ITMI20091362A1 - Composizione farmaceutica, cosmetica o dietetica atta a promuovere un effetto schiarente dell'epidermide - Google Patents

Description

"COMPOSIZIONE FARMACEUTICA, COSMETICA O DIETETICA ATTA A PROMUOVERE UN EFFETTO SCHIARENTE DELL'EPIDERMIDEâ€

DESCRIZIONE

La presente invenzione riguarda l’uso di una composizione con effetto schiarente sulla pelle.

La produzione e l'accumulo non fisiologico delle melanine caratterizzano un vasto numero di malattie della pelle, quali l'iperpigmentazione acquisita, per esempio il melasma, la melanodermia post-infiammatoria, le lentiggini solari.

L'iperpigmentazione epidermica e dermica può dipendere da un maggior numero di melanociti o dall'attività degli enzimi melanogenici. La luce ultravioletta, le infiammazioni croniche e lo sfregamento della pelle, nonché un rilascio anomalo dell'ormone α-melanotropo (α-MSH), sono fattori scatenanti di questi disturbi.

A causa della sua prevalente localizzazione nelle aree fotoesposte, l'iperpigmentazione acquisita ha rilevanza sotto vari profili, psicologico, sociale ed estetico, e sono stati molteplici gli sforzi mirati a selezionare gli agenti di depigmentazione riconosciuti e putativi. Inoltre, poiché i noti composti schiarenti si sono spesso dimostrati inefficaci verso l'accumulo dermico della melanina, sono state proposte come alternativa terapie fisiche, ad esempio con laser.

Un composto di depigmentazione ideale deve avere un effetto schiarente e potente, rapido e selettivo sui melanociti iperattivati e nessun effetto collaterale a breve o a lungo termine, e portare ad una rimozione del pigmento indesiderato agendo in una o più fasi del processo di pigmentazione.

Si à ̈ ora sorprendentemente trovato, e ciò costituisce oggetto della presente invenzione, che il composto spermidina, ossia N-(3-aminopropil)butano-1 ,4-diammina, come tale o sotto forma di derivato farmaceuticamente accettabile quale un sale, à ̈ dotato di un’attività di inibizione della pigmentazione nello strato basale dell’epidermide, e può essere pertanto efficacemente usato per promuovere un effetto schiarente della pelle.

Da tale attività si configura l’uso del composto attivo nell'uomo quale naturale agente di depigmentazione dell’epidermide privo di effetti collaterali negativi.

Oggetto dell'invenzione à ̈ anche una composizione per uso farmaceutico, cosmetico o dietetico atta a svolgere tale effetto schiarente della pelle e contenente pertanto quale principio attivo spermidina, come tale o sottoforma di derivato farmaceuticamente accettabile quale un sale.

Un sale preferito secondo l’invenzione à ̈ spermidina tricloridrato, ossia N-(3-aminopropil)butano-1 ,4-diammina<â– >3HCI.

Una composizione dell’invenzione preferibilmente comprende spermidina tricloridrato formulata per uso topico suH’epidermide. Adatte forme per uso topico sono ad esempio una crema oppure una maschera oppure una emulsione oppure una soluzione.

Spermidina, come tale o sottoforma di derivato farmaceuticamente accettabile quale un sale, à ̈ contenuta in una composizione dell’invenzione formulata per uso topico secondo una concentrazione preferibilmente compresa tra 10<"5>e 1 g/100 mi, corrispondente a da 0.4 a 4-10<4>Î1⁄4Îœ.

Un’altra composizione dell’invenzione comprende spermidina tricloridrato formulata per uso orale.

Spermidina, come tale o sottoforma di derivato farmaceuticamente accettabile quale un sale, à ̈ contenuta in una composizione dell’invenzione formulata per uso orale secondo una quantità compresa tra 0.125 e 25 mg di spermidina come tale, 0 base, per singola unità di somministrazione.

1 seguenti esempi di formulazione illustrano l’invenzione senza in alcun modo limitarne l’ambito.

Le quantità dei componenti sono espresse in grammi oppure milligrammi e, nel caso degli esempi da 1 a 3, per intervalli di concentrazione.

ESEMPIO 1

CREMA GIORNO

Composizione per 100 mi di crema

Componente (Nome INCl)

Cyclopentasiloxane 5 - 30 9

Ethylhexyl methoxycinnamate 1 - 10 g

Hdi/trimethylol hexyllactone crosspolymer 1 - 10 g

Glycerin 1 - 10 g

C30 - 45 alkyl cetearyl dimethicone crosspolymer 0.1 -3 g Steareth - 2 0.1 -3 g Polysilicone - 11 0.1 -3 g Ammonium acryloyldimethyltaurate / vp copolymer 0.1 -3 g Dimethicone 0.1 -3 g Stearic acid 0.1 -3 g Steareth - 21 0.1 -3 g Limnanthes alba seed oil 0.05-2 g Zea mays oil 0.05 - 2 g Boron nitride 0.05 - 2 g Titanium dioxide 0.05-2 g Butyrospermum parkii butter 0.05-2 g Methylene bis - benzotriazolyl tetramethylbutylphenol 0.05-2 g Parfum 0.05-2 g Conservante q.b. g Beta - sitosterol 0.05-2 g Hydrogenatd lecithin 0.05 - 2 g Silica 0.01 - 1 g Decyl glucoside 0.01 - 1 g Tetrasodium glutamate diacetate 0.01 - 1 g Sodium hyaluronate 0.01 - 1 g Pentaerythrityl tetra - di - 1 - butyl hydroxyhydrocinnamate 0.01 - 1 g Tocotrienols 0.01 - 1 g Ceteareth - 25 0.001 -0.01 g Cetyl alcohol 0.001 -0.01 g Propylene glycol 0.001 - 0.01 g Xanthan gum 0.001T0.01 g Spermidine HCI 10<"5>-1 g Aqua q.b. a 100 mi

ESEMPIO 2

CREMA SEBO-EQUILIBRANTE

Composizione per 100 mi di crema

Componente (Nome INCI)

PEG-8 Beeswax 1-8 g Glycerin 1-6 g Squalene 0,5-3 g Cetearyl Alcohol 0,5-3 g Hydrogenated Palm Kernel Glycerides 0,5-3 g Hydrogenated Palm Glycerides 0,5-3 g Macadamia Ternifolia Seed Oil 0,5-3 g Dimethicone 0,5-3 g Conservante 0,5-3 g Carbomer 0,01-0,5 g Hydroxypropyl Guar 0,01-0,5 g Spermidine HCI 10<'b>- 1 g Perfum q.b.

pH corrector (lactic acid/NaOH) q.b.

Aqua q.b. a 100

ESEMPIO 3

CREMA VISO INTENSIVA

Composizione per 100 g di crema

Componente (Nome INCI)

Ethylhexyl palmitate 2-7 g Glycerin 2-6 g C12-C13 Alkyl Lactate 2-6 g C13-15 alkane 2-6 g Cyclopentasiloxane 2-6 g PEG-30 dipolyhydroxystearate 0,5- 3 g Nylon-12 0,5- 3 g Ppg-15 stearyl ether 0,5- 3 g Hydrogenated Castor Oil 0,5- 3 g Magnesium Sulfate Heptahydrate 0,5-1 g Helianthus annuus (Sunflower) seed oil 0.1-1 g Spermidine HCI 10<'5>- 1 g Parfum q.b.

Preservante q.b.

Lactic acid (pH corrector) q.b.

Aqua q.b. a 100 g

ESEMPIO 4

Capsula

Composizione per singola capsula

Componente

Microcrystaline cellulose 70 mg Lactose 30 mg Polyvinylpyrrolidone K30 12 mg Spermidine trihydrochloride 5 mg Silicon dioxide 2.5 mg Tale 10 mg Magnesium stearate 1.5 mg Hard gelatine capsule shell N. 4 1 n.

ESEMPIO 5

Capsula di gelatina molle

Composizione per singola capsula

Componente

Soy oil 82 mg Fish gelatine 40 mg Glycerin 11 mg Sorbitol 70% 16 mg Water 15 mg Bee wax 14 mg Mono and diglycerides of fatty acids 14 mg Lecithin 6 mg Titanio Dioxide 0.5 mg Spermidine (free base) 0.25 mg

ESEMPIO 6

Compressa

Composizione per singola compressa

Componente

Lactose 300 mg Polyvinylpyrrolidone K90 45 mg Colloidal Silicon dioxide 8 mg Magnesium stearate 2 mg Spermidine trihydrochloride 1.0 mg

ESEMPIO 7

Compressa rivestita a rilascio ritardato

Composizione per singola compressa

Componente

Microcrystalline cellulose 274 mg Calcium Phosphate bibasic dihydrate 222 mg Hydroxypropylmethylcellulose K100 140 mg Sepifilm TM LP 770 white 39 mg Magnesium stearate 21 mg Colloidal Silicon dioxide 9 mg Spermidine trihydrochloride 1.5 mg ESEMPIO 8

Granulato effervescente in bustina per la preparazione di un soluzione estemporanea

Composizione per singola bustina

Componente

Mannitolo 1680 mg Acido Tartarico 928 mg Sodio bicarbonato anidro 490 mg Aroma 228 mg Polivinilpirrolidone 79 mg Trometamolo 56 mg Aspartame 35 mg Spermidina tricloridrato 1 mg Silice Colloidale Anidra 4 mg

Si riporta nel seguito la descrizione di uno studio sperimentale relativo all’attività nell’uso della spermidina secondo la presente invenzione.

STUDIO DI ATTIVITÀ’

Campioni di tessuto

Un campione di pelle umana normale à ̈ stato prelevato da una donna sottoposta a un intervento chirurgico di lifting facciale di routine dopo aver ottenuto consenso informato. Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti in conformità ai principi di Helsinki, con approvazione del comitato etico.

Coltura d'organo della pelle a spessore completo

I tessuti biopsiati con bisturi cilindrico da 3-4 mm sono stati coltivati a 37°C per 6 giorni in terreno Williams E (Biochrom, Cambridge, U.K.), integrato con 100 IU mL<"1>di penicillina, 10 pg mL<'1>di streptomicina (Gibco, Karlsruhe, Germania), 10 pg mL<"1>di insulina (Sigma, Taukfirchen, Germania), 10 ng mL<'1>idrocortisone (Sigma) e 2mmol L<"1>(L-glutammina (Invitrogen, Paisley, U.K.).

Sono stati quindi somministrati spermidina HCI alle concentrazioni 0,1 pM; 0,5 pM; 1 Î1⁄4Îœ, oppure un veicolo quale sostanza di riferimento, una volta ad ogni cambio di terreno (ossia ogni 48 ore).

Pigmentazione dell'epidermide

Per la visualizzazione istochimica della melanina su sezioni congelate si à ̈ eseguita la colorazione di Masson-Fontana. La melanina à ̈ stata colorata sotto forma di granuli marroni ed à ̈ stato valutato il grado di pigmentazione attraverso la tecnica di Masson-Fontana quantitativa (Ito N., Ito T., Kromminga A., Bettermann A., Takigawa M., Kees F., Straub R. H., and Paus R. (2005): Human hair follicles display a functional equivalent of thà ̈ hypothalamic-pituitary-adrenal axis and synthesize cortisol. FASEB J 19, 1332-4).

Questo metodo à ̈ un indicatore particolarmente sensibile ed affidabile delle variazioni di sintesi della melanina, così come dimostrato da saggi di attività enzimatica e espressione della tirosinasi standard (Kauser S., Slominski A., Wei E. T., and Tobin D. J. (2006): Modulation of the human hair follicle pigmentary unit by corticotropin-releasing hormone and urocortin peptides. FASEB J 20, 882-95).

L'intensità della colorazione à ̈ stata analizzata in una regione di riferimento definita dell'unità di pigmentazione dell'epidermide, usando il software ImageJ (National Institute of Health).

Misure della proliferazione e deH'apoptosi

Per valutare le cellule apoptotiche in co-localizzazione con un marker di proliferazione Ki-67, si à ̈ usato il metodo di doppia colorazione TUNEL (terminal dUTP nick-end labeling) con Ki-67. Le sezioni per criostato sono state fissate in paraformaldeide e etanolo-acido acetico (2:1) e marcate con un digoxigeninadeossi-UTP (kit di identificazione dell'apoptosi in situ con fluoresceina ApopTag; Intergen, Purchase, NY) in presenza di deossinucleotidil transferasi terminale, a cui à ̈ seguita l'incubazione con un antisiero anti-Ki-67 murino (1:20 in PBS per una notte a 4°C; Dako, Glostrup, Danimarca). Le cellule TUNEL-positive sono state visualizzate mediante un anticorpo antidigoxigenina fluoresceina isotiocianato coniugato (kit ApopTag), mentre Ki-67 à ̈ stato rilevato mediante un anticorpo antitopo di capra marcato con rodammina (Jackson ImmunoResearch, West Grave, PA). I controlli negativi sono stati eseguiti omettendo la deossinucleotidil transferasi terminale e l'anticorpo Ki-67. La controcolorazione à ̈ stata eseguita con 4',6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI) (Roche Molecular Biochemicals GmbH, Mannheim, Germania). Si à ̈ eseguita Pìmmunoistomorfometria quantitativa; le cellule Ki-67, TUNEL o DAPI-positive sono state contate in una regione di riferimento definita precedentemente della matrice dell'epidermide, ed à ̈ stata determinata la percentuale di cellule Ki-67/TUNEL positive.

Immunoistochimica quantitativa di K15

Per esaminare l'espressione della cheratina K15 si à ̈ usato il metodo di amplificazione del segnale con tirammide descritto precedentemente (Kloepper et al., 2008). In breve, le criosezioni fissate con acetone sono state lavate tre volte per 5 minuti usando il tampone TNT (tris-HCL NaCI Tween) (0,1 mol/l di Tris-HCI, pH 7,5; contenente 0,15 mol/l di NaCI e 0,05% di Tween 20). Quindi la perossidasi di rafano à ̈ stata bloccata attraverso il lavaggio con il 3% di H202in un tampone fosfato isotonico (PBS) per 15 minuti. La preincubazione à ̈ stata eseguita con l'incubazione di avidina e biotina per 15 minuti e con il 5% di siero normale di capra in TNT per 30 minuti con delle fasi di lavaggio intermedie. Le K15 antiumane murine (clone LHK15, Chemicon, Billerica, USA) sono state diluite in TNT e incubate per una notte a 4°C, seguite da un anticorpo secondario biotinilato antitopo di capra (1:200 in TNT) per 45 minuti a temperatura ambiente. Quindi, à ̈ stata somministrata streptavidina-perossidasi di rafano (kit TSA; Perkin-Elmer, Boston, MA, USA) (1:100 in TNT) per 30 minuti a temperatura ambiente. La reazione à ̈ stata amplificata con un reagente di amplificazione FITC-tirammide a temperatura ambiente per 5 minuti (1:50 in un diluente di amplificazione fornito con il kit). L'intensità di questa immunocolorazione à ̈ stata quantificata con il software ImageJ (National Institutes of Health). L'intensità della colorazione delle regioni di riferimento nello strato basale deH’epidermide à ̈ stata misurata e confrontata tra i gruppi di controllo trattati con solo veicolo e i gruppi trattati con spermidina.

Analisi statistica

L'analisi statistica à ̈ stata eseguita usando un t-test di Student bilaterale per campioni non appaiati.

Risultati

Le figure dei disegni allegati mostrano i risultati dello studio sperimentale descritto.

La fig. 1 mostra le relative immagini tratte dalla visualizzazione istochimica della melanina attraverso colorazione di Masson-Fontana, confrontata tra i gruppi di controllo trattati con solo veicolo e i gruppi trattati con spermidina HCI alle concentrazioni 0,1 Î1⁄4Îœ; 0,5 Î1⁄4Îœ; 1 pM.

La fig. 2 mostra un corrispondente grafico relativo aH’intensità di pigmentazione riscontrata nello strato basale dell’epidermide.

Da entrambe le figure risulta evidente un effetto di inibizione della pigmentazione nel caso di trattamento con spermidina HCI, in modo dipendente dalla concentrazione e dunque in progressivo aumento dalla concentrazione 0,1 pM fino a 1 pM.

Claims (10)

1. RIVENDICAZIONI 1. Uso di spermidina, come tale o sotto forma di derivato farmaceuticamente accettabile, quale principio attivo in una composizione farmaceutica, cosmetica o dietetica atta a promuovere un effetto schiarente deH'epidermide.
2. 2. Composizione farmaceutica, cosmetica o dietetica per l’uso secondo la rivendicazione 1 atta a promuovere un effetto schiarente deH’epidermide e contenente quale principio attivo spermidina, come tale o sottoforma di derivato farmaceuticamente accettabile quale un sale.
3. 3. Composizione secondo la rivendicazione 2 comprendente detto principio attivo formulato con ogni adatto eccipiente per somministrazione topica suH'epidermide.
4. 4. Composizione secondo la rivendicazione 2 comprendente detto principio attivo formulato con ogni adatto eccipiente per somministrazione orale.
5. 5. Composizione secondo la rivendicazione 3 sottoforma di crema oppure maschera oppure emulsione oppure soluzione.
6. 6. Composizione secondo la rivendicazione 4 sottoforma di capsula oppure compressa oppure granulato oppure soluzione.
7. 7. Composizione secondo la rivendicazione 3 comprendente spermidina in quantità compresa nell' intervallo da 0.4 fino a 4-10<4>Î1⁄4Îœ, corrispondente a da 5.7-10<'6>a 0.57 g/100 mi.
8. 8. Composizione secondo la rivendicazione 4 comprendente spermidina in quantità compresa nell’intervallo da 0.125 a 25 mg per unità di somministrazione.
9. 9. Composizione secondo la rivendicazione 2 in cui la spermidina à ̈ sottoforma di spermidina tricloridrato, ossia N-(3-aminopropil)butano-1,4-diammina - 3HCI.
10. 10. Composizione secondo la rivendicazione 9 comprendente spermidina tricloridrato da 10<'5>a 1 g/100ml.