JP2001172189A - 限界運動量増強剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明は、慢性疲労等の為の限界運動量増強
剤を提供することを課題とする。 【解決手段】 下記の性質で特定されるタンパク質、ま
たはローヤルゼリー中の全タンパク質における同タンパ
ク質を、好ましくは６重量％以上含むローヤルゼリーを
限界運動量増強剤の有効成分とする。 （ａ）ローヤルゼリー中のタンパク質の非変性ポリアク
リルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを形成す
る。 （ｂ）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動により測定される分子量：約５７ｋＤａ。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、疲労回復および改
善等に好適な、限界運動量増強剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】現代はストレスの時代であり現代社会に
暮らすものは、大なり小なりストレスと共に生活してい
る。現代社会に於けるストレスは精神的なものに留まら
ず、肉体的な負荷ストレスも少なくない。これは、精神
的ストレスの影響は肉体にも及ぶからである。従って、
このストレスにより、人々の体調のバランスが崩れたり
して慢性疲労症候群等にかかり、ここ数年社会的な問題
となっている。最近、頻繁に起きている突然死も一つに
は過度の疲労からくるものと考えられている。これに加
えて、睡眠不足や残業の急増による直接肉体に寄与する
負荷ストレス量も急増しており、今や現代人にとって過
労はごく一般的なものとなっている。

【０００３】この様な過労より生体を守る手段として
は、生体の運動に関する耐久性を増すことであり、この
パラメータとしては限界運動量が指標になっている。
又、高齢化社会にともない、循環器疾患、消化器疾患や
肝臓疾患などの重大な病気にかかる人たちが少なくな
い。この様な人たちにとっても限界運動量を増強させる
ことは、早期の回復へとつながり非常に好ましい。この
様に限界運動量は現代社会を生きるにあたって非常に重
要なファクターであり、これを増強させる手段が望まれ
ていたが、得られていないのが現状であった。

【０００４】一方、ローヤルゼリーは、滋養強壮作用を
有する素材として知られており、これを主成分とした健
康食品などが広く販売されているが、その生理活性の本
体が未だ決定されておらず、その為、その生理活性がぶ
れているのが現状であった。又、このローヤルゼリー
が、生体が運動できる最大運動量の増強作用を有するこ
とは全く知られていない。

【０００５】加えて、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電
気泳動等により、分子量５７ｋＤａと決定された、ロー
ヤルゼリー中のタンパク質が、上述した作用を有するこ
とは知られていなかった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記のよう
な状況をふまえて為されたものであり、慢性疲労等の肉
体的ストレスより生体を守る指標である限界運動量を増
強する作用を有する限界運動量増強剤を提供することを
課題とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】この様な状況に鑑みて、
本発明者らは鋭意研究努力を重ねた結果、ローヤルゼリ
ー、特にその中に含まれる特定のタンパク質が限界運動
量を増強する作用を有することを見いだし、本発明を完
成させるに至った。。

【０００８】すなわち本発明は、以下のとおりである。 （１）限界運動量増強作用を有するローヤルゼリー中の
タンパク質を有効成分として含有する限界運動量増強
剤。 （２）前記タンパク質が下記の性質で特定されるタンパ
ク質である（１）記載の限界運動量増強剤。 （ａ）ローヤルゼリー中のタンパク質の非変性ポリアク
リルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを形成す
る。 （ｂ）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動により測定される分子量：約５７ｋＤａ。 （３）前記タンパク質が、トーソー株式会社製ＴＳＫゲ
ルＧ３０００ＳＷ（７．５×３０ｃｍ）をカラムとして
用いて、０．３Ｍ塩化ナトリウム、０．０５％アジ化ナ
トリウム含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を展
開液とし、流速を０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を３
５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出する、高速液
体クロマトグラフィーにおいて、保持時間２５分〜３０
分にピークを有するタンパク質である、（１）又は
（２）に記載の限界運動量増強剤。 （４）前記タンパク質が、配列番号１のアミノ酸番号１
〜８のアミノ酸配列を含むことを特徴とする（１）〜
（３）のいずれか一に記載の限界運動量増強剤。 （５）前記タンパク質を含有するローヤルゼリーを含む
ことを特徴とする（１）〜（４）のいずれか一に記載の
限界運動量増強剤。 （６）前記ローヤルゼリー中の全タンパク質における前
記タンパク質の含有率が６重量％以上であることを特徴
とする（５）に記載の限界運動量増強剤。 （７）（１）〜（６）のいずれか一に記載の限界運動量
増強剤を含む医薬。 （８）（１）〜（６）のいずれか一に記載の限界運動量
増強剤を含む食品。

【０００９】

【発明の実施の形態】＜１＞本発明の限界運動量増強剤
の有効成分であるタンパク質 本発明の限界運動量増強剤の有効成分は、ローヤルゼリ
ー中に含まれる限界運動量増強作用を有するタンパク質
である。実施例に示すように、本発明者らは、採取した
てのローヤルゼリーが限界運動量増強作用を有している
こと、及び、ローヤルゼリー中の特定のタンパク質の含
有率が低下すると、限界運動量増強作用も下がることを
見いだした。そして、この限界運動量増強作用と相関す
るタンパク質を特定することに成功した。前記限界運動
量増強作用を有するタンパク質を特定する方法として
は、電気泳動により特定する方法が挙げられる。該タン
パク質は電気泳動により下記の性質で特定される。 （ａ）ローヤルゼリー中のタンパク質の非変性ポリアク
リルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを形成す
る。 （ｂ）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動により測定される分子量：約５７ｋＤａ。

【００１０】上記「性質で特定される」タンパク質と
は、ローヤルゼリーを原料として得られる上記性質を有
するタンパク質のみならず、同タンパク質と実質的に同
一のタンパク質、例えば組み換えＤＮＡ技術によって得
られるタンパク質であっても良いことを意味する。

【００１１】本発明に用いるタンパク質を特定するに際
し、電気泳動の方法としては、特に制限されないが、例
えば、水溶性ローヤルゼリータンパク質（３％ローヤル
ゼリー水溶液（Ｗ／Ｖ））をポリアクリルアミドゲル
（１０％均一）にて、電流２０ｍＡで電気泳動し、クマ
シーブリリアントブルーにより染色して、タンパク質を
特定する方法がある。

【００１２】上記の条件でローヤルゼリー中のタンパク
質の非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行うと、
前記限界運動量の増強作用を有するタンパク質は、単一
のバンドを形成する。分子量マーカーとしてLMW Kit E
（ファルマシアバイオテク社）を用いた場合、本発明の
タンパク質の分子量は約５１ｋＤａである。

【００１３】また、還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動は、Laemmliらの方法（Laemmli,
U. K. et al., J. Biol. Chem. 252, 1102-1106 (197
7)）で行うことができる。分子量マーカーとしてLMW Ki
t E（ファルマシアバイオテク社）を用いた場合、本発
明のタンパク質の分子量は約５７ｋＤａである。

【００１４】また、本発明におけるタンパク質の別の特
定方法としては、ゲル濾過クロマトグラフィー等の各種
クロマトグラフィーによっても、識別・定量することに
より特定する方法が挙げられる。クロマトグラフィーと
しては、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロ
マトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等
が挙げられる。また、クロマトグラフィーは、オープン
カラムを用いることもできるが、高速液体クロマトグラ
フィーが好ましい。

【００１５】例えば、ゲル濾過分析は、通常に知られて
いる方法に従って行えば良く、好ましい例としては、例
えば、トーソー株式会社製ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷ
（７．５×３０ｃｍ）をカラムとして用いて、０．３Ｍ
塩化ナトリウム、０．０５％アジ化ナトリウム含有０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を展開液とし、流速を
０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を３５℃に設定し、２
８０ｎｍの吸光度で検出する、高速液体クロマトグラフ
ィーが挙げられる。この分析条件下で、上記タンパク質
は、保持時間約２５分〜３０分にピークとして現れるこ
とより、特定される。

【００１６】さらに、本発明におけるタンパク質の別の
特定方法としては、該タンパク質のＮ末端配列分析によ
り決定されたアミノ酸配列（配列番号１）の、全部の配
列あるいは部分配列をＮ末端側に有していることを確認
することで特定する方法が挙げられ、なかでも配列番号
１のアミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列をＮ末端側に有
していることを確認することで特定する方法が好まし
い。

【００１７】上述したこれら特定方法の内の、一つの方
法単独で行うことによっても特定する事ができるが、こ
れらを組み合わせることにより、さらに明確に特定する
ことができる。以下、上記のようにして特定されるロー
ヤルゼリー中のタンパク質を、「５７ｋＤａタンパク
質」ということがある。

【００１８】＜２＞５７ｋＤａタンパク質の調製方法 本発明のローヤルゼリー中の限界運動量増強作用を有す
るタンパク質の調製方法としては、該タンパク質を調製
できれば特に限定されるものではなく、現在および今後
において利用が可能な分離・精製方法から適切なものを
組み合わせた方法が用いることができる。具体的には、
ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラ
フィー、アフィニティークロマトグラフィー等の各種ク
ロマトグラフィーを使用する方法が挙げられる。

【００１９】より具体的には、以下に述べる方法が挙げ
られる。凍結乾燥したローヤルゼリーを０．７重量％で
１０ｍＭのトリス塩酸緩衝液ｐＨ７に溶解し、ＵＦ１０
万（Ｍｉｎｉｐｌａｔｅ１００）で６倍濃縮、７回脱塩
を行い、その濾液をさらにＵＦ３万（Ｍｉｎｉｐｌａｔ
ｅ３０）で８倍濃縮、１回脱塩を行い、分子量１０万〜
３万の画分を得る。

【００２０】次に、この画分をゲル濾過クロマトグラフ
ィーにより分画する。ファルマシア株式会社製ＨｉＬｏ
ａｄ１６／６０Ｓｕｐｅｒｄｅｘ６００（1.6cm×60c
m）をカラムとして用いて、０．１５Ｍ塩化ナトリウム
含有５０ｍＭリン酸カリウムバッッファーｐＨ７．０を
展開液とし、流速を１．０ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を
３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出することに
よって、上記サンプルを分画する。分画は、１フラクシ
ョン２ｍｌとして行う。その結果、フラクションＮｏ．
３５〜４３に分子量５７ｋＤａのタンパク質を得ること
が出来る。

【００２１】上述した方法により得られたタンパク質の
分子量を、電気泳動により確認した。分子量マーカーと
してゲル濾過用LMW Kit及びHMW Kit（ファルマシアバイ
オテク社）を用いた上記と同様のゲル濾過分析により、
上記タンパク質の分子量は、約５７ｋＤａと推定され
た。さらにこのタンパク質は、（１）と同様の還元条件
下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動分析に
おいて、分子量約５７ｋＤａを示した。また、５７ｋＤ
ａタンパク質をＮ−グリコシダーゼＦで消化した後の分
子量は、４８ｋＤａであり、糖タンパク質であることが
わかっている。

【００２２】さらに、上述した分子量１０万〜３万の画
分を得るまでの工程（工程Ａ）と、得られた画分をゲル
濾過クロマトグラフィーにより分画して５７ｋＤａタン
パク質を得る工程（工程Ｂ）との間に、以下に述べる工
程を設けることが好ましい。

【００２３】この工程とは、工程Ａで得られる分子量１
０万〜３万のサンプルを、陰イオン交換クロマトグラフ
ィー等によって分画する工程であり、これによりタンパ
ク質を分離できる。陰イオン交換クロマトグラフィーと
しては通常に知られている方法に従って行えばよく、こ
のような好ましい例として、例えばトーソー株式会社製
DEAE-Toyoperal 650M (2.2×20cm)をカラムとして用い
て、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（pH7.0）
を展開液Ａ、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー
（pH7.0）、１Ｍ ＮａＣｌを展開液Ｂとしてグラジエ
ントにより、流速５ｍｌ／分で溶出し、２８０ｎｍの吸
光度で検出し、２．５ｍｌ／チューブで分画したフラク
ションＮｏ．１１９〜１２７に分子量５７ｋＤａのタン
パク質を含む画分を検出することができる。この画分を
続いて工程Ｂに用いることによりさらに精製された分子
量５７ｋＤａタンパク質を得る事ができる。

【００２４】尚、上述した調製方法により精製したタン
パク質について、Ｎ末端アミノ酸配列を決定したとこ
ろ、ローヤルゼリー中の報告されているタンパク質ＭＲ
ＪＰ１（Schmitzova, J., et al., Cell. Mol. Life Sc
i. 54 (9), 1020-1030 (1998)）及びアピシン（apisi
n）（Kimura, Y. et al., Biosci, Biotech. Biochem,
60(12), 2099-2102 (1996)）のアミノ酸配列と高い相同
性を有していた。特に、５７ｋＤａタンパク質のＮ末端
の８アミノ酸残基は、ＭＲＪＰ１中のアミノ酸配列（Ｎ
末端から２０〜２７番目のアミノ酸残基）と完全に一致
している。報告されているＭＲＪＰ１をコードするＤＮ
Ａの塩基配列及び該配列がコードするアミノ酸配列を、
配列番号２及び３に示す。

【００２５】ＭＲＪＰ１は、４３２アミノ酸からなり、
蜜蜂の下咽頭腺から分泌された後、Ｎ末端にあるシグナ
ルペプチドが切断され、ローヤルゼリー中に存在する。
成熟タンパク質は４１６アミノ酸からなり、その推定分
子量は、４６．８ｋＤａである。しかし、ローヤルゼリ
ー中の電気泳動で５５ｋＤａを示すタンパク質のＮ末端
アミノ酸配列が、ＭＲＪＰ１のＮ末端から２０番目のア
ミノ酸残基以降の配列と一致したことから、ＭＲＪＰ１
の成熟タンパク質の分子量は５５ｋＤａであると推定さ
れている（前記Schmitzova, J., et al.）。そして、Ｍ
ＲＪＰ１中には３つの糖鎖付加部位が存在すると記載さ
れていることから、上記の分子量の差異は糖鎖付加によ
るものと考えられる。

【００２６】上記のように、５７ｋＤａタンパク質とＭ
ＲＪＰ１成熟タンパク質のＮ末端のアミノ酸配列は一致
し、さらに、ローヤルゼリー中のタンパク質を非変性条
件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った場合に
も、５７ｋＤａタンパク質に相当するバンドは単一であ
ることから、５７ｋＤａタンパク質とＭＲＪＰ１は同一
タンパク質である可能性が高い。尚、配列番号１のアミ
ノ酸配列と配列番号３のアミノ酸番号２０以降のアミノ
酸配列とで、一部異なるが、一般的に塩基配列決定に比
べてアミノ酸配列決定は不正確である場合があることか
ら、これらの相違は読み誤りである可能性がある。

【００２７】また、アピシンは、ローヤルゼリー中に存
在するタンパク質であり、ゲル濾過分子量は３５０ｋＤ
ａ、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動による分
子量は５８ｋＤａである（米倉ら、ローヤルゼリーのタ
ンパク質の特徴と機能 ミツバチ科学、第１９巻第１
号、第１５−２２頁、１９９８年）。また、Ｎ末端アミ
ノ酸配列分析の結果、２種類の配列がみられたことか
ら、２種の５８ｋＤａのサブユニットが３分子づつ会合
したヘテロオリゴマータンパク質である。このように、
サブユニットの分子量は５７ｋＤａタンパク質に近く、
Ｎ末端アミノ酸配列も同一であることから、アピシンも
５７ｋＤａタンパク質と同一である可能性が高い。

【００２８】これらの事より、ＭＲＪＰ１およびアピシ
ンは、５７ｋＤａタンパク質と同一、または類似である
ことが示唆される。したがってＭＲＪＰ１およびアピシ
ンは、５７ｋＤａタンパク質と同一でなかったとして
も、本発明の限界運動量増強剤の有効成分として用いる
ことができる可能性が高い。従って、これらのタンパク
質は、例えば、それぞれに対応する塩基配列を用い、組
み換えＤＮＡ技術を利用することによって製造すること
ができ、これらを本発明における有効成分として用いる
ことができることも予測される。

【００２９】＜３＞本発明の限界運動量増強剤 本発明の限界運動量増強剤は、ローヤルゼリーから抽出
した分子量５７ｋＤａのタンパク質を含有することを特
徴とする。したがって、この分子量５７ｋＤａタンパク
質を有効成分として含有させることができれば、ローヤ
ルゼリー自体、または５７ｋＤａタンパク質の部分精製
物でもよい。尚、５７ｋＤａタンパク質は保存中に劣化
しやすいので、ローヤルゼリー自体を用いる場合は、同
タンパク質の含有量が高いこと、例えば全タンパク質中
６重量％以上、好ましくは９重量％以上であることが望
ましい。５７ｋＤａタンパク質が含有されていることの
確認、又はその含有量は、前記の５７ｋＤａタンパク質
を特定する方法と同様にして、例えば、高速液体クロマ
トグラフィーによって評価することができる。具体的に
は、例えば、前記と同様の条件で高速液体クロマトグラ
フィーを行い、得られるクロマトグラム中の全ピーク面
積に対する５７ｋＤａタンパク質のピーク面積の比率に
よって、該タンパク質の含有率を算出することができ
る。

【００３０】上記５７ｋＤａタンパク質を有効成分とし
て含有する本発明の限界運動量増強剤は、通常の疲労の
回復・改善にも有効であり、生体が運動できる最大運動
量の増加において著効を示す。

【００３１】本発明の限界運動量増強剤は、そのまま、
あるいは慣用の製剤担体と共に動物及び人に投与するこ
とが出来る。１日の好ましい有効投与量は、分子量５７
ｋＤａのタンパク質量として、０．０１〜１００ｍｇ／
ｋｇ体重／日、更に好ましい投与量は０．５〜５０ｍｇ
／ｋｇ体重／日である。投与形態としては、特に限定は
なく、必要に応じて適宜選択して使用され、錠剤、カプ
セル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、座
剤等の非経口剤が挙げられる。以上の製剤は、常法によ
って製造される。通常知られた任意成分を本発明の分子
量５７ｋＤａのタンパク質の生理活性が損なわれない程
度に配合することが出来る。かかる任意成分として、白
糖、乳糖等の賦形剤、デンプン、ゼラチン等の結合剤、
カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメ
チルセルロースカルシウム等の崩壊剤、大豆レシチン、
ショ糖脂肪酸エステル等の界面活性剤、タルク、ロウ類
等の滑沢剤、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウム
ゲル等の流動促進剤、生理食塩水、ブドウ糖水溶液等の
希釈剤、矯味矯臭剤、着色剤、殺菌剤、防腐剤、香料等
が挙げられる。本発明の限界運動量増強剤の適応症とし
ては、虚弱体質、病中・病後や産前・産後の体力の回
復、慢性疲労症候群、過剰ストレス負荷状態の改善等が
挙げられる。

【００３２】本発明の限界運動量増強剤を医薬として使
用する場合、５７ｋＤａタンパクの配合量は、限界運動
量増強作用が期待できる量であれば限り特に制限されな
いが、例えば、医薬全量に対して１〜３０重量％が好ま
しい。また、本発明の限界運動量増強剤は、食品に配合
することによって、限界運動量増強作用を有する機能性
食品としても用いることができる。食品の成分として
は、限界運動量増強作用を害さない限り特に制限されな
い。食品への配合量は、食品の味を損なわずに、且つ十
分な限界運動量増強作用が期待できる量であれば特に制
限されないが、例えば、１〜３０重量％が好ましい。

【００３３】

【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明について更に
詳細に説明を加えるが、本発明がかかる実施例にのみ限
定を受けないことは、言うまでもない。

【００３４】＜実施例１＞限界運動量増強剤のマウスに
対する限界運動量増強作用（マウス強制遊泳試験、抗疲
労試験） 実験動物としてｄｄＹマウス、５週齢、雄、１群１０匹
を用いた。京大松元式マウス運動量測定流水槽を用い
て、マウスの強制遊泳による限界運動量増強剤の限界運
動量増強作用に対する影響を測定した。限界運動量増強
剤としてローヤルゼリー（ローヤルゼリー中のタンパク
質全量における５７ｋＤａタンパク質の含有量；１１．
６重量％）を乾燥重量０．７ｇ／ｋｇで、遊泳試験の４
８、２４，０．５時間前に、各被験マウスに経口投与し
た。次に、１群１０匹の該マウスを１５分間遊泳させた
後、１０分間休息させ、再度前記ローヤルゼリーを同量
投与した。さらに、２０分間休息させた後、遊泳時間の
測定を行った。尚、分子量５７ｋＤａのタンパク質含量
が６重量％未満である劣化ローヤルゼリー（ローヤルゼ
リー中のタンパク質全量における５７ｋＤａタンパク質
の含有量；５．１重量％）投与群とコントロール実験と
してローヤルゼリー非投与のものも同様に実験を行っ
た。ローヤルゼリーの遊泳時間の延長に対する影響を測
定することにより、限界運動量増強作用（抗疲労作用）
を測定した。結果を表１に示す。ローヤルゼリー投与群
が遊泳時間を延長していることより、限界運動量が増強
されていることがわかる。又、この結果より、ローヤル
ゼリーとしては、５７ｋＤａのタンパクの含有量が高い
ものの方が好ましく、該タンパクの含有量としては、好
ましくは６重量％以上、更に好ましくは９重量％以上で
あることもわかる。

【００３５】

【表１】 ───────────────────────── 投与群 遊泳時間（分） ───────────────────────── コントロール １６：３５±６：３０ ローヤルゼリー ２２：２４±６：３０ 劣化ローヤルゼリー １６：２２±６：４２ ─────────────────────────

【００３６】＜実施例２〜４＞限界運動量増強剤として
ローヤルゼリー（ローヤルゼリー中のタンパク質全量に
おける５７ｋＤａタンパク質の含有量；１１．６重量
％）を用い、以下に示す処方に従って、医薬品を作成し
た。即ち、処方成分を１０重量部の水と共に転動相造粒
し、打錠して錠剤状の医薬品を得た。これらのものは何
れも優れた疲労回復効果を有していた。尚、表中の数値
の単位は重量部を表す。

【００３７】

【表２】 ──────────────────────────────────── 成分 実施例２ 実施例３ 実施例４ ──────────────────────────────────── 乳糖 ３２ ３２ ３２ デンプン ３５ ３０ ２５ 結晶セルロース １８ １８ １８ ヒドロキシプロピルメチルセルロース ９ ９ ９ ステアリン酸マグネシウム １ １ １ ローヤルゼリー ５ １０ １５ ────────────────────────────────────

【００３８】＜実施例５〜７＞限界運動量増強剤として
ローヤルゼリー（ローヤルゼリー中のタンパク質全量に
おける５７ｋＤａタンパク質の含有量；１１．６重量
％）を用い、以下に示す処方に従って、健康食品を作成
した。即ち、処方成分を撹拌可溶化しドリンク製剤の健
康食品を得た。これらのものは何れも優れた疲労回復効
果を有していた。尚、表中の数値の単位は重量部を表
す。

【００３９】

【表３】 ──────────────────────────────────── 成分 実施例５ 実施例６ 実施例７ ──────────────────────────────────── 水 ８４ ７９ ７４ イソオリゴ糖 １０ １０ １０ ビタミンＢ₆ ０．５ ０．５ ０．５ アスコルビン酸ナトリウム ０．５ ０．５ ０．５ ローヤルゼリー ５ １０ １５ ────────────────────────────────────

【００４０】

【発明の効果】本発明によれば、慢性疲労等の改善及び
予防をするのに好適な限界運動量増強剤を提供すること
が出来る。

【００４１】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> ポーラ化成工業株式会社 <120> 限界運動量増強剤 <130> P-6859 <140> <141>1999-12-15 <160> 3 <170> PatentIn Ver. 2.0

【００４２】 <210> １ <211> 25 <212> PRT <213> Apis mellifera <220> <221> UNSURE <222> (24) <223> Xaa=unkwnon <400> 1 Asn Ile Leu Arg Gly Glu Ser Leu Leu Lys Lys Leu Pro Ile Leu His 1 5 10 15 Glu Met Lys Phe Phe Asp Tyr Xaa Asp 20 25

【００４３】 <210> 2 <211> 1430 <212> DNA <213> Apis mellifera <220> <221> CDS <222> (46)..(1341) <220> <221> sig_peptide <222> (46)..(102) <220> <221> mat_peptide <222> (103)..(1341) <220> <221> UNSURE <222> (1134) <223> n=a or g or c or t <400> 2 ttcacgtaca atattccatt gcttcgttac tcgcagctta gaaaa atg aca aga ttg 57 Met Thr Arg Leu ttt atg ctg gta tgc ctt ggc ata gtt tgt caa ggt acg aca ggc aac 105 Phe Met Leu Val Cys Leu Gly Ile Val Cys Gln Gly Thr Thr Gly Asn -15 -10 -5 -1 1 att ctt cga gga gag tct tta aac aaa tca tta ccc atc ctt cac gaa 153 Ile Leu Arg Gly Glu Ser Leu Asn Lys Ser Leu Pro Ile Leu His Glu 5 10 15 tgg aaa ttc ttt gat tat gat ttc ggt agc gat gaa aga aga caa gat 201 Trp Lys Phe Phe Asp Tyr Asp Phe Gly Ser Asp Glu Arg Arg Gln Asp 20 25 30 gca att cta tct ggc gaa tac gac tac aag aat aat tat cca tcc gac 249 Ala Ile Leu Ser Gly Glu Tyr Asp Tyr Lys Asn Asn Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 att gac caa tgg cat gat aag att ttt gtc acc atg ctg aga tac aat 297 Ile Asp Gln Trp His Asp Lys Ile Phe Val Thr Met Leu Arg Tyr Asn 50 55 60 65 ggc gta cct tcc tct ttg aac gtg ata tct aaa aag gtc ggt gat ggt 345 Gly Val Pro Ser Ser Leu Asn Val Ile Ser Lys Lys Val Gly Asp Gly 70 75 80 ggt cct ctt cta caa cct tat ccc gat tgg tcg ttt gct aaa tat gac 393 Gly Pro Leu Leu Gln Pro Tyr Pro Asp Trp Ser Phe Ala Lys Tyr Asp 85 90 95 gat tgc tct gga atc gtg agc gcc tca aaa ctt gcg atc gac aaa tgc 441 Asp Cys Ser Gly Ile Val Ser Ala Ser Lys Leu Ala Ile Asp Lys Cys 100 105 110 gac aga ttg tgg gtt ctg gac tca ggt ctt gtc aat aat act caa ccc 489 Asp Arg Leu Trp Val Leu Asp Ser Gly Leu Val Asn Asn Thr Gln Pro 115 120 125 atg tgt tct cca aaa ctg ctc acc ttt gat ctg act acc tcg caa ttg 537 Met Cys Ser Pro Lys Leu Leu Thr Phe Asp Leu Thr Thr Ser Gln Leu 130 135 140 145 ctc aag caa gtt gaa ata cca cat gat gtt gcc gta aat gcc act aca 585 Leu Lys Gln Val Glu Ile Pro His Asp Val Ala Val Asn Ala Thr Thr 150 155 160 gga aag gga aga tta tca tct cta gct gtt caa tct tta gat tgc aat 633 Gly Lys Gly Arg Leu Ser Ser Leu Ala Val Gln Ser Leu Asp Cys Asn 165 170 175 aca aat agc gat act atg gtg tac ata gca gac gag aaa ggt gaa ggt 681 Thr Asn Ser Asp Thr Met Val Tyr Ile Ala Asp Glu Lys Gly Glu Gly 180 185 190 tta atc gtg tat cat aat tct gat gat tcc ttc cat cga ttg act tcc 729 Leu Ile Val Tyr His Asn Ser Asp Asp Ser Phe His Arg Leu Thr Ser 195 200 205 aac act ttc gat tac gat cct aaa ttt acc aaa atg acg atc gat gga 777 Asn Thr Phe Asp Tyr Asp Pro Lys Phe Thr Lys Met Thr Ile Asp Gly 210 215 220 225 gaa agt tac aca gcc caa gat gga att tct gga atg gct ctt agt ccc 825 Glu Ser Tyr Thr Ala Gln Asp Gly Ile Ser Gly Met Ala Leu Ser Pro 230 235 240 atg act aac aat ctc tat tac agt cct gta gct tcc acc agt ttg tat 873 Met Thr Asn Asn Leu Tyr Tyr Ser Pro Val Ala Ser Thr Ser Leu Tyr 245 250 255 tat gtt aac acg gaa caa ttc aga aca tcc gat tat caa cag aat gac 921 Tyr Val Asn Thr Glu Gln Phe Arg Thr Ser Asp Tyr Gln Gln Asn Asp 260 265 270 ata cat tac gaa gga gtc caa aat att ttg gat acc caa tcg tcc gct 969 Ile His Tyr Glu Gly Val Gln Asn Ile Leu Asp Thr Gln Ser Ser Ala 275 280 285 aaa gta gta tca aag agt ggc gtt ctc ttc ttc gga ttg gtg ggc gat 1017 Lys Val Val Ser Lys Ser Gly Val Leu Phe Phe Gly Leu Val Gly Asp 290 295 300 305 tca gct ctt ggc tgc tgg aac gaa cat cga aca ctt gaa aga cac aat 1065 Ser Ala Leu Gly Cys Trp Asn Glu His Arg Thr Leu Glu Arg His Asn 310 315 320 atc cgt acc gtc gct caa agt gat gag act ctt caa atg atc gct agc 1113 Ile Arg Thr Val Ala Gln Ser Asp Glu Thr Leu Gln Met Ile Ala Ser 325 330 335 atg aag att aag gaa gct ctn cca cac gtg cct ata ttc gat agg tat 1161 Met Lys Ile Lys Glu Ala Xaa Pro His Val Pro Ile Phe Asp Arg Tyr 340 345 350 ata aac cgt gaa tac ata ttg gtt tta agt aac aaa atg caa aaa atg 1209 Ile Asn Arg Glu Tyr Ile Leu Val Leu Ser Asn Lys Met Gln Lys Met 355 360 365 gtg aat aat gac ttc aac ttc gac gat gtt aac ttc aga att atg aac 1257 Val Asn Asn Asp Phe Asn Phe Asp Asp Val Asn Phe Arg Ile Met Asn 370 375 380 385 gcg aat gta aac gaa ttg ata ttg aac act cgt tgc gaa aat ccc gat 1305 Ala Asn Val Asn Glu Leu Ile Leu Asn Thr Arg Cys Glu Asn Pro Asp 390 395 400 aat gat cga aca cct ttc aaa att tca atc cat ttg taaaatctga 1351 Asn Asp Arg Thr Pro Phe Lys Ile Ser Ile His Leu 405 410 gttttttgtt atatattaaa tatttctcga aatttctttc cattatgaat gtataaaata 1411 aatattgttt tcgcataat 1430

【００４４】 <210> 3 <211> 432 <212> PRT <213> Apis mellifera <220> <221> UNSURE <222> (344) <223> Xaa=unkwnon <400> 3 Met Thr Arg Leu Phe Met Leu Val Cys Leu Gly Ile Val Cys Gln Gly -15 -10 -5 Thr Thr Gly Asn Ile Leu Arg Gly Glu Ser Leu Asn Lys Ser Leu Pro -1 1 5 10 Ile Leu His Glu Trp Lys Phe Phe Asp Tyr Asp Phe Gly Ser Asp Glu 15 20 25 Arg Arg Gln Asp Ala Ile Leu Ser Gly Glu Tyr Asp Tyr Lys Asn Asn 30 35 40 45 Tyr Pro Ser Asp Ile Asp Gln Trp His Asp Lys Ile Phe Val Thr Met 50 55 60 Leu Arg Tyr Asn Gly Val Pro Ser Ser Leu Asn Val Ile Ser Lys Lys 65 70 75 Val Gly Asp Gly Gly Pro Leu Leu Gln Pro Tyr Pro Asp Trp Ser Phe 80 85 90 Ala Lys Tyr Asp Asp Cys Ser Gly Ile Val Ser Ala Ser Lys Leu Ala 95 100 105 Ile Asp Lys Cys Asp Arg Leu Trp Val Leu Asp Ser Gly Leu Val Asn 110 115 120 125 Asn Thr Gln Pro Met Cys Ser Pro Lys Leu Leu Thr Phe Asp Leu Thr 130 135 140 Thr Ser Gln Leu Leu Lys Gln Val Glu Ile Pro His Asp Val Ala Val 145 150 155 Asn Ala Thr Thr Gly Lys Gly Arg Leu Ser Ser Leu Ala Val Gln Ser 160 165 170 Leu Asp Cys Asn Thr Asn Ser Asp Thr Met Val Tyr Ile Ala Asp Glu 175 180 185 Lys Gly Glu Gly Leu Ile Val Tyr His Asn Ser Asp Asp Ser Phe His 190 195 200 205 Arg Leu Thr Ser Asn Thr Phe Asp Tyr Asp Pro Lys Phe Thr Lys Met 210 215 220 Thr Ile Asp Gly Glu Ser Tyr Thr Ala Gln Asp Gly Ile Ser Gly Met 225 230 235 Ala Leu Ser Pro Met Thr Asn Asn Leu Tyr Tyr Ser Pro Val Ala Ser 240 245 250 Thr Ser Leu Tyr Tyr Val Asn Thr Glu Gln Phe Arg Thr Ser Asp Tyr 255 260 265 Gln Gln Asn Asp Ile His Tyr Glu Gly Val Gln Asn Ile Leu Asp Thr 270 275 280 285 Gln Ser Ser Ala Lys Val Val Ser Lys Ser Gly Val Leu Phe Phe Gly 290 295 300 Leu Val Gly Asp Ser Ala Leu Gly Cys Trp Asn Glu His Arg Thr Leu 305 310 315 Glu Arg His Asn Ile Arg Thr Val Ala Gln Ser Asp Glu Thr Leu Gln 320 325 330 Met Ile Ala Ser Met Lys Ile Lys Glu Ala Xaa Pro His Val Pro Ile 335 340 345 Phe Asp Arg Tyr Ile Asn Arg Glu Tyr Ile Leu Val Leu Ser Asn Lys 350 355 360 365 Met Gln Lys Met Val Asn Asn Asp Phe Asn Phe Asp Asp Val Asn Phe 370 375 380 Arg Ile Met Asn Ala Asn Val Asn Glu Leu Ile Leu Asn Thr Arg Cys 385 390 395 Glu Asn Pro Asp Asn Asp Arg Thr Pro Phe Lys Ile Ser Ile His Leu 400 405 410

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 三谷 信 神奈川県横浜市戸塚区柏尾町560 ポーラ 化成工業株式会社戸塚研究所内 (72)発明者 宮崎 博隆 神奈川県横浜市戸塚区柏尾町560 ポーラ 化成工業株式会社戸塚研究所内 Ｆターム(参考） 4B018 LB08 MD76 ME14 4B041 LC10 LD06 LE08 LK40 4C084 AA02 AA18 BA01 BA08 BA22 BA23 CA49 MA52 NA14 ZC211 ZC212 4C087 AA01 AA02 BB22 CA16 CA33 CA44 MA52 NA14 ZC21

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 限界運動量増強作用を有するローヤルゼ
   リー中のタンパク質を有効成分として含有する限界運動
   量増強剤。
2. 【請求項２】 前記タンパク質が下記の性質で特定され
   るタンパク質である請求項１記載の限界運動量増強剤。 （ａ）ローヤルゼリー中のタンパク質の非変性ポリアク
   リルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを形成す
   る。 （ｂ）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
   電気泳動により測定される分子量：約５７ｋＤａ。
3. 【請求項３】 前記タンパク質が、トーソー株式会社製
   ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷ（７．５×３０ｃｍ）をカラ
   ムとして用いて、０．３Ｍ塩化ナトリウム、０．０５％
   アジ化ナトリウム含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．
   ０）を展開液とし、流速を０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム
   温度を３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出す
   る、高速液体クロマトグラフィーにおいて、保持時間２
   ５分〜３０分にピークを有するタンパク質である、請求
   項１又は２に記載の限界運動量増強剤。
4. 【請求項４】 前記タンパク質が、配列番号１のアミノ
   酸番号１〜８のアミノ酸配列を含むことを特徴とする請
   求項１〜３のいずれか一項に記載の限界運動量増強剤。
5. 【請求項５】 前記タンパク質を含有するローヤルゼリ
   ーを含むことを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項
   に記載の限界運動量増強剤。
6. 【請求項６】 前記ローヤルゼリー中の全タンパク質に
   おける前記タンパク質の含有率が６重量％以上であるこ
   とを特徴とする請求項５に記載の限界運動量増強剤。
7. 【請求項７】 請求項１〜６のいずれか一項に記載の限
   界運動量増強剤を含む医薬。
8. 【請求項８】 請求項１〜６のいずれか一項に記載の限
   界運動量増強剤を含む食品。