JP2000502341A

JP2000502341A - オリゴヌクレオチド合成のための再利用可能の固体支持体、その製法、およびその使用法

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Publication number: JP2000502341A
Application number: JP09523166A
Authority: JP
Inventors: リチャードティー．ポン; シュユアンユー
Original assignee: ユーニヴァスィティテクノロヂィズインタナショナルインク．
Priority date: 1995-12-22
Filing date: 1996-12-13
Publication date: 2000-02-29
Also published as: CA2241331A1; CA2241222A1; DE69621836T2; WO1997023496A1; EP0876390A1; DE69630400T2; EP0877751B1; EP0877751A1; WO1997023497A1; AU1027897A; US6015895A; ATE252109T1; DE69630400D1; DE69621836D1; JP2000502342A; CA2241222C; CA2241331C; ATE219098T1; EP0876390B1; AU725627B2

Abstract

(57)【要約】ヌクレオチド合成用の固体支持体が開示されている。該固体支持体は、式（１）を有しており、式（１）において、Ｒ⁸は、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀のアルキル基、置換又は未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀のアリル基及び置換または未置換のＣ₅〜₄₀のアルキルアリル基からなる群から選ばれる基であり、Ｘ³およびＸ⁴は、同一または異なるもので、-Ｏ-、-Ｓ-、-Ｓ(Ｏ)₂-、及び-Ｎ(Ｒ¹²)-からなる群から選ばれる基であり、Ｒ¹²は、置換又は未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀のアルキル基、置換又は未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀のアリル基および置換又は未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀のアルキルアリル基からなる群から選ばれる基であり、Ｙは、-ＣＨ₂-ＣＨ₂-、-ＣＨ₂-Ｏ-ＣＨ₂-、-ＣＨ₂-ＣＨ₂-ＣＨ₂-、-ＣＨ₂＝ＣＨ₂-、-ＣＨ₂＝Ｃ（ＣＨ₃）-、-Ｃ（ＣＨ₃）＝Ｃ（ＣＨ₃）-、-ＣＨ₂-Ｃ（＝ＣＨ₂）-および-ＣＨ₂-Ｓ-ＣＨ₂-からなる群から選ばれる基であり、ここで、Ｙが、-ＣＨ₂-ＣＨ₂-であるときに、Ｘ３およびＸ４の少なくとも一つは、-Ｏ-である。本発明の一態様は、固体支持体に基づくオリゴヌクレオチド合成用のリンカーアームに関する。固体支持体及びリンカーアームの製造方法が、夫々開示されている。リンカーアームは、他の従来のオリゴヌクレオチド生産プロトコルにおいて、再利用可能であることにより特徴付けられる。

Description

【発明の詳細な説明】オリゴヌクレオチド合成のための再利用可能の固体支持体、その製法、およびその使用法技術的分野一面において、本発明はオリゴヌクレオチド合成（oligonucleotide synthe-s is）のための再利用可能の固体支持体（reusable solid support）に関するものである。他の面で、本発明はこのような再利用可能の固体支持体の製法に関する。もう一つの面において本発明はこのような再利用可能の固体支持体の使用法に関する。背景の技術固体支持体上の有機化学の技術は一般に知られている。この話題に関する有用な調査研究論文がフリュヒテル（Fruchtel）らによる“固体支持体上の有機化学（Organic Chemistry on So1id Supports）”、Angew.Chem.Int.Ed.Engl.（１９９６、３５巻、１７−４２ページ）に見いだされる；この内容は参考文献により本明細書に組み入れられるものである。フリュヒテルらが述べているように、この技術はポリペプチド、オリゴヌクレオチドおよびオリゴ糖の自動固相合成を発達させた。ここで特に興味深いのは、オリゴヌクレオチドの固相合成である。下記はこの話題に関する有用な調査研究論文／テキストブックである：ビューケージ（Beaucage）ら、テトラヘドロン(Tetrahedron)、１９９２、４８巻、２２２３ページ；デービス（Davis）ら、固相合成における技術革新および展望（Innovation an d Perspectives in Solid Phase Synthesis）（編集.R.Epton）、Intercept、An dover、１９９２、６３ページ；モントセラ（Montserra）ら、テトラヘドロン、１９９４、５０巻、２６１７ページ；ビューケージ（S.L.Beaucage）ら、テトラヘドロン、１９９３、４９巻、６１２３−６１９４ページ；この各々の内容は参考文献により本明細書に組み入れられるものである。オリゴヌクレオチドの固相合成において、スクシニルリンカーアームを担持する無機固体支持体上でオリゴヌクレオチドを合成することは公知である；例えば下記の文献を参照されたい：カルサーズ（Caruthers）ら、遺伝子工学（Genetic Engineering）、プリーナムプレス（Plenum Press）、ニューヨーク（１９８２）、４巻、１−１７ページ；レッツィンガー（Letsinger）ら、遺伝子工学、プリーナムプレス、ニューヨーク（１９８５）、５巻、１９１ページ；フレーラー（Froehler）ら、核酸研究（Nucleic Acids Research）１４巻、５３９９−５４０７ページ（１９８６）；およびマットィシ（Matteucci）ら、Journal of American Chemical Society、１０３巻、３１８５−３１８６ページ（１９８１）；これらの内容は参考文献により本明細書に組み入れられるものである。典型的にはスクシニルリンカーアーム（succinyl linker arm）は、下記の一般式を有する：こうしてスクシニル基は、成長するオリゴヌクレオチド（growing oligo-nucleo tide）をその末端３’ヒドロキシル基からエステル結合によって、支持体（supp ort）上の第一アミンにアミド結合によって結合させる。その支持体は、例えば従来のコントロールド・ポーラスガラス（controlled pore glass）（ＣＰＧ）またはシリカである。所望オリゴヌクレオチドがひとたび合成されると、エステルカルボニル基の加水分解によって、それをスクシニルリンカーアームから遊離させるか、または切断する。その加水分解剤は普通は濃水酸化アンモニウムである。典型的にはこの反応は完了するまでに１−４時間かかる。現在の固相オリゴヌクレオチド合成器が改良されると、この切断段階は、所望オリゴヌクレオチドの合成のために必要な総時間数の５０％またはそれ以上に達する。リンカーアームのもう一つの種類は、レッツィンガーら（レッツィンガー）の米国特許第５，１１２，９６２号に記載されている；この内容は参考として本明細書に組み入れられるものである。レッツィンガーは下記の構造式を有するオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド誘導体の固相合成のためのリンカーアームを教示している：こうしてレッツィンガーは、彼の主張によれば、合成されたオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド誘導体を１−３０分の間に、そのオリゴヌクレオチドが完全に保護されたままになるようにして遊離することができる、オキサリルリンカーアームを教示している。オキサリルリンカーアームは、彼の主張によれば、メタノール中５％水酸化アンモニウム、水酸化アンモニウム、湿潤第三アミン、トリエチルアミン／アルコール、トリエチルアミン／メタノール、トリエチルアミン／エタノール、水性トリメチルアミンおよびその他の塩基によって速やかに切断される。残念ながら、レッツィンガーのオキサリルリンカーアームは彼が主張する利点によって被害を受ける。より詳細に述べるならば、本発明者は、レッツィンガーのオキサリルリンカーアームが顕著な自発的加水分解（例えば１カ月あたり１０−４０％の自発的加水分解）を受け、そのため市場的規模におけるその使用が難しいことを発見した。オキサリルアームは作るのがむずかしい、なぜならばそれは、非常に反応性に富みかつ有毒でしたがって危険である塩化オキサリルを使用しなければならないからである。リンカーアームの特殊な性質にもかかわらず、所望オリゴヌクレオチドの生成および切断後、そのリンカーアームは再利用できないことが当業者間で認められている。こうして従来のリンカーアームは再利用不可能と見なされている。これは、オリゴヌクレオチドの製造のための従来のスクシニルリンカーアームの使用を説明する図１に示される。ここで示されるように、所望オリゴヌクレオチドの切断後、支持体は非可逆的にリンカー化合物（すなわちスクシニル部分）に結合し、再利用できない。当業者は、固体支持体オリゴヌクレオチド合成のための再利用可能リンカーアームを必要としている。より詳細に述べるならば、当業者は反復オリゴヌクレオチド合成／切断ができるリンカーアームを必要としている。発明の開示先行技術の上記の欠点の少なくとも１つを防ぎまたは緩和するオリゴヌクレオチド合成のための新規の固体支持体を提供することが本発明の目的である。固体支持体を製造するための新規の方法を提供することが本発明のもう一つの目的である。先行技術の上記の欠点の少なくとも１つを防ぎまたは緩和する固体支持体オリゴヌクレオチド合成のための新規のリンカーアームを提供することが本発明の目的である。固体支持体オリゴヌクレオチド合成のためのリンカーアームの新規の製法を提供することが本発明のもう一つの目的である。よって、その一面において、本発明はオリゴヌクレオチド合成のための固体支持体を提供する；その固体支持体は下記の式であらわされ上記式中、Ｒ⁸は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｘ³およびＸ⁴は同じであるかまたは異なり、−Ｏ−、−Ｓ− 、−Ｓ（Ｏ）₂-、および−Ｎ（Ｒ¹²）−からなる群から選択される；Ｒ¹²は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅-Ｃ₃₀アリール基、および置換または未置換のＣ₅-Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、Ｙは下記からなる群から選択され −ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂-； −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ＝ＣＨ−； −ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ₃）−； −Ｃ（ＣＨ₃)＝Ｃ（ＣＨ₃)−；−ＣＨ₂−Ｃ（＝ＣＨ₂）−；および −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂-；上記式中、Ｙが-ＣＨ₂-ＣＨ₂-であるとき、Ｘ³およびＸ⁴の少なくとも１つは− Ｏ−である。また別の面において、本発明はオリゴヌクレオチド合成のための、下記の式を有する固体支持体の製法を提供する上記式中、Ｒ⁸は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基、および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｘ³およびＸ⁴は同じであるかまたは異なり、−Ｏ−、 −Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）₂-、および-Ｎ（Ｒ¹²）−からなる群から選択され；Ｒ¹²は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基、および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、Ｙは下記からなる群から選択され； −ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ＝ＣＨ−； −ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ₃）−； −Ｃ（ＣＨ₃）＝Ｃ（ＣＨ₃）−；−ＣＨ₂-Ｃ（＝ＣＨ₂）−；および −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−；上記式中、Ｙが-ＣＨ₂-ＣＨ₂-であるとき、Ｘ₃およびＸ₄の少なくとも１つは− Ｏ−であり；この製法は、下記の式Ｉ、IIおよびIIIの化合物を一緒に反応させる段階を含んでおり：上記式中、Ｒ⁸、Ｘ³、Ｘ⁴およびＹは前記と同様に定義される。もう一つの面では、本発明は固体支持体オリゴヌクレオチド合成のための、下記の式であらわされるリンカーアームを提供する：上記式中：Ｒ⁸は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基、および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｘ³およびＸ⁴は同じであるかまたは異なり、−Ｏ−、 −Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）₂-、および−Ｎ(Ｒ¹²)−からなる群から選択され；Ｒ¹²は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基、および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、Ｙは下記からなる群から選択され −ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂-； −ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ＝ＣＨ−； −ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ₃)−； −Ｃ（ＣＨ₃）＝Ｃ（ＣＨ₃）−；−ＣＨ₂−Ｃ（＝ＣＨ₂）−；および −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−；Ｚはリンカー部分であり；ここでＹが−ＣＨ₂−ＣＨ₂−であるとき、Ｘ³およびＸ⁴の少なくとも１つは−Ｏ−である。もう一つの面では、本発明は固体支持体オリゴヌクレオチド合成のための、下記の式を含むリンカーアームの製法を提供する：上記式中：Ｒ⁸は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基、および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｘ³およびＸ⁴は同じであるかまたは異なり、−Ｏ−、 −Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）₂−、および−Ｎ（Ｒ¹²）−からなる群から選択され；Ｒ¹² は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基、および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、Ｙは下記からなる群から選択され −ＣＨ₂-ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ＝ＣＨ−； −ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ₃）−； −Ｃ（ＣＨ₃）＝Ｃ（ＣＨ₃）−；−ＣＨ₂-Ｃ（＝ＣＨ₂)−；および −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−；Ｚはリンカー部分であり；Ｙが−ＣＨ₂−ＣＨ₂−であるときには、Ｘ³およびＸ⁴ の少なくとも１つは−Ｏ−であり；この製法は下記の式IV、ＶおよびVIの化合物を一緒に反応させる段階を含んでなり；上記式中、Ｒ⁸、Ｘ³、Ｘ⁴、ＹおよびＺは前記と同様に定義される。本明細書を通して使用する用語“オリゴヌクレオチド”とは、広い意味を有するものとし、一般的オリゴヌクレオチド、主鎖改変オリゴヌクレオチド（例えばオリゴ治療薬として有用なホスホロチオエート、ホスホロジチオエートおよびメチルーホスホネート同族体など）およびオリゴヌクレオチド誘導体、例えばオリゴヌクレオチド−ペプチド結合体などを包含する。本明細書において、置換部分が参照される場合はその置換の性質は明細書によって制限されるものではなく、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、Ｃ₅〜Ｃ₃₀アリール基、Ｃ₅ 〜Ｃ₄₀アルカリール基からなる群から選択される。図面の簡単な説明本発明の実施態様は添付の図面によって説明される：図１は、従来のオリゴヌクレオチド合成の特異的プロセス経路を示す；そして図２は、本発明の特異的好適実施態様を示す。発明を実施するための最良の形態最初に、本発明の理解を容易にするために、図１を参照されたい；それは固体支持体オリゴヌクレオチド合成のための従来の方法を説明するものである。図１に示す工程の最初の段階は、リンキング化合物、例えば琥珀酸（琥珀酸が記載されているが、無水琥珀酸も用いられる）を従来のアミン末端支持体と反応させることを含んでなる。その反応の結果、リンキング化合物と支持体との間にアミド結合が生成し、スクシニル−支持体結合物が生ずる。次に、スクシニル−支持体結合物を所望の最初のヌクレオシドと反応させ、リンカーアームを形成する。図示したヌクレオシドでは、ＤＭＴはジメチルオキシトリチル、Ｂは核酸塩基、Ｒ’はＨ（デオキシリボヌクレオシドの場合）またはＯＲ（リボヌクレオシドの場合）であり、ここでＲはＨまたは一般的ブロッキング／保護基である。反応の結果リンキング化合物と所望の最初のヌクレオシドとの間に、後者の３’の位置でエステル結合が生成する。その後、そのリンカーアームを一般的オリゴヌクレオチド合成（例えば一般的自動合成器で）に用いて、リンカーアームに結合する所望配列のオリゴヌクレオチドを形成する。そのオリゴヌクレオチドをその後加水分解によってリンカーから切り離す。この加水分解はエステル結合を切断するようにはたらき、それによってオリゴヌクレオチドと、再利用不可能のアミン末端リンカーアームが遊離する。本発明者は、従来の支持体を誘導体化してユニークなヒドロキシ末端官能基を作りだし、それからこの誘導体化支持体を従来のリンキング化合物と反応させると、所望配列のオリゴヌクレオチドを合成できるリンカーアームが生成することを見いだした。本発明の重要な特徴は、誘導体化された支持体が所望配列のオリゴヌクレオチドの切断後、再生されることである。発明者の知る限り、これはオリゴヌクレオチド合成に反復使用できる誘導体化支持体の最初の発見である。本発明の誘導体化支持体は下記の式であらわされ：上記式中、Ｒ⁸は、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基、および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｘ³およびＸ⁴は同じであるかまたは異なり、−Ｏ− 、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）₂-、および−Ｎ（Ｒ¹²）−からなる群から選択され；Ｒ¹² は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基、および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、Ｙは下記からなる群から選択され： −ＣＨ₂−ＣＨ₂−： −ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ＝ＣＨ−； −ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ₃)−； −Ｃ（ＣＨ₃）＝Ｃ（ＣＨ₃）−；−ＣＨ₂−Ｃ（＝ＣＨ₂）−；および −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−；上記式中、Ｙが−ＣＨ₂−ＣＨ₂−であるとき、Ｘ³およびＸ⁴の少なくとも１つは −Ｏ−である。好適には、Ｒ⁸は、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基であり、より好適には置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₁₀アルキル基であり、最も好適にはエチル、ｎ −プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルからなる群から選択されるメンバーである。好適にはＲ¹²は水素である。Ｘ³およびＸ⁴が両方共−Ｎ（Ｈ）−であるのが好ましい。またＹが−ＣＨ₂− ＣＨ₂−であるのが好ましい。上記式における“ＳＵＰＰＯＲＴ（支持体）”は、従来の固体支持体である。その固体支持体の性質は特に制限されておらず、熟練せる当業者の権限の範囲内である。例えば、固体支持体は無機物質でもよい。適した無機物質の非制限的例はシリカ、多孔質ガラス、アルミノシリケート、ボロシリケート、金属酸化物（例えば酸化アルミニウム、酸化鉄、酸化ニッケルなど）およびこれらの１つ以上を含む粘土からなる群から選択できる。或いは、固体支持体は架橋ポリマーのような有機物質でもよい。適した架橋ポリマーの非制限的例はポリアミド、ポリエーテル、ポリスチレンおよびそれらの混合物からなる群から選択できる。ここに用いるための好適固体支持体は一般的なものであり、コントロールド・ポーラスガラスビーズまたはポリスチレンビーズから選択できる。本発明の誘導体化支持体は式Ｉ、IIおよびIII の化合物を一緒に反応させる段階を含む製法によって作られる：上記式中、Ｒ⁸、Ｘ³、Ｘ⁴およびＹは上に定義したものである。上記誘導体化支持体におけるＲ⁸、Ｘ³、Ｘ⁴およびＹの好適実施態様に関する上記の議論は本明細書の誘導体化支持体の製法の議論にも等しくあてはまる。式IIの酸無水物を式Ｉの化合物か式IIIの化合物のどちらかと反応させるためには、特別の活性化の必要はない。残りの化合物を式ＩとIIとの組み合わせ、または式IIとIIIとの組み合わせに付加するには、カルボン酸官能価を一般的方法によって、例えば以下により詳細に論ずる活性化剤の使用によって活性化する。先ず最初に式IIおよびIIIの化合物を無水ピリジン中で触媒（例えば４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ））の存在下で結合させるのが好ましい。その後、式Ｉの化合物を有機溶媒（例えばジクロロメタン）中で、カルボジイミド試薬（例えば１−（３−ジメチルーアミノプロピル）−エチルカルボジイミド（ＤＥＣ））およびアシル化触媒（例えばＤＭＡＰ）を用いて結合する。それから誘導体化支持体を従来のヌクレオシドーリンカー化合物と反応させ、本発明によるリンカーアームを作る。このリンカーアームは下記の式を有する：上記式中、Ｒ⁸、Ｘ³、Ｘ⁴およびＹは上に定義したものであり、Ｚはリンカー部分である。誘導体化支持体およびその製法におけるＲ⁸、Ｘ³、Ｘ⁴およびＹの好適実施例に関して上に論じた議論は、本明細書における誘導体化支持体を基礎にしたリンカーアームの議論にも等しくあてはまる。上記式中、ＮＵＣＬＥＯＳＩＤＥ（ヌクレオシド）は下記の式の１つから選択される部分であるのが好ましい：上記式中、Ｒ⁸およびＲ¹⁰は同じかまたは異なり、水素または保護基であり、Ｒ⁹ は水素（デオキシリボヌクレオシドまたはＤＮＡの場合）または−ＯＲ¹¹（リボヌクレオシドまたはＲＮＡの場合）であり、ここではＲ¹¹は水素または保護基であり、Ｂ＊は核酸塩基である。例えばＲＮＡの場合、２個の水酸基があり、それらは保護されていてもよい。またリンカーは５’−，３’−または（もしリボースである場合）２’−ヒドロキシル位置のいずれかに付着できる。実際、ＲＮＡ配列の場合、ヌクレオシドとリンカー化合物との間に形成されるエステルリンカーがヌクレオシドの２’−ヒドロキシル位置であっても、３’−ヒドロキシル位置であってもほとんど差はない。こうして熟練せる当業者はヌクレオシドがその種々のヒドロキシル部分において保護され、またはブロックされることを理解するであろう。有用な保護基の非制限的例はトリチル、メトキシトリチル、ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）、ジアルキルホスファイト、ピバリル−イソブチルオキシカルボニル、ｔ−ブチルジメチルシリル、フェノキシアセタール、９−フェニルキサンテン−９−イル（ピキシル）、テトラヒドロピラニル、メトキシテトラヒドロピラニル、メトキシメチル、ベンジルオキシメチル、メトキシエトキシメチル、メチルチオメチル、ジアルキルホスフェート、レブリニル、ジメチルフェニルシリル、トリメチルシリル、イソプロピルジメチルシリル、ジイソプロピルメチルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、トリイソプロピルシリル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、トリフルオロアセチル、アリル、ベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｏ−ヒドロキシスチリルジメチルシリル、２−オキソ−１，２−ジフェニルエチル、アリルオキシカルボニル、モノメトキシメチル、ニトロベラトリルオキシカルボニル、ジメトキシベンゾイン、ジメトキシベンゾインカルボネート、メチルニトロピペロニルカルボネート、フルオレニルメトキシカルボニル、２− フェニルスルホニルエトキシカルボニル、フルオロフェニルメトキシピペリジニルなどからなる群から選択される。当業者には公知のように、５’−ヒドロキシル位置に用いられる保護基の主な必要条件は、リンカーアームの切断をおこすことなくそれが選択的に除去されることである。例えば５’−ヒドロキシル位置（１つまたは複数）のための好適保護基は酸に不安定なジメトキシトリチル基である。その他のヒドロキシル位置の保護基の主な必要条件は上記保護基の除去のために用いられる条件に対して安定なことである。これらの後者の保護基はリンカーを切断するために用いる同じ条件（以下で論ずる）または分離条件によって除去される。これらの位置の好適保護基はトリアルキルシリル（すなわちｔ−ブチルジメチルシリル）またはアセチルである。その他の情報は以下の文献から得られる：１．グリーン（T.W.Gr eene）& ナッツ（P.G.M.Nuts）、“有機合成における保護基（Protecting Group s in 0rganic Synthesis）”、第２版（１９９１）、JohnWi1ey and Sons,Inc. ，ＮＹ；２．シェルハース（M.Schelhaas）& ワルドマン（H.Waldman）、“有機合成における保護基戦略（Protecting Group Strategies in 0rganic Synthesis）”、 Angew.Chemie Int.Ed.Engl.３５巻、２０５６−２０８３ページ（１９９６）；３．ゲイト（M.J.Gait）編“オリゴヌクレオチド合成、実際的アプローチ（Ol igonucleotide Synthesis A Practical Approach）”IRL Press，オックスフォード（１９８４）；４．ナラング（S.A.Narang）編、“ＤＮＡおよびＲＮＡの合成および使用（Sy nthesis and Applications of DNA and RNA）”、Academic Press,Inc.，オーランド（１９８７）；５．アグラワル（S.Agrawal）編、“分子生物学における方法、２０巻：オリゴヌクレオチドおよび同族体のためのプロトコル（Methods in Molecular Biolo gy,Vol.20:Protocols for Oligonucleotides and Analogs）”、Humanapress、T otowa、ＮＪ（１９９３）；これらの各々の内容は、その他の考えられるヒドロキシル保護基について論ずるために、参考として本明細書に組み入れられるものである。所望ヌクレオシドを保護する方法は一般的なものであり、熟練せる当業者の権限の範囲内である。例えばメルビー（Melby）の米国特許第３，４００，１９０号、カルサース（Caruthers）らの米国特許第４，４５８，０６６号を参照されたい;その各々の内容は参考として本明細書に組み入れられるものである。本発明の範囲のデオキシリボヌクレオシドの好適製法は、５’−ジメトキシトリチル保護基および適した環外アミノ保護基を有するヌクレオシド、例えばＮ６ −ベンゾイル−５’−ジメトキシトリチル−２’−デオキシアデノシン、Ｎ４− ベンゾイル−５’−ジメトキシトリチル−２’−デオキシシチジン、５’−ジメトキシトリチル−Ｎ２-イソブチリル−２’−デオキシグアノシン、または５’ −ジメトキシトリチルチミジンを用いることである。本発明の範囲のリボヌクレオシドの好適製法は、適した環外アミノ保護基を有し、２’−または３’−ヒドロキシル位置のどちらかに保護基がない５’−ジメトキシトリチル保護ヌクレオシドを用いることである。リンカーはその後２つの隣接ヒドロキシル基のどちらか１つ（どちらでもかまわない）と反応することができ、その結果２’−および３’−結合の混合物を与える。その後未反応のヒドロキシル基を、無水酢酸による固定ヌクレオシド処理によってアセチル化することができる。別法として、５’−ジメトキシトリチル基、適切な環外アミノ基保護、そして３’−ヒドロキシル保護基かまたは２’−および３’−保護基の混合物のどちらかを有するリボヌクレオシドを用いることができる。３’−保護化合物は、２’−ヒドロキシル位置を保護するときに同時に生成し、ほとんど他の用途をもたない、概ね好ましくない異性体である。本発明のリンカーアームを示す上記式において、Ｚはリンカー部分である。以下に論ずるように、Ｚは一般式ＨＯ−Ｚ−ＯＨ（下記の式Ｖ）を有するリンカー化合物から誘導される。そのリンカー化合物の性質は特に制限されていない。好適１実施態様において、リンカー部分Ｚは下記の式であらわされる；熟練せる当業者には公知のように、このリンカー部分は琥珀酸または無水琥珀酸から誘導される。その他の好適実施態様において、リンカー部分Ｚは下記の式を有する：熟練せる当業者には明らかなように、このリンカー部分はジグリコール酸または無水ジグリコール酸から誘導される。また別の好適実施態様において、リンカー部分Ｚは下記の式であらわされる：熟練せる当業者には明らかなように、このリンカー部分はオキサル酸または塩化オキサリルから誘導される。また別の、最も好適な実施態様において、リンカー部分Ｚは下記の式であらわされる：上記式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は同じかまたは異なり、水素、ハロゲン化物、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｒ⁴およびＲ⁵は同じかまたは異なり、水素、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂ ₀ アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基、および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｘ¹は−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）₂−および−Ｎ（Ｒ）−からなる群から選択され；Ｒは水素、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅ 〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基から選択され；ｎは０、１または２であり；Ａ¹およびＢ¹の１つが水素、ハロゲン化物、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、Ａ¹およびＢ¹の他の１つが下記の式であらわされ: 上記式中、ｐは０または１、Ｘ²は−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）₂ −および−Ｎ（Ｒ）−からなる群から選択され；Ｒは水素、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、Ｒ⁶およびＲ⁷ は、同じかまたは異なり、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、ｍは、０、１または２である。この実施態様において、Ｂ¹は、好適には水素、ハロゲン化物、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀ アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択される。好適にはＲ、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶およびＲ⁷の少なくとも１つ、より好適にはそれらの各々が水素であり、ｍおよびｎの少なくとも１つが、より好適には両方とも１であることが好ましい。Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³の各々が水素で、Ｘ¹およびＸ²が両方共−Ｏ−であることがさらに好ましい。こうしてこの実施態様ではリンカー部分Ｚの最も好適な形がヒドロキノン−Ｏ，Ｏ’−二酢酸から誘導される。もう一つの好適実施態様において、リンカー部分Ｚは下記の式によってあらわされる：上記式中、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶およびＲ⁷は同じか異なり、水素、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ５-Ｃ３０アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、Ｙは、Ｏ、Ｓ，ＳＯ₂およびＯ−（（ＣＨ₂）１−Ｏ）ｑからなる群から選択され、ｌは、６０以下の整数であり、ｑは１−１０００の範囲内の整数であり、ｎおよびｍは同じかまたは異なり、１または２であり、この際Ｙが０であるときはｎおよびｍの少なくとも１つが２であるという条件がつけられる。好適には１は、１−１０の範囲内の整数であり、ｑは１−１０００の範囲内の整数である。この実施態様において、リンカー部分の最も好適な形はチオジグリコール酸（すなわちＲ⁴＝Ｒ⁵ ＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝Ｈ、ｎ＝ｍ=１およびＹ＝Ｓ）から誘導される。本発明のリンカーアームは式IV、ＶおよびVIの化合物を一緒に反応させる段階を含む製法によって作られる：上記式中、Ｒ⁸、Ｘ³、Ｘ⁴、ＹおよびＺは前の定義と同様である。本発明のリンカーアームに関するＲ⁸、Ｘ³、Ｘ⁴、ＹおよびＺの好適実施態様に関する上記の議論は、リンカーアームを作る製法の議論にも等しくあてはまる。式IV、ＶおよびVIの化合物は活性化剤の存在下で反応させるのが好ましい。本明細書を通して用いられる用語“活性化剤”とは広義のものであり、カルボキシル部分のアシル炭素に離脱基を結合させることによって、カルボキシル部分（例えば式のリンキング化合物上の）を活性化することのできる親電子試薬類を包含する−例えばボダンスキー（M.Bodanszky）著“ペプチド合成の原理（Princip les of Peptide Synthesis）”、第２版、Springer-Verlag、ベルリン（１９９３）を参照されたい；この内容は参考として本明細書に組み入れられるものである。こうして活性化剤は下記の少なくとも１つを開始できなければならない：（ａ）分離した段階または諸段階においてカルボキシル部分から反応性アシル化剤を形成し（これは誘導体の１例である）、その後直ちにアミノ成分（この場合はアミノ末端支持体）で処理してアミド結合を形成し、またはヒドロキシ成分（この場合はヒドロキシ末端支持体または所望ヌクレオシド上のヒドロキシル基）で処理してエステル結合を形成する；（ｂ）段階（ａ）に述べたアミノ−またはヒドロキシ成分で処理する前に、別個に任意的精製を伴う、分離可能のアシル化剤の形成；（ｃ）アミノ／ヒドロキシ成分の存在下で、２成分の混合物に活性化剤を添加することによって、アシル化中間体を形成する。こうして（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の各々はカルボン酸エステルおよび−アミド両方を形成するために適用でき、３経路すべてはヌクレオシドを支持体に結合させるために使用できる。例えば、先ず最初に塩化オキサリルをトリアゾールと反応させ、生成したオキサリルトリアゾリドにヌクレオシドを付加するというレッツィンガーの方法は経路（ａ）の例である。ｐ−ニトロフェノール、またはジ−、トリ−、テトラ−、またはペンタ−塩素化またはフッ素化フェノール、またはＮ−ヒドロスクシンイミドを用いてカルボン酸基を“活性”エステルに変換するのは経路（ｂ）の一般的例である。経路（ｃ）は近年最も一般的に用いられる方法であり、カルボジイミド試薬（ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−（３−ジメチルアミノプロピル）エチルカルボジイミド、およびジイソプロピルカルボジイミド）も、ウロニウム試薬（０−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３− テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、２−（１Ｈ −ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ））も両方共このアプローチに用いられる。好適実施態様において、活性化試薬に加えて、式（IV）、（Ｖ）および（VI）の化合物の反応は、反応をスピードアップするための求核触媒または添加剤（典型的には４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、または１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ））、およびカルボン酸基をイオン化するための第三アミン塩基（典型的にはトリエチルアミン、ピリジン、またはジイソプロプルエチルアミン）の存在下で行われる。こうして熟練せる当業者は、活性化されたカルボン酸基がエステルまたはアミド結合の生成を適切に開始することができ、活性化試薬が所望ヌクレオシドに悪影響を与えないという条件のもとでは、活性化剤の精密な性質は特に制限されないことを当然理解する。こうしてカルボン酸の、酸塩化物；活性エステル（すなわちニトロフェニル、ニトロフェニルチオ、トリクロロフェニル、トリフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、または３−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−４−オキソ−ベンゾトリアジンエステル）；活性ヒドロキシルアミンエステル（すなわちＮ−ヒドロキシフタールイミドまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミド）；酸無水物；または混合無水物への変換による活性化は、所望結合を形成する誘導体を生成し、したがってこれらの戦略は本発明に含まれる。活性化剤の非制限的例は、アリールスルホニルクロリド（例えばベンゼンスルホニルクロリド（ＢＳ−Ｃｌ）、メシチレンスルホニルクロリド（ＭＳ−Ｃｌ) 、トリイソプロピルスルホニルクロリド（ＴＰＳ−Ｃ１））；活性アリールスルホニルエステル（すなわちＢＳ−Ｃｌ、ＭＳ−ＣｌまたはＴＰＳ−Ｃｌのイミダゾール、トリアゾール、ニトロトリアゾール、またはテトラゾールエステル）；２−エトキシ−１−（エトキシカルボニル）−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）；アシルカルボネート；１，１’−（カルボニルジオキシ）ジベンゾトリアゾール；クロロトリメチルシラン；カルボジイミド（すなわちジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−エチルカルボジイミド（ＤＥＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ））の単独化合物、または補助的求核剤（すなわち１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、または３−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロ −１，２，３−ベンゾトリアジン−４−オン（ＨＯＯｂｔ））および／または触媒（すなわち４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）またはＮ−メチルイミダゾール（ＮＭＩ））との組み合わせからなる群から選択される；またはウロニウム塩（すなわちテトラメチルウロニウムクロリド（ＴＭＵ−Ｃｌ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、２−スクシンイミド−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＳＴＵ）、２−（３，４−ジヒドロ−４− オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン−３−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＤＢＴＵ）、２−（２−オキソ −１（２Ｈ）−ピリジル−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＰＴＵ）、２−（５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシミド）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＮＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，３−ジメチル−１，３−ジメチレンウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＭＤＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，３−ジメチル−１, ３−トリメチレンウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＭＴＵ）、０ −（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−ビス（ペンタメチレン）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＰｉｐＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−ビス（テトラメチレン）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＰｙＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ））の単独化合物、または補助的求核剤（すなわち１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１−ヒドロキシ− ７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、または３−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベンゾトリアジン−４−オン（ＨＯＯｂｔ））および／または触媒（例えば４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）またはＮ−メチルイミダゾール（ＮＭＩ））と組み合わせ；または、ホスホニウム塩（例えばベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリスピロリジノホスフォニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、２−（ベンゾトリアゾール−１ −イル）オキシ−１，３−ジメチルイミダゾリジニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＩ）、ブロモトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｒｏＰ）、７−アザベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＡＯＰ）、および７−アザベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＡＯＰ））の単独化合物、または補助的求核剤および／または触媒（上記のもの）との組み合わせも所望結合を生成する。適した活性化剤のその他の例は下記の文献のいずれかに見いだされる：ボダンスキー（I.Bodanszky）“ペプチド合成の原理”、第２版、スプリンゲルフェアラーク（Springer-Verlag）、ベルリン（１９９３）；ジョーンズ（J.Jones）“アミノ酸およびペプチドの合成（Amino Acid and Pe ptide Synthesis）”、オックスフォード大学出版（Oxford University press）、オックスフォード（１９９２）；グラント（G.Grant）“合成ぺプチド：ユーザーのための指針（Synthetic Pep tides：A Users Guide）”、ダブリュー．エイチ．フリーマンアンドコウ．ニューヨーク（W.Ｈ.Freeman & Co.ＮＹ)（１９９２）；ハスラム（E.Haslam）、テトラヘドロン、３６巻、２４０９ページ（１９８０）：オグリアルソ（M.A.Ogliaruso）およびウォルフェ（J.F.Wolfe）“カルボン酸、エステル、それらの誘導体の合成（Synthesis of Carboxylic Acids,Esters ａnd Their Derivatives）”、ジョンウイリイアンドサンズチセスタ（John Wi1ey & Sons、Chicester）（１９９１）；これら各々の内容は、参考文献により本明細書に組み入れられるものである。本発明のリンカーアームを作る場合、反応の順序は特に制限されていない。例えば１実施態様において（これは好適実施態様である）、式IVおよびVの化合物を先ず最初に反応させて、結合体を形成し、それを式VIの化合物と反応させる。もう一つの実施態様では、式VおよびVIの化合物を最初に反応させて結合体を形成し、それを式IVの化合物と反応させる。式IVおよびVの化合物を、式VIの化合物に付加した場合、各固定ヒドロキシル基の誘導体化リガンドへの定量的変換はおきないのが普通である。そこで、支持体表面の未反応のヒドロキシル基をキャッピング試薬との反応によって保護する（キャップする）のが好ましい。これは、その後のオリゴヌクレオチド鎖延長反応に関与し、その結果末端ヌクレオシドの欠けた欠陥配列を生成する遊離ヒドロキシル基を軽減する。キャッピング試薬が可逆的であり、次の支持体誘導化サイクルの前にそのキャッピング剤を除去してヒドロキシル部位を再生できるのが好ましい。未反応部位のキャッピングは一般的であり、それは活性化カルボン酸または無水物との反応によってエステルを形成することによって、または上記のような保護基の付加によって行われる。例えば、ｔ−ブチルフェノキシ酢酸無水物またはより好適にはクロル酢酸無水物の２，６−ルチジン／ＴＨＦ溶液を等量のＮ−メチルイミダゾール−ＴＨＦ溶液と合一したものがキャッピング試薬の有用な例である。図２により、本発明の種々の実施態様の好適反応経路が示される。わかりやすいように、未反応のリンカー部位とその後のキャッピング基の付加および除去は図２には示していない。図２において、ＤＭＴはジメトキシトリチルをあらわし；Ｂ＊は核酸塩基をあらわし、Ｒ¹⁰は前に説明したものである。熟練せる当業者には明らかなように、支持体は、オリゴヌクレオチド切断および支持体再生後、反応スキームの或る点にリサイクルされ、そこで再びＨＱＰＤ−ヌクレオシド結合体と結合し、その後のオリゴヌクレオチド合成に利用される。さらに図２の“オリゴヌクレオチド合成”を参照すると、ひとたび本発明のリンカーアームが生成すると、それを従来の方法に用いてオリゴヌクレオチドが合成される−−例えばレッツィンガーの米国特許第５，１１２，９６２号を参照されたい；これは参考として本明細書に組み入れられる。オリゴヌクレオチドがひとたび合成されたならば、それを固体支持体から切断し、遊離オリゴヌクレオチドが得られ、支持体はそれから再生される−−図２を参照されたい。切断段階は、最初のヌクレオシドがリンキング化合物に付着した点の加水分解を含める。支持体の再生は次の２部分の除去を含める：（ｉ）式VI（上記）から式Ｖ（上記）によってあらわされる構造の除去、それはオリゴヌクレオチド生成物の遊離と同時におきる、および(ii)支持体（support）上の式VI（上記）の未反応ヒドロキシル部位を保護する（キャップする）ために用いられた部分の除去。これら２部分の除去は同時にまたは別々におこり、支持体を再生できる。単一試薬のみを用いて両部分を同時に除去することはより簡単であるが、オリゴヌクレオチド生成物に悪影響を与えない試薬を用いるように注意しなければならない。１つの試薬（典型的には水酸化アンモニウム）を用いるオリゴヌクレオチドの除去と、その後の第２の試薬による支持体の処理とを含む２段階再生（それはより速いが、さもなくばオリゴヌクレオチド生成物を損傷し、そのため２段階再生の使用が必要になる）は、キャッピングおよび再生試薬の選択に巾をもたせる。切断するのに用いられる試薬は特に制限されていない、そして熟練せる当業者の権限の範囲内である。好適にはその試薬はオリゴヌクレオチド生成物を損傷しない程十分にマイルドで、だが速やかな切断をおこすように十分強い塩基である。この目的に適した試薬の非制限的例は、水酸化アンモニウム、水酸化アンモニウム／メタノール、アンモニア／メタノール、水酸化アンモニウム／メチラミン、炭酸カリウム／メタノール、Ｉ−ブチラミン、エチレンジアミン、メチラミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン／水などからなる群から選択される。切断はフッ化物イオン（例えば１Ｍ−フッ化テトラブチルアンモニウム／ＴＨＦまたはトリエチルアミントリヒドロフルオリド）を用いて中性条件下でも行われる。未反応部位からキャッピング試薬を除去するために用いる試薬は上記の試薬またはその他のより強い塩基類、例えば水酸化ナトリウムまたはカリウムなどからなる。我々の好適実施態様において、水酸化アンモニウムを用いてオリゴヌクレオチドを支持体から切り離し、ＨＱＰＤリンカーアームを除去し、クロロアセチル保護ヒドロキシル基を切り離すことは単一の再生段階でできる。切断および再生のための適温は室温であるが、使用する装置の制限に応じて、より高いまたはより低い温度も使用できる。本発明の実施態様は、本発明の範囲を制限するためのものではない下記の実施例によって説明される。実施例には下記の材料を用いた；１．ＣＰＧ、長鎖アルキルアミンコントロールド・ポーラスガラス、１２０− ２００メッシュ、５００Å、９０−１２０μｍｏｌ／ｇのＮＨ2基）；ＣＰＧ社（Lincoln Park、ＮＪ）から市販される）；２．ＨＱＰＤ、ヒドロキノン−Ｏ，Ｏ’−二酢酸、ランカスターシンセシス（Lancaster Synthesis）社（ランカシャー（Lancashire）、英国）から市販される; ３．水酸化アンモニウム溶液（２８−３０％）および溶媒は、ＶＷＲ Canlab 社（Edmonton,Alberta,カナダ）から入手した; ４．キャップＡ：無水酢酸、２，６−ルチジンおよびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１：１：８の容量比からなる溶液；５．キャップＢ：Ｎ−メチルイミダゾールおよびＴＨＦ、１６：８４の容量比からなる溶液；６．Ｉ₂/Ｈ₂Ｏ酸化：ＴＨＦ中０.０５ＭＩ２、Ｈ₂Ｏおよびピリジン、容量比７：２：１からなる溶液; ７．水酸化アンモニウム／４０％メチラミン水溶液（ＡＭＡ）、容量比１：１；８．無水ピリジンおよびアセトニトリル（ＣａＨ₂から蒸留したもの）；９．無水メタノール、Ｍｇターニングから蒸留したもの；１０．ＤＩＥＡ、ジイソプロピルエチルアミン、試薬級；１１．ＭｅＣＮ、アセトニトリル、低水ＤＮＡ合成級；１２．ＤＭＡＰ、４−ジメチルアミノピリジン、試薬級；１３．ＤＥＣ、１−（３−ジメチルアミノプロピレン）−エチルカルボジイミド、試薬級；１４．ＨＢＴＵ、２−（１Ｈ−べンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオローホスフェート、試薬級；１５．ＨＡＴＵ、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、試薬級; １６．ＨＯＡＴ、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、試薬級；１７．ｔＢＰＡ、ＴＨＦ中ｔ−ブチルフェノキシ酢酸無水物、パースペクチブバイオシステムズ（Perseptive Biosystems）社から入手；１８．ＨＯＢＴ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、試薬級；そして１９．ＴＥＡ、トリエチルアミン、試薬級。下記の実施例において不溶性支持体上（に担持されている）ヌクレオシドの量は分光光度法トリチル分析によって測定した。この方法では支持体（４−５ｍｇ）の試料を直接１０ｍＬ容量フラスコに正確に秤取した。それから１，２−ジクロロエタン中ジクロロ酢酸溶液（ジクロロ酢酸：１，２−ジクロロエタンの容量比、５：９５）を加えてフラスコを満たす。その内容物をその後徹底的に混合し、オレンジ色の溶液の吸光度をフィリップスＵＶ／Ｖｉｓ分光光度計で波長５０３ｎｍで測定した。それからヌクレオシド担持量（μｍｏｌ／ｇのＣＰＧ）を次のように計算した：担持量＝（Ａ₅₀₃×Ｖｏｌ×１０００）／（Ｗｔ×７６）上記式中、Ａ₅₀₃＝５０３ｎｍにおける吸光度、Ｖｏｌ=溶液の容量（ｍＬ）、Ｗｔ=試験したＣＰＧの量（ｍｇ）。トリチル測定の精度は約±２−３％であった。実施例１−５：５’−ジメトキシトリチルヌクレオシド−３’−Ｏ−ヘミヒドロキノン-Ｏ，Ｏ’−ジアセテートの合成種々のＨＱＰＤ−ヌクレオシド結合体を下記の一般的方法によって合成した：ＨＱＰＤ（１０ｍｍｏ１、２．２６ｇ）、５’−ジメトキシトリチル保護ヌクレオシド（１０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１ｍｏl、１２２ｍg）、ＤＥＣ（１０ｍｍｏｌ、１．９２ｇ）、トリエチルアミン（０．２ｍＬ）およびジクロロメタン（５０ｍＬ）を１００ｍＬ丸底フラスコ中で一緒にし、室温で一晩撹拌した。溶液を分離漏斗に移し、付加的ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）で希釈し、酸性にしたＨ₂ Ｏ（数滴の１０％ＨＣｌ水溶液を含む１５０ｍＬＨ₂０）で１回洗い、Ｈ₂Ｏで数回洗った。ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、それから蒸発すると、生成物が明灰色固体として得られた；この生成物においてＢ＊およびＲ⁹は表１の通りである。粗物質をシリカゲルＴＬＣ（１０％メタノール／ＣＨＣ１３）によって試験した。所望ヌクレオシド−ＨＱＰＤ生成物が主要産物であり（Ｒｆ＝０．０４−０．１３）、少量の出発原料５’−ジメトキシトリチル保護ヌクレオシド（Ｒｆ＝０．４−０．７）と、ジエステルと予想される副産物（Ｒｆ＝０．７−０．９）があった。その粗物質は支持体に付着するのに適しており、さらに精製することなく用いた。こうして熟練せる当業者は、実施例１−４がＨＱＰＤ−デオキシリボヌクレオシド結合体の製造に関連し、一方、実施例５はＨＱＰＤ−リボヌクレオシド結合体に関係することを理解する。実施例６：Ｎ−（１−ヒドロキシヘキシル）−琥珀酸ジアミドＣＰＧの製法。ＣＰＧ（２５ｇ）、無水琥珀酸（５０ｍｍｏｌ、５ｇ）、ＤＭＡＰ（５ｍｍｏｌ、６１０ｍｇ）および無水ピリジン（１１０ｍＬ）を２５０ｍＬ丸底フラスコ中で一緒にし、室温で振とうした（２４時間）。その後ＣＰＧを濾別し、メタノールで、その後クロロホルムで洗い、乾燥した。スクシニル化ＣＰＧ（５ｇ）と、６−アミノ−１−ヘキサノール（１ｍｍｏｌ、１２１）と、ＤＭＡＰ（０．５ｍｍｏｌ、６１ｍｇ）と、ＤＥＣ（５ｍｍｏl 、９５８ｍｇ）と、トリエチルアミン（０．５ｍＬ）と、ジクロロメタン（２０ｍＬ）とを１００ｍＬ丸底フラスコ中で一緒にし、室温で一晩振とうした。ペンタクロロフェノール（２．５ｍｍｏｌ、６７０ｍｇ）を加え、フラスコを再度一晩振とうした。ピペリジン（２５ｍＬ）を加え、５分間振とう後、ＣＰＧを濾別し、メタノールで、その後クロロホルムで洗い、乾燥した。未反応のすべてのスクシニル基を確実に定量的にブロックするために、ＣＰＧに２度目にはペンタクロロフェノール（２．５ｍｍｏｌ、６７０ｍｇ）、ＤＭＡＰ（０．５ｍｍｏｌ、６１ｍｇ）、ＤＥＣ（５ｍｍｏｌ、９５８ｍｇ）、トリエチルアミン（０．５ｍＬ）およびジクロロエタン（２０ｍＬ）を加えた。室温で一晩振とう後、ピ．ペリジン（２５ｍＬ）を加え、さらに５分後、ＣＰＧを濾別し、上記のように洗い、乾燥した。実施例７−１１：ＨＯＰＤ−ヌクレオシド結合体とＮ−（１−ヒドロキシヘキシル）−琥珀酸ジアミドＣＰＧとの結合実施例７−１１において、実施例１−５でそれぞれ製造された種々のＨＱＰＤ −ヌクレオシド結合体を実施例６で製造した支持体に結合し、本発明の範囲内の種々のリンカーアームを作った。下記の一般的方法を用いた：ヒドロキシル誘導体化ＣＰＧ（２５０ｍｇ）、ＨＢＴＵ（０.０５ｍｍｏｌ、１９ｍｇ）、ＨＯＢＴ（０．０５ｍｍｏｌ、７ｍｇ）、およびＨＱＰＤ−ヌクレオシド結合体（０．０５ｍｍｏｌ）を４ｍＬガラス製バイアルに一緒に入れ、セプタム（隔膜）で封止した；ＤＩＥＡ（１．５ｍｍｏｌ、０．２６ｍＬ）および無水アセトニトリル（１．３ｍＬ）をシリンジによって加えた；そのバイアルを室温で１０分間振とうした；その後ＣＰＧを濾別し、ジクロロメタンで洗い、乾燥した。ヌクレオシド担持量を比色トリチル分析によって測定し（ポン（R.T.Pon）著“分子生物学における方法”、２０巻：オリゴヌクレオチドおよび同族体のためのプロトコル（Protocols for Oligonucleot ides and Analogs）、S.Agrawal編、１９９３、Humana Press Inc.、Totowa,ＮＪ；この内容は参考として本明細書に組み入れられる）、表２に報告する。実施例１２−２２：ＨＱＰＤ−ヌクレオシド結合体をＮ−（１−ヒドロキシヘキシル）−琥珀酸ジアミドＣＰＧに結合するための自動的方法。これらの実施例において、実施例７−１１に記載した方法を用い、パーキンーエルマーアプライドビオシステムズ（Applied Biosystems）３９４自動ＤＮＡ合成器を使用した。ＤＩＥＡ（２等量）を含むＨＱＰＤ−ヌクレオシド結合体（０．２Ｍ）１等量）およびカップリング剤（０．２Ｍ）（両方共濾過したアセトニトリル溶液）をそれぞれ自動合成器のビンの位置＃７および＃８に据え付けた。ヒドロキシル誘導体化ＣＰＧ（実施例６で作られた）をプラスチック合成カラム（〜１２ｍｇ／カラム）に入れ、合成器のカラム位置＃１に据え付けた。一般的プログラム（開始操作）を準備した：それは（ｉ）カラムをアセトニトリルで洗う（４×２０秒）；（ii）両方のボトルの位置＃７および＃８から同時に溶液を供給し、合成カラムを充填する（４．０秒）；（iii）カップリング反応を進行させるために種々の時間（０−６００秒）待つ；そして（iv）カラムをアセトニトリルできれいに洗う（４×２０秒）。ヌクレオシド担持量を、変更されていない合成サイクルを用いて合成器から放出されるトリチル色の比色分析によって測定する。上記の方法を用いて多数の種々異なるカップリング剤の程度および速度を評価した。この結果を表３に報告する。実施例２３：支持体のリサイクルの可能性この実施例では、実施例６に記載の支持体を用いて（実施例７−１１に記載したような）ヌクレオシドカップリングおよびＨＱＰＤリンカーの分離（切断）が複数サイクル行えるかどうかを調べるために最初の研究が行われた。この実施例に用いた装置はパーキン−エルマー、アプライドビオシステムズ支部から市販される３９４型ＤＮＡ合成器である。この合成器は通常、無水アセトニトリル中ＨＱＰＤ−ヌクレオシド結合体（０．２Ｍ）およびＤＩＥＡ（０．４Ｍ）溶液を無水アセトニトリル中ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ／ＤＩＥＡ溶液（０．２Ｍ）と同時に混合し、その後実施例１２−２２に記載したように１０分間のカップリング（待ち（wait））段階を行うようにプログラムされた。その後合成器を作動して、ＡＭＡ溶液を用いて１０分間の切断段階を行う；キャッピング段階は行わない。同じＨＱＰＤ−ヌクレオシド結合体を用いるカップリングおよび切断の連続サイクルのための支持体上のヌクレオシド担持量を表４に報告する。わかりやすいように、表４には、使用した特定のＨＱＰＤ−ヌクレオシド結合体に関する実施例１−４を参照した。注：１特に記載のない限り、すべての試薬は１：１のモル比である２１等量のＤＩＥＡも含む３待ち段階（wait step）表４の結果は明らかに、少なくとも支持体に結合した最初のヌクレオシドに関しては、そのヌクレオシドを反復して切り離し、それを再度ＨＱＰＤ−ヌクレオシド結合体の形で支持体に結合させることが可能であることを示している。実施例２４−支持体のリサイクルの可能性この実施例では、実施例２３に記載したＤＮＡ合成器と、実施例１０で作ったリンカーアームを用いて複数のオリゴヌクレオチドを製造した。最初に、リンカーアームをｔＢＰＡ溶液とＣａｐＢ試薬との混合物（容量比１：１）で３０分間キャッピングし、その後３本のプラスチック合成カラムに充填した（４０−６０ｍｇ／カラム）。複数の合成カラムを用いて、種々の段階を通して少量のリンカーアームを処理するために遭遇する困難を軽減した。それらの合成カラムを、変更しない１μｍｏl規模合成プログラムのＤＮＡ合成器と平行して用い、１７塩基オリゴヌクレオチドを作成した。所望オリゴヌクレオチドの合成後、ＤＮＡ合成器は自動的に、支持体と水酸化アンモニウムとの３分間の接触によってそれを切り離すようにはたらいた。水酸化アンモニウム溶液中のオリゴヌクレオチド生成物を分析のために取り出し、その後合成カラムを取り出して分解した。各カラムから取った使用ずみリンカーアーム材料を合一し、その後ＡＭＡ溶液中で３０分間撹拌することによって再生した。分離再生はこの２段階法を用いて行い、オリゴヌクレオチドがＡＭＡ溶液にさらされるのを回避した。再生した支持体を真空下で乾燥し、カップリング、キャッピング、オリゴヌクレオチド合成、切断およびリンカーアーム再生段階を周期的に繰り返した。カップリング段階から得られる特殊のヌクレオチド担持レベル（Ｎ．Ｌ．）、オリゴヌクレオチド合成中の鎖延長各段階の平均収量（Ａ．Ｙ．）、使用するリンカーアームの量（Ｌ．Ａ．Ａｍｔ．）、合成したオリゴヌクレオチド配列、および生成した粗オリゴヌクレオチド量（Oligo.Yield）を表５に報告する。表５に示すように、本発明のリンカーアームは（ｉ）カップリング（すなわちリンカーアームの作成）、（ii）キャッピング、（iii）オリゴヌクレオチド合成、（iv）オリゴヌクレオチド切断、および（v）リンカーアーム再生からなるサイクル段階に用いることができる。実施例２５：支持体のリサイクルの可能性実施例１６の方法を繰り返した；ただしカップリング、キャッピングおよび再生段階の時間を１０分間に減らした。この実施例で同じ支持体材料を用いて６種類のオリゴヌクレオチドを製造することに成功した。実施例２４で報告した種々のプロセスパラメーターおよび生成物特性はこの実施例では表６に報告される。実施例２６：支持体リサイクル可能性この実施例では、カップリング、キャッピング、オリゴヌクレオチド合成、切断および再生のサイクルに含まれる全ての段階を自動ＤＮＡ合成器によって行い、手による固相支持体の取り扱いを排除した。実施例６で作った支持体の１１.８ｍｇサンプルを１本のプラスチック合成カラムに充填した。実施例１−４で製造したようなＨＱＰＤ−ヌクレオシド結合体のカップリングを実施例１５と同様な方法で、カップリング時間１５０秒を用いて行い、その後５分間のキャッピング段階を行った；これにはＴＨＦ中等容量の０.５Ｍクロロ酢酸無水物／２，６−ルチジンおよびキャップＢ試薬を用いた。クロロ酢酸無水物溶液は、オリゴヌクレオチド合成段階に通常用いられるキャップＡ（無水酢酸）の代わりであった。さもなくば、変更のない０.２μｍｏl規模 −合成サイクルを用いてオリゴヌクレオチド合成を行った。オリゴヌクレオチドの切断および支持体の再生を同時に、水酸化アンモニウムによる１０分間処理によって行った（ＡＭＡ溶液は必要なかった）。関連のプロセスパラメーターおよび生成物特性を表７に報告する。実施例２７−３９：５’−ジメトキシトリチル−２’−デオキシリボヌクレオシド−３’−Ｏ−ヘミスクシネートの使用下記の実施例において、市販のヌクレオシド：Ｎ６-ベンゾイル−５’−ジメトキシトリチル−２’−デオキシアデノシン−３’−Ｏ−ヘミスクシネート；Ｎ４ -ベンゾイル−５’−ジメトキシトリチル−２’−デオキシシチジン−３’− Ｏ−ヘミスクシネート；５’−ジメトキシトリチル−Ｎ２-イソブチリル-２’− デオキシグアノシン−３’−Ｏ−ヘミスクシネート；および５’−ジメトキシトリチルチミジン-３’−Ｏ−ヘミスクシネートを上記の実施例１２、１５、２０および２１に概略示したものと類似の方法で評価した。ただし下記の実施例においては、０．０５Ｍまたは０．２Ｍどちらかの試薬濃度を評価した。また、溶解度制限されているため、５’−ジメトキシトリチルチミジン−３’−Ｏ−ヘミスクシネートをアセトニトリルの代わりに１：１（容量）ジクロロメタン：アセトニトリルに溶解した。結果を表８に報告する。表８の結果は、ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ試薬を用いたとき、琥珀酸部分を含むヌクレオシドは、ＨＱＰＤ部分を含むヌクレオシドに比べて効果的に結合しないことを示している（例えば実施例１３および１７を実施例３１と比較する）。しかし、ＨＢＴＵ／ＤＭＡＰまたはさらに強力なＨＡＴＵ／ＤＭＡＰ試薬を使用すると、特に０．２Ｍ試薬濃度を用いた場合、速やかな満足すべきヌクレオチド担持レベルに達することができる。注１特に記載のない限り、すべての試薬は１：１のモル比である。２１当量のＤＩＥＡも含む。３待ち段階（wait step）。

───────────────────────────────────────────────────── 【要約の続き】の製造方法が、夫々開示されている。リンカーアームは、他の従来のオリゴヌクレオチド生産プロトコルにおいて、再利用可能であることにより特徴付けられる。

Claims

【特許請求の範囲】１．オリゴヌクレオチド合成のための固体支持体であって、前記固体支持体は下記の式であらわされ：上記式中：Ｒ⁸は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｘ³およびＸ⁴は同じかまたは異なり、−Ｏ−、−Ｓ−、 −Ｓ（Ｏ）₂-および−Ｎ（Ｒ¹²)−からなる群から選択され；Ｒ¹²は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｙは、下記からなる群から選択され； −ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−ＣＨ₂-ＣＨ₂−； −ＣＨ＝ＣＨ−； −ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ₃)−； −Ｃ（ＣＨ₃）＝Ｃ（ＣＨ₃）−；−ＣＨ₂-Ｃ（＝ＣＨ₂）−；および −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−；Ｙが−ＣＨ₂−ＣＨ₂−であるとき、Ｘ³およびＸ⁴の少なくとも１つが−Ｏ−であることを特徴とする前記固体支持体。２．Ｒ⁸が、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基であることを特徴とする請求項１に記載の固体支持体。３．Ｒ⁸が、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₁₀アルキル基であることを特徴とする請求項１に記載の固体支持体。４．Ｒ⁸が、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルからなる群から選択されることを特徴とする請求項１に記載の固体支持体。５．Ｘ³およびＸ⁴が、両方共Ｎであることを特徴とする請求項１に記載の固体支持体。６．Ｙが、−ＣＨ₂−ＣＨ₂-であることを特徴とする請求項１に記載の固体支持体。７．ＳＵＰＰＯＲＴ（支持体）が、無機物質であることを特徴とする請求項１に記載の固体支持体。８．前記無機物質が、シリカ、ガラスビーズ、ポーラスガラス、アルミノシリケート、ボロシリケート、酸化金属、粘土およびこれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする請求項７に記載の固体支持体。９．ＳＵＰＰＯＲＴ（支持体）が有機物質である請求項１に記載の固体支持体。１０．有機物質が、架橋ポリマーであることを特徴とする請求項９に記載の固体支持体。１１．固体支持体オリゴヌクレオチド合成のためのリンカーアームであって、前記リンカーアームは、下記の式であらわされ：上記式中：Ｒ⁸は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｘ³およびＸ⁴は同じかまたは異なり、−Ｏ−、−Ｓ−、 −Ｓ（Ｏ）₂-および−Ｎ（Ｒ¹²）-からなる群から選択され；Ｒ¹²は置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｙは下記からなる群から選択され： −ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ＝ＣＨ−； −ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ₃）−； −Ｃ（ＣＨ₃）＝Ｃ（ＣＨ₃）−；−ＣＨ₂−Ｃ（＝ＣＨ₂）−；および −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−；Ｚはリンカー部分であり；Ｙが−ＣＨ₂−ＣＨ₂−であるとき、Ｘ³およびＸ⁴の少なくとも１つは−Ｏ−であることを特徴とする前記リンカーアーム。１２．Ｒ⁸が、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基であることを特徴とする請求項１１に記載のリンカーアーム。１３．Ｒ⁸が、置換または未置換のＣ₁−Ｃ₁₀アルキル基であることを特徴とする請求項１１に記載のリンカーアーム。１４．Ｒ⁸が、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルからなる群から選択されることを特徴とする請求項１１に記載のリンカーアーム。１５．Ｘ³およびＸ⁴が、両方共に、Ｎであることを特徴とする請求項１１に記載のリンカーアーム。１６．Ｙが、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−であることを特徴とする請求項１１に記載のリンカーアーム。１７．Ｚが、下記の式であらわされることを特徴とする請求項１１に記載のリンカーアーム：１８．Ｚが、下記の式であらわされることを特徴とする請求項１１に記載のリンカーアーム：１９．Ｚが、下記の式であらわされることを特徴とする請求項１１に記載のリンカーアーム：２０．Ｚが、下記の式であらわされる請求項１１に記載のリンカーアームであって、上記式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は、同じかまたは異なり、水素基、、ハロゲン化物基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀ アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｒ⁴およびＲ⁵は同じかまたは異なり、水素基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され：Ｘ¹は−Ｏ −、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）₂−および−Ｎ（Ｒ）−からなる群から選択され；Ｒは水素基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；ｎはＯ、１または２であり；Ａ¹およびＢ¹の１つは水素基、ハロゲン化物基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ａ¹およびＢ¹の他の１つは下記の式であらわされ：上記式中、ｐは、０または１、Ｘ²は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）₂-および−Ｎ（Ｒ）−からなる群から選択され、Ｒは、水素基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、Ｒ⁶ およびＲ⁷は、同じかまたは異なり、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；ｍは０、１または２であることを特徴とする前記リンカーアーム。２１．Ｂ¹が水素基、ハロゲン化物基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀ アルキルアリール基からなる群から選択されることを特徴とする請求項２０に記載のリンカーアーム。２２．Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶およびＲ⁷の各々が水素基であることを特徴とする請求項２０に記載のリンカーアーム。２３．ｍおよびｎの各々が１であることを特徴とする請求項２０に記載のリンカーアーム。２４．Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³の各々が水素基であることを特徴とする請求項２０に記載のリンカーアーム。２５．Ｘ¹およびＸ²が、両方共−Ｏ−であることを特徴とする請求項２０に記載のリンカーアーム。２６．Ｚが下記の式を有し：上記式中、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶およびＲ⁷が同じかまたは異なり、水素基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、ＹがＯ、Ｓ、ＳＯ₂およびＯ−（（ＣＨ₂）₁-Ｏ）ｑからなる群から選択され、１は６０以下の正数であり、ｑは１−１０００の範囲の整数であり、ｎおよびｍは同じかまたは異なり、０．１また２であり、ＹがＯであるとき、ｎおよびｍの少なくとも１つは２であるという条件がつけられることを特徴とする請求項１１に記載のリンカーアーム。２７．ＳＵＰＰＯＲＴ（支持体）が無機物質であることを特徴とする請求項２６に記載のリンカーアーム。２８．前記無機物質がシリカ、ガラスビーズ、ポーラスガラス、アルミノシリケート、ボロシリケート、酸化金属、粘土およびそれらの混合物であることを特徴とする請求項２７に記載のリンカーアーム。２９．ＳＵＰＰＯＲＴ（支持体）が有機物質であることを特徴とする請求項２６に記載のリンカーアーム。３０．前記有機物質が架橋ポリマーであることを特徴とする請求項２９に記載のリンカーアーム。３１．ＮＵＣＬＥＯＳＩＤＥ（ヌクレオシド）が、下記の式の１つから選択される部分であり：上記式中、Ｒ⁸およびＲ¹⁰は、同じかまたは異なり、水素基または保護基であり、Ｒ⁹は、水素基または−ＯＲ¹¹であり、この際Ｒ¹¹は、水素基または保護基であり、そしてＢ＊は、核酸塩基であることを特徴とする請求項１１に記載のリンカーアーム。３２．オリゴヌクレオチド合成のための固体支持体の製法であって、固体支持体は下記の式であらわされ：上記式中：Ｒ⁸は、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｘ³およびＸ⁴は、同じかまたは異なり、−Ｏ−、−Ｓ −、−Ｓ（Ｏ）₂-および−Ｎ（Ｒ¹²）−からなる群から選択され；Ｒ¹²は、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｙは下記からなる群から選択され： −ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ＝ＣＨ−； −ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ₃）−； −Ｃ（ＣＨ₃）=Ｃ（ＣＨ₃）−；−ＣＨ₂-Ｃ（＝ＣＨ₂）−;および −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−；Ｙが、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−であるとき、Ｘ³およびＸ⁴の少なくとも１つが−Ｏ−であり；前記製法は下記の式Ｉ、IIおよびIIIの化合物を一緒に反応させる段階を含んでおり、上記式中Ｒ⁸、Ｘ³、Ｘ⁴およびＹは前に定義されたものであることを特徴とする前記製法。３３．式ＩおよびIIの化合物を先ず最初に反応させて、式IIIの化合物と反応する結合体を形成することを特徴とする請求項３２に記載の製法。３４．式IIおよびIIIの化合物を先ず最初に反応させて、式Ｉの化合物と反応する結合体を形成することを特徴とする請求項３２に記載の製法。３５．Ｒ⁸が、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基であることを特徴とする請求項３２に記載の製法。３６．Ｒ⁸が、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₁₀アルキル基であることを特徴とする請求項３２に記載の製法。３７．Ｒ⁸が、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルからなる群から選択されることを特徴とする請求項３２に記載の製法。３８．Ｘ³およびＸ⁴が、両方共にＮであることを特徴とする請求項３２に記載の製法。３９．Ｙが−ＣＨ₂−ＣＨ₂−であることを特徴とする請求項３２に記載の製法。４０．ＳＵＰＰＯＲＴ（支持体）が、無機物質であることを特徴とする請求項３２に記載の製法。４１．無機物質が、シリカ、ガラスビーズ、ポーラスガラス、アルミノシリケート、ボロシリケート、酸化金属、粘土およびこれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする請求項４０に記載の製法。４２．ＳＵＰＰＯＲＴ（支持体）が有機物質であることを特徴とする請求項３２に記載の製法。４３．前記有機物質が、架橋ポリマーであることを特徴とする請求項４２に記載の製法。４４．固体支持体オリゴヌクレオチド合成のためのリンカーアームの製法であって、前記リンカーアームは下記の式を有し：上記式中、Ｒ⁸は、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され;Ｘ³およびＸ⁴は同じかまたは異なり、−Ｏ−、−Ｓ− 、−Ｓ（Ｏ）₂-および−Ｎ（Ｒ¹²）−からなる群から選択され；Ｒ¹²は、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｙは、下記からなる群から選択され： −ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−； −ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−； −ＣＨ＝ＣＨ−； −ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ₃）−； −Ｃ（ＣＨ₃)＝Ｃ（ＣＨ₃）−；−ＣＨ₂-Ｃ（＝ＣＨ₂）−；および −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−；Ｚは、リンカー部分であり；Ｙが、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−であるとき、Ｘ³およびＸ⁴ の少なくとも１つは−Ｏ−であり；前記製法は、下記の式IV、ＶおよびVIの化合物を一緒に反応させる段階を含んでおり：上記式中、Ｒ⁸、Ｘ₃、Ｘ₄、ＹおよびＺは、前に定義されたものであることを特徴とする固体支持体オリゴヌクレオチド合成のためのリンカーアームの製法。４５．式IVおよびＶの化合物を先ず最初に反応させて、式VIの化合物と反応する結合体を形成することを特徴とする請求項４４に記載の製法。４６．式ＶおよびVIの化合物を先ず最初に反応させて、式IVの化合物と反応する結合体を形成することを特徴とする請求項４４に記載の製法。４７．Ｒ⁸が、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基であることを特徴とする請求項４４に記載の製法。４８．Ｒ⁸が、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₁₀アルキル基であることを特徴とする請求項４４に記載の製法。４９．Ｒ⁸が、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルからなる群から選択されることを特徴とする請求項４４に記載の製法。５０．Ｘ³およびＸ⁴が、両方共にＮであることを特徴とする請求項４４に記載の製法。５１．Ｙが、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−であることを特徴とする請求項４４に記載の製法。５２．Ｚが下記の式を有することを特徴とする請求項４４に記載の製法：５３．Ｚが下記の式を有することを特徴とする請求項４４に記載の製法：５４．Ｚが下記の式を有することを特徴とする請求項４４に記載の製法：５５．Ｚが下記の式であらわされ：上記式中：Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は同じかまたは異なり、水素基、ハロゲン化物基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｒ⁴およびＲ⁵は、同じかまたは異なり、水素基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ｘ¹は−Ｏ− 、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）₂−および−Ｎ（Ｒ）−からなる群から選択され；Ｒは水素基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；ｎはＯ、１または２であり；Ａ¹およびＢ¹の１つは、水素基、ハロゲン化物基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；Ａ¹およびＢ¹の他の１つは下記の式であらわされ：上記式中、ｐは０または１、Ｘ²は−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）₂ −および−Ｎ（Ｒ）−からなる群から選択され、Ｒは水素基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、Ｒ６およびＲ⁷は同じかまたは異なり、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され；ｍは０、１または２であることを特徴とする請求項４４に記載の製法。５６．Ｂ¹が、水素基、ハロゲン化物（halide）、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀ アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択されることを特徴とする請求項５５に記載の製法。５７．Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶およびＲ⁷の各々が、水素基であることを特徴とする請求項４４に記載の製法。５８．ｍおよびｎの各々が、１であることを特徴とする請求項４４に記載の製法。５９．Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³の各々が、水素基であることを特徴とする請求項４４に記載の製法。６０．Ｘ¹およびＸ²が、両方共に、−Ｏ−であることを特徴とする請求項４４に記載の製法。６１．Ｚが下記の式であらわされ：上記式中、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶およびＲ⁷は、同じかまたは異なり、水素基、置換または未置換のＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル基、置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₃₀アリール基および置換または未置換のＣ₅〜Ｃ₄₀アルキルアリール基からなる群から選択され、Ｙは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）₂-および-Ｏ−（（ＣＨ₂）１-Ｏ）ｑ−からなる群から選択され、ｌは６０以下の整数であり、ｑは、１〜１０００の範囲内の整数であり、ｎおよびｍは同じかまたは異なり、０、１または２であり、ＹがＯであるときは、ｎおよびｍの少なくとも１つが、２であるという条件がつけられることを特徴とする請求項４４に記載の製法。６２．ＳＵＰＰＯＲＴ（支持体）が無機物質である請求項４４に記載の製法。６３．無機物質が、シリカ、ガラスビーズ、ポーラスガラス、アルミノシリケート、ボロシリケート、酸化金属、粘土およびこれらの混合物からなる群から選択される請求項６２に記載の製法。６４．ＳＵＰＰＯＲＴ（支持体）が有機物質である請求項４４に記載の製法。６５．有機物質が架橋ポリマーである請求項６４に記載の製法。６６．ＮＵＣＬＥＯＳＩＤＥ（ヌクレオシド）が下記の式の１つから選択される部分であり：上記式中、Ｒ⁸およびＲ¹⁰は同じかまたは異なり、水素基または保護基であり、Ｒ⁹は水素基または−ＯＲ¹¹であり、ここでＲ¹¹は水素基または保護基であり、Ｂ＊は核酸塩基であることを特徴とする請求項４４に記載の製法。