JP2001054384A - シロイヌナズナ・δ１−ピロリン−５−カルボン酸合成酵素遺伝子のプロモーター。 - Google Patents
シロイヌナズナ・δ１−ピロリン−５−カルボン酸合成酵素遺伝子のプロモーター。Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 シロイヌナズナのＰ５ＣＳ遺伝子のプロモー
ターが水ストレスに対して遺伝子の発現を制御可能であ
ることを明らかにすること。 【解決手段】 シロイヌナズナのゲノミックライブラリ
ーをシロイヌナズナのＰ５ＣＳ遺伝子のｃＤＮＡをプロ
ーブにしてプラークハイブリダイゼーションによりスク
リーニングしポジティブクローンを得る。これをサブク
ローニングし、サイクルシーケンス法によって塩基配列
を決定する。次に、ＤＮＡ断片の長さを短くしたシリー
ズを作製し、各々をＧＵＳ遺伝子に連結しシロイヌナズ
ナに導入し、これらの遺伝子組換え植物を用いてＧＵＳ
活性を検定しプロモーターの活性部位を調べる。
ターが水ストレスに対して遺伝子の発現を制御可能であ
ることを明らかにすること。 【解決手段】 シロイヌナズナのゲノミックライブラリ
ーをシロイヌナズナのＰ５ＣＳ遺伝子のｃＤＮＡをプロ
ーブにしてプラークハイブリダイゼーションによりスク
リーニングしポジティブクローンを得る。これをサブク
ローニングし、サイクルシーケンス法によって塩基配列
を決定する。次に、ＤＮＡ断片の長さを短くしたシリー
ズを作製し、各々をＧＵＳ遺伝子に連結しシロイヌナズ
ナに導入し、これらの遺伝子組換え植物を用いてＧＵＳ
活性を検定しプロモーターの活性部位を調べる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、シロイヌナズナ・
Δ1−ピロリン−５−カルボン酸合成酵素（以後Ｐ５Ｃ
Ｓと略す）遺伝子のプロモーターに関するものであり、
遺伝子組換えを利用した植物の新品種の開発や有用物質
を生産させる培養細胞の改変に利用される。
Δ1−ピロリン−５−カルボン酸合成酵素（以後Ｐ５Ｃ
Ｓと略す）遺伝子のプロモーターに関するものであり、
遺伝子組換えを利用した植物の新品種の開発や有用物質
を生産させる培養細胞の改変に利用される。
【０００２】
【従来の技術】植物が高塩ストレスを受けるとその体内
にプロリンを蓄積することが塩生植物を含む多くの植物
で知られている。このことから、蓄積されたプロリンは
植物体内の水分保持に役立っていると考えられている。
にプロリンを蓄積することが塩生植物を含む多くの植物
で知られている。このことから、蓄積されたプロリンは
植物体内の水分保持に役立っていると考えられている。
【０００３】植物におけるプロリンはＰ５ＣＳとΔ1−
ピロリン−５−カルボン酸レダクターゼ（以後Ｐ５ＣＲ
と略す）の２つの酵素によってグルタミン酸から合成さ
れる。体内にプロリンを蓄積している植物では、高塩ス
トレスや乾燥ストレスなどの水ストレス（水を吸収しに
くい状態）を受けるとＰ５ＣＳ活性及びＰ５ＣＳ遺伝子
の発現レベルが上昇するが、Ｐ５ＣＲ活性及びＰ５ＣＲ
遺伝子発現レベルはほとんど一定で、低いレベルにあ
る。このことから水ストレス時のプロリン合成には、Ｐ
５ＣＳが律速となっていると考えられる（Yoshibaら Pl
ant J. 7:751-760(1995)）。更に、このＰ５ＣＳ遺伝子
は乾燥や高塩といった水ストレスばかりではなく、植物
ホルモンの１つであるアブシジン酸（ＡＢＡ）処理によ
っても発現が誘導される。また、ストレスが解除されれ
ばＰ５ＣＳ遺伝子の発現は抑制される（Yoshibaら Plan
t Cell Physiol. 38:1095-1102(1997)）。
ピロリン−５−カルボン酸レダクターゼ（以後Ｐ５ＣＲ
と略す）の２つの酵素によってグルタミン酸から合成さ
れる。体内にプロリンを蓄積している植物では、高塩ス
トレスや乾燥ストレスなどの水ストレス（水を吸収しに
くい状態）を受けるとＰ５ＣＳ活性及びＰ５ＣＳ遺伝子
の発現レベルが上昇するが、Ｐ５ＣＲ活性及びＰ５ＣＲ
遺伝子発現レベルはほとんど一定で、低いレベルにあ
る。このことから水ストレス時のプロリン合成には、Ｐ
５ＣＳが律速となっていると考えられる（Yoshibaら Pl
ant J. 7:751-760(1995)）。更に、このＰ５ＣＳ遺伝子
は乾燥や高塩といった水ストレスばかりではなく、植物
ホルモンの１つであるアブシジン酸（ＡＢＡ）処理によ
っても発現が誘導される。また、ストレスが解除されれ
ばＰ５ＣＳ遺伝子の発現は抑制される（Yoshibaら Plan
t Cell Physiol. 38:1095-1102(1997)）。
【０００４】従来用いられてきた植物用ベクター系のプ
ロモーターはカリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭ
Ｖ）の遺伝子由来のプロモーターか、土壌微生物である
アグロバクテリウム・ツメファシエンスのＴｉプラスミ
ドの遺伝子由来のプロモーターである。これらのプロモ
ーターは、導入した遺伝子を植物内で効率良く発現させ
るためのプロモーターとして使用されてきた。
ロモーターはカリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭ
Ｖ）の遺伝子由来のプロモーターか、土壌微生物である
アグロバクテリウム・ツメファシエンスのＴｉプラスミ
ドの遺伝子由来のプロモーターである。これらのプロモ
ーターは、導入した遺伝子を植物内で効率良く発現させ
るためのプロモーターとして使用されてきた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】現在、植物細胞に遺伝
子を導入する技術は完成されている。それとともに、こ
の導入された遺伝子を効率良く発現させるためのプロモ
ーターが開発、使用されている。上述の、植物用ベクタ
ー系のプロモーターはこの例を示すものである。図１
（ａ）は、これを一般的な模式的として示す図であり、
導入された遺伝子１００にプロモーター１０１が結合さ
れ、プロモーター１０１により遺伝子１００の発現が誘
導されることを示す。
子を導入する技術は完成されている。それとともに、こ
の導入された遺伝子を効率良く発現させるためのプロモ
ーターが開発、使用されている。上述の、植物用ベクタ
ー系のプロモーターはこの例を示すものである。図１
（ａ）は、これを一般的な模式的として示す図であり、
導入された遺伝子１００にプロモーター１０１が結合さ
れ、プロモーター１０１により遺伝子１００の発現が誘
導されることを示す。
【０００６】しかしながら、これらのプロモーターは遺
伝子導入後の植物の生育時期や植物部位に関係なく常に
遺伝子を発現させるものであった。一方、実際の植物育
種の面からみると、絶えず遺伝子を発現させている必要
はなく、逆に、このことが不都合な場合も多い。そこ
で、プロモーターが遺伝子の発現を所望の条件に対応し
て制御することが可能であれば、実際の植物育種の面で
大変好都合なものとなる。すなわち、生育時期特異的な
プロモーター、組織特異的なプロモーター、あるいは、
外部環境に応答するプロモーターとして機能するプロモ
ーターとできれば、下流に連結した遺伝子の発現を人為
的に制御することが可能となり、必要なときにのみ必要
な機能の遺伝子の発現をさせることができる。もちろ
ん、これらのプロモーターを組み合わせて、その下流に
ある遺伝子群の発現を制御することができる。
伝子導入後の植物の生育時期や植物部位に関係なく常に
遺伝子を発現させるものであった。一方、実際の植物育
種の面からみると、絶えず遺伝子を発現させている必要
はなく、逆に、このことが不都合な場合も多い。そこ
で、プロモーターが遺伝子の発現を所望の条件に対応し
て制御することが可能であれば、実際の植物育種の面で
大変好都合なものとなる。すなわち、生育時期特異的な
プロモーター、組織特異的なプロモーター、あるいは、
外部環境に応答するプロモーターとして機能するプロモ
ーターとできれば、下流に連結した遺伝子の発現を人為
的に制御することが可能となり、必要なときにのみ必要
な機能の遺伝子の発現をさせることができる。もちろ
ん、これらのプロモーターを組み合わせて、その下流に
ある遺伝子群の発現を制御することができる。
【０００７】図１（ｂ）〜（ｅ）はこのことを模式的に
示す図であり、（ｂ）は遺伝子１０２に外部環境に応答
するプロモーター１０３を連結した状態を、（ｃ）は遺
伝子１０４に組織特異的なプロモーター１０５を連結し
た状態を、（ｄ）は遺伝子１０６に生育時期特異的なプ
ロモーター１０７を連結した状態をそれぞれ示し、さら
に、（ｅ）は遺伝子１０２、１０４および１０６をそれ
ぞれ連結した状態で導入し、これの上流に、それぞれの
特異的なプロモーター１０３、１０５および１０７のそ
れぞれを連結した状態を示す。
示す図であり、（ｂ）は遺伝子１０２に外部環境に応答
するプロモーター１０３を連結した状態を、（ｃ）は遺
伝子１０４に組織特異的なプロモーター１０５を連結し
た状態を、（ｄ）は遺伝子１０６に生育時期特異的なプ
ロモーター１０７を連結した状態をそれぞれ示し、さら
に、（ｅ）は遺伝子１０２、１０４および１０６をそれ
ぞれ連結した状態で導入し、これの上流に、それぞれの
特異的なプロモーター１０３、１０５および１０７のそ
れぞれを連結した状態を示す。
【０００８】このような観点から、本発明は、Ｐ５ＣＳ
遺伝子のプロモーターを用いて、外部環境が悪化した場
合には遺伝子発現のスイッチが入り、外部環境が正常に
戻れば遺伝子発現のスイッチが切れるような、外部環境
に応答するプロモーターを実現することを目的とする。
本発明の提案するＰ５ＣＳ遺伝子のプローモーターによ
り、これに連結した有用な遺伝子（環境ストレスに抵抗
性を付与する遺伝子群）の発現を誘導したり、抑制した
りすることが可能となる。従って、地球環境の変化に伴
って有用作物の環境ストレス耐性をコントロールするこ
とができる。さらに、Ｐ５ＣＳ遺伝子のプロモーターに
植物組織を着色するような遺伝子を連結しておけば外部
環境に応答して悪化の状態をモニターすることも可能と
なり、環境ストレスに対するセンサー植物の作出にも有
効であることが期待できる。
遺伝子のプロモーターを用いて、外部環境が悪化した場
合には遺伝子発現のスイッチが入り、外部環境が正常に
戻れば遺伝子発現のスイッチが切れるような、外部環境
に応答するプロモーターを実現することを目的とする。
本発明の提案するＰ５ＣＳ遺伝子のプローモーターによ
り、これに連結した有用な遺伝子（環境ストレスに抵抗
性を付与する遺伝子群）の発現を誘導したり、抑制した
りすることが可能となる。従って、地球環境の変化に伴
って有用作物の環境ストレス耐性をコントロールするこ
とができる。さらに、Ｐ５ＣＳ遺伝子のプロモーターに
植物組織を着色するような遺伝子を連結しておけば外部
環境に応答して悪化の状態をモニターすることも可能と
なり、環境ストレスに対するセンサー植物の作出にも有
効であることが期待できる。
【０００９】
【課題を解決するための手段】植物が乾燥や高塩ストレ
スのような水ストレス（水が吸収しにくくなるストレ
ス）を受けると、その細胞内にアミノ酸の一つであるプ
ロリンを蓄積することが知られている。このプロリンは
Ｐ５ＣＳ（シロイヌナズナ・Δ1−ピロリン−５−カル
ボン酸合成酵素）と、Ｐ５ＣＲ（Δ1−ピロリン−５−
カルボン酸レダクターゼ）という２つの酵素により合成
され、特に外部から水ストレスを受けた場合、Ｐ５ＣＳ
が律速となっていることが知られている。また、このＰ
５ＣＳ遺伝子は乾燥や高塩といった水ストレスと外部か
ら植物ホルモンであるＡＢＡを与えると速やかに遺伝子
が発現し、またこれらのストレスあるいは処理を解除す
ると速やかに遺伝子の発現が抑制されることが知られて
いる。
スのような水ストレス（水が吸収しにくくなるストレ
ス）を受けると、その細胞内にアミノ酸の一つであるプ
ロリンを蓄積することが知られている。このプロリンは
Ｐ５ＣＳ（シロイヌナズナ・Δ1−ピロリン−５−カル
ボン酸合成酵素）と、Ｐ５ＣＲ（Δ1−ピロリン−５−
カルボン酸レダクターゼ）という２つの酵素により合成
され、特に外部から水ストレスを受けた場合、Ｐ５ＣＳ
が律速となっていることが知られている。また、このＰ
５ＣＳ遺伝子は乾燥や高塩といった水ストレスと外部か
ら植物ホルモンであるＡＢＡを与えると速やかに遺伝子
が発現し、またこれらのストレスあるいは処理を解除す
ると速やかに遺伝子の発現が抑制されることが知られて
いる。
【００１０】そこで、本願の発明者はこのＰ５ＣＳ遺伝
子のプロモーターを利用することで、外部環境によっ
て、遺伝子発現の誘導を行えるのではないか、すなわち
環境ストレスを植物に与えたり、解除したり等人為的に
遺伝子発現を制御できるのではないかと考え、Ｐ５ＣＳ
遺伝子のプロモーターを含むゲノムＤＮＡを単離し、解
析を行った。
子のプロモーターを利用することで、外部環境によっ
て、遺伝子発現の誘導を行えるのではないか、すなわち
環境ストレスを植物に与えたり、解除したり等人為的に
遺伝子発現を制御できるのではないかと考え、Ｐ５ＣＳ
遺伝子のプロモーターを含むゲノムＤＮＡを単離し、解
析を行った。
【００１１】そして、このプロモーター部分を切り出し
大腸菌由来のβ−グルクロニダーゼ遺伝子に連結し、こ
のキメラ遺伝子を植物に導入した。遺伝子を導入された
植物体は、乾燥ストレス、高塩ストレス及びＡＢＡ処理
することによってβ−グルクロニダーゼ遺伝子が発現す
ることが確認できた。
大腸菌由来のβ−グルクロニダーゼ遺伝子に連結し、こ
のキメラ遺伝子を植物に導入した。遺伝子を導入された
植物体は、乾燥ストレス、高塩ストレス及びＡＢＡ処理
することによってβ−グルクロニダーゼ遺伝子が発現す
ることが確認できた。
【００１２】従って、Ｐ５ＣＳ遺伝子のプロモーターは
水ストレスによって遺伝子発現の誘導がかけられること
を確認し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発
明はＰ５ＣＳ遺伝子のプロモーターを含むＤＮＡ断片を
提供する。さらに、本発明は、上記発明のＤＮＡ断片を
含む植物用ベクターを提供する。
水ストレスによって遺伝子発現の誘導がかけられること
を確認し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発
明はＰ５ＣＳ遺伝子のプロモーターを含むＤＮＡ断片を
提供する。さらに、本発明は、上記発明のＤＮＡ断片を
含む植物用ベクターを提供する。
【００１３】
【発明の実施の形態】上述のように、本発明のＤＮＡ断
片は、Ｐ５ＣＳ遺伝子のプロモーターを含む。該プロモ
ーターの由来は特に限定されないが、配列表の配列１に
示す実施例においては、シロイヌナズナのＰ５ＣＳ遺伝
子断片が単離され、プロモーター部分を含めて開示され
ている。
片は、Ｐ５ＣＳ遺伝子のプロモーターを含む。該プロモ
ーターの由来は特に限定されないが、配列表の配列１に
示す実施例においては、シロイヌナズナのＰ５ＣＳ遺伝
子断片が単離され、プロモーター部分を含めて開示され
ている。
【００１４】配列表の配列１は、単離されたＰ５ＣＳ遺
伝子の第１エクソンを含むプロモーター領域のゲノムＤ
ＮＡの塩基配列を示す。
伝子の第１エクソンを含むプロモーター領域のゲノムＤ
ＮＡの塩基配列を示す。
【００１５】本発明では、説明の便宜上、配列表の配列
１に示すゲノムＤＮＡの塩基配列を、その機能に着目し
て番号を付け直したものを図２および図３に示す。図２
および図３は一連のものであるが、図の表示領域が狭い
ので、上流部とその下流部の二つに分割したものであ
る。図の配列において、＋１番目の塩基はＰ５ＣＳ遺伝
子の転写開始点を、＋１２４番目のａｔｇはＰ５ＣＳタ
ンパク質の第１番目のアミノ酸をコードする塩基配列を
表す。遺伝子の転写に必要な要素であるＴＡＴＡボック
スは−３０に認められる。−８６には、植物ホルモンで
あるＡＢＡに応答するシス配列（ＡＢＲＥ）が存在す
る。また、転写因子（ＭＹＣ及びＭＹＢ）の結合が予想
される配列やシス配列（ＣＣＡＡＴ）も存在することが
認められた。本実施例では、配列表の配列１に示される
塩基配列の第−１０６４番目から＋７０番目の塩基配列
を有するＤＮＡ断片をベクターに組み込んで該ＤＮＡ断
片の下流に存在する外来遺伝子の発現に成功している。
１に示すゲノムＤＮＡの塩基配列を、その機能に着目し
て番号を付け直したものを図２および図３に示す。図２
および図３は一連のものであるが、図の表示領域が狭い
ので、上流部とその下流部の二つに分割したものであ
る。図の配列において、＋１番目の塩基はＰ５ＣＳ遺伝
子の転写開始点を、＋１２４番目のａｔｇはＰ５ＣＳタ
ンパク質の第１番目のアミノ酸をコードする塩基配列を
表す。遺伝子の転写に必要な要素であるＴＡＴＡボック
スは−３０に認められる。−８６には、植物ホルモンで
あるＡＢＡに応答するシス配列（ＡＢＲＥ）が存在す
る。また、転写因子（ＭＹＣ及びＭＹＢ）の結合が予想
される配列やシス配列（ＣＣＡＡＴ）も存在することが
認められた。本実施例では、配列表の配列１に示される
塩基配列の第−１０６４番目から＋７０番目の塩基配列
を有するＤＮＡ断片をベクターに組み込んで該ＤＮＡ断
片の下流に存在する外来遺伝子の発現に成功している。
【００１６】図４は、本実施例のＤＮＡ断片を上流
（５'側）から削ったＤＮＡ断片のシリーズを作製しそ
れぞれをベクターに連結して下流に存在する外来遺伝子
の発現を調べた結果を示す図である。図は左側にＤＮＡ
断片を上流から削ったＤＮＡ断片の状態を示し、右側に
下流に存在する外来遺伝子の発現を示す。ここで、左側
で示す数字は図２、図３に示す配列において、＋１番目
の塩基を基点として計数した塩基の位置を示す。また、
シス配列（ＣＣＡＡＴ）、転写因子（ＭＹＣ及びＭＹ
Ｂ）、ＡＢＡに応答するシス配列（ＡＢＲＥ）およびＴ
ＡＴＡボックスの位置をそれぞれ塗りつぶしの角、塗り
つぶしおよび白抜きの丸、白抜きの角および縦棒で示
す。また、右側の白抜きの棒グラフで示すのは乾燥処理
区における発現量を示し、ハッチングを付した棒グラフ
で示すのは対照区における発現量を示す。最上段が本実
施例における外来遺伝子の発現を示す。次段が本実施例
の、５'側から、−６２１番目の塩基まで削った配列お
ける外来遺伝子の発現を示す。第３段が本実施例の、
５'側から、−５０４番目の塩基まで削った配列おける
外来遺伝子の発現を示す。第４段以降、それぞれ、５'
側から、表示されている番目の塩基まで削った配列おけ
る外来遺伝子の発現を示す。
（５'側）から削ったＤＮＡ断片のシリーズを作製しそ
れぞれをベクターに連結して下流に存在する外来遺伝子
の発現を調べた結果を示す図である。図は左側にＤＮＡ
断片を上流から削ったＤＮＡ断片の状態を示し、右側に
下流に存在する外来遺伝子の発現を示す。ここで、左側
で示す数字は図２、図３に示す配列において、＋１番目
の塩基を基点として計数した塩基の位置を示す。また、
シス配列（ＣＣＡＡＴ）、転写因子（ＭＹＣ及びＭＹ
Ｂ）、ＡＢＡに応答するシス配列（ＡＢＲＥ）およびＴ
ＡＴＡボックスの位置をそれぞれ塗りつぶしの角、塗り
つぶしおよび白抜きの丸、白抜きの角および縦棒で示
す。また、右側の白抜きの棒グラフで示すのは乾燥処理
区における発現量を示し、ハッチングを付した棒グラフ
で示すのは対照区における発現量を示す。最上段が本実
施例における外来遺伝子の発現を示す。次段が本実施例
の、５'側から、−６２１番目の塩基まで削った配列お
ける外来遺伝子の発現を示す。第３段が本実施例の、
５'側から、−５０４番目の塩基まで削った配列おける
外来遺伝子の発現を示す。第４段以降、それぞれ、５'
側から、表示されている番目の塩基まで削った配列おけ
る外来遺伝子の発現を示す。
【００１７】第２段目と第３段目の外来遺伝子の発現を
対比して明らかなように、−６２５番目の塩基まで削っ
た配列では外来遺伝子の発現が見られたが、−５０４番
目の塩基まで削った配列では外来遺伝子の発現がほとん
どなくなった。このことから−６２５〜−５０４の間の
１１７ｂｐ（塩基対）にプロモーターの活性があること
が認められた。
対比して明らかなように、−６２５番目の塩基まで削っ
た配列では外来遺伝子の発現が見られたが、−５０４番
目の塩基まで削った配列では外来遺伝子の発現がほとん
どなくなった。このことから−６２５〜−５０４の間の
１１７ｂｐ（塩基対）にプロモーターの活性があること
が認められた。
【００１８】従って、本発明のプロモーター配列は少な
くとも、このＤＮＡ断片中に完全に含まれていることは
明らかである。
くとも、このＤＮＡ断片中に完全に含まれていることは
明らかである。
【００１９】本発明はさらに、上記本発明のＤＮＡ断片
を含む植物細胞用ベクターを提供する。本発明のベクタ
ーは、宿主細胞内で自律的に複製するための複製開始点
と、好ましくは例えば薬剤耐性のような適当なマーカー
を有するプラスミドに上記発明のＤＮＡ断片を組み込む
ことによって得ることができる。
を含む植物細胞用ベクターを提供する。本発明のベクタ
ーは、宿主細胞内で自律的に複製するための複製開始点
と、好ましくは例えば薬剤耐性のような適当なマーカー
を有するプラスミドに上記発明のＤＮＡ断片を組み込む
ことによって得ることができる。
【００２０】このようなプラスミドとしては、植物用ベ
クターとして公知なもの、例えばｐＢＩ１０１、ｐＢＩ
１２１、ｐＢＩ２２１（クローンテック社製）を用いる
ことができ、このような公知のベクターのクローニング
部位に本発明のＤＮＡ断片を組み込むことによって、本
発明のベクターを得ることができる。下記実施例におい
ては、図２、図３に示す配列の−１０６４番目から＋７
０番目の塩基配列を有する断片を上記ｐＢＩ１０１のＨ
ｉｎｄIII−ＢａｍＨＩ消化物中に組み込むことによっ
て本発明のベクターを構築した。
クターとして公知なもの、例えばｐＢＩ１０１、ｐＢＩ
１２１、ｐＢＩ２２１（クローンテック社製）を用いる
ことができ、このような公知のベクターのクローニング
部位に本発明のＤＮＡ断片を組み込むことによって、本
発明のベクターを得ることができる。下記実施例におい
ては、図２、図３に示す配列の−１０６４番目から＋７
０番目の塩基配列を有する断片を上記ｐＢＩ１０１のＨ
ｉｎｄIII−ＢａｍＨＩ消化物中に組み込むことによっ
て本発明のベクターを構築した。
【００２１】本発明のベクターにおいては、上記本発明
のＤＮＡ断片の下流に所望のタンパク質をコードする構
造遺伝子が組み込まれている。下記実施例においては、
構造遺伝子としてβ−グルクロニダーゼ遺伝子が挿入さ
れたベクターＰ５ＣＳ−Ｐｒｏ／ＧＵＳが得られてい
る。
のＤＮＡ断片の下流に所望のタンパク質をコードする構
造遺伝子が組み込まれている。下記実施例においては、
構造遺伝子としてβ−グルクロニダーゼ遺伝子が挿入さ
れたベクターＰ５ＣＳ−Ｐｒｏ／ＧＵＳが得られてい
る。
【００２２】次に、上記本発明のＤＮＡ断片及びベクタ
ーの調整方法をシロイヌナズナを例にとって説明する。
尚、本発明のＤＮＡ断片の調整方法は下記のものに限定
されるものではない。
ーの調整方法をシロイヌナズナを例にとって説明する。
尚、本発明のＤＮＡ断片の調整方法は下記のものに限定
されるものではない。
【００２３】先ず、シロイヌナズナのゲノミックライブ
ラリー（クローンテック社製）をシロイヌナズナのＰ５
ＣＳ遺伝子のｃＤＮＡをプローブとしてスクリーニング
し、シロイヌナズナのＰ５ＣＳ遺伝子のプロモーター領
域を含むＤＮＡ断片を単離することができる。
ラリー（クローンテック社製）をシロイヌナズナのＰ５
ＣＳ遺伝子のｃＤＮＡをプローブとしてスクリーニング
し、シロイヌナズナのＰ５ＣＳ遺伝子のプロモーター領
域を含むＤＮＡ断片を単離することができる。
【００２４】プロモーターとしての活性についての検討
は以下のような実験を行えばよい。例えば、プロモータ
ー活性を持つと考えられる部分をβ−グルクロニダーゼ
（ＧＵＳ）遺伝子の５’側上流に接続する。ＧＵＳは本
来植物には存在せず、４−メチルウンベリフェロン（４
−ＭＵ）にグルクロン酸が結合した４−ＭＵＧを基質と
して反応し、その反応生成物４−ＭＵが強い蛍光を発す
ることにより定量できる(Richardら EMBO J. 6:3901-3
907(1989))。Ｐ５ＣＳ遺伝子のプロモーターとＧＵＳ遺
伝子を組み込んだ組換えプラスミドをシロイヌナズナの
開花直後の花にアグロバクテリウムを介してバキューム
・トランスフォーメーション法（BechtoldらCR Acad. S
ci. Ser. III Sci. Vie. 316:1194-1199(1993))により
導入する。導入した植物は種をつけるまで生育させ、得
られた種をベクターの選抜マーカーである薬剤入り培地
に播種して発芽してくる個体を選抜すればよい。
は以下のような実験を行えばよい。例えば、プロモータ
ー活性を持つと考えられる部分をβ−グルクロニダーゼ
（ＧＵＳ）遺伝子の５’側上流に接続する。ＧＵＳは本
来植物には存在せず、４−メチルウンベリフェロン（４
−ＭＵ）にグルクロン酸が結合した４−ＭＵＧを基質と
して反応し、その反応生成物４−ＭＵが強い蛍光を発す
ることにより定量できる(Richardら EMBO J. 6:3901-3
907(1989))。Ｐ５ＣＳ遺伝子のプロモーターとＧＵＳ遺
伝子を組み込んだ組換えプラスミドをシロイヌナズナの
開花直後の花にアグロバクテリウムを介してバキューム
・トランスフォーメーション法（BechtoldらCR Acad. S
ci. Ser. III Sci. Vie. 316:1194-1199(1993))により
導入する。導入した植物は種をつけるまで生育させ、得
られた種をベクターの選抜マーカーである薬剤入り培地
に播種して発芽してくる個体を選抜すればよい。
【００２５】個体の選抜は、例えば、本発明のプロモー
ター含有ＤＮＡ断片をＧＵＳ遺伝子を有するｐＢＩ１０
１に組み込んだ場合には、ｐＢＩ１０１のカナマイシン
耐性に基づいて選抜することができる。つまり、ｐＢＩ
１０１にはＮＰＴII遺伝子も含まれており、この酵素が
合成されると抗生物質であるカナマイシンに対して耐性
となる。従って、カナマイシン存在下で生育できる（発
芽する）植物はＰ５ＣＳ遺伝子プロモーターとＧＵＳ遺
伝子のキメラ遺伝子を持つ可能性が高くなる。このよう
にして得られた植物に乾燥ストレスや高塩ストレスを与
えると植物体全体にＧＵＳ遺伝子が発現する。
ター含有ＤＮＡ断片をＧＵＳ遺伝子を有するｐＢＩ１０
１に組み込んだ場合には、ｐＢＩ１０１のカナマイシン
耐性に基づいて選抜することができる。つまり、ｐＢＩ
１０１にはＮＰＴII遺伝子も含まれており、この酵素が
合成されると抗生物質であるカナマイシンに対して耐性
となる。従って、カナマイシン存在下で生育できる（発
芽する）植物はＰ５ＣＳ遺伝子プロモーターとＧＵＳ遺
伝子のキメラ遺伝子を持つ可能性が高くなる。このよう
にして得られた植物に乾燥ストレスや高塩ストレスを与
えると植物体全体にＧＵＳ遺伝子が発現する。
【００２６】従って、本発明によるＰ５ＣＳ遺伝子のプ
ロモーターを利用することにより、外部から環境ストレ
ス（特に水ストレス）が与えられたときにのみ、遺伝子
の発現を誘導することができる。また、若い組織に特に
強く発現することから一般的に若い組織はストレスに弱
いとされているので、この若い組織をストレスから守る
ための外来遺伝子を連結すれば効率良く環境ストレスに
対して耐性を付与できる可能性も示唆された。
ロモーターを利用することにより、外部から環境ストレ
ス（特に水ストレス）が与えられたときにのみ、遺伝子
の発現を誘導することができる。また、若い組織に特に
強く発現することから一般的に若い組織はストレスに弱
いとされているので、この若い組織をストレスから守る
ための外来遺伝子を連結すれば効率良く環境ストレスに
対して耐性を付与できる可能性も示唆された。
【００２７】実施例 本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明の実
施例はこれらに限られるものではない。尚、下記実施例
においては、特に断らない限り、各操作はSambrookらMo
lecular Cloning Cold Spring Harbor Laboratory Pres
s (1989)に記載された方法に基づいて行った。
施例はこれらに限られるものではない。尚、下記実施例
においては、特に断らない限り、各操作はSambrookらMo
lecular Cloning Cold Spring Harbor Laboratory Pres
s (1989)に記載された方法に基づいて行った。
【００２８】先ず、シロイヌナズナのゲノミックライブ
ラリー（クローンテック社製）を既に単離したシロイヌ
ナズナのＰ５ＣＳ遺伝子のｃＤＮＡ（Yoshibaら Plant
J. 7:751-760(1995)）をプローブにしてプラークハイブ
リダイゼーションによりスクリーニングし７つのポジテ
ィブクローンを得た。これらの単離したクローンはＥｃ
ｏＲIとＨｉｎｄIIIの制限酵素処理により小さなＤＮＡ
断片にした。
ラリー（クローンテック社製）を既に単離したシロイヌ
ナズナのＰ５ＣＳ遺伝子のｃＤＮＡ（Yoshibaら Plant
J. 7:751-760(1995)）をプローブにしてプラークハイブ
リダイゼーションによりスクリーニングし７つのポジテ
ィブクローンを得た。これらの単離したクローンはＥｃ
ｏＲIとＨｉｎｄIIIの制限酵素処理により小さなＤＮＡ
断片にした。
【００２９】これらをｐＳＫ−ベクターにサブクローニ
ングし、サイクルシーケンスによって塩基配列を決定し
たところＰ５ＣＳ遺伝子の第一エクソンを３’端に持つ
３４９２塩基対のＤＮＡ断片を得た。配列表の配列１に
示したものがそのＰ５ＣＳ遺伝子の第一エクソンを含む
そのプロモーター領域の塩基配列である。
ングし、サイクルシーケンスによって塩基配列を決定し
たところＰ５ＣＳ遺伝子の第一エクソンを３’端に持つ
３４９２塩基対のＤＮＡ断片を得た。配列表の配列１に
示したものがそのＰ５ＣＳ遺伝子の第一エクソンを含む
そのプロモーター領域の塩基配列である。
【００３０】次に、Ｐ５ＣＳ遺伝子のプロモーターの活
性を検討するためにＰ５ＣＳ遺伝子のプロモーター部位
をＰＣＲ法で増幅し、ＧＵＳ遺伝子に接続した。すなわ
ち、図２、図３に示す配列の−１０６４番目から＋７０
番目までの部分（合計１１３４塩基対）に対して５’端
にはＨｉｎｄIIIを、３’端にはＢａｍＨＩの制限酵素
認識部位を付けたプライマーによりＰＣＲにより増幅
し、ｐＢＩ１０１のＨｉｎｄIII部位とＢａｍＨＩ部位
をそれぞれ制限酵素で切断し、この部分に上記Ｐ５ＣＳ
遺伝子のプロモーター含有断片Ｐ５ＣＳ−Ｐｒｏを接続
してプラスミドＰ５ＣＳ−Ｐｒｏ／ＧＵＳを得た。得ら
れたプラスミドＰ５ＣＳ−Ｐｒｏ／ＧＵＳの部分遺伝子
地図を図５に示す。
性を検討するためにＰ５ＣＳ遺伝子のプロモーター部位
をＰＣＲ法で増幅し、ＧＵＳ遺伝子に接続した。すなわ
ち、図２、図３に示す配列の−１０６４番目から＋７０
番目までの部分（合計１１３４塩基対）に対して５’端
にはＨｉｎｄIIIを、３’端にはＢａｍＨＩの制限酵素
認識部位を付けたプライマーによりＰＣＲにより増幅
し、ｐＢＩ１０１のＨｉｎｄIII部位とＢａｍＨＩ部位
をそれぞれ制限酵素で切断し、この部分に上記Ｐ５ＣＳ
遺伝子のプロモーター含有断片Ｐ５ＣＳ−Ｐｒｏを接続
してプラスミドＰ５ＣＳ−Ｐｒｏ／ＧＵＳを得た。得ら
れたプラスミドＰ５ＣＳ−Ｐｒｏ／ＧＵＳの部分遺伝子
地図を図５に示す。
【００３１】さらに、本プロモーターの活性部位を決め
るため、ＤＮＡ断片の長さを短くしたシリーズを作製
し、各々をＧＵＳ遺伝子に連結しシロイヌナズナに導入
した。これらの遺伝子組換え植物を用いて、ＧＵＳ活性
を検定した。
るため、ＤＮＡ断片の長さを短くしたシリーズを作製
し、各々をＧＵＳ遺伝子に連結しシロイヌナズナに導入
した。これらの遺伝子組換え植物を用いて、ＧＵＳ活性
を検定した。
【００３２】図４には、先にも述べたように、導入した
プロモーター含有ＤＮＡ断片の長さ（図４左側）に応じ
たＧＵＳ活性（図４右側）が示されている。ＧＵＳ活性
は無菌的に育てた抽台前の各遺伝子組換えシロイヌナズ
ナを培地から根を痛めないように抜取り、濾紙上に置
き、２４時間乾燥させ、これを材料にＲｉｃｈａｒｄら
の方法に従ってＧＵＳ活性を測定した。具体的には、Ｇ
ＵＳ遺伝子の産物である酵素が４ＭＵＧを分解した産物
の４ＭＵの蛍光強度を測定することになる。
プロモーター含有ＤＮＡ断片の長さ（図４左側）に応じ
たＧＵＳ活性（図４右側）が示されている。ＧＵＳ活性
は無菌的に育てた抽台前の各遺伝子組換えシロイヌナズ
ナを培地から根を痛めないように抜取り、濾紙上に置
き、２４時間乾燥させ、これを材料にＲｉｃｈａｒｄら
の方法に従ってＧＵＳ活性を測定した。具体的には、Ｇ
ＵＳ遺伝子の産物である酵素が４ＭＵＧを分解した産物
の４ＭＵの蛍光強度を測定することになる。
【００３３】図４の結果から、本プロモーターの活性の
ある部位は−６２１番目の塩基から−５０４番目の塩基
の間にあることが示唆される。
ある部位は−６２１番目の塩基から−５０４番目の塩基
の間にあることが示唆される。
【００３４】検証例 図６は本発明のプロモータによるＧＵＳ遺伝子の発現を
検証した写真である。この例は、配列表の配列１の−１
０６４番目から＋７０番目の塩基配列を持つプロモータ
ーを連結したプラスミドＰ５ＣＳ−Ｐｒｏ／ＧＵＳを導
入したシロイヌナズナについて検証したものである。参
照符号Ａを付したものはの乾燥未処理の個体を、参照符
号Ｂを付したものは乾燥処理を２４時間行った個体を、
それぞれ、Jeffersonらの方法（EMBO J. 6:3209-3212
(1987)）に従って５−ブロモ−４−クロロ−３−インド
リルグルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）によりＧＵＳの発現
している部位を青色に染色し検出したものである。図で
は、色が着いていないため、濃淡でしか分からないが、
Ａに示す乾燥未処理のものに比べ、Ｂに示す乾燥処理し
たものは植物体全体が青く染まり、ＧＵＳ遺伝子が発現
していることがわかる。この発現が、若い葉や根におい
て強く出ていることは注目に値する。すなわち、若い組
織に強く発現が見られることから、ストレス耐性遺伝子
を連結しておけば有用作物を環境ストレスから効率良く
保護することができ、しかも悪環境下でも栽培できる作
物の作出が可能性となる。
検証した写真である。この例は、配列表の配列１の−１
０６４番目から＋７０番目の塩基配列を持つプロモータ
ーを連結したプラスミドＰ５ＣＳ−Ｐｒｏ／ＧＵＳを導
入したシロイヌナズナについて検証したものである。参
照符号Ａを付したものはの乾燥未処理の個体を、参照符
号Ｂを付したものは乾燥処理を２４時間行った個体を、
それぞれ、Jeffersonらの方法（EMBO J. 6:3209-3212
(1987)）に従って５−ブロモ−４−クロロ−３−インド
リルグルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）によりＧＵＳの発現
している部位を青色に染色し検出したものである。図で
は、色が着いていないため、濃淡でしか分からないが、
Ａに示す乾燥未処理のものに比べ、Ｂに示す乾燥処理し
たものは植物体全体が青く染まり、ＧＵＳ遺伝子が発現
していることがわかる。この発現が、若い葉や根におい
て強く出ていることは注目に値する。すなわち、若い組
織に強く発現が見られることから、ストレス耐性遺伝子
を連結しておけば有用作物を環境ストレスから効率良く
保護することができ、しかも悪環境下でも栽培できる作
物の作出が可能性となる。
【００３５】同様に高塩処理（２５０ｍＭ ＮａＣｌ水
溶液に植物を浸ける処理）やＡＢＡ処理（１００＝のＡ
ＢＡ水溶液に浸ける処理）によっても乾燥処理と同じよ
うなＧＵＳ遺伝子の発現を観察できた。
溶液に植物を浸ける処理）やＡＢＡ処理（１００＝のＡ
ＢＡ水溶液に浸ける処理）によっても乾燥処理と同じよ
うなＧＵＳ遺伝子の発現を観察できた。
【００３６】また、本プロモーターの下流に植物体を発
色させるような遺伝子を連結し植物に導入すれば環境の
状態（悪化状態）をモニターすることも可能である。
色させるような遺伝子を連結し植物に導入すれば環境の
状態（悪化状態）をモニターすることも可能である。
【００３７】なお、一般に、特定の機能を有するＤＮＡ
配列において、少数の塩基が置換し、欠失しまたは付加
された場合であっても実質的に同一の機能を発揮しうる
場合があることは当業者間に広く認識されているところ
である。従って、配列表の配列１に示されるＤＮＡ断片
中に含まれるプロモーターのＤＮＡ配列のうち、少数の
塩基が置換し、欠失しまたは付加された配列を有するＤ
ＮＡ断片であっても、その配列がプロモーターとして機
能するものであれば、その配列は本願発明のプロモータ
ーと同等のものであることは言うまでもない。
配列において、少数の塩基が置換し、欠失しまたは付加
された場合であっても実質的に同一の機能を発揮しうる
場合があることは当業者間に広く認識されているところ
である。従って、配列表の配列１に示されるＤＮＡ断片
中に含まれるプロモーターのＤＮＡ配列のうち、少数の
塩基が置換し、欠失しまたは付加された配列を有するＤ
ＮＡ断片であっても、その配列がプロモーターとして機
能するものであれば、その配列は本願発明のプロモータ
ーと同等のものであることは言うまでもない。
【００３８】
【発明の効果】本発明により、水ストレス（環境ストレ
ス）によって遺伝子の発現を制御できるプロモーターを
含む新規なＤＮＡ断片及びこれを含む新規な植物用ベク
ターが提供された。本発明により開発されたベクターを
用いることにより導入遺伝子を水ストレスにさらすこと
により発現させることが可能となった。また、その発現
は植物体全体に発現が見られ、特に根幹や側根、花組織
等比較的若い組織に強く認められた。このことは環境ス
トレスに特に弱い若い組織での強発現は、有用作物を環
境ストレスから保護することができ、しかも悪環境下で
も作物を栽培できる可能性のあることが示唆された。従
って、本発明は植物の遺伝子工学におおいに貢献するも
のと考えられる。
ス）によって遺伝子の発現を制御できるプロモーターを
含む新規なＤＮＡ断片及びこれを含む新規な植物用ベク
ターが提供された。本発明により開発されたベクターを
用いることにより導入遺伝子を水ストレスにさらすこと
により発現させることが可能となった。また、その発現
は植物体全体に発現が見られ、特に根幹や側根、花組織
等比較的若い組織に強く認められた。このことは環境ス
トレスに特に弱い若い組織での強発現は、有用作物を環
境ストレスから保護することができ、しかも悪環境下で
も作物を栽培できる可能性のあることが示唆された。従
って、本発明は植物の遺伝子工学におおいに貢献するも
のと考えられる。
【００３９】
【配列表】 SEQUENCE LISTING ＜110＞ HITACHI, LTD ＜120＞ Promoter of Arabidopsis thaliana for Δ1−pyrroline-carboxylate- synthetase ＜160＞ 1 ＜210＞ 1 ＜211＞ 1470 ＜212＞ DNA ＜213＞ Arabidopsis thaliana ＜220＞ ＜221＞ promoter ＜300＞ ＜308＞ AB022784 ＜309＞ January 28, 1999 <400＞ 1 ttttgcccag ttatgattta taaaccctac aatttagtat caaagttttt atttaaaatt 60 ctgaatctga cattaatgat atctggctca tttacagagc caatgagatg gatgatgttc 120 gaaactggat tggccattat ttaccttttt tttatctgga gaatcctcga ttggcacaaa 180 cattatcata ttagccttta gaaattggat tggctaatca cacatttata tatattctta 240 ccaaaataaa tcacctctcc cgtaattgaa aaatatctaa atactgtaag tctgaaaaaa 300 ttcacaaggg tccgaagaaa gaaggaaata tctaagcatc attaataaac tatctgtaac 360 ctgagggaaa atcatttcat gttgaaatat gtggatttgg aagttttata atctatctga 420 atttgtgaaa tttgataaca agtaagattt gtttcttaac acaaatctaa aatttgtttt 480 ctaattaggt ttgagagaga gagagaaaga aacgctttgt atgatacaca tctaggctat 540 gaatgaaggc ccagcggaca aagcggtcta aatttgtctg cggttttagt cccaatcctc 600 atttttctgg ggtggacaat aaaccgctgc ggaccaagtt tatttgtatg taaaaacggt 660 ccgcagatgg tccgaaacga ttttcttcta tttttttaag tccagaccac tgcggactat 720 aattgatgaa tgataaataa aaaacggtct gaaccgttga cggttttgtc cgccccaacc 780 gccataacca ttcaaacccc taattatttc atcagataac attatacact aataatcatt 840 gcactcaaat atgtcacaca atcatataat aaaataataa caatgattaa aatgaaaaaa 900 ttgttgtggc gccgcataaa atagaaatcg tgagagacga cgtcatctaa aaattgcctt 960 gctgtccact tttcactttg tcctctcttc tcatctccgt tcacttccac ggcgtttcct 1020 cagccgccga ttttatttat ttcccaaaat acccatcacc tatagcgcca caatcctcta 1080 catcacaccc taatctcatt accatacacc acccaacgaa cacgcgccac ttcatttgtt 1140 agtatctaaa ataccaaacc tacccttagt tccacacgtg gcgtttcctg gtttgataac 1200 agagcctgag tctctggtgt cgctggtgtt tataaacccc ttcatatctt ccttggtgat 1260 ctccaccttt ccctcacctg atatttattt tcttacctta aatacgacgg tgcttcactg 1320 agtccgactc agttaactcg ttcctctctc tgtgtgtggt tttggtagac gacgacgacg 1380 ata atg gag gag cta gat cgt tca cgt gct ttt gcc aga gac gtc aaa 1428 Met Glu Glu Leu Asp Arg Ser Arg Ala Phe Ala Arg Asp Val Lys 1 5 10 15 cgt atc gtc gtt aag gtt cgtt gagatacgtt cgcattttca 1470 Arg Ile Val Val Lys Val 20
【図１】（ａ）−（ｅ）は植物用遺伝子のプロモーター
と遺伝子の発現との関係を模式的に示す図。
と遺伝子の発現との関係を模式的に示す図。
【図２】配列表の配列１に示すゲノムＤＮＡの塩基配列
を、その機能に着目して番号を付け直したものの上流部
を示す図。
を、その機能に着目して番号を付け直したものの上流部
を示す図。
【図３】配列表の配列１に示すゲノムＤＮＡの塩基配列
を、その機能に着目して番号を付け直したものの下流部
を示す図。
を、その機能に着目して番号を付け直したものの下流部
を示す図。
【図４】本実施例のＤＮＡ断片を上流（５'側）から削
ったＤＮＡ断片のシリーズを作製しそれぞれをベクター
に連結して下流に存在する外来遺伝子の発現を調べた結
果を示す図。
ったＤＮＡ断片のシリーズを作製しそれぞれをベクター
に連結して下流に存在する外来遺伝子の発現を調べた結
果を示す図。
【図５】配列表の配列１に示したＰ５ＣＳ遺伝子のプロ
モーター部分を切り出し、植物用ベクターであるｐＢＩ
１０１に含まれるβ−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）遺伝
子の上流に連結することによって構築したプラスミドＰ
５ＣＳ−Ｐｒｏ／ＧＵＳの遺伝子地図を示した図。
モーター部分を切り出し、植物用ベクターであるｐＢＩ
１０１に含まれるβ−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）遺伝
子の上流に連結することによって構築したプラスミドＰ
５ＣＳ−Ｐｒｏ／ＧＵＳの遺伝子地図を示した図。
【図６】Ａ，Ｂは本発明のプロモーターによる遺伝子の
発現結果を検証する写真。
発現結果を検証する写真。
１００，１０２，１０４，１０６：遺伝子、１０１，１
０３，１０５，１０７：プロモーター。
０３，１０５，１０７：プロモーター。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成１１年８月２０日（１９９９．８．２
０）
０）
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図６
【補正方法】変更
【補正内容】
【図６】 ─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成１１年８月２５日（１９９９．８．２
５）
５）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３５】同様に高塩処理（２５０ｍＭ ＮａＣｌ水
溶液に植物を浸ける処理）やＡＢＡ処理（１００μのＡ
ＢＡ水溶液に浸ける処理）によっても乾燥処理と同じよ
うなＧＵＳ遺伝子の発現を観察できた。
溶液に植物を浸ける処理）やＡＢＡ処理（１００μのＡ
ＢＡ水溶液に浸ける処理）によっても乾燥処理と同じよ
うなＧＵＳ遺伝子の発現を観察できた。
Claims (5)
- 【請求項１】Δ1−ピロリン−５−カルボン酸合成酵素
遺伝子のプロモーターを含むＤＮＡ断片。 - 【請求項２】シロイヌナズナ由来のものである請求項１
記載のＤＮＡ断片。 - 【請求項３】配列表の配列１に示す塩基配列の第６４９
番目から第１４７０番目の塩基配列を有する請求項１ま
たは２記載のＤＮＡ断片。 - 【請求項４】請求項１ないし３のいずれか１項に記載の
ＤＮＡ断片を含む植物細胞用ベクター。 - 【請求項５】植物組織を着色可能な遺伝子に請求項１な
いし３のいずれか１項に記載のＤＮＡ断片を導入したセ
ンサー植物。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11230287A JP2001054384A (ja) | 1999-08-17 | 1999-08-17 | シロイヌナズナ・δ１−ピロリン−５−カルボン酸合成酵素遺伝子のプロモーター。 |
| US09/635,587 US6429307B1 (en) | 1999-08-17 | 2000-08-09 | Promoter for ′-pyrroline-5-carboxylate synthetase gene in arabidopsis thaliana |
| GB0020234A GB2355011A (en) | 1999-08-17 | 2000-08-16 | A delta-1-pyrroline-5-carboxylate synthetase promoter from Arabidopsis thaliana |
| CN00124141.9A CN1284562A (zh) | 1999-08-17 | 2000-08-17 | 拟南芥△1－吡咯啉－5－羧酸合成酶基因的启动子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11230287A JP2001054384A (ja) | 1999-08-17 | 1999-08-17 | シロイヌナズナ・δ１−ピロリン−５−カルボン酸合成酵素遺伝子のプロモーター。 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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