JP2000351711A - 化粧料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 サイトカインの働きが低下した状態を改善す
る化粧料を提供する。 【解決手段】 下記一般式（Ｉ）で表されるエタノール
アミン誘導体またはその塩を含有するか、またはこれと
サイトカインまたはサイトカイン産生促進物質とを含有
するサイトカイン活性増強剤、およびこのサイトカイン
活性増強剤を有効成分として含有するサイトカインの働
きが低下した疾病の治療剤。 （式中、Ｒ₁ はＨ、−ＣＨ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ（ＣＨ₃ ）
ＯＨまたは−ＣＨ₂ ＣＨ ₂ ＯＨであり、Ｒ₂ はＨ、−Ｃ
Ｈ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ₃ または−ＣＯＯＨであり、Ｒ₃ は
Ｈ、−ＣＨ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ₃ または−ＣＨ₂ ＮＨ₂ で
ある）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、サイトカイン活性
増強剤およびサイトカインの働きが低下した疾病の治療
剤に関する。本発明は、特に、サイトカインの応答性を
高めることによって、老化等により低下したサイトカイ
ンの反応性を賦活し、またはサイトカインの減少により
起こる異常を治療できる、化粧料に関する。

【０００２】

【従来の技術】老化肌や荒れ肌の修復には、サイトカイ
ンの分泌が密接に関わりをもっていることが知られてい
る。また、サイトカインは疾病にも大きく関わっている
ことが明らかとなり、サイトカインを治療に用いる試み
が盛んに行われている。具体的には、治療薬としてサイ
トカイン自体を経口または注射、経皮等の非経口でヒト
に投与する方法等が挙げられる。しかし、完全治癒まで
の間、高価なサイトカインを大量に用いることが必要で
あり、治療薬として患者への経済的負担は大きい。

【０００３】一方、これらのサイトカインの産生を促進
する物質を用いる場合も、同様に経口または注射、経皮
等の非経口でヒトに投与される。しかし、やはりこのサ
イトカイン産生促進物質であっても、サイトカイン使用
と同様に、患者への経済的負担は大きい。

【０００４】また、単独でのサイトカインの大量投与
は、代謝バランスを崩す場合があり、また外用での使用
には、分解や吸収性等の点で局所での効果が期待できな
い場合がある等の問題があり、より安全な皮膚代謝の賦
活方法が望まれていた。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明は、そ
れ自体を生体に投与することによって生体中に存在する
サイトカインの応答性を高めることのできる化粧料を提
供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記の目的を
達成するため、下記一般式（Ｉ）で表されるエタノール
アミン誘導体またはその塩を含有する化粧料および入浴
剤を提供する。 （式中、Ｒ₁ はＨ、−ＣＨ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ（ＣＨ₃ ）
ＯＨまたは−ＣＨ₂ ＣＨ ₂ ＯＨであり、Ｒ₂ はＨ、−Ｃ
Ｈ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ₃ または−ＣＯＯＨであり、Ｒ₃ は
Ｈ、−ＣＨ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ₃ または−ＣＨ₂ ＮＨ₂ で
ある）

【０００７】

【発明の実施の形態】本発明で用いられる上記一般式
（Ｉ）で表されるエタノールアミン誘導体は、Ｒ₁ がＨ
である場合、Ｒ₂ はＨ、−ＣＨ₃ または−ＣＨ₂ ＣＨ₃
であるのが好ましく、このときＲ₃ はＨ、−ＣＨ₃ 、−
ＣＨ₂ ＣＨ₃ または−ＣＨ₂ ＮＨ₂ であるのがよい。Ｒ
₁ が−ＣＨ₃ である場合、Ｒ₂ は−ＣＯＯＨであるのが
好ましく、このときＲ₃ はＨ、−ＣＨ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ
₃ または−ＣＨ₂ ＮＨ₂ であるのがよい。さらに、Ｒ₁
が−ＣＨ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ（ＣＨ₃ ）ＯＨまたは−ＣＨ
₂ＣＨ₂ ＯＨである場合、Ｒ₂ はＨであるのが好まし
く、このときＲ₃ はＨ、−ＣＨ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ₃ また
は−ＣＨ₂ ＮＨ₂ であるのがよい。

【０００８】一般式（Ｉ）で表されるエタノールアミン
誘導体の具体例としては、Ｎ−メチル−Ｌ−セリン、ジ
エタノールアミン、エタノールアミン、Ｎ−メチルエタ
ノールアミン、Ｎ−イソプロパノイル−２−メチル−エ
タノールアミン、Ｄ，Ｌ−２−アミノ−１−プロパノー
ル、２−アミノ−１−ブタノール、１，３−ジアミノ−
２−プロパノール、１−アミノ−２−ブタノール等を挙
げることができる。

【０００９】また、一般式（Ｉ）で表されるエタノール
アミン誘導体の塩としては、特に限定されないが、特に
薬学的に許容される塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リ
ン酸塩等の無機酸塩および酢酸塩、フマール酸塩、マレ
イン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、ｐ−トルエンスルホ
ン酸塩等の有機酸塩を挙げることができる。

【００１０】本発明で活性化されるサイトカインとして
は、血小板由来成長因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ−Ｄｅｒｉ
ｖｅｄ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ、以下ＰＤＧＦと
略記する）、線維芽細胞成長因子（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓ
ｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ、以下ＦＧＦと略記す
る）、上皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔ
ｈ Ｆａｃｔｏｒ、以下ＥＧＦと略記する）、形質転換
成長因子（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ
Ｆａｃｔｏｒ、以下ＴＧＦと略記する）、骨形成因子
（Ｂｏｎｅ Ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ、以下ＢＭＰと略記する）、インターフェロン（Ｉ
ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ、以下ＩＦＮと略記する）、顆粒球
コロニー刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ Ｃｏｌｏ
ｎｙ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ、以下Ｇ
−ＣＳＦと略記する）、マクロファージコロニー刺激因
子（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ Ｃｏlｏｎｙ−Ｓｔｉｍｕ
ｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ、以下Ｍ−ＣＳＦと略記す
る）、インシュリン様成長因子（Ｉｎｓｕｌｉｎ−Ｌｉ
ｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ、以下ＩＧＦと略記
する）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｇｒ
ｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ、以下ＨＧＦと略記する）、骨
髄幹細胞成長因子（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏ
ｒ、以下ＳＣＦと略記する）、神経成長因子（Ｎｅｒｖ
ｅ ＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ、以下ＮＧＦと略記す
る）、血管内皮成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏ
ｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏ
ｒ、以下ＶＥＧＦと略記する）、インターロイキン（イ
ンターロイキン・ネットワーク、講談社、１９９２年）
等が挙げられる。それらのうちでも、特に、レセプター
のサブユニットにチロシンキナーゼ、セリンもしくはス
レオニンリン酸化またはキナーゼ活性を有するサイトカ
インに高い効果が見られるので好ましい。

【００１１】レセプターのサブユニットにチロシンキナ
ーゼ、セリンもしくはスレオニンリン酸化またはキナー
ゼ活性を有するサイトカインとしては、上記サイトカイ
ンのうち、ＥＧＦ，ＩＧＦ，ＫＧＦ，ＦＧＦ，ＰＤＧ
Ｆ，Ｍ−ＣＳＦ，ＳＣＦ，ＶＥＧＦ，ＮＧＦ，ＨＧＦ，
ＩＬ−２、ＴＧＦなどが挙げられる。

【００１２】塩基性ＦＧＦ（ｂａｓｉｃ ＦＧＦ、以下
ｂＦＧＦと略記する）やＥＧＦ（現代化学増刊１６、東
京化学同人社、１３１頁）、ＰＤＧＦ（現代化学増刊
４、東京化学同人社、１１４頁、１９８５年）またはＥ
ＧＦレセプターに結合するＴＧＦアルファ（ＴＧＦα、
サイトカイン、メジカルビュー社、１０頁、１９９１
年）、酸性ＦＧＦ（ａｃｉｄｉｃ ＦＧＦ、Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３０巻、９８６頁、１９
９３年）は、脳卒中や、褥創、創傷、潰瘍の治療薬とし
て、抗胃潰瘍剤として、また心筋梗塞の改善に用いられ
ている例もある。

【００１３】一方、ＢＭＰは、今後老齢化社会を迎える
にあたって増加する骨粗鬆症の治療薬として期待されて
いる（実験医学１０巻、１５号、2010頁、１９９２
年）。

【００１４】また、ＴＧＦベータ１（以下、ＴＧＦ−β
１と略す）は、骨折治癒剤の他、プロゼラチナーゼＡ以
外のマトリックス・メタロプロテアーゼ産生抑制、また
ティッシュー・インヒビター・オブ・メタロプロテイナ
ーゼス（Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｍ
ｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ、以下ＴＩＭＰと
略記する）の産生を促進する（実験医学、１０巻、１５
号、１８６０頁、１９９２年）ので、リウマチ治療薬と
して、さらにＩ型コラーゲン合成を促進することから、
創傷治癒剤として期待されている。

【００１５】肝細胞増殖因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ
Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ、以下ＨＧＦと略記する）
は、最近行われている臓器移植の際の臓器再生剤とし
て、また腫瘍細胞の増殖抑制をする（ＦＥＢＳ Ｌｅｔ
ｔｅｒｓ、２巻、２２９頁、１９９１年）ことから、日
本人の死亡率１位である癌の治療薬としても期待されて
いる。

【００１６】ＩＦＮガンマ（ＩＦＮγ）およびＧ−ＣＳ
Ｆは、免疫系を増強することから、腫瘍治療薬として使
用されている。

【００１７】インターロイキン−２（ＩＬ−２）は、悪
性血管細胞種の治療薬として報告例があるほか、ＬＡＫ
療法に使用されている。ＬＡＫ療法は、体外で患者のリ
ンパ球をＩＬ−２を添加して培養し、細胞障害性Ｔ細胞
（ＣＴＬ）およびナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）の
数を増加させて体内に戻し、免疫増強により癌を治療す
る免疫賦活癌治療法の１種である（岩波新書出版「がん
の治療」、小林博著、２９２、１５１頁〜１５４頁、１
９９３年）。

【００１８】ＩＬ−２と類似の作用があり、それより強
い活性を持つものとして、インターロイキン−１２（Ｉ
Ｌ−１２）がある（実験医学、１０巻、３号、３９５頁
〜３９９頁、１９９２年）。このサイトカインについて
も、抗癌剤やＬＡＫ療法等への応用が検討されている
（日経バイオテク、２７７号、２頁〜３頁、１９９３
年）。

【００１９】本発明で用いられるサイトカイン産生促進
物質としては、例えば、溶連菌Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ
ｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓをペニシリンで殺した製剤（Ｏ
Ｋ−４３２）、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸な
どが挙げられる。ＯＫ−４３２は、腫瘍治療剤として使
用されており、腹腔内投与したマウスの脾臓細胞におい
てＩＦＮを産生することが確認されている。また、グリ
チルリチン酸は、肝炎治療剤として使用されている他、
ＩＦＮ産生作用を有する。

【００２０】本発明において、サイトカインの働きが低
下した疾病とは、サイトカインの量が低下したか、ある
いはサイトカイン自体の反応性（応答性）が低下した疾
病を意味する。

【００２１】具体的には、褥創、胃潰瘍等の潰瘍、肺繊
維症、肝硬変などの臓器繊維症、骨粗鬆症、さらにはガ
ン等の免疫系が低下した疾病等が挙げられる。

【００２２】本発明の化粧料は、その使用目的に応じ
て、通常用いられる公知の成分を配合することによっ
て、固形剤、半固形剤、液剤等の各種剤形の組成物に調
製することが可能である。具体的には、固形剤として
は、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、粉末剤、硬カプセル
剤等が挙げられ、半固形剤としては、軟膏、ゲル、クリ
ーム等が挙げられ、液剤としては、シロップ剤、エリキ
シル剤、軟カプセル剤、ローション、スプレー剤、貼付
剤等が挙げられる。

【００２３】通常用いられる公知の成分としては、例え
ば、ワセリン，スクワラン，流動パラフィン等の炭化水
素、ステアリルアルコール、セタノール等の高級アルコ
ール、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプ
ロピル等の高級脂肪酸の低級アルキルエステル、ラノリ
ン等の動物性油脂、グリセリン、プロピレングリコール
等の多価アルコール、マクロゴール４００、マクロゴー
ル４０００等のポリエチレングリコール、モノステアリ
ン酸グリセリン等のグリセリン脂肪酸エステル、ラウリ
ル硫酸ナトリウム、モノステアリン酸ポリエチレングリ
コール、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸
（商品名ＮＩＫＫＯＬ ＤＤＰ−２、日本サーファクタ
ント工業株式会社）などの界面活性剤、蝋、樹脂、水お
よび要すればパラオキシ安息香酸ブチル、パラオキシ安
息香酸メチル等の防腐剤とを混合し、常法により製造す
ることができる。

【００２４】これらの組成物は、一剤形であってもよい
が、一般式（Ｉ）で表されるエタノールアミン誘導体ま
たはその塩と、サイトカインまたはサイトカイン産生促
進物質を分けて２剤形とすることもできる。２剤形とし
た場合は、使用時に併用すればよい。その際、２剤形の
投与経路は異なっていてもよい。

【００２５】一般式（Ｉ）で表されるエタノールアミン
誘導体の含有量は、剤形により異なるが、適用する組成
物全量を基準として、好ましくは０．０００１〜２重量
％、さらに好ましくは０．００１〜１重量％である。た
だし、入浴剤のように使用時に希釈されるものはさらに
含有量を増やすことができる。

【００２６】また、前記ＬＡＫ療法において、体外で培
養するリンパ球にサイトカインを添加培養する場合に、
本発明の一般式（Ｉ）で表されるエタノールアミン誘導
体を含有するサイトカイン活性増強剤を培地中に添加し
て、補助剤として使用することもできる。この場合の添
加量は、一般式（Ｉ）で表されるエタノールアミン誘導
体量として、培地全量を基準として、好ましくは０．０
００１〜２重量％、さらに好ましくは０．００１〜０．
５重量％である。

【００２７】本発明のサイトカイン活性増強剤およびサ
イトカインの働きが低下した疾病の治療剤は、研究・試
験用試薬として培養細胞系に添加して用いることができ
るほか、通常の医薬品および化粧品の有効成分として用
いることもできる。

【００２８】本発明のサイトカイン治療剤は、前記ＬＡ
Ｋ療法において培養リンパ球系に添加して用いるほか、
経口投与、注射、経皮投与等の方法で用いることができ
る。

【００２９】経口投与する際の剤形としては、錠剤、顆
粒剤、散剤、細粒剤、硬カプセル剤等の固形剤のほか、
シロップ剤、エリキシル剤、軟カプセル剤等の液剤が含
まれる。

【００３０】錠剤、顆粒剤、散剤および細粒剤は、一般
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩と、
例えば、乳糖、でんぷん、結晶セルロース、ステアリン
酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、タル
ク等の通常の医薬添加物とを混合して製造される。

【００３１】硬カプセル剤は、上記の細粒剤や散剤を適
宜カプセルに充填して製造される。シロップ剤は、白
糖、Ｄ−ソルビトール、カルボキシメチルセルロース等
を含む水溶液に、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキ
シ安息香酸プロピル等の防腐剤とともに一般式（Ｉ）の
化合物またはその薬学的に許容される塩を溶解または懸
濁して製造される。

【００３２】エリキシル剤は、一般式（Ｉ）の化合物ま
たはその薬学的に許容される塩のエタノール溶液に、グ
リセリン、オレンジ油、レモン油、コリアンダー油、ア
ニス油、タルク等を混合して製造される。

【００３３】軟カプセル剤は、脂質賦形剤、例えば、植
物油、油性エマルジョン、グリコール類等に、一般式
（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を溶解
または懸濁し、軟カプセルに充填して製造される。

【００３４】注射剤は、一般式（Ｉ）の化合物またはそ
の薬学的に許容される塩を生理食塩水または、例えば、
植物油、油性エマルジョン、グリコール等の脂質賦形剤
に溶解または乳化させ、無菌的にアンプルまたはバイヤ
ルに封入することによって製造される。バイヤルを用い
る場合には、封入する際に、サイトカインまたはサイト
カイン産生を促進する薬剤を同時に添加後、凍結乾燥し
て製造することも可能である。

【００３５】経皮投与する際の剤形としては、軟膏剤、
ゲル剤、クリーム等の半固形剤、ローション剤、パップ
剤、スプレー剤および貼付剤等の液剤等が含まれる。

【００３６】本発明のサイトカイン治療剤は、経口また
は非経口で投与される。例えば、臓器腫瘍、心臓病等の
臓器の疾病には経口、経皮または注射により、乾癬、ケ
ロイド等の上皮の疾病には経皮または局所注射により、
本発明のサイトカイン活性増強剤を投与するのが好まし
い。

【００３７】投与量は、患者の年齢、体重、症状、投与
方法または共に投与するサイトカインまたはサイトカイ
ン産生促進物質の量により異なるが、成人に投与する場
合、一般には、１回当り化合物（Ｉ）として０．５〜１
０００ｍｇの量を、１日１〜３回投与する。そして、例
えば、臓器腫瘍、心臓病等の臓器の疾病に対して経口ま
たは注射により全身投与する場合には１回当り３０〜１
０００ｍｇの投与量が適当であり、臓器の疾病、乾癬、
ケロイド等の上皮の疾病に対して経皮により局所投与す
る場合には１回当り１〜５０ｍｇの投与量が適当であ
る。これらの場合、共に使用するサイトカインまたはサ
イトカイン産生促進物質の治療薬としての量は通常より
２０〜９０％減らして使用できる。

【００３８】次に、実施例に先立ち、本発明の効果を示
す試験例を記載する。ただし、本発明は、試験例中に記
された原料および配合比に限定されるものではない。な
お、各試験例中に用いる語句の定義を下記に記載する。

【００３９】（ａ）ＭＥＭ培地 Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ
（大日本製薬社製、１０−１０１）１０．６ｇに１．２
ｇ炭酸水素ナトリウムを添加し、蒸留水を加えて１ｌと
した後、炭酸ガスを吹き込んでｐＨを約７にした（以
下、ＭＥＭ培地と略記する）。

【００４０】（ｂ）ＦＢＳ 牛胎仔血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）

【００４１】（ｃ）測定用緩衝液 ０．２Ｍ塩化ナトリウム、５ｍＭ塩化カルシウムおよび
０．０５％（Ｗ／Ｖ）ブリッジ−３５（商標、ナカライ
テスク（株）製、ポリオキシエチレン(23E.0.)ラウリル
エーテル）を含有する５０ｍＭトリス水溶液を塩酸にて
室温でｐＨ７．５に調整した緩衝液。

【００４２】（ｄ）コラゲナーゼ コラゲナーゼとしては、ヒト線維肉腫細胞由来の足場非
依存性細胞に、無血清無タンパク質培地中で産生させた
ヒトプロコラゲナーゼをＣＭ−セファロース（商標、フ
ァルマシア社製）および亜鉛キレーティングセファロー
ス（商標、ファルマシア社製）により精製して測定用緩
衝液に溶解し、これに活性化剤としてトリプシン（シグ
マ社製、Ｔｙｐｅ１２）を添加して、３５℃にて５分間
インキュベートした後、ダイズトリプシンインヒビター
（メルク社製）を添加してトリプシンを失活させたもの
を用いた（特願平１−２３８９４１号公報参照）。

【００４３】（ｅ）プロコラゲナーゼ産生量 本試験では、プロコラゲナーゼ産生量は、トリプシンで
活性化して得られるコラゲナーゼ活性として定量した。

【００４４】（ｆ）ＴＩＭＰ産生量 本試験では、ＴＩＭＰ産生量は、コラゲナーゼの阻害活
性として定量した。

【００４５】（ｇ）ｂＦＧＦ応答性増強率 本試験では、ｂＦＧＦがプロコラゲナーゼ産生量を促進
することが知られているので、化合物のｂＦＧＦ活性増
強率は、プロコラゲナーゼ産生量を精製水添加と比較し
て算出した。

【００４６】（ｈ）ＴＧＦ−β１応答性増強率 本試験では、ＴＧＦ−β１がＴＩＭＰ産生量を促進する
ことが知られているので、化合物のＴＧＦ−β１活性増
強率は、ＴＩＭＰ産生量を精製水添加と比較して算出し
た。

【００４７】（ｉ）ＰＤＧＦ応答性増強率 本試験では、ＰＤＧＦがプロコラゲナーゼ産生量を促進
することが知られているので、化合物のＰＤＧＦ活性増
強率は、プロコラゲナーゼ産生量を精製水添加と比較し
て算出した。

【００４８】（ｊ）動物実験におけるｂＦＧＦ応答性増
強率 本試験では、ｂＦＧＦが血管新生を促進することが知ら
れているので、化合物のｂＦＧＦ活性増強率は、ラット
腹部皮下に注入したマトリジェル中のヘモグロビン量を
無添加と比較して産出した。

【００４９】

【実施例】試験例−１ 正常ヒト線維芽細胞株〔白人女性の皮膚より採取された
ＣＣＤ４５ＳＫ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １５０６）〕の細
胞密度を１０％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳおよび１％（Ｖ／Ｖ）
非必須アミノ酸（大日本製薬社製）を含むＭＥＭ培地に
て１×１０⁵ 個／ｍｌに調製し、１２穴プレートにそれ
ぞれ０．８ｍｌずつ播種（８×１０⁴ 個／穴）して、５
％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。

【００５０】後述する実施例１に記載のサイトカイン活
性増強剤（Ｎ−メチル−Ｌ−セリン）を０．６％（Ｖ／
Ｖ）ＦＢＳを添加したＭＥＭ培地で希釈して１ｍＭと
し、添加溶液とした。

【００５１】２４時間後培養液を吸引除去し、終濃度
０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを添加したＭＥＭ培地で細胞
を２回洗浄した後、添加溶液０．８ｍｌを加え、２日間
培養した。

【００５２】２日後、培養液を吸引除去し、添加溶液
０．８ｍｌを加え、２日間培養した。この操作をさらに
もう一度繰り返し、サイトカイン活性増強剤を含む培地
で細胞を計６日間処理した。

【００５３】上記操作の終了後、培養液を吸引除去し、
３ｎｇ／ｍｌｂＦＧＦ（べーリンガー・マンハイム社
製）および０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを含むＭＥＭ培地
を０．８ｍｌ添加し、３日間培養して培養上清を得た。

【００５４】得られた培養上清５００μｌに１０ｍＭト
リス塩酸緩衝液〔４℃でｐＨ７．８に調整、１ｍＭ塩化
カルシウム、０．０５％（Ｗ／Ｖ）ブリッジ−３５を含
む〕を３．５ｍｌ加え、同緩衝液で平衡化したＣＭ−セ
ファロースＣＬ−６Ｂ（商標、ファルマシア社製、ベッ
ド容量０．５ｍｌ）に供した。

【００５５】次に、１２５ｍＭ塩化ナトリウムを含む上
記と同じ緩衝液０．５ｍｌにてインヒビターを除去（計
４回、総量２ｍｌ）し、５００ｍＭ塩化ナトリウムを含
む同緩衝液０．５ｍｌにてプロコラゲナーゼを回収（計
４回、総量２ｍｌ）し、試験液とした。

【００５６】試験液を測定用緩衝液で適宜希釈後、２５
μｌを測定用緩衝液２５μｌと混合してトリプシン溶液
（シグマ社、Ｔｙｐｅ１２を測定用緩衝液にて濃度１ｍ
ｇ／ｍｌに調整）２０μｌを添加し、３５℃にて５分間
インキュベートした後、ダイズトリプシンインヒビター
溶液（測定用緩衝液にて濃度３ｍｇ／ｍｌに調整）３０
μｌを添加してトリプシンを失活させ、コラゲナーゼ溶
液を得た。

【００５７】フルオレッセンイソチオシアネート（以
下、ＦＩＴＣと略記する）で標識されたＩ型コラーゲン
（濃度１ｍｇ／ｍｌのＦＩＴＣ−コラーゲン酢酸溶液、
コスモバイオ社製）を基質溶液として用い、永井等の方
法（炎症、４巻、２号、１２３頁、１９８４年参照）に
準じて上記コラゲナーゼの活性（単位／ｍｌ）を測定し
た。そして、上記のトリプシン処理によりプロコラゲナ
ーゼから生じるコラゲナーゼが、３５℃にて１分間当り
１μｇのＩ型コラーゲン（ＦＩＴＣ−コラーゲン）を分
解する量をプロコラゲナーゼの１単位とし、プロコラゲ
ナーゼ産生量（単位／培養液ｍｌ）を求めた（この値を
Ｘ₁ とする）。

【００５８】一方、比較例１として、Ｎ−メチル−Ｌ−
セリンの代わりに精製水を加え、上記と同様の操作によ
りサイトカイン活性増強剤（Ｎ−メチル−Ｌ−セリン）
を添加しない場合のプロコラゲナーゼ産生量（単位／培
養液ｍｌ）を求めた（この値をＹ₁ とする）。

【００５９】次いで、これらの値から下式によりサイト
カイン（ｂＦＧＦ）活性増強率を算出した。結果を下記
表１に示す。 ｂＦＧＦ活性増強率（％）＝〔Ｘ₁ ／Ｙ₁ 〕×１００

【００６０】

【表１】

【００６１】実施例１のサイトカイン活性増強剤は、プ
ロコラゲナーゼ産生量を増加させており、サイトカイン
（ｂＦＧＦ）活性を増強していた。

【００６２】試験例−２（濃度依存性） 後述する実施例１に記載のサイトカイン活性増強剤（Ｎ
−メチル−Ｌ−セリン）を０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを
添加したＭＥＭ培地で希釈して０．０１〜１０ｍＭと
し、添加溶液とした。

【００６３】試験例−１と同様にして培養後、培養上清
を得た。得られた培養上清中のプロコラゲナーゼ産生量
を定量した。結果を下記表２に示す。

【００６４】

【表２】 Ｎ−メチル−Ｌ−セリンは、プロコラゲナーゼ産生量を
増加させており、サイトカイン（ｂＦＧＦ）活性を濃度
依存的に増強していた。

【００６５】試験例−３ 試験例−１と同様に、正常ヒト線維芽細胞株を播種し
た。後述する実施例２に記載のサイトカイン活性増強剤
（ジエタノールアミン）を０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを
添加したＭＥＭ培地で１ｍＭに希釈して添加溶液とし
た。

【００６６】試験例−１と同様にして培養後、培養上清
を得た。ただし、ここでは、ｂＦＧＦの添加量を１０ｎ
ｇ／ｍｌとした。測定の結果を下記表３に示す。

【００６７】

【表３】 実施例２のサイトカイン活性増強剤は、プロコラゲナー
ゼ産生量を増加させており、サイトカイン（ｂＦＧＦ）
活性を増強していた。

【００６８】試験例−４ 正常ヒト線維芽細胞株〔白人女性の皮膚より採取された
Ｄｅｔｒｏｉｔ−５５１（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １１
０）〕の細胞密度を１０％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳ、終濃度
０．１％（Ｗ／Ｖ）ラクトアルブミン酵素水解物（シグ
マ社製）、１％（Ｖ／Ｖ）非必須アミノ酸および１ｍＭ
ピルビン酸ナトリウム（以上いずれも大日本製薬社製）
を含むＭＥＭ培地にて１×１０⁵ 個／ｍｌに調整し、１
２穴プレートにそれぞれ０．８ｍｌずつ播種（８×１０
⁴ 個／穴）して、５％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃
で培養した。

【００６９】後述する実施例３に記載のサイトカイン活
性増強剤（エタノールアミン）を０．６％（Ｖ／Ｖ）Ｆ
ＢＳ、終濃度０．１％（Ｗ／Ｖ）ラクトアルブミン酵素
水解物、１％（Ｖ／Ｖ）非必須アミノ酸および１ｍＭピ
ルビン酸ナトリウムを添加したＭＥＭ培地で希釈して１
ｍＭとし、添加溶液とした。

【００７０】２４時間後培養液を吸引除去し、終濃度
０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを添加したＭＥＭ培地で細胞
を２回洗浄した後、添加溶液０．８ｍｌを加え、４日間
培養した。

【００７１】４日後、培養液を吸引除去し、３ｎｇ／ｍ
ｌｂＦＧＦ、０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳ、終濃度０．１
％（Ｗ／Ｖ）ラクトアルブミン酵素水解物、１％（Ｖ／
Ｖ）非必須アミノ酸および１ｍＭピルビン酸ナトリウム
を含むＭＥＭ培地を０．８ｍｌ添加し、３日間培養して
培養上清を得た。

【００７２】得られた培養上清２５０μｌに１０ｍＭト
リス塩酸緩衝液〔４℃でｐＨ７．８に調整、１ｍＭ塩化
カルシウム、０．０５％（Ｗ／Ｖ）ブリッジ−３５を含
む〕を１．５ｍｌ加え、同緩衝液で平衡化したＣＭ−セ
ファロースＣＬ−６Ｂ（商標、ベッド容量０．５ｍｌ）
に供した。

【００７３】ＣＭ−セファロースＣＬ−６Ｂ（商標）か
らのプロコラゲナーゼの回収およびプロコラゲナーゼ量
の測定を、試験例−１と同様にして行った。結果を下記
表４に示す。

【００７４】

【表４】 実施例３のサイトカイン活性増強剤は、プロコラゲナー
ゼ産生量を増加させており、サイトカイン（ｂＦＧＦ）
活性を増強していた。

【００７５】試験例−５ 後述する実施例４に記載のサイトカイン活性増強剤（Ｎ
−メチルエタノールアミン）について、試験例−４と同
様にしてｂＦＧＦ活性増強を調べた。測定の結果を下記
表５に示す。

【表５】 実施例４のサイトカイン活性増強剤は、プロコラゲナー
ゼ産生量を増加させており、サイトカイン（ｂＦＧＦ）
活性を増強していた。

【００７６】試験例−６ 正常ヒト線維芽細胞株〔白人女性の皮膚より採取された
Ｄｅｔｒｏｉｔ−５５１（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １１０〕
の細胞密度を１０％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳ、終濃度１％（Ｖ
／Ｖ）非必須アミノ酸および１ｍＭピルビン酸ナトリウ
ム（以上いずれも大日本製薬社製）を含むＭＥＭ培地
（以下、ＭＥＭ２培地と呼ぶ）にて１×１０⁵ 個／ｍｌ
に調整し、１２穴プレートにそれぞれ０．８ｍｌずつ播
種（８×１０⁴ 個／穴）して、５％炭酸ガス、飽和水蒸
気下、３７℃で培養した。

【００７７】後述する実施例５に記載のサイトカイン活
性増強剤（Ｎ−イソプロパノイル−２−メチル−エタノ
ールアミン）を０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを含むＭＥＭ
２培地で希釈して３ｍＭとし、添加溶液とした。

【００７８】２４時間後培養液を吸引除去し、終濃度
０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを添加したＭＥＭ２培地で細
胞を２回洗浄した後、添加溶液０．８ｍｌを加え、２日
間培養した。

【００７９】２日後、培養液を吸引除去し、再度添加溶
液０．８ｍｌを加えて２日間培養し、計４日間培養し
た。２日後、培養液を吸引除去し、３ｎｇ／ｍｌｂＦＧ
Ｆ、０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを含むＭＥＭ２培地を
０．８ｍｌ添加し、３日間培養して培養上清を得た。Ｃ
Ｍ−セファロースＣＬ−６Ｂ（商標）からのプロコラゲ
ナーゼの回収およびプロコラゲナーゼの測定を、試験例
−１と同様にして行った。

【００８０】得られた培養上清中のプロコラゲナーゼ産
生量を定量した。結果を下記表６に示す。

【００８１】

【表６】 Ｎ−イソプロパノイル−２−メチル−エタノールアミン
は、プロコラゲナーゼ産生量を増加させており、サイト
カイン（ｂＦＧＦ）活性を増強していた。

【００８２】試験例−７ 試験例−６と同様に、正常ヒト線維芽細胞株を播種し
た。後述する実施例６に記載のサイトカイン活性増強剤
（Ｄ，Ｌ−２−アミノ−１−プロパノール）を０．６％
（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを含むＭＥＭ２培地で希釈して３ｍＭ
とし、添加溶液とした。

【００８３】試験例−６と同様にして培養後、培養上清
を得た。得られた培養上清中のプロコラゲナーゼ産生量
を定量した。結果を下記表７に示す。

【００８４】

【表７】 Ｄ，Ｌ−２−アミノ−１−プロパノールは、プロコラゲ
ナーゼ産生量を増加させており、サイトカイン（ｂＦＧ
Ｆ）活性を増強していた。

【００８５】試験例−８ 試験例−６と同様に、正常ヒト線維芽細胞株を播種し
た。後述する実施例７に記載のサイトカイン活性増強剤
（２−アミノ−１−ブタノール）を０．６％（Ｖ／Ｖ）
ＦＢＳを含むＭＥＭ２培地で希釈して３ｍＭとし、添加
溶液とした。試験例−６と同様にして培養後、培養上清
を得た。得られた培養上清中のプロコラゲナーゼ産生量
を定量した。結果を下記表８に示す。

【００８６】

【表８】 ２−アミノ−１−ブタノールは、プロコラゲナーゼ産生
量を増加させており、サイトカイン（ｂＦＧＦ）活性を
増強していた。

【００８７】試験例−９ 試験例−６と同様に、正常ヒト線維芽細胞株を播種し
た。後述する実施例８に記載のサイトカイン活性増強剤
（１，３−ジアミノ−２−プロパノール）を０．６％
（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを含むＭＥＭ２培地で希釈して３ｍＭ
とし、添加溶液とした。試験例−６と同様にして培養
後、培養上清を得た。得られた培養上清中のプロコラゲ
ナーゼ産生量を定量した。結果を下記表９に示す。

【００８８】

【表９】 １，３−ジアミノ−２−プロパノールは、プロコラゲナ
ーゼ産生量を増加させており、サイトカイン（ｂＦＧ
Ｆ）活性を増強していた。

【００８９】試験例−１０ 試験例−６と同様に、正常ヒト線維芽細胞株を播種し
た。後述する実施例９に記載のサイトカイン活性増強剤
（１−アミノ−２−ブタノール）を０．６％（Ｖ／Ｖ）
ＦＢＳを含むＭＥＭ２培地で希釈して３ｍＭとし、添加
溶液とした。試験例−６と同様にして培養後、培養上清
を得た。得られた培養上清中のプロコラゲナーゼ産生量
を定量した。結果を下記表１０に示す。

【００９０】

【表１０】

【００９１】１−アミノ−２−ブタノールは、プロコラ
ゲナーゼ産生量を増加させており、サイトカイン（ｂＦ
ＧＦ）活性を増強していた。

【００９２】試験例−１１ 後述する実施例１に記載のサイトカイン活性増強剤（Ｎ
−メチル−Ｌ−セリン）を０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを
添加したＭＥＭ培地で希釈して１ｍＭとし、添加溶液と
した。

【００９３】試験例−１と同様にして添加溶液で６日間
培養した。６日後、３０ｎｇ／ｍｌＰＤＧＦ−ＢＢ（オ
ーストラル・バイオロジカルズ社製）および０．６％
（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを含むＭＥＭ培地を０．８ｍｌ添加
し、３日間培養して培養上清を得た。

【００９４】サイトカイン（ＰＤＧＦ）活性増強率を、
試験例−１と同様に、サイトカイン活性増強剤を添加し
た培養上清中のプロコラゲナーゼ産生量をＸ₂ とし、比
較例１として精製水を添加した培養上清中のプロコラゲ
ナーゼ産生量をＹ₂ として下式により算出した。

【００９５】サイトカイン（ＰＤＧＦ）活性増強率
（％）＝〔Ｘ₂ ／Ｙ₂ 〕×１００

【００９６】得られた培養上清中のプロコラゲナーゼ産
生量を定量した。結果を下記表１１に示す。

【００９７】

【表１１】 実施例１のサイトカイン活性増強剤は、プロコラゲナー
ゼ産生量を増加させており、サイトカイン（ＰＤＧＦ）
活性を増強していた。

【００９８】試験例−１２ 後述する実施例１に記載のサイトカイン活性増強剤（Ｎ
−メチル−Ｌ−セリン）を０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを
添加したＭＥＭ培地で希釈して１ｍＭとし、添加溶液と
した。

【００９９】試験例−１と同様に添加溶液を添加して６
日間培養した。培養後、培地を除去し、３ｎｇ／ｍｌＴ
ＧＦ−β１（オーストラル・バイオロジカルズ社製）お
よび０．６％（Ｖ／Ｖ）ＦＢＳを含むＭＥＭ培地を０．
８ｍｌ添加し、３日間培養して培養上清を得た。

【０１００】得られた培養上清中のＴＩＭＰ産生量の測
定を、以下のようにして行った。先ず、培養上清を測定
用緩衝液にて１０〜１０００倍に希釈する。各希釈液と
既知量（０．２４単位）のコラゲナーゼ溶液とを等量混
合し、ＦＩＴＣ−コラーゲンを基質として、試験例−１
と同様にコラゲナーゼ活性を測定する。この測定結果か
ら阻害曲線を求め、この阻害曲線から５０％阻害する培
養上清の希釈倍率を求め、この希釈倍率を単位とした。

【０１０１】一方、比較例１として、試験例−１と同様
の操作を行った。また、サイトカイン（ＴＧＦ−β１）
活性増強率は、サイトカイン活性増強剤を添加した培養
上清中のＴＩＭＰ産生量をＸ₃ とし、比較例１として精
製水を添加した培養上清中のＴＩＭＰ産生量をＹ₃ とし
て下式により算出した。

【０１０２】サイトカイン（ＴＧＦ−β１）活性増強率
（％）＝〔Ｘ₃ ／Ｙ₃ 〕×１００

【０１０３】得られた培養上清中のＴＩＭＰ産生量を定
量した。結果を下記表１２に示す。

【０１０４】

【表１２】

【０１０５】実施例１のサイトカイン活性増強剤は、Ｔ
ＩＭＰ産生量を増加させており、サイトカイン（ＴＧＦ
−β１）活性を増強していた。

【０１０６】試験例−１３ 後述する実施例３に記載のサイトカイン活性増強剤（エ
タノールアミン）を０．６％ＦＢＳを含むＭＥＭ培地で
１ｍＭに希釈して添加溶液とし、試験例−１２と同様に
培養上清を得た。ただし、サイトカイン活性増強剤添加
での培養期間を４日間とし、またＴＧＦ−β１添加６日
後の培養上清のＴＩＭＰ産生量を測定した。

【０１０７】得られた培養上清のＴＩＭＰ産生量を定量
した。結果を下記表１３に示す。

【０１０８】

【表１３】

【０１０９】実施例３のサイトカイン活性増強剤は、Ｔ
ＩＭＰ産生量を増加させており、サイトカイン（ＴＧＦ
−β１）活性を増強していた。

【０１１０】試験例−１４ 実施例１０〔８４ｍＭ（１重量％）Ｎ−メチル−Ｌ−セ
リン〕または実施例１１〔７５ｍＭ（１重量％）Ｎ−イ
ソプロパノイル−２−メチル−エタノールアミン〕のク
リームを、腹部毛剃したＳＤ系雄性ラット（７週齢、体
重２１０〜２３０ｇ、１群１８〜２４匹、日本クレア社
より入手）に２１日間にわたり毎日塗布後、１ｎｇ／ｍ
ｌｂＦＧＦ（大日本製薬社製）およびヘパリン（Ｇｉｂ
ｃｏ ＢＲＬ社製）を含むマトリジェル〔ＭＡＴＲＩＧ
ＥＬ（商標）、基底膜マトリックス・フェノールレッド
フリー、カタログナンバー４０２３４Ｃ〕を腹部皮下に
１ｍｌずつ注入し、８日後に腹部から採取した。

【０１１１】採取したマトリジェルをリン酸緩衝液（生
理食塩水含）中でヒスコトロン（商標、日音医理科器械
製作所（株））にてホモゲナイズ後、遠心し、上清中の
ヘモグロビン量をヘモグロビン−テストワコー（和光純
薬社製）を用いて測定した（この値をＸ₄ とする。）。

【０１１２】一方、後述する比較例２のクリームを用
い、上記と同様の操作を行った後、サイトカイン活性増
強剤（Ｎ−メチル−Ｌ−セリン）を添加しない場合のヘ
モグロビン量を測定した（この値をＹ₄ とする。）。

【０１１３】

【表１４】

【０１１４】次いで、これらの値から下式によりサイト
カイン（ｂＦＧＦ）活性増強率を算出した。

【０１１５】 ｂＦＧＦ活性増強率（％）＝〔Ｘ₄ ／Ｙ₄ 〕×１００

【０１１６】得られたマトリジェル中のヘモグロビン量
を定量した。結果を下記表１５に示す。

【０１１７】

【表１５】

【０１１８】Ｎ−メチル−Ｌ−セリンおよびＮ−イソプ
ロパノイル−２−メチル−エタノールアミンは、それぞ
れヘモグロビン量を増加させており、サイトカイン（ｂ
ＦＧＦ）活性を増強していた。

【０１１９】試験例−１５（皮膚透過性試験） 試験前日に剃毛したＷｉｓｔａｒ系雄性ラットをエーテ
ルで屠殺後、すみやかに腹部皮膚を剥離した。

【０１２０】後述する応用例−２８〜３０のクリームを
試料とし、図１に示す垂直型拡散セル装置（ケルコソ・
エンジニアリング社製、有効面積８cm² ）を用いた。図
１において、１はテトラフルオロエチレン製ふた部、２
はサンプリング口、３は薬物試料、４は皮膚、５はＯ−
リング、６はレセプター相、７は攪拌子である。

【０１２１】上記の垂直型拡散セル装置を用い、セルを
３２℃の空気恒温槽中に置き、レセプター側には等張リ
ン酸緩衝液（１．４４％炭酸水素ナトリウムと２．３３
％リン酸二水素カリウムで調製）４５ｍｌを入れ、ドナ
ー側のラット腹部剥離皮膚に試料１ｇを塗布し（ｎ＝
３）、１、２、４および６時間後にレセプター槽の緩衝
液を０．２ｍｌずつ採取し、直ちに−２０℃で冷凍保存
した。

【０１２２】凍結試料を融解後、１０ｍＭ塩酸で適当な
濃度に希釈し、アスパラチルグリシン（終濃度４０μ
Ｍ）を内部標準として加えた。外部標準にはアミノ酸分
析標準液（ＡＮ型）に、同濃度のアスパラチルグリシン
およびＮ−メチル−Ｌ−セリン、エタノールアミンおよ
びＮ−メチルエタノールアミン（終濃度１０μＭ）を添
加して用いた。これらの検体の定量を、ｏ−フタルアル
デヒド法を用いたポストカラム・アミノ酸分析法（リチ
ウム法）（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ、９６巻、２９８頁、１９７９年）により行っ
た。

【０１２３】Ｎ−メチル−Ｌ−セリンに対する結果を図
２に示す。Ｎ−メチル−Ｌ−セリン（応用例２８）はラ
ット皮膚を透過し、クリーム塗布後２〜６時間の透過速
度は約０．１２μｍｏｌ／cm² ／時間であった（図
２）。また、エタノールアミン（応用例２９）およびＮ
−メチルエタノールアミン（応用例３０）も皮膚を透過
することが分かった（表１６）。

【０１２４】

【表１６】 試験例−１６（急性毒性試験） 水、およびＮ−メチル−Ｌ−セリンの水溶液（検体とし
て５ｇ／ｋｇ体重となるように調製）を０．２ｍｌ／ｋ
ｇ体重の割合でＩＣＲ系雄性マウス（５週齢、体重２４
〜２８ｇ、一群５匹）に経口投与し、その後７日間マウ
スを観察した。Ｎ−メチル−Ｌ−セリン投与群には、対
照群（水だけを投与）と同様に、全く死亡例は認められ
なかった。

【０１２５】試験例−１７（皮膚累積刺激試験） Ｎ−メチル−Ｌ−セリン、エタノールアミンおよびＮ−
メチルエタノールアミンを、それぞれ、塩酸にてｐＨ７
に調整した水溶液を試験試料とした。日本在来種雄性家
兎（体重約３ｋｇ）を用い、ドレイツ法（Ａｐｐｒａｉ
ｓａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｓａｆｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌｓ ｉｎ Ｆｏｏｄｓ，Ｄｒａｇｓ ａｎｄ
Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ、４６頁、１９５９年、ｅｄｉｔｅ
ｄ ａｎｄ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｄｅ
ｉｔｏｒｉａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ，Ａｓｓｏｃｉａ
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｏｄ ａｎｄ ＤｒｕｇＯｆｆｉ
ｃｉａｌｓ ｏｆ Ｕ．Ｓ．Ａ．）に準じて試験した。

【０１２６】すなわち、毛を刈り取った家兎背部（３×
４ｃｍ）に、試験化合物の０．１％（Ｗ／Ｖ）水溶液
０．１ｍｌを開放適用にて１日１回ずつ４日間塗布し
た。２４時間後、塗布の紅斑、浮腫、痂皮および亀裂ス
コアを付けた。

【０１２７】

【表１７】

【０１２８】表１７に挙げた紅斑スコア、浮腫スコア、
痂皮スコアおよび亀裂スコアを合計して累積刺激スコア
とした。

【０１２９】次に、この累積刺激スコアより、下記表１
８の基準に基づき、Ｎ−メチル−Ｌ−セリン、エタノー
ルアミンおよびＮ−メチルエタノールアミンの刺激度を
判定した。結果を下記表１９に示す。

【０１３０】

【表１８】

【０１３１】

【表１９】

【０１３２】Ｎ−メチル−Ｌ−セリン、エタノールアミ
ンおよびＮ−メチルエタノールアミンの皮膚に対する累
積刺激性は低いことが認められた。

【０１３３】試験例−１８（皮膚一次刺激試験、特開平
０４−１１３０号公報参照） Ｎ−メチル−Ｌ−セリン、エタノールアミンおよびＮ−
メチルエタノールアミンを、それぞれ、塩酸にてｐＨ７
に調整した水溶液を試験試料とした。

【０１３４】日本在来種雄性家兎（体重約３ｋｇ）を用
い、前述のドレイツ法に準じて試験した。

【０１３５】すなわち、毛を刈り取った家兎背部に擦傷
部位（損傷皮膚）を作成し、損傷皮膚と正常皮膚のそれ
ぞれに、水０．１ｍｌ、または試験化合物の１％（Ｗ／
Ｖ）水溶液０．１ｍｌを、パッチテスト用絆創膏（１．
２ｘ１．６ｃｍ、リボンエイド登録商標、リバーテープ
製薬製）に浸潤させて貼付した。２４時間後、絆創膏を
剥離し、皮膚の紅斑および浮腫状態を観察し、さらに絆
創膏剥離の４８時間後にも同様に観察した。そして、表
２０の評価基準にてそれぞれ紅斑および浮腫スコアを付
けた。

【０１３６】

【表２０】

【０１３７】表２１に挙げた各スコアを求め、下記式に
より一次刺激スコアを計算した。 Ａ＋Ｂ Ｃ＋Ｄ Ｅ＋Ｆ Ｇ＋Ｈ 一次刺激スコア＝ ＋ ＋ ＋ ２ ２ ２ ２

【０１３８】

【表２１】

【０１３９】次に、一次刺激スコアより下記表２２の基
準に基づき、Ｎ−メチル−Ｌ−セリンの刺激度を判定し
た。結果を下記表２３に示す。

【０１４０】

【表２２】

【０１４１】

【表２３】

【０１４２】Ｎ−メチル−Ｌ−セリン、エタノールアミ
ンおよびＮ−メチルエタノールアミンの皮膚刺激性は低
いことが認められた（特開平４−１１３０号公報参
照）。

【０１４３】試験例−１９（皮膚刺激性試験） Ｎ−メチル−Ｌ−セリン、エタノールアミンおよびＮ−
メチルエタノールアミンを、それぞれ、塩酸にてｐＨ７
に調整した水溶液を試験試料とした。また、健常人１９
名を被検者とした。

【０１４４】クローズドパッチテスト法（Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｏｃｉｅｔｙｏｆ Ｃｏｓｍｅｔ
ｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔ、３１巻、９７頁、１９８０年）
により、被検者の前腕部にＫＩチャンバーを用いて、試
験化合物の１％（Ｗ／Ｖ）水溶液０．０５ｍｌを２４時
間閉塞貼付し、パッチ除去１時間後および２４時間後の
皮膚反応を観察した。

【０１４５】Ｎ−メチル−Ｌ−セリン、エタノールアミ
ンおよびＮ−メチルエタノールアミンのいずれのパッチ
テストにおいても、パッチ除去１時間後および２４時間
後の両時点で１名の被検者に軽微な紅斑が認められただ
けで、皮膚刺激性はほとんどないと判断された。以下
に、本発明の実施例を挙げて、さらに説明する。

【０１４６】実施例１（Ｎ−メチル−Ｌ−セリン） １ＭのＮ−メチル−Ｌ−セリン水溶液をポアーサイズが
０．２μｍのニトロセルロース膜（アドヴァンテック東
洋社製、ＤＩＳＭＩＣ−２５）で濾過滅菌し、サイトカ
イン活性増強剤を得た。

【０１４７】実施例２〜４（ジエタノールアミン、エタ
ノールアミンおよびＮ−メチルエタノールアミン） 塩酸でｐＨ７．５に調整したジエタノールアミン、エタ
ノールアミンまたはＮ−メチルエタノールアミン１Ｍ溶
液を用い、氷冷下にて行う以外は、実施例１と同様にし
て、サイトカイン活性増強剤を得た。

【０１４８】実施例５〜９（Ｎ−イソプロパノイル−２
−メチル−エタノールアミン、Ｄ，Ｌ−２−アミノ−１
−プロパノール、２−アミノ−１−ブタノール、１，３
−ジアミノ−２−プロパノールおよび１−アミノ−２−
ブタノール） 氷冷下に、Ｎ−イソプロパノイル−２−メチル−エタノ
ールアミン、Ｄ，Ｌ−２−アミノ−１−プロパノール、
２−アミノ−１−ブタノール、１，３−ジアミノ−２−
プロパノールおよび１−アミノ−２−ブタノールを、そ
れぞれ、ｐＨ７．５に塩酸で調整して１Ｍ溶液とし、ポ
アーサイズが０．２μｍのニトロセルロース膜（アドヴ
ァンテック東洋社製、ＤＩＳＭＩＣ−２５）で濾過滅菌
し、サイトカイン活性増強剤を得た。

【０１４９】実施例１０〜１１（クリーム） １００ｇ中に有効成分としてＮ−メチル−Ｌ−セリン
（実施例１）またはＮ−イソプロパノイル−２−メチル
−エタノールアミン（実施例５）１０００ｍｇを含有す
るクリームを表２４の通りに調製した。

【０１５０】

【表２４】

【０１５１】Ｎ−メチル−Ｌ−セリンまたはＮ−イソプ
ロパノイル−２−メチル−エタノールアミンと、パラオ
キシ安息香酸メチル、水酸化カリウム、濃グリセリン、
１，３−ブチレングリコール、セチル硫酸ナトリウムお
よび精製水とを湯浴で８０℃に加温して混合し、この混
合物を、８０℃に加温したステアリン酸、セタノール、
親油型モノステアリン酸グリセリン、ラノリン、流動パ
ラフィン、メチルポリシロキサンおよびパラオキシ安息
香酸ブチルの混合物中に攪拌しながら徐々に加えた。次
に、ホモジナイザー（ＴＯＫＵＳＨＵＫＩＫＡＩＫＯＧ
ＹＯ製）で２．５分間激しく攪拌し（２５００ｒｐ
ｍ）、各成分を十分乳化分散させた後、攪拌しながら徐
々に冷却してクリームを得た。

【０１５２】比較例２ Ｎ−メチル−Ｌ−セリンまたはＮ−イソプロパノイル−
２−メチル−エタノールアミンを加えず、精製水を６
６．３８ｇとする以外は、実施例１０〜１１と同様にし
て、比較例２のクリームを得た。

【０１５３】実施例１２〜１４（錠剤） 表２５の成分（Ａ）の混合物に、成分（Ｂ）を３０ｇの
水に溶解して加え、十分練合した。この練合物を２０メ
ッシュの篩に通して顆粒状に造粒粒し、乾燥した後、得
られた顆粒に成分（Ｃ）を混合し、１錠２００ｍｇに打
錠することによって、１錠中に有効成分を１００ｍｇ含
有する錠剤を調製した。

【０１５４】

【表２５】

【０１５５】実施例１５〜２０（カプセル剤） 表２６の各成分を充分混合し、混合物の３００ｍｇずつ
を２号カプセルに充填して、１カプセル中に有効成分を
１００ｍｇ（実施例１５〜１７）または２００ｍｇ（実
施例１８〜２０）含有するカプセル剤を調製した。

【０１５６】

【表２６】

【０１５７】実施例２１〜２６（顆粒剤） 表２７の成分（Ａ）の混合物に、水１０００ｇに溶解し
た成分（Ｂ）を加え、十分練合した。この練合物を２０
メッシュの篩に通して造粒し、乾燥し、整粒を行うこと
によって、１ｇ中に有効成分を３０ｍｇ（実施例２１〜
２３）または３００ｍｇ（実施例２４〜２６）含有する
顆粒剤を調製した。

【０１５８】

【表２７】

【０１５９】実施例２７〜２９（シロップ剤） 精製水４００ｍｌに９０℃で表２８中の成分（Ｂ）を加
えて溶解し、次いで成分（Ｃ）を同温で加え、十分混合
してから３０℃まで冷却した。この混合物に成分（Ａ）
を精製水１００ｍｌに溶解して加え、３０℃で３０分間
攪拌した。次に、成分（Ｄ）を加え、２０分間攪拌し、
精製水を加えて全量１０００ｍｌとし、無菌濾過を行う
ことによって、１ｍｌ中に有効成分を１００ｍｇ含有す
るシロップ剤を調製した。

【０１６０】

【表２８】

【０１６１】実施例３０〜５３（注射剤） 下記の表２９に示す量のサイトカイン活性増強剤を、注
射用精製水（１０％ヒト血清アルブミンおよび２０％マ
ンニトールを含む）に溶解して２００ｍｌの溶液とし、
無菌濾過による除菌を行った。Ｎ−メチル−Ｌ−セリ
ン、エタノールアミンおよびジエタノールアミンの場合
は、除菌した溶液１０ｍｌ容量のバイヤル瓶に２ｍｌず
つ分注した。無菌的に窒素置換し、打栓し、注射剤を得
た。Ｎ−メチルエタノールアミン、Ｎ−イソプロパノイ
ル−２−メチル−エタノールアミン、Ｄ，Ｌ−２−アミ
ノ−１−プロパノール、２−アミノ−１−ブタノール、
１，３−ジアミノ−２−プロパノールおよび１−アミノ
−２−ブタノールの場合は、除菌した溶液を３ｍｌ容量
の褐色アンプルに２ｍｌずつ分注し、アンプルを溶封し
て注射剤を得た。尚、表中の有効成分量は、１バイヤル
中または１アンプル中のＮ−メチル−Ｌ−セリン、エタ
ノールアミン、ジエタノールアミン、Ｎ−メチルエタノ
ールアミン、Ｎ−イソプロパノイル−２−メチル−エタ
ノールアミン、Ｄ，Ｌ−２−アミノ−１−プロパノー
ル、２−アミノ−１−ブタノール、１，３−ジアミノ−
２−プロパノールまたは１−アミノ−２−ブタノールと
しての量を表す。

【０１６２】

【表２９】

【０１６３】実施例５４〜７１（軟膏剤） 表３０および３１中の成分（Ａ）を湯浴で８０℃に加温
して混合し、この混合物を、８０℃に加温した成分
（Ｂ）中に攪拌しながら徐々に加えた。次に、ホモジナ
イザー（ＴＯＫＵＳＨＵＫＩＫＡＫＯＧＹＯ製）で２．
５分間激しく攪拌し（２５００ｒｐｍ）、各成分を十分
乳化分散させた後、攪拌しながら徐々に冷却し、最後に
エタノールアミン誘導体とｂＦＧＦまたはａＦＧＦとを
添加することによって、１００ｇ中に有効成分５００ｍ
ｇとｂＦＧＦ２ｍｇとを（実施例５４〜６２）、または
有効成分１０００ｍｇとａＦＧＦ０．２ｍｇとを（実施
例６３〜７１）含有する軟膏を調製した。

【０１６４】

【表３０】

【０１６５】

【表３１】

【０１６６】以下に、応用例を示す。表中の数値は、特
記しない限り、重量％を表す。

【０１６７】応用例１〜２７ １００ｇ中に有効成分としてＮ−メチル−Ｌ−セリン
（応用例１、１０および１９）、ジエタノールアミン
（応用例２、１１および２０）、エタノールアミン（応
用例３、１２および２１）、Ｎ−メチルエタノールアミ
ン（応用例４、１３および２２）、Ｎ−イソプロパノイ
ル−２−メチル−エタノールアミン（応用例５、１４お
よび２３）またはＤ，Ｌ−２−アミノ−１−プロパノー
ル（応用例６、１５および２４）、２−アミノ−１−ブ
タノール（応用例７、１６および２５）、１，３−ジア
ミノ−２−プロパノール（応用例８、１７および２６）
または１−アミノ−２−ブタノール（応用例９、１８お
よび２７）を１００、２００または４００ｍｇ含有する
ローションを表３２および３３の通りに調製した。

【０１６８】

【表３２】

【０１６９】

【表３３】

【０１７０】表中の有効成分と、成分（Ａ）を湯浴で８
０℃に加温して混合した。一方、成分（Ｂ）も同様に８
０℃に加温して混合し、この混合物へ前者の混合物を攪
拌しながら徐々に加え、ホモジナイザー（ＴＯＫＵＳＨ
ＵＫＩＫＡＩＫＯＧＹＯ製）で２．５分間激しく攪拌し
た（２５００ｒｐｍ）。攪拌しながら徐々に室温まで冷
却してローションを得た。

【０１７１】応用例２８〜３０ 表３４に示す組成でクリームを調製した。

【０１７２】

【表３４】 成分（Ａ）を８０℃で均一に混合溶解した後、それに成
分（Ｂ）を混合溶解した（混合液Ｉ）。これとは別に、
成分（Ｄ）を８０℃で均一に混合溶解後、それに成分
（Ｃ）を混合溶解した（混合液II）。次に、混合液Ｉ
に、徐々に混合液IIを加え、十分攪拌しながら３０℃ま
で冷却し、クリームを得た。

【０１７３】応用例３１（ヘアートニック）

【０１７４】

【表３５】

【０１７５】応用例３２（ヘアートニック）

【表３６】

【０１７６】応用例３３（エアゾルタイプの皮膜剤）

【０１７７】

【表３７】

【０１７８】応用例３４（入浴剤） Ｎ−メチル−Ｌ−セリン３ｇと下記成分とを混合し、入
浴剤１００ｇを得た。

【０１７９】

【表３８】 尚、この入浴剤は使用時に約３０００倍に希釈される。

【０１８０】

【発明の効果】本発明のサイトカイン活性増強剤は、皮
膚細胞に作用して、サイトカインに対する応答性を高
め、皮膚代謝を賦活することができる。また、一般式
（Ｉ）で表されるエタノールアミン誘導体またはその塩
は、皮膚を透過しうるので、局所的にサイトカインの作
用を増強することができる。さらに、エタノールアミン
誘導体またはその塩は、毒性は低く、全身投与において
もサイトカインの作用を増強することができる。従っ
て、一般式（Ｉ）のエタノールアミン誘導体およびその
塩は、サイトカイン活性増強剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】 試験例−１５で使用した垂直型拡散セル装置
を示す図である。

【図２】 試験例−１５において、Ｎ−メチル−Ｌ−セ
リンの皮膚透過性試験を行った結果を表す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/133 Ａ６１Ｋ 31/133 31/198 31/198 Ａ６１Ｐ 43/00 １２１ Ａ６１Ｐ 43/00 １２１

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（Ｉ）で表されるエタノールアミ
   ン誘導体またはその塩を含有する化粧料。 （式中、Ｒ₁ はＨ、−ＣＨ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ（ＣＨ₃ ）
   ＯＨまたは−ＣＨ₂ ＣＨ ₂ ＯＨであり、Ｒ₂ はＨ、−Ｃ
   Ｈ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ₃ または−ＣＯＯＨであり、Ｒ₃ は
   Ｈ、−ＣＨ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ₃ または−ＣＨ₂ ＮＨ₂ で
   ある）
2. 【請求項２】 一般式（Ｉ）で表されるエタノールアミ
   ン誘導体またはその塩を含有する入浴剤。 （式中、Ｒ₁ はＨ、−ＣＨ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ（ＣＨ₃ ）
   ＯＨまたは−ＣＨ₂ ＣＨ ₂ ＯＨであり、Ｒ₂ はＨ、−Ｃ
   Ｈ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ₃ または−ＣＯＯＨであり、Ｒ₃ は
   Ｈ、−ＣＨ₃ 、−ＣＨ₂ ＣＨ₃ または−ＣＨ₂ ＮＨ₂ で
   ある）