有する化合物（二価性試薬；
Ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎ
ｇ Ｒｅａｇｅｎｔ）を使用して調製されたものである
ことが好ましい。代表的な二価性試薬としては、下記一
般式３又は４で表されるものを例示できる。なお一般式
３又は４において、ｎは２〜１０の整数であり、Ｘは
Ｈ、−ＳＯ₃基又はそれらの塩である。一般式３又は式
４で表される二価性試薬は、具体的に例えばＮ−Ｓｕｃ
ｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４−Ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｕｔｙ
ｒａｔｅ（以下ＧＭＢＳと略す）、Ｎ−Ｓｕｃｃｉｎｉ
ｍｉｄｙｌ ３−（２−ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ）
ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（以下ＳＰＤＰと略す）等が挙げ
られる。また一般式３又は４中のメチレン鎖｛−（ＣＨ
₂）_n−｝は分岐又は環状であっても良いが、このような
化合物の具体例としてはＳｕｃｃｉｍｉｄｙｌ ４−
[Ｎ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ]−ｃｙｃｌｏｈ
ｅｘａｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ（以下ＳＭＣ
Ｃと略す）等を例示できる。これらの他にも直鎖、分岐
を有するエチレングリコール鎖や、ピペラジン等の複素
環を含んでいても良い。更にはＳＨ基に対する特異的な
官能基としてＭａｌｅｉｍｉｄｅ基、ｐｙｒｉｄｙｌｄ
ｉｔｈｉｏ基の他に、活性ハロゲンやチオフタルイミド
基等を含むものも使用できる。

【００１５】

【化３】

【００１６】

【化４】

【００１７】ＡＬＰとＦａｂ’化抗体からなるコンジュ
ゲート（以下ＡＬＰ−Ｆａｂ’コンジュゲートと略す）
の調製の一例を簡単に説明すれば、ＡＬＰと一般式３又
は４で表される二価性試薬を中性から弱アルカリ条件下
で反応させ、二価性試薬の活性エステル基と酵素表面の
アミノ基とを反応させる。未反応の二価性試薬を除いた
後、マレイミド基又はピリジルジスルフィド基を導入し
たＡＬＰとＦａｂ’化された抗体を弱酸性下で反応さ
せ、これをゲル濾過等等の常法によって精製すればＡＬ
Ｐ−Ｆａｂ’コンジュゲートが調製できる。

【００１８】上記のようなコンジュゲートを４〜１０℃
という温度条件下、長期間に渡って液体状態でその活性
を維持したまま保存し得る本願発明の保存液のｐＨは５
〜７、好ましくは６．０〜６．５の弱酸性である。保存
液のｐＨを上記範囲とするため、本願発明の保存液は、
コンジュゲートを構成する抗体及びシグナル発生物質に
与える影響を考慮したうえで、当該領域での緩衝能が大
きいリン酸緩衝液、アミノエタンスルホン酸又はアミノ
プロパンスルホン酸系緩衝液を用いて調製することが好
ましい。アミノプロパンスルホン酸系緩衝液としては、
例えば、２−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌ
ｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＭＥＳ）、３−Ｍｏｒｐｈｏｌ
ｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ、２
−Ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｐｒｏｐ
ａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄが例示できる。例え
ばコンジュゲートを構成するシグナル発生物質がＡＬＰ
である場合には、Ｎ−（２−Ａｃｅｔａｍｉｄｅ）ｉｍ
ｉｎｏｄｉａｃｅｔｉｃａｃｉｄ等の金属キレート能を
有する緩衝剤は不適当である。これは、ＡＬＰの活性発
現に金属イオンが要求されるからである。むしろ本願発
明の保存液では、例えばＡＬＰ等の活性発現に金属イオ
ンが必要な場合は金属イオンを含有していることが特に
好ましい。例えばＡＬＰと抗体とのコンジュゲート用の
保存液には、０．１〜５ｍＭのマグネシウムイオン及び
／又は０．０１ｍＭ〜１ｍＭの亜鉛イオンが含まれてい
ることが好ましい。

【００１９】本願発明の保存液中に含まれる蛋白質又は
蛋白質加水分解物としては、例えば動物血清アルブミ
ン、グロブリン、カゼイン、加水分解したゼラチン等が
例示できるが、特に牛血清アルブミン及び／又は加水分
解したゼラチンを用いることが好ましい。これらは、単
独で、又は２種以上を混合して使用できる。蛋白質又は
蛋白質加水分解物の保存液中での濃度は、重量／容量比
で０．１〜１５％とすれば良いが、前記特に好ましく牛
血清アルブミン及び／又は加水分解したゼラチンを使用
する場合には、その濃度を１〜５％とすることを例示で
きる。

【００２０】本願発明では上記蛋白質として、上記例示
した精製蛋白質等以外にも、例えばマウス血清等の動物
血清を使用することができる。この場合は血清等に含ま
れる蛋白質量を通常の方法で測定し、重量／容量比で
０．１〜１５％となるように保存液に加えれば良い。動
物血清を免疫反応時に共存させることによって免疫測定
の対象試料中に存在する妨害物質の影響を排除すること
が可能となることから、蛋白質として動物血清を使用す
ることも本願発明においては好ましい形態である。

【００２１】本願発明の保存液はコンジュゲートを４〜
１０℃という温度条件下で保存し得るものであるが、か
かる温度では細菌の増殖による腐敗が懸念される。従っ
て、特に好ましくは本願発明の保存細菌等の増殖による
腐敗を防ぐ目的でアジ化ナトリウムやチアゾール系の合
成抗菌剤（例えば商品名プロクリン）等を防腐剤として
添加することを例示できる。

【００２２】

【発明の実施形態】以下、本願発明を更に詳細に説明す
るために実施例を記載するが、本発明はこれら実施例に
限定されるものではない。なお下記の実施例において、
コンジュゲートの活性は、市販の全自動免疫測定装置
（東ソー（株）製、ＡＩＡ１２００）を用いて１ステッ
プサンドイッチ免疫測定法で測定した。この測定では、
１回の測定にあたり、ＡＬＰと抗ヒトＴＳＨモノクロー
ナル抗体のＦａｂ’とを結合したコンジュゲート（蛋白
含量にして１μｇ／ｍｌ）の５０μｌ及び前記抗ヒトＴ
ＳＨモノクローナル抗体とは異なる部位でヒトＴＳＨ結
合し得ると抗ヒトＴＳＨモノクローナル抗体のＦ（ａ
ｂ’）₂を固定化した球状固相１２個を入れた反応カッ
プに対して抗原溶液（ヒトＴＳＨ溶液、１０μＩＵ／ｍ
ｌ）の５０μｌを加え、３７℃で４０分反応させた後、
Ｂ／Ｆ洗浄し、１００μｌのＡＬＰ基質溶液（４ＭＵ
Ｐ；４メチルウンベリフェリルリン酸エステル）を加
え、単位時間当たりの蛍光増加量を測定した。測定結果
は、４ＭＵＰの分解物（４ＭＵ；４ウンベリフェロン）
の増加濃度（ｎＭ／ｓｅｃ）に換算した。

【００２３】実施例１ ｐＨ５〜８の溶液で希釈したジ
スルフィド結合型コンジュゲートの安定性 架橋剤としてＳＰＤＰ用い、定法によりＡＬＰと抗ヒト
ＴＳＨモノクローナル抗体のＦａｂ’とのコンジュゲー
トを調製し、それぞれｐＨ５．０、６．０、７．０又は
８．０に調整した保存液（１０％ゼラチン、１％ＢＳ
Ａ、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂、０．１ｍＭ ＺｎＣｌ₂及び
０．１％ ＮａＮ₃を含む、５０ｍＭトリス緩衝液）で
蛋白質濃度が約１μｇ／ｍｌとなるように希釈した。希
釈後、コンジュゲート溶液を２群に分け、一方を４℃、
他方を４０℃でそれぞれ３日間保持し、各群のコンジュ
ゲートについて活性を測定した。結果を図１に示す。

【００２４】図１は、各ｐＨの４℃保存における活性を
１００％とし、４０℃で保存した場合の相対活性（％）
を示したものである。ｐＨ５．０では若干の活性低下
（５％）が認められるものの、ｐＨ６及び７では活性の
低下は認められなかった。これに対しｐＨ８．０では大
幅な活性低下（５７％）が認められた。この事からコン
ジュゲートの安定性ｐＨに依存し、特にアルカリ側で不
安定であること示された。

【００２５】実施例２ マレイミド型コンジュゲートの
安定性 架橋剤としてＧＭＢＳ用い、定法によりＡＬＰと抗ヒト
ＴＳＨモノクローナル抗体のＦａｂ’とのコンジュゲー
トを調製し、ｐＨ５．０、６．０、７．０又は８．０に
調整した保存液（ｐＨ５．０及びｐＨ６．０の保存液と
しては、１０％ゼラチン、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂、０．１
ｍＭ ＺｎＣｌ₂及び０．１％ ＮａＮ₃を含む５０ｍＭ
ＭＥＳ緩衝液；ｐＨ７．０及びｐＨ８．０の保存液と
しては１０％ゼラチン、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂、０．１ｍ
Ｍ ＺｎＣｌ₂及び０．１％ ＮａＮ₃を含むＴＥＳ緩衝
液）で蛋白質濃度が約１μｇ／ｍｌとなるように希釈し
た。希釈後、コンジュゲート溶液を２群に分け、一方を
４℃、他方を４０℃でそれぞれ３日間保持し、各群のコ
ンジュゲートについて活性を測定した。結果を図２に示
す。

【００２６】図２は、各ｐＨの４℃保存における活性を
１００％とし、４０℃で保存した場合の相対活性（％）
を示したものである。実施例１で調製したジスルフィド
結合型コンジュゲートと同様に、本実施例のコンジュゲ
ートもアルカリ側で活性低下の著しいことが示された。

【００２７】実施例３ コンジュゲートのゲル濾過分析 コンジュゲートの各ｐＨにおける保存による分子量的な
変化を調べる目的で、ゲル濾過分析を行った。実施例１
及び実施例２で調製し、ｐＨ６．０、７．０又は８．０
の保存液で希釈後４０℃で３日間保存したジスルフィド
結合型及びマレイミド型コンジュゲートをゲルろ過カラ
ム（東ソー（株）製、商品名；ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３００
０ＳＷＸＬ）に供し、試料注入後５〜９分に渡っての溶
出液画分を０．１ｍｌずつ取得した。なおゲルろ過にお
ける溶離液としては０．1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．
８）を用い、流速は１ｍｌ／ｍｉｎとした。

【００２８】取得した画分を一定倍率で希釈した後、そ
の５μｌに対して５０μｌの化学発光基質（Ｔｒｏｐｉ
ｘ社製、商品名；ＣＳＰＤ Ｅｍｅｒａｌｄ ＩＩ）を
加え、３７℃に保持し、基質添加１０分後の発光量（Ｃ
ｏｕｎｔｓ／ｓｅｃ）を測定した。結果を図３及び図４
に示す。

【００２９】図３及び図４は、縦軸に各画分の発光量、
横軸に各画分の溶出時間をとり、コンジュゲートの種類
別にグラフ化したものである。なお各ｐＨでのデータを
比較するために、最大発光量を示した画分の発光量を１
００％として各画分の発光量を相対化比率（％）として
表示した。図３はジスルフィド結合型コンジュゲートの
パターン、図４はマレイミド型コンジュゲートのパター
ンを示す。

【００３０】両コンジュゲート共に、ｐＨ７．０、８．
０では溶出時間７．８分前後にピークが出現し、又は同
ピークが増加していることが分かる。上記ゲルろ過条件
での未修飾のＡＬＰの溶出時間は７．８分であることか
ら、コンジュゲートは保存中にＡＬＰと抗体（Ｆａ
ｂ’）とに分解したと思われる。

【００３１】以上、実施例１から３までの及び4の結果
を総合すると、アルカリ領域におけるコンジュゲート活
性の低下の原因はコンジュゲートを構成するＡＬＰと抗
体間の結合が開裂したためと推定された。

【００３２】実施例４ 保存液組成のＡＬＰ安定化因子
の同定及び最適化 表１に示した組成の９種類の保存液（１％ ＢＳＡ及び
０．１％ ＮａＮ₃は全保存液共通である）を調製し、
これに実施例２で調製したマレイミド型コンジュゲート
を１μｇ／ｍｌとなるように添加し、４℃又は４０℃で
５日間保存後、各組成の保存液で希釈してＴＳＨ溶液
（１０μＩＵ／ｍｌ）を測定した。比較のため、表中に
対照として示した組成の保存液を用いて４℃で保存した
コンジュゲートを使用して前記ＴＳＨ溶液を測定し、そ
の値を１００％として各保存液により保存した場合の失
活率を求めた。

【００３３】

【表１】

【００３４】失活率を望小特性として要因解析を行い、
「日本規格協会、品質工学口座１「開発・設計段階の品
質工学」に従って各保存液におけるＳ／Ｎを求め、各因
子の寄与率を求めた。この結果、亜鉛イオンの寄与率は
６６．４％と最も高く、ＡＬＰコンジュゲートの安定化
に重要な因子であることが示された。亜鉛イオンを蛋白
溶液に高濃度に添加すると蛋白の沈殿等が生じることか
ら、至適濃度を４０℃、５日間の加速試験後の活性を測
定から実験的に求めた。結果を図５に示す。

【００３５】亜鉛０ｍＭでは、約４０％の活性低下が認
められたが、０．０５〜２ｍＭでは活性低下は認められ
なかった。一方、４〜１０ｍＭではコンジュゲートの一
部に沈殿が生じ、活性も濃度の上昇に従って低下する傾
向が認められた。

【００３６】以上の結果から、亜鉛を加えることにより
コンジュゲートの保存安定性を向上できること、及び亜
鉛の至適濃度は０．１ｍＭであることが分かる。

【００３７】実施例５ 弱酸性保存液中でのＡＬＰコン
ジュゲートの保存安定性 実施例１から４の結果に基づいて保存液組成を決定（５
％牛血清アルブミン、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂、０．１ｍＭ
ＺｎＳＯ₄、０．１％ ＮａＮ₃を含む５０ｍＭ ＭＥ
Ｓ緩衝液（ｐＨ６．５））し、実施例２で調製したＡＬ
Ｐコンジュゲートを１μｇ／ｍｌとなるように希釈して
３５℃、４０℃、４５又は５０℃での加速試験にかけ、
経過時間とコンジュゲート活性のデータから回帰式を求
め、その傾き即ち各温度における劣化速度定数を求め
た。

【００３８】アレニウスプロットの傾きから推定された
活性化エネルギーは３２．２Ｋｃａｌ／ｍｏｌであり、
アレニウスの式及び各温度における実測値から求めた回
帰式から４℃条件下で保存した場合に活性が１０％低下
するにの要する期間は３３５３日と推定された。

【００３９】実施例６ 弱酸性保存液中でのＡＬＰと抗
ヒト成長ホルモンＦａｂ’コンジュゲートの保存安定性 ヒト成長ホルモン（以下ｈＧＨと略す）に対するＦａ
ｂ’化モノクローナル抗体とＡＬＰとのコンジュゲート
を実施例２の方法に従って調製し、これを実施例５と同
様の加速試験に供してその活性化エネルギー及び保存期
間を推定した。なおコンジュゲートの活性測定において
も市販の装置（東ソー（株）製、ＡＩＡ−１２００）
と、前記モノクローナル抗体とは異なる部位でｈＧＨと
結合する抗ヒトｈＧＨモノクローナル抗体を固定化した
固相を用いて測定した。

【００４０】その結果、活性化エネルギーは２６．４Ｋ
ｃａｌ／ｍｏｌであり、４℃条件下で保存した場合に活
性が１０％低下するにの要する期間は４４９日と推定さ
れた。

【００４１】

【発明の効果】本願発明は、凍結や乾燥という複雑かつ
条件設定のための予備的実験が面倒な従来の安定化法と
比較して容易に実施することが可能であるという効果を
有する。またこれら従来の安定化法では大規模な設備が
必要であるが、本願発明ではコンジュゲートに対して単
に保存液を添加するのみでコンジュゲートの安定化が可
能であるため、容易に実施が可能であり、しかも大規模
な設備を必要としないという効果もある。

【００４２】本願発明の保存液を使用すれば、液体状態
のコンジュゲートを４〜１０℃という温度条件下で１年
程度に渡って保存可能である。この間、顕著な活性の低
下を招くことなくもない。従ってイムノアッセイ用試薬
の一構成成分であるコンジュゲートを製造し、消費地ま
で搬送等したり、消費地において一定量を保存するに際
しても、従来の安定化法に比較して効果的である。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は実施例１の結果を示す図であり、ジスル
フィド結合型ＡＬＰコンジュゲートを４０℃で３日間保
存した時の保存液のｐＨと保存後のコンジュゲート活性
の関係を示したものである。

【図２】図２は、実施例２の結果を示す図であり、マレ
イミド結合型ＡＬＰコンジュゲートを４０℃で３日間保
存した時の保存液のｐＨと保存後のコンジュゲート活性
の関係を示したものである。

【図３】図３は実施例３の結果を示す図であり、ジスル
フィド結合型ＡＬＰコンジュゲートを種々ｐＨにて保存
する加速試験後にゲル濾過した場合の溶出パターンを、
ＡＬＰ性を指標にグラフ化したものである。

【図４】図４は実施例３の結果を示す図であり、マレイ
ミド結合型ＡＬＰコンジュゲートを種々ｐＨにて保存す
る加速試験後にゲル濾過した場合の溶出パターンを、Ａ
ＬＰ性を指標にグラフ化したものである。

【図５】図５は実施例４の結果を示す図であり、保存液
中の亜鉛濃度と加速試験後のコンジュゲートのＡＬＰ活
性の関係を示したものである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記式１又は式２で表される抗体とシグナ
   ル発生物質との複合体を、液体状態でその活性を維持し
   たまま保存するための保存液であって、０．１〜１５％
   （重量／容量）の蛋白質又は蛋白質加水分解物を含み、
   かつ、そのｐＨが５〜７であることを特徴とする、前記
   保存液。 【化１】 【化２】 （式１又は式２において、Ａは抗体又はシグナル発生物
   質であり、Ｚはスペーサーであり、ＢはＡが抗体の場合
   はシグナル発生物質、Ａがシグナル発生物質の場合は抗
   体であり、−S-S−はジスルフィド結合をそれぞれ示
   す）。
2. 【請求項２】前記シグナル発生物質はアルカリフォスフ
   ァターゼであることを特徴とする、請求項１の保存液。
3. 【請求項３】前記保存液は、更に０．０１〜１ｍＭの亜
   鉛イオン及び／又は０．１〜５ｍＭのマグネシウムイオ
   ンを含むことを特徴とする、請求項１の保存液。