JP2001081415A - コラーゲンのα鎖の分離方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 コラーゲン、ゼラチン及びそれらの加水分解
物に含まれる、α１鎖成分とα２鎖成分またはそのフラ
グメントを分離し、実用的に分取する方法を提供するこ
と。 【解決課題】 変性コラーゲンまたはゼラチンを非イオ
ン性高分子または蛋白質変性剤および陰イオン界面活性
剤を用いて処理することを特徴とするコラーゲンまたは
ゼラチンのα１鎖とα２鎖との分離方法、または変性コ
ラーゲンまたはゼラチンの加水分解物を非イオン性高分
子または蛋白質変性剤および陰イオン界面活性剤を用い
て処理することを特徴とするコラーゲンまたはゼラチン
加水分解物由来のα１鎖フラグメントとα２鎖フラグメ
ントとの分離方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はコラーゲンまたはゼ
ラチンの構成成分鎖を分離する方法に関し、また、コラ
ーゲンまたはゼラチンの単一種類の構成成分鎖からなる
分離物の製造技術に関する。さらに、本発明は、コラー
ゲンまたはゼラチンの単一構成成分分離物のみまたは殆
ど単一構成成分を含む変性コラーゲンまたはゼラチン分
離物に関する。

【０００２】

【従来の技術】コラーゲンまたはゼラチンのポリペプチ
ド鎖は３本鎖（α１鎖が２本、α２鎖が１本）からな
り、これらの分別は、従来、液体クロマトグラフ法やア
ルコールと硫安による沈殿法が知られているが、これら
は主として分子量による分別である。これらはポリペプ
チド鎖を分離する方法であるが、分子量差による分離で
あり、α１鎖成分とα２鎖成分の分離は出来ない。

【０００３】コラーゲンまたはゼラチンのα１鎖成分と
α２鎖成分は基本的に殆ど同じＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｘのア
ミノ酸シーケンスを持つポリペプチドで、アミノ酸組成
の差も小さいため、分子量や等電点などの基本特性の違
いは極僅かであり、分離は非常に困難となっている。蛋
白質の分離方法として、ポリエチレングリコール（ＰＥ
Ｇと略すことがある）−デキストラン系の様な高分子の
二相分離を利用した分配法が用いられるが、コラーゲン
の鎖分離には成功していない。

【０００４】α１鎖成分とα２鎖成分との分離は通常は
電気泳動、特にドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳと略す
ることがある）を用いた、ポリアクリルアミドゲル電気
泳動により行われるが、これらの方法は分析用であり、
分離した物を分取できない。又、分離能を低くした調製
用のゲル電気泳動装置を用いても、処理量は多くてmgの
オーダーであり、実用的分取法として使用することはで
きない。このため、従来はコラーゲンまたはゼラチンの
ポリペプチド鎖のα１鎖成分とα２鎖成分を分取し、こ
れらの成分を含む何らかの製品を作る考えは存在せず、
分取の試みもなかった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明が解決しようと
する課題は、コラーゲン、ゼラチン及びそれらの加水分
解物に含まれる、α１鎖成分とα２鎖成分またはそのフ
ラグメントを分離し、実用的に分取する方法を提供する
ことにある。

【０００６】さらに本発明の課題は、α２鎖成分を含ま
ないか、極めて少ししか含まないα１鎖成分を実用的に
得る方法を提供すること、およびα１鎖成分のフラグメ
ントを得る方法を提供することにある。

【０００７】また、本発明の課題は、これらのα１鎖等
に分離した変性コラーゲン、ゼラチンまたはポリぺプチ
ドの分離物を実用的必要量を充分満たす程度の量で得る
方法を提供することにある。

【０００８】さらに、本発明の課題は、これらの有用物
質を安価に製造する方法を提供することにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは鋭意研究の
結果、ＳＤＳのような陰イオン界面活性剤とＰＥＧよう
な非イオン性高分子または尿素のような蛋白質変性剤を
共存させて、変性コラーゲンまたはゼラチンを処理する
ことにより、コラーゲンまたはゼラチンのα１鎖成分と
α２鎖成分を分離し、実用的量を分取することに成功
し、本発明を完成した。さらに、この分離方法は、変性
コラーゲンまたはゼラチンの加水分解物であって、α鎖
成分を有することが認められるものにも応用できること
も見いだした。

【００１０】したがって、本発明は、変性コラーゲンま
たはゼラチンを非イオン性高分子または蛋白質変性剤お
よび陰イオン界面活性剤を用いて処理することを特徴と
するコラーゲンまたはゼラチンのα１鎖とα２鎖との分
離方法にある。

【００１１】さらに、本発明は変性コラーゲンまたはゼ
ラチンの加水分解物を非イオン性高分子または蛋白質変
性剤および陰イオン界面活性剤を用いて処理することを
特徴とするコラーゲンまたはゼラチン加水分解物由来の
α１鎖フラグメントとα２鎖フラグメントとの分離方法
にある。

【００１２】以下に本発明の内容を説明するが、本発明
はここに例示したものに限定されない。コラーゲンまた
はゼラチンのα鎖の分離はポリアクリルアミドゲル電気
泳動と同様にＳＤＳ溶液を添加することにより可能とな
るが、α２鎖の沈殿の中にα１鎖成分が含まれ、α１鎖
の上澄みの中にα２鎖成分が含まれるために完全な分離
には至らない。

【００１３】本発明者らは非イオン性高分子または蛋白
質変性剤を添加しておくことにより、この分離が完全に
なることを見出した。また、本発明者らは電気泳動によ
る分離はゲル中でのみ行われるが、非イオン性高分子ま
たは蛋白質変性剤を添加すると液中での相分離に於いて
もこの分離が可能であることを見出した。電気泳動では
ゲル中から目的物を含む部分を切り取り、抽出する必要
があるため操作が非常に煩雑となり、殆ど実施されてい
なく、さらに、得られる量もμｇのオーダーであり実用
的でない。これに対し、本発明は簡便で、大量に処理可
能で、電気泳動のような分析的方法と全く異なる実用的
な分離方法である。

【００１４】本発明の方法は、原料の変性コラーゲンま
たはゼラチン溶液に、非イオン性高分子または蛋白質変
性剤の存在下に陰イオン界面活性剤を作用させてα２鎖
を沈殿させる、または陰イオン界面活性剤と非イオン性
高分子または蛋白質変性剤とを同時に作用させてα２鎖
を沈殿させるのいずれの方法でも良い。現在のところ、
非イオン性高分子または蛋白質変性剤の存在下に陰イオ
ン界面活性剤を作用させてα２鎖を沈殿させる方法が、
分離の程度と回収率が最も良い。上記の作用は、α２鎖
の沈殿反応が完全に終了するが、ゼラチン全体が沈殿し
ないような量で行う。

【００１５】原理に拘束されるものではないが、本発明
は負荷電を持つ陰イオン界面活性剤がα２鎖と優先的に
結合し、非イオン性高分子または蛋白質変性剤を予めま
たは同時に添加することにより、ゼラチン鎖の選択性を
促進させるものと思われる。

【００１６】本発明の原料となる変性コラーゲンは、コ
ラーゲンを熱、酵素及び変性剤その他の薬剤により変性
乃至分別して得た変性コラーゲンを使用することが出来
る。また、コラーゲンを変性して得た物で、商用ゼラチ
ン以外のものを変性コラーゲンと称する。

【００１７】本発明の原料となるゼラチンは、コラーゲ
ンからゼラチン製造工程を経て得られた全てのゼラチン
を使用することができ、アルカリ法ゼラチン、酸性法ゼ
ラチン等の工程によるゼラチンの種類を問わない。又、
骨原料、皮原料等の原料依存性も持たない。

【００１８】変性コラーゲンまたはゼラチンの原料とな
るコラーゲンは、生体の硬組織の主成分となる蛋白質
で、3本のα鎖がヘリックスをなす構造を持っている。
本発明においては、コラーゲンには生体原料からの製造
に当たり、酵素、アルカリ、酸、または塩で可溶化した
全ての種類のコラーゲンを使用することができる。原料
には各種生物の骨または皮等の硬組織が利用可能であ
り、使用するコラーゲンは原料及び組織依存性を持たな
い。

【００１９】本発明においては、コラーゲンまたはゼラ
チン加水分解物にはコラーゲンまたはゼラチンを酸、ア
ルカリ及び酵素等により加水分解したものを使用するこ
とができる。ただし、この加水分解物はα鎖の分離が必
要な程度までα鎖構成成分を残存するものである。また
加水分解物は、その構成成分について言及する場合は
「ポリペプチド」と、分解状態について言及する場合は
「フラグメント」と称するが、これらは全てコラーゲン
を構成するα鎖の加水分解物であり、基本的には同義で
ある。

【００２０】本発明においては、原料となるコラーゲ
ン、ゼラチン及び変性コラーゲンをα鎖のみからなるよ
うに、またはα鎖を非常に多く含むように前処理をする
ことが好ましい。前処理はコラーゲン、ゼラチン及び変
性コラーゲンの製造工程の適当な工程において可能であ
り、処理方法は当業界で公知の処理方法の全てを採用で
きる。例えば、コラーゲンの可溶化に酵素、アルカリ、
酸、または塩を使用できるが、アルカリ処理により分子
鎖末端のテロペプチド部分にある架橋を切断することが
好ましい。又、ゼラチン及び変性コラーゲンは限外濾
過、分別沈殿等によりα鎖のダイマー及びオリゴマーを
除去することができるが、精製法はこれらの例に限定さ
れるものではない。

【００２１】本発明においては、非イオン性高分子は、
非イオン界面活性剤、ビニル化合物、セルロース誘導
体、多糖類等が使用可能であるが、非イオン性水溶性高
分子が好ましい。非イオン性高分子には、例えば、ＰＥ
Ｇ、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン脂
肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリビニル
アルコール、ポリビニルピロリドン、ＣＭＣ、デキスト
ラン等があり、最も好ましくはＰＥＧが選ばれる。非イ
オン性高分子の分子量はα鎖を分離できればどのような
ものでもよいが、例えば、２００〜５００００程度であ
る。非イオン性高分子の使用量は、α鎖を分離できれば
どのような量でもよいが、分離液全体を基準にして重量
％で０．０１％〜１０％程度の含有量である。例えば、
ＰＥＧの場合、分子量は低分子量の物でも効果がある
が、分子量が大きい程効果も大きくなる。しかし、ＰＥ
Ｇは分子量が大きくなると粘度が高くなって固化するた
め、ＰＥＧの分子量は実用的には２００〜１００００程
度、好ましくは４００〜４０００程度、最も好ましくは
１０００〜２０００程度が選ばれる。分離液中のＰＥＧ
の濃度に制限はないが、濃過ぎるとゼラチンが沈殿する
ため、実用的には重量％で０．０１〜１０％程度、好ま
しくは０．０５〜２％程度、最も好ましくは０.１〜０.
５％が選ばれる。使用できるＰＥＧは市販の非イオン界
面活性剤のグレードで良いが、分取する製品の用途によ
り、精製品または低級品の何れでも使用可能である。

【００２２】本発明において蛋白質変性剤には尿素、グ
アニジン塩酸塩等が使用可能であるが、好ましくは尿素
が選ばれる。蛋白質変性剤の使用量は、α鎖を分離でき
ればどのような量でもよいが、分離液全体での濃度で
０．００１モル濃度〜１２モル濃度が好ましい。例え
ば、尿素の場合、その濃度に制限はないが、高濃度過ぎ
るとゼラチン全体が沈殿するため０.００１モル濃度〜
８モル濃度、好ましくは０．０５モル濃度〜２モル濃
度、最も好ましくは０．０１モル濃度〜１モル濃度が選
ばれる。

【００２３】本発明においては、陰イオン界面活性剤
は、アルキル硫酸塩、アルキルスルホン酸塩、リン酸塩
及び他の陰イオン界面活性剤が使用可能であるが、好ま
しくはＳＤＳ、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム
等、最も好ましくはＳＤＳが選ばれる。陰イオン界面活
性剤の使用量は、分離して得る目的のα１鎖またはα２
鎖の純度に依存して決定される。α１鎖の純度を上げる
目的の場合は、α２鎖の沈殿反応が完全に終了するまで
添加される。例えば、ＳＤＳを使用する場合、添加する
ＳＤＳの溶液濃度に制限はないが、重量％で１〜２０％
程度、好ましくは５〜１０％溶液が選ばれる。ＳＤＳ
は、分取する製品の用途により、市販の陰イオン界面活
性剤及び工業薬品グレードで使用可能である。

【００２４】本発明に用いる変性コラーゲンまたはゼラ
チン原料溶液の濃度に制限はないが、重量を基準に０．
５〜１５％、好ましくは１〜５％が選ばれる。これらの
溶液のｐＨはゼラチンの等電点以下であれば良いが、ｐ
Ｈ２〜８．５、アルカリ処理コラーゲン及びゼラチンで
は好ましくはｐＨ３〜６、最も好ましくはＨ３.５〜４.
５が選ばれる。溶液の温度に制限はなく、常温で良い
が、コラーゲンの場合は可溶化し、予め変性温度以上で
変性させる必要がある。

【００２５】変性コラーゲンまたはゼラチンを加水分解
して得たα１鎖またはα２鎖由来のフラグメントからな
るポリペプチドは、変性コラーゲンまたはゼラチンを本
発明の方法を使用してα１鎖成分とα２鎖成分を分離し
た後、通常の方法で分解して得ることが望ましい。この
場合、分解方法は蛋白質分解酵素、酸及びアルカリによ
り常法に従って分解し、分子量を目的とする値に制御す
る。酵素、酸及びアルカリは通常使用されている物全て
が適用可能であり、特別な仕様を必要としない。一方、
α鎖構成成分が残存している分子量が1万以上である比
較的高分子の変性コラーゲンまたはゼラチンの加水分解
物については、市販の加水分解物または目的の分子量に
分解した加水分解物を原料にしてα１鎖由来成分とα２
鎖由来成分を分離することにより得ることも可能であ
る。この場合の分解方法も、蛋白質分解酵素、酸及びア
ルカリによる常法に従って実施することが出来る。

【００２６】本発明の分離法は純粋な変性コラーゲン、
ゼラチンまたはその加水分解物水溶液に対して実施され
るが、必要に応じて添加物を加えた状態及び溶媒を変更
した場合においても、添加物の組み合わせにより同様の
分離効果を得ることができる場合には適用される。

【００２７】本発明により得られた分離物はゼラチンの
有用特性であるゼリー強度が大幅に改善されたゼラチン
を供給する。この物性改善により、本ゼラチンはハード
カプセル用ゼラチン及び写真用ゼラチンとしての利用が
期待できる。

【００２８】

【実施例】（実施例１） （１）４０℃の１％アルカリ法牛皮ゼラチン溶液２０ｍ
ｌをビーカーにとり、０.２％ポリエチレングリコール
溶液（平均分子量１５４０：和光純薬）２０ｍｌと混合
した後、この液を１Ｎ塩酸でｐＨ３.８に調整した。こ
の液に１０％ＳＤＳ（分析溶試薬を使用）溶液を少量ず
つ添加し、液が白濁した後、この第一段目の白濁が一定
になったところで添加を終えた。このまま添加を続ける
と、ゼラチン全体が沈殿し、分離が不可能となる。使用
したＳＤＳ溶液の量は約０．１６ｍｌであった。白濁し
た溶液を遠心分離器にセットし、温度２５℃、回転数１
９０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した後、上澄みと沈
殿を分離した。約４０ｍｌの上澄み液にエタノール８ｍ
ｌを加え、ロータリーエバポレータで約２０ｍｌにまで
濃縮した。濃縮液に４０ｍｌのアセトンを加え、沈殿を
生じさせた。この懸濁液を前と同一条件で遠心分離器に
かけ、ゼラチンの沈殿を得た。沈殿を４０℃の蒸留水２
０ｍｌに再溶解し、室温に冷却した後、４０ｍｌのアセ
トンで再沈殿させ、遠心分離により精製したゼラチン得
た。ゼラチンは再度４０℃の蒸留水２０ｍｌに溶解した
後、凍結乾燥して保存し、分析した。この製品の回収率
は２３％であった。

【００２９】図１にＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）による分析結果を示し
た。この分析は「コラーゲン実験法」永井裕・藤本大三
郎編講談社サイエンティフィック（１９８６）に従って
実施した。比較例として無処理の市販アルカリ法ゼラチ
ンを同時に泳動した。図１より、分離した上澄みは殆ど
α１鎖成分から成っていることが分かる。 （２）ＳＤＳ溶液の使用量を０．１０ｍｌとした以外
は、実施例１（１）と同様にして分離し、ＳＤＳで沈殿
したゼラチンを凍結保存し、分析した。図２にその分析
結果を示した。沈殿は殆どα２鎖成分から成っている事
が確認できる。 （実施例２）平均分子量４０００のポリエチレングリコ
ール(和光純薬)を用いて、実施例１と同様に分離を行っ
た。図３にＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析結果を示した。
この図から分かるように、上澄みは殆どα１鎖成分から
成っていた。 （実施例３）特公昭４６−１５０３３号公報に記載され
ている方法により製造したアルカリ可溶化コラーゲン１
０ｇを６０℃の蒸留水ｌリットルに溶解した。変性を確
実にするために６０℃で更に３０分保持した。この溶液
から５ｍｌを分取し、パギイ法（写真用ゼラチン試験
法）に従って分子量分布を測定し、α鎖成分が８０％以
上あることを確認した。別に、前記変性コラーゲン溶液
から２００ｍｌをビーカーに分取し、０.２％ポリエチ
レングリコール溶液（平均分子量１５４０）２００ｍｌ
と混合した。以後の処理を実施例１と同様に操作し、５
回の分離を併せて５．５ｇの上澄みの乾燥α１成分を得
た。図４から分かるように、本製品は殆どα１鎖成分か
ら成っている。 （実施例４）市販のアルカリ法骨ゼラチン２００ｇを５
リットルのビーカーにとり、４リットルの水を加えて膨
潤後、６０℃で溶解して、５％のゼラチン溶液を得た。
この溶液を５％塩酸でｐＨ３に調整した後、８５℃で５
時間加水分解した。この加水分解物から少量のサンプル
を採り、パギイ法（写真用ゼラチン試験法）に従って分
子量分布を測定し、重量平均分子量３万の値を得た。こ
の溶液を陽イオン交換樹脂ＳＫ１Ｂ（日本錬水製）、陰
イオン交換樹脂ＳＡ１０Ａ（日本錬水製）の各５０ｍｌ
に通液した後、蒸留水で２倍に希釈した。

【００３０】本溶液から２００ｍｌを分取し、１Ｎ塩酸
でｐＨ３．５に調整後、実施例１と同様にして処理し
た。但し、ＰＥＧは０．５％溶液のもの８０ｍｌを使用
した。図４に分離した上澄みから得た変性コラーゲンの
ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析結果を示した。図４より、
本製品は殆どα１鎖成分から成っていることが分かる。 （実施例５）４０℃の４％アルカリ法牛皮ゼラチン溶液
１００ｍｌをビーカーにとり、１０％ポリプロピレング
リコールトリオール７００（和光純薬）の溶液を２ｍｌ
加えた。この液を１Ｎ塩酸でｐＨ３.８に調整した。こ
の液に１０％ＳＤＳ溶液を液が白濁するまで少量ずつ添
加した。白濁した溶液を実施例１に従って処理した。こ
の製品の回収率は１８％であった。図４に分離した上澄
みから得た変性コラーゲンのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分
析結果を示した。図４より、本製品は殆どα１鎖成分か
ら成っていることが分かる。 （実施例６）４０℃の１％アルカリ法牛皮ゼラチン溶液
１００ｍｌをビーカーにとり、１０％ポリプロピレング
リコールトリオール３０００（和光純薬）の溶液を１ｍ
ｌ加えた。この液を１Ｎ塩酸でｐＨ３.８に調整した。
この液に１０％ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム
溶液を液が白濁するまで少量ずつ添加した。白濁した溶
液を実施例１に従って処理した。図４に分離した上澄み
から得た変性コラーゲンのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析
結果を示した。図４より、本製品は殆どα１鎖成分から
成っていることが分かる。 （実施例７）実施例３に従い、アルカリ可溶化コラーゲ
ンから１％の変性コラーゲン溶液を１リットル作った。
この溶液から各２００ｍｌを４個のビーカーに分取し、
各液が尿素の１モル、０.５モル、０．１モル及び０．
０１モル溶液になるように尿素を添加した。この各液に
１０％ＳＤＳ溶液を少量ずつ添加し、液が白濁した後、
この第一段の白濁が完全に終了するところまで添加を続
けた。以後の処理を実施例１と同様に操作し、４個の上
澄みの乾燥品を得た。図５から、これらの製品は殆どα
１鎖成分から成っていることが分かる。 （実施例８）４０℃の１％アルカリ法牛皮ゼラチン溶液
１００ｍｌをビーカーにとり、１０％ポリビールアルコ
ール１０００（和光純薬）の溶液を２ｍｌ加えた。この
液を１Ｎ塩酸でｐＨ３.８に調整した。この液に１０％
ＳＤＳ溶液を液が白濁するまで少量ずつ添加した。白濁
した溶液を実施例１に従って処理した。この製品の回収
率は１５％であった。図４に分離した上澄みから得た変
性コラーゲンのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析結果を示し
た。図４より、本製品は殆どα１鎖成分から成っている
ことが分かる。 （実施例９）４０℃の１％アルカリ法牛皮ゼラチン溶液
１００ｍｌをビーカーにとり、１５％デキストラン（和
光純薬）の溶液を１ｍｌ加えた。この液を２Ｎ塩酸でｐ
Ｈ３.８に調整した。この液に１０％ドデシルベンゼン
スルホン酸ナトリウム溶液を液が白濁するまで少量ずつ
添加した。白濁した溶液を実施例１に従って処理した。
図４に分離した上澄みから得た変性コラーゲンのＳＤＳ
−ＰＡＧＥによる分析結果を示した。図４から、本製品
は殆どα１鎖成分から成っていることが分かる。

【００３１】

【発明の効果】本発明の方法により、コラーゲン、ゼラ
チンおよびそれらの加水分解物に含まれるα鎖構成成分
のα１鎖成分とα２鎖成分またはそのフラグメントを実
用的規模で分離でき、純度の高いα１鎖またはα２鎖ま
たはそれらのフラグメントを大量に得ることができる。
これにより、これらの分離物を大量に提供できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ゼラチンを本発明の方法により分離した上澄み
分離物の分析結果を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動写真
である。

【図２】ゼラチンを本発明の方法により分離したＳＤＳ
沈殿分離物の分析結果を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動
写真である。

【図３】ゼラチンを平均分子量４０００のＰＥＧを使用
した本発明の方法により分離した上澄み分離物の分析結
果を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動写真である。

【図４】種々の変性コラーゲンまたはゼラチンまたは加
水分解物を種々の非イオン性高分子および種々の陰イオ
ン界面活性剤を用いて本発明の方法により分離した上澄
み分離物の分析結果を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動写
真である。

【図５】変性コラーゲンを種々の濃度の尿素を用いて本
発明の方法により分離した上澄み分離物の分析結果を示
すＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動写真である。

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 変性コラーゲンまたはゼラチンを非イオ
   ン性高分子または蛋白質変性剤および陰イオン界面活性
   剤を用いて処理することを特徴とするコラーゲンまたは
   ゼラチンのα１鎖とα２鎖との分離方法。
2. 【請求項２】 変性コラーゲンまたはゼラチンの加水分
   解物を非イオン性高分子または蛋白質変性剤および陰イ
   オン界面活性剤を用いて処理することを特徴とするコラ
   ーゲンまたはゼラチン加水分解物由来のα１鎖フラグメ
   ントとα２鎖フラグメントとの分離方法。
3. 【請求項３】 前記非イオン性高分子がポリエチレング
   リコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアル
   コール、デキストランまたはそれらの混合物から選択さ
   れ、蛋白質変性剤が尿素または塩酸グアニジンから選択
   され、陰イオン界面活性剤がドデシル硫酸ナトリウムま
   たはドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムから選択さ
   れる請求項１または２に記載の分離方法。
4. 【請求項４】 前記非イオン性高分子がポリエチレング
   リコールであり、蛋白質変性剤が尿素であり、陰イオン
   界面活性剤がドデシル硫酸ナトリウムである請求項３に
   記載の方法。
5. 【請求項５】前記ポリエチレングリコールの分子量が２
   ００〜１００００である請求項１〜４のいずれかに記載
   の方法。
6. 【請求項６】 一方の分離物の構成成分が主としてコラ
   ーゲンまたはゼラチンのα１鎖を含む請求項１、３、４
   または５のいずれかに記載の分離方法。
7. 【請求項７】 他方の分離物の構成成分が主としてコラ
   ーゲンまたはゼラチンのα２鎖を含む請求項１、３、４
   または５のいずれかに記載の分離方法。
8. 【請求項８】 一方の分離物の構成成分が主として変性
   コラーゲンまたはゼラチン加水分解物由来のα１鎖フラ
   グメントを含む請求項２、３、４または５のいずれかに
   記載の分離方法。
9. 【請求項９】 他方の分離物の構成成分が主として変性
   コラーゲンまたはゼラチン加水分解物由来のα２鎖フラ
   グメントを含む請求項２、３、４または５のいずれかに
   記載の分離方法。
10. 【請求項１０】 請求項６記載の分離物をさらに加水分
    解して変性コラーゲンまたはゼラチンのα１鎖由来のフ
    ラグメントを得る方法。
11. 【請求項１１】 請求項７記載の分離物をさらに加水分
    解して変性コラーゲンまたはゼラチン由来のα２鎖フラ
    グメントを得る方法。