JP2000516923A - ドラスタチンペンタペプチド誘導体及びその抗腫瘍剤としての使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、式（Ｉ）：Ａ−Ｂ−Ｎ（ＣＨ₃）−ＣＨＤ−ＣＨ（ＯＣＨ₃）−ＣＨ₂ＣＯ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｋの抗腫瘍ペプチド及びその酸性塩に関する。Ａは式：（ＣＨ₃）₂Ｎ−ＣＨＸ−ＣＯのアミノ酸残基を表し、その際、Ｘは直鎖又は分枝鎖のアルキル基を表す。Ｂはバリル、イソロイシル及び２−ｔ−ブチルグリシルからなるグループから選択されるアミノ酸残基を表す。Ｄは直鎖又は分枝鎖のＣ₃〜Ｃ₄アルキル基を表す。Ｋはｔ−ブトキシ基又は置換アミノ基を表す。本発明の他の実施態様は、ほ乳類、例えばヒトに式（Ｉ）の化合物の有効量を製剤学的に認容性の組成物の形で投与することよりなる、ほ乳類の悪性腫瘍の治療方法である。

Description

【発明の詳細な説明】 ドラスタチンペンタペプチド誘導体 及びその抗腫瘍剤としての使用 発明の背景 細胞成長抑制剤として重要な活性を有する一連の短いペプチドは、インド洋ア メフラシのドラベラ・アウリクラリア（Dolabel1a auricularia）から単離され た（Pettit et al.，J．Am．Chem．Soc．109：6883-6885（1987）；Beckwith et al.，J．Nati．Cancer Inst．85：483-88（1993）；米国特許第４，８１６，４ ４４号明細書；欧州特許出願番号第３９８５５８号明細書）。これらのペプチド はドラスタチン１〜１５と呼ばれる。これらの内、ドラスタチン１０及び１５は 最も大きな細胞成長抑制剤の能力を有する。ドラスタチン１５は、例えばナショ ナル・キャンサー・インステイトウーツ（Nationa1 Cancer Institute's）Ｐ３ ８８リンパ球白血病（ＰＳ系）セルラインの成長を阻害し、多様な種類のヒト悪 性腫瘍に対する著しい効果が予想される。ドラスタチン１０及びドラスタチン１ ５はチューブリン重合及び４種の異なるヒトリンパ腫セルラインの成長を抑制す る（Bai et al.,Biochem．Pharmacol．39：1941-1949（1990）；Beckwith et al .，supra(1993)）。 少量のドラスタチンペプチドは、ドラベラ・アウリクラリア中に存在するため （アメフラシ１００ｋｇ当たりそれぞれ約１ｍｇ）、評価及び使用のために十分 な精製された量を得る困難性は、ドラスタチン１０を含めたこの化合物のより有 望な合成に関する研究を活発化させた（Pettit et al.，J．Am．Chem Soc．111 ：5463-5465（1989）；Roux et al．Tetrahedron 50：5345-5360（1994）；Shio ri et al．Tetrahedron 49:1913-1924(1993)）。しかしながら、合成ドラスタチ ン１０は、水性系中で乏しい可溶性を示し、その合成のために高価な出発材料が 必要であるという欠点を有する。これらの欠点は、構造的に変更されたドラスタ チン１０誘導体の合成及び評価を行わせた（欧州特許出願番号ＷＯ９３／０３０ ５４；日本国特許出願番号０６２３４７９０；米国特許シリアル番号０８／１７ ８５２９）。 有効な水溶性を有し、かつ有効にかつ経済的に製造することができるドラスタ チン１０の生物活性を有する合成化合物が必要とされる。 発明の概要 本発明は抗腫瘍活性又は抗新生物活性を有するペプチドを提供する。この化合 物は式Ｉ： Ａ−Ｂ−Ｎ(ＣＨ₃)−ＣＨＤ−ＣＨ(ＯＣＨ₃)−ＣＨ₂ＣＯ−Pro−Pro−Ｋ （Ｉ） 及びその酸性塩である。式Ｉにおいて、 Ａは式：（ＣＨ₃）₂Ｎ−ＣＨＸ−ＣＯのアミノ酸残基であり、その際、 Ｘは直鎖又は分枝鎖のＣ₃〜Ｃ₄アルキル基である。 Ｂはバリル、イソロイシル、ロイシル及び２−ｔ−ブチルグリシルからなるグル ープから選択されるアミノ酸残基である。 Ｄは直鎖又は分枝鎖のＣ₃〜Ｃ₄アルキル基である。 Ｋはｔ−ブトキシ基又は置換アミノ基である。 本発明の他の態様は、式Ｉの化合物及び製剤学的に認容性の担持剤を有する製 剤学的組成物である。 本発明の付加的実施態様は、式Ｉの１種以上の化合物の有効量を製剤学的に認 容性の組成物の形でほ乳類、例えばヒトに投与することよりなるほ乳類の悪性腫 瘍の治療方法である。 発明の詳細な説明 本発明は抗腫瘍活性を有するペプチドに関する。さらに、この化合物を有する 製剤学的組成物及びヒトを含めたほ乳類に前記組成物を投与することよりなるほ 乳類の癌を治療する方法も含まれる。 本出願人は、ドラスタチン１０の構造的変更により、ドラスタチン１０と比較 して悪性腫瘍疾患の治療について意想外に改善された能力を有する新規化合物が 得られることを見出した。さらに、本発明の化合物は、後に詳細に記載するよう に、有利に合成することができる。 本発明の化合物は、式Ｉの抗腫瘍性ペプチドである Ａ−Ｂ−Ｎ(ＣＨ₃)−ＣＨＤ−ＣＨ(ＯＣＨ₃)−ＣＨ₂ＣＯ−Pro−Pro−Ｋ （Ｉ） 前記式中、 Ａは式：（ＣＨ₃）₂Ｎ−ＣＨＸ−ＣＯのアミノ酸残基を表し、その際、 Ｘは直鎖又は分枝鎖のＣ₃〜Ｃ₄アルキル基を表し； Ｂはバリル、イソロイシル、ロイシル及び２−ｔ−ブチルグリシルからなるグル ープから選択されるアミノ酸残基を表し； Ｄは直鎖又は分枝鎖のＣ₃〜Ｃ₄アルキル基を表し；及び Ｋはブトキシ基又は置換アミノ基を表す。 置換アミノ基の例は次のようなものである：−Ｎ（Ｃ₁〜Ｃ₃アルキル）Ｃ₁〜Ｃ₃ アルキル、直鎖又は分枝鎖の−ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ₃）₂ ＣＮ、−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ₃）₂ＣＣＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ₃）₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ、− ＮＨ−Ｃ（ＣＨ₃）₂ＣＨ₂ＯＨ、−ＮＨ−Ｃ₃〜Ｃ₈シクロアルキル、−ＮＨ−［ ３．３．０］ビシクロオクチル、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ（ＯＨ）Ｃ₆Ｈ₅、− Ｈ−キノリル、−ＮＨ−ピラジル、−ＮＨ−ＣＨ₂−ベンズイミダゾリル、−Ｎ Ｈ−アダマンチル、−ＮＨ−ＣＨ₂−アダマンチル、−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ₃）−フ ェニル、−ＮＨ−Ｃ（Ｃ Ｈ₃）₂−フェニル、−Ｎ（Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキシ）−Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル、−Ｎ（Ｃ₁ 〜Ｃ₄アルコキシ）−ＣＨ₂−フェニル、−Ｎ（Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキシ）フェニル 、−Ｎ（ＣＨ₃）Ｏ−フェニル、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_v−フェニル（ｖ＝０、１、 ２又は３）、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ナフチル（ｍ＝０又は１）、−ＮＨ−（ＣＨ₂ ）_w−ベンジルヒドリル（ｗ＝０、１又は２）、−ＮＨ−ビフェニル、−ＮＨ− ピリジル、−ＮＨ−ＣＨ₂−ピリジル、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ピリジル、−Ｎ Ｈ−ベンゾチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾイソチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾピラゾ リル、−ＮＨ−ベンゾピラゾリル、−ＮＨ−ベンズオキサゾリル、−ＮＨ−（Ｃ Ｈ₂）_m−フルオレニル（ｍ＝０又は１）、−ＮＨ−ピリミジル、−ＮＨ−（ＣＨ₂ ）_m−インダニル（ｍ＝０又は１）、−ＮＨ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_y−ＣＨ₂ＣＨ₃ （ｙ＝０、１、２、３、４又は５）、−ＮＨ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_y−ＣＨ₃（ｙ＝ ０、１、２、３、４又は５）、−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ−ＮＣＨ₃−Ｃ₆Ｈ₅ 、−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅、及び−ＮＨ−Ｎ（ＣＨ₃）−ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅。 Ｋは次のものの中から選択することもできる： 本発明の有利な化合物は Ａは式：（ＣＨ₃）₂Ｎ−ＣＨＸ−ＣＯのアミノ酸残基を表し、その際、 Ｘはイソプロピル基、ｔ−ブチル基又はｓ−ブチル基を表し、 Ｂはバリル、イソロイシル及び２−ｔ−ブチルグリシルからなるグループから選 択されるアミノ酸残基を表し、 Ｄはイソプロピル基、ｔ−ブチル基又はｓ−ブチル基を表し、 Ｋはｔ−ブトキシ基又は次のもの：−ＮＨＣＨ₃、−ＮＨＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨ（ ＣＨ₂）₂ＣＨ₃、−ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＣＨ₃、−ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＣＨ₃、−ＮＨ（Ｃ Ｈ₂）₅ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）₂、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−ＮＨ（Ｃ Ｈ₂ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−ＮＨＣ（ＣＨ₃）₃、−ＮＨＣＨ［ＣＨ（ＣＨ₃）₂］₂、− ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃、− ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂Ｆ、−ＮＨＣ（ＣＨ₃）₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ （ＣＨ₃）₂、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）Ｃ（ＣＨ₃）₃、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂Ｃ Ｈ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂、−ＮＨＣＨ₂Ｃ（ＣＨ₃）₃、−ＮＨ−シ クロプロピル、−ＮＨ−シクロブチル、−ＮＨ−シクロペンチル、−ＮＨ−シク ロヘキシル、−ＮＨ−シクロヘプチル、−Ｎ（ＣＨ₃）ＯＣＨ₃、−Ｎ（ＣＨ₃）₂ 、−Ｎ（ＣＨ₃）ＯＣＨ₂ＣＨ₃、−Ｎ（ＣＨ₃）ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−Ｎ（ＣＨ₃ ）ＯＣＨ（ＣＨ₃）₂、−Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）ＯＣＨ₃、−Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）ＯＣＨ₂ ＣＨ₃、−Ｎ（ＣＨ₃）ＯＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅、−Ｎ（ＯＣＨ₃）ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅、−Ｎ（ ＣＨ₃）Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ−ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ（ＣＨ₂）₂Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ（Ｃ Ｈ₂）₃Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ（ＯＨ）Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ−ＣＨ₂−シク ロヘキシル、 −ＮＨ−インダニルー（１）、−ＮＨ−ＣＨ₂ＣＦ₃、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｆ）₂、 −ＮＨＣ（ＣＨ₃）₂ＣＨ₂ＯＨ、−ＮＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣ （ＣＨ₃）₂ＣＮ、−ＮＨ−キノリル、−ＮＨ−ピラジル、−ＮＨ−アダマンチル （２）、−ＮＨ−アダマンチル（１）、−ＮＨ−ＣＨ₂−ナフチル、−ＮＨ−ベ ンズヒドリル、−ＮＨ−ビフェニル、−ＮＨ−ピリジル、−ＮＨ−ＣＨ₂−ピリ ジル、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ピリジル、−ＮＨ−ベンゾチアゾリル、−ＮＨ− ベンゾイソチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾピラゾリル、−ＮＨ−ベンゾオキサゾリ ル、−ＮＨ−フルオレニル、−ＮＨ−ピリミジル、−ＮＨ−ＣＨ₂-（４−メチル ）−チアゾリル（２）、−ＮＨ−ＣＨ₂−フラニル（２）、−ＮＨ−ＣＨ₂−チエ ニル（２）、−ＮＨ−ＣＨ₂-（５−メチル）チエニル（２）、−ＮＨ−チアゾリ ル（２）、−ＮＨ−イソオキサゾリル（３）、−ＮＨ−（３−メチル）イソキサ ゾリル（５）、−ＮＨ−（３−メチル）イソチアゾリル（５）、−ＮＨ−（５− トリフルオロメチル）チアジアゾリル（２）、−ＮＨ−（５−シクロプロピル） チアジアゾリル（２）、−ＮＨ−（４，５−ジメチル）チアゾリル（２）、−Ｎ Ｈ−（５−メチル）チアジアゾリル（２）の中から選択されるアミノ基を表すか 、又はＫは次のもの：を表す式Ｉの化合物である。 合成方法 本発明の化合物は公知のペプチド合成法により製造することができる。このよ うに、ペプチドは個々のアミノ酸から又は適当な小さなペプチド断片の連結によ り逐次組立てることができる。逐次の組立において、このペプチド鎖はＣ−末端 から出発して、１工程当たり１個のアミノ酸により徐々に延長される。断片の連 結において、異なる長さの断片を一緒に連結することができ、かつこの断片は逐 次組立によりアミノ酸から又はより短いペプチドの断片の連結により得ることが できる。 両方の逐次組立及び断片の連結において、アミド結合の形成によるユニットを 連結する必要があり、この連結は酵素による及び化学的な多様な方法により行う ことができる。アミド結合を形成させるための化学的 Methoden der organischen Chemie Vol．XV/2，1-364，Thieme Verlag，Stuttga rt，（1974）；Stewart and Younq，Solid Phase Peptide Synthesis，31-34 an d 71-82，Pierce Chemical Comp any，Rockford，IL（1984）；Bodanszky et al.，Peptide Synthesis，85-128， John Wiley & Sons，New York，(1976)）に詳細に記載されている。有利な方法 は、アジド法、対称法及び混合無水物法、インサイトウで生成された又は予め形 成された活性エステルの使用、アミノ酸のウレタンで保護されたＮ−カルボキシ 無水物の使用及び連結試薬、例えばカルボン酸活性剤、特にジシクロヘキシルカ ルボジイミド（ＤＣＣ）、ジィソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１−エト キシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、１− エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（ ＥＤＣＩ）、ｎ−プロパン−ホスホン酸無水物（ＰＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２− オキソ−オキサゾリジニル）イミドーホスホリルクロリド（ＢＯＰ−Ｃｌ）、ブ ロモートリスーピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｒ ｏｐ）、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）、カストロ試薬（ＢＯＰ、Ｐ ｙＢｏｐ）、Ｏ−ベンゾトリアゾリル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロ ニウム塩（ＨＢＴＵ）、Ｏ−アザベンゾトリアゾリル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テ トラメチルウロニウム塩（ＨＡＴＵ）、ジエチルホスホリルシアニド（ＤＥＯＣ Ｎ）、２，５−ジフェニル−２，３−ジヒドロ−３−オキソ−４−ヒドロキシチ オフェンジオキシド（Steqlich's試薬； ＧＯＴＤＯ）、及び１，１’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を用いたア ミド結合の形成である。この連結試薬は単独でも又は添加物、例えばＮ，Ｎ−ジ メチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール （ＨＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキ シアザベンゾトリアゾリル（ＨＯＡｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯ Ｓｕ）又は２−ヒドロキシピリジンと組み合わせて使用することができる。 保護基の使用は一般に酵素によるペプチド合成において必要ないが、アミド結 合の形成に関連しない反応性基の可逆的保護は化学的合成の両方の反応体にとっ て必要である。３つの通常の保護基の技術は、化学的ペプチド合成にとって有利 である：ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ） 及び９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）技術。それぞれの場合に 、鎖長延長ユニットのα−アミノ基に関して保護基が同定される。アミノ酸保護 schen Chemie Vol．xV/1，pp20-906，Thieme Verlaq，Stuttqart（1974）になさ れている。ペプチド鎖の組立のために使用されるユニットは、溶液中で、懸濁液 中で又はMerrifie1d，J．Amer．Chem．Soc．85，2149（1963）に記載されたと同 様の方法により反応させることができる。特に有利な方法は、ペプ チドをＺ、Ｂｏｃ又はＦｍｏｃ保護基技術を用いて逐次的に又は断片の連結によ り組み立てる方法である。 ペプチド合成にとって適当な溶剤は、反応条件下で不活性の溶剤、特に水、Ｎ ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、 アセトニトリル、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、１，４−ジオキサン、テトラヒド ロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、酢酸エチル及び これらの溶剤の混合物である。 Ｎ−メチル化γ−アミノ酸誘導体に続くアミノ酸の連結のために、Ｂｏｃ−保 護アミノ酸Ｎ−カルボニル無水物（ＮＣＡｓ）、Ｚ−保護ＮＣＡｓを使用するか 又はピバロイルクロリド又はＨＡＴＵを縮合剤として使用することがこのタイプ の連結のために最も適している。 アミノ末端でジアルキル化されたペプチドは、適当なＮ，Ｎ−ジアルキルアミ ノ酸を形成ブロックとして使用して、又は溶液中で適当なアルデヒド又はケトン 及び触媒、例えば木炭上のパラジウムの存在でＮ−非置換ペプチドの水素化によ り製造することができる。 この明細書に開示された非天然に生じる多様なアミノ酸は市販の供給源から得 ることができるか又は当業者に公知の方法を用いて市販された材料から合成する ことができる。例えば、基：−ＮＲ³−ＣＨＤ−ＣＨ（ＯＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＯ−は 、公開された方法（Shior i et al．in Peptide Chemistry，Yanaihara，ed．（1989）；Pettit et al.，J ．Am．Chem．Soc．111：5463（1989）；Shiori et al.，Tet．Lett．：931-934 （1991）；Koga et al.，Tet．Lett.：2395-2398(1991)）に従って製造すること ができる。 請求の範囲に記載された化合物の使用方法 他の実施態様において、本発明は治療上有効量の式Ｉの化合物又は式Ｉの化合 物の組合せを、ほ乳類、例えばヒトに投与することにより、ほ乳類の充実性腫瘍 （例えば肺癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、膀胱癌、直腸癌又は子宮内膜癌）又は 血液学的悪性腫瘍（例えば白血病、リンパ腫）の形成の部分的又は完仝な抑制方 法又は前記腫瘍の他の治療方法（例えば前記腫瘍の更なる発生の反転又は抑制） に関する。式Ｉの化合物は単独で、又は他の薬剤、例えば他の抗癌剤と組み合わ せて、又はさらに認容性の担持剤又は希釈剤及び場合により他の薬剤からなる調 剤学的組成物の形で投与することができる。投与は、調剤学的、有利に腫瘍学的 薬剤にとって通常の方法、例えば経口及び腸管外、例えば皮下、静脈内、筋肉内 及び腹膜内、鼻又は直腸で行うことができる。 ほ乳類、例えばヒトに投与するための用量は、前記の化合物の治療上有効量で ある。この治療上有効量は所定の時間内での１回の投与量又は複数の投与量で投 与される（つまり、一日１回又は一日２回以上）。本 明細書で使用した「治療上有効量」とは、腫瘍又は血液の悪性腫瘍の形成を（部 分的又は完全に）抑制するのに十分な量又は充実性腫瘍又は他の悪性腫瘍の反転 成長又はその進行の減少のために十分な量である。特別な状態又は治療方法につ いて、この用量は経験的に、通常の方法を用いて、及び因子、例えば使用する特 別な化合物の生物学的活性、投与法、患者の年齢、健康状態及び体重、病状の種 類及び程度、治療の頻度、他の治療剤の投与及び所望の効果に依存して決定され る。典型的な一日の投与量は経口投与の場合に体重１ｋｇあたり約０．５〜５０ ｍｇ、腸管外投与の場合に体重１ｋｇあたり０．０５〜２０ｍｇである。 本発明の化合物は、通常の液体又は固体の製剤学的形状で、例えば未被覆又は （皮膜）被覆錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、坐剤又は溶液の形で投与すること ができる。これらは通常の方法で製造することができる。この活性物質は、この ために、通常の調剤学的手段、例えば錠剤結合剤、充填剤、保存剤、錠剤崩壊剤 、流動調節剤、可塑剤、湿潤剤、分散剤、乳化剤、溶剤、持続放出組成物、酸化 防止剤及び／又は発泡ガスと共に加工される（cf．H．Sucker et al.:Pharmazeu tische Technologie，Thieme-Verlag，Stuttgart，1978）。この方法で得られた 投与形態は、一般に活性物質約１〜約９０重量％を含有する。 次の実施例は本発明を例示するだけであり、本発明 を限定するものではない。 実施例 天然のアミノ酸は実施例において３文字記号を用いて省略して記載した。他の 省略記号は次のものを使用した：ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸；Ａｃ＝酢酸；ＤＣ Ｍ＝ジクロロメタン；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；Ｂｕ＝ブチル；Ｅｔ＝ エチル；Ｍｅ＝メチル；Ｂｚｌ＝ベンジル；ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルア ミド；ＬＨＭＤＳ＝リチウムヘキサメチルジシラジド；ＨＭＰＡ＝ヘキサメチル リン酸トリアミド。 一般的材料及び方法 本発明の化合物は、前記したような標準のＺ−及びＢｏｃ−方法論を用いて典 型的な溶液合成により合成される。 精製は、適当な溶剤又は溶剤混合物から晶出により、中圧クロマトグラフィー （固定相：HD-SIL C-8，20-45micron,１００オングストローム移動相：Ａ＝０． １％ＴＦＡ／水、Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／ＭｅＯＨ有する勾配）により、又は分取 ＨＰＬＣ（固定相：Waters Delta-Pak C-18，15micron,１００オングストローム ；移動相：Ａ＝０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／ＭｅＯＨ又は０．１ ％ＴＦＡ／アセトニトリル）により実施される。生じた生成物の純度は、分析Ｈ ＰＬＣ（固定相：１００ 2.1mm VYDAC C-１８,３００オングストローム；移動 相：アセトニトリル −水勾配、０．１％ＴＦＡ、４０％Ｃで緩衝）により測定した。特性決定は質量 スペクトル分析により行った（ＥＳＩ又はＦＡＣ−ＭＳ）。 例１ （３Ｒ，４Ｓ）−４−［Ｎ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル） −Ｎ−メチルアミノ）−３−メトキシ−５−メチル−ヘキサノイル−プロリル− プロリル−トリアゾリル（２）−アミド（化合物）の合成 ｔ−ブチル−（４Ｓ）−４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−５− メチル−３−オキソヘキサノエートの合成 Ｚ−バリン（５ｇ、１９．９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン６０ｍｌ中の氷 冷溶液に、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（３．５５ｇ、２２．３ｍｍｏ ｌ）を１回で添加し、得られた混合物を３時間撹拌した。−７８℃で、ｔ−ブチ ルアセテート（１３．５ｍｌ、１００ｍｍｏｌ）をＬＤＡ（９０ｍｍｏｌ）のテ トラヒドロフラン（２７０ｍｌ）中の溶液に添加した。３０分後に、このイミダ ゾリド溶液を両頭針を介してエノレートに滴加した。得られた混合物を、温度が −１５℃に上昇するまで２時間撹拌した。この反応をエーテル（３×２００ｍｌ ）で停止した。合わせた有機抽出物を２Ｎ水性ＨＣｌ（５０ｍｌ）、水性の飽和 ＮａＨＣＯ₃（２×５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネ シウムで乾燥させ、真空中で蒸発乾固させた。この残留物を、溶離剤として酢酸 エチル−ヘキサン（１：４）を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーに より精製すると、無色の油状物として生成物が得られた（６．８８ｇ）。 ＭＳ：計算上の単一同位体質量３４９．１９；測定ＥＳＩ−：３４８．１ ｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ）−４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ） −３−ヒドロキシ−５−メチル−ヘキサノエートの合成 ｔ−ブチルー（４Ｓ）−４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−アミノ）−５ −メチル−３−オキソヘキサノエート（６．０ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）のエタノ ール７０ｍｌ中の０℃の溶液に、水素化ホウ素カリウム（３．２３ｇ、５８．８ ｍｍｏｌ）を添加した。０℃で４時間及び室温で１２時間撹拌した後、この反応 混合物を氷酢酸でｐＨ４にまで酸性化し、真空中で濃縮した。残留物を酢酸エチ ル２００ｍｌ及び水２００ｍｌの混合物中に溶かした。水相を酢酸エチル（３× ５０ｍｌ）でさらに洗浄した後、合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥 させ、真空中で濃縮した。粗製生成物を、溶離剤として酢酸エチル−ヘキサン（ １：４）を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製すると、ア ルコールが白色固体（５．３１ｇ）として得られた。 ＭＳ：計算上の単一同位体質量３５１．２；測定ＥＳＩ＋：３５２．２ ｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ）−４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−メ チルアミノ）−３−メトキシ−５−メチル−ヘキサノエートの合成 ｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ）−４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ） −３−ヒドロキシ−５−メチル−ヘキサノエート（３．０２７ｇ、８．６２４ｍ ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４０ｍｌ）中の溶液を、ＬＨＭＤＳ（２４．０ ｍｌ）のＨＭＰＡ（４．５ｍｌ、２５．７ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（ ４０ｍｌ）中の溶液に−７８℃で添加した。２０分間撹拌した後、メチルトリフ レート（５．６８ｍｌ、５１．７ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後に、この反応 を水性１０％酢酸７０ｍｌの添加により停止した。この混合物を酢酸エチル（３ ×）で抽出した。合わせた有機抽出物を、水性の飽和ＮａＨＣＯ₃（１００ｍｌ ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空中で濃縮した。粗製生成物を、溶 離剤として酢酸エチル−ヘキサン（１：４）を用いるシリカゲルのカラムクロマ トグラフィーにより精製すると、乾燥生成物が無色の油状物（２．４５６ｇ）と して得られた。 ＭＳ：計算上の単一同位体質量３７９．２４；測定ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺： ３８０ ｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ）−４−（Ｎ−メチルア ミノ）−３−メトキシ−５−メチルヘキサノエートの合成 ｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ）−４−（Ｎ−ベンジルオキシ−カルボニル−Ｎ− メチルアミノ）−３−メトキシ−５−メチル−ヘキサノエート（３．８５５ｇ、 １０．１７ｍｍｏｌのメタノール１００ｍｌ中の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（０． ５４１ｇ）を添加し、この混合物を脱保護が完了するまで水素化した（ｔｌｃコ ントロール）。この触媒を濾過により除去し、濾液を真空中で濃縮した。得られ た非晶質の固体（２．４９ｇ）をエーテルから、ジオキサン中のＨＣｌの溶液を 添加することにより晶出させることができた。 ＭＳ：計算上の単一同位体質量２４５．２；測定ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺２４ ６ ｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ）−４−［Ｎ−（ビェンジルオキシカルボニル−Ｌ −バリル）−Ｎ−メチルアミノ］−３−メトキシ−５−メチル−ヘキサノエート の合成 Ｚ−バリン（３．６７２ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）及びピバロイルクロリド（１ ．８ｍｌ、１４．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（２．５ ｍｌ、１４．６ｍｍｏｌ）を−１５℃で添加した。１時間後に、ｔ−ブチル−（ ３Ｒ，４Ｓ）−４−（Ｎ−メチル−アミノ）−３−メトキシ−５−メチル−ヘキ サノエート（１．７９ｇ、７．３ｍｍｏｌ）及びジイ ソプロピルエチルアミン（１．２５ｍｌ、７．３ｍｍｏｌ）を添加した。得られ た混合物を０℃で３時間、室温で２０時間撹拌し、次いで真空中で濃縮した。残 留物を酢酸エチル（１００ｍｌ）中に溶かし、１０％水性酢酸（２×３０ｍｌ） で洗浄し、水性の飽和ＮａＨＣＯ₃（３０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで 乾燥し、真空中で濃縮した。粗製生成物を溶離剤として酢酸エチル−ヘキサン（ １：４）を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製すると、ジ ペプチドが無色の油状物（１．８０４ｇ）として得られた。 ＭＳ：計算上の単一同位体質量４７８．３；測定ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺４７ ９ ｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ）−４−［Ｎ−（Ｌ−バリル）−Ｎ−メチルアミノ ］−３−メトキシ−５−メチル−ヘキサノエートの合成 ｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ）−４−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル−Ｌ− バリル）−Ｎ−メチルアミノ］−３−メトキシ−５−メチル−ヘキサノエート（ １．８０４ｇ、３．７７ｍｍｏｌ）のメタノール（６０ｍｌ）中の溶液に、１０ ％Ｐｄ／Ｃ（０．２６ｇ）を添加し、次いでこの混合物を完了するまで（ｔｌｃ コントロール）水素化した。この触媒を濾過により分離し、濾液を真空中で濃縮 すると、脱保護されたジペプチドユニット（１．２７ｇ）が得られた。 ＭＳ：計算上の単一同位体質量３４４．２７；測定ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＃Ｈ］＋３ ４５ ｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ）−４−［（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ− バリル）−Ｎ−メチルアミノ］−３−メトキシ−５−メチル−ヘキサノエートの 合成 ｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ）−４−［Ｎ−（Ｌ−バリル）−Ｎ−メチルアミノ ］−３−メトキシ−５−メチルヘキサノエート（０．３７５ｇ、１．０３８ｍｍ ｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジメチルバリン（０．３０１ｇ、２．０７６ｍｍｏｌ）をＤ ＭＦ３ｍｌ中に溶かし、０℃に冷却した。ＤＥＰＣ（０．４９６ｍｌ、２．２８ ３ｍｍｏｌ）を添加し、引き続きジイソプロピルエチルアミン（０．３９１ｍｌ 、２．２８３ｍｍｏｌ）を添加した。０℃で３時間及び室温で１６時間撹拌した 後、この反応混合物を水性の飽和ＮａＨＣＯ₃（２０ｍｌ）で希釈し、トルエン ／酢酸エチル２：１（３×）で洗浄した。合わせた有機層を２Ｎ水性ＨＣｌ（３ ×１０ｍｌ）で抽出した。次いで、水相をＮａＨＣＯ₃で中和し、トルエン／酢 酸エチル（２：１）（３×２０ｍｌ）で抽出した。この有機層を硫酸マグネシウ ムで乾燥し、真空中で濃縮した。粗製生成物をＨＣｌのジオキサン中の溶液の添 加によりエーテルから晶出させることにより精製すると、トリペプチドが白色固 体（０．４３３ｇ）として得られた。 ＭＳ：計算上の単一同位体質量４７１．３７；測定ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺４ ７２ （３Ｒ，４Ｓ）−４−［Ｎ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル） −Ｎ−メチルアミノ］−３−メトキシ−５−メチル−ヘキサン酸の合成 ｔ−ブチル−（３Ｒ，４Ｓ）−４−［Ｎ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル− Ｌ−バリル）−Ｎ−メチルアミノ］−３−メトキシ−５−メチル−ヘキサノエー トのジクロロメタン（２ｍｌ）中の溶液に、トリフルオロ酢酸（２ｍｌ）を添加 した。２時間撹拌した後、反応混合物を真空中で濃縮した。残留物をトルエン（ ５×１０ｍｌ）と一緒に再蒸発させると、脱保護された生成物（０．２６８ｇ） が得られ、これはさらに精製することなしに次の工程に使用した。 ＭＳ：計算上の単一同位体質量４１５．３；測定ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺４１ ６ Ｎ−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−プロリル−プロリル−チアゾリル（２ ）−アミドの合成 Ｂｏｃ−プロリル−プロリン（１ｇ、３．２ｍｍｏｌ）及び２−アミノチアゾ ール（０．３５７ｇ、３．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ２５ｍｌ中に溶かし、０℃に冷 却した。トリエチルアミン（１．１ｍｌ、７．６ｍｍｏｌ）を添加し、引き続き ＤＥＰＣ（０．６１３ｍｌ、３．７ｍｍｏｌ）を添加した。０℃で２時間及び引 き続き室温で２４時間撹拌した後、この反応混合物を 酢酸エチル／トルエン（２：１）で希釈し、１Ｍ水性硫酸水素カリウム、水、水 性の飽和ＮａＨＣＯ₃及び水性ＮａＣｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、 真空中で濃縮した。この粗製生成物を酢酸エチル／ヘキサンから晶出させること により精製すると、白色固体（０．５２６ｇ）が得られた。Ｒｆ：０．２６（酢 酸エチル／ヘキサン１：１） ＥＳＩ−ＭＳ：３９５．２［Ｍ＋Ｈ］⁺、計算値Ｃ₁₃Ｈ₂₆Ｎ₄Ｏ₄Ｓ＝３９４．３ プロリル−プロリル−チアゾリル（２）−アミドの合成 Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−プロリル−プロリル−チアゾリル（２）− アミドのジクロロメタン（２ｍｌ）中の溶液に、トリフルオロ酢酸（２ｍｌ）を 添加した。２時間撹拌した後に、この反応混合物を真空中で濃縮した。残留物を トルエン（５×１０ｍｌ）を用いて再蒸発させると、脱保護された生成物が得ら れ、これはさらに精製せずに次の工程で使用された。 （３Ｒ，４Ｓ）−４-［Ｎ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル）− Ｎ−メチルアミノ］−３メトキシ−５−メチル−ヘキサノイル−プロリル−プロ リル−チアゾリル（２）−アミド（化合物１）の合成 （３Ｒ，４Ｓ）−４−［Ｎ−［Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル） −Ｎ−メチルアミノ］−３ −メトキシ−５−メチルヘキサン酸０．１ｇ（０．２０ｍｍｏｌ）及びプロリル −プロリル−チアゾリル（２）−アミド０．０８ｇ（０．２０ｍｍｏｌ）のＤＭ Ｆ１ｍｌ中の予め冷却した溶液に、ＤＥＰＣ ０．０３７ｍｌ（０．２２ｍｍｏ ｌ）及びトリエチルアミン０．０９６ｍｌ（０．６６ｍｍｏｌ）を添加した。０ ℃で２時間、室温で２４時間撹拌した後、この反応混合物を酢酸エチル／トルエ ン（２：１）で希釈し、１Ｍ水性硫酸水素カリウム、水、水性の飽和ＮａＨＣＯ₃ 及び水性ＮａＣｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮した。こ の粗製生成物を分取ＨＰＬＣを介して精製すると、所望の生成物１１２ｍｇが白 色固体として得られた。 ＥＳＩ−ＭＳ：６９２［Ｍ＋Ｈ］⁺、計算値Ｃ₃₄Ｈ₅₇Ｎ₇Ｏ₆Ｓ＝６９１ 例２ （３Ｒ，４Ｓ）−４−［Ｎ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル） −Ｎ−メチルアミノ］−３−メトキシ−５−メチルヘキサノイル−プロリル−プ ロリル−ベンジルアミド（化合物２）の合成 （３Ｒ，４Ｓ）−４−［Ｎ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル） −Ｎ−メチルアミノ）−３−メトキシ−５−メチル−ヘキサン酸０．１５ｇ（０ ．３０ｍｍｏｌ）及びプロリル−プロリル−ベンジルアミド０．１５ｇ（０．３ ０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ２ｍ ｌ中の予め冷却した溶液にＤＥＰＣ０．２ｍｌ（１．２ｍｍｏｌ）及びトリエチ ルアミン０．２ｍｌ（２．３３ｍｍｏｌ）を添加した。０℃で２時間、室温で２ ４時間撹拌した後、反応混合物を酢酸エチル／トルエン（２：１）で希釈し、１ Ｍ水性硫酸水素カリウム、水、水性の飽和ＮａＨＣＯ₃及び水性ＮａＣｌで洗浄 し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮した。粗製生成物を分取ＨＰＬＣを 介して精製すると、所望の生成物１６１ｍｇが白色固体として得られた。 ＥＳＩ−ＭＳ：６９９［Ｍ＋Ｈ］⁺、計算値Ｃ₃₈Ｈ₆₂Ｎ₆Ｏ₆＝６９８ 例３ （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−［Ｎ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バ リル）−Ｎ−メチルアミノ］−３−メトキシ−５−メチル−ヘプタノイル−プロ リル−プロリル−イソプロピルアミド（化合物３） Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−プロリル−イソプロピルアミドの合成 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−プロリン（２５ｇ、０．１ｍｏｌ）をジクロ ロメタン４５０ｍｌ中に溶かした。次いで、イソプロピルアミン１１．０７ｍｌ （０．１３ｍｏｌ）を添加し、引き続きＨＯＢｔ ７．６６ｇ（０．０５ｍｏｌ ）、ＥＤＣＩ ２４．９２ｇ（０．１３ｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミ ン６０．８５ｍｌ（０．３５ｍｏｌ）を添加した。こ の反応混合物を室温で一晩中撹拌し、さらにジクロロメタンで希釈し、５％クエ ン酸（２×）、飽和炭酸水素ナトリウム（１×）及び水（１×）で洗浄した。有 機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮すると、生成物２８．４８ｇがオ フホワイトの固体として得られた。 ＭＳ（ＥＯ）：Ｍ⁺＝２９０。 プロリル−イソプロピルアミドの合成 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−プロリル−イソプロピルアミド（２８．４８ ｇ、９８．２ｍｍｏｌ）をメタノール７５ｍｌ中に溶かした。この溶液をメタノ ール５０ｍｌ中の３スパチュラ量の１０％Ｐｄ／Ｃのスラリーに窒素流中で添加 した。この反応混合物を４時間水素化し、CELITE上で濾過し、メタノールで洗浄 し、溶剤を減圧下で蒸発させると、黄色の結晶性固体を１６ｇが得られた。この 材料をジクロロメタン中に溶かし、５％クエン酸（２×）で洗浄した。合わせた 酸性の水層を１Ｎ ＮａＯＨ及び固体ＮａＯＨでｐＨ１２にもたらし、ジクロロ メタン（２×）で抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、真 空中で濃縮すると、オフホワイトの結晶性固体１４．２ｇが得られた。 ＭＳ（ＣＩ）：Ｍ⁺＝１５７。 （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−［Ｎ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バ リル）−Ｎ−メチルアミノ ）−３−メトキシ−５−メチル−ヘプタノイル−プロリル−プロリル−イソプロ ピルアミド（化合物３）の合成 （３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−［Ｎ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バ リル）−Ｎ−メチルアミノ）−３−メトキシ−５−メチル−ヘプタノイル−プロ リン（０．４５ｇ、０．８５５ｍｍｏｌ）及びプロリル−イソプロピルアミド０ ．１４７ｇ（０．９４０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１５ｍｌ中に溶かした。Ｈ ＯＢｔ ０．０６５ｇ（０．４２８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ ０．１８ｇ（０．９ ４ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン０．４４ｇを添加した。この反応 混合物を室温で一晩中撹拌した。付加的反応体を添加し（プロリル−イソプロピ ルアミド０．０７３ｇ、ＨＯＢｔ ０．０３２ｇ、ＥＣＩ ０．０９ｇ、ジイソ プロピルエチルアミン０．２２３ｍｌ）、及び室温で一晩中撹拌し続けた。この 反応混合物を真空中で濃縮し、酢酸エチル中に再溶解し、水性の飽和ＮａＨＣＯ₃ 、ブライン、及び５％クエン酸で洗浄した。酸性の水層を１Ｎ ＮａＯＨでｐ Ｈ１０にもたらし、酢酸エチル（２×）で抽出した。合わせた有機抽出物を真空 中で濃縮した。残留物を水１００ｍｌ中に溶かし、凍結乾燥すると生成物３３０ ｍｇが羽毛状の白色固体として得られた。 ＥＳＩ−ＭＳ：６６５．５［Ｍ＋Ｈ］⁺ 次の化合物は、例１、２及び３に記載した方法に従って製造することができた 。 省略した形の記号Ｘは次の意味を表す： 例４ 試験管内の細胞毒性作用の測定 細胞毒性作用をミクロ培養テトラゾリウムアッセイ（ＭＴＴ）（付着セルライ ンについての標準的方法）を用いて測定した。このアッセイの詳細は公開されて いる（Alley，et al.，Cancer Research 48:589 -601(1988)。指数的に成長するＨＴ−２９結腸癌細胞の培養を微量定量プレート 培養を製造するために使用した。細胞は１つのウェルあたり５０００〜２０００ ０個の細胞を９６個のウェルプレートに入れ（媒体１５０ｍｌ中）、３７℃で一 晩中成長させた。試験化合物を、１０^-4Ｍ〜１０^-10Ｍで変化する１０倍の希釈 物の形で添加した。次いで細胞を４８時間インキュベートした。それぞれのウェ ル中に生存する細胞の数を測定するために、ＭＴＴ染料を添加した（食塩水中の ３−（４ ５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾ リウムブロミドの３ｍｇ／ｍｌ溶液５０ｍｌ）。この混合物を３７℃で５時間イ ンキュベートし、次いで２５％ＳＤＳ（ｐＨ２）５０μｌを各ウェルに添加した 。一晩中インキュベートした後、５５０ｎｍでの各ウェルの吸光度をＥＬＩＳＡ 読取装置を用いて読み取った。応答したウェルからのデータの平均＋／−ＳＤに ついての値を、式％Ｔ／Ｃ（％処理された生存細胞／対照）を用いて校正した。 ５０％の成長抑制のＴ／Ｃを示す試験化合物の濃度を、ＩＣ₅₀値として表した 。 結果 試験管内評価の結果を次の表に示した。ＩＣ₅₀値は ナノモルの範囲内にあり、この化合物がＨＴ−２９系における明らかな活性を有 することを示す。 表 化合物 ＩＣ₅₀（Ｍ） １ ２×１０^-9 ２ ４×１０^-9 ３ ６×１０^-9 例５ 生体内活性の測定 本発明の化合物を、さらに、臨床的使用を暗示する生体内活性について前臨床 アッセイにおいて試験した。このようなアッセイは、この分野において公知のよ うに、有利にヒト起源の腫瘍組織を移植された（異種移植）ヌードマウスを用い て行った。試験化合物は異種移植片を有するマウスに投与して抗腫瘍効果につい て評価した。 無胸腺ヌードマウス中で成長させたヒト乳癌（ＭＸ−１）を、サイズ中約５０ ｍｇの腫瘍断片を用いて新しいレシピエントマウス中に移植した。移植した日を ０日として示した。このマウスをそれぞれ５〜１０匹のグループに分けた。未処 理のグループを対照とした。３つのグループを、化合物１の皮下注射により治療 し、それぞれのグループは１週あたり３０、２０又は１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量 を投与した。用量は、インプラント後の５、７、９、１２、１４、１６、１９、 ２１及び２３日に投与された。 腫瘍の直径及び体重を週に２回測定した。腫瘍体積はVernierキャリパーを用 いて直径を測定し、次の式を用いることにより計算した： （長さ×幅²）／２＝腫瘍体積ｍｍ³ 平均腫瘍体積をそれぞれの処理グループについて計算し、各グループについて 測定したＴ／Ｃ値を未処理の対照腫瘍と比較した。 もう一つの生体内アッセイにおいて、Ｐ３８８ネズミリンパ球性白血病をドナ ーマウスから移植から７日後に腹膜潅流により収穫し、試験マウスに投与した。 試験マウスは移植３日後に処理し、この薬剤を連続して５日間投与した。未処理 のマウスの生存時間は一般に１１〜１３日の間である。このデータは平均生存時 間（ＭＳＴ）及び処理／対照％で表した。ナショナル・キャンサー・インスティ トウーツ−ガイドラインに従い、１２８〜１９０％の範囲内のＴ／Ｃは中程度〜 良好な活性を有する薬剤であることが示された。 等価 当業者は、本明細書に記載された発明の特別な態様にについての全ての同等な ものを日常の実験によって認識又は確認することができる。このような同等なも のは次の請求の範囲の範囲内に含まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ， ＪＰ，ＫＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＵＡ，ＵＳ (72)発明者 ベルント ヤンセン アメリカ合衆国 01752 マサチューセッ ツ マールボーロウ アップルブリアー レーン 114 (72)発明者 クリスティアン グリージンガー ドイツ連邦共和国 Ｄ―61440 オーバー ウルゼル ハンス―ローター―シュテーク ２ (72)発明者 ダニエル ベリーク ドイツ連邦共和国 Ｄ―60437 フランク フルト アム マイン ゾイルベルガー シュトラーセ 33 (72)発明者 ミヒャエル ボレツキー ドイツ連邦共和国 Ｄ―63067 オッフェ ンバッハ リリシュトラーセ 56 (72)発明者 ジョージ ロバート ペティット アメリカ合衆国 85253 アリゾナ パラ ダイス ヴァレー ブレット ヒルズ ド ライヴ 6232

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 式Ｉ： Ａ−Ｂ−Ｎ(ＣＨ₃)−ＣＨＤ−ＣＨ(ＯＣＨ₃)−ＣＨ₂ＣＯ−Pro−Pro−Ｋ （Ｉ） ［式中、Ａは式：（ＣＨ₃）₂Ｎ−ＣＨＸ−ＣＯのアミノ酸残基を表し、その際 、ｘは直鎖又は分枝鎖のＣ₃〜Ｃ₄アルキル基を表し；Ｂはバリル、ィソロィシル 、ロイシル及び２−ｔ−ブチルグリシルからなるグループから選択されたアミノ 酸残基を表し；Ｄは直鎖又は分枝鎖のＣ₂〜Ｃ₅アルキル基を表し；Ｋはｔ−ブト キシ基又は置換アミノ基を表す］で示される化合物又はそれと製剤学的に認容性 の酸との塩。 ２． Ｋは、−Ｎ（Ｃ₁〜Ｃ₃アルキル）Ｃ₁〜Ｃ₃アルキル、直鎖又は分枝鎖の− ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ₃）₂ＣＮ、−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ₃）₂Ｃ ＣＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ₃）₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ₃）₂ＣＨ₂ＯＨ 、−ＮＨ−Ｃ₃〜Ｃ₈シクロアルキル、−ＮＨ−［３．３．０］−ビシクロオクチ ル、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ（ＯＨ）Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ−キノリル、−ＮＨ−ピ ラジル、−ＮＨ−ＣＨ₂−ベンズイミダゾリル、−ＮＨ−アダマンチル、−ＮＨ −ＣＨ₂−アダマンチル、−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ₃）−フェニル、−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ₃ ）₂−フェニル、−Ｎ（Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキシ）Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル、−Ｎ（Ｃ₁〜Ｃ₄ アルコキシ）−ＣＨ₂−フェニル、−Ｎ（Ｃ₁〜Ｃ₄アルコキシ）フェニル、−Ｎ （ＣＨ₃）Ｏ−フェニル、−ＮＨ−（ＣＨ₂）ｖ−フェニル（ｖ＝０、１、２又は ３）、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−ナフチル（ｍ＝０又は１）、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_w− ベンズヒドリル（ｗ＝０、１又は２）、−ＮＨ−ビフェニル、−ＮＨ−ピリジル 、−ＮＨ−ＣＨ₂−ピリジル、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ピリジル、−ＮＨ−ベン ゾチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾイソチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾピラゾリル、− ＮＨ−ベンズオキサゾリル、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−フルオレニル（ｍ＝０又は１ ）、−ＮＨ−ピリミジル、−ＮＨ−（ＣＨ₂）_m−インダニル（ｍ＝０又は１）、 −ＮＨ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_y−ＣＨ₂ＣＨ₃（ｙ＝０、１、２、３、４又は５）、 −ＮＨ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_y−ＣＨ₃（ｙ＝０、１、２、３、４又は５）、−ＮＨ −ＮＨ−Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ−Ｎ（ＣＨ₃）Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅、 −ＮＨ−Ｎ（ＣＨ₃）ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅、 からなるグループから選択される置換アミノ基を表 す、請求項１記載の化合物。 ３． Ｘがイソプロピル基、ｔ−ブチル基又はｓ−ブチル基を表し；Ｂはバリル 、イソロイシル又は２−ｔ−ブチルグリシルを表し；Ｄはイソプロピル基、ｔ− ブチル基又はｓ−ブチル基を表し；及びＫはｔ−ブトキシ基又は置換アミノ基を 表す、請求項１記載の化合物。 ４． Ｋは−ＮＨＣＨ₃、−ＮＨＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨ（ＣＨ₂）₃ＣＨ₃、−ＮＨ（ ＣＨ₂）₃ＣＨ₃、−ＮＨ（ＣＨ₂）₄ＣＨ₃、−ＮＨ（ＣＨ₂）₅ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ （ＣＨ₃）₂、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、 −ＮＨＣ（ＣＨ₃）₃、−ＮＨＣＨ［ＣＨ（ＣＨ₃）₂−］₂、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｃ Ｈ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂Ｆ 、−ＮＨＣ（ＣＨ₃）₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ（ＣＨ₃）₂、−Ｎ ＨＣＨ（ＣＨ₃）Ｃ（ＣＨ₃）₃、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨ ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂）₂、−ＮＨＣＨ₂Ｃ（ＣＨ₃）₃、ＮＨ−シクロプロピル、−Ｎ Ｈ−シクロブチル、−ＮＨ−シクロペンチル、−ＮＨ−シクロヘキシル、−ＮＨ −シクロヘプチル、−Ｎ（ＣＨ₃）ＯＣＨ₃、−Ｎ（ＣＨ₃）₂、−Ｎ（ＣＨ₃）Ｏ ＣＨ₂ＣＨ₃、−Ｎ（ＣＨ₃）ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−Ｎ（ＣＨ₃）ＯＣＨ（ＣＨ₃）₂ 、−Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）ＯＣＨ₃、− Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）ＯＣＨ₂ＣＨ₃、−Ｎ（ＣＨ₃）ＯＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅、−Ｎ（ＯＣＨ₃ ）ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅、−Ｎ（ＣＨ₃）ＯＣ₆Ｈ₅、−ＮＨ−ＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ（ ＣＨ₂）₂Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ（ＣＨ₂）₃Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ（ＯＨ） Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ−ＣＨ₂−シクロヘキシル、−ＮＨ−インダニル−（１）、−Ｎ Ｈ−ＣＨ₂ＣＦ₃、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｆ）₂、−ＮＨＣ（ＣＨ₃）₂ＣＨ₂ＯＨ、− ＮＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣ（ＣＨ₃）₂ＣＮ、−ＮＨ−キノリ ル、−ＮＨ−ピラジル、−ＮＨ−アダマンチル（２）、−ＮＨ−アダマンチル（ １）、−ＮＨ−ＣＨ₂−ナフチル、−ＮＨ−ベンズヒドリル、−ＮＨ−ビフェニ ル、−ＮＨ−ピリジル、−ＮＨ−ＣＨ₂−ピリジル、−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ピ リジル、−ＮＨ−ベンゾチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾイソチアゾリル、−ＮＨ− ベンゾピラゾリル、−ＮＨ−ベンズオキサゾリル、−ＮＨ−フルオレニル、−Ｎ Ｈ−ピリミジル、−ＮＨ−ＣＨ₂−（４−メチル）チアゾリル（２）、−ＮＨ− ＣＨ₂−フラニル（２）、−ＮＨ−ＣＨ₂−チエニル（２）、−ＮＨ−ＣＨ₂−（ ５−メチル）−チエニル（２）、−ＮＨ−チアゾリル（２）、−ＮＨ−イソキサ ゾリル（３）、−ＮＨ−（３−メチル）イソキサゾリル（５）、−ＮＨ−（３− メチル）イソチアゾリル（５）、−ＮＨ−（５−トリフルオロメチル）チ アジアゾリル（２）、−ＮＨ−（５−シクロプロピル）チアジアゾリル（２）、 −ＮＨ−（４，５−ジメチル）チアゾリル（２）、−ＮＨ−（５−メチル）チア ジアゾリル（２）、 からなるグループから選択される置換アミノ基を表す、請求項１記載の化合物 。 ５． Ｋは−ＮＨＣＨ₃、−Ｎ（ＣＨ₃）₂、−ＮＨ（ＣＨ₂）₂ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ （ＣＨ₃）₂、−ＮＨＣＨ［ＣＨ（ＣＨ₃）₂］₂、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃ 、−ＮＨ（ＣＨ₂）₅ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₂、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）₂ ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂）₂、−ＮＨＣ（ＣＨ₃）₃、−ＮＨＣ Ｈ（ＣＨ₂ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₃）Ｃ（ＣＨ₃）₃、−ＮＨ ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂、−ＮＨＣＨ₂Ｃ（ＣＨ₃）₃、−ＮＨ−シクロプロピル、− ＮＨ−シクロペンチル、−ＮＨ−シクロヘキシル、−ＮＨ−シクロヘプチル、− Ｎ（ＣＨ₃）ＯＣＨ₃、−Ｎ（ＣＨ₃）（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）、−Ｎ（ＣＨ₃）ＯＣＨ₂ Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ₃）−Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨＣ Ｈ（ＣＨ₃）ＣＨ（ＯＨ）Ｃ₆Ｈ₅、−ＮＨ −ＣＨ₂−シクロヘキシル、−ＮＨ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨ−イ ンダニル−（１）、−ＮＨＣＨ（ＣＨ₂Ｆ）₂、−ＮＨＣ（ＣＨ₃）₂ＣＮ、−ＮＨ −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ピリジル、４−モルホリニル、２−チアゾリジニル、及び−Ｎ Ｈ−（５−メチル）チアジアゾリル（２）からなるグループから選択される置換 アミンを表す、請求項１記載の化合物。 ６． Ｘはイソプロピルを表し、Ｂはバリルを表し、Ｄはイソプロピル又はｓ− ブチルを表す、請求項５記載の化合物。 ７． 製剤学的に認容性の担持剤及び治療上有効量の請求項１記載の化合物を有 する製剤学的組成物。 ８． ほ乳類に腫瘍抑制量の請求項１記載の化合物を投与することよりなる、ほ 乳類の腫瘍を治療する方法。 ９． 腫瘍が結腸腫瘍、乳房腫瘍又は肺腫瘍である、請求項１０記載の方法。