JP2000146982A

JP2000146982A - Ｍａファミリ―ポリペプチド及び抗―Ｍａ抗体

Info

Publication number: JP2000146982A
Application number: JP11320171A
Authority: JP
Inventors: B Posner Jerome; ビー．ポスナージェローム; O Dalmau Joseph; オー．ダルマウジョセフ; R Rosenfelt Milna; アール．ローゼンフェルトミルナ
Original assignee: Sloan Kettering Institute for Cancer Research
Current assignee: Memorial Sloan Kettering Cancer Center
Priority date: 1998-11-10
Filing date: 1999-11-10
Publication date: 2000-05-26
Anticipated expiration: 2019-11-10
Also published as: JP4402223B2; CA2287545C; CA2287545A1; US20020123114A1; US7026450B2; US6387639B1

Abstract

(57)【要約】【課題】Ｍａファミリーポリペプチド及び抗−Ｍａ抗体
が提供される。【解決手段】ＭａファミリーポリペプチドＭａ１、Ｍａ
２、Ｍａ３、Ｍａ４及びＭａ５が開示され、Ｍａファミ
リーポリペプチドをコードする核酸、Ｍａファミリーポ
リペプチドに結合する抗体、及び個体由来の試験試料
を、Ｍａファミリーポリペプチドに対する抗体の存在若
しくは非存在、又は量について評価することによる、腫
瘍随伴性症候群の診断方法が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、Ｍａファミリーポ
リペプチド及び抗−Ｍａ抗体に関する。本発明は、国立
衛生研究所（ｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕ
ｔｅｓｏｆｈｅａｌｔｈ）の助成金ＮＳ−２６０６
４及び国立ガン研究所（ｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＣ
ａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）の助成金０８７４８
により、全体又は一部が支援された。米国政府は、本発
明において一定の権利を有する。

【０００２】

【従来の技術】腫瘍随伴性症候群として知られる、特定
の神経学的障害を伴う癌の併発の存在は、広範囲の、又
は侵襲性の（ｉｎｖａｓｉｖｅ）研究をしばしば必要と
し、あるいは剖検により確認される。腫瘍随伴性症状
は、通常、癌の検出に先行し、神経系のいずれかの部分
に影響することがあり、癌自体よりも衰弱性であること
が多い。腫瘍随伴性辺縁系脳炎（ＰＬＥ）は、これらの
症候群の１つであり、１９６８年に最初に認知された
（コーセリス（Ｃｏｒｓｅｌｌｉｓ）、Ｊ．Ａ．Ｎ．
ら、Ｂｒａｉｎ９１：４８１〜４９６頁（１９６
８））。ＰＬＥの顕現性の症状としては、被刺激性、う
つ病、発作、重度の記憶欠如及び痴呆である。これらの
症状は、主要な病理学的関連部分（海馬、扁桃、視床下
部ならびに島皮質及び帯状皮質）を有する神経系の領域
に相関するが、ほとんどの研究では、脳幹脳炎（ＢＥ）
及び臨床的に無症候性であったり、なかったりすること
がある他の領域における異常も示す（バクハイト（Ｂａ
ｋｈｅｉｔ），Ａ．Ｍ．Ｏ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎ
ｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ５３：１０
８４−１０８８（１９９０）；ヘンソン（Ｈｅｎｓｏ
ｎ），Ｒ．Ａ．及びユーリッチ（Ｕｒｉｃｈ），Ｈ．、
ＣａｎｃｅｒａｎｄｔｈｅＮｅｒｖｏｕｓＳｙ
ｓｔｅｍ、ブラックウェル・サイエンティフィック・パ
ブリケイションズ（ＢｌａｃｋｗｅｌｌＳｃｉｅｎｔ
ｉｆｉｃＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、オックスフォ
ード、米国、１９８９、３１４〜３４５頁）。

【０００３】臨床症状の多様性及び特異的マーカーがな
いことがよくあることにより、ＰＬＥは診断されにく
い。既知の癌の患者において、ＰＬＥの症状は、脳への
転移、毒性及び代謝性脳障害、感染症並びに癌治療の副
作用を含む他の合併症に属し得る。患者の約６０％で
は、ＰＬＥは腫瘍の検出に先行し、その臨床的認知をな
おさら困難にする（ダルマウ（Ｄａｌｍａｕ），Ｊ．
ら、Ｍｅｄｉｃｉｎｅ７１：５９−７２（１９９
２）；アラモウィッチ（Ａｌａｍｏｗｉｔｃｈ），Ｓ．
ら、Ｂｒａｉｎ１２０：９２３−９２８（１９９
７））。ＭＲＩ検査における近心側頭葉に関連する異常
の所見は、ＰＬＥの疑いを生ずることがあるが、診断は
確定しない。

【０００４】神経系に影響する腫瘍随伴性症候群のいく
つかは、ニューロンタンパク質及び原因となる腫瘍と反
応する抗体〔オンコニューロナル（ｏｎｃｏｎｅｕｒｏ
ｎａｌ）抗原〕に関連する（グリーンリー（Ｇｒｅｅｎ
ｌｅｅ），Ｊ．Ｅ．、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ１２：１
０２（１９８２）；グラウス（Ｇｒａｕｓ），Ｆ．ら、
Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ３５：５３８−５４３（１９８
５）；ブッデ−ステフェン（Ｂｕｄｄｅ−Ｓｔｅｆｆｅ
ｎ），Ｃ．ら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２３：５２８−
５３１（１９８８）；ダルマウ（Ｄａｌｍａｕ），Ｊ．
及びポスナー（Ｐｏｓｎｅｒ），Ｊ．Ｂ．、Ｓｅｍｉ
ｎ．Ｏｎｃｏｌ．２４：３１８−３２８（１９９
７））。これらの抗体のいくつかは、異なる型の癌に関
連する特定の神経学的疾患症候群のマーカーである（フ
ァーネアウックス（Ｆｕｒｎｅａｕｘ），Ｈ．Ｍ．ら、
ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２２：１８４４−１
８５１（１９９０）；ルーク（Ｌｕｑｕｅ），Ｆ．Ａ．
ら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２９：２４１−２５１（１
９９１）；ダルマウ（Ｄａｌｍａｕ），Ｊ．ら、Ｍｅｄ
ｉｃｉｎｅ７１：５９−７２（１９９２））。いくつ
かの抗体の存在は非常に特異的であるため、以前に脳の
生検により、又は剖検により同定された疾患は、今では
血清学的に診断され得る（ヘンソン（Ｈｅｎｓｏｎ），
Ｒ．Ａ．ら、Ｂｒａｉｎ８８：４４９−４６４（１９６
５）；アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ），Ｎ．Ｅ．
ら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２４：５５９−５６７（１
９８８）；ダルマウ（Ｄａｌｍａｕ），Ｊ．ら、Ａｎ
ｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２７：５４４−５５２（１９９
０）；ポスナー（Ｐｏｓｎｅｒ），Ｊ．Ｂ．（編）、Ｐ
ａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃＳｙｎｄｒｏｍｅｓ．
ＮｅｕｒｏｌｏｇｉｃＣｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ
ｏｆＣａｎｃｅｒ、フィラデルフィア、ＦＡデイビ
ス社（ＦＡＤａｖｉｓＣｏｍｐａｎｙ）、３５３〜３
８５頁（１９９５））。腫瘍によるニューロンタンパク
質の発現は、そうでなければ正常なニューロンタンパク
質にとって、免疫寛容が破壊される、おそらく非常に重
要な工程である（カーペンティア（Ｃａｒｐｅｎｔｉｅ
ｒ）ら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ５０：Ａ３５４−３５５
（１９９８））。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】これまでに、特徴的な
抗ニューロン抗体が、数種の腫瘍随伴性障害のみにおい
て、発見されている。臨床症状の多様性及び特異的マー
カーがないことがよくあることに加え、腫瘍随伴性症候
群の衰弱性の性質のため、腫瘍随伴性症候群を診断する
新しい手段を同定することが重要である。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、Ｍａファミリ
ーポリペプチドの活性若しくは機能的誘導体又は断片に
加え、単離されたＭａファミリーポリペプチド、特に、
Ｍａ１（配列番号：４）、Ｍａ２（配列番号：７）、Ｍ
ａ３（配列番号：９）、Ｍａ４（配列番号：１１）及び
Ｍａ５（配列番号：１３）に関する。また、本発明は、
Ｍａファミリーポリペプチドをコードする核酸及び調節
配列に作動可能に連結された、本明細書に記載の核酸分
子を含有してなる核酸構築物、並びに調節配列に作動可
能に連結された、本明細書に記載の核酸分子を含有して
なる組換え宿主細胞に関する。また、本発明は、Ｍａフ
ァミリーポリペプチド又はその活性誘導体又は断片に選
択的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合性断
片に関する。

【０００７】さらに、本発明は、（例えば、体液若しく
は体組織の、又は体液若しくは体組織から単離された抗
体の）試験試料を、Ｍａ１及び／又はＭａ２等のＭａフ
ァミリーポリペプチドに結合する抗体の存在、非存在又
は量について評価することによる、個体における腫瘍随
伴性症候群の診断方法に関する。Ｍａファミリーポリペ
プチドに結合する抗体の存在は、腫瘍随伴性症候群の存
在を示し；Ｍａファミリーポリペプチドに結合する抗体
の非存在は、腫瘍随伴性症候群の非存在を示す。本発明
は、さらに、（例えば、体液若しくは体組織の、又は体
液若しくは体組織の試料から単離された抗体の）試験試
料を、Ｍａ１及び／又はＭａ２等のＭａファミリーポリ
ペプチドに結合する抗体の存在、非存在又は量について
評価することによる、個体における新生物の診断方法に
関する。Ｍａファミリーポリペプチドに結合する抗体の
存在は、新生物の存在を示し；Ｍａファミリーポリペプ
チドに結合する抗体の非存在は、新生物の非存在を示
す。

【０００８】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチドこのように、本発明は、本明細書に記載のヌクレオチド
配列によりコードされるポリヌクレオチド産物に加え、
単離されたＭａファミリーポリペプチドに関する。「ポ
リペプチド」という用語は、アミノ酸のポリマーをい
い、特定の鎖長のものではなく；従って、ペプチド、オ
リゴペプチド及びタンパク質は、ポリペプチドの定義の
範囲に含まれる。本明細書で使用する「Ｍａファミリー
ポリペプチド」は、脳及び／又は精巣により発現され、
Ｍａ１、Ｍａ２、Ｍａ３、Ｍａ４及び／又はＭａ５とか
なりの同一性を共有するポリペプチドをいう。「かなり
の同一性を共有する」ポリペプチドとは、Ｍａ１、Ｍａ
２、Ｍａ３、Ｍａ４及び／又はＭａ５と、約７５％のア
ミノ酸同一性を有するポリペプチドである。低度の同一
性を示すポリペプチドも、特に、ポリペプチドの１以上
の特定のドメインにおいて、Ｍａ１、Ｍａ２、Ｍａ３、
Ｍａ４及び／又はＭａ５と、高度の、例えば、少なくと
も約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より
いっそう好ましくは少なくとも約９５％のアミノ酸同一
性を示す場合、有用であり、Ｍａファミリーポリペプチ
ドとみなすことができる。例えば、抗体結合性活性を含
む特定の活性に必要なドメインにおいて、高度の同一性
を共有するポリペプチドは、これに含まれる。本発明の
好ましい態様において、Ｍａファミリーポリペプチド
は、Ｍａ１（配列番号：４）、Ｍａ２（配列番号：
７）、Ｍａ３（配列番号：９）、Ｍａ４（配列番号：１
１）又はＭａ５（配列番号：１３）である。また、「Ｍ
ａファミリーポリペプチド」という用語は、脳及び／又
は精巣により発現され、Ｍａ１、Ｍａ２、Ｍａ３、Ｍａ
４及び／又はＭａ５に特異的に結合する抗体により認識
されるポリペプチドを含む。本発明のＭａファミリーポ
リペプチドは、部分的に、又は実質的に精製（例えば、
同種に精製）され得る。

【０００９】本発明のＭａファミリーポリペプチドは、
種々の方法により、組換え細胞培養物から単離又は精製
（例えば、同種に）され得る。「単離された」ポリペプ
チドは、その天然の状態において伴う成分からの分離な
どにより、天然で会合する成分を実質的に含まない。し
たがって、化学的に合成されたり、又はそれが天然に存
在する細胞とは異なる細胞系で合成されるポリペプチド
は、天然で会合する成分を実質的に含ないであろうか
ら、「単離された」とみなされる。単離の方法には、限
定されないが、アニオン又はカチオン交換クロマトグラ
フィー、エタノール沈殿、ポリアクリルアミドゲル電気
泳動、アフニティークロマトグラフィー並びに高速液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が含まれる。使用され
る特定の方法は、ポリペプチドの性質及び宿主細胞の選
択に依存し；適切な方法は、当業者に容易にわかるであ
ろう。

【００１０】本発明によれば、Ｍａファミリーポリペプ
チドのアミノ酸配列は、天然に存在するポリペプチド
（例えば、Ｍａ１、配列番号：４、Ｍａ２、配列番号：
７、Ｍａ３、配列番号：９、Ｍａ４、配列番号：１１又
はＭａ５、配列番号：１３）のそれであり得、それにお
ける改変を含有してなり得る。そのような改変には、保
存的又は非保存的アミノ酸置換、１以上のアミノ酸の付
加及び欠失が含まれる；しかしながら、そのような改変
は、Ｍａファミリーポリペプチドの少なくとも１つの活
性を保存すべき、すなわち、改変又は変異体ポリペプチ
ドは、天然に存在するポリペプチドの活性又は機能的誘
導体であるべきである。例えば、変異体は、好ましく
は、元のポリペプチドの抗体結合部位の三次元立体配置
を保存し得る。また、断片は、結合のための免疫学的エ
ピトープの共有に加えて、免疫原性機能等の他の免疫学
的活性を保持する。

【００１１】Ｍａファミリーポリペプチド活性の存在又
は非存在は、限定されないが、抗−Ｍａ抗体（すなわ
ち、Ｍａ１又はＭａ２に対する抗体）又は抗−Ｔａ抗体
（すなわち、Ｍａ２に対する抗体）の該ポリペプチドへ
の結合のアッセイを含む種々の標準的な機能アッセイに
より決定される。さらに、Ｍａファミリーポリペプチド
の機能に必須のアミノ酸は、当該分野で既知の方法によ
り同定することができる。特に有用な方法には、免疫グ
ロブリン遺伝子のスーパーファミリーにおける保存アミ
ノ酸の同定、部位特異的突然変異誘発及びアラニンスキ
ャニング（ａｌａｎｉｎｅ−ｓｃａｎｎｉｎｇ）突然変
異誘発（例えば、カニングハム（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａ
ｍ）及びウェルズ（Ｗｅｌｌｓ）、Ｓｃｉｅｎｃｅ２
４４：１０８１−１０８５（１９８９））、結晶化及び
核磁気共鳴が含まれる。これらの方法により生成させた
改変ポリペプチドは、免疫原性及び抗原性を含む特定の
生物学的活性について試験され得る。

【００１２】具体的には、適当なアミノ酸改変は、疎水
性、塩基性若しくは酸性の特性、荷電、極性、サイズ、
官能基（例えば、−ＳＨ又はグリコシル化部位）の存在
又は非存在及び芳香族特性を含むいくつかの基準に基づ
いて行うことができる。上述の性質に基づく、種々のア
ミノ酸の類似基への割り振りは、当業者に容易にわかる
だろう；さらに、適切なアミノ酸変化は、ボウイ（Ｂｏ
ｗｉｅ）ら（Ｓｃｉｅｎｃｅ２４７：１３０６−１３
１０（１９９０））にも見ることができる。

【００１３】本発明のＭａファミリーポリペプチドの他
の改変には、例えば、グリコシル化、アセチル化、カル
ボキシル化、ホスホリル化、ユビキチン化、標識（例え
ば、放射性核種で）、酵素的修飾、アミノ酸（例えば、
天然アミノ酸を含む）のアナログの取り込み、置換され
た結合（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄｌｉｎｋａｇｅｓ）
及び当該分野において既知の修飾が含まれ、共に、天然
および非天然に存在する。

【００１４】本明細書に記載の本発明は、本明細書に記
載の単離されたポリペプチドの断片にも関連する。「断
片」という用語は、単離されたポリペプチドの、上述し
たような（例えば、免疫原性又は抗原性機能）１以上の
機能又は生物学的活性を保持する、本明細書に記載のポ
リペプチドの一部分を包含するものとする。例えば、断
片は、少なくとも約２０個の隣接するアミノ酸から少な
くとも約２００個の隣接するアミノ酸、より好ましくは
少なくとも約５０個のアミノ酸、よりいっそう好ましく
は少なくとも約１００個のアミノ酸、よりいっそう好ま
しくは少なくとも約１５０個のアミノ酸であり得る。

【００１５】また、Ｍａファミリーポリペプチドは、１
以上の付加的成分に融合した、Ｍａファミリーポリペプ
チドのアミノ酸配列の全部又は一部を含有する融合タン
パク質であり得る。代表的な融合パートナーには、免疫
グロブリン、細菌性β−ガラクトシダーゼ、ｔｒｐＥ、
プロテインＡ、β−ラクタマーゼ、α−アミラーゼ、ア
ルコールデヒドロゲナーゼ、及び酵母α接合因子が含ま
れる。放射性同位体及び抗原性タグ等の付加的成分は、
ポリペプチドの単離又は精製を補助したり、又はポリペ
プチドの半減期を延長するために選択することができ；
例えば、ヘキサヒスチジンタグにより、ニッケルクロマ
トグラフィーによる精製が容易になるだろう。さらに、
本発明のポリペプチドは、Ｍａファミリーポリペプチド
の前駆体でありえ；前駆体は、切断されて活性なＭａフ
ァミリーポリペプチドを形成する分子である。

【００１６】本明細書に記載のＭａファミリーポリペプ
チドは、天然に存在する供給源から単離されるか、化学
的に合成されるか、又は組換え的に製造され得る。例え
ば、本明細書に記載の核酸分子は、細菌又は真核細胞に
よるプロセスを介し、コードされたポリペプチドの組換
え型を製造するのに使用することができる。ポリヌクレ
オチド配列の、発現ベクター等の遺伝子構築物へのライ
ゲーション、及び真核（酵母、トリ類、昆虫、植物又は
哺乳類）又は原核（細菌細胞）のいずれかの宿主への形
質転換又はトランスフェンクションは、他の周知のタン
パク質の製造に使用される標準法である。同様の方法、
又はその変形法は、細菌による手段又は組織培養技術に
より、本発明による組換えポリペプチドの製造に使用す
ることができる。

【００１７】本発明の核酸また、本発明は、上述のＭａファミリーポリペプチドを
コードする単離された核酸分子に関連する。本発明の核
酸分子は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）又はｃＤＮＡ及
びゲノムＤＮＡ等のＤＮＡであり得る。ＤＮＡ分子は、
二本鎖又は一本鎖でありえ；一本鎖のＲＮＡ又はＤＮＡ
は、コード（センス）鎖又は非コード（アンチセンス）
鎖のいずれかであり得る。好ましくは、核酸分子は、少
なくとも約１５個のヌクレオチド、より好ましくは少な
くとも３０個のヌクレオチド、よりいっそう好ましくは
約６０個の隣接するヌクレオチド、さらにより好ましく
は少なくとも約１００個の隣接するヌクレオチド、より
いっそう好ましくは少なくとも約１５０個の隣接するヌ
クレオチド、よりいっそう好ましくは少なくとも約３０
０個の隣接するヌクレオチドを含有する。核酸分子は、
Ｍａファミリーポリペプチドのアミノ酸配列の少なくと
も断片をコードするポリヌクレオチドのみであり得；ま
た、核酸分子は、イントロン及び非コード３’及び５’
配列（例えば、調節配列を含む）等の付加的な非コード
配列とともに、Ｍａファミリーポリペプチドをコードす
る核酸の少なくとも断片を含み得る。さらに、核酸分子
は、ポリペプチドの単離又は精製を補助するために、マ
ーカー配列、例えば、ポリペプチドをコードするヌクレ
オチド配列を含み得る。このような配列には、限定され
ないが、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳ
Ｔ）融合タンパク質をコードするもの、及びインフルエ
ンザ由来の血球凝集素Ａ（ＨＡ）ペプチドマーカーをコ
ードするものが含まれる。好ましい態様において、核酸
分子は、Ｍａ１（配列番号：３）をコードする配列；Ｍ
ａ２（配列番号：６）をコードする配列；Ｍａ３（配列
番号：８）をコードする配列；Ｍａ４（配列番号：１
０）をコードする配列；又はＭａ５（配列番号：１２）
をコードする配列を有する。

【００１８】本明細書で使用されているように、「単離
された」又は「実質的に純粋な」核酸分子は、通常（天
然で）、その遺伝子又はヌクレオチド配列をフランキン
グする（ゲノム配列におけるように）、及び／又は、他
の転写された配列から完全に又は部分的に精製されてい
る（ｃＤＮＡ又はＲＮＡライブラリーにおけるように）
ヌクレオチド配列にフランキングされていないヌクレオ
チド配列を意味するものとする。このように、単離され
たヌクレオチド配列は、化学的に、又は組換え手段によ
り合成されたヌクレオチド配列を含み得る。したがっ
て、ベクターに含まれる組換えＤＮＡは、本明細書に使
用されるような「単離された」という定義に含まれる。
また、単離されたヌクレオチド配列は、溶液中の部分的
又は実質的に精製されたＤＮＡ分子に加えて、異種宿主
細胞内の組換えＤＮＡ分子を含む。本発明のＤＮＡ分子
のインビボ及びインビトロＲＮＡ転写物も、「単離され
た」ヌクレオチド配列に包含される。このような単離さ
れたヌクレオチド配列は、コードされたタンパク質の製
造において、相同配列の単離用（例えば、他の哺乳類種
から）、遺伝子マッピング用（例えば、染色体とのイン
サイチューハイブリダイゼーションにより）、又はノー
ザンブロット分析等による、Ｍａファミリーポリペプチ
ドの組織内（例えば、ヒト組織）での発現の検出用のプ
ローブとして有用である。

【００１９】また、本発明は、必ずしも天然には見られ
ないが、Ｍａファミリーポリペプチドをコードする核酸
分子に関する。このように、天然に存在するヌクレオチ
ド配列とは異なる配列を含有するが、遺伝コードの縮重
により、本発明のＭａファミリーポリペプチドをコード
するＤＮＡ分子は、本発明の主題である（例えば、配列
番号：４、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１
１又は配列番号：１３をコードする核酸分子）。また、
本発明は、Ｍａファミリーポリペプチドの一部、アナロ
グ又は誘導体をコードするもの等、本発明のヌクレオチ
ド配列の変異を包含する。このような変異は、対立遺伝
子変異の場合のように天然に存在するものでありえ、又
は、種々の変異原及び変異誘発手法により誘発されたも
の等の非天然に存在するものであり得る。意図される変
異は、限定されないが、付加及び欠失を含む保存的又は
非保存的アミノ酸変化をもたらし得る、１以上のヌクレ
オチドの付加、欠失又は置換を含む。好ましくは、ヌク
レオチド又はアミノ酸の変異は、サイレントである若し
くは保存されている；すなわち、それらは、Ｍａファミ
リーポリペプチドの特性又は活性を変更しない。

【００２０】本発明の核酸分子の他の変形は、例えば、
非荷電結合（例えば、メチルホスホネート類、ホスホト
リエステル類、ホスホアミデート類、カルバメート類）
等の標識、メチル化、ヌクレオチド間修飾、荷電結合
（例えば、ホスホロチオエート類、ホスホロジチオエー
ト類）、ペンダント部（例えば、ポリペプチド類）、挿
入剤（例えば、アクリジン、ソラレン（ｐｓｏｒａｌｅ
ｎ））、キレート剤、アルキル化剤及び修飾結合（例え
ば、アルファ芳香族核酸）を含み得る。また、水素結合
及び他の化学的相互作用を介しての指定の配列に結合す
る能力において核酸分子をまねる合成分子が含まれる。
そのような分子は、例えば、分子の主鎖においてペプチ
ド結合がリン酸結合に置き換わるものを含む。

【００２１】また、本発明は、本明細書に記載の単離さ
れた核酸分子の断片に関する。「断片」という用語は、
上述のＭａファミリーポリペプチドの断片をコードする
部分等の、本明細書に記載の核酸配列の一部を包含する
ものとする。例えば、断片は、少なくとも約１５個の隣
接するヌクレオチドから少なくとも約３００個の隣接す
るヌクレオチド又はそれ以上の長さの核酸の一部であり
得る。１以上のイントロンも存在し得る。そのような断
片は、例えば、診断方法用のプローブとして、及び、プ
ライマー又はプローブとして有用である。特に好ましい
プライマー及びプローブは、本明細書に記載のＭａファ
ミリーポリペプチドをコードする核酸分子に、選択的に
ハイブリダイズする。例えば、本明細書に記載のＭａフ
ァミリーポリペプチドの抗原性領域をコードする断片は
有用である。

【００２２】また、本発明は、媒体下、より好ましくは
高度にストリンジェンシーなハイブリダイゼーション条
件下で（例えば、選択的ハイブリダイゼーション用）、
本明細書に記載の核酸分子の一部にハイブリダイズする
核酸分子に関する。適切なストリンジェンシー条件は、
当業者に知られており、あるいは、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒ
ｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌ
ｏｇｙ、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク、（１９９
８）、６．３．１．−６．３．６．等の標準テキストに
見出すことができる。そのようなハイブリダイズ可能な
核酸分子は、診断用途用のプローブ又はプライマーとし
て有用である。例えば、サザン・ブロッティングのため
の高度にストリンジェンシーなハイブリダイゼーション
条件は、算出したＴｍ（Ｔｍは、プローブのヌクレオチ
ド配列に基づき、各プローブについて計算することがで
きる）よりも約１２〜２０℃低い温度での条件を含み；
また、高度にストリンジェンシーな条件は、低塩条件を
含む。

【００２３】従って、本発明は、本明細書に記載のヌク
レオチド配列と実質的に同一性を有する核酸分子に関す
る。特に、本明細書に記載のヌクレオチド配列と、少な
くとも約６０％、より好ましくは少なくとも約８５％、
よりいっそう好ましくは少なくとも約９５％、さらによ
り好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸
分子が好ましい。また、この場合、本明細書に記載のＭ
ａファミリーポリペプチドの少なくとも１つの活性を有
するポリペプチドをコードする核酸分子が特に好まし
い。例えば、Ｍａファミリーポリペプチドと同じ又は類
似の免疫原性又は抗原性を有するポリペプチドをコード
する好ましい核酸分子は、本発明の範囲内である。全体
的に低度の相同性を有する核酸分子も、それらがポリペ
プチドの断片において実質的に同一性を有するならば、
本明細書に含まれる。例えば、Ｍａファミリーポリペプ
チドは、それぞれ、セグメントを含み（約１５個のヌク
レオチドから約１００個のヌクレオチドの範囲であり、
１２０個から３６０個までのヌクレオチドのセグメント
を含む）、互いに実質的に相同性を有する（少なくとも
６０％から少なくとも９５％の範囲）。Ｍａ１及びＭａ
２は、独立した５つのセグメントにおいて、６０％から
７６．５％の範囲の実質的な同一性を共有する：Ｍａ２
のヌクレオチド１１〜３８及びＭａ１のヌクレオチド６
７８〜７０５（７１．４％相同）；Ｍａ２のヌクレオチ
ド７８〜１０９及びＭａ１のヌクレオチド７４５〜７７
６（６８．８％相同）；Ｍａ２のヌクレオチド１５０〜
１６５及びＭａ１のヌクレオチド８１４〜８２９（６０
％相同）；Ｍａ２のヌクレオチド１８４〜２００及びＭ
ａ１のヌクレオチド８４６〜８６４（７６．５％相
同）；Ｍａ２のヌクレオチド２４６〜３４１及びＭａ１
のヌクレオチド９１０〜１００５（７４％相同）。いく
つかのセグメントにおける実質的な相同性は、コードさ
れたポリペプチドが密接に関連していることを示す。し
たがって、Ｍａファミリーポリペプチドに対して同様に
全体的に低度の相同性を有するが、Ｍａファミリーポリ
ペプチドの１以上の領域に対して実質的な相同性を有す
る核酸分子は、本発明に包含される。

【００２４】また、本発明は、Ｍａファミリーポリペプ
チド又はその活性な誘導体若しくは断片をコードし、少
なくとも１つの調節配列に作動可能に連結されたヌクレ
オチド配列を含む発現ベクターを提供する。このような
ベクターの多くは、商品として入手可能であり、他の好
適なベクターは、当業者により容易に作製され得る。
「作動可能に連結された」とは、ヌクレオチド配列が、
ヌクレオチド配列の発現が可能なように調節配列に連結
されることを意味するものとする。調節配列は、当該分
野において認知されており、Ｍａファミリーポリペプチ
ド又はその活性な誘導体を生成するように選択される。
したがって、「調節配列」という用語は、プロモータ
ー、エンハンサー、及び、ゴーデル（Ｇｏｅｄｄｅ
ｌ）、ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｅｉｏｎＴｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ：ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇ
ｙ１８５、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ）、サンディエゴ、カリフォルニア州、
（１９９０）に記載された他の発現調節要素を含む。例
えば、元の調節配列又は形質転換された宿主細胞の元の
調節配列を使用することができる。発現ベクターの設計
は、形質転換される宿主の選択及び／又は発現させたい
タンパク質の型等の因子に依存するかもしれないという
ことを理解されたい。例えば、本発明の核酸分子にコー
ドされるポリペプチドは、クローン化遺伝子又はその一
部を、原核細胞、真核細胞又はその両方のいずれかにお
いて、発現に好適なベクターにライゲートすることによ
り製造することができる（例えば、ブローチ（Ｂｒｏａ
ｃｈ）ら、ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＭａｎｉｐｕｌａ
ｔｉｏｎｏｆＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、
Ｍ．イノウエ（Ｉｎｏｕｙｅ）編、（アカデミック・プ
レス（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ）、１９８３）、
８３頁；ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬ
ａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、第２版、サンブル
ック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら編、（コールド・スプリン
グ・ハーバー・ラボラトリー・プレス（ＣｏｌｄＳｐｒ
ｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒｔａｔｏｒｙＰｒ
ｅｓｓ）、１９８９）、第１６章及び第１７章を参照の
こと）。典型的には、発現構築物は、限定されないが、
ジヒドロ葉酸レダクターゼをコードする遺伝子、及びネ
オマイシン、テトラサイクリン、アンピシリン、クロラ
ムフェニコール、カナマイシン及びストレプマイシン耐
性へ耐性を付与する遺伝子を含む、１以上の選択マーカ
ーを含むであろう。また、ベクターは、例えば、自律複
製配列（ＡＲＳ）、発現調節配列、リボソーム結合部
位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、転写
終結配列、分泌シグナル及びｍＲＮＡ安定化配列を含み
得る。

【００２５】記載のベクターにより形質転換された原核
宿主細胞及び真核宿主細胞も、本発明により提供され
る。例えば、本発明のベクターで形質転換され得る細胞
は、限定されないが、大腸菌（例えば、大腸菌Ｋ１２
株）、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、セ
ラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃ
ｅｓｃｅｎｓ）及びサルモネラ・ティフィムリウム（Ｓ
ａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）等の細
菌細胞、ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）を
含む昆虫細胞（バキュロウィルス）、酵母細胞等のカビ
細胞、植物細胞、並びに、胸腺細胞、チャイニーズ・ハ
ムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）及びＣＯＳ細胞等の哺乳類
細胞を含む。宿主細胞は、記載のベクターにより、種々
の方法（例えば、エレクトロポレーション、塩化カルシ
ウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−
デキストラン又は他の物質を用いるトランスフェクショ
ン；マイクロプロジェクタイル・ボンバードメント（ｍ
ｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎ
ｔ）；リポフェクション、ベクターがレトロウィルスゲ
ノム等の感染性の作因である感染、及びその他の方法）
により、細胞宿主の型に基づいて形質転換され得る。

【００２６】本発明の核酸分子は、例えば、上述のよう
に、好適な宿主細胞における複製により製造することが
できる。他方、核酸分子は化学合成によっても製造でき
る。

【００２７】本発明の抗体また、本発明は、１つのＭａファミリーポリペプチド
（又は、複数のポリペプチド）に結合する単離された抗
体又は抗原結合性断片に関する。例えば、非ヒト抗体及
びヒト抗体、ヒト化された抗体、キメラ抗体及びその抗
原結合性断片を含む、ポリクロナール抗体及びモノクロ
ナール抗体（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉ
ｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ジョン・ウィリー＆サンズ
（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）、ニューヨー
ク、（１９９４）；欧州特許出願第１７３，４９４号、
（モリソン（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ））；国際公開第８６／
０１５３３号（ニューバーガー（Ｎｅｕｂｅｒｇｅ
ｒ）；及び米国特許第５，２２５，５３９号（ウィンタ
ーズ（Ｗｉｎｔｅｒｓ）））は、記載のＭａファミリー
ポリペプチドに結合し、本発明の範囲内である。マウ
ス、ラット、ハムスター又はウサギ等の哺乳類を、免疫
原性の型のＭａファミリーポリペプチド（例えば、タン
パク質又は抗体応答を誘導することができるタンパク質
の抗原性断片を含有するペプチド）で、免疫化すること
ができる。タンパク質又はペプチドに免疫原性を付与す
るための技術には、担体へのコンジュゲーション、又は
その他の当該分野で周知の技術が含まれる。タンパク質
又はポリペプチドは、アジュバントの存在下で投与する
ことができる。免疫化の進行は、プラズマ又は血清の抗
体力価の検出により監視することができる。抗体の量を
評価するために、抗原として免疫原を用い、標準的なＥ
ＬＩＳＡ又は他のイムノアッセイを使用することができ
る。

【００２８】免疫化の後、抗−ペプチド抗血清を得るこ
とができ、所望により、ポリクロナール抗体を血清から
単離することができる。モノクロナール抗体も、当該分
野で周知の標準技術により製造することができる（コー
ラー（Ｋｏｈｌｅｒ）及びミルステイン（Ｍｉｌｓｔｅ
ｉｎ）、Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５−４９７（１９
７５）；コズバール（Ｋｏｚｂａｒ）ら、Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙＴｏｄａｙ４：７２（１９８３）；及びコー
ル（Ｃｏｌｅ）ら、ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓａｎｄＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙ、
アランＲ．リス・インク（ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ，
Ｉｎｃ．）、７７〜９６頁（１９８５））。本明細書で
使用の「抗体」という用語は、Ｆａｂ及びＦ（ａ
ｂ）₂’等の抗体の断片を含むものとする。そのような
抗体は、放射性標識等の標識との組み合わせで、例え
ば、組織試料からの細胞内の発現されたタンパク質の存
在をアッセイするのに使用することができる。そのよう
な抗体も、Ｍａファミリーポリペプチドを単離するため
に、ＥＬＩＳＡ等の免疫吸着方法において使用すること
ができる。アッセイ可能な組織試料には、霊長類、特に
ヒト、組織、例えば、分化又は未分化細胞が含まれる。
例には、脳及び精巣が含まれる。

【００２９】本発明の診断方法ＭａファミリーポリペプチドＭａ１及びＭａ２と、腫瘍
随伴性症候群との関連性により、個体由来の試験試料を
Ｍａファミリーポリペプチド（類）に対する抗体の存在
又は非存在について評価することにより、今では、個体
における腫瘍随伴性症候群の存在又は非存在を診断する
方法が得られる。Ｍａファミリーポリペプチドに対する
抗体の存在は腫瘍随伴性症候群の存在を示し；Ｍａファ
ミリーポリペプチドに対する抗体の非存在は腫瘍随伴性
症候群の非存在を示す。本明細書に使用する「腫瘍随伴
性症候群」という用語は、新生物（癌）の存在に関連す
るが、新生物による神経系への直接浸入によるもの、又
は治療の副作用、感染症、代謝不良及び栄養不良及び脳
血管性障害等の他の合併症によるものでない神経学的障
害をいう。好ましい態様では、Ｍａファミリーポリペプ
チド、Ｍａ１に結合する抗体の存在は、腫瘍随伴性症候
群を示す。他の好ましい態様では、Ｍａファミリーポリ
ペプチド、Ｍａ２に結合する抗体の存在は、腫瘍随伴性
症候群を示す。特に好ましい態様では、Ｍａ２に結合す
る抗体の存在は、腫瘍随伴性症候群、腫瘍随伴性辺縁系
脳炎及び／又は脳幹脳炎、特に、間脳機能不全を伴うこ
とを示す。１種を超えるＭａファミリーポリペプチド
（例えば、Ｍａ１及びＭａ２の両方）に結合する抗体の
存在も、腫瘍随伴性症候群の存在を示す。

【００３０】さらに、個体由来の試験試料をＭａファミ
リーポリペプチド（類）に対する抗体の存在又は非存在
について評価することにより、今では、個体における新
生物の存在又は非存在を診断する方法が得られる。腫瘍
随伴性症候群は、潜伏性の新生物の発見の前に生ずるこ
とが多いため、これらの方法は、神経学的障害を腫瘍随
伴性症候群であると同定することにより、新生物の存在
の同定を容易にする。さらに、Ｍａファミリーポリペプ
チド（類）に対する抗体は、腫瘍随伴性の病状が存在し
ない（すなわち、腫瘍随伴性症候群が存在しない）個体
に存在する（例えば、少ない量で）ことがある；本発明
の方法は、これらの個体においても同様に新生物の存在
の同定を容易にする。Ｍａファミリーポリペプチドに対
する抗体の存在は、腫瘍随伴性症候群の存在を示し、従
って、新生物の存在を示す。好ましい態様において、Ｍ
ａファミリーポリペプチドＭａ１に結合する抗体（例え
ば、抗−Ｍａ抗体）の存在は、新生物の存在を示す。特
に好ましい態様では、新生物は、乳癌、結腸癌、肺癌、
精巣癌、生殖細胞腫又は耳下腺癌である。他の好適な態
様では、ＭａファミリーポリペプチドＭａ２に結合する
抗体（例えば、抗−Ｔａ抗体）の存在は、精巣新生物及
び／又は生殖細胞腫又は胚癌の存在を示す。Ｍａファミ
リーポリペプチドに対する抗体の非存在は、腫瘍随伴性
症候群の非存在を示し、従って、新生物の非存在を示
す。

【００３１】本発明の方法では、腫瘍随伴性症候群の疑
いのある個体などの個体由来の試験試料を使用する。試
験試料は、また、癌の疑いがあるが、腫瘍随伴性症候群
を示さない個体由来のものであり得る。試験試料は、血
液、血清、脳脊髄液、尿、鼻分泌物、唾液、又は他の体
液若しくは体組織を含有し得る。また、試験試料は、個
体由来の体液又は体組織の試料から単離した抗体を含有
し得る。試料が単離された抗体である場合、単離された
抗体には、単一の型の抗体（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、
ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭ抗体）、又はすべての型
の抗体が含まれ得；また、１以上の型の抗体（ＩｇＭ抗
体、ＩｇＧ抗体、又はＩｇＭ及びＩｇＧ抗体）を単離す
ることができる。好ましい態様では、試験試料は、個体
由来の血清試料又は脳脊髄液試料である。

【００３２】１つのＭａファミリーポリペプチドに対し
（又は、１つを超えるＭａファミリーポリペプチドに対
し）結合する抗体の存在又は非存在について、試験試料
を評価する。本発明の１つの態様では、上述の１つ以上
のＭａファミリーポリペプチドを、Ｍａファミリーポリ
ペプチドに対する抗体の存在を検出するのに用いること
ができる。これらの方法では、Ｍａファミリーポリペプ
チド試料を用いる。本明細書で使用する、用語「Ｍａフ
ァミリーポリペプチド試料」とは、Ｍａファミリーポリ
ペプチドあるいはその活性誘導体又は断片を含む試料で
あり得る。Ｍａファミリーポリペプチド試料は、１つを
超えるＭａファミリーポリペプチドあるいは活性誘導体
又は断片も含み得る（例えば、Ｍａ１とＭａ２を含むＭ
ａファミリーポリペプチド試料）。好ましい態様では、
Ｍａファミリーポリペプチド試料は、Ｍａ１及び／又は
Ｍａ２を含有してなる。Ｍａファミリーポリペプチド試
料は、単離されたＭａファミリーポリペプチドの試料で
あり得る；他方、Ｍａファミリーポリペプチド試料は、
Ｍａファミリーポリペプチドを含有してなる試料であり
得る（例えば、ヒト脳若しくはラット脳由来のニューロ
ン組織、又はＭａファミリーポリペプチドを含むことが
知られている他の組織等の組織片、あるいはＭａファミ
リーポリペプチドを含むことが知られている組織のホモ
ジェネート）。

【００３３】Ｍａファミリーポリペプチド試料を個体由
来の試験試料に接触させる。Ｍａファミリーポリペプチ
ド試料と個体由来の試験試料との接触により、「接触試
料」となり、それは、Ｍａファミリーポリペプチド試料
と試験試料の混合物である。もし、Ｍａファミリーポリ
ペプチドに対する抗体が試料中に存在するようであれ
ば、接触試料を、かかる抗体がＭａファミリーポリペプ
チドに結合可能な適切な条件下に維持する。本明細書で
使用する、用語「抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗
体」又は「抗−Ｍａファミリーポリペプチド自己抗体」
とは、上述のＭａファミリーポリペプチドに特異的に結
合する抗体をいう。次いで、抗−Ｍａファミリーポリペ
プチド抗体の存在又は非存在を評価する。

【００３４】本発明の１つの態様では、接触試料中のＭ
ａファミリーポリペプチドに結合した抗−Ｍａファミリ
ーポリペプチド抗体の量を、あるとすれば、基準量と比
較する。本明細書で使用する、用語「基準量」とは、腫
瘍随伴性症候群又は新生物の診断と相互に関連する抗−
Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量をいう。基準量
は、例えば、腫瘍随伴性症候群を患っていることがわか
っている個体由来の接触試料（例えば、「陽性対照試
料」）中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量
と、腫瘍随伴性症候群を患っていないことがわかってい
る個体由来の接触試料（例えば、下記の「陰性対照試
料」）中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量と
を比較し、かつ疾患と相互に関連する抗体の量を決定す
ることにより、決定し得る。基準量は、接触試料中の抗
−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量を決定すると共
に、陽性及び／又は陰性対照試料中の抗−Ｍａファミリ
ーポリペプチド抗体の量を決定することにより決定し得
る；他方、基準量は、歴史的に決定された量であり得る
（即ち、接触試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド
抗体の量を決定する以前に決定された量）。例えば、１
つの態様では、「基準量」は、比較対照試料中の抗−Ｍ
ａファミリーポリペプチド抗体の量より統計的に有意に
多い、試験試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗
体の量であり得る。１つの態様において、比較対照試料
中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量より、２
標準偏差（ｔｗｏｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉ
ｏｎｓ）が高い場合には、試験試料中の抗−Ｍａファミ
リーポリペプチドの量は統計的に有意である。

【００３５】異なる型の抗体の量（即ち、１つを超える
型の抗体の量を含む合計）を、基準量と比較し得る；他
方、１つの特定の型の抗体の量（例えば、ＩｇＡ，Ｉｇ
Ｄ，ＩｇＥ，ＩｇＭ又はＩｇＧ抗体の量）を、基準量と
比較し得る。好ましい態様では、抗体はＩｇＧ抗体であ
る。基準量は、接触試料中で評価された抗体と同じ型の
抗体の量である：例えば、接触試料についての異なる型
の抗体の量の合計（即ち、１つを超える型の抗体を含
む）を、基準量と比較する場合には、それらの型の抗体
の量の合計を、基準量にも使用する。接触試料中の１つ
の特定の型の抗体の量（例えば、ＩｇＭ又はＩｇＧ抗体
の量）を、基準量と比較する場合には、その型の抗体の
量を、基準量にも使用する。

【００３６】１つの態様では、基準量と同じ又は多い量
の存在は、腫瘍随伴性症候群（の存在を示す）の診断と
相互に関連する。同様に、基準量と同じ又は多い量の存
在は、新生物の存在と相互に関連する。基準量より少な
い量は、腫瘍随伴性症候群の非存在（を示す）と相互に
関連する。同様に、基準量より少ない量の存在は、新生
物の非存在と相互に関連する。

【００３７】本発明の他の態様では、接触試料を評価し
て、あるとすれば、Ｍａファミリーポリペプチドと結合
した抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量を決定す
る。該アッセイで、異なる型の抗体（即ち、１つを超え
る型の抗体を含む）の量の合計である量を決定できる；
他方、該アッセイで、１つの特定の型の抗体の量を決定
できる（例えば、ＩｇＡ，ＩｇＤ，ＩｇＥ，ＩｇＭ又は
ＩｇＧ抗体の量）。好ましい態様では、接触試料を評価
し、ＩｇＭ又はＩｇＧ抗体の量を決定する。

【００３８】接触試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプ
チド抗体の量を、少なくとも１つの比較陰性対照試料
（即ち、腫瘍随伴性症候群に悩まされていない個体由来
の試料）中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量
と比較する。陰性対照試料は、腫瘍随伴性症候群に悩ま
されていないいずれかの個体由来の試料であり得る。陰
性対照試料は、疾患のない個体に由来する必要はない：
例えば、陰性対照試料は、癌を患っているが腫瘍随伴性
症候群を患ってはいない個体由来の試料であり得る。
「比較」陰性対照試料は、試験試料と同じ型の体液又は
体組織の試料である；他方、試験試料が、体液又は体組
織の試料から単離された抗体である場合には、比較陰性
対照試料は、同じ型の体液又は体組織から単離された抗
体の試料である。１つを超える対照試料を用い得る。陰
性対照試料のアッセイで、接触試料のアッセイと同じ型
の抗体を決定する：例えば、異なる型の抗体（即ち、１
つを超える型の抗体を含む）の量の合計を、接触試料に
ついて検出する場合には、それらの型の抗体の量の合計
も、陰性対照試料について測定される。アッセイで、接
触試料中の１つの特定の型の抗体（例えば、ＩｇＭ又は
ＩｇＧ抗体の量）の量を測定する場合には、その型の抗
体の量も、陰性対照試料について測定する。好ましい態
様では、１つを超える対照試料を用い得る。

【００３９】固相酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）若しく
は他の固相免疫アッセイ、ラジオイムノアッセイ、比濁
分析法、電気泳動法、免疫蛍光法、ウエスタンブロット
（イムノブロット）又は他の方法（１９９７年までの補
遺を含む、オースベル（Ａｕｓｕｂｅｌ），Ｆ．Ｍ．ら
編，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏ
ｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅ
ｙ＆Ｓｏｎｓ、特にユニット１１．２（ＥＬＩＳ
Ａ）及び１１．１６（特異的抗体力価の測定（Ｄｅｔｅ
ｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＳｐｅｃｉｆｉｃＡｎｔ
ｉｂｏｄｙＴｉｔｅｒ））を参照のこと）を含む、標
準技術を用いる種々の方法により抗体の量又は抗体の存
在若しくは非存在を、決定し得る。好ましい態様では、
力価をＥＬＩＳＡで決定する；他の好ましい態様では、
抗体の量（又は存在若しくは非存在）をウエスタンブロ
ットで決定する。例えば、該量（又は抗体の存在若しく
は非存在）を、Ｍａファミリーポリペプチド試料とし
て、ヒト及び／又はラット脳等のニューロン組織の切片
を用いて決定し得る；該切片を試験試料とインキュベー
トし、次いで、抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の
存在若しくは非存在又は量を、検出用抗体又は間接免疫
蛍光法等による適切な方法により評価し得る。他の例で
は、該量（又は抗体の存在若しくは非存在）を、ホモジ
ェナイズしたニューロン組織を用い、ウエスタンブロッ
トにおいてタンパク質を分離することにより決定し得
る；次いで、ブロットを試験試料とインキュベートし、
次いで、抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の存在若
しくは非存在又は量を、検出用抗体又は間接免疫蛍光法
等による適切な方法により評価し得る。適切な重量にお
ける（例えば、Ｍａファミリーポリペプチドの分子量に
おける）タンパク質バンドの存在は、抗−Ｍａファミリ
ーポリペプチド抗体の存在を示す。特に好ましい態様で
は、Ｍａファミリーポリペプチドは、固体支持体に付着
する。典型的には、Ｍａファミリーポリペプチド試料に
結合する抗体の量を、抗−Ｍａファミリーポリペプチド
抗体に結合する検出用抗体を用いて測定し得る。

【００４０】比較対照試料中の抗−Ｍａファミリーポリ
ペプチド抗体の量より有意に多い、試験試料中の抗−Ｍ
ａファミリーポリペプチド抗体の量の存在は、腫瘍随伴
性症候群の存在と相互に関連する。比較対照試料中の抗
−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量より有意に多く
ない、試験試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗
体の量の存在は、腫瘍随伴性症候群の非存在と相互に関
連する。例えば、免疫組織化学を用いる場合、対照試料
中よりも１：５００に希釈した患者の血清中により大き
な反応性が存在することは、腫瘍随伴性症候群の診断と
相互に関連する；１：５００に希釈した患者の血清中に
明確な反応性が存在しないということは、腫瘍随伴性症
候群の非存在を示す。他の態様では、ウエスタンブロッ
トを用いる場合、対照試料中よりも１：１０００に希釈
した患者の血清中により大きな反応性が存在すること
は、腫瘍随伴性症候群の診断と相互に関連する；１：１
０００に希釈した患者の血清中に明確な反応性が存在し
ないということは、腫瘍随伴性症候群の非存在と相互に
関連する。同様に、比較対照試料中の抗−Ｍａファミリ
ーポリペプチド抗体の量より有意に多い、試験試料中の
抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量の存在は、新
生物の存在と相互に関連する。比較対照試料中の抗−Ｍ
ａファミリーポリペプチド抗体の量より有意に多くな
い、試験試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体
の量の存在は、新生物の非存在と相互に関連する。

【００４１】本発明は、本発明の方法において用いられ
るキットも含む。キットは、以下の成分を含み得る：
（１）Ｍａファミリーポリペプチド試料；及び、任意
に、（２）抗体、好ましくは抗−Ｍａファミリーポリペ
プチド抗体に結合する標識された検出用抗体。検出用抗
体は、酵素、放射性分子又は蛍光試薬等の検出可能試薬
に結合した抗体を含有してなり得る。検出用抗体を、ホ
ースラディッシュペルオキシダーゼ等の、添加基質と反
応し着色産物を生ずる酵素に結合する場合には、キット
は基質も含み得る。キット中のＭａファミリーポリペプ
チド試料は、固体支持体に接着され得る。

【００４２】以下の実施例は、本発明を説明する目的で
挙げられ、本発明の範囲を限定するものではない。本明
細書で引用する全ての参照文献の教示は、参照により、
本明細書中に取り込まれる。

【００４３】

【実施例】実施例１腫瘍随伴性神経学的障害の患者の
血清により認識されるニューロン及び精巣特異的タンパ
ク質Ｍａ１の同定腫瘍随伴性症候群が疑われる患者の血清を抗ニューロン
抗体について試験した。新規抗ニューロン抗体（抗−Ｍ
ａと呼ぶ）が、腫瘍随伴性神経学的症候群の４名の患者
の血清中で同定された。ラット並びに正常なヒト組織及
び腫瘍中の標的抗原の発現の同定、並びに抗−Ｍａ血清
により認識される新規ニューロン及び精巣特異的タンパ
ク質Ｍａ１のクローニングを下記のようにして行った。

【００４４】Ａ．材料及び方法患者、血清及び組織腫瘍随伴性抗ニューロン抗体についてスクリーニングす
るために送られた１，７０５例の患者由来の血清（又は
入手可能な場合は脳脊髄液）を研究に用いた。これら血
清を採取した時点において、９８４例の患者が癌と診断
された。対照として用いた血清は、５２例の正常個体由
来の血清；十分に特徴的な腫瘍随伴性症候群の９６例の
患者由来の血清（４４例は抗−Ｈｕ関連脳脊髄炎及び感
覚神経障害（ｎｅｕｒｏｎｏｐａｔｈｙ）；１７例は抗
−Ｙｏ関連小脳変性；１１例はＰ／Ｑ型の電位依存カル
シウム−チャンネル抗体［ＶＧＣＣ］を伴うランバート
−イートン筋無力症候群；２例は抗−Ｒｉ関連小脳運動
失調及び眼球クローヌス；６例は抗−Ｔｒ関連小脳機能
不全；５例は胸腺腫に関連する重症筋無力症；及び１１
例は神経芽腫に関連する眼球クローヌス）；腫瘍随伴性
神経学的症候群はないが癌（４４例の精巣、１０例の結
腸、１０例の卵巣、４０例の肺、２２例の胸部、２０例
の脳腫瘍及び３３例の神経芽腫）のある１７９例の患者
由来の血清；癌のない筋萎縮側索硬化症の６例の患者由
来の血清；並びに胸腺腫のない重症筋無力症の４例の患
者由来の血清を含んだ。

【００４５】血清は−７０℃で凍結して保存した。ヒト
神経系及び全身の組織を、神経学的に正常な個体の剖検
又は生検研究から得た。腫瘍随伴性症候群のない患者由
来の５３例の癌組織（１５例の結腸、５例の胸部、５例
の膀胱、３例の耳下腺、５例の神経芽腫、５例の非小細
胞肺癌及び１５例の精巣生殖細胞腫）及び腫瘍随伴性障
害に関連する抗体を有する患者由来の１３例の癌組織
（４例の卵巣、４例の肺、２例の子宮、１例の膀胱、１
例の咽頭及び１例の軟骨肉腫）は、メモリアル・スロー
ン−ケターリング・キャンサー・センター（Ｍｅｍｏｒ
ｉａｌＳｌｏａｎ−ＫｅｔｔｅｒｉｎｇＣａｎｃｅ
ｒＣｅｎｔｅｒ）のチューモア・プロキュアメント・
サービス（ＴｕｍｏｒＰｒｏｃｕｒｅｍｅｎｔＳｅ
ｒｖｉｃｅ）により提供された。

【００４６】ウイスターラットを麻酔し、生理的食塩水
で灌流した後、脳及び他の組織を取り出した。ヒト及び
ラットの組織の試料は−７０℃で保存した；同じ組織由
来の他の試料を、オプティマル・カッティング・テンペ
ラチャー（ＯｐｔｉｍａｌＣｕｔｔｉｎｇＴｅｍｐｅ
ｒａｔｕｒｅ）媒体（ＯＣＴ、マイルズ・インク（Ｍｉ
ｌｅｓＩｎｃ）、米国）に包埋し、液体窒素により冷
却したイソペンタン中で凍結した。

【００４７】ヒト腫瘍の研究及び免疫組織化学的競合ア
ッセイのため、患者の血清由来のＩｇＧをプロテイン−
Ｇセファロースカラム（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、セント
スイス、ミズーリ州）を用いて単離した後、ビオチンで
標識した（ファーノー（Ｆｕｒｎｅａｕｘ），Ｈ．Ｍ．
ら，ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２２：１８４４
−１８５１頁（１９９０））。

【００４８】ウエスタンブロット分析のため、ヒト組織
を、０．１％ＮｏｎｉｄｅｔＰ−４０並びにプロテアー
ゼ阻害剤：ＰＭＳＦ（５０μｇ／ｍｌ）、アプロチニン
（１μｇ／ｍｌ）、ペプスタチン（１μｇ／ｍｌ）、及
びロイペプチン（１μｇ／ｍｌ）（全てシグマ（Ｓｉｇ
ｍａ）製）中でホモジェナイズした。

【００４９】免疫組織化学ラット及びヒトの脳及び小脳の７ミクロン厚の凍結切片
を、ホルマリン、１００％メタノール又は冷アセトン
（４℃）中で固定し、続いて、リン酸緩衝生理的食塩水
（ＰＢＳ）中の０．３％過酸化水素と共に１０分間、１
０％正常ヤギ血清と共に２０分間、１：５００に希釈し
た患者の血清と共に２時間、１：２，０００に希釈した
ビオチニル化ヤギ抗−ヒトＩｇＧ（ベクター（Ｖｅｃｔ
ｏｒ）、バーリンガム（Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ）、カリ
フォルニア州）と共に３０分間、並びにアビジンビオチ
ンペルオキシダーゼ複合体（ベクター（Ｖｅｃｔｏ
ｒ））と共に３０分間、インキュベートした。ＰＢＳ中
の０．０１％過酸化水素及び０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ−
１００と共に０．０５％ジアミノベンジジン四塩酸塩
（シグマ（Ｓｉｇｍａ））で、反応を顕現させた。患者
の血清及び二次抗体をＰＢＳ中の１０％正常ヤギ血清に
て希釈した。各工程間に、スライドをＰＢＳで洗浄し
た。

【００５０】内因性ＩｇＧとの反応性を排除するため、
全身のヒト組織及び腫瘍に関する全ての免疫組織化学的
研究に、患者血清から単離した、ビオチニル化ＩｇＧを
使用した。１０％正常ヒト血清との切片（ｓｅｃｔｉｏ
ｎ）のプレインキュベーションを用いて非特異的ＩｇＧ
結合をブロックしたことを除き、全工程を前記のように
して行い、二次抗体は用いなかった。

【００５１】競合アッセイのため、組織切片を患者の１
例の血清（１：５に希釈）と共に１時間プレインキュベ
ートした後、別の患者の血清（１：２５に希釈）から単
離したビオチニル化ＩｇＧと共にインキュベートした。
正常ヒト血清、又は対照としての他の抗ニューロン抗体
（１：５に希釈）を有する患者由来の血清と共に組織を
プレインキュベートした。一方の患者のビオチニル化Ｉ
ｇＧの反応性が、別の患者由来の血清との組織のプレイ
ンキュベーションにより排除された場合、血清は、同じ
エピトープに対して競合するとみなした。

【００５２】小脳ｃＤＮＡ発現ライブラリーのスクリー
ニング λＺＡＰヒト小脳ライブラリー（ストラタジーン（Ｓｔ
ｒａｔａｇｅｎｅ）、ラホラ（ＬａＪｏｌｌａ）、カ
リフォルニア州）を、５×１０⁴ｐｆｕ／１５０ｍｍプ
レートの密度で、スクリーニングした。４２℃で３時間
インキュベートした後、プレートに、１０ｍｍｏｌ／Ｌ
のイソプロピルβ−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰ
ＴＧ）に浸したフィルターを重層し、３７℃で４時間イ
ンキュベートした。次いで、プレートを４℃で２０分間
冷却し、フィルターを取り除き、１％ウシ血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）により４℃で１２時間ブロックし、腫瘍随
伴性脳幹及び小脳機能不全を伴う患者由来の血清（１：
１，０００に希釈）とともに３時間インキュベートし
た。Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄した後、フィルターをＩ
¹²⁵プロテインＡ（０．１μＣｉ／ｍＬ）とともに１時
間インキュベートし、洗浄、乾燥して、ＸＡＲ５フィル
ムに−７０℃で２４時間曝露した。陽性の結果を与える
クローンを、収量１００％で陽性のプラークが得られる
まで抗体スクリーニングを数回行うことにより精製し
た。ファージクローンを、インビボ・エキサイション・
ファージ・レスキュー・プロトコル（ｅｘｃｉｓｉｏｎ
ｐｈａｇｅｒｅｓｃｕｒｅｐｒｏｔｏｃｏｌ）（ス
トラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ））を用い、ｐＢ
ｌｕｅｓｃｒｉｐｔでサブクローニングした。

【００５３】ＤＮＡシークエンシング配列分析を、自動ＤＮＡシークエンサー（ＡＢＩ３７
７）により、ダイターミネーター蛍光法（リー（Ｌｅ
ｅ），Ｌ．Ｇ．ら、Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．２
０：２４７１−２４８３（１９９２））を用いて行っ
た。二本鎖ＤＮＡを、キアゲンプラスミドミディ−プレ
ップシステム（キアゲン（Ｑｉａｇｅｎ）、サンタクラ
リタ、カリフォルニア州）を用いて精製し、両鎖につい
てシークエンシングした。ＳＫ及びＫＳプライマーに加
えて内部オリゴヌクレオチドプライマーを使用した。

【００５４】ウエスタンブロット分析融合タンパク質及び大腸菌タンパク質抽出物を、個々の
コロニーを光学濃度０．６まで増殖させ、１０ｍｍｏｌ
／ＬＩＰＴＧにより３７℃で３時間誘導することによ
り得た。細胞を、遠心分離により単離し、ＰＢＳ中０．
１％ＮＰ−４０及び２％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤ
Ｓ）に再懸濁させることにより溶解した。

【００５５】融合タンパク質のライセート、又はヒト及
びラットの組織から抽出したタンパク質を、１０％ＳＤ
Ｓ−アクリルアミドゲル電気泳動により分離し、ニトロ
セルロースに移した（トウビン（Ｔｏｗｂｉｎ），Ｈ．
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
７６：４３５０−４（１９７９））。５％乾燥Ｃａｒｎ
ａｔｉｏｎ（登録商標）ミルクでブロックした後、ニト
ロセルロースストリップを、患者の血清（１：１，００
０に希釈）とともに２時間、及び１：２０，０００に希
釈したヒツジ抗−ヒトホースラディッシュペルオキシダ
ーゼ標識ＩｇＧ（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）、ア
ーリントンハイト、イリノイ州）とともに１時間、順次
インキュベートした。次いで、ストリップを、強化化学
発光溶液（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）、アーリン
トン、イリノイ州）に１分間浸漬し、コダックＸＡＲ
５フィルム（シグマ（Ｓｉｇｍａ）社）に曝露した。工
程間では、ストリップをＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ
−２０で洗浄した。すべてのインキュベーションは、室
温（ＲＴ）で行なった。

【００５６】ノーザンブロット分析配列特異的オリゴヌクレオチドプローブを、Ｔ４ポリヌ
クレオチドキナーゼを用いて、［γ−³²Ｐ］ＡＴＰで末
端標識した。Ｍａ１用プローブとして、以下のオリゴヌ
クレオチド：５’−ＧＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＧ
ＧＧ−３’（配列番号：１；ｃＤＮＡ塩基対（６４７〜
６３０）、及びβ−アクチン用プローブとして、以下の
オリゴヌクレオチド：５’−ＧＴＣＴＴＴＧＣＧＧＡＴ
ＧＴＣＣＡＣＧ−３’（配列番号：２）を使用した。標
識したプローブを、フェノールクロロホルムで抽出し、
Ｇ−２５セファデックスカラムで精製した。プローブ
（１×１０⁷ｃｐｍ／ｍＬ）を「ヒューマン・マルチプ
ル・ティシュ・ノーザンブロッツＩアンドＩＩ（“Ｈｕ
ｍａｎＭｕｌｔｉｐｌｅＴｉｓｓｕｅＮｏｒｔｈ
ｅｒｎＢｌｏｔｓＩａｎｄＩＩ”）」（クロー
ンテック（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ）、パロアルト、カリフ
ォルニア州）に、一晩、４２℃で、ＲａｐｉｄＨｙｂ緩
衝液（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））中で、ハイブ
リダイズさせた。ブロットを、ＲＴで５×ＳＳＣ（２０
×＝ＮａＣｌ３Ｍ及びクエン酸Ｎａ ₃塩０．３Ｍ、ｐ
Ｈ７．０）、０．１％ＳＤＳ中で；４２℃で１×ＳＳ
Ｃ、０．１％ＳＤＳ中で；及び４２℃で０．１×ＳＳ
Ｃ、０．１％ＳＤＳ中で、１５分間洗浄した。Ｍａ１プ
ローブとのハイブリダイゼーション後、ブロットを０．
５％ＳＤＳ中で１０分間煮沸することによりストリッピ
ングし、β−アクチンプローブとハイブリダイズさせ
た。可視化のため、ブロットをＸＡＲフィルムに−８０
℃で７２時間曝露した。

【００５７】Ｂ．結果臨床的及び病理学的所見１７０５例の血清の研究の結果、抗−Ｍａと称する新規
な抗ニューロン抗体を保有する患者４例が確認された。
これらの患者の臨床的情報を表１にまとめる。

【００５８】０．１％ＳＤＳ。Ｍａ１プローブとのハイ
ブリダイゼーション後、ブロットを０．５％ＳＤＳ中で
１０分間煮沸することによりストリッピングし、β−ア
クチンプローブとハイブリダイズさせた。可視化のた
め、ブロットをＸＡＲフィルムに−８０℃で７２時間曝
露した。

【００５９】Ｂ．結果臨床的及び病理学的所見１７０５例の血清の研究の結果、抗−Ｍａと称する新規
な抗ニューロン抗体を保有する患者４例が確認された。
これらの患者の臨床的情報を表１にまとめる。

【００６０】

【表１】

【００６１】神経学的症状は、３例の患者において腫瘍
の診断に先行し、１例の患者において、６年前に診断さ
れた乳癌の再発に先行した。３例の患者は、小脳及び／
又は脳幹併発の症状を有し；その関連する癌は、乳、耳
下腺及び結腸であった。中度の嚥下困難、近位虚弱（ｐ
ｒｏｘｉｍａｌｗｅａｋｎｅｓｓ）及び１年間の性的
不能の病歴をもつ別の患者は、右気管支の大細胞癌腫の
縦隔鏡検査及び生検を受けた；麻酔後、彼は呼吸筋衰弱
を示した。ランバート−イートン筋無力症候群に対する
神経生理学的検査及び血清学的試験（Ｐ／Ｑ型電位依存
カルシウムチャネル抗体）は陰性であった。この患者は
追跡できず、この患者が他の神経学的症状を示したかは
わからない。

【００６２】臨床的情報が得られた患者３例のうち、２
例は免疫調節治療を受けた（静脈内免疫グロブリン、プ
ロテインＡカラム免疫吸収（ｉｍｍｕｎｏａｂｓｏｒｐ
ｔｉｏｎ）、血漿交換）が、いずれも神経学的欠損は改
善しなかった。１例の患者は生存、２例は、一方が多数
の全身性問題（腹膜癌種症、敗血症、凝血異常）、他方
が進行性脳幹機能不全で死亡した。

【００６３】剖検では、１例の患者は乳癌が広範囲の全
身性転移及び小結節性硬変を有した。神経系（脊髄は検
査せず）において転移は何も同定されなかった。小脳に
はプルキンエ細胞はほとんど全くなく、ベルグマン神経
膠症に関連し、小脳白質深部に中度の炎症性浸潤物があ
った。神経炎プラークが、皮質（主に、後頭葉に）に確
認されたが、他の異常は大脳皮質、小脳扁桃及び脳幹に
おいてみられなかった。この患者は、アルツハイマー病
を示す病歴はなかった。

【００６４】他の患者の剖検は脳に留め、臨床的に検出
されない全身性転移の可能性を除外することはできなか
った。中脳の蓋領域及び被蓋領域、橋被蓋並びに髄は、
広範囲の血管周囲及び腸に、小グリア小節を伴う炎症性
浸潤物を示した。重度のニューロン減少及び神経膠症
が、下位オリーブ核及び周囲の組織において見られた。
また、プルキンエ細胞及び歯状核のニューロンの病巣減
少もあり、ベルグマン神経膠症を伴った。炎症性浸潤物
が、小脳白質深部に見られた。やや中度の血管周囲及び
腸のリンパ球性浸潤物が、視床下部及び無名質において
観察された。

【００６５】両患者において、Ｂ（ＣＤ２０）細胞、Ｔ
（ＣＤ３）細胞及びＴ細胞の亜群（ＣＤ４及びＣＤ８）
に対するマーカーによる、炎症性浸潤物の免疫組織化学
的分析により、細胞のほとんど（＞９０％）がＴリンパ
球、主に、ＣＤ８＋（Ｔ細胞の＞７５％）であることが
示された。

【００６６】研究所所見抗−Ｍａ抗体は、正常な脳及び精巣と特異的に反応する上記４例の患者の血清は、交感神経及び背根神経節を含
む中枢及び抹消神経系のすべてのニューロン、並びに腸
節神経叢と特徴的なパターンで反応した。抗−Ｍａ抗体
は、主に、ニューロンの亜核成分（ｓｕｂｎｕｃｌｅａ
ｒｅｌｅｍｅｎｔ）（核及び核小体）内で、低い程度
で細胞質内で反応した。非ニューロン細胞は反応しなか
った。反応性は、ホルマリン、メタノール又はアセトン
固定により影響されなかったが、パラフィン包埋組織に
おけるよりも凍結組織において、より良好に保存され
た。凍結ラット組織において、ニューロン核は、反応性
の斑点状のパターンを示し、多くのニューロンにおい
て、それは、核小体に限られているようであった；これ
に対して、細胞質は、中程度で散在的だが、粒状ではな
いパターンで反応した。凍結ヒト組織及びパラフィン包
埋ヒト組織では、反応性は、ニューロンの核小体により
集中しているようであり、細胞質の中度の標識もあっ
た。肺、肝臓、腎臓、脾臓、甲状腺、膵臓、小腸、結
腸、心臓、骨格筋及び卵巣を含む、ヒト及びラットの全
身の組織は、抗−ＭａＩｇＧと反応しなかったが、精
巣生殖細胞、特に、精母細胞及び初期精子細胞は反応し
た。ラットの精巣では、精細管の生殖細胞に選択的に関
連する斑点状の染色があったが、間質におけるライジッ
ヒ細胞の標識は何も観察されなかった。ヒト精巣生殖細
胞における抗−Ｍａ標識は、核反応性の数個の斑点に留
まり、核及び細胞質のやや中程度で散在的な染色を伴っ
た。

【００６７】同じ全身の組織、脳ホモジェネート及び精
製したニューロン（皮質性ニューロン及びプルキンエ細
胞）からのタンパク質抽出物のイムノブロットにおい
て、４つの抗−Ｍａ血清が、精製したニューロン並びに
脳及び精巣のホモジェネートのみにおいて発現したタン
パク質と反応した。脳において、反応性の２つの別個の
バンドが、３７及び４０ｋＤａに確認された。精巣で
は、３７ｋＤａのタンパク質のみが見つかった。３３７
例の対照血清のいずれも、上記の免疫組織化学的及びウ
エスタンブロット反応性を示さなかった。

【００６８】抗−Ｍａ抗体は腫瘍随伴性腫瘍を特異的に
認識するパラフィン包埋腫瘍組織を、抗−Ｍａ抗体を有する４例
の患者のうち３例から得た。組織の脱パラフィン及び抗
原取り出しの後（カットレッティ（Ｃａｔｔｏｒｅｔｔ
ｉ），Ｇ．ら、Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１７１：８３〜９８
頁（１９９３））、すべての３腫瘍（胸の腺癌、結腸の
腺癌及び耳下腺癌）が、抗−ＭａＩｇＧ抗体により同
定された抗原を発現するが、ニューロンとは対照的に、
反応性は細胞質に集中することがわかった。抗−Ｍａ抗
体は、腫瘍細胞の細胞質と反応した；正常なヒトＩｇＧ
抗体では、反応性は何も同定されなかった。

【００６９】また、Ｍａ抗原の発現を、腫瘍随伴性症候
群のない患者由来の５３例の腫瘍及び他の抗体関連腫瘍
随伴性症候群の患者由来の１３例の腫瘍を含む凍結又は
パラフィン包埋腫瘍において検査した：いずれも抗−Ｍ
ａ抗体と反応しなかった。

【００７０】初期の免疫組織学的所見を、２例の異なる
患者由来のビオチニル化抗−ＭａＩｇＧを用いて再現
し、さらに、任意の抗−Ｍａ血清との組織のプレインキ
ュベーションが別の抗−Ｍａ患者由来のビオチニル化Ｉ
ｇＧの反応性を排除する競合アッセイにより確認した。

【００７１】Ｃ．Ｍａ１抗原のクローニング及び特性評
価Ｍａ１抗原のクローニング λＺＡＰヒト小脳ライブラリーのスクリーニングは、３
種の組換えバクテリオファージクローンの単離をもたら
した。いずれも、正常ヒト血清とは反応しなかった。フ
ァージクローンを、ファージエキサイションプロトコル
（ｐｈａｇｅｅｘｃｉｓｉｏｎｐｒｏｔｏｃｏｌ）を
用い、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔにサブクローニングし
た。得られた細菌性ｃＤＮＡプラスミドは、２１３９ｂ
ｐの挿入物を含み、配列分析により、すべてのクローン
が同一の挿入物を有することが示された。クローン８−
３Ａ１由来のプラスミドｐ８Ａを用い、さらなる研究を
行った。

【００７２】ｃＤＮＡ配列（配列番号：３、図１に示
す）により、１つのコドンから分離した２つの推定開始
ＡＵＧコドンを伴うオープン・リーディング・フレーム
（ＯＲＦ）が明らかになった。ヌクレオチド２７２のこ
れらの第１のものは、コザックコンセンサスルール（Ｋ
ｏｚａｋｃｏｎｓｅｎｓｕｓｒｕｌｅ）（コザック
（Ｋｏｚａｋ），Ｍ．、Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅ
ｓ．１５：８１２５−８１４８（１９８７））に最も厳
密にあてはまるので、翻訳開始コドンであるようであ
る。ＯＲＦは、ヌクレオチド１２５８の第１イン−フレ
ーム終始コドンまで伸び、３３０個のアミノ酸（配列番
号：４、図１）の、推定分子量３６．８ｋＤａのタンパ
ク質をコードする。我々は、この遺伝子産物をＭａ１と
呼んだ。ＯＲＦに加えて、ｃＤＮＡクローンは、５’非
コード配列及び３’ポリアデニル化シグナル（ジーンバ
ンク（ＧｅｎＢａｎｋ）ＡＦ０３７３６４、図１に配列
番号：３として示す）を含む。ＥＭＢＬ／ジーンバンク
（ＧｅｎＢａｎｋ）データベースの調査により、Ｍａ１
ｃＤＮＡヌクレオチド２７２〜５４６が、ヒトＣｐＧ
島ＤＮＡゲノム断片（ジーンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）
ＨＳ１９Ａ６Ｒ）と９７％同一性を有すること（クロス
（Ｃｒｏｓｓ），Ｓ．Ｈ．ら、ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅ
ｔ．６：２３６−２４４（１９９４））、及びヌクレオ
チド７９４〜１２３０が、ヒト結腸癌腫細胞株（ジーン
バンク（ＧｅｎＢａｎｋ）ＡＡ３１４００９）（アダム
ス（Ａｄａｍｓ），Ｍ．Ｄ．ら、Ｎａｔｕｒｅ３７
７：３−１７４（１９９５））及び乳児脳（ジーンバン
ク（ＧｅｎＢａｎｋ）ＨＯ６３４１）由来のｃＤＮＡク
ローンと９８％相同性を有することが明らかになった。
これらのクローンは、ＣｐＧ島に対するスクリーニング
の間に誘導され、配列タグを発現した；さらなる特性は
公表されていない。タンパク質の部分配列モチーフに対
するいくつかのデータベースの調査により、Ｍａ１タン
パク質が数種の潜在的なカゼインキナーゼＩＩ及びプロ
テインキナーゼＣホスホリル化部位を含むが、他の容易
に同定可能なドメインは何も含まないことが明らかにな
った。

【００７３】腫瘍随伴性症候群の患者由来の血清はＭａ
１融合タンパク質を認識するＭａ１融合タンパク質のイムノブロットを用い、抗−Ｍ
ａ関連腫瘍随伴性症候群の患者４例すべての血清は、約
３７ｋＤａのバンドと反応した。シャム（ｓｈａｍ）タ
ンパク質（挿入物なしの親プラスミドを有する大腸菌の
抽出物）とでは、反応性は何も観察されなかった。３３
７例の対照血清（癌であるが、腫瘍随伴性神経学的症状
［乳、結腸、肺又は精巣生殖細胞の癌］はない患者、及
び腫瘍随伴性神経学的症状のある患者［抗−Ｈｕ関連、
抗−Ｙｏ関連］）は、いずれもＭａ１と反応しなかっ
た。

【００７４】Ｍａ１に対する抗体が、脳及び精巣と反応
する同じ抗体に対応するか否かを決定するために、これ
らの組織の切片及び脳のイムノブロットを、Ｍａ１融合
タンパク質又はシャムタンパク質と予備吸収（ｐｒｅａ
ｂｓｏｒｂｅｄ）させた抗−Ｍａ１血清とともにインキ
ュベートした。シャムタンパク質とではなく、Ｍａ１タ
ンパク質との免疫吸収では、精巣との反応性のすべて、
及び脳との反応性の８０％を排除した（ほんのわずかの
点状の反応性の粒子が、ニューロンの核において陽性の
ままであった）。さらに、Ｍａ１と予備吸収させた血清
は、３７ｋＤａニューロンタンパク質とはもはや反応し
なかったが、４０ｋＤａバンドとは反応性を維持し、こ
れは、３７ｋＤａタンパク質はクローン化Ｍａ１に対応
することを示す。

【００７５】ヒト組織におけるＭａ１ｍＲＮＡの発現Ｍａ１特異的オリゴヌクレオチドプローブの、多数のヒ
ト組織由来のｍＲＮＡのノーザンブロットへのハイブリ
ダイゼーションにより、Ｍａ１ｍＲＮＡが脳及び精巣
により発現されるが、胎盤、肺、肝臓、脾臓、胸腺、前
立腺、卵巣、小腸、結腸又は抹消血白血球では発現され
ないことが示された。ブロットにより、脳及び精巣の両
方において、約２．６キロベースの単一のバンドが明ら
かになった。心臓、骨格筋、腎臓及び膵臓において観察
されたかすかなシグナルは、非常に少ない量のＭａ１
ｍＲＮＡ発現、又は、これらの臓器に含まれる神経組織
の痕跡を示す可能性がある。免疫組織化学的アッセイ及
びイムノブロットアッセイ（上記参照のこと）では、こ
れらの組織は抗−Ｍａ血清と反応せず、これは、Ｍａ１
タンパク質発現がないことを示した。

【００７６】実施例２精巣腫瘍並びに腫瘍随伴性辺縁
系及び脳幹脳炎の患者由来の血清抗体を用いた癌−脳抗原の同定Ａ．材料及び方法血清及び組織抗ニューロン抗体試験のために我々のもとに送られてき
た、組織学的に癌であると証明された患者９８６例の血
清（又は、入手可能な場合はＣＳＦ）を、本研究に使用
した。全部で３０４例の血清を対照として使用した；こ
れらの対照は、癌及び腫瘍随伴性症候群（４５例のＰＬ
Ｅ及び精巣癌以外の腫瘍［１３抗−Ｈｕポジティブ］；
２３例の抗−Ｈｕポジティブ脳脊髄炎−感覚神経障害；
２０例の抗Ｙｏ−関連小脳変性；５例のランバート−イ
ートン筋無力症候群、すべてＰ／Ｑ型ＶＧＣＣ抗体に対
してポジティブ；６例の抗−Ｒｉ関連小脳性運動失調症
及び眼球クローヌス；並びに９例の重症筋無力症及び胸
腺腫）を伴う患者、癌であるが腫瘍随伴性症候群でない
患者（４４例の精巣癌；１０例の結腸癌；１０例の卵巣
癌；２１例の乳癌）、及び種々の障害（４１例の多発性
硬化症；３５例の全身性紅斑性狼瘡）を伴う患者並びに
２４例の正常個体を含んだ。すべての血清は、−７０℃
で凍結して保存した。

【００７７】腫瘍組織は、委託の医師及びメモリアル・
スローン−ケターリング・キャンサー・センター（Ｍｅ
ｍｏｒｉａｌＳｌｏａｎ−ＫｅｔｔｅｒｉｎｇＣａ
ｎｃｅｒＣｅｎｔｅｒ）のチューモア・プロキュアメ
ント・サービス（ＴｕｍｏｒＰｒｏｃｕｒｅｍｅｎｔ
Ｓｅｒｖｉｃｅ）により提供された。それらは、ＰＬＥ
−ＢＥの患者由来の４例の精巣腫瘍；腫瘍随伴性症候群
でない患者由来の４５例（２５例の精巣生殖細胞腫、５
例の結腸、４例の乳、３例の肺、２例の耳下腺及び６例
のＳＣＬＣ）、及び他の腫瘍随伴性症候群の患者由来の
８例（４例のＳＣＬＣ、３例の卵巣、１例の膀胱）を含
んだ。正常ヒト組織及びウィスター（Ｗｉｓｔａｒ）ラ
ットの組織を、報告されたようにして入手し（ダルマウ
（Ｄａｌｍａｕ），Ｊ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．
１４１：８８１−６（１９９２））、−７０℃に保存し
た。同じ組織由来の他の試料は、「オプティマル・カッ
ティング・テンペラチャー（ＯｐｔｉｍａｌＣｕｔｔ
ｉｎｇＴｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）」媒体（ＯＣＴ、マ
イルズ・インク（ＭｉｌｅｓＩｎｃ．）、米国）に包
埋し、液体窒素で冷却したイソペンタン中にスナップ凍
結（ｓｎａｐｆｒｏｚｅｎ）した。

【００７８】ウエスタンブロット分析のために、報告さ
れたようにして、組織を０．１％ＮｏｎｉｄｅｔＰ−
４０及びプロテアーゼ阻害剤中でホモジェナイズした
（ダルマウ（Ｄａｌｍａｕ），Ｊ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａ
ｔｈｏｌ．１４１：８８１−６（１９９２））。

【００７９】免疫組織化学ラット及びヒトの組織の７ミクロン厚の凍結切片を、１
０％ホルマリン、１００％メタノール又は冷アセトン
（４℃）で固定し、既報の免疫組織学的方法（ダルマウ
（Ｄａｌｍａｕ），Ｊ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．
１４１：８８１−６（１９９２）を用いて、患者の血
清、ＩｇＧ又はＣＳＦとともにインキュベートした。

【００８０】内在性ＩｇＧとの反応性を排除するため、
ヒト組織を用いた全ての免疫組織学的研究では、患者の
血清から精製し、ビオチンで標識したＩｇＧを用いた。
同じＩｇＧを、免疫競合アッセイに使用した：組織の一
方の血清とのプレインキュベーションが、他方の血清の
ＩｇＧの反応性を排除した場合、２つの血清は同じエピ
トープに対して競合するとみなした。

【００８１】Ｔａ抗体の鞘内合成Ｔａ抗体の鞘内合成を、シュラー式（Ｓｃｈｕｅｌｌｅ
ｒ’ｓｆｏｒｍｕｌａ）（シュラー（Ｓｃｈｕｕｌｅ
ｒ），Ｅ．、ＴｒｅｎｄｓｉｎＮｅｕｒｏｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ（マロス（Ｍａｒｒｏｓｕ），Ｍ．Ｇ．、
シアンチェッティ（Ｃｉａｎｃｈｅｔｔｉ），Ｃ．及び
タボラト（Ｔａｂｏｌａｔｏ），Ｂ．編）、プレナム・
プレス（ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ）、ニューヨーク、
１９９０、３〜１２頁）により計算した。鞘内抗体特異
活性（ＡＳＡ）／血清ＡＳＡの比率＞２を鞘内合成陽性
とみなした。

【００８２】Ｍａ２ｃＤＮＡのクローニング、単離及
び配列分析腫瘍随伴性脳幹機能不全の患者の血清を用い、λＺＡＰ
ヒト小脳ライブラリー（ストラタジーン（Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ）、ラホラ（ＬａＪｏｌｌａ）、カリフォル
ニア州）を、５×１０４ｐｆｕ／１５０ｍｍプレートの
密度でスクリーニングした。４２℃での４時間の培養
後、プラークに、１０ｍＭイソプロピルｂ−Ｄ−チオガ
ラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）に浸したニトロセルロー
スフィルターを重層し、３７℃で１２時間インキュベー
トした。フィルターを取り除き、リン酸緩衝生理的食塩
水（ＰＢＳ）中１％ウシ血清アルブミンでブロックし、
患者の血清（１：１０００に希釈）とともに室温で２時
間インキュベートした。ポジティブファージコロニーを
同定し、抗体スクリーニングを数回行うことにより精製
した後、インビボ・エキサイション・ファージ・レスキ
ュー・プロトコル（ｉｎｖｉｖｏｅｘｃｉｓｉｏｎ
ｐｈａｇｅｒｅｓｃｕｅｐｒｏｔｏｃｏｌ）（ス
トラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ））を用い、ｐＢ
ｌｕｅｓｃｒｉｐｔでサブクローニングした。

【００８３】二本鎖Ｍａ２ｃＤＮＡを、キアゲン・プ
ラスミド・ミディ−プレップ・システム（Ｑｉａｇｅｎ
ｐｌａｓｍｉｄｍｉｄｉ−ｐｒｅｐｓｙｓｔｅ
ｍ）（キアゲン（Ｑｉａｇｅｎ）、サンタ・クラリタ
（ＳａｎｔａＣｌａｒｉｔａ、カリフォルニア州）を
用いて精製し、両方の鎖について配列決定した。ＳＫ及
びＫＳプライマーの他に、内部オリゴヌクレオチドプラ
イマーを用いた配列分析を、自動ＤＮＡシークエンサー
（アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ）、モデル３７７）により、ダイ・タ
ーミネーター蛍光法（ｄｙｅｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｅｔｈｏｄ）（リー（Ｌ
ｅｅ），Ｌ．Ｇ．ら、Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．
２０：２４７１−２４８３（１９９２））を用いて行っ
た。

【００８４】ウエスタンブロット分析融合タンパク質、大腸菌タンパク質並びにヒト及びラッ
トの組織由来のタンパク質を、先述（ダルマウ（Ｄａｌ
ｍａｕ），Ｊ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４１：
８８１−６（１９９２）；マンリー（Ｍａｎｌｅｙ），
Ｇ．Ｔ．ら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３８：１０２−１
１０（１９９５））のようにして得、１０％ＳＤＳ−ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動により分離し、ニトロセ
ルロースに移した。次いで、ニトロセルロースストリッ
プを患者の血清（１：１，０００に希釈）とともにイン
キュベートし、強化化学発光法（アマシャム（Ａｍｅｒ
ｓｈａｍ）、アーリントン、イリノイ州）により、反応
性を明らかにした。

【００８５】ノーザンブロット分析配列特異オリゴヌクレオチドプローブを、［ｇ−³²Ｐ］
ＡＴＰにより、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて
末端標識し、Ｇ−２５セファデックスカラムで精製し
た。Ｍａ２用プローブとして以下のオリゴヌクレオチド
を使用した：５’−ＧＧＧＡＡＴＧＧＣＣＧＡＧＡＣＡ
ＴＣ−３’（配列番号：５）（ｃＤＮＡ塩基対２３４〜
２１７）、また、β−アクチン用プローブとして以下の
オリゴヌクレオチドを使用した：５’−ＧＴＣＴＴＴＧ
ＣＧＧＡＴＧＴＣＣＡＣＧ−３’（配列番号：２）。プ
ローブ（１×１０⁷ｃｐｍ／ｍＬ）を、「ヒューマン・
マルチプル・ティシュ・ノーザン・ブロッツＩアンドＩ
Ｉ（ＨｕｍａｎＭｕｌｔｉｐｌｅＴｉｓｓｕｅＮ
ｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔｓＩａｎｄＩＩ）（ク
ローンテック（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、パロアルト、カ
リフォルニア州）に、４２℃で一晩、ＲａｐｉｄＨｙ
ｂ緩衝液（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））中で、ハ
イブリダイズさせた。ブロットを、ＲＴで５×ＳＳＣ
（２０×＝ＮａＣｌ３Ｍ及びクエン酸Ｎａ₃塩０．３
Ｍ、ｐＨ７．０）、０．１％ＳＤＳ中；４２℃で１×Ｓ
ＳＣ、０．１％ＳＤＳ中；及び４２℃で０．１×ＳＳ
Ｃ、０．１％ＳＤＳ中にて、１５分間洗浄した。Ｍａ２
プローブとのハイブリダイゼーション後、ブロットを
０．５％ＳＤＳ中で１０分間煮沸することによりストリ
ッピングし、β−アクチンプローブとハイブリダイズさ
せた。可視化のため、ブロットをＸＡＲフィルムに−８
０℃で７２時間曝露した。

【００８６】Ｂ．結果患者血清をオンコニューロン抗体について検査した、数種の
癌の患者９８６例のうち、２０例は精巣癌及び多様な腫
瘍随伴性症候群を有した。これら２０例の患者のうち１
０例は、Ｔａと命名した類似の抗ニューロン抗体を保有
し（下記参照のこと）、１０例すべては、ＰＬＥ、Ｂ
Ｅ、又は両方を患った（表２）。ＰＬＥの患者９例のう
ち１例のみは、Ｔａ抗体を保有しなかった。

【００８７】

【表２】

【００８８】Ｔａ抗体を有する患者の臨床的特徴を表３
に示す。８例の患者はＰＬＥを有し（２例はＢＥに関
連）；症状は、重度の記憶喪失（ｎ＝５患者）、発作
（ｎ＝６）及び視床下部−間脳機能不全（２例の高体
温、１例の過眠症、１例の重量の病理学的増加、１例の
下垂体ホルモン欠乏）を含んだ。さらに別の２例の患者
は、顕著な目の運動異常を伴う顕著なＢＥを有した。中
度の小脳症状が３例の患者において同定され、すべてＢ
Ｅの顕著な徴候を伴った。

【００８９】

【表３】

【００９０】神経学的症状が、８例の患者において腫瘍
の診断の前に現れた（中央値６ヶ月、２〜３６ヶ月の範
囲）；他の２例では、腫瘍の診断が神経学的障害に先行
した（７及び１２ヶ月）。頭部ＭＲＩは、７例のＰＬＥ
患者において異常であった；典型的な所見は、側頭葉の
内側面において明るいシグナルを含み、間脳にも含まれ
ることがあった。４例の患者は脳生検を受け；すべて炎
症性浸潤、神経膠症及びニューロン変性を示した。右側
頭葉においてより強度のシグナルが、脳生検後の局所浮
腫に対応し、これは、血管周囲の炎症性浸潤及び多数の
Ｔ細胞のニューロン周囲の浸潤を示した。２例の患者
は、再発性及び緩解性神経学的症状を有した：一方は別
途に報告され（バートン（Ｂｕｒｔｏｎ），Ｇ．Ｖら、
Ｃａｎｃｅｒ６２：２２４８−２２５１（１９８
８））、他方は、血清Ｔａ抗体の検出が腫瘍随伴性ＢＥ
の診断を確立し、腫瘍の発見に至るまで１２ヶ月間症状
を有した。すべての患者は精巣癌を有した（４例のセミ
ノーマ及び６例の非セミノーマ性生殖細胞腫）。腫瘍診
断時、４例の患者は全身性転移を有した。

【００９１】１０例の患者はすべて除睾術を受け、５例
は化学療法を受け、１例は放射線療法を受けた。神経学
的疾患は、ステロイド（ｎ＝４）、血漿交換（ｎ＝２）
及び静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ、ｎ＝１）により
治療した。ＩＶＩＧ及びステロイドで治療した１例の患
者のみ、改善した。全体的に、５例の患者が神経学的に
改善し（２例は全緩解（ｔｏｔａｌｒｅｍｉｓｓｉｏ
ｎ））、２例が安定のまま、１例が悪化、２例が死亡し
た（一方は化学療法による合併症により；他方は神経学
的疾患により）。

【００９２】Ｔａ抗体の検出精製したヒトニューロンのイムノブロットを用い、１０
例の患者の血清（及び６例から得たＣＳＦ）を、４０ｋ
Ｄａタンパク質と反応させた。反応性の分布及びパター
ンを、数種の固定剤及び異なる組織処理法を用い、ヒト
及びラット組織の免疫組織化学により検査した。すべて
の血清及びＣＳＦは、類似した脳特異的反応性を示し
た。最も強い免疫標識を、凍結組織及びアセトン若しく
はメタノール−アセトン固定により得た。これらの条件
を用いると、中枢神経系のニューロンのほとんどは、別
個の亜核及び細胞質反応性構造を示した；反応性は、核
小体及び核周囲部に集中しているようであった。ホルマ
リン固定組織では、類扁桃複合体（ａｍｙｇｄａｌｏｉ
ｄｃｏｍｐｌｅｘ）のニューロン、脳幹の大ニューロ
ン及び小脳の歯状核の部分群のみが、ポジティブのまま
であった。８つの血清のいずれかとの組織のプレインキ
ュベーションは、他の２つの血清から単離されたＩｇＧ
の反応性を消失させ、これは、すべての血清が類似のエ
ピトープ特異性を有したことを示す。

【００９３】これらのイムノブロット及び免疫組織化学
的技術により規定される反応性は、「Ｔａ」（インデッ
クスの患者名の最初の２文字にちなんで）と呼んだ。Ｔ
ａ抗体は、癌及び腫瘍随伴性症候群の患者を含む３０４
例の対照血清においては同定されなかった（４５例のＰ
ＬＥ及び精巣癌以外の腫瘍［１３例の抗−Ｈｕポジティ
ブ］；２３例の抗−Ｈｕポジティブ脳脊髄炎−感覚神経
障害；２０例の抗−Ｙｏ関連小脳変性；５例のランバー
ト−イートン筋無力症候群、すべてＰ／Ｑ−型ＶＧＣＣ
抗体に対してポジティブ；6 例の抗−Ｒｉ関連小脳運動
失調症及び眼球クローヌス；及び９例の重症筋無力症及
び胸腺腫）、癌であるが腫瘍随伴性症候群でない患者
（４４例の精巣癌；１０例の結腸癌；１０例の卵巣癌；
２１例の乳癌）及び種々の障害を伴う患者（４１例の多
発性硬化症；３５例の全身性腫瘤エリテマトーデス）、
並びに２４例の正常個体（抗体−Ｈｕ：ザボ（Ｓｚａｂ
ｏ），Ａ．ら、Ｃｅｌｌ６７：３２５−３３３（１９
９１）参照のこと；抗−Ｙｏ：ピーターソン（Ｐｅｔｅ
ｒｓｏｎ），Ｋ．ら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ４２：１
９３１−３７（１９９２）参照のこと；抗−Ｒｉ：ルー
ク（Ｌｕｑｕｅ），Ｆ．Ａ．ら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏ
ｌ．２９：２４１−２５１（１９９１）参照のこと）。

【００９４】別の患者他の個体のさらなる研究により、抗−Ｔａ抗体を伴う別
の患者も精巣癌を有することが明らかになった。これら
の男性患者すべての神経学的症状は、間脳機能不全を伴
う脳幹及び／又は辺縁系脳炎であった。

【００９５】さらに、３例の女性が抗−Ｔａ抗体により
確認されている。これら３例の患者は、脳幹脳炎及び／
又は小脳機能不全を有した。３例のうち２例は肺癌を有
し、１例は初期部位が不明の癌のリンパ節への転移を有
した。

【００９６】Ｃ．Ｍａ２のクローニング及び特性評
価、Ｔａ抗体により認識された抗原Ｍａ２のクローニング患者の血清によるλＺＡＰヒト小脳ライブラリーのスク
リーニングは、ポジティブクローンの単離をもたらし、
これを、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔにおけるサブクローニ
ングにより回収した。得られたプラスミド（ｐ５６１
Ａ）は、６１４ｂｐの挿入物を含んだ。配列分析によ
り、推定分子量が２１．９ｋＤａの、１９５個のアミノ
酸からなる不完全オープン・リーディング・フレーム
（ジーンバンク（Ｇｅｎｂａｎｋ）ＡＦ０３７３６５、
図２に配列番号：６として示す）の存在が明らかになっ
た。核酸配列（配列番号：６）及び推定アミノ酸配列
（配列番号：７）を図２に示す。５８６ｂｐにおける終
始コドンのほぼすぐ後に、明らかなポリアデニル化シグ
ナルが続く。アミノ酸１２及び２１のメチオニンは、ク
ローンが５’末端で完全でなくなる開始コドンについて
のコザックコンセンサスルール（Ｋｏｚａｋｃｏｎｓ
ｅｎｓｕｓｒｕｌｅ）に厳密にあてはまらない。この
ｃＤＮＡにより発現されたタンパク質をＭａ２と呼ん
だ。

【００９７】Ｍａ２のｃＤＮＡ配列は、部分的にＭａ1
と相同であることがわかり（Ｆｉｇｕｒｅ３Ａ及び３
Ｂ）、腫瘍随伴性抗原が脳及び精巣で発現した（実施例
１参照のこと）。ジーンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）デー
タベースの調査により、Ｍａ２ｃＤＮＡが、多発性硬化
症の患者の脱髄病変部から抽出したＲＮＡ由来のヒトｃ
ＤＮＡクローン（ジーンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）Ｎ４
７７８４）と８４％相同性を有することが明らかになっ
た。さらなる分析により、最も高い相同性（９５％）の
領域がＭａ２の推定タンパク質コード領域の範囲内にあ
ることが示され、実際、シークエンシングエラーが説明
され、２つのクローンは、この領域において同一である
ようである。Ｎ４７７８４クローンは、Ｍａ２終始コド
ンを超えて伸びる潜在的なＯＲＦ有する。さらに、Ｍａ
２は、成体マウス精巣から単離されたｃＤＮＡクローン
（ジーンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）９１８１０３）と、
６０％相同性を有することがわかった。

【００９８】精巣癌及びＰＬＥ−ＢＥの患者は、Ｍａ２
に対する血清抗体を保有し、これらの抗体の鞘内合成を有するＭａ２融合タンパク質のイムノブロットを用い、Ｔａ抗
体を有する患者由来のすべての血清及びＣＳＦを、約３
２ｋＤａのバンドと反応させた。シャムタンパク質（挿
入物なしの親プラスミドを有する大腸菌）のイムノブロ
ットでは反応性は何も得られなかった。３０４例の対照
血清は、いずれもＭａ２と反応しなかった。

【００９９】Ｍａ２が、Ｔａ抗体により同定された４０
ｋＤａニューロンタンパク質に対応するか否かを決定す
るために、ニューロンタンパク質のイムノブロットを、
Ｍａ２と予備吸収させた抗−Ｔａ血清とともにインキュ
ベートした。シャムタンパク質ではなくＭａ２との予備
吸収は、４０ｋＤａのニューロンタンパク質との血清反
応性を排除し、これは、このタンパク質がＭａ２である
ことを示す。

【０１００】Ｔａ抗体の鞘内ＡＳＡ／血清ＡＳＡの比
は、０．７４、４．４、６．２、１６．９及び２３．５
であり、５例の患者のうち４例におけるポジティブな鞘
内合成（＞２）に一致した。

【０１０１】Ｍａ２は正常脳及びＰＬＥ−ＢＥの患者の
腫瘍により発現される多数のヒト組織から抽出したｍＲＮＡのノーザンブロッ
ト分析により、Ｍａ２ｍＲＮＡが、脳では発現される
が、胎盤、肺、肝臓、脾臓、胸腺、前立腺、卵巣、精
巣、小腸、結腸又は抹消血白血球では発現されないこと
が示された。ノーザンブロットにより、脳において発現
された約６，５００キロベースの単一の転写物が明らか
になった。プローブとしてビオチニル化抗−ＴａＩｇ
Ｇを用いた、同じ組織の免疫組織化学的及びウエスタン
ブロット分析により、脳のみがＭａ２反応性を現すこと
が示された。

【０１０２】ＰＬＥ−ＢＥ及びＴａ抗体を有する４例の
患者の腫瘍を、ホルマリン−固定し、パラフィン−包埋
したブロックとして得た。組織の脱パラフィン及び抗原
除去後、すべての４例の腫瘍は、抗−ＴａＩｇＧとの
反応性を示した。ＩｇＧをＭａ２タンパク質と予備吸収
させておいた場合、反応性は何も観察されなかった。結
果は、切片又は脂肪海馬（ｆａｔｈｉｐｐｏｃａｍｐ
ｕｓ）に類似した。Ｍａ２反応性は、腫瘍随伴性症候群
のない、又は他の腫瘍随伴性障害のある患者由来の５３
例の多様な腫瘍（２５例の精巣癌を含む）では現れなか
った。

【０１０３】Ｄ．Ｍａ１及びＭａ２は、神経学的症状
及び腫瘍の異なる特徴に関連する免疫学的応答の標的で
あるＭａ１とＭａ２との間の配列相同性のため、抗−Ｔａ及
び抗−Ｍａ血清が両方のタンパク質と反応するか否かを
試験した。これらの研究により、すべての抗−Ｔａ血清
は排他的にＭａ２と反応するが、抗−Ｍａ血清は両方の
Ｍａタンパク質を認識することが示された。これらのタ
ンパク質のいずれかとの抗−Ｍａ血清の予備吸収は、他
の１つとの反応性を排除せず、これは、Ｍａ１及びＭａ
２におけるエピトープが異なることを示す。さらに、ラ
ット脳切片並びにニューロンタンパク質及びＭａ２のイ
ムノブロットと抗−Ｍａ血清のいずれかとのプレインキ
ュベーションは、抗−ＴａＩｇＧとの反応性を消失は
させないが低下させ、これは、すべてではないが、いく
つかのＭａ２エピトープが、血清の両方の型により認識
されることを示す。これらの研究から導かれる臨床的−
免疫学的関連性をＦｉｇｕｒｅ４にまとめる。

【０１０４】実施例３Ｍａ３、Ｍａ４及びＭａ５の同
定小脳ライブラリーからのＭａ１及びＭａ２の単離で上述
したのと同じ技術を用いた、ヒト脳幹ｃＤＮＡライブラ
リーのスクリーニングは、Ｍａ３及びＭａ２との相同性
を有するさらに３つのクローンの単離をもたらした；こ
れらを、Ｍａ３、Ｍａ４及びＭａ５と呼んだ。Ｍａ３
は、８３３ヌクレオチド長で、２１キロダルトンの融合
タンパク質をコードする。Ｍａ４は、１５７４ヌクレオ
チド長で、３６キロダルトンの融合タンパク質をコード
する。Ｍａ５は、２２４８ヌクレオチド長で、５６キロ
ダルトンの融合タンパク質をコードする。融合タンパク
質は、クローンとβ−ガラクトシダーゼ遺伝子の５’−
末端との融合であるｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔにおいて、
ｃＤＮＡクローンにより発現されるそれらタンパク質で
ある。Ｍａ３、Ｍａ４及びＭａ５に対するｃＤＮＡは、
ジーンバンク（Ｇｅｎｂａｎｋ）に、ＡＦ０８３１１４
（Ｍａ３、Ｆｉｇｕｒｅ５に配列番号：８として示
す）、ＡＦ０８３１１５（Ｍａ４、Ｆｉｇｕｒｅ６Ａ〜
６Ｂに配列番号：１０として示す）、及びＡＦ０８３１
１６（Ｍａ５、Ｆｉｇｕｒｅ７Ａ〜７Ｂに配列番号：１
２として示す）として寄託した。Ｍａ３、Ｍａ４及びＭ
ａ５に対する推定されるコードされたポリペプチドを、
Ｆｉｇｕｒｅ５（配列番号：９）、６Ａ〜６Ｂ（配列番
号：１１）、及び７Ａ〜７Ｂ（配列番号：１３）にそれ
ぞれ示す。

【０１０５】本発明を、その好ましい態様を参照しなが
ら特に示し、記載しているが、当業者は、添付の特許請
求の範囲により規定される本発明の主旨及び範囲から逸
脱せずに、本発明において、形態及び詳細における種々
の変更を行い得ることを理解できるであろう。

【０１０６】

【発明の効果】本発明は、Ｍａファミリータンパク質、
Ｍａファミリータンパク質をコードする核酸、及び該タ
ンパク質の腫瘍随伴性症候群との関連性に関する。本明
細書に記載のように、出願人らは、５つのタンパク質、
Ｍａ１、Ｍａ２、Ｍａ３、Ｍａ４及びＭａ５、並びにそ
れらをコードする核酸を同定した。Ｍａ１は、脳及び精
巣で発現される３７キロダルトンのタンパク質であり；
Ｍａ１に対する抗体（本明細書では「抗−Ｍａ抗体」と
もいう）の存在は腫瘍随伴性症候群、特に脳幹又は小脳
に影響するものに関連する。Ｍａ２は、脳で発現される
４０キロダルトンのタンパク質であり；Ｍａ２に対する
抗体（本明細書では「抗−Ｔａ抗体」ともいう）の存在
は、特に精巣癌又は肺癌並びに腫瘍随伴性症候群腫瘍随
伴性辺縁系脳炎（ＰＬＥ）及び脳幹脳炎（ＢＥ）に関連
する。Ｍａ３は２１キロダルトンのタンパク質であり；
Ｍａ４は３６キロダルトンのタンパク質であり；そし
て、Ｍａ５は５６キロダルトンのタンパク質である。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、Ｍａ１のｃＤＮＡ（配列番号：３）及
び推定アミノ酸配列（配列番号：４）を示す。

【図２】図２は、Ｍａ２のｃＤＮＡ（配列番号：６）及
び推定アミノ酸配列（配列番号：７）を示す。

【図３】図３は、Ｆｉｇｕｒｅ３Ａであり、Ｍａ１のｃ
ＤＮＡ（配列番号：３）とＭａ２のｃＤＮＡ（配列番
号：６）、及びマウスｃＤＮＡ（配列番号：１４）との
相同性を示す。

【図４】図４は、Ｆｉｇｕｒｅ３Ｂであり、Ｍａ１のｃ
ＤＮＡ（配列番号：３）とＭａ２のｃＤＮＡ（配列番
号：６）、及びマウスｃＤＮＡ（配列番号：１４）との
相同性を示す。

【図５】図５は、Ｆｉｇｕｒｅ４であり、Ｍａ１及びＭ
ａ２に対する抗体の、腫瘍随伴性症候群との臨床的−免
疫学的関連性の概要を示す。

【図６】図６は、Ｆｉｇｕｒｅ５であり、Ｍａ３のｃＤ
ＮＡ（配列番号：８）及び推定アミノ酸配列（配列番
号：９）を示す。

【図７】図７は、Ｆｉｇｕｒｅ６Ａであり、Ｍａ４のｃ
ＤＮＡ（配列番号：１０）及び推定アミノ酸配列（配列
番号：１１）を示す。

【図８】図８は、Ｆｉｇｕｒｅ６Ｂであり、Ｍａ４のｃ
ＤＮＡ（配列番号：１０）及び推定アミノ酸配列（配列
番号：１１）を示す。

【図９】図９は、Ｆｉｇｕｒｅ７Ａであり、Ｍａ５のｃ
ＤＮＡ（配列番号：１２）及び推定アミノ酸配列（配列
番号：１３）を示す。

【図１０】図１０は、Ｆｉｇｕｒｅ７Ｂであり、Ｍａ５
のｃＤＮＡ（配列番号：１２）及び推定アミノ酸配列
（配列番号：１３）を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 5/10 5/00 Ａ 15/09 ＺＮＡ 15/00 ＺＮＡＡ (72)発明者ジョセフオー．ダルマウアメリカ合衆国ニューヨーク 10021 ニューヨーク，アパートメント 31−０, イーストシックスティーサードストリート 504 (72)発明者ミルナアール．ローゼンフェルトアメリカ合衆国ニューヨーク 10021 ニューヨーク，アパートメント 31−０, イーストシックスティーサードストリート 504

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】個体由来の試験試料を、Ｍａファミリー
ポリペプチドに対する抗体の存在又は非存在について評
価する工程を含み、その際、Ｍａファミリーポリペプチ
ドに対する抗体の存在が腫瘍随伴性症候群の存在を示
す、個体における腫瘍随伴性症候群の診断方法。
【請求項２】ＭａファミリーポリペプチドがＭａ１で
ある請求項１記載の方法。
【請求項３】ＭａファミリーポリペプチドがＭａ２で
ある請求項１記載の方法。
【請求項４】腫瘍随伴性症候群が、腫瘍随伴性辺縁系
脳炎（ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃｌｉｍｂｉｃ
ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）及び／又は脳幹脳炎であ
る、請求項３記載の方法。
【請求項５】個体由来の試験試料を、Ｍａファミリー
ポリペプチドに対する抗体の存在又は非存在について評
価する工程を含み、その際、Ｍａファミリーポリペプチ
ドに対する抗体の非存在が腫瘍随伴性症候群の非存在を
示す、個体における腫瘍随伴性症候群の診断方法。
【請求項６】ＭａファミリーポリペプチドがＭａ１で
ある請求項５記載の方法。
【請求項７】ＭａファミリーポリペプチドがＭａ２で
ある請求項５記載の方法。
【請求項８】腫瘍随伴性症候群が、腫瘍随伴性辺縁系
脳炎及び／又は脳幹脳炎である、請求項７記載の方法。
【請求項９】ａ）存在する場合、抗体がＭａファミ
リーポリペプチドに結合可能な条件下、Ｍａファミリー
ポリペプチド試料を、個体由来の試験試料に接触させる
工程、それにより接触試料が生成し；並びにｂ）接触試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗
体の量を、基準量と比較する工程、を含み、接触試料中
の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量が基準量と
同じか又は多いことが、腫瘍随伴性症候群の存在を示
す、個体における腫瘍随伴性症候群の診断方法。
【請求項１０】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ１を含有してなる請求項９記載の方法。
【請求項１１】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ２を含有してなる請求項９記載の方法。
【請求項１２】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ１及びＭａ２を含有してなる請求項９記載の方法。
【請求項１３】試験試料が、血液、血清、脳脊髄液、
尿、鼻分泌物及び唾液からなる群より選ばれる試料を含
有してなる請求項９記載の方法。
【請求項１４】試験試料が、体液又は体組織の試料か
ら単離された抗体を含有してなる請求項９記載の方法。
【請求項１５】ａ）存在する場合、抗体がＭａファ
ミリーポリペプチドに結合可能な条件下、Ｍａファミリ
ーポリペプチド試料を、個体由来の試験試料に接触させ
る工程、それにより接触試料が生成し；並びにｂ）接触試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗
体の量を、基準量と比較する工程、を含み、接触試料中
の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量が基準量よ
り少ないことが、腫瘍随伴性症候群の非存在を示す、個
体における腫瘍随伴性症候群の診断方法。
【請求項１６】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ１を含有してなる請求項１５記載の方法。
【請求項１７】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ２を含有してなる請求項１５記載の方法。
【請求項１８】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ１及びＭａ２を含有してなる請求項１５記載の方法。
【請求項１９】試験試料が、血液、血清、脳脊髄液、
尿、鼻分泌物及び唾液からなる群より選ばれる試料を含
有してなる請求項１５記載の方法。
【請求項２０】試験試料が、体液又は体組織の試料か
ら単離された抗体を含有してなる請求項１５記載の方
法。
【請求項２１】ａ）存在する場合、抗体がＭａファ
ミリーポリペプチドに結合可能な条件下、Ｍａファミリ
ーポリペプチド試料を、個体由来の試験試料に接触させ
る工程、それにより接触試料が生成し；ｂ）接触試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗
体の量を測定する工程；並びにｃ）接触試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗
体の量を、少なくとも１つの比較陰性対照試料中の抗−
Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量と比較する工程、
を含み、接触試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド
抗体の量が比較陰性対照試料中の抗−Ｍａファミリーポ
リペプチド抗体の量よりも有意に多いことが、腫瘍随伴
性症候群の存在を示す、個体における腫瘍随伴性症候群
の診断方法。
【請求項２２】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ１を含有してなる請求項２１記載の方法。
【請求項２３】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ２を含有してなる請求項２１記載の方法。
【請求項２４】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ１及びＭａ２を含有してなる請求項２１記載の方法。
【請求項２５】試験試料が、血液、血清、脳脊髄液、
尿、鼻分泌物及び唾液からなる群より選ばれる試料を含
有してなる請求項２１記載の方法。
【請求項２６】試験試料が、体液又は体組織の試料か
ら単離された抗体を含有してなる請求項２１記載の方
法。
【請求項２７】ａ）存在する場合、抗体がＭａファ
ミリーポリペプチドに結合可能な条件下、Ｍａファミリ
ーポリペプチド試料を、個体由来の試験試料に接触させ
る工程、それにより接触試料が生成し；ｂ）接触試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗
体の量を測定する工程；並びにｃ）接触試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗
体の量を、少なくとも１つの比較陰性対照試料中の抗−
Ｍａファミリーポリペプチド抗体の量と比較する工程、
を含み、接触試料中の抗−Ｍａファミリーポリペプチド
抗体の量が比較陰性対照試料中の抗−Ｍａファミリーポ
リペプチド抗体の量よりも有意に多くないことが、腫瘍
随伴性症候群の非存在を示す、個体における腫瘍随伴性
症候群の診断方法。
【請求項２８】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ１を含有してなる請求項２７記載の方法。
【請求項２９】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ２を含有してなる請求項２７記載の方法。
【請求項３０】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ１及びＭａ２を含有してなる請求項２７記載の方法。
【請求項３１】試験試料が、血液、血清、脳脊髄液、
尿、鼻分泌物及び唾液からなる群より選ばれる試料を含
有してなる請求項２７記載の方法。
【請求項３２】試験試料が、体液又は体組織の試料か
ら単離された抗体を含有してなる請求項２７記載の方
法。
【請求項３３】個体由来の試験試料を、Ｍａファミリ
ーポリペプチドに対する抗体の存在又は非存在について
評価する工程を含み、その際、Ｍａファミリーポリペプ
チドに対する抗体の存在が新生物の存在を示す、個体に
おける新生物の診断方法。
【請求項３４】ＭａファミリーポリペプチドがＭａ１
である請求項３３記載の方法。
【請求項３５】新生物が、乳癌、結腸癌、耳下腺癌、
肺癌、精巣癌及び生殖細胞腫からなる群より選ばれる請
求項３４記載の方法。
【請求項３６】ＭａファミリーポリペプチドがＭａ２
である請求項３３記載の方法。
【請求項３７】新生物が、精巣癌、生殖細胞腫及び肺
癌からなる群より選ばれる請求項３６記載の方法。
【請求項３８】個体由来の試験試料を、Ｍａファミリ
ーポリペプチドに対する抗体の存在又は非存在について
評価する工程を含み、その際、Ｍａファミリーポリペプ
チドに対する抗体の非存在が新生物の非存在を示す、個
体における新生物の診断方法。
【請求項３９】ＭａファミリーポリペプチドがＭａ１
である請求項３８記載の方法。
【請求項４０】新生物が、乳癌、結腸癌、耳下腺癌、
肺癌、精巣癌及び生殖細胞腫からなる群より選ばれる請
求項３９記載の方法。
【請求項４１】ＭａファミリーポリペプチドがＭａ２
である請求項３８記載の方法。
【請求項４２】新生物が、精巣癌、生殖細胞腫及び肺
癌からなる群より選ばれる請求項４１記載の方法。
【請求項４３】Ｍａファミリーポリペプチド試料及び
抗−Ｍａファミリーポリペプチド抗体に結合する検出用
抗体を含有してなる、腫瘍随伴性症候群の診断に使用す
るキット。
【請求項４４】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ１を含有してなる請求項４３記載のキット。
【請求項４５】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ２を含有してなる請求項４３記載のキット。
【請求項４６】Ｍａファミリーポリペプチド試料がＭ
ａ１及びＭａ２を含有してなる請求項４３記載のキッ
ト。
【請求項４７】単離されたＭａファミリーポリペプチ
ド又はその機能的誘導体若しくは断片。
【請求項４８】ポリペプチドが、配列番号：４、配列
番号：７、配列番号：９、配列番号：１１及び配列番
号：１３からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含有す
るものである請求項４７記載の単離されたＭａファミリ
ーポリペプチド。
【請求項４９】Ｍａファミリーポリペプチドを含有し
てなる単離された融合タンパク質。
【請求項５０】Ｍａファミリーポリペプチドが、配列
番号：４、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１
１及び配列番号：１３からなる群より選ばれるアミノ酸
配列を含有するものである請求項４９記載の融合タンパ
ク質。
【請求項５１】Ｍａファミリーポリペプチド又はその
機能的誘導体若しくは断片をコードする、単離された核
酸分子。
【請求項５２】該核酸分子が、配列番号：３、配列番
号：６、配列番号：８、配列番号：１０及び配列番号：
１２からなる群より選ばれるヌクレオチド配列を含有す
るものである請求項５１記載の単離された核酸分子。
【請求項５３】調節配列に作動可能に連結された請求
項５１記載の単離された核酸分子を含有してなるＤＮＡ
構築物。
【請求項５４】調節配列に作動可能に連結された請求
項５１記載の単離された核酸分子を含有してなる組換え
宿主細胞。
【請求項５５】請求項５４記載の組換え宿主細胞を培
養する工程を含む、Ｍａファミリーポリペプチド又はそ
の活性誘導体若しくは断片の製造方法。
【請求項５６】請求項４７記載の単離されたＭａファ
ミリーポリペプチド又はその活性誘導体若しくは断片に
選択的に結合する抗体又はその抗原結合性断片。