ITRM20120412A1 - Metodo per la preparazione di un concentrato di proteine sieriche. - Google Patents

Metodo per la preparazione di un concentrato di proteine sieriche. Download PDF

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ITRM20120412A1
ITRM20120412A1 IT000412A ITRM20120412A ITRM20120412A1 IT RM20120412 A1 ITRM20120412 A1 IT RM20120412A1 IT 000412 A IT000412 A IT 000412A IT RM20120412 A ITRM20120412 A IT RM20120412A IT RM20120412 A1 ITRM20120412 A1 IT RM20120412A1
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Description

"METODO PER LA PREPARAZIONE DI
UN CONCENTRATO DI PROTEINE SIERICHE"
DESCRIZIONE
La presente invenzione riguarda un metodo per la preparazione di un concentrato di proteine a partire da un campione di lattosiero in cui tale concentrato à ̈ caratterizzato dal fatto di comprendere una concentrazione ≤ 0.5 grammi di lattosio per chilogrammo di proteine, il concentrato ottenibile da detto procedimento e prodotti contenenti detto concentrato.
STATO DELLA TECNICA ANTERIORE
Il siero di latte (o anche lattosiero) rappresenta la parte liquida del latte e contiene un’elevata percentuale di lattosio (tra il 50-75%) oltre che proteine, sali minerali, tracce di lipidi e prodotti di degradazione del lattosio (acido lattico, glucosio, galattosio). Il contenuto proteico del lattosiero à ̈ compreso tra circa l’8% e il 14% ed in particolare, à ̈ possibile la presenza di una miscela di proteine di cui le principali sono albumina, β-lattoglobuline, α-lattoalbumine, sieroalbumine, lattoferrina, immunoglobuline; aminoacidi essenziali (leucina, isoleucina, valina, treonina, triptofano, lisina, fenilalanina, ecc).
Diversi studi hanno dimostrato come le proteine del lattosiero abbiano effetti benefici sulla salute. In particolare, Wong et al. riportano come l’assunzione di proteine del siero di latte migliori la funzione immunitaria grazie alle presenza delle immunoglobuline in esso presenti (Wong & Watson 1995. Immunomodulatory effects of dietary whey proteins in mice. J Dairy Res. 62(2):359-68). Inoltre, à ̈ stato anche suggerito come l’assunzione di proteine di lattosiero possa avere un effetto preventivo per lo sviluppo del cancro (Hakkak et al. Dietary whey protein protects against azoxymethane-induced colon tumors in male rats. Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev.
10 (5): 555–8. PMID 11352868).
Da un punto di vista medico-scientifico particolare interesse à ̈ stato rivolto non solo alle immunoglobuline di lattosiero ma anche alla lattoferrina per la quale sono stati descritti effetti benefici sulla salute umana quali miglioramento della risposta immunitaria, attività anti-microbica, anti-virale e anti-cancro.
Le proteine di lattosiero sono anche note per l’effetto benefico sulla cute.
Sebbene, come sopra riportato, alle proteine di lattosiero sono associati una serie di effetti benefici, la loro assunzione o il loro utilizzo in genere, risulta essere limitato dal fatto che il lattosiero in cui esse sono presenti si caratterizza per un elevato contenuto dello zucchero lattosio. In particolare, nella popolazione mondiale l’intolleranza a tale molecola à ̈ molto diffusa, intolleranza dovuta principalmente all’incapacità da parte dei soggetti di metabolizzare il lattosio a causa di un deficit dell’enzima lattasi. L'incidenza di tale intolleranza varia significativamente da paese a paese con una percentuale che si aggira intorno circa al 22% della popolazione adulta negli Stati Uniti fino ad arrivare al 70% circa della popolazione nell'Europa meridionale.
La sintomatologia più comune relativa all'intolleranza al lattosio consiste in disturbi essenzialmente gastrointestinali quali dolori e crampi addominali, sensazione di gonfiore e tensione a livello intestinale, aumentata peristalsi, flatulenza, meteorismo, scariche diarroiche ecc.
La terapia d'eccellenza in caso d’intolleranza al lattosio à ̈ un regime alimentare con ridotto apporto di alimenti ricchi di lattosio, compreso quindi il lattosiero. Tale terapia risulta però essere particolarmente inadatta nei casi in cui il soggetto intollerante risulta essere, ad esempio, un soggetto pediatrico, un soggetto con malnutrizione, con deficit immunitari ecc in cui l’assunzione di lattosiero à ̈ fondamentale per garantirne l’adeguato apporto di proteine di lattosiero.
Pertanto à ̈ estremamente sentita la necessità, nello stato della tecnica nota, di mettere a punto tecniche che consentano di purificare la miscela di proteine sieriche dal lattosiero riducendo al minimo il contenuto di lattosio in essa presente garantendo quindi il mantenimento della composizione proteica, amminoacidica ecc tipica del siero di latte.
SOMMARIO DELL'INVENZIONE
La presente descrizione riguarda un metodo per la preparazione di un concentrato di proteine a partire da lattosiero (noto anche come siero di latte). In particolare, tale metodo comprende una serie di passaggi operativi il cui risultato finale à ̈ l’ottenimento di un concentrato di proteine di lattosiero (o anche indicate come proteine sieriche) con caratteristiche estremamente vantaggiose.
Infatti, il metodo qui descritto consente di ridurre il contenuto di lattosio presente nel lattosiero preservandone nel contempo il contenuto in proteine sieriche senza quindi, in altri termini, alterarne o modificarne la peculiare composizione in proteine, amminoacidi, sali minerali ecc.
In particolare, il concentrato di proteine sieriche ottenibile mediante il metodo qui descritto si caratterizza per il fatto di avere una concentrazione ≤ 0.5 grammi di lattosio per chilogrammo di proteine. Inoltre, le proteine isolate dal lattosiero secondo quanto di seguito descritto, presentano un grado di purezza di almeno il 96%.
Il metodo oggetto della presente descrizione può essere quindi utilizzato vantaggiosamente per la preparazione di concentrati di proteine sieriche a partire da lattosiero desinati, ad esempio, a soggetti con intolleranza o allergia al lattosio e/o che necessitano di un importante apporto di proteine sieriche.
Inoltre, gli autori della presente invenzione hanno anche osservato che il metodo qui descritto conduce ad un concentrato di proteine sieriche caratterizzato dall’essere privo di odori e gusto sgradevoli tipici invece delle proteine del lattosiero. Tale ulteriore vantaggio determina, in ultima analisi, ad esempio, un più agevole utilizzo del concentrato in fasi successive quali la preparazione di prodotti che lo contengono, che a titolo esemplificativo ma senza essere ad essi limitati, possono essere prodotti alimentare, cosmetici, biotecnologici ecc.
Forma quindi un primo oggetto della presente descrizione un metodo per la preparazione di un concentrato di proteine sieriche con ridotto contenuto di lattosio a partire da un campione di lattosiero comprendente i seguenti passaggi:
a) concentrare detto campione di lattosiero fino ad ottenere una concentrazione in proteine compresa tra circa 150-300 grammi/litro;
b) sottoporre detto lattosiero concentrato ad almeno un passaggio di diafiltrazione;
c) diluire detto concentrato di proteine diafiltrato fino ad ottenere una soluzione avente una concentrazione in proteine compresa tra circa 50-90 grammi/litro;
d) aggiungere a detta soluzione circa 5-10 grammi di una silice pirogenica per litro di soluzione;
e) aggiungere circa 70-300 ml di etanolo al 95% v/v, per chilogrammo di proteine in detta soluzione;
f) acidificare il pH della soluzione ottenuta al punto e) fino ad un valore di circa 4.5-5;
g) riscaldare la soluzione acidificata ad una temperatura compresa tra circa 55 e 70 °C per almeno 20 minuti in cui detta temperatura à ̈ raggiunta nel giro di circa 30 minuti;
h) raffreddare la soluzione ad una temperatura compresa tra circa 10 e 20°C; i) effettuare una separazione della soluzione raffreddata di proteine;
l) portare il pH della soluzione separata ad un valore di circa 5.8-6.8;
m) sottoporre la soluzione ottenuta al punto l) ad almeno un passaggio di microfiltrazione fino ad ottenere un concentrato proteico avente una concentrazione in proteine compresa tra circa 100 e 300 grammi/litro,
n) sottoporre il concentrato proteico ad almeno un passaggio di diafiltrazione; o) essiccare e/o liofilizzare detto concentrato proteico.
in cui detto concentrato di proteine sieriche di lattosiero ha una concentrazione ≤ 0.5 grammi di lattosio per chilogrammo di proteine.
Un secondo oggetto della presente descrizione à ̈ un concentrato di proteine di lattosiero (o proteine sieriche) comprendente ≤ 0.5 grammi di lattosio per chilogrammo di proteine.
Ulteriore oggetti della presente descrizione sono prodotti alimentari, cosmetici o biotecnologici comprendenti il concentrato di proteine di lattosiero di cui sopra.
DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL'INVENZIONE
La presente invenzione riguarda un metodo per la preparazione di un concentrato di proteine sieriche con ridotto contenuto di lattosio a partire da un campione di lattosiero. In altri termini, il metodo qui descritto consente di isolare la miscela di proteine contenute nel lattosiero riducendo e/o eliminando il lattosio presente nel campione di siero di latte di partenza.
Con il termine “lattosiero†o “siero di latte†s’intende nella presente descrizione la parte liquida che si ottiene del latte intero, scremato, parzialmente scremato dopo separazione del caglio.
In particolare, il metodo oggetto della presente descrizione comprendente i seguenti passaggi operativi:
a) concentrare detto campione di lattosiero fino ad ottenere una concentrazione in proteine compresa tra circa 150-300 grammi/litro;
b) sottoporre detto lattosiero concentrato ad almeno un passaggio di diafiltrazione;
c) diluire detto concentrato di proteine diafiltrato fino ad ottenere una soluzione avente una concentrazione in proteine compresa tra circa 50-90 grammi/litro;
d) aggiungere a detta soluzione circa 5-10 grammi di una silice pirogenica per litro di soluzione;
e) aggiungere circa 70-300 ml di etanolo al 95% v/v, per chilogrammo di proteine in detta soluzione;
f) acidificare il pH della soluzione ottenuta al punto e) fino ad un valore di circa 4.5-5.0;
g) riscaldare la soluzione acidificata ad una temperatura compresa tra circa 55 e 70 °C per almeno 20 minuti in cui detta temperatura à ̈ raggiunta nel giro di circa 30 minuti;
h) raffreddare la soluzione ad una temperatura compresa tra circa 10 e 20°C; i) effettuare una separazione della soluzione raffreddata di proteine;
l) portare il pH della soluzione separata ad un valore di circa 5.8-6.8;
m) sottoporre la soluzione ottenuta al punto l) ad almeno un passaggio di microfiltrazione fino ad ottenere un concentrato proteico avente una concentrazione in proteine compresa tra circa 100 e 300 grammi/litro,
n) sottoporre il concentrato proteico ad almeno un passaggio di diafiltrazione; o) essiccare e/o liofilizzare detto concentrato proteico.
in cui detto concentrato di proteine sieriche di lattosiero ha una concentrazione ≤ 0.5 grammi di lattosio per chilogrammo di proteine.
La preparazione di un concentrato di proteine secondo il metodo qui descritto può essere effettuato a partire da un campione di lattosiero che può comprende sia lattosiero dolce che acido oppure può contenere solo lattosiero dolce o solo lattosiero acido. Il lattosiero utile ai fini della presente invenzione può essere di qualsiasi origine quindi a titolo meramente esemplificativo e non limitante tale lattosiero può essere ottenuto da latte umano, bovino, caprino ecc.
Come sopra indicato, il metodo comprende un passaggio di concentrazione del campione di lattosiero di partenza che può essere effettuato secondo una qualsiasi tecnica nota al tecnico del settore idonea a tal fine. In una forma di realizzazione preferita del presente metodo, il passaggio di concentrazione à ̈ effettuato mediante ultrafiltrazione/i. Ad esempio, l’ultrafiltrazione, secondo il passaggio a) sopra indicato, à ̈ condotta mediante l’utilizzo di membrane aventi un cut off compreso tra circa 10000-15000 dalton. Quindi, a scopo illustrativo possono essere utilizzate membrane con cut off di 10000, 11000, 12000, 13000, 14000 e/o 15000. Ai fini dell’ottenimento di un lattosiero con una concentrazione in proteine di almeno 150 grammi/litro, potranno essere richiesti uno o più passaggi di ultrafiltrazione e/o l’utilizzo di uno o più membrane sopra indicate.
La fase successiva ovvero il passaggio b) del metodo di cui sopra consiste nella riduzione della massima quantità possibile di lattosio dal lattosiero concentrato secondo quanto sopra detto. L’eliminazione totale o la parziale riduzione del contenuto di lattosio può essere effettuata, ad esempio, mediante almeno un passaggio di diafiltrazione. Per diafiltrazione s’intende in generale la separazione di micro soluti da una soluzione di molecole, in questo caso proteine, mediante ultrafiltrazione effettuata con continua addizione di solvente. Ad esempio, la diafiltrazione secondo il presente metodo può essere effettuata utilizzando come solvente acqua demineralizzata, distillata e/o osmotica ma non soluzioni saline. A titolo meramente esemplificativo possono essere utilizzati tre volumi di acqua demineralizzata per ogni volume di lattosiero concentrato. In una forma di realizzazione della presente invenzione, i passaggi di diafiltrazione del lattosiero concentrato sono almeno 3 e sono effettuati impiegando tre volumi di acqua demineralizzata per ogni volume di lattosiero concentrato.
Successivamente, il lattosiero diafiltrato che per quanto sopra detto si caratterizza rispetto al campione di lattosiero di partenza per una concentrazione di lattosio ridotta, à ̈ diluito mediante l’aggiunta di un solvente fino ad ottenere una soluzione di lattosiero diafiltrato con un contenuto di proteine di circa 50-90 grammi/litro. In particolare, tale soluzione può avere un contenuto di proteine di circa 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80 ,81 ,82 , 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 grammi/litro. In una forma di realizzazione dell’invenzione la soluzione di lattosiero diafiltrato ha una concentrazione in proteine di circa 70 grammi/litro. Ad esempio, la diluzione della soluzione di lattosiero diafiltrato à ̈ effettuato mediante l’utilizzo di acqua demineralizzato come solvente.
Il passaggio d) del metodo qui descritto comprende l’aggiunta alla soluzione diluita di lattosiero circa 5-10 grammi, ad esempio 7 grammi, di una silice pirogenica per litro di soluzione.
La silice pirogenica à ̈ un particolare tipo di silice consistente in goccioline microscopiche di silice amorfa che si agglomerano in particelle terziarie con peculiari caratteristiche chimico/fisiche. La silice pirogenica, di solito presente in commercio sotto forma di una polvere, à ̈ silice pirogenica idrofila in grado di fissare lipoproteine, materia grassa residua e/o macromolecole presenti in una data soluzione. Non risulta necessario in tale sede descrivere nel dettaglio la silice pirogenica dal momento che essa à ̈ ben nota e ampiamente utilizzate in diversi campi tecnici dagli esperti del settore. A titolo meramente esemplificativo e non limitante ai fini della presente invenzione, la silice pirogenica può essere del tipo Aerosil® ad esempio Aerosil® 380 e/o Aerosil® 200.
Successivamente all’aggiunta della silice di cui sopra, alla soluzione sono addizionati circa 70-300 ml di etanolo al 95% v/v, per chilogrammo di proteine. Ad esempio, la quantità di etanolo aggiunta à ̈ di circa 120 ml per chilogrammo di proteine e ancora più ad esempio, l’etanolo à ̈ di tipo alimentare.
In seguito, in accordo al passaggio f) del metodo qui descritto, il pH della soluzione à ̈ portato ad un valore compreso tra 4.5 e 5.0, ad esempio mediante l’utilizzo di HCl. Il pH della soluzione alla fine del passaggio f) potrà essere un pH di 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0; ad esempio il pH avrà un valore di 4.6.
La soluzione acida così ottenuta à ̈ poi riscaldata ad una temperatura compresa tra 55 e 70 °C per almeno 20 minuti. In particolare, tale temperatura di riscaldamento può essere di 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 °C, ad esempio di 66°C. Ai fini della presente invenzione, il riscaldamento appena descritto che consiste concretamente nell’aumento della temperatura dalla temperatura iniziale del campione di lattosiero di partenza alla temperatura d’interesse sopra indicata, deve avvenire in un intervallo di almeno 30 minuti. In particolare, gli inventori del presente metodo hanno osservato che un riscaldamento più rapido della soluzione determina la perdita nella resa di proteine sieriche purificate mentre un riscaldamento più lento determina una purificazione non soddisfacente delle proteine sieriche dal momento che proteine non d’interesse come, ad esempio, la caseina non sono eliminate.
In seguito, la soluzione riscaldata à ̈ raffreddata ad una temperatura inferiore compresa tra 10 e 20°C, quindi ad una temperatura di 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20°C.
Tale soluzione raffreddata à ̈ successivamente sottoposta a separazione allo scopo di isolare la porzione contenete le proteine sieriche. Tale passaggio i) del metodo qui descritto può essere effettuato secondo una qualsiasi tecnica di separazione/purificazione ritenuta dal tecnico del settore idonea a consentire della componente proteica dalla soluzione di cui sopra. A titolo meramente esemplificativo, la separazione può essere in continuo utilizzando separatori Alfalaval o Wesfalia.
Il pH della soluzione separata, contente le proteine sieriche, à ̈ poi portato ad un valore compreso tra 5.8 e 6.8, ad esempio mediante l’utilizzo di NaOH. Il pH della soluzione alla fine di tale passaggio l) potrà essere un pH di 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7 o 6.8, ad esempio il pH avrà un valore di 6.4.
Successivamente, in accordo al passaggio m) del metodo oggetto della presente descrizione la soluzione di proteine sieriche à ̈ sottoposta ad almeno un passaggio di microfiltrazione fino ad ottenere un concentrato proteico avente una concentrazione in proteine compresa tra circa 100 e 300 grammi/litro. In una forma di realizzazione del presente metodo, la microfiltrazione à ̈ condotta con membrane aventi un cut off di circa 12 micron o 0.6 micron. In particolare, può essere effettuato almeno un primo passaggio di microfiltrazione utilizzando membrane con cut off di 12 micron seguito da uno o più passaggi di microfiltrazione utilizzando membrane con cut off di 6 micron. Ad esempio, le membrane per la microfiltrazione da usare nel metodo qui descritto sono membrane organiche e/o di ceramica.
In seguito, la soluzione microfiltrata di proteine sieriche à ̈ sottoposta ad almeno un passaggio di diafiltrazione che può essere condotto in maniera analoga a quanto già prima descritto per il passaggio b) del metodo della presente descrizione.
Infine, la soluzione microfiltrata e diafiltrata di proteine di lattosiero à ̈ essiccata e/o liofilizzata ottenendo così un concentrato di proteine sieriche di lattosiero.
Il concentrato di proteine di lattosiero o sieriche ottenibile mediante il metodo sopra descritto si caratterizza, in particolare, per avere una concentrazione ≤ 0.5 grammi di lattosio per chilogrammo di proteine. Inoltre, il metodo conduce ad un concentrato di proteine sieriche in cui la purezze delle proteine in esso contenute à ̈ di almeno il 96%. In aggiunta, il concentrato proteico ottenibile secondo quanto qui divulgato si caratterizza anche per essere privo di odori e/o gusti sgradevoli tipici delle proteine del lattosiero.
Come già indicato, le caratteristiche chimico/fisiche di detto concentrato lo rendono particolarmente vantaggioso in condizioni in cui à ̈ necessario che il contenuto di lattosio in esso presente sia ridotto al minimo o ad esempio assente come nel caso in cui la sua destinazione d’uso finale coinvolga soggetti intolleranti e/o allergici al lattosio. Per quanto detto, formano oggetto della presente invenzione anche prodotti che comprendono il concentrato proteico sopra descritto. In particolare, tali prodotti possono essere destinati a qualsiasi campo della tecnica come, ad esempio e senza essere ad essi limitati, a prodotti del campo alimentare, cosmetico, biotecnologico. A titolo meramente esemplificativo i prodotti alimentari possono essere alimenti destanti al nutrimento di neonati, di soggetti malati, di bambini, di persone anziane o semplicemente di persone che seguono un particolare regime dietetico come, ad esempio, zuppe, yogurt, latte, succhi di frutta, dessert ecc. In campo cosmetico invece, il concentrato oggetto della presente invenzione può essere compreso in prodotti idratanti, o in generale in prodotti che permettono di nutrire le cellule della pelle. Inoltre, in campo biotecnologico, il concentrato d proteine sieriche può essere ad esempio utilizzato come elemento da inserire nei terreni di coltura per cellule di mammifero o per microorganismi destinati, ad esempio, alla produzione di proteine ricombinanti.
ESEMPI
Esempio1: Arricchimento di prodotti alimentari con il concentrato di proteine del latte di siero
I prodotti alimentari comprendenti il concentrato di proteine di siero possono essere preparati come segue.
Zuppe: tra 10 e 15g di concentrato per una porzione di zuppa compresa tra 150 e 250 ml;
latte: tra 5 e 10g di proteine sieriche per una porzione di latte compresa tra 150 e 250 ml;
yogurt: tra 5 e 10g di concentrato per una porzione di yogurt compresa tra 100 e 250 ml;
Succo di frutta: tra 5 e 10g di concentrato per una porzione compresa tra 100 e 1000 ml;
Dessert: tra 5 e 10g di concentrato per una porzione di dessert compresa tra 100 e 250 ml;

Claims (17)

  1. RIVENDICAZIONI 1. Metodo per la preparazione di un concentrato di proteine sieriche con ridotto contenuto di lattosio a partire da un campione di lattosiero comprendente i seguenti passaggi: a) concentrare detto campione di lattosiero fino ad ottenere una concentrazione in proteine compresa tra circa 150-300 grammi/litro; b) sottoporre detto lattosiero concentrato ad almeno un passaggio di diafiltrazione; c) diluire detto concentrato di proteine diafiltrato fino ad ottenere una soluzione avente una concentrazione in proteine compresa tra circa 50-90 grammi/litro; d) aggiungere a detta soluzione circa 5-10 grammi di una silice pirogenica per litro di soluzione; e) aggiungere circa 70-300 ml di etanolo al 95% v/v, per chilogrammo di proteine in detta soluzione; f) acidificare il pH della soluzione ottenuta al punto e) fino ad un valore di circa 4.5-5.0; g) riscaldare la soluzione acidificata ad una temperatura compresa tra circa 55 e 70 °C per almeno 20 minuti in cui detta temperatura à ̈ raggiunta nel giro di circa 30 minuti; h) raffreddare la soluzione ad una temperatura compresa tra circa 10 e 20°C; i) effettuare una separazione della soluzione raffreddata di proteine; l) portare il pH della soluzione separata ad un valore di circa 5.8-6.8; m) sottoporre la soluzione ottenuta al punto l) ad almeno un passaggio di microfiltrazione fino ad ottenere un concentrato proteico avente una concentrazione in proteine compresa tra circa 100 e 300 grammi/litro, n) sottoporre il concentrato proteico ad almeno un passaggio di diafiltrazione; o) essiccare e/o liofilizzare detto concentrato proteico. in cui detto concentrato di proteine di lattosiero ha una concentrazione ≤ 0.5 grammi di lattosio per chilogrammo di proteine.
  2. 2. Metodo secondo la rivendicazione 1, in cui detto campione di lattosiero comprende lattosiero dolce e/o acido.
  3. 3. Metodo secondo la rivendicazione 1 o 2, in cui la concentrazione ai punti a) e n) Ã ̈ effettuata mediante ultrafiltrazione.
  4. 4. Metodo secondo la rivendicazione 3, in cui detta ultrafiltrazione à ̈ effettuata con membrane aventi un cut off compreso tra circa 5000-15000 dalton.
  5. 5. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 4, in cui detti almeno 1 passaggio di diafiltrazione ai punti b) ed n) sono almeno 3.
  6. 6. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 5, in cui detto almeno un passaggio di diafiltrazione al punto b) Ã ̈ effettuato utilizzando come solvente acqua demineralizzata, deionizzata e/o una soluzione osmotica.
  7. 7. Metodo secondo la rivendicazione 6, in cui la diafiltrazione à ̈ effettuata utilizzando 3 volumi di detto solvente per ogni volume della soluzione concentrata di proteine.
  8. 8. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 7, in cui detto passaggio d) Ã ̈ effettuato aggiungendo circa 7 gr di silice pirogenica per ogni litro di detta soluzione diluita.
  9. 9. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 8, in cui detto passaggio e) Ã ̈ effettuato aggiungendo circa 100-150 ml di detto etanolo per chilogrammo di proteine in detta soluzione.
  10. 10. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 9, in cui detto passaggio g) Ã ̈ effettuato ad una temperatura di circa 66°C.
  11. 11. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 10, in cui detto almeno un passaggio di microfiltrazione al punto m) Ã ̈ effettuato utilizzando una membrana con un cut off di circa 12 micron o 0.6 micron.
  12. 12. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 11 in cui dette proteine sono pure almeno al 96%.
  13. 13. Concentrato di proteine di lattosiero ottenibile mediante il metodo secondo un qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 12.
  14. 14. Concentrato di proteine di lattosiero comprendente ≤ 0.5 grammi di lattosio per chilogrammo di proteine.
  15. 15. Concentrato di proteine di lattosiero secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 14 in cui dette proteine sono pure almeno al 96%.
  16. 16. Concentrato di proteine di lattosiero secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 13 a 15 caratterizzato dall’essere privo di odori e/o gusti sgradevoli tipici delle proteine sieriche.
  17. 17. Prodotti alimentari, cosmetici o biotecnologici comprendenti il concentrato di proteine di lattosiero secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 13 a 16.
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