ITRM930527A1 - Piante di fragaria e procedimento per la loro produzione. - Google Patents

Description

DESCRIZIONE

a corredo di una domanda di brevetto per invenzione dal titolo: "Piante di Fragaria e procedimento per la loro produzione"

La presente invenzione concerne piante di Fragaria e procedimento per la loro produzione.

Pi? in particolare l'invenzione piante poliploidi di Fragaria (fragola) capaci di essere propagate da semi e semi per questo scopo.

Stato dell arte

Le piante poliploidi di Fragaria non si incrociano efficientemente, a causa delle loro caratteristiche genetiche molto complesse. La progenie di una variet? propagata in maniera vegetativa fertelizzata con il proprio polline ? molto differente.

Vi sono stati alcuni tentativi per migliorare le strategie di incrocio in modo da ottenere di fragola con caratteristiche migliorate; tuttavia tali strategie non hanno avuto grande successo, a causa del fatto che non si sono riusciti a risolvere i problemi associati con la cosiddetta "depressione da incrocio".

Niemirowicz-Szycytt K. (1989) Acta Horticulturae 265: 97-104] non sono riusciti a controllare tale depressione da incrocio all'interno del programma di incrocio utilizzato e, pertanto, non hanno ottenuto linee pure vitali e convenientemente omogenee (uniformi) in grado di essere utilizzate nei programmi di incrocio per ottenere piante di fragola agronomicamente attraenti dal punto di vista commerciale.

Altri lavoratori hanno tentato di utilizzare strade alternative per ottenere linee octoploidi vitali da utilizzare in incroci di fragole. Sayegh A.J. e Hennarty M.J. [(1989) Acta Horticulturae 265: 129-135] hanno tentato la produzione di cultivar aploidi di fragole commerciali utilizzando la androgenesi e incroci intergenere, seguiti da recupero dell'embrione e coltura. Tuttavia, questo approccio non ? stato di successo, a causa del fatto che il primo passaggio essenziale, che ? quello di ottenere gli aploidi, non ? stato realizzato e, come conseguenza, l'idea di raddoppiare il numero aploide per creare octoploidi e poi selezionare linee octoploidi vitali utili per l'uso nell'Incrocio, non pu? essere realizzata.

Un problema ricorrente associato con i programmi di incrocio di fragole, come descritto nel settore, ? che le linee pure ottenute attraverso programmi di autoincrocio ripetuti mancano di vigore e, come conseguenza, sono troppo deboli per essere utilizzate ulteriormente. La perdita del vigore della pianta ? generalmente evidente a circa la terza o la quarta generazione o oltre.

In tutti i casi, tali programmi non sono stati designati in modo da ottenere quantit? commerciali di ibridi F1 e di semi per questi. Gli obiettivi di tali programmi di incrocio sono stati la acquisizione di nuove linee pure per l'uso come base per acquisire nuove variet? adatte per creare nuovi cultivar propagati vegetativamente.

Come conseguenza delle difficolt? associate con le tecniche classiche di incrocio della fragola, i costitutori hanno incontrato grande difficolt? nel migliorare le loro collezioni geniche e ogni anno sono alia ricerca di piantine da cui derivare i loro programmi di incrocio, che possano esprimere le caratteristiche desiderate. Tali piantine di Fragaria sono propagate per via vegetativa a mezzo di stoloni o per tecniche di micropropagazione, fino a quando necessario; tuttavia, i semi da tali piantine non possono generalmente essere utilizzati a scopi di propagazione in quanto le piante che risultano da tali semi generalmente non mostrano similarit? fenotipiche in termini di caratteristiche commercialmente desiderabili dell'aspetto della pianta (Guttridge C.G. & Simpson D.W. Grower, Die. 23, (1982) pp28-29). Piante che crescono da semi raccolti da cultivar propagati in maniera vegetativa mostrano tipicamente differenze marcate nel loro aspetto, o nelle caratteristiche della pianta. Tali differenze le rendono commercialmente e agronomicamente non accettabili.

Ulteriori svantaggi nel fornire materiale cresciuto per via vegetativa e per propagazione clonale sono correlati al tempo di rilascio di tale materiale al coltivatore. Il propagatore generalmente incontra difficolt? nella tempistica e nella coordinazione del rilascio di un sufficiente numero di piante di fragole per incontrare le esigenze del coltivatore.

Un ulteriore svantaggio del materiale propagato in maniera vegetativa ? che vi ? un alto rischio di trasmissione di malattia in tale materiale e quando si osserva un'infestazione da malattia, l'uso di prodotti chimici per combattere tale infestazione pu? diventare necessario, comportando cos? non solo un aumento dei costi, ma anche effetti per l'ambiente potenzialmente non desiderabili.

Ne consegue che l'eredit? uniforme di caratteristiche commercialmente desiderabili potrebbe essere ottenuta in piante di fragole coltivate da semi e tale risultato costituirebbe un significativo punto di partenza per l?ottenimento di una produzione commerciale di fragole che non abbiano i limiti gi? delineati, e costituiscano mezzi fortemente attrattivi per produrre un largo numero di fragole in maniera efficace e economica.

Le specie selvatiche di Fragaria si propagano da seme. Tuttavia le specie selvatiche generalmente producono frutti piccoli e non uniformi nel loro aspetto, cos? come nell'aspetto della pianta.

Recentemente vi sono stati tentativi per sviluppare piante coltivate di fragola propagate da seme; tuttavia, tali tentativi hanno avuto un successo limitato dal punto di vista commerciale. Un tentativo di ottenere una fragola propagata da seme, descritta come commercialmente disponibile da Pan American Seed, ? descritta, nell'allegato del prodotto, come propagabile da seme; tuttavia, questa variet? risente del fatto che solo il 75% delle piante cresciute da semi sono in grado di fiorire e di avere frutti nella loro prima stagione. L'allegato non descrive come tale variet? sia ottenuta. Mentre una fragola propagata da seme che si comporti secondo quanto descritto possa essere soddisfacente per colture da giardino, vi sono dubbi che lo sia da un punto di vista agronomico per il coltivatore commerciale.

Alti livelli di ploidia, cos? come octoploidia, in Fragaria propagate vegetativamente, sono generalmente associati con grandi dimensioni della bacca, mentre bassi livelli di ploidia, cos? come diploidia, sono generalmente associati con dimensioni minori della bacca. Come esempio delle specie diploidi di fragola, F. vesca impollinata aH'aperto, viene cresciuta commercialmente da seme ed ? adatta per l'uso nella produzione di succhi di frutta, di conserve e simili, in quanto i frutti che la specie produce sono piccoli e generalmente non attraenti da essere consumati freschi. La produzione sul mercato di frutti di fragola ? generalmente dominata dalle specie di Fragaria poliploidi che sono propagate attraverso propagazione vegetativa. Tali tipi comprendono tra l'altro le specie octoploidi F. x ananassa. Sarebbe molto desiderabile se le piante poliploidi di Fragaria che mostrano caratteristiche commercialmente importanti, potessero essere propagate da seme in maniera affidabile e senza il bisogno di tecniche di propagazione vegetativa.

Risulta da quanto sopra che ? molto desiderabile fornire semi che danno luogo a piante di Fragaria poliploidi, per cui sostanzialmente ciascuna pianta sia capace di una produttivit? di frutti entro il primo anno dalla semina, i semi dovrebbero dare luogo in maniera conveniente a piante che mostrano una similarit? (cio? una sostanziale uniformit?) in uno o pi? tratti valutabili commercialmente, e in cui una similarit? desiderata sia evidente nell'aspetto generale della pianta.

Nonostante tali chiari vantaggi di piante di Fragaria poliploidi che sono propagabili per seme per cui sostanzialmente ciascuna pianta ? capace di una produttivit? di frutti, tali piante/semi non sono disponibli a causa della complessa genetica delle piante e dei problemi associati con la tipica "depressione da incrocio" per le piante di Fragaria poliploidi.

E' stato ora sorprendentemente trovato che ? possibile applicare le tecniche di incrocio disponibili per piante diploidi, cos? come l'uso di famiglie di consanguinei o di semi-consanguinei nei passaggi di selezione da incrocio, alle piante poliploidi di Fragaria e che quando si incrocia una pianta poliploide di Fragaria che ha una caratteristica desiderata (tratto) con un'altra pianta poliploide di Fragaria, tale caratteristica sar? espressa sostanzialmente in tutta la sua progenie (cio? nei limiti della certezza biologica, che ?, in generale pi? del 95% della progenie).

Descrizione dettagliata

Secondo la presente invenzione sono fomite piante coltivate poliploidi di Fragaria propagabili da seme in cui sostanzialmente ciascuna pianta ? capace di una produttivit? di frutti entro il primo anno.

"Poliploidi" significa che le piante di Fragaria non sono diploidi. Esse possono mostrare qualsiasi ploidia che possa essere trovata nella famiglia Fragaria, da triploidia sino a octoploidia, nonaploidia, decaploidia o livelli di ploidia pi? alti. Preferibilmente, dette piante di Fragaria sono octoploidi.

Il termine "piante" si riferisce a piante intere o a parti di esse, compresi semi, bacche, tessuti e cellule vegetali di queste.

La pianta Fragaria pu? essere selezionata dal gruppo comprendente F. x ananassa, F. chiloensis, F. virginiana, F. moschata e simili. Una lista di cultivans commercialmente importanti propagati in maniera vegetativa rappresentanti delle diverse specie di Fragaria ? fornito in Fruii Varieties Journal 42,3, 102- 108 (1988) qui incorporato per riferimento, e le specie cos? rappresentate dai cultivars descritte sono anche comprese nella definizione di piante di Fragaria propagabile da seme dell'invenzione. Una specie preferita di Fragaria ? quella di F. x ananassa. Preferibilmente, la F. x ananassa ? octoploide.

"Sostanzialmente ciascuna pianta ? in grado di una produttivit? di frutti nel suo primo anno" significa che sostanzialmente ciascuna pianta ? capace di una produttivit? di frutti nella sua prima stagione dopo la semina e che la pianta mostra una produttivit? di frutti entro una particolare stagione durante il suo primo anno. Naturalmente, tale produttivit? di frutti sar? dipendente dalle condizioni normali richieste per l'impollinazione cosi come per esempio di avere una quantit? sufficiente di insetti da impollinazione in una particolare stagione.

"Sostanzialmente ciascuna pianta" significa che pi? del 90%, particolarmente pi? del 95%, molto pi? preferibilmente almeno il 99% delle piante.

Oltre alla loro capacit? di produrre frutti entro il primo anno dalla semina, le piante dell'invenzione preferibilmente mostrano una similarit? in uno o pi? tratti valutabili commercialmente. Esempi tipici di tratti valutabili commercialmente sono forma della bacca, dimensioni della bacca, produttivit? dei frutti, sapore del frutto, permeabilit? del ricoprimento .dei seme o deirachene, neutralit? alla lunghezza del giorno, numero di stoloni per pianta. Una caratteristica particolarmente preferita delle piante dell'invenzione ? la neutralit? alla lunghezza del giorno (cio? esse possono essere cresciute tutto l'anno, in maniera indipendente dalla loro area di produzione). Il termine neutralit? alla lunghezza del giorno significa che i germoglio dei fiori sono inducibili e producono frutti sostanzialmente in maniera indipendente dalla lunghezza del giorno, e non dipendente dalla naturale quantit? di luce diurna, luce artificiale o una combinazione di queste. Secondo un'altra caratteristica particolarmente preferita le piante dell'invenzione producono molto pochi o affatto stoloni paragonati ai tipi propagati in maniera vegetativa disponibili commercialmente. Tipicamente, le piante preferite dell'invenzione avranno meno di cinque stoloni per pianta. Le piante che non producono affatto stoloni sono particolarmente preferite. Le piante con un numero ridotto di stoloni producono pi? frutti per pianta.

Le bacche mature delle piante dell'invenzione per consumo fresco avranno preferibilmente un diametro medio di almeno 25mm al loro punto pi? ampio.

Le piante dell'invenzione pi? preferibilmente mostreranno una uniformit? generale nella apparenza e una similarit? nel comportamento della pianta, cio? una similarit? accettabile per il coltivatore commerciale di fragole. Le piante possono mostrare differenze tollerabili nel comportamento della pianta nel senso che tali differenze non influiscano in maniera avversa alle decisioni di acquisto dei clienti. Per esempio una differenza nella forma della foglio del 5% delle piante pu? costituire una differenza commercialmente accettabile mentre una differenza nella dimensione della bacca nella stessa percentuale delle piante lo potrebbe.

Piante di Fragaria poliploidi particolarmente preferite secondo l'invenzione sono in forma ibrida F1, sono preferibilmente octoploidi, molto pi? preferibilmente F. x ananassa octoploidi. L'invenzione fornisce anche linee parentali di tali piante ibride F1 secondo l'invenzione, e generazioni successive derivate da tali piante ibride F1 secondo l'invenzione.

Per gli scopi della presente invenzione una pianta ibrida F1 poliploide ? una pianta che ? il prodotto di un incrocio tra linee parentali che mostrano sostanzialmente uniformit? nelle caratteristiche ereditarie desiderate dopo parecchie generazioni di incrocio. Il termine sostanzialmente uniforme nelle caratteristiche ereditarie significa che pi? del 90%, in particolare pi? del 95%, pi? preferibilmente almeno il 99% di uniformit? ereditaria. Tipicamente, la scelta della linea parentale comporta tra l'altro un'assegnazione sulle capacit? di combinazione delle linee parentali selezionate. Tale assegnazione pu? essere fatta quando le linee parentali mostrano una espressione prevedibile di una caratteristica desiderata o di una combinazione di caratteristiche desiderate. Tali ibridi poliploidi F1 mostrano un?espressione omogenea fenotipica di caratteristiche desiderabili commercialmente.

Tali piante tipicamente mostrano una similarit? nel comportamento della pianta a tale grado che il coltivatore possa essere preparato a superare quelle irregolarit? che non influenzano la disponibilit? commerciale del prodotto.

L'invenzione fornisce anche semi che diano luogo a piante secondo l'invenzione e frutti di fragole o bacche da piante secondo l'invenzione.

Anche comprese neH'ambito della presente invenzione sono piante poliploidi di Fragaria che possono essere prodotte da semi di piante di Fragaria ibride F1 come gi? descritto. I semi di piante di Fragaria ibride F1 possono dare luogo ad una progenie di F2 o di generazioni successive che sono propagabili per seme e capaci di produrre frutti alla loro prima stagione e in cui l'espressione delle caratteristiche desiderate della generazione ibrida F1 pu? essere osservata in tali popolazioni. La progenie F2 e le

ulteriori generazioni di piante di Fragaria derivate da ibridi F1 mostrer? una segregazione progressiva rispetto all'espressione delle caratteristiche desiderate dell'ibrido F1, ma potrebbe ancora rientrare neH'ambito dell'invenzione. I frutti o le bacche di piante dell'invenzione possono essere destinati a qualsiasi tipo di consumo cos? come consumo fresco cos? come forme processate del frutto o della bacca cos? come in marmellate, confetture, succhi di frutta, caramelle, liquori, alcolici e simili.

Le piante poliploidi di Fragaria secondo l'invenzione sono in grado di essere propagate da seme in quantit? commerciali. I vantaggi di produrne i semi per la vendita in quantit? commerciali per la produzione su larga scala di piante di fragola, opposta alla fornitura di piante che sono propagate in maniera vegetativa, sono quelli che i semi generalmente producono materiale libero da malattie, i costi di produzione possono essere ridotti, e la spedizione e la crescita pu? essere meglio pianificata. Quando si devono effettuare spedizioni in paesi tropicali, la fornitura di semi di fragole liberi da malattia dovrebbe essere particolarmente vantaggiosa.

Per ottenere ie piante poliploidi di Fragaria e gii ibridi polipioidi F1 di Fragaria dell?invenzione, un protocollo di incrocio ? stabilito in cui la depressione da incrocio venga controllata, allo scopo di ottenere ibridi F1, uniformi fenotipicamente alle linee parentali.

La presente invenzione fornisce un metodo per la produzione di piante di Fragaria poliploidi propagabili da seme in cui sostanzialmente ciascuna pianta ? in grado di una produttivit? di frutto entro il primo anno che comprende selezionare le piantine che mostrano le caratteristiche di interesse da una popolazione di piantine e incrociare tali piantine fino a che le caratteristiche desiderate sia stabilmente ereditata e in grado di essere affidabilmente riprodotta in ciascuna ulteriore generazione. Il numero di passaggi di incrocio pu? essere qualsiasi, tuttavia il numero di passaggi generalmente comprende circa 4 passaggi, e pu? comprendere tra 4 e 10 passaggi o pi?.

Preferibilmente, il metodo dell'invenzione fa uso di passaggi di selezione di una famiglia di consaguinei o di semi-consanguinei. Tali passaggi di selezione permettono di evitare i problemi della depressione da incrocio tipici per piante di Fragaria poliploidi come descritti nel settore.

I passaggi di selezione comprenderanno convenientemente la selezione di ulteriori tratti di valore commerciale, per esempio uno o pi? dei tratti gi? evidenziati, in particolare la neutralit? alla lunghezza del giorno e un basso numero (o assenza) di stoloni.

Per aumentare la frequenza di germinazione dei semi, potrebbe essere vantaggioso utilizzare un passaggio di potenziamento del seme in uno o pi? dei passaggi di selezione. Le piante cos? ottenute potrebbero essere incrociate per formare gli ibridi. Se le linee parentali soddisfano il criterio delia similarit? dell'aspetto della pianta richiesto per scopi commerciali, possono essere utilizzate come linee parentali per la produzione di piante ibride F1 secondo l'invenzione.

La produzione di piante ibride secondo l'invenzione comprende tipicamente i passaggi di:

i) incrociare le linee parentali;

ii) raccogliere i semi di detto incrocio;

iii) seminare i semi; e

iv)utilizzare opzionalmente un passaggio di induttore di semi a qualsiasi punto prima del passaggio iii). I semi di Fragaria sono veri frutti o acheni, che hanno un tegumento di ricoprimento impermeabile, dotato di un ricoprimento duro e, a seconda della permeabilit? del ricoprimento e/o della dormienza del seme, i semi possono impiegare tempi diversi per germinare. E' possibile selezionare all'interno del programma d'incrocio per le piante semi che hanno un ricoprimento relativamente pi? permeabile e/o nessuna dormienza da seme e corrispondentemente tempi di germinazione pi? veloci e pertanto frequenze di germinazione naturalmente pi? alte.

Alternativamente, i semi delle piante utilizzate nel programma di incrocio, cosi come i semi di prodotto finale possono essere soggetti a passaggi di induzione da seme a qualsiasi tempo conveniente. Il passaggio di induzione da seme comprende tipicamente un trattamento che indebolisce o aumenta la permeabilit? del ricoprimento del seme senza interferire sostanzialmente con la vitalit? del seme, sia attraverso mezzi fisici, cio? scarificazione, o attraverso mezzi chimici, cos? come per applicazione di enzimi capaci di agire sul ricoprimento del seme, o attraverso l'applicazione di agenti schiarenti leggeri (per esempio soluzione di sodio ipoclorito 1% per 15 minuti) e simili. L'applicazione di un passaggio di induzione di seme, se richiesto, pu? aumentare la frequenza di germinazione generale del seme da piante di Fragaria di interesse fino almeno 85% a secondo delle richieste. Per esempio, per semi da una linea di Fragaria selezionata per, tra l'altro, ricoprimenti da seme permeabili (cio? aventi una frequenza naturale di germinazione alta) vi potrebbe essere alcun bisogno di utilizzare un passaggio di induzione di seme. Tuttavia, nel caso in cui i semi non abbiano una frequenza naturalmente alta di germinazione, un passaggio di induzione di seme potrebbe essere richiesto. Cos? in una forma preferita dell'invenzione sono fornite piante poliploidi di Fragaria che producono semi che hanno una frequenza di germinazione di almeno 85%.

Una volta che la o le desiderate caratteristiche siano sufficientemente stabilmente integrate nelle linee parentali d'interesse queste possono essere incrociate. II prodotto di tale incrocio ? visto come un ibrido F1 secondo la definizione gi? fornita. Gli ibridi F1 propagabili da seme mostrano un aspetto della pianta stabile da un punto di vista commerciale come gi? descritto.

In una forma preferita dell'invenzione gli ibridi dell'Invenzione sono ottenuti utilizzando una linea parentale maschile sterile.

Tale linea parentale maschile sterile pu? essere ottenuta incrociando una linea parentale utilizzando i passaggi di selezione e opzionalmente il passaggio di induzione da seme gi? specificato e poi incrociando tale linea parentale con una pianta donatrice di sterilit? maschile per ottenere una pianta maschio sterile e poi reincrociando detta pianta maschio sterile con detta linea parentale.

Nel caso in cui la popolazione di tali piante ? ottenuta da una miscela di piante maschio sterile e altre piante maschio sterile vi dovrebbe essere un numero sufficiente di piante maschio sterile in modo tale che l'impollinazione possa effettuarsi. Se le piante di Fragaria fossero cresciute in serra e indotte a fiorire o fruttificare in qualsiasi in qualsiasi stagione, per esempio inverno, le condizioni normali per la impollinazione dovrebbero comprendere qualsiasi procedimento convenzionale di impollinazione cos? come impollinazione a mano, l'introduzione di una colonia di insetti da impollinazione nella serra e simili.

L'introduzione di un elemento di reincrocio nei metodi di incrocio gi? delineati introduce le caratteristiche di maschio sterilit? nella linea parentale e riduce o elimina la richiesta di demascolinizzare a mano le piante fertili ottenute in almeno un modo delle linea parentali utilizzate nella produzione di seme, li numero di reincroci richiesti pu? essere qualsiasi numero, tuttavia ? generalmente trovato che almeno tre reincroci debbano essere richiesti. Le piante ibride F1 risultanti dalla semina dei semi F1 secondo l'invenzione sono una miscela di piante interamente fertili e di piante maschio sterili a causa della segregazione rispetto alla sterilit? del maschio, tuttavia, rispetto alla eredit? e repressione di altre caratteristiche desiderate le piante risultanti sono conformi con la descrizione dell'accettabilit? commerciale.

Segue ora una descrizione generale di come ottenere una pianta F1 ibrida di Fragaria poliploide dell'invenzione in cui il tratto di maschio sterilit? ? utilizzato nel procedimento di incrocio.

Piante di fragola propagate da stoloni sono autoreplicate per fornire una popolazione F2. Queste popolazioni F2 mostrano una segregazione genotipica. Le piante che mostrano alcune caratteristiche desiderate sono selezionate a coppie dalla generazione F2 ed incrociate per fornire una generazione F3, denominata una famiglia interamente consanguinea (full sib family). Il procedimento di incrocio di selezioni interamente consanguinee viene ripetuto per generazioni seguenti fino a che si ottiene una linea parentale sufficientemente omogenea rispetto all'espressione di caratteristiche commercialmente desiderabili. I membri di tale linea parentale da famiglia interamente consanguinea possono poi essere clonati utilizzando tecniche convenzionali cos? come tecniche di coltura di tessuto o tecniche di propagazione vegetativa. Alternativamente, tale linea parentale interamente consanguinea pu? essere messa a seme. In una variante di quanto sopra, possono essere utilizzate selezioni di linee da famiglie semi-consanguinee. Una famiglia semiconsanguinea ? una una in cui le piante selezionate di una linea sono impollinate con una miscela di polline ottenuto da queste piante o da piante di due o pi? linee ulteriori. La progenie (cio? i semi o le piante) di una pianta separata raccolta ? designata come famiglia di semi consanguinei. Pertanto, la pianta parentale femminile ? nota ma la pianta parentele maschile no. Le linee semi-consanguinee possono essere trattate nello stesso modo delle linee interamente consanguinee rispetto alia selezione e all'incrocio fino a che una linea parentale sufficientemente omogenea rispetto all'espressione di caratteristiche commercialmente desiderabili sia in grado di essere mantenuta. I membri di tali linee parentali di famiglie semi-consanguinee possono poi essere clonati utilizzando tecniche convenzionali. Alternativamente, la linea parentale della famiglia semiconsanguinea pu? essere messa a seme.

Utilizzando la selezione di una famiglia interamente consanguinea o la selezione di una famiglia semi-consanguinea come gi? descritto, o altri metodi convenzionali di incrocio cos? come selezione ricorrente o selezione massiva, linee parentali che esprimano le caratteristiche commercialmente desiderabili possono essere poi trattate come descritto in seguito.

Una linea parentale che mostra le caratteristiche desiderabili commercialmente pu? essere poi reincrociata parecchie volte con una pianta donatore maschio sterile per introdurre la maschio sterilit? nella linea parentale. Una volta che la maschio sterilit? ? introdotta in questa linea parentale per reincrocio viene incrociata con una linea parentale fertile che porta le caratteristiche desiderabili. (Alternativamente, e come gi? accennato, le caratteristiche della maschio sterilit? possono essere anche prodotte nella linea parentale semplicemente selezionando una pianta che mostra le caratteristiche di maschio sterilit? ed introducendo quella caratteristica in una eventuale linea parentale utilizzando procedure convenzionali utilizzate nei programmi di incrocio cos? come la selezione ricorrente e la selezione massiva). Il prodotto di tale incrocio ? un seme ibrido F1 che pu? dare origine a piante ibride F1 . Secondo un ulteriore forma di realizzazione, le piante dell'invenzione sono clonate, utilizzando tecniche di coltura di tessuto e terreno di crescita convenzionali.

Questo passaggio di clonazione facilita la produzione su larga scala delle piante (comprese parti di piante, tessuti, frutti e semi di queste) dell'invenzione.

L'uso di tecniche di coltura di tessuto ? particolarmente indicato per la produzione massiva di una o entrambe linee parentali per la produzione di ibridi.

Il clonaggio qui si riferisce alia moltiplicazione di tessuto di piante secondo l'invenzione e alla conseguente moltiplicazione di questa per produrre un gran numero di piante con lo stesso genotipo. Le piante clonate possono essere incrociate o con piante ottenute attraverso reincroci e tecniche di incrocio convenzionali o con altre piante clonate convenienti. In una preferita attuazione, le piante parentali clonate possono essere incrociate con altre piante parentali clonate e i semi di tali incroci raccolti. Alternativamente, pu? essere prelevato dalle piante dell'invenzione del tessuto in grado di essere clonato in colture di tessuto ed utilizzato per clonare tale piante per se. Tale materiale derivato da tessuto pu? essere cresciuto fino allo stadio di seme e venduto ai coltivatori in quantit? commerciali. "Tessuto" si riferisce a cellule individuali, organi di piante come radici, germogli, foglie o pezzi di organi, piantine e simili.

I semi ibridi F1 M8 (esempio 2 di seguito) e M55 (esempio 1 di seguito) sono stati depositati il 9 novembre 1992 presso il NCIMB, Aberdeen e i numeri di deposito sono rispettivamente NCIMB 40527 e NCIMB 40528. L'invenzione sar? ora descritta in riferimento ai seguenti esempi. E' da intendersi che gli esempi non sono intesi per limitare l'ambito dell'invenzione in alcun modo. Esempio 1_: Produzione di una pianta di Fragaria octoploide ibrida F1 che mostra un ridotto numero di stoloni, ed una produzione di frutti per pianta utilizzando due linee indifferenti alla lunghezza del giorno.

Si fa riferimento al seguente schema d'incrocio 1.

Una variet? di Fragaria octoploide propagata vegetativamente, cv Ostara (OPRO, Wageningen), che mostra tra l'altro una neutralit? alla lunghezza del giorno e frutti morbidi viene selezionata e i semi vengono raccolti da queste. I semi danno una popolazione F2 designata con numero di riferimento interno E21 OP (dove OP ? inteso per impollinata all'aperto). Viene selezionata una pianta dalla popolazione F2 (E21-6) impollinata all'aperto e vengono raccolti semi da questa. I semi danno una popolazione F3, designata F17. Una pianta ? selezionata da questa popolazione F3 e designata come F17-2, impollinata all'aperto e i semi raccolti da questa. I semi danno una popolazione F4 designata G44. Una pianta viene selezionata da questa popolazione F4 e designata come G44-1. G44-1 viene auto impollinata (S) e i semi raccolti da questa. I semi di G44-1 sono seminati e le piantine designate H67. Due piante designate H67-3 e H67-1 sono selezionate, rispettivamente auto impollinate e i semi vengono raccolti da queste. I semi da H67-3S e H67-1S sono seminati separatamente (cio? senza miscelamento delle due popolazioni di seme) e le popolazioni di piantine ottenute sono designate 1167 e 1165. Le piante (1167-1 e 1165-6) dalle due linee sorelle sono incrociate per ristorare il vigore della pianta. I semi sono raccolti da questo incrocio e seminati per dare la designazione di campo K148. Sono ottenuti semi-consanguinei prendendo cinque piante parentali femminili da K148 e impollinandole con una miscela di polline dalle stesse cinque piante parentali pertanto creando una subpopolazione di K148. Le piante sono raccolte separatamente da K148. Dalla popolazione di semi- consanguinei viene designata L107 la progenia di una delle piante selezionate (K148-2), e la pianta viene selezionata da questa popolazione e designata come L107- 1. Questa pianta ? la pianta parentale maschile cio? la generazione di incrocio F8 dal cv Ostara. Queste piante mostrano tra l'altro una neutralit? alla lunghezza del giorno ed un ridotto numero di stoloni.

Le linee parentali femminili sono ottenute da semi raccolti da una variet? di Fragaria octoploide propagata vegetativamente, cv Brighton (University of California), a campo aperto e le piante sono derivate da questa e designate come I63 OP (F2). Famiglie di semi- consanguinei di I63 sono ottenute utilizzando un procedimento simile a quello utilizzato nell'ottenere la linea parentale maschile. Viene evitata la miscelazione di semi delle famiglie di semi-consanguinei. Le famiglie di semi-consanguinei sono seminati e una di queste ? designata K249. Le famiglie di semi-consanguinei di K249 sono ottenute utilizzando un procedimento simile a quello descritto nell'ottenere una linea parentale maschile come sopra. Viene evitata la miscelazione dei semi dalle famiglie di semi-consanguinei. Le famiglie di semiconsanguinei sono seminate e la progenie di una di queste piante selezionate (K249-1) ? designate L203. Una pianta viene selezionata da questa popolazione L203 e designata L203-2. Questa pianta ? la pianta parentale femminile (cio? la generazione di incrocio F4 dal cultivar Brighton) e mostra tra l'altro le caratteristiche di una media neutralit? alla lunghezza del giorno, un ridotto numero di stoloni, ed una produttivit? di frutto per pianta entro il primo anno.

Le due linee parentali sono incrociate per ottenere piante ibride F1 che sono designate M55. Queste piante di Fraqaria octoploidi mostrano una produzione, dimensione e forma omogenea di frutti, un numero ridotto di stoloni, una neutralit? alla lunghezza del giorno, ed una produttivit? di frutti entro il loro primo anno.

Esempio 2\ Produzione di una pianta ibrida octoploide di Fragaria F1 che mostra una produzione di frutto entro il primo anno utilizzando una linea neutrale alla lunghezza del giorno ed una linea che richiede un numero di ore di luce limitato.

Si fa riferimento al seguente schema di incrocio 2.

I semi dal cv Douglas (University of California), una variet? di Fragaria octoploide propagata vegetativamente con un numero limitato di ore di luce richiesto, sono seminati per fornire una popolazione designata G153 OP (F2). Viene selezionata una pianta da questa popolazione e designata G1 53-41, impollinata all'aperto, e i semi raccolti da questa e seminati per fornire una popolazione designata H294. Viene selezionata una pianta da questa popolazione e designata H294-6, impollinata aN'aperto, e vengono raccolti i semi da questa e seminati con il numero designato 1371. Da 1371, vengono ottenute famiglie semiconsanguinee utilizzando i procedimenti descritti nell'esempio 1. Una di queste famiglie di semi- consanguinei (1371-3) ? seminata con la designazione K426. Da K426 quattro piante sono selezionate e il polline di queste piante miscelato per incrocio con 1109-1 per saggiare la capacit? di combinazione. La capacit? di combinazione viene assegnata osservando l'ereditariet? delle caratteristiche di una linea in combinazione con altre linee.

I semi da una variet? di fragola octoploide neutra per la lunghezza del giorno propagata vegetativamente denominata Rapella (CPRO, Wageningen) sono seminati e viene dato loro il numero di popolazione G17 OP. Viene selezionata una pianta da questa popolazione e designata G17-1 e auto impollinata. I semi di G17-1 sono seminati, cresciuti e la popolazione risultante designata H42. Viene selezionata una pianta da questa popolazione e designata H42-4 e auto impollinata. I semi di H42-4 sono seminati, cresciuti, e alla popolazione risultante data la designazione 1109. Viene selezionata una pianta da questa popolazione designata 1109-1. Questa pianta ? una pianta parentale femminile che mostra tra l'altro una neutralit? alla lunghezza del giorno.

Sono incrociati 1109-1 e il polline da quattro piante da K426. Ci? risulta in una pianta ibrida F1 di Fragar?a octoploide denominata M8. Queste piante mostrano tra l'altro un aspetto vigoroso della pianta, una alta resa di frutti, ed una produzione di frutti per pianta nel primo anno.

Esempio 3: Produzione di una pianta di Fragaria octoploide ibrida F1 che mostra una produzione di frutta in tutte le piante che dimostrano l'uso del tratto di maschio sterilit? nello schema di incrocio.

E' fatto riferimento al seguente schema d'incrocio 3.

I semi da una variet? di Fragaria octoploide propagata vegetativamente con una richiesta di un numero limitato di ore di luce, cv Honeoye (Cornell University, Geneva Expt. Station, NY State) sono seminate e la popolazione di piantine viene designata con 1461 OP. Viene selezionata una pianta da questa popolazione, 1461-1, e i semi prodotti per impollinazione all'aperto sono poi seminati. Dalia popolazione di piantine, K484, una pianta viene selezionata (K484-1), impollinata aH'aperto e i semi da questa seminati, producendo una popolazione L396. Due piante (L396-2 e L396-4) sono selezionate per fornire una miscela di polline che ? utilizzata per fertilizzare la pianta parentale femminile L29-1 ms.

I semi da una fonte di maschio sterile, una pianta di Fragaria octoploide sperimentale che mostra la maschio sterilit?, sono designati G1. (I semi da qualsiasi pianta di Fragaria che mostrano le caratteristiche di maschio sterilit? possono essere selezionati come una fonte di maschio sterilit?. Un esempio di una variet? commercialmente disponibile che pu? essere utilizzata come fonte di maschio sterilit? ? il cv Pandora, East Mailing * Experimental Research Station). I semi G1 sono seminati, cresciuti, e viene selezionata una pianta che mostra la maschio sterilit?, G1-1 ms. I semi sono prodotti per impollinazione aH'aperto e raccolti da G1-1 ms e seminati per fornire una popolazione di piante designate H27 OP. Una pianta che mostra la maschio sterilit? viene selezionata da questa popolazione, (H27-1 ms), e incrociata con una miscela di polline dal gruppo (H42) di dieci (10) piante selezionate da una popolazione F3 di variet? Rapella neutra alla lunghezza del giorno ottenuta per procedure di selezione generale come quelle utilizzate per altre linee gi? descritto (per esempio la pianta F4 1109-1 dello schema di incrocio 2), fornendo una popolazione di piante (K83) da cui viene selezionata K83-2 ms e reincrociata con K199-6 una pianta di Rapella F5. Dalia popolazione risultante, designata L29 viene selezionata una pianta che mostra maschio sterilit? (L29-1 ms) e incrociata utilizzando ii polline delle piante L396-2 e L396-4 che risulta in un ibrido F1, M215. Tutte le piante di questo ibrido octoploide F1 mostrano una produttivit? di frutti e segregano 50% :50% rispetto alla maschio sterilit?.

Esempio 4; Produzione di piante di Fragaria octoploidi ibridi F1 che mostrano una uniformit? nelle caratteristiche della pianta e una segregazione 50% / 50% rispetto alla maschio sterilit? utilizzando linee che richiedono poche ore di luce (SD) o che sono neutre rspetto alla lunghezza del giorno (DN).

Viene fatto riferimento ai seguenti schemi di incrocio 2, 3 e 4.

I semi da una variet? di Fragaria octoploide propagata vegetativamente che richiede poche ore di luce (SD), cv Kent (Agricultural Research Station, Kentville, Nova Scotia, Canada) sono seminati e la popolazione di piantine (popolazione F2) designata I460 OP (dove OP va inteso come impollinato ail'aperto). Viene selezionata una pianta da questa popolazione, I460-2, e i semi prodotti per impollinazione all'aperto sono poi seminati. Dalla popolazione di piantine, K483, viene selezionata una pianta (K483-2), impollinata all'aperto e i semi di questa sono seminati, producendo una popolazione L394. Due piante, L394-2 e L394-3, sono selezionate da questa popolazione L394 e incrociate per fornire una famiglia pienamente consanguinea designata M353. La pianta F5, M353-3, viene selezionata come parentale maschile dell'ibrido F1 R199. I semi da una fonte di maschio sterilit?, una pianta di Fragaria octoploide sperimentale che mostra maschio sterilit?, sono designati G1. (? semi da una qualsiasi pianta di Fragaria che mostrano le caratteristiche d? maschio sterilit? possono essere selezionati come fonte di maschio sterilit?. Un esempio di una variet? commercialmente disponibile che pu? essere utilizzata come fonte di maschio sterilit? ? il cv Pandora, East Mailing Experimental Research Station). I semi G1 sono seminati e una pianta che mostra la maschio sterilit? viene selezionata (G1-1 ms). I semi sono prodotti per impollinazione aH'aperto e raccolti da G1-1 ms e seminati. La popolazione risultante di piante viene designata H27 OP. Una pianta che mostra la maschio sterilit? viene selezionata da questa popolazione, (H27-1 ms) e viene incrociata con una miscela di polline da un gruppo (H42) di dieci (10) piante selezionate da una popolazione di variet? neutre alla lunghezza del giorno Rapella F3 ottenuta per procedure di selezione generale come quelle descritte per altre linee (per esempio F4 pianta 1109-1, schema di incrocio 2), fornendo una popolazione di piante (K83) da cui K83-2 ms viene selezionata e reincrociata con K199- 6, una pianta di Rapella F5. La popolazione risultante da questo primo reincrocio ? designata L29. Tra la popolazione L29 viene selezionata una pianta maschio sterile L29-1 ms e reincrociata con una pianta L175-1 da una popolazione F6 di Rapella (L175). Il risultato di questo reincrocio viene designato M58. Da questa popolazione M58 viene selezionata una pianta maschio sterile, M58-1 ms, e reincrociata con M111-1, una pianta F7 selezionata da una popolazione di Rapella F7. La popolazione risultante da questo reincrocio viene designata M501. Da questa popolazione M501 viene selezionata una pianta maschio sterile, M501-1 ms, e reincrociata con una pianta M111-1 producendo una popolazione maschio sterile, P205, da cui viene selezionata una pianta maschio sterile per incrocio con M353-3. P205-1 ms ? il quarto reincrocio di Rapella. Le piante P205-1 ms e M353-3 sono incrociate, producendo un ?brido F1 octoploide R199 che mostra una uniformit? fenotipica almeno rispetto alla produttivit? di frutto nel suo primo anno, alla neutralit? alle ore del giorno, e una segregazione 50% : 50% per la maschio sterilit?.

Esempio 5? Effetto del Trattamento di Induzione di Seme sui semi ibridi F1 octoploidi Fragaria x ananassa

3 x 1 lotti si 6gm di semi ibridi F1 di octoploide Fragaria x ananassa (designazione interna K1, K2, e K3) sono posti in 300 mi di una soluzione di ipoclorito di sodio al 7% per volume ad una temperatura iniziale di 20?C, per intervalli di tempo di 15, 30 e 45 minuti. I controlli sono posti in 300 mi di acqua a 20?C per gli stessi intervalli di tempo; gli altri parametri sperimentali sono gli stessi come nei campioni da saggiare. La temperatura dei campioni da saggiare inizia a 20?C raggiungendo 23?C durante il saggio. Dopo ciascun intervallo di tempo i semi sono rimossi dalla soluzione, posti in una sacca di nylon e lavati in 10 litri di acqua per 1 minuto. La procedura di lavaggio viene ripetuta per altre due volte. Dopo il lavaggio i semi sono centrifugati per 1 minuto a 1000g. I semi ulteriormente essiccati in un essiccatore ad aria (circa 40m/minuto) per un periodo fino a 24 ore. Viene saggiata la germinazione su campioni di 200 semi per ciascun lotto di seme seminando i semi trattati e i controlli sulla superficie superiore di carta alla luce a 25?C, e viene monitorata la germinazione ogni giorno per 28 giorni contando il numero di radichette sporgenti. La germinazione totale viene determinata al 28? giorno. Il 50% della germinazione totale (T50) e la diffusione sono determinate seguendo il metodo descritto da Orchard T.J. (1977) Seed Sci. & Technol., 5, 61-69.

I risultati sono mostrati nella seguente Tabella 1.

Tabella 1

Trattamento T50 Diiffusione %Germ %Germ Sodio clorito giorno giorno giorni 14 28 Lotto

seme 1

(K1) Controllo

(acqua) 12.0 4.8 59 88 hypo 7% 15min 10.5 3.4 82 97 hypo 7% 30min 7.2 2.8 . 97 100 hypo 7% 45min 6.6 2.1 98 99 Lotto

seme 2

(K2) Controllo

(acqua) 13.2 5.1 58 94 hypo 7% 15 min 10.6 5.4 81 99 hypo 7% 30 min 8.1 3.3 91 97 hypo 7%45 min

Lotto

seme 3

(K3)

Controllo

(acqua) 12.2 5.2 67 98 hypo 7% 15 min 10.4 3.8 82 98 hypo 7%30 min 7.1 2.2 97 98 hypo 7%45 min 7.1 2.2 100 100 1) k87.1 x k407.1 F1 ibrido K1

2) k87.1 x k407.1 F1 ibrido K2

3) k148.2 x k407.1 F1 ibrido K3

- non fatto

Esempio 6: Clonaggio di piante octoploidi di Fragaria utilizzando tecniche di coltura di tessuto

Materiale da espianto che comprende materiale germinale contenente materiale meristematico viene tagliato da gli apici germinativi di stoloni di K148-2 e la superficie viene sterilizzata per immersione (per non pi? di 5 secondi) in una soluzione al 70% di etanolo. Il materiale viene poi posto in una soluzione di sodio ipoclorito (30 mi) aH'1.5% in volume (Glorix, Fenix BV Zwolle, NL) e la superficie viene sterilizzata per 15 minuti su un agitatore rotatorio a 200 rpm a temperatura ambiente. Il materiale di espianto viene poi lavato in 3 volumi (3 x 30ml) di una soluzione sterile fisiologica salina (8.5 g/l) e il tessuto meristematico viene exciso dall'apice. Il tessuto meristematico viene posto in tubi da coltura (diametro 2 cm) contenenti 16.7 mi di terreno di inizio di coltura per tubo. Il terreno di inizio di coltura contiene:

macro-elementi come descritti da Knop W [(1865) Vers. Stn. 7: 93-107] con l'aggiunta di:

10 mg/l FeSQ4 ? 7?2<3 e

10 mg/l Na2EDTA

e micro-elementi e elementi organici come descritti da Murashige T. & Skoog F. [(1962) Physioi. Plant. 15: 473-497].

1.2 mg/l KIBA (Acido indolo-3-butirrico - Sigma)

0. 1 mg/l BA (N -Benzil adenina Fiuka AG)

44 g/l glucosio mono idrato 7 g/l agar (Lab M) (Amersham, UK) pH 5.6

31 meristemi sono posti al buio per 7 giorni e poi trasferiti alla luce in condizioni di 16 ore di luce 3000 lux per 8 ore di buio. La temperatura viene mantenuta nell'intervallo da 22? a 24?C. Dopo 6 settimane i germogli formati sono posti in barattoli di vetro con i coperchi con bordi interrotti (per permettere lo scambio gassoso) su 62.5 mi di terreno da moltiplicazione comprendente gli stessi elementi del terreno di inizio eccetto che la concentrazione di ormone per la pianta KIBA 1.2 mg/f e BA 1.0 mg/l. La temperatura e le condizioni di luce sono le stesse per le colture di inizio; il periodo di moltiplicazione ? di 7 settimane. Alla fine del periodo di moltiplicazione sono raccolti 150 germogli e trasferiti ad un terreno per la radicazione. (Per ottenere pi? germogli per la radicazione dal passaggio di moltiplicazione i germogli possono essere tagliati in pi? pezzi in funzione di quante piante sono richieste, e poi posti sul terreno di moltiplicazione). Il terreno di radicazione ? simile al terreno di moltiplicazione eccetto che BA ? escluso. Il periodo di radicazione ? di 6 settimane; tutti gli altri parametri sono gli stessi del passaggio di moltiplicazione. Dopo il periodo di radicazione, i germogli radicati sono lavati attentamente in acqua tiepida e trasferiti a terreno da vaso 3 (commercialmente disponibile da Jongkind Grand BV Aalsmeer, NL) e viene permessa la crescita in piantine in barattoli di vetro ad una umidit? relativa alta (95%).

L'irrobustimento delle piantine viene ottenuto per riduzione graduale dell'umidit? relativa a circa 70% per un periodo di 2 settimane. Le piantine sono poi trasferite in serra.

Le piantine di K148-2 sono di buona qualit? e mostrano un tasso di sopravvivenza del 99% in serra.

Descrizione degli schemi di incrocio

Schema di incrocio V schema dello sviluppo di due linee parentali neutre alla lunghezza del giorno (DN) nella produzione di ibridi F1 di Fragaria che mostrano un numero ridotto di stoloni ed una produttivit? di frutti per ciascuna pianta nel primo anno.

Schema di incrocio 2: schema dello sviluppo di linee parentali neutre alla lunghezza del giorno (DN) e richiedenti un numero di ore brevi di luce (SD) nella produzione di ibridi F1 di Fragaria che mostrano una produttivit? di frutti sostanzialmente per ciascuna pianta nel suo primo anno.

Schema di incrocio 3; passaggi iniziali dello schema nello sviluppo di linee parentali maschio sterile (ms) e fertili (f) nella produzione di ibridi F1 di Fragaria, utilizzando la caratteristica di maschio sterilit?.

Schema di incrocio 4; schema dell'intero sviluppo delle linee parentali maschio sterile (ms) e fertile (f) nella produzione di piante ibride di Fragaria Ft che mostrano una uniformit? nelle caratteristiche della pianta ma segregano rispetto al tratto di maschio sterilit?.

In tutti gli schemi d'incrocio, la pianta sui lato destro di ciascun incrocio ? la pianta maschile.

(seguono tabelle)

cv Ostare

E 2 I1 OP i popolazione F2

E 2 1-6 OP pianta F2

F 17-2 OP pianta F3

cv Brighton G 44-1 S pianta F4 \ i . /

popolazione F2 i 63 OP I! 67-3 S il 67- 1 S ?pianta F5

* \ /

pianta F2 -i 63r3 * i 63 I 167- 1 * I 165- 6 pianta F6

\

pianta F2 ? 249-1 * ? 249 K 148-2 ? * K 148 pi finta F7

/

\

pianta F4 , U 203-2 * li 107 - 1 pianta F8

Ibrido F II" M55

DN * SD

cv Douglas (SD)

cv Rapella (DM) ?

1 G 153 OP popolazione FI

popolazione F2 ; ; G 17 O .P G 1 ?53-41 OP pianta F2

*

Pianta F2 G 17-1 s HJ 294 -6 OP pianta F3

pianta F I3 M 42-4 s I 3171 - 3 * I 371 pianta F4

pianta F I4 i 109-1 * K 4 J26- 1 to 4 ? pianta F5 linea nuetra per la i

lunghezza del giorno f

Ibrido-Fi M B

(pianta? sperimentale di Fragaria

maschio sterile)

?? : fonte ms (SD/DN) cv Honeoye (SD)

Gl- ?l ms OP

popolazione F2 H 27 OP I 461. OP popolazione F2

F3 Rapella (DN)

1? incrocio H 27-1 ms * li 42. * I 461-1 OP pi anta F2

Il 42-4S

\

r.10 *9- 11 s 1 ?

1 ?. reincrocio : K 83-2 ms * K199-6<' >K 484 -1 OP pianta 3

\

risultato del . primo rein- L29-1 ms * L 396- 12 L .396-4 pianta F4 crocio

\

FI M215

Ql ? fonte ms (SD/DN) cv Kant (SD)

\

popolazione F2 H 27 OP

F3 Rapella (DN)

Il 27-1 ms * I Il 42

F5 Rapel-la (DN)

K 83-2 ma ? * K 199-6 1460 OP popolazione F2

F6 Rapella (DN)

^?. O

. Q ?

3; ?

20 M ? L 29-1 ms * L I175-1 1460-2 OP

r re

\ 5 ?. n ? F7 Rapella (DN)

?>VJ ? >5 ^ ?N

ra a > M 50- MI11-1 K48 ?3-2 OP

?Ss o D ~ 5 o 11 ms ?

? a. F7 Rapella (DN)

Q

M501-1 ms * Ml tll-1 L394-2 1* L394-3

*

risultato del 4? reincrocio : P205-1 ma M353 V-3 Pianta f5

ibrido F2 RI 99 : uniforme per le caratteri della pi anta, segregante 5 maschio sterilit?

Claims (14)

1. RIVENDICAZIONI 1. Piante pollploidi di Fragaria propagabili da seme in cui sostanzialmente ciascuna pianta ? in grado di dare una produttivit? di frutti entro il primo anno.
2. 2. Piante secondo la rivendicazione 1, che mostrano una omogeneit? sostanziale rispetto ad una o pi? delle caratteristiche selezionate da forma della bacca, dimensioni della bacca, produttivit? di frutti, sapore del frutto, permeabilit? del ricoprimento del seme o deirachene, basso numero o assenza di stoloni per pianta e neutralit? alla lunghezza del giorno.
3. 3. Piante secondo la rivendicazione 2, in cui il diametro medio della bacca naturale ? di almeno 25 mm al suo punto pi? ampio.
4. 4. Piante secondo le rivendicazioni da 1 a 3, che sono octopioidi.
5. 5. Piante secondo la rivendicazione 4 selezionate dal gruppo consistente di F. x ananassa, F. chiloensis e F. virginiana.
6. 6. Piante secondo le rivendicazioni da 1 a 3 che sono F. A SpWWt? W &t?flM B , moschata.
7. 7. Ibridi F1 di piante secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 6.
8. 8. Linee parentali di piante secondo la rivendicazione 7.
9. 9. Piante maschio sterili secondo la rivendicazione 8.
10. 10. Cellule, tessuti, organi, pezzi di organi e piantine di piante secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 9.
11. 11. Fruti di fragola prodoti da piante di Fragaria secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 9.
12. 12. Semi di piante di Fragaria secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 9.
13. 13. Semi producenti piante secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 9.
14. 14. Semi secondo le rivendicazioni 12 o 13 aventi una frequenza di germinazione di almeno 85%.