JP2000116384A

JP2000116384A - 新規遺伝子及びそれにコ―ドされる蛋白質ｐｇｔｈ

Info

Publication number: JP2000116384A
Application number: JP11228277A
Authority: JP
Inventors: Osamu Obara; ▲収▼ 小▲原▼; Takahiro Nagase; 隆弘長瀬; Nobuo Nomura; 信夫野村; Kiyoshi Takayama; 喜好高山; Hitoshi Toyoda; 均豊田; Makoto Yoshimoto; 真吉本
Original assignee: Kazusa DNA Research Institute Foundation; Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Kazusa DNA Research Institute Foundation; Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1998-08-12
Filing date: 1999-08-12
Publication date: 2000-04-25

Abstract

(57)【要約】【課題】プロスタグランジン輸送活性を有する、ヒト由
来の新規蛋白質を提供する。【解決手段】ヒト脳由来のｃＤＮＡライブラリーからの
クローニングによって得られる新規蛋白質ＰＧＴＨとそ
れをコードする遺伝子ｐｇｔｈを得る。遺伝子ｐｇｔｈ
ならびに新規蛋白質ＰＧＴＨは、医薬又は医薬の開発に
用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術】本発明は、プロスタグランジン輸
送活性を有する、ヒト脳由来の新規蛋白質ＰＧＴＨと、
該蛋白質をコードする遺伝子ｐｇｔｈに関するものであ
る。

【０００２】

【従来の技術】プロスタグランジンとは、プロスタグラ
ンジンＥ、プロスタグランジンＤ、プロスタグランジン
Ｆ、プロスタグランジンＩ、プロスタグランジンＪ等の
一連の生理活性脂質の総称である。プロスタグランジン
は、特異的細胞膜受容体、或いは核内受容体を介して、
血流量調節、睡眠、胃粘膜保護作用、血栓形成、妊娠と
いった生理的機能の調節や炎症、動脈硬化、糖尿病の病
態亢進に深く関連する、生体内の生理活性物質である。

【０００３】プロスタグランジンは、様々な生理的刺激
に応答して、細胞膜からホスホリパーゼＡ２により切り
出されたアラキドン酸等のエイコサポリエン酸が、シク
ロオキシゲナーゼならびに各種のプロスタグランジン合
成酵素により変換されることで細胞内で産生され、細胞
外に遊離した後にオートクリンやパラクリンに作用す
る。一方、遊離したプロスタグランジンは血流を循環
後、特定の細胞に取り込まれ、代謝分解を受けて消失す
る。

【０００４】プロスタグランジンは微量で強い生理活性
を示すことから、これらの産生は、生産系酵素ならびに
代謝系酵素の活性制御により厳密に制御されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、プロス
タグランジンは単独で細胞膜の脂質２重層を通過するこ
とが出来ないことが報告されている。そのため、プロス
タグランジン輸送機構として、細胞内で産生されたプロ
スタグランジンが細胞外に遊離する過程、血流を循環し
た後に特定の細胞に取り込まれる過程に、特別な蛋白質
の介在が想定されている。

【０００６】この輸送機構を担う蛋白質としてプロスタ
グランジントランスポーター（以下ｈＰＧＴとする：hu
man Prostaglandin Transporter ）が報告されているも
のの、全てのプロスタグランジン輸送を担う蛋白質で
はなく、不明な点が多い。そのため、この輸送機構に関
わるｈＰＧＴ以外の生体分子を明らかにすることによ
り、かかる生体分子を直接的に医薬として使用し、又は
間接的に医薬化合物の探索に供することが可能となると
推察される。本発明の目的は、この様な分子を同定し、
医薬等または医薬等の開発に利用することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ヒト脳で
発現している遺伝子の中から、所望の蛋白質を把握する
べく鋭意研究の結果、新規蛋白質ＰＧＴＨ（Prostaglan
din Transporter Homolog)の存在とそれをコードする遺
伝子ｐｇｔｈの単離に成功し、本発明を完成した。

【０００８】即ち、本発明は、（ａ）配列番号：１に記
載のアミノ酸配列からなる蛋白質、または（ｂ）配列番
号：１のアミノ酸配列において１もしくは数個のアミノ
酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からな
り、かつプロスタグランジン輸送活性を有する蛋白質に
関するものである。

【０００９】さらに本発明は、（ｃ）配列番号：２に記
載のＤＮＡからなる遺伝子、または、（ｄ）配列番号：
２のＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズ
し、かつプロスタグランジン輸送活性を有する蛋白質を
コードするＤＮＡに関するものである。

【００１０】本発明の遺伝子であるｐｇｔｈは、ヒト脳
由来のｃＤＮＡライブラリーから、該遺伝子を含んだｃ
ＤＮＡ断片として単離することができる。本発明者らが
使用したｃＤＮＡライブラリーは、クローンテック社か
ら市販されているヒト脳由来のｍＲＮＡをもとに調製し
たものである上述のｃＤＮＡライブラリーにおいて、プ
ロスタグランジン輸送活性を有する蛋白質をコードｃＤ
ＮＡを識別する方法として、小原らの方法（DNA Resear
ch,Vol.4, p53, 1997）による、長鎖ｃＤＮＡライブラ
リーを用いた網羅的ｃＤＮＡライブラリーの解析方法を
用いた。小原らの方法で作製した、ヒト脳由来の長鎖ｃ
ＤＮＡライブラリーから無作為に２５，０００個の組換
え体を選択し、１５，０００クローンのｃＤＮＡ部分の
５’側ならびに３’側の塩基配列を決定し、全クローン
の５’側の配列から既に報告されているｈＰＧＴをコー
ドする遺伝子と相同性のあるクローンをＤＮＡ解析プロ
グラム（BLAST並びにFastA）を用いることで、見いだす
事が出来る。

【００１１】塩基配列中の蛋白質をコードする領域（Ｏ
ＲＦ、open reading frame）の存在は、塩基配列をコン
ピュータープログラムを用いて解析する汎用の方法によ
り確認することができる。該ｃＤＮＡ配列の中に目的と
する遺伝子の存在を確信した本発明者らは、コンピュー
ターを利用して該配列中に一つのＯＲＦを見いだし、こ
の遺伝子をｐｇｔｈと、該遺伝子にコードされる蛋白質
をＰＧＴＨと命名した。本発明であるＰＧＴＨは、全７
０９アミノ酸残基からなる分子量約８０キロダルトン
（ｋＤａ）の蛋白質である。

【００１２】

【発明の実施の形態】ｐｇｔｈは、配列番号：２に示さ
れる２１３０塩基対（ｂｐ）からなる遺伝子である。こ
のｐｇｔｈを用い、適当な宿主ベクター系による一般的
な遺伝子組み換え技術によって、組み換え遺伝子を調製
することができる。適当なベクターとしては、大腸菌由
来のプラスミド（例、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１１８その
他）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１０、ｐ
Ｃ１９４その他）、酵母由来のプラスミド（例、ｐＳＨ
１９その他）、さらにバクテリオファージやレトロウィ
ルスやワクシニアウィルス等の動物ウィルス等が利用で
きる。組み換えに際しては、適当な合成ＤＮＡアダプタ
ーを用いて翻訳開始コドンや翻訳終止コドンを付加する
ことも可能である。さらに該遺伝子を発現させるため
に、遺伝子の上流に適当な発現プロモーターを接続す
る。使用するプロモーターは、宿主に応じて適宜選択す
ればよい。例えば、宿主が大腸菌である場合には、Ｔ７
プロモーター、ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモータ
ー、λＰＬプロモーターなどが、宿主がバチルス属菌で
ある場合にはＳＰＯ系プロモーター等が、宿主が酵母で
ある場合にはＰＨＯ５プロモーター、ＧＡＰプロモータ
ー、ＡＤＨプロモーター等が、宿主が動物細胞である場
合にはＳＶ４０由来プロモーター、レトロウィルスプロ
モーター等が、それぞれ使用できる。

【００１３】また該遺伝子を他の蛋白質（例、グルタチ
オンＳトランスフェラーゼ、プロテインＡその他）との
融合蛋白質として発現させることも可能である。このよ
うにして発現させた融合型ＰＧＴＨは、適当なプロテア
ーゼ（例、トロンビンその他）を用いて切り出すことが
可能である。

【００１４】ＰＧＴＨの発現の際に利用できる宿主とし
ては、エシェリヒア属菌であるEscherichia coliの各種
菌株、バチルス属菌であるBacillus subtilisの各種菌
株、酵母としてはSaccharomyces cerevisiaeの各種菌
株、動物細胞としてはＣＯＳ−７細胞、ＣＨＯ細胞等が
利用できる。

【００１５】上記組み換えベクターを用いて宿主細胞を
形質転換する方法としては、選択する宿主細胞に対して
一般に用いられる形質転換方法が適用できる。

【００１６】尚、本発明においては、配列番号：２に示
したＤＮＡ配列の他に、該ＤＮＡとハイブリダイズしか
つプロスタグランジン輸送活性を有する蛋白質をコード
するＤＮＡも、本発明の範囲内である。

【００１７】すなわち、ｐｇｔｈの全長配列において、
種々の人為的処理、例えば部位特異的変異導入、変異剤
処理によるランダム変異、制限酵素切断によるＤＮＡ断
片の変異・欠失・連結等により、部分的にＤＮＡ配列が
変化したものであっても、これらＤＮＡ変異体がｐｇｔ
ｈとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、か
つプロスタグランジン輸送活性を有する蛋白質をコード
するＤＮＡであれば、配列番号：２に示したＤＮＡ配列
との相違に関わらず、本発明の範囲内のものである。

【００１８】上記のＤＮＡ変異の程度は、ｐｇｔｈのＤ
ＮＡ配列と９０％以上の相同性を有するものであれば許
容範囲内である。また、ｐｇｔｈとハイブリダイズする
程度としては、通常の条件下、例えばDIG DNA Labeling
kit（ベーリンガー・マンハイム社製Cat No.1175033）
でプローブをラベルした場合に、３２℃のDIG Easy Hyb
溶液（ベーリンガー・マンハイム社製Cat No.1603558）
中でハイブリダイズさせ、５０℃の０．５×ＳＳＣ溶液
（０．１％［ｗ／ｖ］ＳＤＳを含む）中でメンブレンを
洗浄する条件（１×ＳＳＣは０．１５ＭＮａＣｌ、
０．０１５Ｍクエン酸ナトリウムである）でのサザン
ハイブリダイゼーションで、ｐｇｔｈにハイブリダイズ
する程度であればよい。

【００１９】また、上記のごとくｐｇｔｈと相同性の高
い変異体遺伝子にコードされる蛋白質であって、プロス
タグランジン輸送活性を有する蛋白質もまた、本発明の
範囲内のものである。

【００２０】すなわち、ＰＧＴＨのアミノ酸配列の１も
しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加され
た変異体であっても、該変異体がプロスタグランジン輸
送活性を有する蛋白質であれば、該変異体は本発明の範
囲内のものである。

【００２１】蛋白質の構成要素となるアミノ酸の側鎖
は、疎水性、電荷、大きさなどにおいてそれぞれ異なる
ものであるが、実質的に蛋白質全体の３次元構造（立体
構造とも言う）に影響を与えないという意味で保存性の
高い幾つかの関係が、経験的にまた物理化学的な実測に
より知られている。例えば、アミノ酸残基の置換につい
ては、グリシン（Ｇｌｙ）とプロリン（Ｐｒｏ）、Ｇｌ
ｙとアラニン（Ａｌａ）またはバリン（Ｖａｌ）、ロイ
シン（Ｌｅｕ）とイソロイシン（Ｉｌｅ）、グルタミン
酸（Ｇｌｕ）とグルタミン（Ｇｌｎ）、アスパラギン酸
（Ａｓｐ）とアスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃ
ｙｓ）とスレオニン（Ｔｈｒ）、Ｔｈｒとセリン（Ｓｅ
ｒ）またはＡｌａ、リジン（Ｌｙｓ）とアルギニン（Ａ
ｒｇ）、等が挙げられる。

【００２２】従って、配列番号：１に示したＰＧＴＨの
アミノ酸配列上の置換、挿入、欠失等による変異蛋白質
であっても、その変異がＰＧＴＨの３次元構造において
保存性が高い変異であって、その変異蛋白質がＰＧＴＨ
と同様にプロスタグランジン輸送活性を有する蛋白質で
あれば、これらは本発明の範囲内にあるものと言うこと
ができる。変異の程度としては、配列番号：１に示した
アミノ酸配列との相同性が９０％以上のものが許容し得
る範囲である。

【００２３】

【発明の効果】ＰＧＴＨはプロスタグランジン輸送活性
を有していることから、ｐｇｔｈの発現異常あるいはＰ
ＧＴＨの機能不全は、生体の正常なプロスタグランジン
生産調節機構を失うこととなり、重大な障害となるもの
と推測される。

【００２４】従って、ＰＧＴＨそれ自体が医薬として有
用と考えられる一方、ｐｇｔｈやＰＧＴＨを用いること
により、ＰＧＴＨの機能と同様の機能を有する物質や当
該機能を促進または阻害する物資、あるいは遺伝子の発
現を促進する物質等の探索、評価を効率よく行うことが
できる。

【００２５】

【実施例】以下実施例を挙げて詳述するが、本発明はこ
の実施例に限定されないことは言うまでもない。尚、特
に断らない限り、下記実施例において使用した実験操作
は、Molecular Cloning 2nd.ed.（Cold Spring Harbor
Lab.Press, 1989）に代表される各種の標準的な実験書
や市販キットの取扱説明書の記載に従い、また制限酵素
等の各市販製品に対する推奨条件下で行うことができ
る。

【００２６】実施例１ｐｇｔｈのクローニング１）ヒト脳由来長鎖ｃＤＮＡライブラリーの構築 NotIサイトを有するオリゴヌクレオチド（GACTAGTTCTAG
ATCGCGAGCGGCCGCCC(T)₁₅)をＤＮＡ合成機（ABI380B）で
合成した。これをプライマーとして、ヒト脳由来のｍＲ
ＮＡ（クローンテック社）を鋳型にSuperScript II逆転
転写酵素キット（ギブコBRL社）で２本鎖ｃＤＮＡを合
成した。この合成ＤＮＡと、SalI サイトを有するアダ
プター（宝酒造）とをｃＤＮＡとライゲーションした後
にNotI消化し、１％濃度の低融解アガロース電気泳動に
より、３ｋｂ以上のｃＤＮＡ断片を精製した。

【００２７】精製したｃＤＮＡ断片を、SalI−NotI制限
酵素処理を施したpBluescriptIISK+プラスミドとライゲ
ーションした後、大腸菌 ElectroMax DH10B株(ギブコBR
L社）に、エレクトロポーレーション法により組み換え
プラスミドを導入した。次いで、当該ライブラリーから
無作為に２５，０００個の組換え体を選択し、組換えＤ
ＮＡを抽出し、１５，０００クローンのｃＤＮＡ部分の
５’側ならびに３’側の塩基配列を決定した。配列決定
にはＰＥアプライドバイオシステムズ社製のＤＮＡシー
クエンサー（ABI PRISM377）と同社製反応キットを用い
た。

【００２８】２）ｐｇｔｈの配列を含むクローンの選別１）で決定した全クローンの５’側の配列を、既に報告
されているｈＰＧＴとＤＮＡ解析プログラム（BLAST並
びにFastA）を用いて比較したところ、クローン名ＨＫ
０７４５７が有為な相同性を示した。

【００２９】３）ＤＮＡ断片の塩基配列の決定塩基配列決定にはＰＥアプライドバイオシステムズ社製
のＤＮＡシークエンサーを用い、ダイプライマー法を用
いた。大部分の配列はショットガン法で、一部の塩基配
列については、決定した塩基配列を元にしてオリゴヌク
レオチドを合成し、プライマーウォーキング法で両鎖の
全塩基配列を決定した。当該クローンのｃＤＮＡの全塩
基配列を配列番号：３に示す。

【００３０】当該ｃＤＮＡは、７０９残基より成る蛋白
質（ＰＧＴＨ）をコードするＯＲＦを含んでいる。該蛋
白質の開始コドンであるメチオニン残基の上流域に同じ
reading frameで終止コドンが出現したことから、当該
ｃＤＮＡ断片がコードする蛋白質のアミノ酸配列は、配
列番号３に示したものが唯一のものであることを確認し
た。

【００３１】既に報告されているｈＰＧＴと、本発明で
あるＰＧＴＨのアミノ酸の相同性を図１に示す。両者は
高い相同性を示し、特にＰＧＴＨのＣ末端側に存在する
システイン残基の位置が保存されていること、輸送活性
に特に重要なアミノ酸であるｈＰＧＴの７７残基目のグ
ルタミン、５６１残基目のアルギニン、６１４残基目の
リジンがＰＧＴＨでもそれぞれ保存されている。

【００３２】実施例２ｐｇｔｈのin vitroトランスレ
ーション法による蛋白質発現の確認実施例１で調製したｐｇｔｈを含むプラスミドをRNaseA
で処理後、ADVAMAXビーズ（AGTC社製）でRNaseAを除去
して、（³⁵S）メチオニン存在下でTNT T7 coupled reti
culocyte lysate システム（プロメガ社）を用いてin v
itroトランスレーションを実施した。反応液の一部をＳ
ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ）により分離して、BAS-2000（富士写真工業製）
で解析した。その結果、図２に示すように、約８０ｋＤ
ａの位置に単一バンドを確認した。

【００３３】実施例３動物細胞発現用ベクターの構築１）ＯＲＦを含むｃＤＮＡの増幅配列番号：３の該蛋白質の開始コドンより上流の配列を
有するオリゴヌクレオチド（下記の配列−１）と、該蛋
白質の終止コドンより下流の一部分と逆相補鎖と配列を
有するオリゴヌクレオチド（下記の配列−２）をＤＮＡ
合成機（ABI社製380B）で合成した。

【００３４】配列−１５’−CTGGAGCTCACTGCACTCCAGCAGTC−３’ 配列−２５’−AGCTCACACTCGGGAATCCTCTGGCTTC-３’ 実施例１で単離した配列番号：３を含む組み替えｃＤＮ
Ａを鋳型とし、配列−１のオリゴヌクレオチドと配列−
２のオリゴヌクレオチドをプライマーとして、タカラLA
PCR Kit Ver.2とＰＣＲサーマルサイクラーＭＰ（いず
れも宝酒造製）を用いて、以下のＰＣＲ操作を行った。

【００３５】 cDNA 5μl(10ng) 10×PCRバッファー(25mM Mg⁺⁺を含む) 5μl 2.5mM dNTP 8μl 10μM 配列−１ 2μl 10μM 配列−２ 2μl 水 27.5μlLA Taqホ゜リメラーセ゛ 0.5μl 総量 50μｌＰＣＲサイクルは、９４℃で２分保持後、９８℃で２０
秒間反応させ、６８℃まで−１℃／２秒の速度で冷却
し、６８℃で３分保持し、更に７２℃で１０分間保持を
３０回繰り返して行った。

【００３６】上記方法により、配列番号：３の一部を有
するＤＮＡ断片（約２．２ｋｂ）を増幅させた。

【００３７】２）動物細胞用発現ベクターへのサブクロ
ーニング１）で増幅したＤＮＡ断片を、１％アガロースゲル電気
泳動で分画した。ゲルをエチジウムブロマイドで染色し
た後、紫外光照射して目的とするバンドを含むゲルを切
り出した。アガロースゲルからのＤＮＡ断片の抽出と精
製は、GENECLEAN II Kit（バイオ１０１社製）を用いて
行った。

【００３８】この抽出精製したＤＮＡ断片を、動物細胞
用発現用ベクターpTARGET（プロメガ社製）にサブクロ
ーニングした。Ligation溶液はタカラDNA Ligation Kit
Ver.2（宝酒造製）を用い、以下の組成で１６℃で１．
５時間反応させた。

【００３９】抽出精製したＤＮＡ断片 1μl(50ng) pTARGET 1μl(10ng) 水 3μl Ligation溶液 5μl 総量 10μl 上記反応後の溶液を用いて、大腸菌Ｋ１２株ＤＨ５の形
質転換を行った。形質転換体をアンピシリン（Ａｍｐ）
５０μｇ／ｍｌ、5-Bromo-4-Chloro-3-indolyl-β-D-ga
lactoside(ＩＰＴＧ）４０μｇ／ｍｌ、Isopropyl-β-D
-Thio-Galactopyranoside（Ｘ−ｇａｌ）１００μＭを
含有するＬＢ寒天培地にプレーティングし、３７℃で一
晩培養した。

【００４０】上記プレートに出現したコロニーを５０μ
ｇ／ｍｌのＡｍｐを含むＬＢ液体培地１０ｍｌに接種し
て３７℃で一晩培養し、遠心分離によって菌体を集めた
後、QIAprep Spin Plasmid Miniprep Kit（キアゲン社
製）で組換えＤＮＡを精製し、pTARGETpgthを得た。

【００４１】３）導入ｃＤＮＡの塩基配列の決定塩基配列決定にはＤＮＡシークエンサー（ABI社製PRISM
377）を用い、ダイターミネーター法を用い、プライマ
ーウオーキング法で両鎖の全塩基配列を決定した。当該
クローンは配列番号：３の配列のうち、配列−１及び配
列−２に挟まれるすべての領域を含んでいたことから、
目的とする遺伝子pTARGETpgthがクローニングされたこ
とを確認した。

【００４２】実施例４ＣＨＯｋ１細胞への導入と安定
な形質転換体の取得実施例２で取得したpTARGETpgthはｐｇｔｈの上流にＣ
ＭＶプロモーターを有しており、当該組換えＤＮＡを動
物細胞中に導入すれば、ｐｇｔｈを発現させることが可
能である。

【００４３】ＣＨＯｋ１細胞を直径６０ｍｍのプラスチ
ックシャーレで培養した。培地としては10％牛胎児血清
(大日本製薬）、５０ユニット／ｍｌのペニシリン、５
０μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含むHamF-12（ギ
ブコ社製、以下増殖培地とする）を使用し、３７℃、５
％ＣＯ₂存在下で培養した。細胞密度が５０％になった
時点で、実施例２で取得したpTARGETpgthを含むLIPOFEC
TAMINE試薬（ギブコ社製）を、細胞上に重層して６時間
培養した後、増殖培地に置換して４８時間培養した。ト
リプシンで細胞を分散した後、細胞懸濁液を直径６０ｍ
ｍのプラスチックシャーレに分注してさらに２４時間培
養した。培地を除いた後、G418試薬（ギブコ社製；終濃
度５００μｇ／ｍｌ）を含有する増殖培地に置換した。
G418試薬添加培地を３日毎に交換してして２週間培養し
た。細胞のコロニーが肉眼で確認できるようになった時
点で、ステンレスカップを用いてコロニーを３個単離し
た。対照として用いるために、ＣＨＯｋ１細胞にpTARGE
Tベクター（プロメガ社製）のみを上記と同様にして導
入し、安定な形質転換体を単離した。

【００４４】２）形質転換体中の遺伝子発現の確認単離した各形質転換体を、６穴のプレートでG418添加培
地（終濃度５００μｇ／ｍｌ）で培養し、細胞密度が再
度８０％コンフルエントになった時点で培地を除去し、
ＰＢＳを添加し洗浄後、Trizol（ギブコ社製）を用いて
細胞から全ＲＮＡを精製した。２μｇの全ＲＮＡ鋳型
に、Superscript逆転転写酵素（ギブコ社製）を用いて
ｃＤＮＡを合成した。

【００４５】合成したｃＤＮＡを鋳型に実施例２−１と
同じオリゴヌクレオチド（配列−１、配列−２）を用い
て、ＰＣＲ反応を実施した。

【００４６】 cDNA 5μl(100ng) 10×PCRバッファー(25mM Mg⁺⁺を含む) 5μl 2.5mM dNTP 8μl 10μM 配列−１ 2μl 10μM 配列−２ 2μl 水 27.5μlLA Taqホ゜リメラーセ゛ 0.5μl 総量 50 μl ＰＣＲサイクルは、９４℃で２分保持後、９８℃で２０
秒間反応させ、６８℃まで−１℃／２秒の速度で冷却
し、６８℃で３分保持し、更に７２℃で１０分間保持を
３０回繰り返して行った。

【００４７】増幅したＤＮＡ断片を、アガロースゲル電
気泳動（ゲル濃度１％）で分画し、エチジウムブロマイ
ドで染色した後、紫外光照射して目的とするバンドが増
幅されるか否か調べた。

【００４８】その結果、pTARGETpgthを導入したＣＨＯ
ｋ１細胞でのみ、目的のバンドが増幅され、コントロー
ルベクターを導入したＣＨＯｋ１細胞では、増幅は確認
できなかった。

【００４９】実施例５ｐｇｔｈを導入したＣＨＯｋ1
細胞のプロスタグランジン輸送活性実施例３で確立したｐｇｔｈを導入したＣＨＯｋ１と、
コントロールベクターを導入したＣＨＯｋ１細胞のプロ
スタグランジン輸送活性の比較を行った。

【００５０】実施例３と同様の増殖培地を使用して、６
穴培養プレートに１穴あたり500000個のｐｇｔｈを導入
したＣＨＯｋ１細胞、コントロールベクターを導入した
ＣＨＯｋ１細胞それぞれを培養した。２４時間後、牛血
清アルブミンを含む適当な緩衝液で細胞を洗浄後、（³
Ｈ）放射標識ＰＧＥ２（アマシャム社製）を含む緩衝液
で更に２０分培養した。細胞を洗浄後、細胞を回収し
取り込まれた放射活性を測定した。その結果、ｐｇｔｈ
を導入したＣＨＯｋ１では、コントロールベクターを導
入したＣＨＯｋ１細胞と比較して、プロスタグランジン
輸送活性が統計学的に有為に高い値を示した。

【００５１】実施例６ヒト酸化ＬＤＬ負荷マクロファ
ージでのｐｇｔｈｍＲＮＡの発現１）ヒト酸化ＬＤＬ負荷マクロファージ並びに正常単球
ｃＤＮＡの作成正常単球ｃＤＮＡは、ヒト末梢血よりＣＤ１４陽性単球
よりＴｒｉｚｏｌ（ギブコBRL社）より調製したＲＮＡ
を鋳型として、SuperScript II逆転写酵素キット（ギブ
コBRL社）を用いて作成した。ヒト酸化ＬＤＬ負荷マク
ロファージは、正常単球をヒト２０％ＡＢ型血清、抗生
物質を含むRPMI-1640（大日本製薬）を１４日間培養
後、常法に従い硫酸銅で酸化させたヒトＬＤＬ（酸化Ｌ
ＤＬ）を再終濃度４０μ/ｍｌになるように添加し、更
に24時間培養し調製した。正常単球と同様な方法でｃＤ
ＮＡを調製した。

【００５２】２）ＲＴ−ＰＣＲ法によるｐｇｔｈｍＲ
ＮＡの発現の確認配列番号：２に含まれる配列を有するオリゴヌクレオチ
ド（下記の配列−３）と逆相補鎖と配列を有するオリゴ
ヌクレオチド（下記の配列−４）のそれぞれををＤＮＡ
合成機（ABI社製380B）で合成した。

【００５３】配列−３５’−GCTCCTGCCCATTGGACGGCTTTAACC-３’ 配列−４５’−TCACACTCGGGAATCCTCTGGCTTC-３’ (１)で作成したｃＤＮＡを鋳型とし、配列−３のオリゴ
ヌクレオチドと配列−４のオリゴヌクレオチドをプライ
マーとして、タカラLA PCR Kit Ver.2とＰＣＲサーマル
サイクラーＭＰ（いずれも宝酒造製）を用いて、以下の
ＰＣＲ操作を行った。

【００５４】 cDNA ２μl(４０ng) 10×PCRバッファー(25mM Mg⁺⁺を含む) 1.5μl 2.5mM dNTP 2.4μl 10μM 配列−３ 0.4μl 10μM 配列−４ 0.4μl 水 10.15μl LA Taqホ゜リメラーセ゛ 0.15μl 総量 15 μl ＰＣＲサイクルは、９４℃で５分保持後、９４℃で1分
反応させ、５８℃１分保持し、更に７２℃で１分間保持
を３０回繰り返して行った。PCR反応液を、１％アガロ
ースゲル電気泳動で分画した。ゲルをエチジウムブロマ
イドで染色した後、紫外光照射して増幅される約５００
ｂｐのバンドを検出した。また同様に、標準ｃＤＮＡとしてGlyceraldehyde3-Phosphate Dehydrogen
ase遺伝子増幅プライマー（Ｇ３ＰＤＨ：クローンテッ
ク社製）を用いてＰＣＲを行い検定した。その結果、第
３図に示すように、酸化ＬＤＬ負荷マクロファージにお
いてｐｇｔｈｍＲＮＡの発現が強く誘導されていた。

【００５５】正常単球、あるいは酸化ＬＤＬ負荷したマ
クロファージあるいは、同等の培養細胞に化合物を添加
して培養後、上記方法でＰＧＴＨのｍＲＮＡの変動を測
定することで、ＰＧＴＨのｍＲＮＡ発現を調節する物質
をスクリーニングすることができる。

【００５６】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> TAISHO PHARMACEUTICAL CO.,Ltd. <120> Prostaglandin Transporter Homolog <130> P2937 <150> JP10-227723 <151> 1998-08-12 <160> 3 <210> 1 <211> 709 <212> PRT <213> Homo sapience <400> 1 Met Gly Pro Arg Ile Gly Pro Ala Gly Glu Val Pro Gln Val Pro 5 10 15 Asp Lys Glu Thr Lys Ala Thr Met Gly Thr Glu Asn Thr Pro Gly 20 25 30 Gly Lys Ala Ser Pro Asp Pro Gln Asp Val Arg Pro Ser Val Phe 35 40 45 His Asn Ile Lys Leu Phe Val Leu Cys His Ser Leu Leu Gln Leu 50 55 60 Ala Gln Leu Met Ile Ser Gly Tyr Leu Lys Ser Ser Ile Ser Thr 65 70 75 Val Glu Lys Arg Phe Gly Leu Ser Ser Gln Thr Ser Gly Leu Leu 80 85 90 Ala Ser Phe Asn Glu Val Gly Asn Thr Ala Leu Ile Val Phe Val 95 100 105 Ser Tyr Phe Gly Ser Arg Val His Arg Pro Arg Met Ile Gly Tyr 110 115 120 Gly Ala Ile Leu Val Ala Leu Ala Gly Leu Leu Met Thr Leu Pro 125 130 135 His Phe Ile Ser Glu Pro Tyr Arg Tyr Asp Asn Thr Ser Pro Glu 140 145 150 Asp Met Pro Gln Asp Phe Lys Ala Ser Leu Cys Leu Pro Thr Thr 155 160 165 Ser Ala Pro Ala Ser Ala Pro Ser Asn Gly Asn Cys Ser Ser Tyr 170 175 180 Thr Glu Thr Gln His Leu Ser Val Val Gly Ile Met Phe Val Ala 185 190 195 Gln Thr Leu Leu Gly Val Gly Gly Val Pro Ile Gln Pro Phe Gly 200 205 210 Ile Ser Tyr Ile Asp Asp Phe Ala His Asn Ser Asn Ser Pro Leu 215 220 225 Tyr Leu Gly Ile Leu Phe Ala Val Thr Met Met Gly Pro Gly Leu 230 235 240 Ala Phe Gly Leu Gly Ser Leu Met Leu Arg Leu Tyr Val Asp Ile 245 250 255 Asn Gln Met Pro Glu Gly Gly Ile Ser Leu Thr Ile Lys Asp Pro 260 265 270 Arg Trp Val Gly Ala Trp Trp Leu Gly Phe Leu Ile Ala Ala Gly 275 280 285 Ala Val Ala Leu Ala Ala Ile Pro Tyr Phe Phe Phe Pro Lys Glu 290 295 300 Met Pro Lys Glu Lys Arg Glu Leu Gln Phe Arg Arg Lys Val Leu 305 310 315 Ala Val Thr Asp Ser Pro Ala Arg Lys Gly Lys Asp Ser Pro Ser 320 325 330 Lys Gln Ser Pro Gly Glu Ser Thr Lys Lys Gln Asp Gly Leu Val 335 340 345 Gln Ile Ala Pro Asn Leu Thr Val Ile Gln Phe Ile Lys Val Phe 350 355 360 Pro Arg Val Leu Leu Gln Thr Leu Arg His Pro Ile Phe Leu Leu 365 370 375 Val Val Leu Ser Gln Val Cys Leu Ser Ser Met Ala Ala Gly Met 380 385 390 Ala Thr Phe Leu Pro Lys Phe Leu Glu Arg Gln Phe Ser Ile Thr 395 400 405 Ala Ser Tyr Ala Asn Leu Leu Ile Gly Cys Leu Ser Phe Pro Ser 410 415 420 Val Ile Val Gly Ile Val Val Gly Gly Val Leu Val Lys Arg Leu 425 430 435 His Leu Gly Pro Val Gly Cys Gly Ala Leu Cys Leu Leu Gly Met 440 445 450 Leu Leu Cys Leu Phe Phe Ser Leu Pro Leu Phe Phe Ile Gly Cys 455 460 465 Ser Ser His Gln Ile Ala Gly Ile Thr His Gln Thr Ser Ala His 470 475 480 Pro Gly Leu Glu Leu Ser Pro Ser Cys Met Glu Ala Cys Ser Cys 485 490 495 Pro Leu Asp Gly Phe Asn Pro Val Cys Asp Pro Ser Thr Arg Val 500 505 510 Glu Tyr Ile Thr Pro Cys His Ala Gly Cys Ser Ser Trp Val Val 515 520 525 Gln Asp Ala Leu Asp Asn Ser Gln Val Phe Tyr Thr Asn Cys Ser 530 535 540 Cys Val Val Glu Gly Asn Pro Val Leu Ala Gly Ser Cys Asp Ser 545 550 555 Thr Cys Ser His Leu Val Val Pro Phe Leu Leu Leu Val Ser Leu 560 565 570 Gly Ser Ala Leu Ala Cys Leu Thr His Thr Pro Ser Phe Met Leu 575 580 585 Ile Leu Arg Gly Val Lys Lys Glu Asp Lys Thr Leu Ala Val Gly 590 595 600 Ile Gln Phe Met Phe Leu Arg Ile Leu Ala Trp Met Pro Ser Pro 605 610 615 Val Ile His Gly Ser Ala Ile Asp Thr Thr Cys Val His Trp Ala 620 625 630 Leu Ser Cys Gly Arg Arg Ala Val Cys Arg Tyr Tyr Asn Asn Asp 635 640 645 Leu Leu Arg Asn Arg Phe Ile Gly Leu Gln Phe Phe Phe Lys Thr 650 655 660 Gly Ser Val Ile Cys Phe Ala Leu Val Leu Ala Val Leu Arg Gln 665 670 675 Gln Asp Lys Glu Ala Arg Thr Lys Glu Ser Arg Ser Ser Pro Ala 680 685 690 Val Glu Gln Gln Leu Leu Val Ser Gly Pro Gly Lys Lys Pro Glu 695 700 705 Asp Ser Arg Val 709 <210> 2 <211> 2130 <212> DNA <213> Homo sapience <400> 2 10 20 30 40 50 60 atgggaccca ggatagggcc agcgggtgag gtaccccagg taccagacaa ggaaaccaaa 60 gccacaatgg gcacagaaaa cacacctgga ggcaaagcca gcccagaccc tcaggacgtg 120 cggccaagtg tgttccataa catcaagctg ttcgttctgt gccacagcct gctgcagctg 180 gcgcagctca tgatctccgg ctacctaaag agctccatct ccacagtgga gaagcgcttc 240 ggcctctcca gccagacgtc ggggctgctg gcctccttca acgaggtggg gaacacagcc 300 ttgattgtgt ttgtgagcta ttttggcagc cgggtgcacc gaccccgaat gattggctat 360 ggggctatcc ttgtggccct ggcgggcctg ctcatgactc tcccgcactt catctcggag 420 ccataccgct acgacaacac cagccctgag gatatgccac aggacttcaa ggcttccctg 480 tgcctgccca caacctcggc cccagcctcg gccccctcca atggcaactg ctcaagctac 540 acagaaaccc agcatctgag tgtggtgggg atcatgttcg tggcacagac cctgctgggc 600 gtgggcgggg tgcccattca gccctttggc atctcctaca tcgatgactt tgcccacaac 660 agcaactcgc ccctctacct cgggatcctg tttgcagtga ccatgatggg gccaggcctg 720 gcctttgggc tgggcagcct catgctgcgc ctttatgtgg acattaacca gatgccagaa 780 ggtggtatca gcctgaccat aaaggacccc cgatgggtgg gtgcctggtg gctgggtttc 840 ctcatcgctg ccggtgcagt ggccctggct gccatcccct acttcttctt ccccaaggaa 900 atgcccaagg aaaaacgtga gcttcagttt cggcgaaagg tcttagcagt cacagactca 960 cctgccagga agggcaagga ctctccctct aagcagagcc ctggggagtc cacgaagaag 1020 caggatggcc tagtccagat tgcaccaaac ctgactgtga tccagttcat taaagtcttc 1080 cccagggtgc tgctgcagac cctacgccac cccatcttcc tgctggtggt cctgtcccag 1140 gtatgcttgt catccatggc tgcgggcatg gccaccttcc tgcccaagtt cctggagcgc 1200 cagttttcca tcacagcctc ctacgccaac ctgctcatcg gctgcctctc cttcccttcg 1260 gtcatcgtgg gcatcgtggt gggtggcgtc ctggtcaagc ggctccacct gggccctgtg 1320 ggatgcggtg ccctttgcct gctggggatg ctgctgtgcc tcttcttcag cctgccgctc 1380 ttctttatcg gctgctccag ccaccagatt gcgggcatca cacaccagac cagtgcccac 1440 cctgggctgg agctgtctcc aagctgcatg gaggcctgct cctgcccatt ggacggcttt 1500 aaccctgtct gcgaccccag cactcgtgtg gaatacatca caccctgcca cgcaggctgc 1560 tcaagctggg tggtccagga tgctctggac aacagccagg ttttctacac caactgcagc 1620 tgcgtggtgg agggcaaccc cgtgctggca ggatcctgcg actcaacgtg cagccatctg 1680 gtggtgccct tcctgctcct ggtcagcctg ggctcggccc tggcctgtct cacccacaca 1740 ccctccttca tgctcatcct aagaggagtg aagaaagaag acaagacttt ggctgtgggc 1800 atccagttca tgttcctgag gattttggcc tggatgccca gccccgtgat ccacggcagc 1860 gccatcgaca ccacctgtgt gcactgggcc ctgagctgtg ggcgtcgagc tgtctgtcgc 1920 tactacaata atgacctgct ccgaaaccgg ttcatcggcc tccagttctt cttcaaaaca 1980 ggttctgtga tctgcttcgc cttagttttg gctgtcctga ggcagcagga caaagaggca 2040 aggaccaaag agagcagatc cagccctgcc gtagagcagc aattgctagt gtcggggcca 2100 gggaagaagc cagaggattc ccgagtgtga 2130 <210> 3 <211> 4083 <212> DNA <213> Homo sapience <400> 3 aagtgaccca gggagacaaa cacttggaga tacttggggc tgagtttgag caagactccc 60 taacctgtgt ctggacaagt ctgatgtcct gtgtggccca agaagaactg accccgtgtc 120 tggagctccc accgttattg catccctgct gtggctcacc tgctgctgtc tccaggagcc 180 cctgagaaga tttgcctcct ctcccctgct aagctccagg tcctgagatt gaattagggg 240 ctggagctca ctgcactcca gcagtc 266 atg gga ccc agg ata ggg cca gcg ggt gag gta ccc cag gta cca 311 Met Gly Pro Arg Ile Gly Pro Ala Gly Glu Val Pro Gln Val Pro 5 10 15 gac aag gaa acc aaa gcc aca atg ggc aca gaa aac aca cct gga 356 Asp Lys Glu Thr Lys Ala Thr Met Gly Thr Glu Asn Thr Pro Gly 20 25 30 ggc aaa gcc agc cca gac cct cag gac gtg cgg cca agt gtg ttc 401 Gly Lys Ala Ser Pro Asp Pro Gln Asp Val Arg Pro Ser Val Phe 35 40 45 cat aac atc aag ctg ttc gtt ctg tgc cac agc ctg ctg cag ctg 446 His Asn Ile Lys Leu Phe Val Leu Cys His Ser Leu Leu Gln Leu 50 55 60 gcg cag ctc atg atc tcc ggc tac cta aag agc tcc atc tcc aca 491 Ala Gln Leu Met Ile Ser Gly Tyr Leu Lys Ser Ser Ile Ser Thr 65 70 75 gtg gag aag cgc ttc ggc ctc tcc agc cag acg tcg ggg ctg ctg 536 Val Glu Lys Arg Phe Gly Leu Ser Ser Gln Thr Ser Gly Leu Leu 80 85 90 gcc tcc ttc aac gag gtg ggg aac aca gcc ttg att gtg ttt gtg 581 Ala Ser Phe Asn Glu Val Gly Asn Thr Ala Leu Ile Val Phe Val 95 100 105 agc tat ttt ggc agc cgg gtg cac cga ccc cga atg att ggc tat 626 Ser Tyr Phe Gly Ser Arg Val His Arg Pro Arg Met Ile Gly Tyr 110 115 120 ggg gct atc ctt gtg gcc ctg gcg ggc ctg ctc atg act ctc ccg 671 Gly Ala Ile Leu Val Ala Leu Ala Gly Leu Leu Met Thr Leu Pro 125 130 135 cac ttc atc tcg gag cca tac cgc tac gac aac acc agc cct gag 716 His Phe Ile Ser Glu Pro Tyr Arg Tyr Asp Asn Thr Ser Pro Glu 140 145 150 gat atg cca cag gac ttc aag gct tcc ctg tgc ctg ccc aca acc 761 Asp Met Pro Gln Asp Phe Lys Ala Ser Leu Cys Leu Pro Thr Thr 155 160 165 tcg gcc cca gcc tcg gcc ccc tcc aat ggc aac tgc tca agc tac 806 Ser Ala Pro Ala Ser Ala Pro Ser Asn Gly Asn Cys Ser Ser Tyr 170 175 180 aca gaa acc cag cat ctg agt gtg gtg ggg atc atg ttc gtg gca 851 Thr Glu Thr Gln His Leu Ser Val Val Gly Ile Met Phe Val Ala 185 190 195 cag acc ctg ctg ggc gtg ggc ggg gtg ccc att cag ccc ttt ggc 896 Gln Thr Leu Leu Gly Val Gly Gly Val Pro Ile Gln Pro Phe Gly 200 205 210 atc tcc tac atc gat gac ttt gcc cac aac agc aac tcg ccc ctc 941 Ile Ser Tyr Ile Asp Asp Phe Ala His Asn Ser Asn Ser Pro Leu 215 220 225 tac ctc ggg atc ctg ttt gca gtg acc atg atg ggg cca ggc ctg 986 Tyr Leu Gly Ile Leu Phe Ala Val Thr Met Met Gly Pro Gly Leu 230 235 240 gcc ttt ggg ctg ggc agc ctc atg ctg cgc ctt tat gtg gac att 1031 Ala Phe Gly Leu Gly Ser Leu Met Leu Arg Leu Tyr Val Asp Ile 245 250 255 aac cag atg cca gaa ggt ggt atc agc ctg acc ata aag gac ccc 1076 Asn Gln Met Pro Glu Gly Gly Ile Ser Leu Thr Ile Lys Asp Pro 260 265 270 cga tgg gtg ggt gcc tgg tgg ctg ggt ttc ctc atc gct gcc ggt 1121 Arg Trp Val Gly Ala Trp Trp Leu Gly Phe Leu Ile Ala Ala Gly 275 280 285 gca gtg gcc ctg gct gcc atc ccc tac ttc ttc ttc ccc aag gaa 1166 Ala Val Ala Leu Ala Ala Ile Pro Tyr Phe Phe Phe Pro Lys Glu 290 295 300 atg ccc aag gaa aaa cgt gag ctt cag ttt cgg cga aag gtc tta 1211 Met Pro Lys Glu Lys Arg Glu Leu Gln Phe Arg Arg Lys Val Leu 305 310 315 gca gtc aca gac tca cct gcc agg aag ggc aag gac tct ccc tct 1256 Ala Val Thr Asp Ser Pro Ala Arg Lys Gly Lys Asp Ser Pro Ser 320 325 330 aag cag agc cct ggg gag tcc acg aag aag cag gat ggc cta gtc 1301 Lys Gln Ser Pro Gly Glu Ser Thr Lys Lys Gln Asp Gly Leu Val 335 340 345 cag att gca cca aac ctg act gtg atc cag ttc att aaa gtc ttc 1346 Gln Ile Ala Pro Asn Leu Thr Val Ile Gln Phe Ile Lys Val Phe 350 355 360 ccc agg gtg ctg ctg cag acc cta cgc cac ccc atc ttc ctg ctg 1391 Pro Arg Val Leu Leu Gln Thr Leu Arg His Pro Ile Phe Leu Leu 365 370 375 gtg gtc ctg tcc cag gta tgc ttg tca tcc atg gct gcg ggc atg 1436 Val Val Leu Ser Gln Val Cys Leu Ser Ser Met Ala Ala Gly Met 380 385 390 gcc acc ttc ctg ccc aag ttc ctg gag cgc cag ttt tcc atc aca 1481 Ala Thr Phe Leu Pro Lys Phe Leu Glu Arg Gln Phe Ser Ile Thr 395 400 405 gcc tcc tac gcc aac ctg ctc atc ggc tgc ctc tcc ttc cct tcg 1526 Ala Ser Tyr Ala Asn Leu Leu Ile Gly Cys Leu Ser Phe Pro Ser 410 415 420 gtc atc gtg ggc atc gtg gtg ggt ggc gtc ctg gtc aag cgg ctc 1571 Val Ile Val Gly Ile Val Val Gly Gly Val Leu Val Lys Arg Leu 425 430 435 cac ctg ggc cct gtg gga tgc ggt gcc ctt tgc ctg ctg ggg atg 1616 His Leu Gly Pro Val Gly Cys Gly Ala Leu Cys Leu Leu Gly Met 440 445 450 ctg ctg tgc ctc ttc ttc agc ctg ccg ctc ttc ttt atc ggc tgc 1661 Leu Leu Cys Leu Phe Phe Ser Leu Pro Leu Phe Phe Ile Gly Cys 455 460 465 tcc agc cac cag att gcg ggc atc aca cac cag acc agt gcc cac 1706 Ser Ser His Gln Ile Ala Gly Ile Thr His Gln Thr Ser Ala His 470 475 480 cct ggg ctg gag ctg tct cca agc tgc atg gag gcc tgc tcc tgc 1751 Pro Gly Leu Glu Leu Ser Pro Ser Cys Met Glu Ala Cys Ser Cys 485 490 495 cca ttg gac ggc ttt aac cct gtc tgc gac ccc agc act cgt gtg 1796 Pro Leu Asp Gly Phe Asn Pro Val Cys Asp Pro Ser Thr Arg Val 500 505 510 gaa tac atc aca ccc tgc cac gca ggc tgc tca agc tgg gtg gtc 1841 Glu Tyr Ile Thr Pro Cys His Ala Gly Cys Ser Ser Trp Val Val 515 520 525 cag gat gct ctg gac aac agc cag gtt ttc tac acc aac tgc agc 1886 Gln Asp Ala Leu Asp Asn Ser Gln Val Phe Tyr Thr Asn Cys Ser 530 535 540 tgc gtg gtg gag ggc aac ccc gtg ctg gca gga tcc tgc gac tca 1931 Cys Val Val Glu Gly Asn Pro Val Leu Ala Gly Ser Cys Asp Ser 545 550 555 acg tgc agc cat ctg gtg gtg ccc ttc ctg ctc ctg gtc agc ctg 1976 Thr Cys Ser His Leu Val Val Pro Phe Leu Leu Leu Val Ser Leu 560 565 570 ggc tcg gcc ctg gcc tgt ctc acc cac aca ccc tcc ttc atg ctc 2021 Gly Ser Ala Leu Ala Cys Leu Thr His Thr Pro Ser Phe Met Leu 575 580 585 atc cta aga gga gtg aag aaa gaa gac aag act ttg gct gtg ggc 2066 Ile Leu Arg Gly Val Lys Lys Glu Asp Lys Thr Leu Ala Val Gly 590 595 600 atc cag ttc atg ttc ctg agg att ttg gcc tgg atg ccc agc ccc 2111 Ile Gln Phe Met Phe Leu Arg Ile Leu Ala Trp Met Pro Ser Pro 605 610 615 gtg atc cac ggc agc gcc atc gac acc acc tgt gtg cac tgg gcc 2156 Val Ile His Gly Ser Ala Ile Asp Thr Thr Cys Val His Trp Ala 620 625 630 ctg agc tgt ggg cgt cga gct gtc tgt cgc tac tac aat aat gac 2201 Leu Ser Cys Gly Arg Arg Ala Val Cys Arg Tyr Tyr Asn Asn Asp 635 640 645 ctg ctc cga aac cgg ttc atc ggc ctc cag ttc ttc ttc aaa aca 2246 Leu Leu Arg Asn Arg Phe Ile Gly Leu Gln Phe Phe Phe Lys Thr 650 655 660 ggt tct gtg atc tgc ttc gcc tta gtt ttg gct gtc ctg agg cag 2291 Gly Ser Val Ile Cys Phe Ala Leu Val Leu Ala Val Leu Arg Gln 665 670 675 cag gac aaa gag gca agg acc aaa gag agc aga tcc agc cct gcc 2336 Gln Asp Lys Glu Ala Arg Thr Lys Glu Ser Arg Ser Ser Pro Ala 680 685 690 gta gag cag caa ttg cta gtg tcg ggg cca ggg aag aag cca gag 2381 Val Glu Gln Gln Leu Leu Val Ser Gly Pro Gly Lys Lys Pro Glu 695 700 705 gat tcc cga gtg tga 2396 Asp Ser Arg Val 709 gctgtcttgg ggccccacct ggccaagagt agcagccaca gcagtacctc ctctgagtcc 2456 tttgcccaag attgggtgtc aagagccctg tgttccattc tggctcctcc actaaattgc 2516 tgtgtgactt caggcaagac attgatcctc tctcagcctt tgcttgctag tctgaaccaa 2576 agagttgttt gggcatttgc tgtgttggcc atttctggag caagagggtc ttcttcctcc 2636 ttcccccagc cagccagctg tcctggggcc aggctttcct gggtggaaag aagtatacct 2696 ttccctgggg ccctaggata gcaaagtgag ccatagtggg ccaggctgcc ctccatgctg 2756 ggccccagcc caggtctgca ctcgcctgga tcaccttctt tgagccttag ccatctcctg 2816 tcaggtagga atgaacttgc cagccttcag gctcgttcag ctatgaccat ctgtgcggtc 2876 agggtacact cagctctcct ccccaactcc agcagccttt aagaagtgtc cctttggcgc 2936 cccctggagg cagagcactg agctggaccc tgggtagact cccacaggga ggacggagct 2996 ggcctcagga gtgggacacc cagacttggc agggccttca agaggcctgt gtgggggccc 3056 caggaatcct tagctgaagc ggggagactc actctccatc tcaggaaatt ctagcccttg 3116 ccctcaggga gccacggttg agggtgaggc ccaacacctg ccttagggcc ctgggtgggc 3176 aagtctgggc cctggggtag ggagggagac tcaggcccac acttgggtat tttctaattt 3236 cagacaaaca cacactcagc gcgcactcac tgattcctac acattgccaa gatttcacac 3296 atgtgaccag gggccaccaa agtccctgtg acctttgtga ctaggatcct aatttctcta 3356 ttttctcctg ggtgcctggg tctgtgtcac ctggggcagt gtggataatg tttagttctg 3416 tgacactgtt ttttgggggt ggcacctggt tctccgatgc ctgggctggt gtcaggccca 3476 ggactgtagt gctgggagca gtaaagctca gctctgtgta atgagtgatg ctatggcttg 3536 ctcgtgtctt atgatccaat ccttttctac atcagccctt gttttgtttt atggctagtc 3596 ttatctggcc tggttatttc cttgcgggga ggagagggtt tgctaatctg ctcccagccc 3656 aacctattac caccccacct cgctgggacc tactgctcgg gaggcagcag acagggagcc 3716 accagcagtg gcttcctggc cctgtgctgg gggtgggggg aagctggggg cacatgtggc 3776 ccttgccttc tgagcagctc ccagtgccag ggctttgaga ctttcccaca tgataaaaga 3836 aaagggaggt acagaagttc caattccctt tttattttgc tggttggtat ctgtaaatgt 3896 ttaataaata tctgagcatg tatctatcaa cgccaagaat ttcaaagtct ccttcaacaa 3956 tatgaggctt ttaggatgtt tatattcctt catccctctt gtttcccagg ttttgcaggg 4016 aaaaaaagtc tggaattata gatacagctt attattaaat ttgttcttgc ataaaaaaaa 4076 aaaaaaa 4083

【図面の簡単な説明】

【図１】ｈＰＧＴと本発明であるＰＧＴＨとの、アミノ
酸配列の相同性の比較を示す。

【図２】ｐｇｔｈを用いてin vitroトランスレーション
法により発現させたＰＧＴＨのSDS-PAGEの結果を示す。

【図３】ヒト酸化ＬＤＬ負荷マクロファージでのｐｇｔ
ｈの発現を、ＲＴ−ＰＣＲ法を用い、ｍＲＮＡで検出し
た結果を示す。図中において、ｏはヒト酸化ＬＤＬ負荷
マクロファージでの、ｍはヒト正常単球でのそれぞれの
検出結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者長瀬隆弘千葉県木更津市矢那1532番３号財団法人かずさディー・エヌ・エー研究所内 (72)発明者野村信夫千葉県木更津市矢那1532番３号財団法人かずさディー・エヌ・エー研究所内 (72)発明者高山喜好東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内 (72)発明者豊田均東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内 (72)発明者吉本真東京都豊島区高田３丁目24番１号大正製薬株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】以下の（ａ）または（ｂ）の蛋白質；（ａ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列からなる蛋白
質；（ｂ）配列番号：１のアミノ酸配列において１もしくは
数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ
酸配列からなり、かつプロスタグランジン輸送活性を有
する蛋白質。
【請求項２】以下の（ａ）または（ｂ）のＤＮＡ（ａ）配列番号：２に記載の塩基配列からなるＤＮＡ（ｂ）配列番号：２のＤＮＡとストリンジェントな条件
でハイブリダイズし、かつプロスタグランジン輸送活性
を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。