JP2000007562A - レトロウイルス感染に伴う免疫不全発症予防薬及び進行抑制薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】より安全で効果の高いレトロウイルス感染に伴
う免疫不全発症の予防薬及び治療薬を開発し、ＨＩＶ感
染者の免疫不全発症の予防及び発症後の症状の進行を抑
制する薬剤、或いはＦＩＶ等の動物レトロウイルス感染
に伴う動物の免疫不全症を予防及び発症後の症状の進行
を抑制する薬剤を提供すること。 【解決手段】コナゲニン及びその薬学的に許容される塩
からなる群より選ばれた少なくとも１種を有効成分とす
るレトロウイルス感染に伴う免疫不全発症予防薬又は進
行抑制薬。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、レトロウイルス感
染に伴う免疫不全発症予防薬及び進行抑制薬に関する。

【０００２】

【従来の技術】レトロウイルス感染に伴う免疫不全症と
しては、ヒトレトロウイルス（ＨＩＶ）の感染によるヒ
ト後天性免疫不全症候群〔(acquired immunodeficiency
syndrome (AIDS)、以下、エイズという〕、サルレトロ
ウイルス（ＳＩＶ）の感染によるサルエイズ、ネコレト
ロウイルス（ＦＩＶ）の感染によるネコエイズ及びネズ
ミ白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）の感染によるネズミエイ
ズが知られている。これらのレトロウイルスは、免疫中
枢を担うＴ細胞等に感染しその感染細胞を破壊すること
により生体の免疫系の恒常性を乱し免疫不全を引き起こ
すと考えられている。例えば、ＨＩＶ感染の場合、生体
の免疫の中枢を担う末梢血中のＣＤ４⁺ 細胞が減少し免
疫不全に陥ることが知られている。

【０００３】なかでも、ヒトエイズに関しては、１９９
６年７月までに米国防疫センターに報告されたエイズ症
例数は、米国だけを見ても５５万人を越え、うち３４万
人が既に死亡している。この様な状況から、ＨＩＶ感染
者におけるエイズの発症予防法と治療法の開発は急務と
なっており、あらゆる角度から抗ＨＩＶ物質の開発が進
められている。

【０００４】現在、核酸誘導体であるＡＺＴ（3'-azido
-3'-deoxythymidine）、ｄｄＩ(2',3'-dideoxyinosin
e)、ｄｄＣ(2',3'-dideoxycytidine）、ｄ４Ｔ(2',3'-d
ideoxy-2',3'-didehydrothymidine ）、３ＴＣ(3'-thia
cytidine) 、プロテアーゼ阻害剤であるsaquinavir(Ro3
1-8959), ritonavir(ABT-538), indinavir(MK-639)等の
抗ＨＩＶ物質が国内外で臨床応用されており、ある程度
の効果が期待されている〔Mituya et. al., Proc. Nat
l. Acad. Sci. USA, 84, 2033, (1987); Eiseman,J. L.
et al., Antiviral Res., 16, 307, (1991)；Cameron,
D. W. et al.,XIInternational Conferance on AIDS.
Vancouver, 25（要約），(1996)〕。しかしながら、前
記抗ＨＩＶ物質は、強い骨髄抑制等の副作用を有するこ
とも知られている〔Molina, J. M. et al., N. Engl.
J. Med, 321, 1478, (1989)〕。さらに、抗腫瘍剤であ
るアドリアマイシン等も抗ＨＩＶ作用を有することが知
られているが、顕著な効果は認められていない。前記し
たように、種々のエイズ発症予防法及び治療法が検討さ
れているが、何れも感染者増加の抑制を期待できる程の
ものではなく、その効果は限られたものとなっている。

【０００５】一方、動物においても、前記したように、
ヒトエイズ様の免疫不全症候群が知られている。例え
ば、ＦＩＶの感染は、日本国内のネコの３０％に認めら
れ、感染したネコの５〜１０％の個体がネコエイズを発
症すると云われている〔Bendinelli, M. et al., Clin.
Microbiol. Rev., 8, 87, (1995) 〕。前記ネコエイズ
は、一旦発症するとほぼ１００％死亡するため、ネコの
病気としてペット愛好家から恐れられているが、その発
症を予防又は治療し得る薬剤は開発されていないのが現
状である。

【０００６】以上のことから、より安全で効果の高いレ
トロウイルス感染に伴う免疫不全症の予防及び治療剤の
開発が待たれている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、前記従来の
技術に鑑みてなされたものであり、より安全で効果の高
いレトロウイルス感染に伴う免疫不全発症の予防薬及び
治療薬を開発し、ＨＩＶ感染者の免疫不全発症の予防及
び発症後の症状の進行を抑制する薬剤、或いはＦＩＶ等
の動物レトロウイルス感染に伴う動物の免疫不全症を予
防及び発症後の症状の進行を抑制する薬剤を提供するこ
とを目的とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】コナゲニンは、癌の化学
療法剤として知られており（特開平２−３０６９５３号
公報又は米国特許第５０９８９３５号明細書）、その人
体に対する毒性が非常に低いことが知られている。ま
た、コナゲニンは血小板及び白血球増加作用を示すこ
と、全身性の副作用軽減作用があることも認められてい
るが（特開平５−２２９９３９号公報、特開平６−６５
０７２号公報）、レトロウイルス感染に伴う免疫不全症
の予防及び進行抑制作用は全く知られていない。

【０００９】本発明者らは、下記のエイズ治療薬のスク
リーニング法等により、コナゲニンの病態への影響を検
討した結果、驚くべく、エイズの発症及び病態の進行を
遅らせることを見いだした。

【００１０】マウスを用いるエイズ治療薬のスクリーニ
ング法としては、例えば、ＨＩＶ全ゲノムを導入したト
ランスジェニックマウスと正常マウスを交配して得られ
たＦ１マウスを用いるモデル（Leonard, J. M. et al.,
Science, 242, 1665, (1988) 〕、SCID-hu マウスにＨ
ＩＶ−１を静脈注射するモデル〔Kaneshima et al.,Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 4523, (1991)〕及びヒ
トのエイズに類似した免疫不全症候群（Murine Aquired
Immunodeficiency Syndrome:MAIDS）を発症させるＭｕ
ＬＶ感染モデルを用いる方法が知られている。また、そ
の他の動物を用いるスクリーニング法としては、ヒトの
エイズに類似した免疫不全症を発症させるＦＩＶ感染ネ
コモデルを用いる方法、さらに、チンパンジー、ギボン
サルにＨＩＶ−１を感染させた霊長類のモデルを用いる
方法等が知られている。

【００１１】本発明者らは、前記方法の中で、比較的簡
便に実験が行なうことができ、しかも、ヒトエイズ発症
時に認められる免疫不全症を検出できるのみでなく、Ｂ
細胞や単核球の増殖に起因するＢ細胞の急激な活性化高
ガンマグロブリン血症、さらにＢ細胞や単核球の増殖に
起因する頑固なリンパ節腫脹〔Fauci, A. S., Science,
262, 1011, (1993)〕が観察されるという点でもヒトの
エイズに類似しているモデルであるＭｕＬＶ（ＬＰＢＭ
−５）感染モデル〔Watoson, R. R., Life Science, 4
4, 3, (1989); Simard, C. & Jolicoeur, P., Science,
251, 305, (1991)〕を用いて検討を行った。本発明者
らは、コナゲニンをＭｕＬＶ（ＬＰＢＭ−５）感染マウ
スに投与したところ、この化合物がマウスエイズの発症
及び病態の進行を遅らせることを見いだした。さらに検
討を加え本発明を完成させるに至った。

【００１２】すなわち本発明の要旨は、（１） コナゲ
ニン及びその薬学的に許容される塩からなる群より選ば
れた少なくとも１種を有効成分とするレトロウイルス感
染に伴う免疫不全発症予防薬又は進行抑制薬、（２）
レトロウイルス感染に伴う免疫不全症がヒトレトロウイ
ルス（ＨＩＶ）感染によるヒトエイズである、前記
（１）記載のレトロウイルス感染に伴う免疫不全発症予
防薬又は進行抑制薬、（３） レトロウイルス感染に伴
う免疫不全症が動物レトロウイルス感染による動物エイ
ズである、前記（１）記載のレトロウイルス感染に伴う
免疫不全発症予防薬又は進行抑制薬、に関する。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明のレトロウイルス感染に伴
う免疫不全発症予防薬及び進行抑制薬は、式（Ｉ）：

【００１４】

【化１】

【００１５】で示されるコナゲニン、すなわち(2S)-N-
[(2R,3S,4R)2,4-dihydroxy-3-methyl-pentanoyl]-2-met
hylserine、及びその薬学的に許容される塩からなる群
より選ばれた少なくとも１種を有効成分とする。

【００１６】本発明においては、コナゲニン及びその薬
学的に許容される塩からなる群より選ばれた少なくとも
１種を用いることに１つの大きな特徴がある。毒性が非
常に低いコナゲニン及びその薬学的に許容される塩から
なる群より選ばれた少なくとも１種を用いるため、本発
明のレトロウイルス感染に伴う免疫不全発症予防薬及び
進行抑制薬は、非常に副作用が少なく優れた効果を発現
する。

【００１７】前記コナゲニンは、天然由来のコナゲニン
を用いてもよく、化学合成したコナゲニンを用いてもよ
い。

【００１８】前記天然由来のコナゲニンは、ストレプト
ミセス属に属するコナゲニン生産菌の培養物から採取で
き、例えば、前記特開平２−３０６９５３号公報に記載
の製造法等により得ることができる。

【００１９】また、前記コナゲニンは、塩を形成するこ
とがあるが、形成したコナゲニンの塩のなかで、薬学的
に許容される塩を用いることができる。前記薬学的に許
容される塩としては、特に限定はないが、例えば、コナ
ゲニンのカルボキシル基における塩等が挙げられる。例
えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアル
カリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカ
リ土類金属塩、アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、
ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩、アンモニウム塩等
の無機塩、ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン
塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシン
アルキルエステル塩、エチレンジミン塩、Ｎ−メチルグ
ルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエ
チルアミン塩、ジシクヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジ
ベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン塩、プロ
カイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェ
ネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニ
ウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩等
の有機塩等のアミン塩、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化
水素酸塩、沃化水素酸塩等のハロゲン化水素酸塩、硝酸
塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、メタ
ンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エ
タンスルホン酸塩等の低級アルカンスルホン酸、ベンゼ
ンスルホン酸塩等のアリールスルホン酸塩、酢酸塩、リ
ンゴ酸塩、フマール酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒
石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩、グリ
シン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グル
タミン酸塩、アスパラギン酸塩等のアミノ酸塩等が挙げ
られる。また、コナゲニンの薬学的に許容される塩は、
水和物となる場合があるが、そのような塩も薬学的に許
容される塩に包含される。

【００２０】レトロウイルス感染に伴う免疫不全症に対
する前記コナゲニン又はその薬学的に許容される塩の薬
理作用は、例えば、マウスエイズモデルを用いて、レト
ロウイルス感染に伴う脾臓重量、脾臓細胞数、脾細胞幼
若化反応、ＣＤ４／ＣＤ８、脾細胞によるインターフェ
ロンγ（ＩＦＮ−γ）産生能などを測定する評価試験等
により示される。前記評価試験により、脾臓重量及び所
属リンパ節の腫大の抑制、細胞数の増加の抑制、脾リン
パ球機能の変化の改善、ＣＤ４／ＣＤ８の上昇の抑制、
ＩＦＮ−γ産生能の改善が認められることにより、免疫
不全発症の予防、発症後の症状の進行の抑制に有効であ
ると考えられる。

【００２１】マウスエイズモデルの１つであるＭｕＬＶ
（ＬＰ−ＢＭ５）感染マウスでは、エイズ発症に伴い脾
臓重量及び所属リンパ節の著しい腫大が認められるがコ
ナゲニンを投与することにより、これらの腫大が軽減さ
れることが認められる。

【００２２】また、ＬＰ−ＢＭ５感染に伴い脾細胞数は
脾臓の腫大と相まって増加する傾向が認められる。コナ
ゲニンを投与することにより、ＬＰ−ＢＭ５感染マウス
における脾細胞数の増加は抑制されることが認められ
る。

【００２３】ＬＰ−ＢＭ５感染に伴い脾細胞のＴ細胞マ
イトジェン（ＰＨＡ、ＣｏｎＡ）に対する幼若化能は著
しい低下を示し、Ｂ細胞マイトジェン（ＬＰＳ）に対す
る幼若化能は逆に著しく亢進するが、コナゲニン投与に
よりこれら脾リンパ球機能の変化が改善されることが認
められる。

【００２４】ＬＰ−ＢＭ５感染後、病態の進行に伴い、
ＣＤ８シングルポジテイブＴ細胞の減少とそれに伴うＣ
Ｄ４／ＣＤ８の上昇が生じるが、コナゲニンを投与する
ことによりＣＤ４／ＣＤ８の上昇は抑制されることが認
められる。

【００２５】脾細胞からのＩＦＮ−γ産生能は、ＬＰ−
ＢＭ５感染により著しい低下を示すが、コナゲニンの投
与により改善される。

【００２６】前記したような結果により、コナゲニン
は、免疫不全発症後の症状の進行の抑制のみならず、免
疫不全発症の予防にも有効であると考えられる。

【００２７】本発明のレトロウイルス感染に伴う免疫不
全発症予防薬及び進行抑制薬を適用しうる免疫不全とし
ては、ＨＩＶ感染によるヒトエイズ、動物レトロウイル
ス感染による、サルエイズ、ネコエイズ、ネズミエイズ
等の動物エイズが挙げられる。

【００２８】本発明のレトロウイルス感染に伴う免疫不
全発症予防薬及び進行抑制薬は、前記コナゲニン又はそ
の薬学的に許容される塩を、常用の製剤用担体と適量配
合し、医薬組成物又は動物薬組成物として製剤化でき
る。

【００２９】また、本発明のレトロウイルス感染に伴う
免疫不全発症予防薬及び進行抑制薬の剤形は、特に限定
されないが、投与形態、目的等に応じて、その剤形を決
定すればよい。具体的には、錠剤、被覆錠剤、丸剤、散
剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤
等の経口剤、及び注射剤、坐剤、軟膏剤、硬膏剤、貼付
剤、エアゾール剤等の非経口剤があげられ、これらは、
常法により製造することができる。

【００３０】前記製剤用担体としては、通常使用される
薬学的に許容される各種の添加剤、例えば、賦形剤、結
合剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、保湿剤、吸収剤、滑沢剤、
安定化剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、ｐＨ調整剤、緩衝
剤、吸収促進剤、局所麻酔剤、界面活性剤、希釈剤、基
剤等を使用することができる。さらに、前記各製剤に
は、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味
剤等や他の医薬品を含有させてもよい。

【００３１】具体的には、前記錠剤を製造する場合に
は、担体として、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウ
ム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオ
リン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤；単シロッ
プ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキ
シメチルセルロース、シェラック、メチルセルロース、
リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤；乾
燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラ
ン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキ
シエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸
ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、
乳糖等の崩壊剤；白糖、ステアリン酸、カカオバター、
水素添加油等の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩、ラ
ウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン、デ
ンプン等の保湿剤；デンプン、乳糖、カオリン、ベント
ナイト、コロイド状ケイ酸等の吸収剤；精製タルク、ス
テアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の
滑沢剤を使用し、常法により打錠等を行えばよい。さら
に前記錠剤は、必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例
えば、糖衣錠、ゼラチン被包剤、腸溶被錠、フィルムコ
ーテイング錠、二重錠、多層錠等とすることができる。

【００３２】前記丸剤を製造する場合には、担体とし
て、例えば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ油、硬
化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴ
ム、トラガント、ゼラチン等の結合剤、ラミナリン、寒
天等の崩壊剤等を用い、常法により調製することができ
る。

【００３３】前記カプセル剤を製造する場合には、常法
に従い前記有効成分を前記製剤用担体と混合して硬化ゼ
ラチンカプセル、軟質カプセル等に充填して調製され
る。

【００３４】また、本発明のレトロウイルス感染に伴う
免疫不全発症予防薬及び進行抑制薬においては、前記有
効成分に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等の担体を
加えて、常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル
剤等の経口用液体製剤を製造することもできる。この場
合、矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が
使用でき、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安
定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等
が使用できる。

【００３５】注射剤を製造する場合には、液剤、乳剤及
び懸濁剤は、滅菌状態であることが必要であり、かつ血
液と等張であることが好ましい。注射剤の調製には、希
釈剤として、例えば、水、エチルアルコール、マクロゴ
ールプロピレングリコール、エトキシ化イソステアリル
アルコール、ポリオキシ化イソステアリールアルコー
ル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等
を使用することができる。なお、この場合、血液と等張
である溶液を調製するために十分な量の食塩、ブドウ糖
あるいはグリセリンを医薬製剤中に含有させてもよく、
また、pH調整剤、緩衝剤、安定化剤、局所麻酔剤等を添
加してもよい。前記 pH 調整剤及び緩衝剤としては、例
えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナ
トリウム、重炭酸ナトリウム等があげられる。前記安定
化剤としては、ピロ亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミ
ン四酢酸、チオグリコール酸、チオ乳酸等があげられ
る。前記局所麻酔剤としては、塩酸プロカイン、塩酸リ
ドカイン等があげられる。

【００３６】坐剤を製造する場合には、前記有効成分
に、基剤、さらに必要に応じて界面活性剤等を加えた
後、常法により製造することができる。前記基剤として
は、例えばラノリン、カカオ油、脂肪酸トリグリセライ
ド、ウイテプゾール（ダイナマイトノーベルズ社製）等
の油性基剤や、マクロゴール等の水溶性基剤を用いるこ
とができる。

【００３７】軟膏剤を製造する場合には、前記有効成分
に、通常使用される基剤、安定化剤、湿潤剤、保存剤等
の担体を必要に応じ配合し、常法により混合し、製剤化
すればよい。前記基剤としては流動パラフィン、白色ワ
セリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアルコー
ル、パラフィン等が挙げられる。保存剤としてはパラオ
キシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラ
オキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。

【００３８】貼付剤を製造する場合には、通常使用され
る支持体に、前記軟膏剤、ペースト状製剤、クリーム状
製剤、ゲル状製剤等を常法により塗布することにより製
造すればよい。支持体としては綿、スフ、化学繊維から
なる織布、不織布や軟質塩化ビニル、ポリエチレン、ポ
リウレタン等のフィルムあるいは発泡体シートが望まし
い。

【００３９】本発明のレトロウイルス感染に伴う免疫不
全発症予防薬及び進行抑制薬中に含有するコナゲニン又
はその薬学的に許容される塩の量としては、特に限定さ
れず広範囲に選択されるが、好ましくは０．２重量％以
上、より好ましくは０．３重量％以上であることが望ま
しく、好ましくは９０重量％以下、より好ましくは８０
重量％以下であることが望ましい。

【００４０】本発明のレトロウイルス感染に伴う免疫不
全発症予防薬及び進行抑制薬の投与法としては、特に制
限はなく、各種製剤形態、患者又は動物の年齢、性別、
その他の条件、疾患の程度等に応じて適宜決定すればよ
い。例えば、錠剤、丸剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、
懸濁剤、乳剤は経口投与される。注射剤は単独で又はブ
ドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与
され、さらに必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下も
しくは腹腔内投与される。坐剤は直腸内投与される。軟
膏剤は皮膚、口腔内粘膜等に塗布される。

【００４１】本発明のレトロウイルス感染に伴う免疫不
全発症予防薬及び進行抑制薬により、投与されるコナゲ
ニンの投与量は、患者あるいは動物の症状、体重、年
齢、性別、その他の条件等に応じて適宜選択される。非
経口投与の場合、投与量は、通常成人１人当たりコナゲ
ニンとして約０．１ｍｇ以上であり、好ましくは０．５
ｍｇ以上であることが望ましく、５ｇ以下であり、４ｇ
以下であることが望ましい。経口投与の場合、通常成人
１人当たりコナゲニンとして０．５ｍｇ以上であり、好
ましくは１ｍｇ以上であることが望ましく、５ｇ以下で
あり、４ｇ以下であることが望ましい。

【００４２】本発明のレトロウイルス感染に伴う免疫不
全発症予防薬及び進行抑制薬を投与する回数は、患者あ
るいは動物の症状、体重、年齢、性別、その他の条件等
に応じて適宜選択されるが、４日に１回又は２〜４回程
度に分けて投与することが望ましい。

【００４３】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明をより具体的に説
明する。

【００４４】実施例１ マウスレトロウイルスＬＰ−ＢＭ５ ＭｕＬＶ（以下、
ＬＰ−ＢＭ５と略す）感染によるマウスエイズモデルに
対する効果、ＬＰ−ＢＭ５感染モデルの作製及び病態の
評価は、ワトソンらの方法〔Y. Wang, D. S. Huang, S.
Wood, R. R. Watson, Immunopharmacology, 29, 225,
(1995)〕を基づいて実施した。

【００４５】ＬＰ−ＢＭ５の調製及びプラーク形成単位
（ＰＦＵ）の測定は、公知の方法〔Laterjet, R.及びDu
plan, J. F., Int. J. Radiat. Biol., 5, 339, (196
2)；Chattropadhyay, S. K. et al. Proc. Natl. Acad.
Sci. USA., 86, 3862, (1989)〕を参考に行った。

【００４６】コナゲニンは、前記特開平２−３０６９５
３号公報に記載の製造法と同様にして製造したものを用
いた。

【００４７】４週齡のＣ５７ＢＬ／６雌マウス４０匹
を、各１０匹ずつ４群に分け、無処置対照群、ＬＰ−Ｂ
Ｍ５感染後生理食塩水を投与する群（以下、ＬＰ−ＢＭ
５感染対照群という）、ＬＰ−ＢＭ５感染マウスにコナ
ゲニンを５ｍｇ／ｋｇになるように投与する群（以下、
５ｍｇ／ｋｇ投与群という）、及びＬＰ−ＢＭ５感染マ
ウスにコナゲニンを５０ｍｇ／ｋｇになるように投与す
る群（以下、５０ｍｇ／ｋｇ投与群という）を設けた。

【００４８】ＬＰ−ＢＭ５の感染は、マウス腹腔内にＬ
Ｐ−ＢＭ５（４．５ｌｏｇ₁₀ＰＦＵ／ｍｌ）浮遊液０．
１ｍｌを注射することにより行った。生理食塩水に溶解
したコナゲニンあるいは生理食塩水の腹腔内投与は５回
／週の割合で、ＬＰ−ＢＭ５感染当日から実験終了まで
続けた。感染マウスが通常エイズを発症する時期である
感染１３週間後のマウスを、ネンブタール麻酔下で屠殺
し、剖検を行った。また、マウスの脾臓を無菌的に摘出
して重量を測定した後、該マウスの脾臓から脾細胞を調
製し、脾細胞数の測定、脾細胞の幼若化能及びＩＦＮ−
γ産生能の評価を行った。実験期間中、固形食及び飲料
水は自由摂取とし、体重を週２回測定した。

【００４９】脾細胞は、脾臓重量を測定した後、ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地（大日本製薬株式会社製）を含むシャー
レ内でステンレススチール製のメッシュに通し、ついで
２７Ｇの注射針中を通過させ脾細胞を単離することによ
り調製した。単離した脾細胞は、０．２％酢酸溶液で１
００倍希釈した後、血球計算盤を用い顕微鏡により細胞
数を算定した。５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２−メル
カプトエタノールを含むＨＥＰＥＳ ＲＰＭＩ１６４０
培地を用い、１×１０⁶ ／ｍｌの脾細胞懸濁液を調製し
た。

【００５０】脾細胞の幼若化反応は、Ｔ細胞マイトジェ
ンであるＰＨＡ（phytohemagglutinin）及びＣｏｎＡ(c
oncanavalin A)とＢ細胞マイトジェンであるＬＰＳ（li
popolysaccharide）に対する脾細胞の幼若化能を測定す
ることにより評価した。

【００５１】脾細胞を各マイトジェン（それぞれ１０μ
ｇ／ｍｌ ＰＨＡ、５μｇ／ｍｌＣｏｎＡ又は１０μｇ
／ｍｌ ＬＰＳになるように添加）と７２時間培養後、
それぞれに１μCi／ウエルになるように³ H-チミジンを
加えた。さらに２４時間培養後、セルハーベスター（ラ
ボラトリーサイエンス社製）により細胞をグラスファイ
バーフィルター上に採取し、細胞の放射活性をベータカ
ウンター（アロカ社製）にて測定した。得られた結果
は、培地のみの放射活性と培養物の放射活性とで除した
刺激係数(Stimulation index) として表わした。

【００５２】ヘパリン処理した注射筒を用いて、下大静
脈より採取した血液２００μｌをＦＩＴＣ標識した抗マ
ウスＣＤ４モノクローナル抗体（セルテック社製）及び
ＰＥ標識したＣＤ８モノクローナル抗体（セルテック社
製）を用いて免疫染色させた後、フローサイトメーター
（ベクトンデキソン社製）を用いてリンパ球１０，００
０個当たりのＴ細胞サブセットの割合を測定することに
より、末梢血中のＴ細胞サブセットの解析を行なった。
得られた結果は、ＣＤ４とＣＤ８のシングルポジテイブ
Ｔ細胞比として表わした。

【００５３】脾細胞からのインターフェロンγ（ＩＦＮ
−γ）産生能は、脾細胞をＣｏｎＡと２４時間in vitro
培養した際の培養上清中のＩＦＮ−γをＥＬＩＳＡ法に
より測定した。

【００５４】体重及び脾臓重量測定結果 体重については各群間に差異は認められず、実験終了時
まで各群とも同様の体重増加を示し、屠殺時には各群と
も実験開始時の約２倍に増加した。

【００５５】脾臓重量測定により、ＬＰ−ＢＭ５感染に
伴う脾臓腫大に対するコナゲニンの抑制効果を評価した
結果を表１に示す。

【００５６】

【表１】

【００５７】表１に示すように、ＬＰ−ＢＭ５感染マウ
スでは、エイズ発症に伴い脾臓重量及び所属リンパ節の
著しい腫大が認められた。これに対し、５ｍｇ／ｋｇ投
与群及び５０ｍｇ／ｋｇ投与群ではこれらの腫大が軽減
されていた。また、各群の脾臓重量の平均を比較しても
ＬＰ−ＢＭ５感染対照群に比較し５ｍｇ／ｋｇ投与群及
び５０ｍｇ／ｋｇ投与群において脾臓の腫大が抑制され
ており、その傾向はコナゲニン投与量が多いほど強く見
られた。

【００５８】脾細胞数測定結果 ＬＰ−ＢＭ５感染に伴う脾臓細胞数増大に対するコナゲ
ニンの抑制効果の結果を表２に示す。

【００５９】

【表２】

【００６０】表２に示すように、ＬＰ−ＢＭ５感染によ
り脾細胞数は脾臓の腫大と相まって増加する傾向を認め
た。また、コナゲニン投与群では脾臓重量と同様にＬＰ
−ＢＭ５感染対照群に比べて脾細胞数の増加は抑制され
た。

【００６１】脾細胞幼若化能測定結果 ＬＰ−ＢＭ５感染に伴う脾細胞幼若化能変化に対するコ
ナゲニンの改善効果の結果を表３に示す。

【００６２】

【表３】

【００６３】表３に示すように、ＬＰ−ＢＭ５感染に伴
い脾細胞のＴ細胞マイトジェン（ＰＨＡ、ＣｏｎＡ）に
対する幼若化能は著しい低下を示した。一方、Ｂ細胞マ
イトジェン（ＬＰＳ）に対する幼若化能は逆に著しく亢
進したが、コナゲニン投与によりこれら脾リンパ球機能
の変化が改善されることを認めた。特に５ｍｇ／ｋｇ投
与群でその作用が最も強く認められた。

【００６４】Ｔ細胞サブセット解析結果 ＬＰ−ＢＭ５は主としてＣＤ８シングルポジテイブ細胞
内に侵入し増殖することが知られている。その結果、病
態の進行に伴い、ＣＤ８シングルポジテイブＴ細胞の減
少とそれに伴うＣＤ４／ＣＤ８の上昇が知られている。

【００６５】Ｔ細胞サブセット解析により、ＬＰ−ＢＭ
５感染に伴うＣＤ４／ＣＤ８異常に対するコナゲニンの
改善効果を評価した結果を表４に示す。

【００６６】

【表４】

【００６７】表４に示すように、ＬＰ−ＢＭ５感染によ
り末梢血中のＣＤ４／ＣＤ８は非感染マウスに比較し約
２倍の上昇を示したが、コナゲニン投与群ではＬＰ−Ｂ
Ｍ５感染に伴うＣＤ４／ＣＤ８の上昇は抑制された。そ
の効果は５ｍｇ／ｋｇ投与群で強く認められた。

【００６８】脾細胞によるＩＦＮ−γ産生能測定結果 脾細胞からのＩＦＮ−γ産生能はＬＰ−ＢＭ５感染によ
り著しい低下を示した（無処置対照群の約３０％）が、
５ｍｇ／ｋｇ投与群では無処置対照群の７５％レベルま
で改善された。

【００６９】以上の表１〜４の結果から、コナゲニンが
ＬＰ−ＢＭ５等のレトロウイルス感染に伴う免疫不全症
候群の発症の予防及び症状の進行を抑制する作用を有す
ることを示す。

【００７０】実施例２ 単回投与毒性試験 コナゲニンを０、１００、５００、１０００、２０００
ｍｇ／ｋｇになるようにマウス及びラットに、静脈、腹
腔内、皮下又は経口的に単回投与し、毒性試験を行なっ
た。結果を表５に示す。

【００７１】

【表５】

【００７２】投薬したマウス、ラットのいずれも死亡は
認められず、また一般症状の異常所見は認められなかっ
た。この結果よりコナゲニンは単回投与において安全な
薬剤であることが確認された。また、従来使用されてい
るアドリアマイシン及びＡＺＴを静脈注射した場合のＬ
Ｄ₅₀はそれぞれ２１．２ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ
と報告されていることより〔Ｂｅｃｔａｚｚｏｌ，Ｇ．
ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ，２６，３８
９，（１９７０）；Ａｙｅｒｓ，Ｋ．Ｍ．，Ａｍ．Ｊ．
Ｍｅｄ．，８５，１８６，（１９８８）〕、コナゲニン
は、これらの従来使用されている薬剤に比べ安全な薬剤
であることが確認された。

【００７３】実施例３ 反復投与毒性試験 ６週齢ウイスター系雄性ラット（１群を３匹とする）の
腹腔内にコナゲニン１００ｍｇ／ｋｇを３ヶ月間反復投
与し、生理食塩水投与群を対照としてラットに対する毒
性を評価した。一般症状、尿検査、血液検査、血液生化
学検査、剖検、臓器重量及び病理検査について試験し
た。結果を表６に示した。

【００７４】

【表６】

【００７５】検査項目の判定法については「毒性試験法
ガイドライン」に従った。調査した全ての項目の一般症
状、尿検査、血液検査、血液生化学検査、剖検、臓器重
量及び病理検査に関して、コナゲニン投与群では、対照
の生理食塩水投与群と比較して、有意な変化を全く認め
なかった。即ち、コナゲニンは長期連続投与においても
極めて高い安全性を示すことが確認された。

【００７６】実施例４ 錠剤の製造

【００７７】

【表７】

【００７８】上記配合割合で、常法に従い錠剤を製造し
た。

【００７９】実施例５ 注射剤の製造

【００８０】

【表８】

【００８１】上記配合割合で、常法に従い注射剤を製造
した。

【００８２】実施例６ 注射剤の製造

【００８３】

【表９】

【００８４】上記配合割合で、常法に従い注射剤を調製
した。

【００８５】実施例７ 坐剤

【００８６】

【表１０】

【００８７】上記配合割合で、常法に従い坐剤を調製し
た。

【００８８】

【発明の効果】本発明のレトロウイルス感染に伴う免疫
不全発症予防薬及び進行抑制薬は、予防及び治療効果が
高く、さらに副作用も少なく、極めて安全性が高いとい
う優れた効果を奏する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 石塚 雅章 東京都大田区田園調布本町３丁目17番地 (72)発明者 白石 忠義 兵庫県高砂市西畑３丁目８番14号 Ｆターム(参考） 4C206 AA01 AA02 GA04 KA17 MA01 MA04 NA14 ZB33 ZC55 ZC61

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 コナゲニン及びその薬学的に許容される
   塩からなる群より選ばれた少なくとも１種を有効成分と
   するレトロウイルス感染に伴う免疫不全発症予防薬又は
   進行抑制薬。
2. 【請求項２】 レトロウイルス感染に伴う免疫不全症が
   ヒトレトロウイルス（ＨＩＶ）感染によるヒトエイズで
   ある、請求項１記載のレトロウイルス感染に伴う免疫不
   全発症予防薬又は進行抑制薬。
3. 【請求項３】 レトロウイルス感染に伴う免疫不全症が
   動物レトロウイルス感染による動物エイズである、請求
   項１記載のレトロウイルス感染に伴う免疫不全発症予防
   薬又は進行抑制薬。