JP2001061468A - 油脂分分解性桿菌およびそれを用いた排水処理プロセス - Google Patents
油脂分分解性桿菌およびそれを用いた排水処理プロセスInfo
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- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
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- C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
- C02F3/343—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used for digestion of grease, fat, oil
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
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- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
Abstract
(57)【要約】
【課題】 油脂分を含む排水を分解する能力に優れた微
生物およびプロセスを提供する。 【解決手段】 完全培地において、少なくとも３０゜Ｃ
における世代時間が３０分以下であるような増殖速度を
示す桿菌であって、好気条件下で油脂分を分解する桿
菌。
生物およびプロセスを提供する。 【解決手段】 完全培地において、少なくとも３０゜Ｃ
における世代時間が３０分以下であるような増殖速度を
示す桿菌であって、好気条件下で油脂分を分解する桿
菌。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は排水処理の分野に関
する。より詳細には、油脂分を含む排水を浄化する能力
に優れた微生物、およびこれを用いた排水処理プロセス
に関する。
する。より詳細には、油脂分を含む排水を浄化する能力
に優れた微生物、およびこれを用いた排水処理プロセス
に関する。
【０００２】
【従来の技術】食堂、ハンバーガーショップなどの厨房
排水、食品工場排水には、油脂分が多く含まれ、その浄
化プロセスには、通常「グリーストラップ」と呼ばれる
油脂分を補足するための水槽が組み込まれている。グリ
ーストラップに補足された排水中の油脂分は、その大部
分が、グリーストラップ中の液面に半固形状物質として
浮遊し、夏期には腐敗して悪臭の原因となり、冬期には
固化して浄化プロセスの稼動を妨げる。液面に蓄積した
半固形状物質は、通常、バキュームにより吸引除去され
ていた。
排水、食品工場排水には、油脂分が多く含まれ、その浄
化プロセスには、通常「グリーストラップ」と呼ばれる
油脂分を補足するための水槽が組み込まれている。グリ
ーストラップに補足された排水中の油脂分は、その大部
分が、グリーストラップ中の液面に半固形状物質として
浮遊し、夏期には腐敗して悪臭の原因となり、冬期には
固化して浄化プロセスの稼動を妨げる。液面に蓄積した
半固形状物質は、通常、バキュームにより吸引除去され
ていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来の方法では、上記
半固形状物質を定期的に抜き取る必要がある上に、抜き
取った油脂成分をさらに処理する必要があった。
半固形状物質を定期的に抜き取る必要がある上に、抜き
取った油脂成分をさらに処理する必要があった。
【０００４】本発明は、油脂分を含む排水を浄化する能
力に優れた微生物、およびこれを用いた排水処理プロセ
スを提供することより、上述の問題点を取り除くことを
目的とする。
力に優れた微生物、およびこれを用いた排水処理プロセ
スを提供することより、上述の問題点を取り除くことを
目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、完全培地にお
いて、３０℃における世代時間が３０分以下であるよう
な増殖速度を示す桿菌であって、好気条件下で油脂分を
分解する桿菌に関する。
いて、３０℃における世代時間が３０分以下であるよう
な増殖速度を示す桿菌であって、好気条件下で油脂分を
分解する桿菌に関する。
【０００６】上記桿菌は、プロテアーゼ、セルラーゼ、
アミラーゼ、リパーゼ、および生物系界面活性剤からな
る群から選択される、油脂分分解促進物質を生産し得
る。
アミラーゼ、リパーゼ、および生物系界面活性剤からな
る群から選択される、油脂分分解促進物質を生産し得
る。
【０００７】好ましくは、上記桿菌は、生物系界面活性
剤を生産する。
剤を生産する。
【０００８】上記桿菌は、アミラーゼおよびリパーゼ、
セルラーゼ、またはプロテアーゼおよびアミラーゼを生
産し得る。
セルラーゼ、またはプロテアーゼおよびアミラーゼを生
産し得る。
【０００９】好ましくは、上記桿菌は、バチルス・ズブ
チリス FERM P−17512号、またはバチルス・ズブチリス
FERM P−17513号ある。
チリス FERM P−17512号、またはバチルス・ズブチリス
FERM P−17513号ある。
【００１０】１つの局面で、本発明は、上記桿菌を含む
微生物剤と、該微生物剤に酸素を供給する手段とを備え
た、排水処理プロセスに関する。
微生物剤と、該微生物剤に酸素を供給する手段とを備え
た、排水処理プロセスに関する。
【００１１】上記微生物剤は、少なくとも２種以上の桿
菌を含み得る。
菌を含み得る。
【００１２】
【発明の実施の形態】本発明は、油脂分を含む排水を浄
化する能力に優れた微生物および微生物剤を提供するこ
とにより、油脂分の分解効率の高い排水処理プロセスを
提供する。本発明の微生物は、種々の天然の供給源に由
来し得、土壌、湖沼水、汚泥などの供給源から分離され
得る。特に、本発明者らは、岩石中にも微生物が存在す
ることを見出して本発明を完成するに至った。本発明の
微生物は、好ましくは、岩石を粉砕して得た粉末を、通
常の微生物の分離手法に従って、微生物の生育に必要な
栄養素を含む完全培地で培養して本発明の油脂分を含む
排水を浄化する能力に優れた微生物を分離する。完全培
地には、必要に応じて油脂分を添加して、本発明の微生
物の分離効率を向上させ得る。
化する能力に優れた微生物および微生物剤を提供するこ
とにより、油脂分の分解効率の高い排水処理プロセスを
提供する。本発明の微生物は、種々の天然の供給源に由
来し得、土壌、湖沼水、汚泥などの供給源から分離され
得る。特に、本発明者らは、岩石中にも微生物が存在す
ることを見出して本発明を完成するに至った。本発明の
微生物は、好ましくは、岩石を粉砕して得た粉末を、通
常の微生物の分離手法に従って、微生物の生育に必要な
栄養素を含む完全培地で培養して本発明の油脂分を含む
排水を浄化する能力に優れた微生物を分離する。完全培
地には、必要に応じて油脂分を添加して、本発明の微生
物の分離効率を向上させ得る。
【００１３】本発明の微生物は、代表的には、グラム陽
性の桿状形態の一群の細菌であって、特に、その優れた
増殖速度により既存の微生物と区別され得る。本発明の
微生物は完全培地において、３０℃における世代時間が
３０分以下であるような増殖速度を示す示すことによっ
て特徴付けられる。
性の桿状形態の一群の細菌であって、特に、その優れた
増殖速度により既存の微生物と区別され得る。本発明の
微生物は完全培地において、３０℃における世代時間が
３０分以下であるような増殖速度を示す示すことによっ
て特徴付けられる。
【００１４】ここで、完全培地とは、微生物の生育に必
要な、炭素源、窒素源、ビタミン類、微量金属などをす
べて含む培地をいい、代表的には、以下の成分を含む微
生物培養基を含む：０．５％の酵母エキス、１％のペプ
トン、０．５％のＮａＣｌ。
要な、炭素源、窒素源、ビタミン類、微量金属などをす
べて含む培地をいい、代表的には、以下の成分を含む微
生物培養基を含む：０．５％の酵母エキス、１％のペプ
トン、０．５％のＮａＣｌ。
【００１５】本明細書で用いる用語「油脂分」とは、特
に他に記載がなければ、環境庁告示第６４号付表４に記
載の重量法に従って測定されるｎ−ヘキサン抽出物質を
いう。
に他に記載がなければ、環境庁告示第６４号付表４に記
載の重量法に従って測定されるｎ−ヘキサン抽出物質を
いう。
【００１６】本明細書で用いる用語「世代時間」は、細
胞分裂からその次の細胞分裂までの平均所要時間、つま
り、細胞数が２倍になる平均所要時間（倍化時間）をい
い、そして世代時間が３０分以下であるような増殖速度
とは、当業者に周知の用語である、微生物の増殖速度を
示す「比増殖速度」で表せば、以下の実施例に記載の式
を用いて、比増殖速度が少なくとも１．３８／時間であ
ると換言され得る。
胞分裂からその次の細胞分裂までの平均所要時間、つま
り、細胞数が２倍になる平均所要時間（倍化時間）をい
い、そして世代時間が３０分以下であるような増殖速度
とは、当業者に周知の用語である、微生物の増殖速度を
示す「比増殖速度」で表せば、以下の実施例に記載の式
を用いて、比増殖速度が少なくとも１．３８／時間であ
ると換言され得る。
【００１７】本明細書で用いる用語「プロテアーゼ」、
「セルラーゼ」、「アミラーゼ」、「リパーゼ」は、通
常、当該技術分野で用いられる意味で使用され、それぞ
れタンパク質分解酵素、繊維素分解酵素、デンプン加水
分解酵素、脂質分解酵素を総称し、それらの活性は、当
該分野で公知の方法により測定され得る。
「セルラーゼ」、「アミラーゼ」、「リパーゼ」は、通
常、当該技術分野で用いられる意味で使用され、それぞ
れタンパク質分解酵素、繊維素分解酵素、デンプン加水
分解酵素、脂質分解酵素を総称し、それらの活性は、当
該分野で公知の方法により測定され得る。
【００１８】本明細書で用いる用語「生物系界面活性剤
（バイオサーファクタント）」は、生物が生産する界面
活性物質をいい、特に微生物が菌体外に生産する界面活
性物質をいう。一般に、生物系界面活性剤は、分子内に
親水性部位および疎水性部位部位を有し、代表例とし
て、親水性の糖と疎水性の脂肪酸が結合しているグリコ
リピドが挙げられるがこれに限定されない。
（バイオサーファクタント）」は、生物が生産する界面
活性物質をいい、特に微生物が菌体外に生産する界面活
性物質をいう。一般に、生物系界面活性剤は、分子内に
親水性部位および疎水性部位部位を有し、代表例とし
て、親水性の糖と疎水性の脂肪酸が結合しているグリコ
リピドが挙げられるがこれに限定されない。
【００１９】本発明の微生物は、通常、２種以上を混合
した微生物剤の形態で用いられ、それによって油脂分の
分解効率を向上し得る。ここで、「微生物剤」とは、通
常、１種以上の微生物および任意の材料を含む組成物を
いい、微生物とともに含まれる材料の例としては、土壌
に含まれる無機物および有機物のような、微生物が存在
する天然環境において微生物の周囲に通常近接して存在
する材料、一般に微生物の固定化に用いられる、バーミ
キュライト、シリカ、ゼオライト、活性炭、光硬化性樹
脂、各種樹脂などの天然または合成の担体材料が挙げら
れる。
した微生物剤の形態で用いられ、それによって油脂分の
分解効率を向上し得る。ここで、「微生物剤」とは、通
常、１種以上の微生物および任意の材料を含む組成物を
いい、微生物とともに含まれる材料の例としては、土壌
に含まれる無機物および有機物のような、微生物が存在
する天然環境において微生物の周囲に通常近接して存在
する材料、一般に微生物の固定化に用いられる、バーミ
キュライト、シリカ、ゼオライト、活性炭、光硬化性樹
脂、各種樹脂などの天然または合成の担体材料が挙げら
れる。
【００２０】好ましくは、分離された天然環境において
微生物周囲に近接して存在する材料が用いられ、それに
よって微生物の生存率および増殖を促進させ得る。本発
明においては、特に、本発明の微生物が存在する岩石を
ハンマーなどで適切な大きさに粉砕し、得られた粉砕物
をそのまま微生物剤として用いてもよい。
微生物周囲に近接して存在する材料が用いられ、それに
よって微生物の生存率および増殖を促進させ得る。本発
明においては、特に、本発明の微生物が存在する岩石を
ハンマーなどで適切な大きさに粉砕し、得られた粉砕物
をそのまま微生物剤として用いてもよい。
【００２１】あるいは、本発明の微生物を培養した後、
当該分野で公知の固定化法により上記公知の天然または
合成の担体材料に固定化して微生物剤として用い得る。
当該分野で公知の固定化法により上記公知の天然または
合成の担体材料に固定化して微生物剤として用い得る。
【００２２】本発明の微生物は、好気条件下で良好に生
育し、そして油脂分を分解する。好気条件は、通常、微
生物に酸素を供給する手段によって行われる。
育し、そして油脂分を分解する。好気条件は、通常、微
生物に酸素を供給する手段によって行われる。
【００２３】上記微生物剤に酸素を供給する手段は、微
生物の生存および増殖に必要な酸素を微生物に提供し得
る任意の手段を含み、通常空気を曝気することによりな
される。例えば、当該分野で公知のスパージャーなどを
用いてなされ得る。
生物の生存および増殖に必要な酸素を微生物に提供し得
る任意の手段を含み、通常空気を曝気することによりな
される。例えば、当該分野で公知のスパージャーなどを
用いてなされ得る。
【００２４】本発明の微生物剤は、通常、既存の浄化
槽、グリーストラップ、接触曝気槽、活性汚泥槽などに
適当量投入して使用し得る。あるいは、前記浄化槽など
に充填し固定床しても使用し得る。グリーストラップな
ど曝気装置を備えていない場合、例えば、塩化ビニルな
どの配管を設置してブロアに連結して酸素を供給する手
段としてもよい。曝気量は、当業者が通常行うように、
流入する排水の性状、微生物剤に含まれる微生物の状態
により適宜変化させ得る。
槽、グリーストラップ、接触曝気槽、活性汚泥槽などに
適当量投入して使用し得る。あるいは、前記浄化槽など
に充填し固定床しても使用し得る。グリーストラップな
ど曝気装置を備えていない場合、例えば、塩化ビニルな
どの配管を設置してブロアに連結して酸素を供給する手
段としてもよい。曝気量は、当業者が通常行うように、
流入する排水の性状、微生物剤に含まれる微生物の状態
により適宜変化させ得る。
【００２５】
【実施例】本発明を実施例により説明する。以下の実施
例は、本発明の例示であって、本発明を制限することを
意図していない。
例は、本発明の例示であって、本発明を制限することを
意図していない。
【００２６】（実施例１） 油脂分分解性桿菌の分離 岩石を粉砕して得た粉末の約１ｇを、５ｍｌの無菌水に
懸濁する。これを適宜希釈してＬ寒天培地（０．５％酵
母エキス、１％ペプトン、０．５％ＮａＣｌ、１．５％
寒天）に塗布し３０℃で一晩インキュベートし、得られ
たコロニーのなかから増殖速度の優れた（大きな）コロ
ニーを釣り上げ、Ｒ１〜Ｒ１４株と命名した１４株を選
択した。得られた菌株についてＬ寒天培地上で適宜純化
培養し以下の実験に供した。顕微鏡およびグラム染色法
を用いて観察したところ、Ｒ１〜Ｒ１４株はいずれもグ
ラム陽性の桿菌であった。図１に分離株の１つＲ５株の
細胞の透過型電子顕微鏡写真を示す。
懸濁する。これを適宜希釈してＬ寒天培地（０．５％酵
母エキス、１％ペプトン、０．５％ＮａＣｌ、１．５％
寒天）に塗布し３０℃で一晩インキュベートし、得られ
たコロニーのなかから増殖速度の優れた（大きな）コロ
ニーを釣り上げ、Ｒ１〜Ｒ１４株と命名した１４株を選
択した。得られた菌株についてＬ寒天培地上で適宜純化
培養し以下の実験に供した。顕微鏡およびグラム染色法
を用いて観察したところ、Ｒ１〜Ｒ１４株はいずれもグ
ラム陽性の桿菌であった。図１に分離株の１つＲ５株の
細胞の透過型電子顕微鏡写真を示す。
【００２７】（実施例２） 分離された菌の増殖速度の
測定 分離された一群の菌は、増殖速度が非常に高いことが特
徴であった。そこで、これら分離菌の比増殖速度を、当
該技術分野でバチルス・ズブチリス菌の代表的な菌株で
あるとして知られているバチルス・ズブチリスＭＩ１１
３株（ＭａｓａｚｕｍｉＭａｔｓｕｍｕｒａら、Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，Ｏｃｔ．
１９８４，ｐ．４１３−４２０）を対照として測定し
た。
測定 分離された一群の菌は、増殖速度が非常に高いことが特
徴であった。そこで、これら分離菌の比増殖速度を、当
該技術分野でバチルス・ズブチリス菌の代表的な菌株で
あるとして知られているバチルス・ズブチリスＭＩ１１
３株（ＭａｓａｚｕｍｉＭａｔｓｕｍｕｒａら、Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，Ｏｃｔ．
１９８４，ｐ．４１３−４２０）を対照として測定し
た。
【００２８】比増殖速度は、Ｌ培地（０．５％酵母エキ
ス、１％ペプトン、０．５％ＮａＣｌ）を用いて以下の
手順で行った。なお、培養に用いた培地および器具は、
当業者が通常行うように、オートクレーブで１１５℃〜
１２１℃の条件下で１０分〜２０分間の殺菌操作を行っ
た後に使用した。
ス、１％ペプトン、０．５％ＮａＣｌ）を用いて以下の
手順で行った。なお、培養に用いた培地および器具は、
当業者が通常行うように、オートクレーブで１１５℃〜
１２１℃の条件下で１０分〜２０分間の殺菌操作を行っ
た後に使用した。
【００２９】まず、５００ｍｌ容の三角フラスコ中の１
００ｍｌのＬ培地に被験菌株の１白金耳を接種し、３０
℃で６時間振盪培養した（前培養）。得られた前培養液
の１部を、同じく５００ｍｌ容の三角フラスコ中の１０
０ｍｌのＬ培地に入れ、３０℃で振盪培養した（本培
養）。本培養の培養液の６６０ｎｍの吸光度（Ｏ
Ｄ660）を経時的に測定し、片対数グラフにプロット
し、得られた曲線の傾きより比増殖速度μ［１／時間］
として算出した。世代時間τ（倍化時間）は、得られた
比増殖速度μから以下の式により算出される。
００ｍｌのＬ培地に被験菌株の１白金耳を接種し、３０
℃で６時間振盪培養した（前培養）。得られた前培養液
の１部を、同じく５００ｍｌ容の三角フラスコ中の１０
０ｍｌのＬ培地に入れ、３０℃で振盪培養した（本培
養）。本培養の培養液の６６０ｎｍの吸光度（Ｏ
Ｄ660）を経時的に測定し、片対数グラフにプロット
し、得られた曲線の傾きより比増殖速度μ［１／時間］
として算出した。世代時間τ（倍化時間）は、得られた
比増殖速度μから以下の式により算出される。
【００３０】τ＝ｌｎ２／μ＝０．６９３／μ Ｒ５株、Ｒ１４株について得られた結果を表１に示す。
【００３１】
【表１】
【００３２】表１に示されるように、Ｒ５株およびＲ１
４株は、対照株であるＭＩ１１３株の比増殖速度が１．
１２時間-1であるのに対し、それぞれ、１．３８時間-1
および１．４２時間-1と、約１．２３倍以上の比増殖速
度を示し、いずれも３０分以下の世代時間を有してい
た。
４株は、対照株であるＭＩ１１３株の比増殖速度が１．
１２時間-1であるのに対し、それぞれ、１．３８時間-1
および１．４２時間-1と、約１．２３倍以上の比増殖速
度を示し、いずれも３０分以下の世代時間を有してい
た。
【００３３】なお、Ｒ５株およびＲ１４株は、それぞ
れ、FERM P−17512号およびFERM P−17513号として、１
９９９年８月１１日付けで通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所特許微生物寄託センターに寄託されて
いる。
れ、FERM P−17512号およびFERM P−17513号として、１
９９９年８月１１日付けで通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所特許微生物寄託センターに寄託されて
いる。
【００３４】図２は、Ｌ寒天培地上で、Ｒ５株の優れた
増殖速度を示すＲ５株のコロニーの写真である。写真の
コロニーは、Ｌ寒天培地にＲ５株（下側）およびＭＩ１
１３株（上側）をほぼ同量白金耳を用いて画線し、３０
℃６時間培養した後にＬ寒天表面を写真撮影したもので
ある。図２から明らかなように、ＭＩ１１３株はＬ寒天
培地上で薄い膜上のわずかな生育しか観察されないのに
対し、Ｒ５株はＬ寒天培地表面上で大きく盛り上がり、
Ｒ５株の優れた増殖速度が確認された。
増殖速度を示すＲ５株のコロニーの写真である。写真の
コロニーは、Ｌ寒天培地にＲ５株（下側）およびＭＩ１
１３株（上側）をほぼ同量白金耳を用いて画線し、３０
℃６時間培養した後にＬ寒天表面を写真撮影したもので
ある。図２から明らかなように、ＭＩ１１３株はＬ寒天
培地上で薄い膜上のわずかな生育しか観察されないのに
対し、Ｒ５株はＬ寒天培地表面上で大きく盛り上がり、
Ｒ５株の優れた増殖速度が確認された。
【００３５】（実施例３） 単離菌株の特徴付け
【００３６】１．Ｒ５株の特徴付け Ｒ５株は、グラム染色陽性の桿状の細菌である。グラム
染色性は不安定であり、染色された細胞は容易に脱色さ
れた。この菌は、カタラーゼおよびオキシダーゼ陽性で
あった。Ｒ５株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子をクローニング
するために、Ｄａｖｉｄ J．Ｌａｎｅ、Ｂｅｒｎａｄ
ｅｔｔｅ Ｐａｃｅ、Ｇａｒｙ Ｊ．Ｏｌｓｅｎ、Ｄａ
ｖｉｄ Ａ．Ｓｔａｈｌ、Ｍｉｔｃｈｅｌｌ Ｌ．Ｓｏ
ｇｉｎ、およびＮｏｒｍａｎ Ｒ．Ｐａｃｅ： Ｒａｐ
ｉｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ １６Ｓ ｒ
ｉｂｏｓｏｍａｌ ＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏ
ｒｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｅｓ． Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：
６９５５−６９５９に記載される１６ＳｒＲＮＡ遺伝子
の保存領域を基に以下のプライマーを構築した： Ｒｓ１： 5'-AAACTC/TAAAG/TGAATTGACGG-3'（位置９０
７−９２６） Ｒｓ２： 5'-ACGGCGGTGTGTA/GC-3（位置１４０６−１
３９２）。
染色性は不安定であり、染色された細胞は容易に脱色さ
れた。この菌は、カタラーゼおよびオキシダーゼ陽性で
あった。Ｒ５株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子をクローニング
するために、Ｄａｖｉｄ J．Ｌａｎｅ、Ｂｅｒｎａｄ
ｅｔｔｅ Ｐａｃｅ、Ｇａｒｙ Ｊ．Ｏｌｓｅｎ、Ｄａ
ｖｉｄ Ａ．Ｓｔａｈｌ、Ｍｉｔｃｈｅｌｌ Ｌ．Ｓｏ
ｇｉｎ、およびＮｏｒｍａｎ Ｒ．Ｐａｃｅ： Ｒａｐ
ｉｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ １６Ｓ ｒ
ｉｂｏｓｏｍａｌ ＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏ
ｒｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｅｓ． Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：
６９５５−６９５９に記載される１６ＳｒＲＮＡ遺伝子
の保存領域を基に以下のプライマーを構築した： Ｒｓ１： 5'-AAACTC/TAAAG/TGAATTGACGG-3'（位置９０
７−９２６） Ｒｓ２： 5'-ACGGCGGTGTGTA/GC-3（位置１４０６−１
３９２）。
【００３７】これら２つのプライマーをプライミングス
トランドとして、そしてＲ５株のゲノムＤＮＡをテンプ
レートとして用い、ＰＣＲ法により、０．５ｋｂのＤＮ
Ａを増幅した。次いで上記の２つのプライマーが、それ
らの５’末端に制限酵素部位を持つように伸長し、以下
のプライマーを得た：
トランドとして、そしてＲ５株のゲノムＤＮＡをテンプ
レートとして用い、ＰＣＲ法により、０．５ｋｂのＤＮ
Ａを増幅した。次いで上記の２つのプライマーが、それ
らの５’末端に制限酵素部位を持つように伸長し、以下
のプライマーを得た：
【００３８】これらのプライマーをプライミングストラ
ンドとして、そして第１ラウンドのＰＣＲで得た０．５
ｋｂのＤＮＡをテンプレートとして用い、第２ラウンド
のＰＣＲを行った。得られた増幅産物を、ＨｉｎｄＩＩ
ＩおよびＳａｌＩで消化し、ｐＵＣ１８クローニングベ
クター（東洋紡績）にクローニングした。得られた陽性
のクローンを配列決定した。得られた配列を、既存のデ
ータベース（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＵＰＤ）にある配列とＢ
ＬＡＳＴＮ １．４．１０ＭＰを用いて比較したとこ
ろ、Ｒ５株はバチルス属の細菌に近縁であることが示さ
れた。
ンドとして、そして第１ラウンドのＰＣＲで得た０．５
ｋｂのＤＮＡをテンプレートとして用い、第２ラウンド
のＰＣＲを行った。得られた増幅産物を、ＨｉｎｄＩＩ
ＩおよびＳａｌＩで消化し、ｐＵＣ１８クローニングベ
クター（東洋紡績）にクローニングした。得られた陽性
のクローンを配列決定した。得られた配列を、既存のデ
ータベース（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＵＰＤ）にある配列とＢ
ＬＡＳＴＮ １．４．１０ＭＰを用いて比較したとこ
ろ、Ｒ５株はバチルス属の細菌に近縁であることが示さ
れた。
【００３９】次いで、Ｒ５株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の
全配列を決定するために、Ｒ５株のゲノムＤＮＡを、Ｂ
ａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＳａｌＩ、お
よびＸｂａＩで消化し、上記のクローン化された１６Ｓ
ｒＲＮＡの部分遺伝子をプローブとして用い、サザンブ
ロットハイブリダイゼーションを行った。ハイブリダイ
ゼーションの結果に基づいて、Ｒ５株から完全長の１６
ＳｒＲＮＡ遺伝子を保有する約２．３ｋｂのＢａｍＨＩ
ＤＮＡフラグメントをｐＵＣ１８にクローニングした。
クローン化されたＤＮＡフラグメントの制限酵素地図を
図３に示す。
全配列を決定するために、Ｒ５株のゲノムＤＮＡを、Ｂ
ａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＳａｌＩ、お
よびＸｂａＩで消化し、上記のクローン化された１６Ｓ
ｒＲＮＡの部分遺伝子をプローブとして用い、サザンブ
ロットハイブリダイゼーションを行った。ハイブリダイ
ゼーションの結果に基づいて、Ｒ５株から完全長の１６
ＳｒＲＮＡ遺伝子を保有する約２．３ｋｂのＢａｍＨＩ
ＤＮＡフラグメントをｐＵＣ１８にクローニングした。
クローン化されたＤＮＡフラグメントの制限酵素地図を
図３に示す。
【００４０】図３に示されるＤＮＡフラグメントのＫｐ
ｎＩ−ＰｓｔＩおよびＰｓｔＩ−ＳｍａＩフラグメント
をｐＵＣ１８ベクター中にさらにサブクローニングし
て、Ｒ５株の全１６ＳｒＲＮＡ遺伝子を配列決定し、既
存のデータベース（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＵＰＤ）にある配
列とＢＬＡＳＴＮ １．４．１０ＭＰを用いて比較し
た。得られた完全配列（配列番号１）を図４に、そして
その配列の相同性スコアを図５に示す。図５に示される
ように、Ｒ５株は、バチルス属の細菌に最大の相同性を
有していた。単離菌株Ｒ５およびバチルス・ズブチリス
の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子間のアラインメントを図６およ
び図７に示す。単離菌株Ｒ５は、バチルス・ズブチリス
と９９％の配列同一性を有していることから、単離菌株
Ｒ５は、バチルス・ズブチリスであるか、またはそれに
密接に関連する菌であることが示された。
ｎＩ−ＰｓｔＩおよびＰｓｔＩ−ＳｍａＩフラグメント
をｐＵＣ１８ベクター中にさらにサブクローニングし
て、Ｒ５株の全１６ＳｒＲＮＡ遺伝子を配列決定し、既
存のデータベース（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＵＰＤ）にある配
列とＢＬＡＳＴＮ １．４．１０ＭＰを用いて比較し
た。得られた完全配列（配列番号１）を図４に、そして
その配列の相同性スコアを図５に示す。図５に示される
ように、Ｒ５株は、バチルス属の細菌に最大の相同性を
有していた。単離菌株Ｒ５およびバチルス・ズブチリス
の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子間のアラインメントを図６およ
び図７に示す。単離菌株Ｒ５は、バチルス・ズブチリス
と９９％の配列同一性を有していることから、単離菌株
Ｒ５は、バチルス・ズブチリスであるか、またはそれに
密接に関連する菌であることが示された。
【００４１】２．その他の分離株の特徴付け 分離株Ｒ３、Ｒ４およびＲ１４株から約５００ｎｔの１
６Ｓ rＲＮＡを、上記１に記載したＲ５株の場合と同様
にクローン化し配列決定した。Ｒ３およびＲ４株につい
ての配列データおよび相同性スコアを図８および図９、
ならびに図１０および図１１にそれぞれ示す。図９およ
び図１１に示されるように、Ｒ３株およびＲ４株のいず
れもがバチルス属の細菌と最も高い相同性を示した。Ｒ
１、Ｒ６〜Ｒ１４株についても同様の分析を行ったが、
いずれの株も同様に、バチルス属の細菌と最も高い相同
性を示した。配列番号２にＲ１４株の１６Ｓ rＲＮＡの
部分配列を示す。
６Ｓ rＲＮＡを、上記１に記載したＲ５株の場合と同様
にクローン化し配列決定した。Ｒ３およびＲ４株につい
ての配列データおよび相同性スコアを図８および図９、
ならびに図１０および図１１にそれぞれ示す。図９およ
び図１１に示されるように、Ｒ３株およびＲ４株のいず
れもがバチルス属の細菌と最も高い相同性を示した。Ｒ
１、Ｒ６〜Ｒ１４株についても同様の分析を行ったが、
いずれの株も同様に、バチルス属の細菌と最も高い相同
性を示した。配列番号２にＲ１４株の１６Ｓ rＲＮＡの
部分配列を示す。
【００４２】（実施例４） 単離菌株の解析 次に、単離菌株の油脂分分解性能を特徴付けるために、
単離菌株が生産する菌体外酵素活性を調べた。菌体外酵
素活性は、以下の方法で測定した。
単離菌株が生産する菌体外酵素活性を調べた。菌体外酵
素活性は、以下の方法で測定した。
【００４３】１．プレートアッセイ 各単離菌株のプロテアーゼ活性、アミラーゼ活性、リパ
ーゼ活性およびセルラーゼ活性について以下に示す方法
で測定した。要約すれば、以下に示す組成の寒天培地
を、各酵素の基質物質を良く懸濁または乳化して調製す
る。次いで、各寒天培地に被験菌株を接種して３０℃で
培養し、被験菌株のコロニー形成にともなって生じる、
各酵素の基質の溶解に起因するコロニー周囲の透明ゾー
ン（ハロー）の大きさを肉眼または化学的発色反応で観
察するによって各酵素活性を検出および比較した。
ーゼ活性およびセルラーゼ活性について以下に示す方法
で測定した。要約すれば、以下に示す組成の寒天培地
を、各酵素の基質物質を良く懸濁または乳化して調製す
る。次いで、各寒天培地に被験菌株を接種して３０℃で
培養し、被験菌株のコロニー形成にともなって生じる、
各酵素の基質の溶解に起因するコロニー周囲の透明ゾー
ン（ハロー）の大きさを肉眼または化学的発色反応で観
察するによって各酵素活性を検出および比較した。
【００４４】プロテアーゼ：Ｌ寒天＋１％カゼイン、４
８時間培養後の透明ゾーンの大きさを肉眼で観察。
８時間培養後の透明ゾーンの大きさを肉眼で観察。
【００４５】アミラーゼ：Ｌ寒天＋１％可溶性デンプ
ン、２４〜４８時間培養後、寒天平板をヨウ素蒸気に曝
してデンプンを染色し、コロニー周囲の透明ゾーンを肉
眼で観察。
ン、２４〜４８時間培養後、寒天平板をヨウ素蒸気に曝
してデンプンを染色し、コロニー周囲の透明ゾーンを肉
眼で観察。
【００４６】リパーゼ：Ｌ寒天＋１％トリブチレン、４
８時間培養後の透明ゾーンの大きさを肉眼で観察。
８時間培養後の透明ゾーンの大きさを肉眼で観察。
【００４７】セルラーゼ：Ｌ寒天＋０．１％カルボキシ
メチルセルロース、４８時間培養後、以下の手順で寒天
平板をコンゴーレッドで染色し、染色されない部分の大
きさを肉眼で観察：(i)コンゴーレッド溶液で２０分間
染色、(ii)蒸留水で洗浄、(iii)１Ｍ食塩水で洗浄(３〜
５回)、(iv)蒸留水で洗浄、(v)０．１Ｎのカセイソーダ
溶液で洗浄。
メチルセルロース、４８時間培養後、以下の手順で寒天
平板をコンゴーレッドで染色し、染色されない部分の大
きさを肉眼で観察：(i)コンゴーレッド溶液で２０分間
染色、(ii)蒸留水で洗浄、(iii)１Ｍ食塩水で洗浄(３〜
５回)、(iv)蒸留水で洗浄、(v)０．１Ｎのカセイソーダ
溶液で洗浄。
【００４８】図１２に、プレートアッセイの結果を示
す。図１２左上がセルラーゼ活性、左下がプロテアーゼ
活性、右上がアミラーゼ活性、そして右下がリパーゼ活
性をアッセイしたＬ寒天平板である。図１２に見られる
ように、Ｒ５株は、いずれの酵素のアッセイについて
も、対照株であるＭＩ１１３株に比べてコロニー周縁か
らハーロー周縁までの距離が大きいゾーンを形成した。
Ｒ９株は、アミラーゼ活性、リパーゼ活性を示し、Ｒ１
４株は、プロテアーゼ活性、アミラーゼ活性、リパーゼ
活性を示した。
す。図１２左上がセルラーゼ活性、左下がプロテアーゼ
活性、右上がアミラーゼ活性、そして右下がリパーゼ活
性をアッセイしたＬ寒天平板である。図１２に見られる
ように、Ｒ５株は、いずれの酵素のアッセイについて
も、対照株であるＭＩ１１３株に比べてコロニー周縁か
らハーロー周縁までの距離が大きいゾーンを形成した。
Ｒ９株は、アミラーゼ活性、リパーゼ活性を示し、Ｒ１
４株は、プロテアーゼ活性、アミラーゼ活性、リパーゼ
活性を示した。
【００４９】２．粗酵素を用いたアッセイ 各単離菌株をＬ培地で３０℃２４時間振盪培養した後、
遠心分離して得た上清液について硫安分画（８０％）
し、その沈殿区分を５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．５）に溶解し、これを粗酵素として用い、プ
ロテアーゼ活性、アミラーゼ活性、リパーゼ活性および
セルラーゼ活性について以下に示す方法で測定した。
遠心分離して得た上清液について硫安分画（８０％）
し、その沈殿区分を５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．５）に溶解し、これを粗酵素として用い、プ
ロテアーゼ活性、アミラーゼ活性、リパーゼ活性および
セルラーゼ活性について以下に示す方法で測定した。
【００５０】アミラーゼ：(i)０．５％可溶性デンプン
液(５０ｍＭのＮａＯＡｃ緩衝液ｐＨ６〜６．５を用い
て調製)１００μｌを試験管にとる、(ii)粗酵素を添加
し、適切な温度で１５〜３０分間インキュベートする、
(iii)２００μｌの０．１Ｎ塩酸を添加する、(iv)２ｍ
ｌのヨウ素溶液（０．００５％Ｉ2＋０．０５％ＫＩ）
を添加する、(v)混合して６６０ｎｍで吸光度（Ｏ
Ｄ660）を測定する。なお、対照としては、粗酵素の代
わりに蒸留水を添加する。ＯＤ660が低いほど酵素活性
が高い。
液(５０ｍＭのＮａＯＡｃ緩衝液ｐＨ６〜６．５を用い
て調製)１００μｌを試験管にとる、(ii)粗酵素を添加
し、適切な温度で１５〜３０分間インキュベートする、
(iii)２００μｌの０．１Ｎ塩酸を添加する、(iv)２ｍ
ｌのヨウ素溶液（０．００５％Ｉ2＋０．０５％ＫＩ）
を添加する、(v)混合して６６０ｎｍで吸光度（Ｏ
Ｄ660）を測定する。なお、対照としては、粗酵素の代
わりに蒸留水を添加する。ＯＤ660が低いほど酵素活性
が高い。
【００５１】リパーゼ：(i)用時調製したｐ−ニトロフ
ェニルパルミチン酸（ＰＮＰＰ）溶液（３ｍｇＰＮＰＰ
／ｍｌイソプロパノール溶液を調製し、この溶液を９ｍ
ｌのリン酸緩衝液、ｐＨ７．５〜８と混合して調製）を
試験管にとる、(ii)粗酵素を添加し、適切な温度で１５
〜３０分間インキュベートする、(iii)４１０ｎｍで吸
光度（ＯＤ410）を測定する。なお、対照としては、粗
酵素の代わりに蒸留水を添加する。
ェニルパルミチン酸（ＰＮＰＰ）溶液（３ｍｇＰＮＰＰ
／ｍｌイソプロパノール溶液を調製し、この溶液を９ｍ
ｌのリン酸緩衝液、ｐＨ７．５〜８と混合して調製）を
試験管にとる、(ii)粗酵素を添加し、適切な温度で１５
〜３０分間インキュベートする、(iii)４１０ｎｍで吸
光度（ＯＤ410）を測定する。なお、対照としては、粗
酵素の代わりに蒸留水を添加する。
【００５２】プロテアーゼ：(i)２．０％アゾカゼイン
液(４０ｍｇのアゾカゼインを１ｍｌの蒸留水に加温し
ながら溶解し、０．００５ｇのＮａＨＣＯ3を添加し、
さらにアゾカゼインの最終濃度が２０ｍｇ／ｍｌとなる
ように、アッセイ緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、
ｐＨ７．４、１５ｍＭβメルカプトエタノール）を添加
して得る)２００μｌを試験管にとる、(ii)粗酵素を添
加し、反応系の容量が２ｍｌとなるようにアッセイ緩衝
液を添加する、(iii)２５℃で３０〜１２０分間インキ
ュベートする、(iv)氷冷し、０．１ｍｌの１５％ＴＣＡ
を添加する、(v)５０００×ｇで１０分間遠心分離して
清澄な液を得る、(vi)０．５Ｍのカセイソーダ溶液を添
加する、 (vii)４４０ｎｍで吸光度（ＯＤ440）を測定
する。
液(４０ｍｇのアゾカゼインを１ｍｌの蒸留水に加温し
ながら溶解し、０．００５ｇのＮａＨＣＯ3を添加し、
さらにアゾカゼインの最終濃度が２０ｍｇ／ｍｌとなる
ように、アッセイ緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、
ｐＨ７．４、１５ｍＭβメルカプトエタノール）を添加
して得る)２００μｌを試験管にとる、(ii)粗酵素を添
加し、反応系の容量が２ｍｌとなるようにアッセイ緩衝
液を添加する、(iii)２５℃で３０〜１２０分間インキ
ュベートする、(iv)氷冷し、０．１ｍｌの１５％ＴＣＡ
を添加する、(v)５０００×ｇで１０分間遠心分離して
清澄な液を得る、(vi)０．５Ｍのカセイソーダ溶液を添
加する、 (vii)４４０ｎｍで吸光度（ＯＤ440）を測定
する。
【００５３】セルラーゼ：(i)２％カルボキシメチルセ
ルロース溶液５００μｌ、１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液
５０μｌを試験管にとり、粗酵素を添加して反応系の容
量を１０００μｌとする、(ii)３０℃で２時間〜一晩イ
ンキュベートする、(iii)４０μｌの反応液に、１２０
μｌのＤＮＳ（ジニトロサリチル酸）試薬を添加する、
(iv)沸騰水中で５分間加熱する、(v)冷却し、８４０μ
ｌの蒸留水を添加する、(v)遠心分離して清澄な液を得
て、５００ｎｍで吸光度（ＯＤ500）を測定する。
ルロース溶液５００μｌ、１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液
５０μｌを試験管にとり、粗酵素を添加して反応系の容
量を１０００μｌとする、(ii)３０℃で２時間〜一晩イ
ンキュベートする、(iii)４０μｌの反応液に、１２０
μｌのＤＮＳ（ジニトロサリチル酸）試薬を添加する、
(iv)沸騰水中で５分間加熱する、(v)冷却し、８４０μ
ｌの蒸留水を添加する、(v)遠心分離して清澄な液を得
て、５００ｎｍで吸光度（ＯＤ500）を測定する。
【００５４】各単離菌株および対照株について得られた
測定結果を表２に示す。
測定結果を表２に示す。
【００５５】
【表２】
【００５６】表中の酵素活性を示す数値は、培養液１Ｌ
あたりに存在していた各酵素の単位数を表す。
あたりに存在していた各酵素の単位数を表す。
【００５７】なお、表２における各酵素の単位数は、下
記に記載の文献に従って以下のように定義した。
記に記載の文献に従って以下のように定義した。
【００５８】リパーゼ：酵素１単位を、１分間あたり１
μモルのｐ−ニトロフェノールを放出させる酵素量とし
た。Ｃｌａｕｄｉａ Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｄａｎｎｅｒ
ｔ、Ｍ．Ｌｕｉｓａ Ｒｕａ、Ｈａｒｕｙｕｋｉ Ａｔ
ｏｍｉ、Ｒｏｌｆ Ｄ．Ｓｃｈｉｍｄ．：Ｔｈｅｒｍｏ
ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃ ｌｉｐａｓｅ ｏｆ Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｔｈｅｒｍｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｓ．
Ｉ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇ，ｎｕｃｌｅｏ
ｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ、ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ ａｎｄ ｓｏｍｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ． Ｂｉ
ｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃ
ｔａ （１９９６）１３０１：１０５−１１４。
μモルのｐ−ニトロフェノールを放出させる酵素量とし
た。Ｃｌａｕｄｉａ Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｄａｎｎｅｒ
ｔ、Ｍ．Ｌｕｉｓａ Ｒｕａ、Ｈａｒｕｙｕｋｉ Ａｔ
ｏｍｉ、Ｒｏｌｆ Ｄ．Ｓｃｈｉｍｄ．：Ｔｈｅｒｍｏ
ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃ ｌｉｐａｓｅ ｏｆ Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｔｈｅｒｍｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｓ．
Ｉ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇ，ｎｕｃｌｅｏ
ｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ、ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ ａｎｄ ｓｏｍｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ． Ｂｉ
ｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃ
ｔａ （１９９６）１３０１：１０５−１１４。
【００５９】アミラーゼ：デンプン分解活性の１単位
を、１分間あたりアミロース−ヨウ素複合体の吸光度
（６００ｎｍ）を１％減少させるために必要な酵素活性
量と規定した。Ｙｏｓｈｉｈｉｓａ Ｔａｃｈｉｂａｎ
ａ、Ｓｈｉｎｓｕｋｅ Ｆｕｊｉｗａｒａ、Ｍａｓａｈ
ｉｒｏ Ｔａｋａｇｉ、およびＴａｄａｙｕｋｉ Ｉｍ
ａｎａｋａ（１９９７） Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅ
ｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ４−α−Ｇｌｕｃａｎｏｔｒ
ａｎｓｆｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｈ
ｙｐｅｒｔｈｅｍｏｐｈｉｃ Ａｒｃｈａｅｏｎ Ｐｙ
ｒｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．ＫＯＤ１、ａｎｄ Ｃｈａｒａ
ｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｅｎｚｙｍｅ．
Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．８３：５４０５
４８。
を、１分間あたりアミロース−ヨウ素複合体の吸光度
（６００ｎｍ）を１％減少させるために必要な酵素活性
量と規定した。Ｙｏｓｈｉｈｉｓａ Ｔａｃｈｉｂａｎ
ａ、Ｓｈｉｎｓｕｋｅ Ｆｕｊｉｗａｒａ、Ｍａｓａｈ
ｉｒｏ Ｔａｋａｇｉ、およびＴａｄａｙｕｋｉ Ｉｍ
ａｎａｋａ（１９９７） Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅ
ｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ４−α−Ｇｌｕｃａｎｏｔｒ
ａｎｓｆｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｈ
ｙｐｅｒｔｈｅｍｏｐｈｉｃ Ａｒｃｈａｅｏｎ Ｐｙ
ｒｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．ＫＯＤ１、ａｎｄ Ｃｈａｒａ
ｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｅｎｚｙｍｅ．
Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．８３：５４０５
４８。
【００６０】プロテアーゼ：酵素活性の１単位を、４４
０ｎｍの吸光度を１時間あたり０．０１増加させるため
に必要な酵素量と規定した。Ｋ．Ｌ．Ｋｏｈｌｍａｎ
ｎ、Ｓ．Ｓ．Ｎｉｅｌｓｅｎ、Ｌ．Ｒ．Ｓｔｅｅｎｓｏ
ｎおよびＭ．Ｒ．Ｌａｄｉｓｃｈ（１９９１） Ｐｒｏ
ｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ｂｙ Ｐ
ｓｙｃｈｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉ
ｓｍｓ．Ｊ．ＤａｉｒｙＳｃｉ．７４：３２７５−３２
８３。
０ｎｍの吸光度を１時間あたり０．０１増加させるため
に必要な酵素量と規定した。Ｋ．Ｌ．Ｋｏｈｌｍａｎ
ｎ、Ｓ．Ｓ．Ｎｉｅｌｓｅｎ、Ｌ．Ｒ．Ｓｔｅｅｎｓｏ
ｎおよびＭ．Ｒ．Ｌａｄｉｓｃｈ（１９９１） Ｐｒｏ
ｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ｂｙ Ｐ
ｓｙｃｈｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉ
ｓｍｓ．Ｊ．ＤａｉｒｙＳｃｉ．７４：３２７５−３２
８３。
【００６１】セルラーゼ：酵素活性の１単位を、１分間
あたり１ｍｌあたり１μモルのグルコースを生成するた
めに必要な酵素量と規定した。Ｓｕｓｕｍｕ Ｉｔｏ
（１９９７）Ａｌｋａｌｉｎｅ ｃｅｌｌｕｌａｓｅｓ
ｆｒｏｍ ａｌｋａｌｉｐｈｉｌｉｃ Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、ｇ
ｅｎｅｔｉｃｓ、ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔ
ｏ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ． Ｅｘｔｒｅｍｏｐｈｉｌ
ｅｓ、１：６１−６６。
あたり１ｍｌあたり１μモルのグルコースを生成するた
めに必要な酵素量と規定した。Ｓｕｓｕｍｕ Ｉｔｏ
（１９９７）Ａｌｋａｌｉｎｅ ｃｅｌｌｕｌａｓｅｓ
ｆｒｏｍ ａｌｋａｌｉｐｈｉｌｉｃ Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、ｇ
ｅｎｅｔｉｃｓ、ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔ
ｏ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ． Ｅｘｔｒｅｍｏｐｈｉｌ
ｅｓ、１：６１−６６。
【００６２】（実施例５）単離菌株が生産する生物界面
活性剤 Ｒ５株を上記のようにＬＢ培地で培養して上清液を得
た。この上清液を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）により、逆相カラムＣｏｓｍｏｓｉｌＰａｃｋｅ
ｄ Ｃｏｌｕｍｎ ５Ｃ１８−ＡＲ（４．６×１５０ｍ
ｍ、半井社製）を用いて分析した（溶媒：８０％アセト
ニトリル、０．１％ＴＦＡ、流速０．７ｍｌ／分）。標
準品としては、生物系界面活性剤Ｓｕｒｆａｃｔｉｎ
（登録商標）（和光純薬）を用い同条件下における溶出
パターンを比較した。得れた溶出パターンを図１３に示
す。図１３の（ａ）がＳｕｒｆａｃｔｉｎの溶出パター
ン、そして図１３の（ｂ）がＲ５株上清液の溶出パター
ンである。図１３に示されるように、Ｒ５株上清液の溶
出パターンは、Ｓｕｒｆａｃｔｉｎの溶出パターンに似
た４つのピークを有してした。各ピーク画分をプールし
て集め、油膜排除活性についてアッセイしたところピー
ク４画分に界面活性剤としての活性が検出された。な
お、油膜排除活性は、Ｍａｓａａｋｉ Ｍｏｒｉｋａｗ
ａら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ、Ｏｃｔ．１９９３、ｐ．６４５９−６４６６に記載
の方法に従い、蒸留水を入れたシャーレの素面に原油約
３０μｌを垂らして水面上に形成された原油薄膜上に、
１０μｌの試料を垂らすことにより測定した。
活性剤 Ｒ５株を上記のようにＬＢ培地で培養して上清液を得
た。この上清液を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）により、逆相カラムＣｏｓｍｏｓｉｌＰａｃｋｅ
ｄ Ｃｏｌｕｍｎ ５Ｃ１８−ＡＲ（４．６×１５０ｍ
ｍ、半井社製）を用いて分析した（溶媒：８０％アセト
ニトリル、０．１％ＴＦＡ、流速０．７ｍｌ／分）。標
準品としては、生物系界面活性剤Ｓｕｒｆａｃｔｉｎ
（登録商標）（和光純薬）を用い同条件下における溶出
パターンを比較した。得れた溶出パターンを図１３に示
す。図１３の（ａ）がＳｕｒｆａｃｔｉｎの溶出パター
ン、そして図１３の（ｂ）がＲ５株上清液の溶出パター
ンである。図１３に示されるように、Ｒ５株上清液の溶
出パターンは、Ｓｕｒｆａｃｔｉｎの溶出パターンに似
た４つのピークを有してした。各ピーク画分をプールし
て集め、油膜排除活性についてアッセイしたところピー
ク４画分に界面活性剤としての活性が検出された。な
お、油膜排除活性は、Ｍａｓａａｋｉ Ｍｏｒｉｋａｗ
ａら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ、Ｏｃｔ．１９９３、ｐ．６４５９−６４６６に記載
の方法に従い、蒸留水を入れたシャーレの素面に原油約
３０μｌを垂らして水面上に形成された原油薄膜上に、
１０μｌの試料を垂らすことにより測定した。
【００６３】（実施例６）東京都港区にある、１日あた
り約１０００人が利用する社員食堂に設置された０．６
立米（ｍ3）のグリストラップに、Ｒ５株が分離された
岩石を粉砕し、一片が５ｍｍ程度の大きさの粉砕片を約
１０個投入した。０．１〜０．２ｖｖｍの曝気を行って
２ケ月稼動後、グリストラップから排水を採取し、表４
に示す項目について示された方法で水質を分析し、上記
粉砕片の投入前の水質分析値（表３に示す）と比較し
た。なお、表中、ｎ−ヘキサン抽出物質が、油脂分に相
当する。
り約１０００人が利用する社員食堂に設置された０．６
立米（ｍ3）のグリストラップに、Ｒ５株が分離された
岩石を粉砕し、一片が５ｍｍ程度の大きさの粉砕片を約
１０個投入した。０．１〜０．２ｖｖｍの曝気を行って
２ケ月稼動後、グリストラップから排水を採取し、表４
に示す項目について示された方法で水質を分析し、上記
粉砕片の投入前の水質分析値（表３に示す）と比較し
た。なお、表中、ｎ−ヘキサン抽出物質が、油脂分に相
当する。
【００６４】
【表３】
【００６５】
【表４】
【００６６】表３および表４から明らかなように、Ｒ５
株が分離された岩石の粉砕片の投与により、稼動２ケ月
後には、ｎ−ヘキサン抽出物質が、６７０００ｐｐｍか
ら８４ｐｐｍに減少した。
株が分離された岩石の粉砕片の投与により、稼動２ケ月
後には、ｎ−ヘキサン抽出物質が、６７０００ｐｐｍか
ら８４ｐｐｍに減少した。
【００６７】（実施例７）神奈川県川崎市内にある社員
食堂に設置されたグリストラップに、Ｒ５株が分離され
た岩石を粉砕し、一片が５ｍｍ程度の大きさの粉砕片を
約１０個投入した。０．１〜０．２ｖｖｍの曝気を行っ
て１４日稼動後、グリストラップから排水を採取し、表
６に示す項目について示された方法で水質を分析し、上
記粉砕片の投入前の水質分析値（表５に示す）と比較し
た。
食堂に設置されたグリストラップに、Ｒ５株が分離され
た岩石を粉砕し、一片が５ｍｍ程度の大きさの粉砕片を
約１０個投入した。０．１〜０．２ｖｖｍの曝気を行っ
て１４日稼動後、グリストラップから排水を採取し、表
６に示す項目について示された方法で水質を分析し、上
記粉砕片の投入前の水質分析値（表５に示す）と比較し
た。
【００６８】
【表５】
【００６９】
【表６】
【００７０】表５およひ表６から明らかなように、Ｒ５
株が分離された岩石の粉砕片の投与により、稼動１４日
後には、ｎ−ヘキサン抽出物質が、３００００ｐｐｍか
ら４ｐｐｍに減少した。
株が分離された岩石の粉砕片の投与により、稼動１４日
後には、ｎ−ヘキサン抽出物質が、３００００ｐｐｍか
ら４ｐｐｍに減少した。
【００７１】（実施例８）栃木県足利市にあるネギトロ
工場の実排水量５立米（ｍ3）の浄化槽（接触曝気）
に、Ｒ５株が分離された岩石を粉砕し、一片が５ｍｍ程
度の大きさの粉砕片を約１０個投入した。０．１〜０．
２ｖｖｍの曝気を行って約１ケ月稼動後、グリストラッ
プから排水を採取し、表８に示す項目について示された
方法で水質を分析し、上記粉砕片の投入前の水質分析値
（表７に示す）と比較した。
工場の実排水量５立米（ｍ3）の浄化槽（接触曝気）
に、Ｒ５株が分離された岩石を粉砕し、一片が５ｍｍ程
度の大きさの粉砕片を約１０個投入した。０．１〜０．
２ｖｖｍの曝気を行って約１ケ月稼動後、グリストラッ
プから排水を採取し、表８に示す項目について示された
方法で水質を分析し、上記粉砕片の投入前の水質分析値
（表７に示す）と比較した。
【００７２】
【表７】
【００７３】
【表８】
【００７４】表７および表８から明らかなように、Ｒ５
株が分離された岩石の粉砕片の投与により、稼動約１ケ
月後には、ｎ−ヘキサン抽出物質が、２２０００ｐｐｍ
から２ｐｐｍに減少した。
株が分離された岩石の粉砕片の投与により、稼動約１ケ
月後には、ｎ−ヘキサン抽出物質が、２２０００ｐｐｍ
から２ｐｐｍに減少した。
【００７５】（実施例９）東京都杉並区にあるレストラ
ンパプに設置されたグリストラップに、Ｒ５株が分離さ
れた岩石を粉砕し、一片が５ｍｍ程度の大きさの粉砕片
を約１０個投入した。０．１〜０．２ｖｖｍの曝気を行
って約４ケ月稼動後、グリストラップから排水を採取
し、表１０に示す項目について示された方法で水質を分
析し、上記粉砕片の投入前の水質分析値（表９に示す）
と比較した。
ンパプに設置されたグリストラップに、Ｒ５株が分離さ
れた岩石を粉砕し、一片が５ｍｍ程度の大きさの粉砕片
を約１０個投入した。０．１〜０．２ｖｖｍの曝気を行
って約４ケ月稼動後、グリストラップから排水を採取
し、表１０に示す項目について示された方法で水質を分
析し、上記粉砕片の投入前の水質分析値（表９に示す）
と比較した。
【００７６】
【表９】
【００７７】
【表１０】
【００７８】表９および表１０から明らかなように、Ｒ
５株が分離された岩石の粉砕片の投与により、稼動約４
ケ月後には、ｎ−ヘキサン抽出物質が、６ｐｐｍから１
ｐｐｍ未満に減少した。
５株が分離された岩石の粉砕片の投与により、稼動約４
ケ月後には、ｎ−ヘキサン抽出物質が、６ｐｐｍから１
ｐｐｍ未満に減少した。
【００７９】
【発明の効果】油脂分を含む排水を浄化する能力に優れ
た微生物、およびこれを用いた排水処理プロセスが提供
される。
た微生物、およびこれを用いた排水処理プロセスが提供
される。
【００８０】
【配列表】 SEQENCE LISTING <110> Tadayuki IMANAKA and Masaaki SAITO <120> A novel bacillus which degrades fats and a waste water treating pr ocess using the same. <130> <140> <141> <150> <151> <160> 2 <170> <210> SEQ ID NO: 1 <211> 1627 <212> RNA <213> Bacillus subtilis R5 <400> 1 GGATCCAACG GAGAGTTTGA TTCTGGCTCA GGACGAACGC TGGCGGCGTG CCTAATACAT 60 GCAAGTCGAG CGGACAGATG GGAGCTTGCT CCCTGATGTT AGCGGCGGAC GGGTGAGTAA 120 CACGTGGGTA ACCTGCCTGT AAGACTGGGA TAACTCCGGG AAACCGGGGC TAATACCGGA 180 TGGTTGTTTG AACCGCATGG TTCAAACATA AAAGGTGGCT TCGGCTACCA TTTACAGATG 240 GACCCGCGGC GCATTAGCTA GTTGGTGAGG TAACGGCTCA CCAAGGCGAC GATGCGTAGC 300 CGACCTGAGA GGGTGATCGG CCACACTGGG ACTGAGACAC GGCCCAGACT CCTACGGGAG 360 GCAGCAGTAG GGAATCTTCC GCAATGGACG AAAGTCTGAC GGAGCAACGC CGCGTGAGTG 420 ATGAAGGTTT TCGGATCGTA AAGCTCTGTT GTTAGGGAAG AACAAGTACC GTTCGAATAG 480 GGCGGTGCCT TGACGGTACC TAACCAGAAA GCCACGGCTA ACTACGTGCC AGCAGCCGCG 540 GTAATACGTA GGTGGCAAGC GTTGTCCGGA ATTATTGGGC GTAAAGGGCT CGCAGGCGGT 600 TTCTTAAGTC TGATGTGAAA GCCCCCGGCT CAACCGGGGA GGGTCATTGG AAACTGGGGA 660 ACTTGAGTGC AGAAGAGGAG AGTGGAATTC CACGTGTAGC GGTGAAATGC GTAGAGATGT 720 GGAGGAACAC CAGTGGCGAA GGCGACTCTC TGGTCTGTAA CTGACGCTGA GGAGCGAAAG 780 CGTGGGGAGC GAACAGGATT AGATACCCTG GTAGTCCACG CCGTAAACGA TGAGTGCTAA 840 GTGTTAGGGG GTTTCCGCCC CTTAGTGCTG CAGCTAACGC ATTAAGCACT CCGCCTGGGG 900 AGTACGGTCG CAAGACTGAA ACTCAAAGGA ATTGACGGGG GCCCGCACAA GCGGTGGAGC 960 ATGTGGTTTA ATTCGAAGCA ACGCGAAGAA CCTTACCAGG TCTTGACATC CTCTGACAAT 1020 CCTAGAGATA GGACGTCCCC TTCGGGGGCA GAGTGACAGG TGGTGCATGG TTGTCGTCAG 1080 CTCGTGTCGT GAGATGTTGG GTTAAGTCCC GCAACGAGCG CAACCCTTGA TCTTAGTTGC 1140 CAGCATTCAG TTGGGCACTC TAAGGTGACT GCCGGTGACA AACCGCAGGA AGGTGGGGAT 1200 GACGTCAAAT CATCATGCCC CTTATGACCT GGGCTACACA CGTGCTACAA TGGACAGAAC 1260 AAAGGGTAGC GAAACCGCGA GGTTAAGCCA ATCCCACAAA TCTGTTCTCA GTTCGGATCG 1320 CAGTCTGCAA CTCGGACTGC GTGAAGCTGG AATCGCTAGT AATCGCGGAT CAGCATGCCG 1380 CGGTGAATAC GTTCCCGGGC CTTGTACACA CCGCCCGTCA CACCACGAGA GTTTGTAACA 1440 CCCGAAGTCG GTGAGGTAAC CTTTTAGGAG CCAGCCGCCG AAGGTGGGAC AGATGATTGG 1500 GGTGAAGTCG TAACAAGGTA GCCGTATCGG AAGGTGCGGC TGGATCACCT CCTTTCTAAG 1560 GATATTATAC GGAATATAAG ACCTTGGGGC TTATAAACAG AACGTTCCCT GTCTTGTTTA 1620 GTTTTGA 1627 <210> SEQ ID NO: 2 <211> 501 <212> RNA <213> Bacillus subtilis R 14 <400> 2 AAACTTAAAG GAATTGACGG GGGCCCGCAC AAGCGGTGGA GCATGTGGTT TAATTCGAAG 60 CAACGCGAAG AACCTTACCA GGTCTTGACA TCCTCTGACA ACTCTAGAGA TAGAGCGTTC 120 CCCTTCGGGG GACAGAGTGA CAGGTGGTGC ATGGTTGTCG TCAGCTCGTG TCGTGAGATG 180 TTGGGTTAAG TCCCGCAACG AGCGCAACCC TTGATCTTAG TTGCCAGCAT TTAGTTGGGC 240 ACTCTAAGGT GACTGCCGGT GACAAACCGG AGGAAGGTGG GGATGACGTC AAATCATCAT 300 GCCCCTTATG ACCTGGGCTA CACACGTGCT ACAATGGATG GTACAAAGGG CTGCAAGACC 360 GCGAGGTCAA GCCAATCCCA TAAAACCATT CTCAGTTCGG ATTGTAGGCT GCAACTCGCC 420 TACATGAAGC TGGAATCGCT AGTAATCGCG GATCAGCATG CCGCGGTAAA TACGTTCCCG 480 GGCCTTGCAC ACACCGCCCG T 501
【図１】本発明の桿菌Ｒ５株の細胞の透過型電子顕微鏡
写真である。
写真である。
【図２】Ｌ寒天培地上におけるＲ５株および対照株であ
るＭＩ １１３株のコロニーの形成を示す写真である。
るＭＩ １１３株のコロニーの形成を示す写真である。
【図３】Ｒ５株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子を含む約２．３
ｋｂのＢａｍＨＩＤＮＡフラグメントの制限酵素地図を
示す図である。
ｋｂのＢａｍＨＩＤＮＡフラグメントの制限酵素地図を
示す図である。
【図４】本発明の桿菌Ｒ５株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の
完全配列を示す図である。
完全配列を示す図である。
【図５】本発明の桿菌Ｒ５株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の
配列を、既存のデータベースにある配列と比較して算出
した相同性スコアを示す図である。
配列を、既存のデータベースにある配列と比較して算出
した相同性スコアを示す図である。
【図６】図７と併せて、本発明の桿菌Ｒ５株およびバチ
ルス・ズブチリスの１６ＳｒＲＮＡ配列を、比較のため
にアラインメントした図である。
ルス・ズブチリスの１６ＳｒＲＮＡ配列を、比較のため
にアラインメントした図である。
【図７】図６と合わせて、本発明の桿菌Ｒ５株およびバ
チルス・ズブチリスの１６ＳｒＲＮＡ配列を、比較のた
めにアラインメントした図である。図６の続きの配列を
示す図である。
チルス・ズブチリスの１６ＳｒＲＮＡ配列を、比較のた
めにアラインメントした図である。図６の続きの配列を
示す図である。
【図８】分離されたＲ３株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の配
列の一部を示す図である。
列の一部を示す図である。
【図９】分離されたＲ３株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の配
列を、既存のデータベースにある配列と比較して算出し
た相同性スコアを示す図である。
列を、既存のデータベースにある配列と比較して算出し
た相同性スコアを示す図である。
【図１０】分離されたＲ４株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の
配列の一部を示す図である。
配列の一部を示す図である。
【図１１】分離されたＲ４株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の
配列を、既存のデータベースにある配列と比較して算出
した相同性スコアを示す図である。
配列を、既存のデータベースにある配列と比較して算出
した相同性スコアを示す図である。
【図１２】分離されたＲ５、Ｒ９およびＲ１４株が生産
する菌体外酵素のプレートアッセイの結果を、寒天培地
上に形成されたコロニー形態とともに示す写真である。
する菌体外酵素のプレートアッセイの結果を、寒天培地
上に形成されたコロニー形態とともに示す写真である。
【図１３】Ｒ５株の培養上清液のＨＰＬＣにおけるクロ
マトグラムを示す図である。
マトグラムを示す図である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【書類名】 受託番号変更届
【整理番号】 Ｊ１９９４３２３９３
【提出日】 平成１２年８月２１日
【旧寄託機関の名称】 工業技術院生命工学工業技術研
究所 （国内寄託）
究所 （国内寄託）
【旧受託番号】 ＦＥＲＭ Ｐ−１７５１２
【新寄託機関の名称】 国際寄託当局
【新受託番号】 ＦＥＲＭ ＢＰ−７２７０
【書類名】 受託番号変更届
【整理番号】 Ｊ１９９４３２３９３
【旧寄託機関の名称】 工業技術院生命工学工業技術研
究所 （国内寄託）
究所 （国内寄託）
【旧受託番号】 ＦＥＲＭ Ｐ−１７５１３
【新寄託機関の名称】 国際寄託当局
【新受託番号】 ＦＥＲＭ ＢＰ−７２７１
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:125） Ｆターム(参考） 4B050 DD02 LL10 4B065 AA19X AC14 CA31 CA32 CA33 CA54 4D040 DD03 DD12
Claims (10)
- 【請求項１】 完全培地において、３０℃における世代
時間が３０分以下であるような増殖速度を示す桿菌であ
って、好気条件下で油脂分を分解する桿菌。 - 【請求項２】 プロテアーゼ、セルラーゼ、アミラー
ゼ、リパーゼ、および生物系界面活性剤からなる群から
選択される、油脂分分解促進物質を生産する、請求項１
に記載の桿菌。 - 【請求項３】 生物系界面活性剤を生産する、請求項２
に記載の桿菌。 - 【請求項４】 アミラーゼおよびリパーゼを生産する、
請求項２に記載の桿菌。 - 【請求項５】 セルラーゼを生産する、請求項２に記載
の桿菌。 - 【請求項６】 プロテアーゼおよびアミラーゼを生産す
る、請求項２に記載の桿菌。 - 【請求項７】 バチルス・ズブチリス FERM P−17512号
である、請求項１に記載の桿菌。 - 【請求項８】 バチルス・ズブチリス FERM P−17513号
である、請求項１に記載の桿菌。 - 【請求項９】 請求項１に記載の桿菌を含む微生物剤
と、該微生物剤に酸素を供給する手段とを備えた、排水
処理プロセス。 - 【請求項１０】 前記微生物剤が少なくとも２種以上の
桿菌を含む、請求項９に記載の排水処理プロセス。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23902099A JP2001061468A (ja) | 1999-08-25 | 1999-08-25 | 油脂分分解性桿菌およびそれを用いた排水処理プロセス |
| PCT/JP2000/005602 WO2001014524A1 (fr) | 1999-08-25 | 2000-08-21 | Bacille degradant les graisses et procede de traitement des eaux usees reposant sur l'utilisation de ce bacille |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23902099A JP2001061468A (ja) | 1999-08-25 | 1999-08-25 | 油脂分分解性桿菌およびそれを用いた排水処理プロセス |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001061468A true JP2001061468A (ja) | 2001-03-13 |
Family
ID=17038706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23902099A Withdrawn JP2001061468A (ja) | 1999-08-25 | 1999-08-25 | 油脂分分解性桿菌およびそれを用いた排水処理プロセス |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001061468A (ja) |
| WO (1) | WO2001014524A1 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004080903A1 (ja) * | 2003-03-10 | 2004-09-23 | Ip Bio Corporation | ノンスラッジ高速排水処理システム |
| JP2004267127A (ja) * | 2003-03-10 | 2004-09-30 | Kobelco Eco-Solutions Co Ltd | 新規微生物及びその微生物を用いた有機性固形物の処理方法 |
| JP2011110517A (ja) * | 2009-11-27 | 2011-06-09 | Parker Engineering Kk | 塗装ブース循環水の処理方法 |
| CN104830818A (zh) * | 2015-04-26 | 2015-08-12 | 常州大学 | 一种生产脂肪酶的新方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| CN114437961B (zh) * | 2021-12-24 | 2024-04-02 | 青岛尚德生物技术有限公司 | 一种降低水体表面张力的解淀粉芽孢杆菌复合菌剂及其应用 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2516894B2 (ja) * | 1992-03-31 | 1996-07-24 | 神奈川県 | 新規微生物およびそれを用いる原油の分解方法 |
| JP3192900B2 (ja) * | 1994-10-06 | 2001-07-30 | 三菱重工業株式会社 | 含油廃水の処理方法 |
| JP2787015B2 (ja) * | 1995-09-25 | 1998-08-13 | 泰則 松葉 | 油脂資化性細菌およびそれを使用した油脂の処理方法 |
| JPH09206066A (ja) * | 1996-01-30 | 1997-08-12 | Toyota Central Res & Dev Lab Inc | 分解菌および有機性廃棄物の分解方法 |
-
1999
- 1999-08-25 JP JP23902099A patent/JP2001061468A/ja not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-08-21 WO PCT/JP2000/005602 patent/WO2001014524A1/ja active Application Filing
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2001014524A1 (fr) | 2001-03-01 |
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|---|---|---|---|
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