HUT76969A - Glutamát receptor - Google Patents
Glutamát receptor Download PDFInfo
- Publication number
- HUT76969A HUT76969A HU9701680A HU9701680A HUT76969A HU T76969 A HUT76969 A HU T76969A HU 9701680 A HU9701680 A HU 9701680A HU 9701680 A HU9701680 A HU 9701680A HU T76969 A HUT76969 A HU T76969A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- receptor
- dna
- hmglur
- leu
- hmglur2
- Prior art date
Links
- 102000018899 Glutamate Receptors Human genes 0.000 title description 4
- 108010027915 Glutamate Receptors Proteins 0.000 title description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 132
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 71
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 71
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 57
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 55
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 48
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 47
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 41
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 37
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 37
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 35
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 34
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 30
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 24
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 22
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 20
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 20
- 108010010914 Metabotropic glutamate receptors Proteins 0.000 claims description 19
- 102000016193 Metabotropic glutamate receptors Human genes 0.000 claims description 19
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 19
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 17
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 14
- 239000000928 excitatory amino acid agonist Substances 0.000 claims description 12
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 12
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 10
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 10
- 229940125516 allosteric modulator Drugs 0.000 claims description 9
- 239000003825 glutamate receptor antagonist Substances 0.000 claims description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 7
- 229940122459 Glutamate antagonist Drugs 0.000 claims description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 6
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 5
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 claims description 4
- 230000000051 modifying effect Effects 0.000 claims description 4
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 claims description 3
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 claims description 3
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 claims 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 84
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 41
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 25
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 24
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 23
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 22
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 21
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 19
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 17
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 16
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 14
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 12
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 12
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 12
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 11
- 229930195714 L-glutamate Natural products 0.000 description 11
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 10
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 9
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 8
- OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N FORSKOLIN Chemical compound O=C([C@@]12O)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)[C@@H](O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N 0.000 description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- YFHXZQPUBCBNIP-UHFFFAOYSA-N fura-2 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=3OC(=CC=3C=2)C=2OC(=CN=2)C(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 YFHXZQPUBCBNIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 230000000848 glutamatergic effect Effects 0.000 description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 7
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 7
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 6
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 5
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 5
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 5
- -1 L-glutamate amino acid Chemical class 0.000 description 5
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000003491 cAMP production Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 5
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 3 Isobutyl 1 methylxanthine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(CC(C)C)C2=C1N=CN2 APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N Deoxycoleonol Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)C(O)CCC2(C)C SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OZLGRUXZXMRXGP-UHFFFAOYSA-N Fluo-3 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=C(C=2)C2=C3C=C(Cl)C(=O)C=C3OC3=CC(O)=C(Cl)C=C32)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 OZLGRUXZXMRXGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 4
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 4
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 4
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 4
- YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N Lys-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108010047562 NGR peptide Proteins 0.000 description 4
- 241000277269 Oncorhynchus masou Species 0.000 description 4
- GVUVRRPYYDHHGK-VQVTYTSYSA-N Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 GVUVRRPYYDHHGK-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 4
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 108700010039 chimeric receptor Proteins 0.000 description 4
- OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N colforsin Natural products OC12C(=O)CC(C)(C=C)OC1(C)C(OC(=O)C)C(O)C1C2(C)C(O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 238000007878 drug screening assay Methods 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 4
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 4
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 108010038421 metabotropic glutamate receptor 2 Proteins 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 4
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- FKYQEVBRZSFAMJ-QWRGUYRKSA-N Gly-Ser-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FKYQEVBRZSFAMJ-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 3
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N Leu-Leu-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100036837 Metabotropic glutamate receptor 2 Human genes 0.000 description 3
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101001071458 Rattus norvegicus Metabotropic glutamate receptor 2 Proteins 0.000 description 3
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 3
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 3
- 108010043240 arginyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 3
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 3
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 3
- YFYNOWXBIBKGHB-FBCQKBJTSA-N (1s,3r)-1-aminocyclopentane-1,3-dicarboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@]1(N)CC[C@@H](C(O)=O)C1 YFYNOWXBIBKGHB-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RCAUJZASOAFTAJ-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)CN=C(N)N RCAUJZASOAFTAJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- PBSOQGZLPFVXPU-YUMQZZPRSA-N Arg-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O PBSOQGZLPFVXPU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- SKTGPBFTMNLIHQ-KKUMJFAQSA-N Arg-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SKTGPBFTMNLIHQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- ZJEDSBGPBXVBMP-PYJNHQTQSA-N Arg-His-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O ZJEDSBGPBXVBMP-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 2
- OFIYLHVAAJYRBC-HJWJTTGWSA-N Arg-Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O OFIYLHVAAJYRBC-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 2
- UHFUZWSZQKMDSX-DCAQKATOSA-N Arg-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N UHFUZWSZQKMDSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N Arg-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N Arg-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- IIAXFBUTKIDDIP-ULQDDVLXSA-N Arg-Leu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O IIAXFBUTKIDDIP-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- GIMTZGADWZTZGV-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N GIMTZGADWZTZGV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- DBPAXNBOIPGEID-UHFFFAOYSA-N Arg-Phe-Phe-Asn Chemical compound C=1C=CC=CC=1CC(C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCN=C(N)N)N)CC1=CC=CC=C1 DBPAXNBOIPGEID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOJYORNRFWWEIV-IHRRRGAJSA-N Arg-Tyr-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 AOJYORNRFWWEIV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- DDPXDCKYWDGZAL-BQBZGAKWSA-N Asn-Gly-Arg Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DDPXDCKYWDGZAL-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- QQXOYLWJQUPXJU-WHFBIAKZSA-N Asp-Cys-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O QQXOYLWJQUPXJU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- FIAKNCXQFFKSSI-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Cys Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O FIAKNCXQFFKSSI-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- GCACQYDBDHRVGE-LKXGYXEUSA-N Asp-Thr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O GCACQYDBDHRVGE-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 2
- AWPWHMVCSISSQK-QWRGUYRKSA-N Asp-Tyr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(O)=O AWPWHMVCSISSQK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- YRJICXCOIBUCRP-CIUDSAMLSA-N Cys-Asn-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CS)N YRJICXCOIBUCRP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- BUUVFIAZIOIEIN-UBHSHLNASA-N Cys-Cys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)N BUUVFIAZIOIEIN-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- KJJASVYBTKRYSN-FXQIFTODSA-N Cys-Pro-Asp Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O KJJASVYBTKRYSN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- VRJZMZGGAKVSIQ-SRVKXCTJSA-N Cys-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VRJZMZGGAKVSIQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- MTAOBYXRYJZRGQ-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MTAOBYXRYJZRGQ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- LRPXYSGPOBVBEH-IUCAKERBSA-N Glu-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LRPXYSGPOBVBEH-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- OPAINBJQDQTGJY-JGVFFNPUSA-N Glu-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O OPAINBJQDQTGJY-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 2
- QXDXIXFSFHUYAX-MNXVOIDGSA-N Glu-Ile-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O QXDXIXFSFHUYAX-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 2
- LZMQSTPFYJLVJB-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N LZMQSTPFYJLVJB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- IRXNJYPKBVERCW-DCAQKATOSA-N Glu-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IRXNJYPKBVERCW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- GPSHCSTUYOQPAI-JHEQGTHGSA-N Glu-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O GPSHCSTUYOQPAI-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 2
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 2
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 2
- HMHRTKOWRUPPNU-RCOVLWMOSA-N Gly-Ile-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O HMHRTKOWRUPPNU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N Gly-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)CN)O WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N 0.000 description 2
- HFPVRZWORNJRRC-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN HFPVRZWORNJRRC-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- OEROYDLRVAYIMQ-YUMQZZPRSA-N His-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OEROYDLRVAYIMQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- MPXGJGBXCRQQJE-MXAVVETBSA-N His-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MPXGJGBXCRQQJE-MXAVVETBSA-N 0.000 description 2
- PZAJPILZRFPYJJ-SRVKXCTJSA-N His-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PZAJPILZRFPYJJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700039609 IRW peptide Proteins 0.000 description 2
- ZXJFURYTPZMUNY-VKOGCVSHSA-N Ile-Arg-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 ZXJFURYTPZMUNY-VKOGCVSHSA-N 0.000 description 2
- VZSDQFZFTCVEGF-ZEWNOJEFSA-N Ile-Phe-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O VZSDQFZFTCVEGF-ZEWNOJEFSA-N 0.000 description 2
- YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N Ile-Thr-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)O)N YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 2
- RTSQPLLOYSGMKM-DSYPUSFNSA-N Ile-Trp-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N RTSQPLLOYSGMKM-DSYPUSFNSA-N 0.000 description 2
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- PPTAQBNUFKTJKA-BJDJZHNGSA-N Leu-Cys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O PPTAQBNUFKTJKA-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- FOEHRHOBWFQSNW-KATARQTJSA-N Leu-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O FOEHRHOBWFQSNW-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N Leu-Gly-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- BTNXKBVLWJBTNR-SRVKXCTJSA-N Leu-His-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BTNXKBVLWJBTNR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N Leu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N 0.000 description 2
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N Leu-Phe-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N 0.000 description 2
- YWKNKRAKOCLOLH-OEAJRASXSA-N Leu-Phe-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YWKNKRAKOCLOLH-OEAJRASXSA-N 0.000 description 2
- QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 2
- ISHNZELVUVPCHY-ZETCQYMHSA-N Lys-Gly-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O ISHNZELVUVPCHY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- TWPCWKVOZDUYAA-KKUMJFAQSA-N Lys-Phe-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O TWPCWKVOZDUYAA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- LMGNWHDWJDIOPK-DKIMLUQUSA-N Lys-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LMGNWHDWJDIOPK-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 2
- CUHGAUZONORRIC-HJGDQZAQSA-N Lys-Thr-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O CUHGAUZONORRIC-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- ZAJNRWKGHWGPDQ-SDDRHHMPSA-N Met-Arg-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N ZAJNRWKGHWGPDQ-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 2
- JHVNNUIQXOGAHI-KJEVXHAQSA-N Met-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N)O JHVNNUIQXOGAHI-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 2
- 102100036834 Metabotropic glutamate receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- YMORXCKTSSGYIG-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Cys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N YMORXCKTSSGYIG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- KIAWKQJTSGRCSA-AVGNSLFASA-N Phe-Asn-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KIAWKQJTSGRCSA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- HTKNPQZCMLBOTQ-XVSYOHENSA-N Phe-Asn-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O HTKNPQZCMLBOTQ-XVSYOHENSA-N 0.000 description 2
- TXKWKTWYTIAZSV-KKUMJFAQSA-N Phe-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N TXKWKTWYTIAZSV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- ABEFOXGAIIJDCL-SFJXLCSZSA-N Phe-Thr-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 ABEFOXGAIIJDCL-SFJXLCSZSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- SWXSLPHTJVAWDF-VEVYYDQMSA-N Pro-Asn-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SWXSLPHTJVAWDF-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 2
- PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N Pro-Glu-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- VYWNORHENYEQDW-YUMQZZPRSA-N Pro-Gly-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 VYWNORHENYEQDW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- RMODQFBNDDENCP-IHRRRGAJSA-N Pro-Lys-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RMODQFBNDDENCP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- FHZJRBVMLGOHBX-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O FHZJRBVMLGOHBX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- LEBTWGWVUVJNTA-FKBYEOEOSA-N Pro-Trp-Phe Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)N[C@@H](CC4=CC=CC=C4)C(=O)O LEBTWGWVUVJNTA-FKBYEOEOSA-N 0.000 description 2
- OIDKVWTWGDWMHY-RYUDHWBXSA-N Pro-Tyr Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=C(O)C=C1 OIDKVWTWGDWMHY-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 2
- FCRMLGJMPXCAHD-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O FCRMLGJMPXCAHD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- JJKSSJVYOVRJMZ-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)CN=C(N)N JJKSSJVYOVRJMZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- QGMLKFGTGXWAHF-IHRRRGAJSA-N Ser-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O QGMLKFGTGXWAHF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N Ser-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- HEQPKICPPDOSIN-SRVKXCTJSA-N Ser-Asp-Tyr Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HEQPKICPPDOSIN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- YRBGKVIWMNEVCZ-WDSKDSINSA-N Ser-Glu-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YRBGKVIWMNEVCZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N Ser-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- NLOAIFSWUUFQFR-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NLOAIFSWUUFQFR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- PPNPDKGQRFSCAC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PPNPDKGQRFSCAC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- XNXRTQZTFVMJIJ-DCAQKATOSA-N Ser-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XNXRTQZTFVMJIJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- JAWGSPUJAXYXJA-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)N)CC1=CC=CC=C1 JAWGSPUJAXYXJA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N Ser-Thr-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 2
- ZVBCMFDJIMUELU-BZSNNMDCSA-N Ser-Tyr-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CO)N ZVBCMFDJIMUELU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- KIEIJCFVGZCUAS-MELADBBJSA-N Ser-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O KIEIJCFVGZCUAS-MELADBBJSA-N 0.000 description 2
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VFEHSAJCWWHDBH-RHYQMDGZSA-N Thr-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VFEHSAJCWWHDBH-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- ZLNWJMRLHLGKFX-SVSWQMSJSA-N Thr-Cys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O ZLNWJMRLHLGKFX-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N Thr-Glu Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N Thr-Gly-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- PRNGXSILMXSWQQ-OEAJRASXSA-N Thr-Leu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O PRNGXSILMXSWQQ-OEAJRASXSA-N 0.000 description 2
- HSQXHRIRJSFDOH-URLPEUOOSA-N Thr-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HSQXHRIRJSFDOH-URLPEUOOSA-N 0.000 description 2
- XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N Thr-Ser-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N)O XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 2
- YEGMNOHLZNGOCG-UBHSHLNASA-N Trp-Asn-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YEGMNOHLZNGOCG-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- KOVPHHXMHLFWPL-BPUTZDHNSA-N Trp-Pro-Asn Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O KOVPHHXMHLFWPL-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- WTRQBSSQBKRNKV-MNSWYVGCSA-N Trp-Thr-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)[C@H](O)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WTRQBSSQBKRNKV-MNSWYVGCSA-N 0.000 description 2
- RGYDQHBLMMAYNZ-IHRRRGAJSA-N Tyr-Cys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N RGYDQHBLMMAYNZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N UNPD107823 Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N Val-Leu-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 description 2
- 239000003194 amino acid receptor blocking agent Substances 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 108010084758 arginyl-tyrosyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 2
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 2
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 229960001484 edetic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 2
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 2
- 230000002964 excitative effect Effects 0.000 description 2
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 2
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 108010014719 metabotropic glutamate receptor type 1 Proteins 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 108010083476 phenylalanyltryptophan Proteins 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010079317 prolyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108010069117 seryl-lysyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- LRABILJBQLBJCT-VKHMYHEASA-N (2s)-2-azaniumyl-4-phosphobutanoate Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CC[P+]([O-])=O LRABILJBQLBJCT-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- YNXICDMQCQPQEW-UHFFFAOYSA-N 1-naphthyl dihydrogen phosphate Chemical compound C1=CC=C2C(OP(O)(=O)O)=CC=CC2=C1 YNXICDMQCQPQEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DQVAZKGVGKHQDS-UHFFFAOYSA-N 2-[[1-[2-[(2-amino-4-methylpentanoyl)amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-4-methylpentanoic acid Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O DQVAZKGVGKHQDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOIRDLRUNWIUMX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3,7-dihydropurin-6-one;6-amino-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1.O=C1NC(N)=NC2=C1NC=N2 NOIRDLRUNWIUMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNCAZYRLRMTVSF-UHFFFAOYSA-N 4-(1-amino-1-carboxyethyl)benzoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)(C)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 DNCAZYRLRMTVSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLYYHIKRBRMAJV-AEJSXWLSSA-N Ala-Val-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N NLYYHIKRBRMAJV-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- JSLGXODUIAFWCF-WDSKDSINSA-N Arg-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JSLGXODUIAFWCF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- QPOARHANPULOTM-GMOBBJLQSA-N Arg-Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N QPOARHANPULOTM-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- GOWZVQXTHUCNSQ-NHCYSSNCSA-N Arg-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GOWZVQXTHUCNSQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- RFXXUWGNVRJTNQ-QXEWZRGKSA-N Arg-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N RFXXUWGNVRJTNQ-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- BNODVYXZAAXSHW-IUCAKERBSA-N Arg-His Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 BNODVYXZAAXSHW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- PZBSKYJGKNNYNK-ULQDDVLXSA-N Arg-Leu-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O PZBSKYJGKNNYNK-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- FKQITMVNILRUCQ-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FKQITMVNILRUCQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- GSUFZRURORXYTM-STQMWFEESA-N Arg-Phe-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 GSUFZRURORXYTM-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N Arg-Pro Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N Arg-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- XRNXPIGJPQHCPC-RCWTZXSCSA-N Arg-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)O)C(O)=O XRNXPIGJPQHCPC-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N Arg-Tyr Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccc(O)cc1)C(=O)O UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QMQZYILAWUOLPV-JYJNAYRXSA-N Arg-Tyr-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QMQZYILAWUOLPV-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- BWMMKQPATDUYKB-IHRRRGAJSA-N Arg-Tyr-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BWMMKQPATDUYKB-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N Asn-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- OGMDXNFGPOPZTK-GUBZILKMSA-N Asn-Glu-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N OGMDXNFGPOPZTK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- XLZCLJRGGMBKLR-PCBIJLKTSA-N Asn-Ile-Phe Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XLZCLJRGGMBKLR-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 1
- MRQQMVZUHXUPEV-IHRRRGAJSA-N Asp-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O MRQQMVZUHXUPEV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- FKBFDTRILNZGAI-IMJSIDKUSA-N Asp-Cys Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O FKBFDTRILNZGAI-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- OVPHVTCDVYYTHN-AVGNSLFASA-N Asp-Glu-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OVPHVTCDVYYTHN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- GPPIDDWYKJPRES-YDHLFZDLSA-N Asp-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GPPIDDWYKJPRES-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- QTIZKMMLNUMHHU-DCAQKATOSA-N Asp-Pro-His Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O QTIZKMMLNUMHHU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N Asp-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- NTQDELBZOMWXRS-IWGUZYHVSA-N Asp-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- XAPPCWUWHNWCPQ-PBCZWWQYSA-N Asp-Thr-His Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)O XAPPCWUWHNWCPQ-PBCZWWQYSA-N 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100228196 Caenorhabditis elegans gly-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000312 Calcium Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000003922 Calcium Channels Human genes 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005462 Cation channels Proteins 0.000 description 1
- 241000252203 Clupea harengus Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- OIMUAKUQOUEPCZ-WHFBIAKZSA-N Cys-Asn-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O OIMUAKUQOUEPCZ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- LBOLGUYQEPZSKM-YUMQZZPRSA-N Cys-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)N LBOLGUYQEPZSKM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- NXTYATMDWQYLGJ-BQBZGAKWSA-N Cys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS NXTYATMDWQYLGJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- KCPOQGRVVXYLAC-KKUMJFAQSA-N Cys-Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N KCPOQGRVVXYLAC-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- OZSBRCONEMXYOJ-AVGNSLFASA-N Cys-Phe-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N OZSBRCONEMXYOJ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- SAEVTQWAYDPXMU-KATARQTJSA-N Cys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SAEVTQWAYDPXMU-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241001131785 Escherichia coli HB101 Species 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000034286 G proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000237858 Gastropoda Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- BRKUZSLQMPNVFN-SRVKXCTJSA-N Glu-His-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O BRKUZSLQMPNVFN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UGSVSNXPJJDJKL-SDDRHHMPSA-N Glu-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N UGSVSNXPJJDJKL-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- ITVBKCZZLJUUHI-HTUGSXCWSA-N Glu-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ITVBKCZZLJUUHI-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 1
- HLYCMRDRWGSTPZ-CIUDSAMLSA-N Glu-Pro-Cys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O HLYCMRDRWGSTPZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- QOXDAWODGSIDDI-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N QOXDAWODGSIDDI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- SABZDFAAOJATBR-QWRGUYRKSA-N Gly-Cys-Phe Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SABZDFAAOJATBR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N Gly-Leu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N Gly-Ser-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N Gly-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GJHWILMUOANXTG-WPRPVWTQSA-N Gly-Val-Arg Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GJHWILMUOANXTG-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 101100043639 Glycine max ACPD gene Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- TVQGUFGDVODUIF-LSJOCFKGSA-N His-Arg-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N TVQGUFGDVODUIF-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- KYMUEAZVLPRVAE-GUBZILKMSA-N His-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KYMUEAZVLPRVAE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 101001071429 Homo sapiens Metabotropic glutamate receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- YKRIXHPEIZUDDY-GMOBBJLQSA-N Ile-Asn-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YKRIXHPEIZUDDY-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- JSZMKEYEVLDPDO-ACZMJKKPSA-N Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O JSZMKEYEVLDPDO-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- PPSQSIDMOVPKPI-BJDJZHNGSA-N Ile-Cys-Leu Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O PPSQSIDMOVPKPI-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- CDGLBYSAZFIIJO-RCOVLWMOSA-N Ile-Gly-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)NCC([O-])=O CDGLBYSAZFIIJO-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- VEPIBPGLTLPBDW-URLPEUOOSA-N Ile-Phe-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N VEPIBPGLTLPBDW-URLPEUOOSA-N 0.000 description 1
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- JZNVOBUNTWNZPW-GHCJXIJMSA-N Ile-Ser-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N JZNVOBUNTWNZPW-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- WLRJHVNFGAOYPS-HJPIBITLSA-N Ile-Ser-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N WLRJHVNFGAOYPS-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- HJDZMPFEXINXLO-QPHKQPEJSA-N Ile-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N HJDZMPFEXINXLO-QPHKQPEJSA-N 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPIZVHPMGFWKMJ-AKGZTFGVSA-N L-alpha-(methylidenecyclopropyl)glycine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1CC1=C MPIZVHPMGFWKMJ-AKGZTFGVSA-N 0.000 description 1
- GZOVEPYOCJWRFC-UHFFFAOYSA-N L-trans-alpha-Amino-2-carboxycyclopropaneacetic acid Chemical compound OC(=O)C(N)C1CC1C(O)=O GZOVEPYOCJWRFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- TWQIYNGNYNJUFM-NHCYSSNCSA-N Leu-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TWQIYNGNYNJUFM-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- YKNBJXOJTURHCU-DCAQKATOSA-N Leu-Asp-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YKNBJXOJTURHCU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- JQSXWJXBASFONF-KKUMJFAQSA-N Leu-Asp-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O JQSXWJXBASFONF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QJUWBDPGGYVRHY-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N QJUWBDPGGYVRHY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OMHLATXVNQSALM-FQUUOJAGSA-N Leu-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N OMHLATXVNQSALM-FQUUOJAGSA-N 0.000 description 1
- HRTRLSRYZZKPCO-BJDJZHNGSA-N Leu-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HRTRLSRYZZKPCO-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N Leu-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N Leu-Thr-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- BTEMNFBEAAOGBR-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N BTEMNFBEAAOGBR-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LZWNAOIMTLNMDW-NHCYSSNCSA-N Lys-Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N LZWNAOIMTLNMDW-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- QIJVAFLRMVBHMU-KKUMJFAQSA-N Lys-Asp-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O QIJVAFLRMVBHMU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- VKCPHIOZDWUFSW-ONGXEEELSA-N Lys-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN VKCPHIOZDWUFSW-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- YKWHHKDMBZBMLG-GUBZILKMSA-N Met-Cys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCSC)N YKWHHKDMBZBMLG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JZNGSNMTXAHMSV-AVGNSLFASA-N Met-His-Arg Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N JZNGSNMTXAHMSV-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- CHDYFPCQVUOJEB-ULQDDVLXSA-N Met-Leu-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 CHDYFPCQVUOJEB-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N Met-Met Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCSC ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HUURTRNKPBHHKZ-JYJNAYRXSA-N Met-Phe-Val Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HUURTRNKPBHHKZ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- XPVCDCMPKCERFT-GUBZILKMSA-N Met-Ser-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O XPVCDCMPKCERFT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108010065028 Metabotropic Glutamate 5 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100038357 Metabotropic glutamate receptor 5 Human genes 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- FIRWJEJVFFGXSH-RYUDHWBXSA-N Phe-Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 FIRWJEJVFFGXSH-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- CWFGECHCRMGPPT-MXAVVETBSA-N Phe-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CWFGECHCRMGPPT-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- MVIJMIZJPHQGEN-IHRRRGAJSA-N Phe-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=CC=C1 MVIJMIZJPHQGEN-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- VIIRRNQMMIHYHQ-XHSDSOJGSA-N Phe-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N VIIRRNQMMIHYHQ-XHSDSOJGSA-N 0.000 description 1
- 229940099471 Phosphodiesterase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HXNYBZQLBWIADP-WDSKDSINSA-N Pro-Cys Chemical compound OC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HXNYBZQLBWIADP-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JIWJRKNYLSHONY-KKUMJFAQSA-N Pro-Phe-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JIWJRKNYLSHONY-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N Pro-Trp Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)[O-])C(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- ZAUHSLVPDLNTRZ-QXEWZRGKSA-N Pro-Val-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ZAUHSLVPDLNTRZ-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N Ser-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- OLIJLNWFEQEFDM-SRVKXCTJSA-N Ser-Asp-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OLIJLNWFEQEFDM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SWSRFJZZMNLMLY-ZKWXMUAHSA-N Ser-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SWSRFJZZMNLMLY-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- UFKPDBLKLOBMRH-XHNCKOQMSA-N Ser-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O UFKPDBLKLOBMRH-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N Ser-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- LRWBCWGEUCKDTN-BJDJZHNGSA-N Ser-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LRWBCWGEUCKDTN-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N Ser-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfisoxazole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SSDZRWBPFCFZGB-UHFFFAOYSA-N TCA-ethadyl Chemical compound ClC(Cl)(Cl)C(=O)OCCOC(=O)C(Cl)(Cl)Cl SSDZRWBPFCFZGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N 0.000 description 1
- AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- YGCDFAJJCRVQKU-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O YGCDFAJJCRVQKU-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- WPSKTVVMQCXPRO-BWBBJGPYSA-N Thr-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WPSKTVVMQCXPRO-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N Thr-Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 1
- JAWUQFCGNVEDRN-MEYUZBJRSA-N Thr-Tyr-Leu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N)O JAWUQFCGNVEDRN-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- AXEJRUGTOJPZKG-XGEHTFHBSA-N Thr-Val-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O AXEJRUGTOJPZKG-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)=CNC2=C1 LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- WMBFONUKQXGLMU-WDSOQIARSA-N Trp-Leu-Val Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N WMBFONUKQXGLMU-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONWMQORSVZYVNH-UWVGGRQHSA-N Tyr-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ONWMQORSVZYVNH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- GZWPQZDVTBZVEP-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GZWPQZDVTBZVEP-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- QPZMOUMNTGTEFR-ZKWXMUAHSA-N Val-Asn-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N QPZMOUMNTGTEFR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- UDNYEPLJTRDMEJ-RCOVLWMOSA-N Val-Asn-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)NCC(=O)O)N UDNYEPLJTRDMEJ-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- YODDULVCGFQRFZ-ZKWXMUAHSA-N Val-Asp-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YODDULVCGFQRFZ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- IRLYZKKNBFPQBW-XGEHTFHBSA-N Val-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O IRLYZKKNBFPQBW-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- JTWIMNMUYLQNPI-WPRPVWTQSA-N Val-Gly-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N JTWIMNMUYLQNPI-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- YTPLVNUZZOBFFC-SCZZXKLOSA-N Val-Gly-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O YTPLVNUZZOBFFC-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- UKEVLVBHRKWECS-LSJOCFKGSA-N Val-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N UKEVLVBHRKWECS-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- KRAHMIJVUPUOTQ-DCAQKATOSA-N Val-Ser-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N KRAHMIJVUPUOTQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WUFHZIRMAZZWRS-OSUNSFLBSA-N Val-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N WUFHZIRMAZZWRS-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N Val-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(O)=O LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- OFTXTCGQJXTNQS-XGEHTFHBSA-N Val-Thr-Ser Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O OFTXTCGQJXTNQS-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- RTJPAGFXOWEBAI-SRVKXCTJSA-N Val-Val-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N RTJPAGFXOWEBAI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000269370 Xenopus <genus> Species 0.000 description 1
- MMWCIQZXVOZEGG-HOZKJCLWSA-N [(1S,2R,3S,4S,5R,6S)-2,3,5-trihydroxy-4,6-diphosphonooxycyclohexyl] dihydrogen phosphate Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@H]1OP(O)(O)=O MMWCIQZXVOZEGG-HOZKJCLWSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 238000010448 genetic screening Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N glyclproline Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 235000019514 herring Nutrition 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- PNDZEEPOYCVIIY-UHFFFAOYSA-N indo-1 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=C(C=2)C=2N=C3[CH]C(=CC=C3C=2)C(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 PNDZEEPOYCVIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000037906 ischaemic injury Diseases 0.000 description 1
- 108010078274 isoleucylvaline Proteins 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010030617 leucyl-phenylalanyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 230000027928 long-term synaptic potentiation Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 108700023046 methionyl-leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010085203 methionylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- DZNKOAWEHDKBEP-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[6-[bis(2-methoxy-2-oxoethyl)amino]-5-[2-[2-[bis(2-methoxy-2-oxoethyl)amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-1-benzofuran-2-yl]-1,3-oxazole-5-carboxylate Chemical compound COC(=O)CN(CC(=O)OC)C1=CC=C(C)C=C1OCCOC(C(=C1)N(CC(=O)OC)CC(=O)OC)=CC2=C1OC(C=1OC(=CN=1)C(=O)OC)=C2 DZNKOAWEHDKBEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000004751 neurological system process Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000003957 neurotransmitter release Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- RGCLLPNLLBQHPF-HJWRWDBZSA-N phosphamidon Chemical compound CCN(CC)C(=O)C(\Cl)=C(/C)OP(=O)(OC)OC RGCLLPNLLBQHPF-HJWRWDBZSA-N 0.000 description 1
- 239000002571 phosphodiesterase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 230000009834 selective interaction Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000003956 synaptic plasticity Effects 0.000 description 1
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108700004896 tripeptide FEG Proteins 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 230000001515 vagal effect Effects 0.000 description 1
- 108010015385 valyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70571—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for neuromediators, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Neurology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
A humán metabotrop glutamát receptor altípus egy tisztított humán metabotrop glutamát receptor (hmGluR2).
A nukleinsavakat az jellemzi, hogy egy, a találmány szerinti receptort vagy egy variánsát kódoló nukleinsavat tartalmaznak.
A receptor előállítására szolgáló eljárást az jellemzi, hogy egy alkalmas gazdasejtet in vivő vagy in vitro sokszoroznak.
A receptor az aktivitását módosító vegyületek szkrínelésére használható.
• ·
I · · · · · · ?'/Ρ- it 1 63Α7Ί/ΖΕ
AA
Nemzetközi Szabadalmi Iroda
1-1062 Budapest, ^drássy ut _ relefon·· 34-24-950, Fax'· 34-24-323
A)
Glutamát receptor
NOVARTIS AG, BÁZEL, CH
Feltalálók:
FLÓR Peter Josef, FREIBURG, DE KUHN Rainer, LÖRRACH, DE PÜTTNER Iréné, BÁZEL, CH KNÖPFEL Thohas, RHEINFELDEN, CH
A bejelentés napja: 1995. 07. 12.
Elsőbbsége: 1994. 08. 19. (9416554.5), GB
A nemzetközi bejelentés száma: PCT/EP95/02728
A nemzetközi közzététel száma: WO 96/06167
-2A találmány tárgya egy humán metabotrop glutamát receptor (hmGluR) altípus, az azt kódoló izolált nukleinsavak, a találmány szerinti fehérjét termelő gazdasejtek, az ilyen fehérje, nukleinsavak és gazdasejtek felhasználása valamint az előállításukra szolgáló eljárások. A találmány további tárgya a találmány szerinti hmGluR fehérjével szembeni antitestek.
A metabotrop glutamát receptorok (hmGluR) a G-proteinnel (guaninnukleotidkötő fehérje) kapcsolt receptorok osztályába tartoznak, amelyek egy glutamaterg ligandum megkötése után egy intracelluláris (sejten belüli) másodlagos messenger (hírvivő) rendszer - például kalciumionok, egy gyűrűs nukleotid. diacil-glicerin, inozit-l,4,5-trifoszfát (hexaoxi-ciklohexán-1,4,5trifoszfát) - útján egy extracelluláris (sejten kívüli) jelet fiziológiai válasszá tudnak átalakítani. A metabotrop glutamát receptorok általános szerkezetét az jellemezi, hogy van hét feltételezett, a membránon átívelő szegmensük, amelyeket egy széles, sejten kívüli aminoterminális dómén előz meg és egy széles karboxiterminális dómén követ. Nakanishi [Science 258, 597-603 (1992)] szerint az mGluR osztály az aminosav-szinten mutatott szekvenciaazonosság alapján két, különböző receptor-altípusokat tartalmazó alosztályra bontható. Az egyes mGluR altípusokat egy-egy egyedi gén kódolja. Ami egy adott mGluR altípusnak egy másik alosztály egy másik altípusához viszonyított homológiáját illeti, az aminosavszekvencia megegyezése körülbelül 50%-nál kisebb. Egy alosztályon belül az aminosavszekvencia megegyezése általában 70%-nál kisebb. Tehát egy adott altípus jellemezhető az aminosavszekvenciának egy másik mGluR altípushoz - különösen egy azonos emlősfajból származó altípushoz - viszonyított homológiájával. Továbbá egy adott altípus jellemezhető a régiójával és a szövet-eloszlással, celluláris és szubcelluláris expressziós mintájával vagy egyedi fiziológiai profiljával, például elektrofiziológiai és farmakológiai tulajdonságaival.
Minthogy az L-glutamát aminosav a major excitátoros neurotranszmitter, a glutamaterg rendszerek feltehetően fontos szerepet játszanak sokféle idegi folyamatban, amilyen például a gyors excitátoros szinapsziszos transzmisszió, a neurotranszmitter kibocsátások szabályozása, a hosszú időtartamú potencionálás. tanulás és emlékezés, fejlődési szinapsziszos plaszticitás, hipoxiás-isémiás károsodás és neuronsejthalál, epilepszia-szerű rohamok valamint néhány neurodegeneratív betegség kórfejlődése. Jelenleg semmiféle információnk nincs a humán metabotrop glutamát receptor (hmGluR) 2-es altípusra, például annak aminosavszekvenciájára vagy szöveteloszlására vonatkozóan. Ez az ismerethiány különösképpen akadályozza az olyan humánterápiás szerek kutatását, amelyek a glutamaterg rendszer valamely hiányosságának tulajdonítható betegségeket specifikusan képesek befolyásolni. Tekintettel a metabotrop glutamát receptor potenciális fiziológiai és patológiai jelentőségére, szükség van humán receptor altípusokra és olyan sejtekre, amelyek ezen altípusokat az eletrofiziológiai és farmakológiai tulajdonságaik kiderítéséhez elegendő mennyiségben termelik. Például a gyógyszerszkrínelési vizsgálatokhoz tisztított humán receptor szükséges aktív alakban, ami jelenleg nem hozzáférhető.
Tehát a találmány egyik tárgya ezen igény kielégítése, vagyis 2-es altípuséi hmGluR, egy azt kódoló nukleinsav és az altípust termelő gazdasejt. A hmGluR2-t hatásosan aktiválja a (2S,3S,4S)-ct-(karboxi-ciklopropil)-glicin (LCCG-I), és ha kínai hörcsög petefészeksejtekben (CHO) vagy fiatal hörcsög vesesejtekben (BHK) expresszálják, akkor a G-proteinen keresztül negatívan kapcsolódik az adenilát-ciklázhoz. Ha a hmGluR2-re reagáló gyógyszerek szkríneléséhez egy találmány szerinti rekombináns hmGluR altípust tartalmazó rendszert használunk, akkor többek között nagyobb sejtenkénti receptorszámot érünk el, nagyobb lesz a reagens kihozatala és a vizsgálat jel/zaj aránya,
-4továbbá megnövekszik a receptor-altípus specifikussága (esteleg a biológiai és betegség-specifikusság is növekszik).
A találmány tárgya közelebbről hmGluR2, amelynek aminosavszekvenciája a 2. azonosítószámon megadott.
A találmány leírásában a hmGluR altípus egy tisztított fehérjét jelent, amely a G-proteinnel kapcsolt receptorok osztályába tartozik, és egy glutamaterg ligandum megkötése után egy extracelluláris jelet egy intraeelluláris második messenger rendszer útján átalakít. Ez esetben a találmány szerinti altípust az jellemzi, hogy egy gyűrűs nukleotid (cAMP. cGMP) szintjét módosítja. A jelátalakítás a találmány szerinti receptor altípushoz kapcsolt G-protein és egy másik membránfehérje - például egy ioncsatorna - közötti közvetlen kölcsönhatás útján is végbemehet. Úgy véljük, hogy a hmGluR2-t egy külön gén kódolja, amely más metabotrop glutamát receptor altípust nem kódol. Egy altípus jellemezhető egyedi fiziológiai profiljával, előnyösen jelátalakítási és farmakológiai tulajdonságaival. Ilyen farmakológiai tulajdonság például az agonista és antagonista válaszok szelektivitása.
A glutamaterg ligandum a leírásban például L-glutamátot vagy más olyan vegyületet jelent, amely egy hmGluR altípussal glutamátszerűen reagál vagy ily módon kötődik hozzá. Ilyen például az ACPD (lS,3R-l-amino-ciklopentán-l,3-dikarbonsav), egy ACPD-szerű ligandum, például QUIS (kviszkalát), L-2amino-4-foszfovajsav (AP4), L-CCG-I és hasonlók. Más ligandumok - például az (R,S)-a-metil-4-karboxi-fenil-glicin (MCPG) vagy az a-metil-L-AP4 - úgy reagálhatnak a találmány szerinti receptorral, hogy egy glutamaterg ligandum kötődését megakadályozzák.
A fentiekben vagy későbbiekben használt tisztított vagy izolált jelző egy dúsított vagy tiszta alakban jelenlévő találmány szerinti molekulára vonat-5kozik, amely természetes forrásból vagy génsebészet útján nyerhető. A találmány szerinti tisztított fehérje, DNS és RNS felhasználható olyan célokra, amelyekre a természetben előforduló alakjukban nem használhatók, például olyan vegyületek azonosítására, amelyek a találmány szerinti hmGluR expresszióját vagy aktivitását szelektíven modulálják.
A találmány szerinti tisztított hmGluR azonosított hmGluR2-t jelent, amelz természetes környezetének egy vagy több komponensétől gyakorlatilag mentes. Ilyen tisztított hmGluR a rekombináns sejttenyészetben lévő hmGluR. Az altípus dúsított formája olzan készítményt jelent, amely ay altípust a természetesnél nagyobb koncentrációban tartalmazza, például egy, az altípust tartalmazó sejtmembrán-frakció. Ha az altípus tiszta alakban van jelen, akkor más makromolekuláktól, különösen a természetben előforduló fehérjeszerü szennyezésektől gyakorlatilag mentes. Kívánt esetben az altípus szolubilizálható. Előnyös tisztított találmány szerinti hmGluR2 egy rekombináns fehérje. A találmány szerinti altípus előnyösen aktív állapotban van, ami azt jelenti, hogy ligandumkötő és jelátalakító hatást egyaránt mutat. A receptor-aktivitást a szakmában ismert módszerekkel, így kötési vagy funkcionális vizsgálatokkal - például egy később ismerteti módszerrel mérjük.
en körülbelül 20 aminosavból állnak.
A találmány oltalmi köre találmány szerinti receptor altípus variánsait is magába foglalja. Például a találmány szerinti hmGluR altípusnak egy variánsa az altípus funkcionális vagy immunológiai ekvivalense. Funkcionális ekvivalens egy olyan emberi fehérje, amelynek fiziológiai profilja lényegében megegyezik a 2. azonosítószámú aminosavszekvenciát mutató hmGluR2-re jellemző proflillal. Továbbá a funkcionális ekvivalens aminosavszekvenciája több mint 70 %-ban, előnyösen több mint 90 %-ban azonos a 2. szekvencia• · • *
-6azonosítószámon megadottal. Tehát a funkcionális ekvivalens nem lehet az adott alosztály egy másik altípusa, például hmGluR3. Az in vitro és in vivő fiziológiai profil tartalmazza a receptor effektor funkciót, az elektrofiziológiai és tarmakológiai tulajdonságokat, például az agonistákkal vagy antagonistákkal szemben fellépő szelektív kölcsönhatásokat. A funkcionális ekvivalensek lehetnek például egy primer transzkriptum eltérő illesztésével létrehozott rnRNS által kódolt illesztési (splice) variánsok, aminosav-mutánsok vagy glikozilezési variánsok. A 2. azonosítószámon megadott aminosavszekvenciájú hmGluR2 immunológiai ekvivalense egy olyan fehérje vagy peptid, amely ezen altípussal szemben specifikus antitesteket képes létrehozni. Különösen hasznos immunológiai ekvivalensnek tekinthetők a receptor sejten kívüli doménjének részei, például olyan peptidek, amelyek legalább 6-8, előnyösen körülbelül 20 aminosavból állnak.
A találmány oltalmi körébe tartozó további variánsok a memebránhoz kötött vagy oldható fragmentumok és a más kémiai egységekkel képzett kovalens vagy aggregációs konjugátok, amelyek egy vagy több receptorfunkciót mutatnak, amilyen például a ligandum megkötése vagy a jelátalakítás. A találmány szerinti fragmentumok előállíthatok természetes forrásból, kémiai szintéssel vagy rekombinációs módszerekkel. Ezeket a ligandumkötő domént tartalmazó fragmentumokat - minthogy a találmány szerinti hmGluR altípus endogén ellendarabjával képesek versenyezni annak endogén ligandumáért, fragmentumaiért vagy származékaiért - terápiás szereknek tekintjük.
A kovalens származékok közé tartoznak például egy receptor karboxilcsoportjának alifás észterei vagy amidjai, a hidroxilcsoportot tartalmazó aminosavak O-acil-származékai és az aminocsoportot tartalmazó aminosavak N-acilszármazékai. Ilyen származékok a receptorfehérje oldalláncain valamint N- és C-terminusán található funkciós csoportokkal kialakított kötések révén • · ·
- 7 állíthatók elő. A találmány szerinti fehérjét megjelölhetjük egy kimutatható, például radioaktív csoporttal, kovalens módon köthetjük ritka földfémek kelátjaihoz vagy egy fluoreszcens molekularészhez kapcsolhatjuk.
További származékok a találmány szerinti fehérjének egy másik fehérjével vagy peptiddel képzett kovalens konjugátjai (fúziós proteinek), például azok. amelyek különböző glutamát-receptorok különböző részeit tartalmazzák. Ilyen fúziós proteinek felhasználhatók a G-proteinekhez való kötődés megváltoztatására és/vagy egy funkcionális vizsgálat érzékenységének javítására. Például az ilyen fúziós proteinekben vagy kiméra receptorokban a találmány szerinti altípus sejten belüli doménjei egy másik mGluR altípus különösen egy hmGluR. például egy másik alosztályba tartozó hmGluR altípus - megfelelő doménjeivel lehetnek helyettesítve. Az ilyen chimer receptorok felépítésére különösen alkalmasak egy olyan receptor sejten belüli doménjei, amely a foszfolipáz C/Ca2+-szignál válaszutat aktiválja, mint például a Masu és munkatársai [Natúré 349, 760-765] által leírt mGluRl vagy azmGluR5. Kicserélhető sejten belüli dómén például a második sejten belüli hurok, amit i2nek is nevenek [lásd: Pin és munkatársai, EMBO J. 13, 342-348 (1994)]. így például egy kalcium-ion-vizsgálattal meghatározhatjuk azt a kölcsönhatást, ami egy vizsgált vegyület és egy találmány szerinti receptor ligandumkötő doménje között lép fel. A találmány szerinti chimer receptor szintetizálható rekombinációs módszerekkel vagy a szakmában a fehérjék térhálósítására alkalmasként ismert reagensekkel.
Aggregációs származékok például a sejtmembránokkal képzett adszorpciós komplexek.
Egy másik megvalósításban a találmány tárgya egy készítmény, amely a találmány szerinti hmGluR altípust tartalmazza.
-8A találmány szerinti fehérjék felhasználhatók például immuogénként, gyógyszerszkrínelési vizsgálatokban, immunvizsgálatok reagenseiként továbbá tisztítási eljárásokban, például egy kötő ligandum affinitást tisztítására.
A találmány szerinti fehérjék előállíthatok természetes forrásból például agyszövetből izolálva -, kémiai szintézissel vagy rekombinációs módszerekkel.
A találmány további tárgya eljárás a találmány szerinti hmGluR altípus előállítására, amely abból áll, hogy a találmány szerinti receptor altípust termelő alkalmas gazdasejteket in vitro vagy in vivő szaporítjuk. A gazdasejteket előnyösen transzformáljuk (transzfektáljuk) egy hibrid vektorral, amely egy promotert és egy, a szóbanforgó altípust kódoló DNS-szekvenciát tartalmazó expressziós kazettát tartalmaz, amelyben a DNS-t az említett promoter szabályozza. Ezután a találmány szerinti hmGluR altípust kinyerhetjük. A kinyerés jelentheti például azt, hogy a találmány szerinti altípust az altípust tartalmazó gazdasejtekből, például a tápoldatból izoláljuk. Különösen előnyös egy funkcionálisan aktív receptor előállítására szolgáló eljárás.
A hmGluR muteinjei előállíthatok egy, a találmány szerinti hmGluR fehérjét kódoló DNS-ből, amelyen előzetesen mutagenézist hajtottunk végre, és ennek következtében végbement egy vagy több aminosav addíciója, cseréje vagy deléciója. A találmány szerinti hmGluR altípus szubsztitúciós, deléciós vagy inszerciós variánsai előállíthatok például rekombinációs módszerekkel, és szkrínelhetők a hmGluR natív formáival mutatott immun-keresztreakciókra.
A találmány szerinti fehérje in vitro is előállítható a szakmában ismert hagyományos módszerekkel.
Az alkalmas gazdasejtek közé tartónak az eukarióta sejtek, például állati, növényi és gombasejtek; a prokarióta sejtek, például a gram-pozitív és gram-9negatív baktériumok, amilyen például az E-coli. Előnyösen alkalmazhatók a kétéltűekből vagy emlősökből származó eukarióta gazdasejtek.
A leírásban az in vivő kifejezés jelentése: ex vitro, tehát beleértendők a sejt- és szövettenyészetek is.
A találmány további tárgya egy nukleinsav (DNS vagy RNS), amely egy, találmány szerinti altípust kódoló tisztított, előnyösen rekombináns nukleinsavat (DNS vagy RNS), vagy egy ilyen nukleinsavnak egy fragmentumát tartalmazza. Ezek a nukleinsavak nemcsak a fent említett rekombináns hmGluR fehérjék előállítására használhatók, hanem szondaként is, ezáltal az átlagosan müveit szakember könnyen azonosíthatja és/vagy izolálhatja a találmány szerinti hmGluR fehérjét kódoló nukleinsavat. A nukleinsav adott esetben meg lehet jelölve egy kimutatható molekularésszel. Ezen kívül a találmány szerinti nukleinsav felhasználható például egy, a hmGluRjelenlétének kimutatására szolgáló eljárásban, amely abból áll, hogy a hmGluR-t kódoló vagy vele komplementer DNS-t (vagy RNS-t) a vizsgált nukleinsavval hibridizáljuk, és a hmGluR jelenlétét kimutatjuk.
A találmány szerinti, hmGluR2-t kódoló tisztított nukleinsav magába foglalja az olyan nukleinsavat, amely mentes legalább egy olyan szennyező nukleinsavtól, amellyel a hmGluR nukleinsav természetes fonásában eredetileg együtt fordult elő. Tehát a tisztított nukleinsav a természetben előfordulótól eltérő formában vagy összetételben van jelen. A tisztított hmGluR2 nukleinsav azonban magába foglaja a rendes körülmények között hmGluR-t expresszáló sejtekben lévő hmGluR2 nukleinsavat, ha a nukleinsav a természetes sejtekétől eltérő kromoszomális helyen van jelen, vagy valamilyen, a természetben találhatótól eltérő DNS-szekvenciájú oldalláncot tartalmaz. A hmGluR2 a genetikai térképen az emberi 3-as kromoszómában található.
• · ·
- 10A találmány tárgya közelebbről egy olyan tisztított vagy izolált DNSmolekula. amely a találmány szerinti hmGluR2 fehérjét kódolja, vagy az ilyen DNS-nek egy fragmentuma. A definíció szerint ilyen DNS lehet egy egyfonalas kódoló DNS; egy kétfonalas DNS. amely egy említett egyfonalas kódoló DNSböl és egy vele komplementer DNS-böl áll; vagy lehet maga ez az (egyfonalas) komplementer DNS. Előnyösen alkalmazható az előző bekezdés elején említett előnyös hmGluR2-t kódoló DNS vagy annak egy fragmentuma. A találmány további tárgya egy DNS, amely egy, a fent említett előnyös hmGluR2-t kódoló DNS-t vagy annak egy fragmentumát tartalmazza.
Közelebbről előnyös a hmGluR2-t kódoló DNS vagy annak egy része, különösen az olyan DNS, amelynek aminosavszekvenciája a 2. azonosítószámon megadott, például az, amelynek nukleotidszekvenciája a 1. azonosítószámon megadott.
A találmány szerinti nukleinsavszekvenciák további hmGluR2 altípusokat kódoló DNS-ek azonosítására használhatók. így például a találmány szerinti nukleinsavszekvenciák felhasználhatók az ugyanazon receptor alosztályba tartozó további hmGluR2 altípusokat kódoló DNS-ek azonosítására. Egy ilyen DNS azonosításának egyik módszere, hogy humán DNS-t összehozunk egy fent leírt nukleinsav-próbával, és meghatározzuk, hogy mely nukleinsav(ak) hibridizálnak ezzel a próbával.
A példákban szereplő találmány szerinti nukleinsavak úgy is jellemzhetők, mint olyan nukleinsavak, melyek egy találmány szerinti hmGluR altípust kódolnak, és az 1. azonosítószámon megadott szekvenciájú DNS-sel vagy annak egy választott részével (fragmentumával) hibridizálnak. Előnyösek azok a találmány szerinti hmGluR-t kódoló DNS-molekulák, amelyek a fenti DNS-ekkel szigorúan meghatározott körülmények között hibridizálnak.
A hibridizációs körülmények szigorú meghatározottsága azon • ·
«··· ·«··
- 11 körülményekre vonatkozik, amelyek között a polinukleinsav hibridek stabilak. Ezek a körülmények az átlagosan művelt szakember számára nyilvánvalóak. Ismert, hogy a hibridek stabilitását tükrözi az olvadáspont (Op), amely a szekvencia homológiájának 1 %-os csökkenésével körülbelül 1-1,5 %-kal csökken. A hibridek stabilitása általában a nátriuvnion-koncentrációtól és a hőmérséklettől ftigg. A hibridizációs reakciót rendszerint szigorúan meghatározott körülmények között, az azt követő mosásokat pedig változó szigorúságú körülmények között hajtjuk végre.
A szigorúan meghatározott körülmények a leírásban olyan körülményeket jelentenek, amelyek csak olyan nukleinsav-szekvenciák hibridizációját teszik lehetővé, amelyek 1M nátriumion-koncentrációjú oldatban 65-68°C-on stabil hibrideket képeznek. Szigorúan meghatározott körülményeket hozhatunk létre például úgy, hogy a hibridizációt 6x SSC-t, 5x Denhardt-oldatot, 1 % SDS-t (nátrium-dodecil-szulfát), 0,1 % nátrium-pirofoszfátot és nem-specifikus kompetitorként (versenytársként) 0,1 mg/ml denaturált lazacsperma-DNS-t tartalmazó vizes oldatban hajtjuk végre. A hibridizálás után néhány lépésben mosást végezhetünk szigorúan meghatározott körülmények között, majd egy végső (körülbelül 30 perces) mosást végzünk a hibridizációs hőmérsékleten 0,2-0, lx SSC-t és 0,1 % SDS-t tartalmazó oldatban.
A közepesen szigorú körülmények azt jelentik, hogy a hibridizálást a fenti oldatban, de körülbelül 60-62°C-on hajtjuk végre. Ez esetben a végső mosást a hibridizációs hőmérsékleten, lx SSC-t és 0,1 % SDS-t tartalmazó oldatban végezzük.
A kevéssé szigorú körülmények azt jelentik, hogy a hibridizálást a fenti oldatban, de körülbelül 50-52°C-on hajtjuk végre. Ez esetben a végső mosást a ·· ··»· ·«··
- 12hibridizációs hőmérsékleten, 2x SSC-t és 0,1 % SDS-t tartalmazó oldatban végezzük.
Ezek a körülmények különféle, például formamid-alapú pufferek és különböző hőmérsékletek alkalmazásához adaptálhatók, és így megsokszorozhatok. A Denhardt-oldat és az SSC a szakmában jól ismert, más alkalmas hibridizációs pufferek leírása megtalálható például az alábbi szakirodalmi helyeken: Sambrook, J., Fritsch, E.F. és Maniatis, T.: Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd edition) [Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, USA (1989)] vagy Ausubel, F.M. és munkatársai: Current Protocols in Molecular Biology [Green and Wiley, USA (1993)]. Az optimális hibridizálási körülményeket kísérleti úton kell meghatározni, továbbá a próba hosszúsága és GC-tartalma (guanin-citozin hányad) is szerepet játszik.
A leírás segítségével a találmány szerinti nukleinsavak a szakmában ismert módszerekkel előállíthatók. A találmány oltalmi körébe tartozik egy eljárás is az ilyen nukleinsavak előállítására.
Egy találmány szerinti DNS-molekula például előállítható kémiai szintézissel, rekombináns DNS-technikával vagy polimeráz láncreakcióval (PCR). A rekombináns DNS-technikával történő előállítás jelentheti egy alkalmas cDNS vagy genom könyvtár szkrínelését. Egy találmány szerinti DNS előállítására alkalmas módszer lehet például az, hogy egy sor oligonukleotidot szintetizálunk, ezeket PCR módszerekkel amplifikáljuk (sokszorozzuk), majd összekapcsoljuk, hogy megkapjuk a kívánt DNS-szekvenciát. E célra alkalmas, például a példákban alkalmazott könyvtárak kereskedelmi forgalomban kaphatók, vagy neurális vagy neuronális (ideg- vagy idegsejti) szövetekből - például hippocampusvagy cerebellum-szövetekből sejtvonalakból és hasonlókból előállíthatók.
Egy egyedi hmGluR altípusra (és illesztési variánsaira) nézve az expressziós minta a neurális vagy neuronális szövetben változó lehet. Tehát egy • ·· ······· · · ··«·· · · · • ···· · ·· « · · · ♦ ·
- 13 adott altípust (vagy illesztési variánst) kódoló cDNS izolálásához előnyös, ha különböző alkalmas szövetekből vagy sejtekből előállított könyvtárakat szkríneliink. Szkrínelési próbaként használhatunk olyan DNS-t vagy RNS-t, amely lényegében az egész hmGluR2 kódoló szakaszt tartalmazza, vagy egy ilyen DNS-en alapuló alkalmas oligonukleotid próbát. A hibridizációt is magába foglaló szkríneléshez alkalmas oligonukleotid próba egy egyfonalas DNS vagy RNS. amelynek nukleotid-szekvenciája legalább 14 olyan szomszédos bázist tartalmaz, amelyek az 1. számon megadott szekvencia tetszőleges 14 vagy több szomszédos bázisával azonosak vagy komplemeterek. A próba a kimutatás megkönnyítésére meg lehet jelölve egy alkalmas kémiai molekularésszel. A próba céljára kiválasztott nukleínsav-szekvenciáknak kellő hosszúságúnak és egyértelműeknek kell lenniük, hogy a téves pozitív eredményeket minimálisra csökkentsük.
Próbák készítéséhez előnyösen használható régiók az 5'- és/vagy 3'kódoló szekvenciák, amelyek feltehetően ligandumkötő vagy hasonló helyeket kódolnak. Próbaként használható például a találmány szerinti teljes hosszúságú cDNS klón vagy annak fragmentumai. A találmány szerinti nukleinsav-próbák előnyösen meg vannak jelölve valamilyen alkalmas jelölési módszerrel, hogy hibridizálás után könnyen kimutathatók legyenek. Alkalmas jelölési módszer például egy radioaktív jelölés. Egy DNS-fragmentum jelölésére előnyösen használható az a szakmában ismert módszer, hogy egy random rendszerű lánchosszabbítási reakcióban DNS-polimeráz Klenow-fragmentumának alkalmazásával 32p_Vel jelzett α-dATP-t építünk be. Az oligonukleotidok általában 3 2P-vel jelzett γ-dATP-vel és polinukleotid kinázzal végcímkézettek, de a fragmentum vagy oligonukleotid címkézésére más (például nem radiaktív) módszereket is alkalmazhatunk, amilyenek például az enzimes jelölés vagy a biotinilezés.
·· *r*» «>· • · « • *·· · a · «
- 14Miután a könyvtárt például egy, az egész hmGluR2 kódoló szakaszt tartalmazó DNS-sel vagy az ilyen DNS-nek egy szakaszán alapuló alkalmas oligonukleotiddal szkríneltük. a pozitív kiónokat egy hibridizációs jel kimutatása révén azonosítjuk; az azonosított kiónokat restrikciós enzim térképpel és/vagy DNS szekvenciaelemzéssel jellemezzük, azután például a találmány szerinti szekvenciákkal összehasonlítva vizsgáljuk annak eldöntésére, hogy tartalmaznak-e egy teljes hmGluR-t kódoló DNS-t (vagyis a tranlásziót indító és lezáró kodonokat). Ha a választott kiónok inkomplettek (nem teljesek), akkor ugyanazon vagy egy másik könyvtár ismételt szkrínelésével felhasználhatók arra, hogy átfedő kiónokat kapjunk. Ha genom-könyvtárról van szó, akkor az overlap (átfedő) kiónok lehetnek exonok vagy intronok cDNS-könyvtár esetén az overlap kiónok egy nyílt leolvasási keretet tartalmaznak. A komplett kiónok mindkét esetben a találmány szerinti DNS-ekkel és az azokból levezetett aminosavszekvenciákkal végzett összehasonlítás útján azonosíthatók.
Egy endogén hmGIuR2 valamely abnormalitásának kimutatására a genetikai szkrínelést végezhetjük úgy, hogy hibridizációs próbaként egy találmány szerinti nukleotid szekvenciát alkalmazunk. Továbbá a találmány szerinti nukleinsav- szekvenciákat felhasználhatjuk antiszenz típusú terápiás szerek tervezésére.
Várható, hogy a találmány szerinti nukleinsav nukleotid szubsztitúcióval, nukleotid deléeióval, nukleotid inszercióval, egy nukleotid szakasz invertálásával vagy ezek bármely kombinációjával könnyen módosítható. Az ilyen módosított szekvenciák felhasználhatók egy olyan mutáns hmGluR altípus előállítására, amely a természetben található receptor-altípusoktól eltérő. A mutagenézis lehet előre megjósolható (helyspecifikus) vagy véletlenszerű. Nem szabad, hogy egy nem csendes mutáció szekvenciákat távolítson el a leolvasási keretekből, és a mutáció előnyösen nem képez olyan komlementer régiókat, ·· · «♦» »·* « ·« • · 9 • «· • * · ··
- 15amelyek hibridizálva másodlagos mRNS szerkezeteket és hurkokat vagy hajtűket képeznének.
A találmány szerinti natív vagy mutáns hmGluR-t kódoló cDNS-t vagy genom DNS-t további maniplációkhoz beépíthetjük vektorokba. A találmány további tárgya egy hibrid vektor rekombináns DNS, amely a fent említett DNSek közül legalább egyet tartalmaz.
A találmány szerinti hibrid vektorok tartalmaznak egy replikációs kiindulási pontot vagy egy önálló replikáló szekvenciát, egy vagy több domináns marker (jelző) szekvenciát, továbbá adott esetben expressziós szabályozó szekvenciákat, szignál-szekvenciákat és további hasítási helyeket is tartalmaznak.
A találmány szerinti hibrid vektor előnyösen tartalmaz egy fenti nukleinsav inszertumot egy később ismerteit expressziós szabályozó szekvenciával operábilis (működőképes) kapcsolatban.
A vektorok a kompatibilis (összeférhető) gazdasejtekkel együttműködve rendszerint kétféle feladatot teljesítenek. Egyrészt megkönnyítik a találmány szerinti hmGluR altípust kódoló nukleinsavak klónozását, vagyis használható meny-nyiségü nukleinsav előállítását (klónozó vektorok). Másik funkciójuk, hogy egy alkalmas gazdaszervezetben kromoszómán kívüli elemként megmaradva vagy a gazdaszervezet kromoszómájába beépülve replikáció és expresszió céljára génszerkezeteket termeljenek (expressziós vektorok). A klónozó vektorok tartalmazzák a fenti DNS-eket, egy replikációs kiindulási pontot vagy egy önálló replikáló szekvenciát, választható marker szekvenciákat, adott esetben szignál-szekvenciákat és további hasítási helyeket. Az expressziós vektorok ezen kívül tartalmaznak olyan expressziós szabályozó szekvenciákat, amelyek a találmány szerinti DNS transzkripciójához (átírás) és transzlációjához (átfordítás) alapvetően fontosak. Tehát az expressziós vektor • ·
- 16egy rekombináns DNS-szerkezetet jelent, így lehet például egy plazmid, egy fág. egy rekombináns vírus vagy más olyan vektor, amely egy alkalmas gazdasejtbe beépítve a klónozott DNS expresszióját eredményezi. Az alkalmas expressziós vektorok a szakmában jól ismertek, ilyenek például az eukarióta és/vagv prokarióta sejtekben replikálható vektorok.
A legtöbb expressziós vektor az élő szervezeteknek legalább egy osztályában képes a replikációra, de az expresszióhoz átültethető (transz fektálható) egy másik szervezetbe. Például egy vektort E. Coli-ban klónozunk, majd ugyanezt a vektort élesztő- vagy emlős-sejtekbe ültetjük át, bár a gazdasejt kromoszómájától függetlenül nem képes replikálódni. A DNS sokszorozását (amplifikálását) végezhetjük úgy is, hogy a gazdaszervezet genomjába inszertáljuk. De a hmGluR-t kódoló genom DNS-t nehezebb kinyerni, mint az exogén módon replikáit vektort, mert a hmGluR DNS kimetszéséhez restrikciós enimes emésztést kell alkalmazni. A DNS-t polimeráz láncreakcióval (PCR) is sokszorozhatjuk, és replikáció nélkül, közvetlenül átültethetjük a gazdaszervezetbe.
Az expressziós és a klónozó vektor előnyösen tartalmaz egy szelekciós gént, amit jelzőgénnek is szoktak nevezni. Ez a gén egy olyan fehérjét kódol, amely szelektív táptalajon tenyésztett, transzformált gazdasejtek fennmaradásához vagy szaporodásához szükséges. A szelekciós gént tartalmazó vektorral nem transzform ált gazdasejtek nem maradnak meg a tenyésztő közegben. A tipikus szelekciós gének olyan fehérjéket kódolnak, amelyek antibotikumokkal és más toxinokkal - mint ampicillin, neomicin, methotrexát vagy tetraciklin - szembeni ellenállást adnak, pótolják az auxotróf defekteket vagy az összetett közegben nem található, kritikus jelentőségű tápanyagokat nyújtanak.
- 17Minthogy a vektorok sokszorozását a legkönnyebben E. Coli-ban végezzük, ezek előnyösen egy E. Coli jelzögént és egy E. Coli replikációs kiindulópontot is tartalmaznak. Ezek megkaphatok E. Coli plazmidokból, amilyen például a pBR322, a Bluescript vektor vagy valamilyen UC plazmid.
Emlősök sejtjeihez szelekciós génként olyan gének alkalmasak, amelyek lehetővé teszik a hmGluR nukleinsav felvételéhez szükséges sejtkomponensek azonosítását - például a dihidrofolát-reduktáz (DHFR, metotrexáttal szembeni ellenállás), timidin-kináz - vagy ellenállást nyújtanak a G418-cal vagy a higromieinnel szemben. Az emlősök sejtjeit szelekciós nyomás alá helyezzük, amelyet csak azok a tranfektánsok képesek egyedülálló alkalmazkodásuk révén túlélni, amelyek a markert felvették és expresszálják.
Az expressziós és a klónozó vektorok rendszerint tartalmaznak egy promotert, amelyet a gazdaszervezet felismer, és amely operábilisan kapcsolódik a hmGluR nukleinsavhoz. Ez a promoter lehet indukálható vagy konstitutív. A promotereket úgy kapcsoljuk operábilisan a hmGluR-t kódoló DNS-hez, hogy hogy a promotert restrikciós enzimmel végzett emésztéssel eltávolítjuk a kiindulási DNS-ből, majd az izolált promoter-szekvenciát a vektorba inszertáljuk.
A természetes hmGluR2 promoter-szekvencia és sok heterológ promoter is használható a hmGluR DNS közvetlen sokszorozására és/vagy expresszálására. Azonban előnyösebbek a heterológ promoterek, mert általában nagyobb mértékű transzkripciót és az expresszált hmGluR2-ből nagyobb kihozatalt adnak, mint a természetes hmGluR2 promoter.
Prokarióta gazdaszervezetekhez alkalmas promoterek például a β-laktamáz és laktóz promoter-rendszerek, az alkalikus foszfatáz, egy triptofán (trp) promoter-rendszer, továbbá hibrid promoterek, például a tac promoter. Nukleotidszekvenciájukat az irodalomban ismertették, ezáltal a gyakorlott szakember képessé vált arra, hogy ezeket a promotereket linkerek vagy adaptorok alkal• ·
- 18mazásával operábilisan kapcsolja a hmGluRt kódoló DNS-hez, és így tetszőleges hasítási helyeket alakűtson ki. A bakteriális rendszerekben használatos promoterek általában egy - a hmGluRt kódoló DNS-hez operábilisan kapcsolt - Shine-Delgrano szekvenciát is tartalmaznak.
A hmGluR2 génnek emlős gazdasejtekben vektorokból végzett transzkripcióját a gazdasejt-rendszerrel kompatibilis, például vírusok genomjából származó promoterekkel szabályozhatjuk. A találmány szerinti hmGluR altípusnak eukarióta gazdasejtekben, különösen emlős-sejtekben végbemenő expressziójához alkalmas plazmidok például a citomegalovírus (CMV) promotert tartalmazó vektorok, az RSV promotert tartalmazó vektorok, az S V40 promotert tartalmazó vektorok és az MMTV LTR promotert tartalmazó vektorok, szabályozásuk természetétől függően a promoterek lehetnek konstitutívak vagy az kísérleti körülményekkel szabályozhatók.
Egy találmány szerinti hmGluR altípust kódoló DNS-nek magasabbrendű eukariótákkal végzett transzkripciója fokozható oly módon, hogy a vektorba egy enhancer szekvenciát inszertálunk.
A vektor DNS különböző DNS-szegmensei operábilisen kapcsoltak, vagyis egymás mellett helyezkednek el, és egymással funkcionális kapcsolatban állnak.
A találmány szerinti vektorok felépítéséhez a hagyományos ligációs módszereket alkalmazzuk. Az izolált plazmidokat vagy DNS-fragmentumokat hasítjuk, szabjuk és a kívánt plazmid kialakításához szükséges formában ismét összekapcsoljuk. Kívánt esetben a szekvencia pontosságának ellenőrzésére a megszerkesztett plazmidokat a szakmában ismert módszerek valamelyikével elemezzük. Az expressziós vektorok szerkesztésére, in vitro transzkriptumok előállítására, DNS-nek gazdasejtekbe történő bevitelére valamint a hmGluRexpresszió és -funció meghatározására szolgáló módszerek az átlagosan művelt • · · · · ·
- 19szakember számára ismertek. A gén jelenléte, az amplifikáció és/vagy expresszió egy mintában közvetlenül mérhető, például az mRNS transzkripciójának mennyiségi meghatározását végezhetjük a hagyományos Southern biot vagy northen biot módszerrel, a DNS- vagy RNS-elemzéshez használhatunk dot-blot módszert, egy találmány szerinti szekvencián alapuló, megfelelően jelzett próba alkalmazásával végezhetünk in situ hibridizálást. továbbá alkalmazhatunk kötési, immundetekciós és funkcionális vizsgálatokat. Alkalmas módszerek azok. amelyeket a példákban részletesen ismertetünk. Az átlagosan müveit szakember könnyen átlátja, hogy ezeket az eljárásokat kívánt esetben hogyan kell módosítani.
A találmány további tárgyát képezik a találmány szerinti hmGluR altípust termelni képes, és az ilyen altípust kódoló heterológ (idegen) DNS-t tartalmazó gazdasejtek.
A találmány szerinti nukleinsavak sokféle gazdasejtben expresszálhatók, például a fent említett sejtekben, amelyek a megfelelő expressziós vektorral transzform áltak vagy transzfektáltak. A találmány szerinti receptor (vagy annak egy része) fúziós fehérjeként is expresszálható. Ezután a rekombináns sejteket olyan körülmények között tenyészthetjük, amelyek lehetővé teszik a találmány szerinti DNS által kódolt egy vagy több fehérje expresszióját.
Az alkalmas prokarióták közé tartoznak az eubaktériumok, például Gram-negatív vagy Gram-pozitív szervezetek, így például az E. Coli törzsek, mint az E. Coli K-12, a DH5a és a HB 101 valamint a Bacillusok. A hmGluR-t kódoló vektorok számára alkalmas gazdasejtek továbbá eukarióta mikrobák, például fonalas gombák vagy élesztők, amilyen például a Saccharomyces cerevisiae. A magasabbrendű eukarióta sejtek közé tartoznak például a rovarok, kétlakiak és gerincesek, különösen az emlősök sejtjei, például a neuroblastoma sejtvonalak vagy a fibrobastból származó sejtvonalak. Az emlősök sejtei közül
···· ····
-20előnyösek például a HEK 293, a CHO, a CVI, a BHK, az L. az LLCPK-1, a GH3 és a COS sejtek. Az utóbbi években a kétlaki sejteknek kultúrában (szövetkultúrában) végzett tenyésztése rutin-eljárássá vált. A leírásban a gazdasejtek” kifejezés mind az in vitro kultúrában mind pedig egy gazdaállatban jelenlévő sejtekre vonatkozik.
Egy aktív rekombináns hmGluR expressziójára alkalmas gazdasejtek előnyösen endogén vagy rekombináns G-fehérjéket expresszálnak. Előnyösek azok a sejtek, amelyek legfeljebb egy kevés endogén metabotrop glutamát receptort termelnek. A DNS lehet stabilan beépítve a sejtekbe, vagy hagyományos módszerekkel átmenetileg expresszálható.
Stabilan transzfektált emlőssejteket úgy állíthatunk elő, hogy a sejteket egy szelekciós markergént tartalmazó vektorral transzferáljuk, majd a sejteket a markergén expressziójához alkalmas szelektív körülmények között szaporítjuk. Átmeneti tranfektánsok előállítására az emlőssejteket egy riporter génnel transzferáljuk, hogy a transzfekció hatásosságát mérhessük.
Ahhoz, hogy a találmány szerinti hmGluR előállításához stabilan vagy időlegesen transzfektált sejteket kapjunk, a sejteket megfelelő mennyiségű, hmGluR-t kódoló nukleinsavval kell transzferálni. A találmány szerinti hmGluR-t kódoló DNS pontos mennyiségének meghatározása kísérleti úton végezhető és egy adott sejthez és vizsgálathoz optimalizálható.
A találmány szerinti DNS transzgénikus állatokban is expresszálható, erre különösen alkalmasak a melegvérű transzgénikus állatok. Transzgénikus állatok - például egerek, patkányok, nyulak, juhok és sertések - a szakmában ismertek, leírásuk leírása megtalálható például Hammer és munkatársai [Natúré 315, 680-683 (1985)] közleményében. Megtermékenyített tojások pronucleusába (előmag) beviszünk egy expressziós egységet, amely egy
-21 találmány szerinti. hmGluR-t kódoló DNS-t tartalmaz a megfelelő helyeken lévő expressziós szabályozó szekvenciákkal együtt. Ez megoldható például mikroinjeketálással. A beinjektált DNS beépülését például a megfelelő szövetmintákból származó DNS blot-analízisével mutatjuk ki. A DNS előnyösen úgy épül be a az állat csíravonalába (germ line), hogy az állat utódjába is átmegy.
Továbbá létrehozhatunk knoek-out állatokat oly módon, hogy az mGluR szekvenciába egy mutációt viszünk be, és ennek következtében az állat már nem fogja expresszálni a funkcionális mGIuR2 gént. Az ilyen knock-out állatok télhasználhatók a metabotrop glutamát receptornak az anyagcserében különösen a normális és zavart agy funkciókban - játszott szerepének tanulmányozására.
Közelebbről: egy mutált vagy vad típusú hmGluR2 gén bevitelével knock-out állatok (amelyek már nem expresszálják az endogén mGluR2 gént) fejleszthetők ki. Knock-out egerek és patkányok létrehozására szolgáló módszerek a szakmában ismertek. A knoek-out állatok nemcsak egy adott metabotrop glutamát receptor szerepének tanulmányozására használhatók, mint például F. Conquet és munkatársai [Natúré 372, 237-243 (1994)] vagy A. Aiba és munkatársai [Cell 80, 757-765 (1995)] közleményében, hanem elsősorban olyan állatmodellként, amelynek genetikai háttere megfelelő a homológ humán receptort és/vagy annak külömféle izoformáit kódoló transzgének beviteléhez és expresszálásához. Humán receptor ellendaraboknak (counterpart) egy knockout hátterű homológ génen való expressziója azzal az egyedülálló előnnyel jár, hogy a gyógyszereknek egy adott receptorra (ez esetben az mGluR2-re) gyakorolt hatásában kizárja a a faj specifikus szekvencia-eltérésekből adódó különbségeket.
Gazdasejteket az előző bekezdés elején említett expresszióval vagy a
-22találmány szerinti klónozó vektorokkal transzferálunk és transzformálunk, majd a sejteket promoterek beviteléhez, transzformánsok szelekciójához vagy a kívánt szekvenciákat kódoló gének sokszorozásához alkalmasan módosított hagyományos tápközegben tenyésztjük. Heterológ DNS a gazdasejtekbe bevihető bármilyen ismert módszerrel, például úgy, hogy a sejtet kalciumfoszfátos együttes kicsapás, elektroporáció vagy lipofektin-mediációs eljárás alkalmazásával egy heterológ DNS-t kódoló vektorral transzfektáljuk. Az e területen átlagosan müveit szakember sokféle transzfektál ás i módszert ismer. A transzfekció sikerességét általában úgy ismerjük fel, hogy a gazdasejtben ez a vektor valamiféle működés jelét mutatja. A transzformációt a felhasznált gazdasejtekhez megfelelő szokásos eljárásokkal végezzük.
Kónozott DNS beépítése egy alkalmas expressziós vektorba, eukarióta sejtek transzfektálása egy plazmid vektorral vagy ilyen vektorok keverékével - amelyek mindegyike egy vagy több különböző gént kódol - vagy lineáris DNS-sel valamint a transzfektált sejtek szelektálása a szakmában ismert, ezek leírása megtalálható például Sambrook és munkatársai Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd edition) [Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, USA (1989)] című kézikönyvében.
A transzfektált vagy transzformált sejteket a szakmában ismert közegek és módszerek alkalmazásával tenyésztjük, előnyösen olyan körülmények között, amelyek révén a DNS által kódolt hmGluR expresszálódik. Az alkalmas közeg összetételét az átlagosan müveit szakember ismeri, így könnyen elő tudja állítani. Akalmas tenyésztő közegek a kereskedelemben is kaphatók.
Bár a találmány szerinti DNS bármilyen alkalmas gazdasejtben expresszálható, a funkcionális hmGluR-t kódoló DNS expresszálásához előnyösen eukarióta expressziós renszereket, főleg emlős expressziós
-23 renszereket alkalmazunk, amelyek lehetnek a kereskedelemben kapható vagy más, a müveit szakember számára ismert a rendszerek.
A találmány szerinti hmGluR2-t vagy hmGluR altípusok speciális kombinációit - beleértve a hmGluR2-t - kódoló transzformált sejtvonalak előállítására az mGluR2 DNS-t egy vektorba ligáljuk, és bevisszük egy alkalmas gazdasejtbe. Az így kapott sejtvonal azután olyan mennyiségben termelhető, amely egy receptor-specifikus agonista. antagonista vagy alloszterikus modulátor hatásainak reprodukálható minőségi és mennyiségi elemzéséhez elegendő. Ezen kívül az mRNS előállítható egy találmány szerinti altípust kódoló DNS in vitro átírásával. Ezt az mRNS-t Xenopus oocitákba (primitív petesejtek) injektálhatjuk, ahol az mRNS az aktív receptor altípus szintézisét irányítja. Egy másik módszer szerint közvetlenül az altípust kódoló DNS-t injektáljuk az oocitákba. A transzfektált emlős-sejteket vagy oocitákat felhasználhatjuk a későbbiekben leírt gyógyszerszkrínelési vizsgálatban. Ezek a gyógyszerek a találmány szerinti hmGluR altípus patogenézisével kapcsolatos betegségeknél használhatók. Ilyenek például a glutamát túlzott - a hmGluR-ek által preferenciálisan médiáit (közvetített) - hatásából eredő betegségek, például a stroke, epilepszia és krónikus neurodegeneratív betegségek. A találmány szerinti hmGluR-t expresszáló, stabilan transzfektált sejtvonalak különösen jól használhatók a vegyületek és a találmány szerinti speciális hmGluR altípusok közötti specifikus kölcsönhatások meghatározására.
Tehát a találmány szerinti hmGluR-t expresszáló gazdasejtek felhasználhatók gyógyszerszkrínelésre, és a találmány további tárgya eljárás egy, a hmGluR2 aktivitását módosító vegyület vagy szignál azonosítására, amely eljárás abból áll, hogy a találmány szerinti hmGIuR-t kódoló heterológ DNS-t tartalmazó sejteket, amelyek funkcionális hmGluR2-t termelnek, kitesszük legalább egy olyan vegyület vagy szignál hatásának, amelynek a hmGluR2
-24aktivitását módosító hatását kívánjuk meghatározni, majd figyeljük, hogy ez a módosítás milyen változásokat okoz a sejtekben. Ezzel a vizsgálattal azonosíthatók a találmány szerinti hmGluR agonistái, antagonistái és alloszterikus modulátorai.
A találmány további tárgya egy vizsgálat a hmGluR2 aktivitását módosító vegyületek azonosítására, amely az alábbi lépésekből áll:
- a sejteket, amelyek egy aktív hmGluR2-t expresszálnak, és a találmány szerinti hmGluR altípust kódoló heterológ DNS-t tartalmaznak, összehozzuk legalább egy olyan vegyülettel, amelynek ezen receptor aktivitását módosító hatását kívánjuk meghatározni, és
- figyelj ük a sejteket, hogy tapasztalható-e változás a másodlagos messenger aktivitásban.
A vizsgálat eredményét egy negatív kontrollként használható vizsgálattal hasonlítjuk össze.
A vizsgálati eljárások sok esetben különféle kontroliokkal való összehasonlítást igényelnek. A receptor aktivitásában vagy a másodlagos messenger szintjében bekövetkezett változást akkor tulajdonítunk a vizsgált vegyület hatásának, ha ilyen változás a vizsgált vegyület távollétében nem következik be. Akkor mondjuk, hogy a vizsgált vegyületnek egy találmány szerinti receptor altípusra gyakorolt hatását az adott receptor mediálja, ha ez a hatás nem tapasztalható olyan sejtekben, amelyek a receptort nem expresszálják.
A leírásban a találmány szerinti hmGluR2 aktivitását módosító vegyület vagy szignál olyan vegyületet vagy szignált jelent, amely (a hmGluR távollétében fennálló állapothoz viszonyítva) megváltoztatja a hmGluR2 által medáiált válasz lefutását a sejten belül. A válasz lefutását egy sejten kívüli inger aktiválja, amely a másodlagos messenger koncentrációjában vagy az enzim-aktivitásban változást idéz elő, vagy megváltoztatja egy memebránhoz
-25 kötött fehérje, például egy receptor vagy ioncsatorna ativitását. Sokféle válaszút alkalmazható, például az adenilát-cikláz pálya, a foszfolipáz C/ sejten belüli kalcium ion-koncentráció válaszút vagy egy olyan válaszút, amelyen a receptor egy ioncsatornához kapcsolódik. Az adenilát-cikláz koncentrációjának meghatározására szolgáló módszerek ismertek, egy ilyen módszer leírása megtalálható például az alábbi szakirodalmi helyen: Nakajima és munkatársai [J. Bioi. chem. 267, 2437-2442 (1992)].
Ily módon a hmGIuR2-t expresszáló sejtek felhasználhatók olyan, főleg kis tömegű molekulák azonosítására, amelyek glutamát-agonistaként vagy -antagonistaként képesek működni. Előnyösek az 1000 Daltonnál kisebb tömegű molekulák. A leírásban az agonista olyan molekulát jelent, amely a hmGluR2-vel kölcsönhatásba tud lépni, és így az L-glutamát hatását utánozza.
A glutamát-agonista azzal jellemezhető, hogy képes kölcsönhatásba lépni a találmány szerinti hmGluR-rel, és ezáltal növelni vagy csökkenteni egy válaszút stimulációját a sejten belül. Egy agonista például éppúgy növel vagy csökkent egy mérhető paramétert a gazdasejten belül - például egy érett messenger koncentrációját - mint ahogy a természetes ligandum növeli vagy csökkenti ezt a paramétert. Egy alkalmas vizsgáló rendszerben, amelyben a találmány szerinti hmGluR negatívan kapcsolódik az adenilát-ciklázhoz - például hmGluR2-t expresszáló CHO vagy BHK sejtekben - egy ilyen agonista például úgy tudja módosítani a hmGluR2 működését, hogy a cAMP sejten belüli koncentrációja csökken.
Ha viszont a hmGluR2 aktivitását csökkenteni kívánjuk, akkor antagonizáló vegyületeket használhatunk. A leírásban az antagonista olyan vegyületet jelent, amely képes a hmGluR2-vel kölcsönhatásba lépni, de nem stimulál egy a sejten belüli válaszutat. A glutamát antagonistát általánosan az jellemzi, hogy a találmány szerinti hmGluR2-vel kölcsönhatásba tud lépni, és ezáltal a ·* · ·· · ·♦ · · * · • « · · · • · · · · · ·
-26természetes ligandumnak egy sejten belüli válaszutat stimuláló képességét csökkenti. például megakadályozza az L-glutamát kötődését a találmány szerinti hmGIuR-hez vagy a hmGluR működéséhez szükséges egyéb sejtfunkciókat gátol. így például egy alkalmas - például hmGluR2-t expresszáló CHO vagy BHK sejtekkel végzett - vizsgálatban egy glutamát antagonista úgy tudja változtatni a találmány szerinti hmGluR aktivitását, hogy a természetes ligandumnak a cAMP sejten belüli koncentrációját csökkentő hatását gyengíti. Az antagonista hatás elérésének egy másik módja, hogy az antiszenz hmGluR RNS túltermelését használjuk fel. Előnyösek az olyan agonisták és antagonisták. amelyek szelektíve hatnak a hmGluR2-re. Különösen előnyösek az olyan agonisták és antagonisták, amelyek a hmGluR2 aktivitását anélkül módosítják, hogy bármely más altípus aktivitását befolyásolnák.
Egy találmány szerinti hmGluR alloszterikus modulátora a receptorfehérjére nem az L-glutamáttól eltérő helyen hat, így agonistaként vagy antagonistaként viselkedik. Ezért az itt ismertetett vizsgálatok egy találmány szerinti receptor alloszterikus modulátorának kimutatására is használhatók. Például egy agonistaként működő alloszterikus modulátor a találmány szerinti hmGluR és az L-glutamát közötti specifikus kölcsönhatást megnövelheti. Ha egy alloszterikus modulátor antagonistaként működik, akkor a receptor-fehérjével való kölcsönhatása például azt eredményezheti, hogy az agonista kötődése funkcionálisan kevésbé hatásos lesz.
A glutamát agonista vagy antagonista vizsgálatokhoz szükséges lehet elegendő mennyiségű találmány szerinti hmGluR előállítása funkcionális alakban, rekombinációs DNS módszerek alkalmazásával. Ezután megtervezzük a hmGluR2 fehérje egy funkcionális tulajdonságának, például egy glutamaterg ligandummal való kölcsönhatásásának mérését. A találmány szerinti hmGluR tér9 9·*' ♦
-2Ί melését akkor tekintjük elegendő mennyiségűnek, ha a receptor mérhető választ ad.
Emlős-sejteket, például az American Tissue Type Culture Collection-tól beszerezhető HEK 293, L, a CHO-K1, a CVI, LLCPK-1 vagy GH3 sejteket csökkentett glutamát-tartalmú, előnyösen glutamátmentes közegben történő szaporításhoz adaptálunk. A sejtekbe például az Ausubel, F.M. és munkatársai [Current Protoeols in Molecular Biology [Green and Wiley, USA (1993)] által leírt kaleium-foszfátos kicsapásos módszerrel átmenetileg transzfektálunk egy hmGluR. expressziós plazmidot, például a példákban ismertett plazmidok valamelyikét. A találmány szerinti hmGluR-t stabilan expresszáló sejtvonalakat például a Southern és Berg [J. Mól. Appl. Génét. 1, 327-341 (1982)] által leírt módon, egy hmGluR2 expressziós plazmáddal és egy szelekciós markergént, például a G-418 rezisztenciagént kódoló p-SV2-Neot plazmidvektort tartalmazó plazmiddal végzett, lipofektin-mediált transzfekció útján állíthatunk elő. A szelekciót túlélő sejteket elválasztjuk, és a szelekciós közegben szaporítjuk. A rezisztens klonális sejtvonalakat vizsgáljuk például az altípusra nézve specifikus antitestekkel szembeni immunreaktivitás szempontjából, vagy agonista hozzáadása után mérjük a hmGluR reakcióját. A kívánt hmGluR altípust termelő sejteket a találmány szerinti hmGluR-hez kötődő vegyületek kimutatására vagy glutamát agonisták és antagonisták azonosítására szolgáló eljárásokban használjuk
Egy további megvalósításban a találmány tárgya eljárás a hmGluR2-höz kötődő vegyületek azonosítására, amely abból áll, hogy a találmány szerinti hmGluR altípust egy kompetitív kötési vizsgálatban alkalmazzuk. A kompetitív kötési vizsgálat alapelve a szakmában ismert. Röviden: a kötési vizsgálatot úgy végezzük, hogy a vizsgált vegyületet a hmGluR2 célmolekula kötődési helyéért egy ismert, célszerűen jelzett glutamerg ligandummal versenyeztetve mérjük a
-28vegyület kötődési kapacitását a hmGluR-hez. A célszerűen jelzett ligandum lehet például egy radioaktív címkével ellátott ligandum - például [3H]-glutamát - vagy egy optiaki tulajdonságai, például fényelnyelése vagy fluoreszcenciája alapján kimutatható ligandum. A kötetlenül maadt ligandum és vizsgált vegyület eltávolítása után mérjük a hmGluR2-öhöz kötődött jelzett ligandum mennyiségét. Ha a jelzett ligandum mennyisége a vizsgált vegyület jelenlétében csökken, akkor azt mondjuk, hogy a vizsgált vegyület kötődik a célmolekulához. A kompetitív kötési vizsgálatot végezhetjük a találmány szerinti hmGluR-t expresszáló transzformált vagy transzfektált gazdasejtekkel vagy a találmány szerinti hmGluR-t tartalmazó sejtmembrán-frakcióval.
A hmGluR2 célmolekulához kötött vegyület megváltoztathatja a hmGluR2 funkcionális tulajdonságait, ezért egy funkcionális vizsgálatban glutamát-agonistaként vagy -antagonistaként azonosítható.
A funkcionális vizsgálatokat a találmány szerinti hmGluR2 funkcionális aktivitásában bekövetkező változások kimutatására használjuk. Ilyen például egy funkcionális reakció, amely például a vizsgált vegyület és a hmGluR közötti kölcsönhatás eredményeként lép fel. Funkcionális reakció például egy releváns érett messenger koncentrációjának változása (eltérése) vagy egy másik, membránhoz kötött fehérje aktivitásának változása (a negatív kontrolihoz viszonyítva), amit a találmány szerinti receptor befolyásol a funkcionális hmGluR2-t expresszáló sejtekben. Az átlagosan művelt szakember könnyen ki tud választani egy sejten belüli érett messenger szintjének változását - ami az aktív hmGluR2 expresszióját jelzi - kimutató vizsgálatot (funkcionális vizsgálat). Ilyenek például aNakajima és munkatársai [J. Bioi. Chem. 267, 2437-2442 (1992)] által leírt cAMP vizsgálatok, a Steiner és munkatársai [J. Bioi. Chem. 247, 1106-1113 (1972)] által leírt cGMP vizsgálatok, a Nakajima és munkatársai [J. Bioi. Chem. 267, 2437-2442 (1992)] által leírt foszfatidil• ·
-29inozit (Pl) ciklusvizsgálatok, az Ito és munkatársai [J. Neurochem. 56. 531-540 (1991)] által leírt kalcium-ionáram vizsgálatok, a Felder és munkatársai [J.
Bioi. Chem. 264, 20356-20362 (1989)] által leírt arachidonsav-felszabadítási vizsgálatok, és hasonlók.
Közelebbről: a találmány szerinti eljárás egy glutamát-agonista kimutatására a következő lépésekből áll: (a) egy vegyületet egy válaszúthoz kapcsolt találmány szerinti hmGluR altípus hatásának teszünk ki olyan körülmények között és annyi ideig, amennyi a szükséges ahhoz, hogy a vegyület és a receptor közötti kölcsönhatás és az arra adott válasz az adott pályán végigmenjen, és (b) kimutatjuk a válaszút stimulációjának a vizsgált vegyület távollétében mért értékhez képest fellépő növekedését vagy csökkenését, amit a vegyület és a hmGluR2 közötti kölcsönhatás okoz, és ebből megállapítjuk, hogy glutamátagonista van-e jelen.
A glutamát-antagonista kimutatására szolgáló eljárás a következő lépésekből áll: (a) egy vegyületet egy ismert glutamát-agonista jelenlétében egy reakciópályához kapcsolt hmGluR2 hatásának teszünk ki olyan körülmények között és annyi ideig, amennyi a szükséges ahhoz, hogy az agonista és a receptor közötti kölcsönhatás és az arra adott válasz az adott pályán végigmenjen, és (b) kimutatjuk a válaszút stimulációjának az agonista által indukált gátlását - amit a vegyület és a hmGluR2 közötti kölcsönhatás okoz - a stimuláció azon értékéhez viszonyítva, amit a glutamát-agonista egymagában idéz elő, és ebből megállapítjuk, hogy glutamát-antagonista van-e jelen. A gátlás kimutatható például, ha a vizsgált vegyület a glutamát-antagonistával versenyez a hmGluR2-ért. Ezzel a módszerrel szkrínelhetők például a hmGluR2-höz specifikusan kötődő blokkoló antitestek. Továbbá ez a vizsgálat felhasználható az L-glutamáttal reagáló vegyületek szkrínelésére. Ez ezestben az agonista hatást a vizsgált vegyületnek az agonistához való kötődése • ·
-30semlegesíti vagy csökkenti, ily módon befolyásolja az agonista és a receptor közötti kölcsönhatást. Ilyen vegyületek például az olyan oldható hmGluR fragmentumok, amelyek a ligandumkötő dómén egy részét vagy egészét tartalmazzák.
Az agonista vagy antagonista és a hmGluR2 közötti kölcsönhatást előnyösen az jelzi, hogy az agonista vagy antagonista a hmGluR-hez kötődik.
A feltételezett glutamát-agonista vagy -antagonista és a receptor közötti kölcsönhatáshoz elegendő idő a receptor eredetétől függően változó, de a kötéshez megfelelő körülmények általában a következők: körülbelül 4°C és körülbelül 40°C közötti, előnyösen körülbelül 4°C és körülbelül 37°C közötti hőmérséklet egy pH=5 és 9 közötti, előnyösen 6,5 és 8 közötti pufferoldatban, amely körülbelül 0 és 2M között, előnyösen körülbelül 0 és 0,9M közötti, még előnyösebben 0,1M nátrium-kloridot tartalmaz. A kötődéshez és válaszhoz elegendő idő az érintkezéstől számítva általában 1 ms és 24 óra közé esik.
A találmány egyik megvalósításban a válaszút egy membránhoz kötött adenilát-cikláz pálya, és egy agonista detektálása abból áll, hogy mérjük a membránhoz kötött adenilát-cikláz válaszút által végzett cAMP-termelés csökkenését vagy növekedését - előnyösen csökkenését - a megfelelő kontrolirendszer cAMP-termeléséhez képest. A találmány céljára előnyös, ha a cAMPtermelés csökkenése vagy növekedése azonos vagy nagyobb, mint az IC5Q-nek megfelelő koncentrációban alkalmazott L-glutamát által előidézett csökkenés vagy növekedés. Egy antagonista detektálása azon alapul, hogy az antagonista jelenlétében az L-glutamát a membránhoz kötött adenilát-cikláz válaszút által végzett cAMP-termelést kisebb mértékben csökkenti vagy növeli, mint az antagonista távollétében. A cAMP-t mérhetjük a sejtek elroncsolása után vagy a sejtbe bevitt, a cAMP-re érzékeny molekuláris próbával, például egy
-31 fluoreszcens színezékkel, amely a cAMP megkötése után megváltoztatja a tulajdonságait, például a fluoreszcenciáját.
A ciklikus AMP termelését a szakmában ismert módszerekkel, például a Nakajima és munkatársai fent említett közleményében leírt módon vagy a kereskedelemben beszerezhető, például radioaktív jelzéssel ellátott cAMP-t mint [,-N]cAMP vagy [3HcAMP] - tartalmazó kitek alkalmazásával mérhetjük. Ilyen például az Amersham Scintillation Promixity Assay Kit-je amely a cAMP termelését úgy méri, hogy jódozott cAMP cAMP antitestekkel vesenyez - vagy az Amersham Cyclic AMP [3H] Assay Kit-je.
Az olyan vizsgáló rendszerekben, amelyek az adenilát-cikláz pályához negatívan kapcsolt hmGluR2-t expresszáló sejteket alkalmaznak, tehát stimulálás hatására a cAMP-t csökkentik, és a stimulálás csökkenésének hatására a eAMP-t növelik, a sejteket a (feltételezett) receptor-agonista vagy antagonista hozzáadása előtt előnyösen egy olyan vegyület hatásának tesszük ki. amely az adenilát-ciklázt reverzibilisen vagy irreverzibilisen stimulálja - mint például a forskolin - vagy pedig egy foszfodiészteráz inhibitor, például izobutil-metil-xantin (IBMX).
A találmány egy másik megvalósításban a reakcióválaszút a Pl hidrolízis / kalciumion-mobilizációs pálya. Az ilyen vizsgálat, amelynek célja a vizsgált vegyület és a találmány szerinti hmGluR altípus specifikus kölcsönhatásának meghatározása, funkcionálisan kapcsolódhat a sejten belüli kalciumion-koncentráció változásához. A sejten belüli kalciumion-koncentráció változásának mérésére a szakmában többféle módszer ismert, például egy kalciumionra érzékeny fluoreszcens színezéket - mint például a fura-2, amelynek leírása az alábbi szakirodalmi helyen található: Grynkiewisz és munkatársai [J. Biol. Chem. 260, 3440-3450 (1985)], a fluo-3 vagy Indo-1 - alkalmazó eljárások, így a Charest és munkatársai [J. Biol. Chem. 259, 8679-8773 (1993)] által leírt kai• ·
-32cium-fluor-QuinZ mószer vagy a Nakajima és Shidama [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88. 6878-6882 (1991)] által leírt aequorin fotoprotein módszer. A találmány egyik megvalósításban a sejten belüli kalciumion-koncentrációt mikro fluorimetriásan mérjük kalcium-érzékeny fIuo-3 vagy fura-2 fluoreszcens színezékkel töltött rekombináns sejtekben. Ezeket a méréseket végezhetjük egy t'edőlemezen tenyésztett sejteken, ami lehetővé teszi invertált mikroszkóp és videofelvételi technikák vagy egy fluoreszcens fotométer alkalmazását, hogy a kalciumion-koncentrációt az egyedi sejt szintjén mérhessük. Mindkét esetben egy hmGluR2-t expresszáló plazmiddal transzform ált sejteket kell a kalciumindikátorral megtölteni. E célból a szaporító közeget eltávolítjuk a sejtekből, és fura-2-t vagy ttuo-3-at tartalmazó oldattal helyettesítjük. A sejteket előnyösen 8 óra múlva használjuk fel a kalcium meghatározásához. A mikrofluorimetriát a szokásos eljárásokkal végezzük.
A vegyületek és a célmolekula funkcionális kölcsönhatásából származó Ca2+ (kalciumion) -jelek átmenetiek lehetnek, ha a vegyületet korlátozott ideig alkalmazzuk, például egy perfúziós renszerrel. A vegyületek átmeneti alkalmazásával ugyanazon sejteken több mérést végezhetünk, így vizsgálhatjuk a belső szabályozást és sokféle vegyületet.
A találmány szerinti hmGluR funkcionális kapcsolása a Ca2+ -jeladáshoz például CHO sejtekben különböző módszerekkel oldható meg:
(i) egy találmány szerinti rekombináns hmGluR és egy olyan rekombináns feszültségfúggő kationcsatoma együttes expressziója, amelynek aktivitása funkcionálisan kapcsolódik a hmGluR2 aktivitásához;
(ii) egy olyan kimer hmGluR receptor expressziója, amely a PI/Ca2+ válaszutat közvetlenül stimulálja;
(iii) egy találmány szerinti rekombináns hmGluR és egy rekombináns Ca2+ áteresztő, cAMP-függő kationcsatorna együttes expressziója.
• ·
-33 Más expressziós rendszerekben a hmGluR2-nek a Ca2+ -jeladáshoz való kapcsolása megoldható a találmány szerinti hmGluR transzfektálásával, ha ezek a sejtek természetes úton expresszálnak (i) volt-kapus kalcium-csatornákat, amelyeknek aktivitása funkcionálisan kapcsolódik a hmGluR-ek aktivitásához vagy (ii) Ca-+ -áteresztő, cAMP-fuggő ioncsatornákat.
További sejt-alapú szkríning vizsgálatok tervezhetők például olyan sejtvonalak szerkesztésével, amelyekben egy riporter-fehérje, például egy könnyen vizsgálható fehérje - mint β-galaktozidáz, chloramphenicol-acetil-transzferáz (CAT) vagy luciferáz - expressziója a találmány szerinti hmGluR működésétől függ. Például egy cAMP válaszadó elemet tartalmazó DNS-szerkezetet operábilisan kapcsolunk egy luciferázt kódoló DNS-hez, és az így kapott, enzim-DNS-t tartalmazó DNS-t egy gazdasejtbe stabilan transzfektáljuk.
Ezután a gazdasejtet transzfektáljuk egy második DNS-szerkezettel. amely tartalmaz egy első, a találmány szerinti hmGluR-t kódoló DNS-szegmenst operábilisan összekapcsolva a receptor expresszálásához szükséges további DNS-szegmensekkel. Ha például egy agonista megkötése a találmány szerinti hmGluR-en csökkenti a cAMP szinteket, akkor a luciferáz expressziója a választott promotertől függően növekszik vagy csökken. A luciferázt lueiferinnal reagáltatjuk, és a luciferin oxidációja következtében kibocsátott fotonokat mérjük.
A találmány szerinti gyógyszerkrínelési vizsgálatok lehetővé teszik a receptor-altípusra specifikus vegyületek, különösen a hmGluR2-höz kötődő ligandumok felismerését és tervezését, és ez egy betegségre specifikus gyógyszer kifejlesztéséhez vezet. Ha a gyógyszert úgy tervezzük, hogy csak egyetlen hmGluR altípussal (vagy a hmGluR altípusok egy előre meghatározott körével) álljon nagyon specifikus kölcsönhatásban, akkor valószínűleg sokkal kevesebb nem kívánt mellékhatása lesz, mint egy olyan gyógyszernek, amelyet sokféle • ·
-34(ismeretlen) receptor altípust expresszáló sejtekkel végzett szkríneléssel határoztak meg. Továbbá egy egyedi, találmány szerinti receptor altípusnak vagy különböző receptor-altípusok specifikus kombinációinak különböző feltételezett agonistákkal és antagonistákkal végzett vizsgálata további információkat nyújt az egyedi hmGluR2 fehérje működésére és aktivitására vonatkozóan, és szükségszerűen elvezet olyan vegyületek meghatározásához és tervezéséhez, amelyek igen specifikus kölcsönhatásba tudnak lépni egy vagy több receptor altípussal.
A találmány további tárgya a hmGluR2-vel szemben termelt poliklonális és monoklonális antitestek. Ilyen antitestek felhasználhatók például immunvizsgálatokhoz - így immun-hisztokémiai vizsgálatokhoz - továbbá diagnosztikai és terápiás célokra. Például a hmGluR2 sejten kívüli doménjére vagy annak egyes részeire specifikus antitestek az endogén hmGluR altípus blokkolására használhatók
A találmány szerinti antitestek a szakmában ismert módszerekkel állíthatók elő, amelyekben antigénként a találmány szerinti hmGluR-t vagy egy fragmentumát vagy ezt az altípust vagy fragmentumot expresszáló sejtet alkalmazunk. Az antigén jelentheti a találmány szerinti receptor aktív vagy inaktív alakját. Az antitestek képesek lehetnek az aktív és inaktív alak megkülönböztetésére. Ha altípus-fragmentumokat választunk antigénként (szintetikus peptid vagy fúziós fehérje alakjában), akkor figyelebe kell venni többek között az antigén jelleget, a hozzáférhetőséget (például sejten kívüli vagy citoplazmikus domének) és az adott altípus egyediségét.
Különösen jól használhatók azok az antitestek, amelyek szelektíve felismerik a hmGluR2-t és így ötödnek hozzá. A találmány szerinti antitesteket az arra rászoruló egyénnek a szokásos módszerekkel adjuk be. Az átlagosan
-35 müveit szakember a beadás választott módjának függvényében könnyen meg tudja határozni a dózisformákat, diétát és hasonlókat.
Az alábbi példák a találmány részletes ismertetésére szolgálnak, annak oltalmi körét nem befolyásolják.
1. Példa: hmGluR-t kódoló cDNS klónozása és expressziója
1.1 cDNS klónozása emberi agyból
Patkány elöagy egyfonalas cDNS-éböl polimeráz láncreakcióval (PCR) patkány mGluR2 cDNS N-terminális és C-terminális fragmentumokat [aTaban és munkatársai [Neuron 8, 169-179 (1992)] által leírt nt 192-518 és nt 19832810 fragmentumok] hozunk létre.
Az egyfonalas cDNS szintéziséhez 1 pg patkány elöagy poli(A)+ RNS-t, 80 U M-MLV reverz transzkriptázt (BRL), 25 ml pH=8,3-as Tris-sósavat,
37,5 mM kálium-kloridot, 1,5 mM magnézium-kloridot, 10 mM ditiotreitolt, a dATP. dCTP dGTP, dTTP mindegyikéből 1-lmM-t, 50 ml oligo-dT|?.ig-at (Pharmacia) és 2 U RNSsin-t (Promega) használunk. A szintézist 37°C-on 60 percig végezzük. A PCR során 3' és 5' primerként az N-terminális fragmentumhoz (192-518. nukleotid) ATGGAATCACTGCTTGGGTT/TGAGGCAGGCACAAAGTCCA-t, a C-terminális fragmentumhoz pedig (1983-2810. nukleotid) GTCAAGGCTTCCGGTCGGGA/TCAAAGCGACGACGTTGTTGA-t használunk. A PCR reakciókat GeneAMP DNS ampliftkációs kit (Perkin Elmer Cetus) alkalmazásával az alábbi körülmények között hajtjuk végre: 0,5 percig 93°C, 1,5 percig 56°C, és 3 percig 72°C, 40 cikluson át. A sokszorozással kapott DNS-eket géltisztítás után pBluescipt SK-ba klónozzuk az Smal helyen, és Sequenase T7 polimerase Kit-en (United States Biochemicals) végrehajtott DNS-szekvenálással jellemezzük. Emberi magzati agy és felnőtt emberi hippocampus cdDNS könyvtárból - amelyet Lambda-ZAPII-ben (Stratagene) oligo-36(dT)-böl és random rendszerű lánchosszabbítással kapott poli(A)+ RNS-ből építettünk fel - 2 χ 106 plakkot N- és C-terminális patkány mGluR2 próbákkal egymás után szkrínelünk. A metabotrop mGluR próbákat a géltisztítással kezelt fragmentumok random lánchosszabbításával, [ct-22P]dCTP alkalmazásával állítjuk elő. A hibridizálást egy éjszakán át 60°C-on, 5x SSC-t, 5x Denhardtoldatot, 50mM dinátrium-hidrogén-foszfátot, 10 mM etilén-diamintetraeeetsavat (EDTA), 1 % SDS-t, 50 pg/ml Herring Testis DNS-t és 20 pg/ml élesztő RNS-t tartalmazó oldatban hajtjuk végre. A mosást 25°C-on, egyenként 30 percen át. 5xSSC-t és 0,2 % SDS-t, azután 2xSSC-t és 0.2 % SDS-t, majd IxSSC-t és 0,2 % SDS-t tartalmazó oldattal végezzük. Az N-terminális és Cterminális patkány mGluR2 fragmentumkai hibridizáló plakkok közül ötöt a szkríning egy második és harmadik futtatásával tisztítunk, és öt cDNS inszertumot in vivő hasítással Bluescript SK fágmid közegbe mentünk ki. A cDNS inszertumokat restrikciós enzim térképpel és DNS-szekvenálással jellemezzük. A cDNS kiónok restrikciós térképei csak a 3' és 5' végen mutatnak eltérést. A legnagyobb cDNS klón, a hmGluR2.1 egy 4,1 kilobázispáros (kb) KpnI/NotI fragmentumot tartalmaz. Mindkét szálon a teljes kódoló szekvenciát szekvenáljuk. A hmGluR2 fehérjét kódoló DNS-szekvencia és az abból származó aminosavszekvencia az 1. illetve 2. szekvencia-azonosítószámon látható.
1.2 hmGluR2-t expresszáló szerkezet felépítése és expresszió emlős sejtekben
A 4,1 kb-os hmGluR2.1 cDNS inszertumot a pMSC emlős expressziós vektorba (lásd: Asselbergs és Grand, 1993), az egér CMV promoter után található letetett Notl/KpnI helyekre klónozzuk, így megkapjuk a pSMCChmGluR2s expressziós szerkezetet. Kínai patkány petesejteket (CHOKl) egyidejűleg pSMCChmGluR2s-sel és pSV2-Neo-val [lásd: Southern és • ·
-37Berg [Jouranl of Molecular and Applied Genetics 1, 327-341 (1982)] transzfektálunk lipofektin-mediált géntranszfer alkalmazásával (Gibco-BRL). 32 G-418-cal szemben rezisztens sejtvonalat izolálunk, és egy anti-hmGluR2 antitesttel szemben mutatott immunreaktivitás (immundetekció, lásd később) valamint az agonista hozzáadását követő, cAMP radioimmun vizsgálattal mért funkcionális válaszok alapján meghatározzuk az mGluR2 fehérje expressziót.
2. Példa: A hmGluR2 fehérje expresszió immundetekciója az altípusra nézve specifikus hmGluR antitestekkel
A hmGluR2 expressziót immun-citokémiai vizsgálattal, az altípusra nézve specifikus hmGluR antitestek (lásd: 5. Példa) alkalmazásával határozzuk meg. A transzfektálás után 1-3 nappal a sejteket foszfáttal pufferolt nátrium-klorid-oldattal (PBS) kétszer átmossuk, 4 % paraformaldehidet tartalmazó PBS-sel 10 percig fixáljuk, majd PBS-sel mossuk. A sejteket 0,4 % Triton Χ-100-at tartalmazó permeabilizáljuk (áteresztővé tesszük), azután 10 mM glieint tartalmazó PBS-sel, majd PBS-sel mossuk. A sejteket PBSTB-vel (lx PBS / 0,1 % Triton X-100 /1 % BSA) 1 órán át blokkoljuk, azután PBSTBben oldott 0,5 - 2,0 g/ml immuntisztított hmGluR antiszérummal 1 órán át inkubáijuk. PBS-sel végzett háromszori mosás után a sejteket nyúlban készített ellenanyaggal szemben kecskében készített, PBSTB-ben 1:200 arányban oldott alkáli-peroxidáz IgG konjugátummal (Jackson Immuno Research) 1 órán át inkubáijuk. Ezeután a sejteket PBS-sel háromszor átmossuk, és az immunreaktivitást a következő összetételű oldatban vizsgáljuk: 0,4 mg/ml naftol-foszfát (Biorad) / 1 mg/ml Fást Red (Biorad) / 10 mM Levamisole (Sigma) / 100 ml pH=8,8-as Tris-sósav / 100 mM nátrium-klorid / 50 mM magnézium-klorid. A reakciót 15 perc elteltével leállítjuk, majd a sejteket PBSΓ · • · • · · 9
-38sel mossuk. A hmGluR2-t homogénen expresszáló sejtvonalak közül négyet immunfestéssel azonosítunk.
3. Példa: hmGluR2-t expresszáló stabil sejtvonalak felhasználása modulátorok vagy receptor-aktivitás szkrínelésére
HmGluR2-t expresszáló stabil sejtvonalakat használunk agonisták, antagonisták és alloszterikus modulátorok szkrínelésére. Ezeket a vegyületeket [’H]-glutamátot és/vagy a sejten belüli másodlagos messenger ([cAMPj, [Ca2+]) szintek mérését alkalmazó kötési vizsgálatokkal azonosítjuk.
3.1 cAMP radioimmun-vizsgálat
A ligandum-megkötést és a cAMP forskolin-stimulált akkummulációjának agonista által indukált csökkenését (vagyis a sejten belüli cAMP-koncentráció változását) cAMP radioimmun-vizsgálattal (Amersham) határozzuk meg. A sejteket 12-lyukú lemezekre oltjuk 0,5 - 2,0 sejt/lyuk sűrűséggel, és 2-4 napig, összefüggő sejtréteg kialakulásáig szaporítjuk. A sejteket PBS-sel kétszer mossuk, és 1 mM 3-izobutil-l-metil-xantint (IBMX) tartalmazó PBS-oldatban 20 percig inkubáljuk, majd az inkubálást friss, 10 μΜ forskolint. 1 mM IBMX-et és egy ismert hmGluR agonistát tartalmazó PBSoldatban további 20 percen át folytatjuk. Ekkor az agonista hatást leállítjuk, és a gyógyszert tartalmazó közeg leszívása után a sejtek által termelt cAMP-t 100 ml etanol. 50 ml víz és 1 ml 1M sósav-oldat elegyéből 1 ml-t hozzáadva felszabadítjuk. A cAMP szintet [3H]-cAMP-t alkalmazó radioimmunvizsgálattal (Amersham) határozzuk meg.
A CHO sejtekben expresszált hmGluR2 negatívan kapcsolódik az adenilát-ciklázhoz. Az agonista megkötése a cAMP forskolin által indukált akkummulációját gátolja. Az agonisták hatásfokának nagyság szerinti sorrendje a következő: (2S,3S,4S)-ct-(karboxi-ciklopropil)-glicin > (lS,3R)-l-amino-ciklopentán-l,3-dikarbonsav = L-glutamát > kviszkalát.
-393.2 A sejten belüli kalciumion-koncentráció mérése
Egy hmGluR expressziós plazmiddal, például a fenti expressziós plazmiddal transzformált sejteket egy kalcium-érzékeny színezékkel, például fura-2 vagy tluo-3 fluoreszcens színezékkel töltünk. Ezeket a sejteket adott esetben fedőlemezzel ellátott egyedi lyukakba vagy 96-lyukú lemezre oltjuk, és 1 - 5 napon át, 50-100 %-ban összefüggő sejtréteg kialakulásáig szaporítjuk. A lyukakat egyensúlyi sóoldattal (BBS) háromszor átmossuk, 1 órán át BBS-ben inkubáljuk. majd BBS-sel ismét háromszor átmossuk. Ezután a sejteket 20 - 60 percig 50 gg fura-2AM-et (vagy fluoro3-AM-et, Molecular Probes, Inc.) 4,99 ml BBS-t. 75 μΐ dimetil-szulfoxidot (DMSO) és 6,25 gg Pluronic-ot (Molecular Probes, Inc.) tartalmazó oldatban inkubáljuk. A sejteket ezután 2 mg/ml borjúalbumint tartalmazó BBS-sel háromszor átmossuk, 10 percig pihentetjük, azután mikrofluorometriás mérésekkel meghatározzuk a kalciumionkoncentrációt.
A sejteket átvisszük egy fluorometriás berendezésbe, például inverz mikroszkópba, spektrofluoriméterbe vagy egy fluoreszcencia-leolvasóba. A fura-2 vagy fluo-3 kalcium-indikátort a színezék gerjesztési spektrumának (ez fura-2nél 340-380 nm, fluo-3-nál 480 nm) megfelelő hullámhosszúságú fénnyel megvilágítva gerjesztjük. A sejten beüli szabad kalciumion-koncentráció növekedését a fúra-2 vagy fluo-3 340 nm-nél illetve 480 nm-nél gerjesztett fluoreszcenciájának növekedése, vagy a fura-2 380 nm-nél gerjesztett fluoreszcenciájának csökkenése jelzi.
Pozitív kontrollként L-glutamátot adunk a sejtekhez saját EC50 értékének megfelelő koncentrációban, ezzel a sejten beüli kalciumionkoncentráció mérhető növekedését idézzük elő. A vizsgált vegyületet akkor nevezzük agonistának, ha a glutamáttal indukált jellel összemérhető kalciumion-jelet ad. A vizsgált vegyületet antagonistának nevezzük, ha a
-40glutamáttal indukált kalcium-jel a vegyület jelenlétében kisebb, mint ha a vizsgált v egyület nincs jelen.
4. Példa: hmGluR2 kiméra (mozaik)
Kimutatták, hogy az mGluRl sejten beüli doménjei, különösen a második intracelluláris hurok (i2) és a C-terminális régió a meghatározók a Gfehérje megkötésében, amely a foszfolipáz C / kalciumion jelző válaszutat aktiválja anélkül, hogy a receptor farmakológiai profilját megváltoztatná {lásd: Pin és munkatársai [EMBO J. 13, 342-348 (1994)]). A hmGluRs2 sejten beüli doménjei hagymányos PCR mutagenézis eljárásokkal felcserélhetők a hmGluR 1 megfelelő doménjeivel. Stabil CHO sejtvonalak hozhatók létre hmGluR2/l kimér expressziós szerkezetekkel, amelyek segítségével kalciumion-fúggő vizsgálatokkal elemezhetjük a (hmGluR2) receptor-aktivitás modulátorainak hatását.
i) A kiméra szerkesztéséhez a hmGluR2.1 cDNS kiónt használjuk.
ii) A hmGluR 1 membránon túli régióit PCR-rel klónozzuk, ehhez a Masu és munkatársai [lásd fent, (1991)] által leírt primereket használunk. Szenz primerként a Masu szekvencia nt 1753-1774 szakaszának megfelelő
5' -T ATCTTG AGTGG AGTG AC AT AG-3 ’ oligonukleotid szekvenciát alkalmazzuk. Az antiszenz primer szekvenciája:
5’-ACTGCGGACGTTCCTCTCAGG-3', ez a Masu szekvencia nt 2524-2544 szakaszának felel meg. Az la, lb és le illesztési variánst PCR-rel, a Masu és munkatársai (1991), Tanabe és munkatársai [lásd fent, (1992)] illetve Pin és munkatársai [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89 10331-10335 (1992)] által leírt primerek alkalmazásával hasítjuk. Ehhez szenz primerként a Masu szekvencia nt 2521 - nt 2543 szakaszának megfelelő
5’-AAACCTGAGAGGAACGTCCGCAG-3'
-41 oligonukleotid szekvenciát alkalmazzuk. A hmGluR la-hoz. lb-hez illetve léhez antiszenz primerként a Masu szekvencia nt 3577 -3600 szakaszának megfelelő
5’-CTACAGGGTGGAAGAGCTTTGCTT-3', a Tanabe szekvencia nt 2698 -2721 szakaszának megfelelő
5'-TCAAAGCTGCGCATGTGCCGACGG-3', illetve a Pin szekvencia nt 2671 -2694 szakaszának megfelelő
5'-TCAATAGACAGTGTTTTGGCGGTC-3' szekvenciájú oligonukleotidokat használunk.
A PCR fragmentumot pBIuescript íl-be klónozzuk, és teljes egészében szekvenáljuk.
(iii) A kiméra cDNS fragmentumot, amelyben a hmGluR2 i2 hurka (az 1. azonosítószámú szekvencia nt 1966-2037 szakasza) a megfelelő hmGluR 1 szekvenciákul van helyettesítve, a Pin és munkatársai (1994) által fent leírt módon PCR-rel generáljuk. A fragmentumot Bsu36I-gyel és DralII-mal emésztjük, ezek az i2-hurkot határoló egyedi restrikciós helyeken végzik el a hasítást.
A Bsu36I/DraIII kiméra fragmentumot a hmGluR2.1 klón Bsu36I/DraIII fragmentumával helyettesítjük.
(iv) A hmGluR2 C-terminális doménjében további helyettesítéseket végzünk a fenti hmGluR 1 illesztési variánsainak megfelelő szekvenciáival a hmGluR2 C-terminális végét határoló DralII és KpnI egyedi restrikciós helyek felhasználásával.
(v) Az így kapott hmGluR2/hmGluRl kiméra cDNS-t szekvenáljuk, majd KpnI-gyel és Notl-gyel emésztjük, ezáltal a teljes cDNS-t kinyerjük a Bluescriptből. A stabil expresszió eléréséhez a kiméra cDNS végeit leetetjük, és a pCMV-T7-2 emlős expressziós vektor leetetett NotI helyére klónozzuk, így a CHO sejtek a hmGluR2/l kiméra receptort stabilan fogják expresszálni.
-42 5. példa: Anti-hmGluR2 antitestek generálása és alkalmazása
A hmGluR2 elméletileg meghatározott C-terminális aminosavszekvenciájának megfelelő peptideket szintetizáljuk és ovalbuminhoz (tojásfehérje) vagy Tentagelhez kapcsoljuk. Nyulakban poliklonális antiszérumok jönnek létre. A humán mGluR2 specifikus antitesteket peptid-oszlopokon végzett immunaffinitási kromatográfiával nyerjük ki az antiszérumokból. A hmGluR2 specifikus antitesteket ELISA reakcióval és E. Coli-ban előállított glutation-Stranszferáz/hmGluR fúziós proteinekkel vagy emberi agykivonttal végzett immunblottal vizsgájuk. A hmGluR2-re specifikus antitesteket hmGluR2 receptoroknak transzfektált sejtekben való kimutatására és a hmGluR2 fehérjék celluláris és szubcelluláris expressziós mintájának emberi agyszövet agyszövetmetszetekben végzett elemzésére használjuk.
Különböző. hmGluR2-re specifikus, 20 aminosavat tartalmazó peptidekkel és E. Coli-ban expresszált fúziós fehérjékkel szembeni antitesteket képzőnk. A peptideket szilárd fázisú szintézissel állítjuk elő gutáraldehiddel tapadócsiga hemocianinhoz (KLH) vagy tojásfehérjéhez kapcsolva. A hmGluR2 teljes feltételezett sejten belüli fragmentumát tartalmazó PCR fragmentumokat BamHI/EeoRI fragmentumok alakjában pGEX-2T E. Coli expressziós vektorba klónozzuk a Guan és Dixon [Analytical Biochemistry 192 262-267 (1991)] által leírt módon, így glutation-S-transzferáz(GST)/hmGluR fúziós gének jönnek létre. Az E. Coli DH5a sejteket (Gibco-BRL), amelyek a GST/hmGluR fúziós géneket tartalmazó expressziós plazmidokat hordozzák, egy éjszakán át 37°Con, 100 mg/ml ampicillint tartalmazó LB közegben szaporítjuk. A tenyészeteket LB-vel 1:30 arányban hígítjuk, és 2 órán át 30°C-on szaporítjuk. A fúziós fehérjék expresszióját 0,1 mM izopropil-b-D-tiogalakto-piranoziddal 3 órán át 30°C-on végzett kezeléssel indítjuk meg. A sejteket 5000 g-vel végzett
-43 centrifugálással elválasztjuk. A fúziós fehérjét glutation affinitási kromatográfíával izoláljuk.
-44SZEKVENCIALISTA (1) Általános információ:
(i) Bejelentő:
(A) Név: Ciba-Geigy AG (B) Utca: Klybeckstr. 141 (C) Város: Bázel (E) Ország: Svájc (F) írányítószám: (ZIP): 4002 (G) Telefon: +41 61 69 11 11 (H) Telefax: +41 61 696 79 76 (I) Telex: 962 991 (ii) A találmány címe: Glutamát receptor (iii) Szekvenciák száma: 2 (iv) Computerrel olvasható forma:
(A) Médium típusa: Floppy disk (B) Computer: IBM PC kompatibilis (C) Operációs rendszer: PC-DOS/MS-DOS (D) Software: Patentln Release #1.0, Version #1.25 (EPO) (2) Információ az 1. azonosítószámú szekvenciához:
(i) Szekvencia jellemzők:
(A) Hosszúság: 2618 bázispár (B) Típus: nukleinsav (C) Lánctípus: egyfonalas (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: cDNS • · ·
-45 (ix) Jellegzetességek:
(A) Név/kulcsszó: CDS (B) Elhelyezkedés: 1..2618 (D) Más információ: (product = hmGluR2 (xi) Szekvencialeírás: 1 azonosítószámú szekvencia
| ATG Met 1 | GGA Gly | TCG Ser | CTG Leu | CTT GCG Leu Alá 5 | CTC Leu | CTG Leu | GCA CTG | CTG Leu | CCG Pro | CTG Leu | TGG Trp | GGT Gly 15 | GCT Alá | ||
| Alá | Leu 10 | ||||||||||||||
| GTG | GCT | GAG | GGC | CCA | GCC | AAG | AAG | GTG | CTG | ACC | CTG | GAG | GGA | GAC | TTG |
| Val | Alá | Glu | Gly | Pro | Alá | Lys | Lys | Val | Leu | Thr | Leu | Glu | Gly | Asp | Leu |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| GTG | CTG | GGT | GGG | CTG | TTC | CCA | GTG | CAC | CAG | AAG | GGC | GGC | CCA | GCA | GAG |
| Val | Leu | Gly | Gly | Leu | Phe | Pro | Val | His | Gin | Lys | Gly | Gly | Pro | Alá | Glu |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| GAC | TGT | GGT | CCT | GTC | AAT | GAG | CAC | CGT | GGC | ATC | CAG | CGC | CTG | GAG | GCC |
| Asp | Cys | Gly | Pro | Val | Asn | Glu | His | Arg | Gly | Ile | Gin | Arg | Leu | Glu | Alá |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| ATG | CTT | TTT | GCA | CTG | GAC | CGC | ATC | AAC | CGT | GAC | CCG | CAC | CTG | CTG | CCT |
| Met | Leu | Phe | Alá | Leu | Asp | Arg | Ile | Asn | Arg | ASp | Pro | His | Leu | Leu | Pro |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| GGC | GTG | CGC | CTG | GGT | GCA | CAC | ATC | CTC | GAC | AGT | TGC | TCC | AAG | GAC | ACA |
| Gly | Val | Arg | Leu | Gly | Alá | His | Ile | Leu | Asp | Ser | Cys | Ser | Lys | Asp | Thr |
| 85 | 90 | 95 |
| CAT GCG CTG GAG | CAG GCA CTG GAC TTT GTG CGT GCC | TCA CTC AGC | CGT Arg | 336 | ||||||||||||
| His | Alá | Leu Glu 100 | Gin | Alá Leu | Asp | Phe 105 | Val Arg | Alá | Ser | Leu 110 | Ser | |||||
| GGT | GCT | GAT | GGA | TCA | CGC | CAC | ATC | TGC | CCC | GAC | GGC | TCT | TAT | GCG | ACC | 384 |
| Gly | Alá | Asp | Gly | Ser | Arg | His | Ile | Cys | Pro | Asp | Gly | Ser | Tyr | Alá | Thr | |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
| CAT | GGT | GAT | GCT | CCC | ACT | GCC | ATC | ACT | GGT | GTT | ATT | GGC | GGT | TCC | TAC | 432 |
| His | Gly | Asp | Alá | Pro | Thr | Alá | Ile | Thr | Gly | Val | Ile | Gly | Gly | Ser | Tyr | |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
| AGT | GAT | GTC | TCC | ATC | CAG | GTG | GCC | AAC | CTC | TTG | AGG | CTA | TTT | CAG | ATC | 480 |
| Ser | Asp | Val | Ser | Ile | Gin | Val | Alá | Asn | Leu | Leu | Arg | Leu | Phe | Gin | Ile | |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
| CCA | CAG | ATT | AGC | TAC | GCC | TCT | ACC | AGT | GCC | AAG | CTG | AGT | GAC | AAG | TCC | 528 |
| Pro | Gin | He | Ser | Tyr | Alá | Ser | Thr | Ser | Alá | Lys | Leu | Ser | Asp | Lys | Ser | |
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||||||
| CGC | TAT | GAC | TAC | TTT | GCC | CGC | ACA | GTG | CCT | CCT | GAC | TTC | TTC | CAA | GCC | 576 |
| Arg | Tyr | Asp | Tyr | Phe | Alá | Arg | Thr | Val | Pro | Pro | Asp | Phe | Phe | Gin | Alá | |
| 180 | 185 | 190 | ||||||||||||||
| AAG | GCC | ATG | GCT | GAG | ATT | CTC | CGC | TTC | TTC | AAC | TGG | ACC | TAT | GTG | TCC | 624 |
| Lys | Alá | Met | Alá | Glu | Ile | Leu | Arg | Phe | Phe | Asn | Trp | Thr | Tyr | Val | Ser | |
| 195 | 200 | 205 | ||||||||||||||
| ACT | GAG | GCC | TCT | GAG | GGC | GAC | TAT | GGC | GAG | ACA | GGC | ATT | GAG | GCC | TTT | 672 |
| Thr | Glu | Alá | Ser | Glu | Gly | Asp | Tyr | Gly | Glu | Thr | Gly | Ile | Glu | Alá | Phe | |
| 210 | 215 | 220 | ||||||||||||||
| GAG | CTA | GAG | GCT | CGT | GCC | CGC | AAC | ATC | TGT | GTG | GCC | ACC | TCG | GAG | AAA | 720 |
| Glu | Leu | Glu | Alá | Arg | Alá | Arg | Asn | Ile | Cys | Val | Alá | Thr | Ser | Glu | Lys | |
| 225 | 230 | 235 | 240 |
| GTG GGC | CGT GCC ATG AGC | CGC Arg | GCG GCC TTT GAG GGT GTG GTG CGA GCC | 768 | ||||||||||||
| Val | Gly | Arg Alá | Met 245 | Ser | Alá | Alá | Phe 250 | Glu Gly | Val | Val | Arg 255 | Alá | ||||
| CTG | CTG | CAG | AAG | CCC | AGT | GCC | CGC | GTG | GCT | GTC | CTG | TTC | ACC | CGT | TCT | 816 |
| Leu | Leu | Gin | Lys | Pro | Ser | Alá | Arg | Val | Alá | Val | Leu | Phe | Thr | Arg | Ser | |
| 260 | 265 | 270 | ||||||||||||||
| GAG | GAT | GCC | CGG | GAG | CTG | CTT | GCT | GCC | AGC | CAG | CGC | CTC | AAT | GCC | AGC | 864 |
| Glu | Asp | Alá | Arg | Glu | Leu | Leu | Alá | Alá | Ser | Gin | Arg | Leu | Asn | Alá | Ser | |
| 275 | 280 | 285 | ||||||||||||||
| TTC | ACC | TGG | GTG | GCC | AGT | GAT | GGT | TGG | GGG | GCC | CTG | GAG | AGT | GTG | GTG | 912 |
| Phe | Thr | Trp | Val | Alá | Ser | Asp | Gly | Trp | Gly | Alá | Leu | Glu | Ser | Val | Val | |
| 290 | 295 | 300 | ||||||||||||||
| GCA | GGC | AGT | GAG | GGG | GCT | GCT | GAG | GGT | GCT | ATC | ACC | ATC | GAG | CTG | GCC | 960 |
| Alá | Gly | Ser | Glu | Gly | Alá | Alá | Glu | Gly | Alá | Ile | Thr | Ile | Glu | Leu | Alá | |
| 305 | 310 | 315 | 320 | |||||||||||||
| TCC | TAC | CCC | ATC | AGT | GAC | TTT | GCC | TCC | TAC | TTC | CAG | AGC | CTG | GAC | CCT | 1008 |
| Ser | Tyr | Pro | Ile | Ser | Asp | Phe | Alá | Ser | Tyr | Phe | Gin | Ser | Leu | Asp | Pro | |
| 325 | 330 | 335 | ||||||||||||||
| TGG | AAC | AAC | AGC | CGG | AAC | CCC | TGG | TTC | CGT | GAA | TTC | TGG | GAG | CAG | AGG | 1056 |
| Trp | Asn | Asn | Ser | Arg | Asn | Pro | Trp | Phe | Arg | Glu | Phe | Trp | Glu | Gin | Arg | |
| 340 | 345 | 350 | ||||||||||||||
| TTC | CGC | TGC | AGC | TTC | CGG | CAG | CGA | GAC | TGC | GCA | GCC | CAC | TCT | CTC | CGG | 1104 |
| Phe | Arg | Cys | Ser | Phe | Arg | Gin | Arg | Asp | Cys | Alá | Alá | His | Ser | Leu | Arg | |
| 355 | 360 | 365 | ||||||||||||||
| GCT | GTG | CCC | TTT | GAA | CAG | GAG | TCC | AAG | ATC | ATG | TTT | GTG | GTC | AAT | GCA | 1152 |
| Alá | Val | Pro | Phe | Glu | Gin | Glu | Ser | Lys | Ile | Met | Phe | Val | Val | Asn | Alá | |
| 370 | 375 | 380 |
-481200
| GTG Val 385 | TAC GCC ATG GCC | CAT His 390 | GCG CTC CAC AAC ATG CAC CGT GCC CTC | TGC Cys 400 | |||||||||||
| Tyr | Alá | Met | Alá | Alá Leu | His Asn Met 395 | His | Arg Alá | Leu | |||||||
| CCC | AAC | ACC | ACC | CGG | CTC | TGT | GAC | GCG | ATG | CGG | CCA | GTT | AAC | GGG | CGC |
| Pro | Asn | Thr | Thr | Arg | Leu | Cys | Asp | Alá | Met | Arg | Pro | Val | Asn | Gly | Arg |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| CGC | CTC | TAC | AAG | GAC | TTT | GTG | CTC | AAC | GTC | AAG | TTT | GAT | GCC | CCC | TTT |
| Arg | Leu | Tyr | Lys | Asp | Phe | Val | Leu | Asn | Val | Lys | Phe | Asp | Alá | Pro | Phe |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| CGC | CCA | GCT | GAC | ACC | CAC | AAT | GAG | GTC | CGC | TTT | GAC | CGC | TTT | GGT | GAT |
| Arg | Pro | Alá | Asp | Thr | His | Asn | Glu | Val | Arg | Phe | Asp | Arg | Phe | Gly | Asp |
| 435 | 440 | 445 | |||||||||||||
| GGT | ATT | GGC | CGC | TAC | AAC | ATC | TTC | ACC | TAT | CTG | CGT | GCA | GGC | AGT | GGG |
| Gly | Ile | Gly | Arg | Tyr | Asn | Ile | Phe | Thr | Tyr | Leu | Arg | Alá | Gly | Ser | Gly |
| 4 50 | 455 | 460 | |||||||||||||
| CGC | TAT | CGC | TAC | CAG | AAG | GTG | GGC | TAC | TGG | GCA | GAA | GGC | TTG | ACT | CTG |
| Arg | Tyr | Arg | Tyr | Gin | Lys | Val | Gly | Tyr | Trp | Alá | Glu | Gly | Leu | Thr | Leu |
| 465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
| GAC | ACC | AGC | CTC | ATC | CCA | TGG | GCC | TCA | CCG | TCA | GCC | GGC | CCC | CTG | GCC |
| Asp | Thr | Ser | Leu | Ile | Pro | Trp | Alá | Ser | Pro | Ser | Alá | Gly | Pro | Leu | Alá |
| 485 | 490 | 495 | |||||||||||||
| GCC | TCT | CGC | TGC | AGT | GAG | CCC | TGC | CTC | CAG | AAT | GAG | GTG | AAG | AGT | GTG |
| Alá | Ser | Arg | Cys | Ser | Glu | Pro | Cys | Leu | Gin | Asn | Glu | Val | Lys | Ser | Val |
| 500 | 505 | 510 | |||||||||||||
| CAG | CCG | GGC | GAA | GTC | TGC | TGC | TGG | CTC | TGC | ATT | CCG | TGC | CAG | CCC | TAT |
| Gin | Pro | Gly | Glu | Val | Cys | Cys | Trp | Leu | Cys | Ile | Pro | Cys | Gin | Pro | Tyr |
| 515 | 520 | 525 |
1248
1296
1344
1392
1440
1488
1536
1584
| GAG TAC | CGA Arg | TTG Leu | GAC GAA TTC ACT TGC GCT GAT TGT GGC CTG | GGC Gly | TAC Tyr | 1632 | ||||||||||
| Glu | Tyr 530 | Asp | Glu | Phe Thr 535 | Cys | Alá | Asp | Cys 540 | Gly | Leu | ||||||
| TGG | CCC | AAT | GCC | AGC | CTG | ACT | GGC | TGC | TTC | GAA | CTG | CCC | CAG | GAG | TAC | 1680 |
| Trp | Pro | Asn | Alá | Ser | Leu | Thr | Gly | Cys | Phe | Glu | Leu | Pro | Gin | Glu | Tyr | |
| 545 | 550 | 555 | 560 | |||||||||||||
| ATC | CGC | TGG | GGC | GAT | GCC | TGG | GCT | GTG | GGA | CCT | GTC | ACC | ATC | GCC | TGC | 1728 |
| Ile | Arg | Trp | Gly | Asp | Alá | Trp | Alá | Val | Gly | Pro | Val | Thr | Ile | Alá | Cys | |
| 565 | 570 | 57 5 | ||||||||||||||
| CTC | GGT | GCC | CTG | GCC | ACC | CTG | TTT | GTG | CTG | GGT | GTC | TTT | GTG | CGG | CAC | 1776 |
| Leu | Gly | Alá | Leu | Alá | Thr | Leu | Phe | Val | Leu | Gly | Val | Phe | Val | Arg | His | |
| 580 | 585 | 590 | ||||||||||||||
| AAT | GCC | ACA | CCA | GTG | GTC | AAG | GCC | TCA | GGT | CGG | GAG | CTC | TGC | TAC | ATC | 1824 |
| Asn | Alá | Thr | Pro | Val | Val | Lys | Alá | Ser | Gly | Arg | Glu | Leu | Cys | Tyr | Ile | |
| 595 | 600 | 605 | ||||||||||||||
| CTG | CTG | GGT | GGT | GTC | TTC | CTC | TGC | TAC | TGC | ATG | ACC | TTC | ATC | TTC | ATT | 1872 |
| Leu | Leu | Gly | Gly | Val | Phe | Leu | Cys | Tyr | Cys | Met | Thr | Phe | Ile | Phe | Ile | |
| 610 | 615 | 620 | ||||||||||||||
| GCC | AAG | CCA | TCC | ACG | GCA | GTG | TGT | ACC | TTA | CGG | CGT | CTT | GGT | TTG | GGC | 1920 |
| Alá | Lys | Pro | Ser | Thr | Alá | Val | Cys | Thr | Leu | Arg | Arg | Leu | Gly | Leu | Gly | |
| 625 | 630 | 635 | 640 | |||||||||||||
| ACT | GCC | TTC | TCT | GTC | TGC | TAC | TCA | GCC | CTG | CTC | ACC | AAG | ACC | AAC | CGC | 1968 |
| Thr | Alá | Phe | Ser | Val | Cys | Tyr | Ser | Alá | Leu | Leu | Thr | Lys | Thr | Asn | Arg | |
| 645 | 650 | 655 | ||||||||||||||
| ATT | GCA | CGC | ATC | TTC | GGT | GGG | GCC | CGG | GAG | GGT | GCC | CAG | CGG | CCA | CGC | 2016 |
| Ile | Alá | Arg | Ile | Phe | Gly | Gly | Alá | Arg | Glu | Gly | Alá | Gin | Arg | Pro | Arg | |
| 660 | 665 | 670 |
| TTC Phe | ATC AGT CCT GCC | TCA Ser | CAG Gin | GTG GCC | ATC Ile | TGC CTG GCA CTT ATC | TCG Ser | 2064 | ||||||||
| Ile | Ser 675 | Pro | Alá | Val 680 | Alá | Cys | Leu | Alá 685 | Leu | He | ||||||
| GGC | CAG | CTG | CTC | ATC | GTG | GTC | GCC | TGG | CTG | GTG | GTG | GAG | GCA | CCG | GGC | 2112 |
| Gly | Gin | Leu | Leu | Ile | Val | Val | Alá | Trp | Leu | Val | Val | Glu | Alá | Pro | Gly | |
| 690 | 695 | 700 | ||||||||||||||
| ACA | GGC | AAG | GAG | ACA | GCC | CCC | GAA | CGG | CGG | GAG | GTG | GTG | ACA | CTG | CGC | 2160 |
| Thr | Gly | Lys | Glu | Thr | Alá | Pro | Glu | Arg | Arg | Glu | Val | Val | Thr | Leu | Arg | |
| 705 | 710 | 715 | 720 | |||||||||||||
| TGC | AAC | CAC | CGC | GAT | GCA | AGT | ATG | TTG | GGC | TCG | CTG | GCC | TAC | AAT | GTG | 2208 |
| Cys | Asn | His | Arg | Asp | Alá | Ser | Met | Leu | Gly | Ser | Leu | Alá | Tyr | Asn | Val | |
| 725 | 730 | 735 | ||||||||||||||
| CTC | CTC | ATC | GCG | CTC | TGC | ACG | CTT | TAT | GCC | TTC | AAT | ACT | CGC | AAG | TGC | 2256 |
| Leu | Leu | He | Alá | Leu | Cys | Thr | Leu | Tyr | Alá | Phe | Asn | Thr | Arg | Lys | Cys | |
| 740 | 745 | 750 | ||||||||||||||
| CCC | GAA | AAC | TTC | AAC | GAG | GCC | AAG | TTC | ATT | GGC | TTC | ACC | ATG | TAC | ACC | 2304 |
| Pro | Glu | Asn | Phe | Asn | Glu | Alá | Lys | Phe | Ile | Gly | Phe | Thr | Met | Tyr | Thr | |
| 755 | 760 | 765 | ||||||||||||||
| ACC | TGC | ATC | ATC | TGG | CTG | GCA | TTG | TTG | CCC | ATC | TTC | TAT | GTC | ACC | TCC | 2352 |
| Thr | Cys | Ile | Ile | Trp | Leu | Alá | Leu | Leu | Pro | Ile | Phe | Tyr | Val | Thr | Ser | |
| 770 | 775 | 780 | ||||||||||||||
| AGT | GAC | TAC | CGG | GTA | CAG | ACC | ACC | ACC | ATG | TGC | GTG | TCA | GTC | AGC | CTC | 2400 |
| Ser | Asp | Tyr | Arg | Val | Gin | Thr | Thr | Thr | Met | Cys | Val | Ser | Val | Ser | Leu | |
| 785 | 790 | 795 | 800 | |||||||||||||
| AGC | GGC | TCC | GTG | GTG | CTT | GGC | TGC | CTC | TTT | GCG | CCC | AAG | CTG | CAC | ATC | 2448 |
| Ser | Gly | Ser | Val | Val | Leu | Gly | Cys | Leu | Phe | Alá | Pro | Lys | Leu | His | He | |
| 805 | 810 | 815 |
| ATC Ile | CTC Leu | TTC Phe | CAG Gin 820 | CCG CAG AAG | AAC Asn | GTG Val 825 | GTT AGC | CAC His | CGG Arg | GCA CCC | ACC Thr | 2496 | ||||
| Pro Gin | Lys | Val | Ser | Alá 830 | Pro | |||||||||||
| AGC | CGC | TTT | GGC | AGT | GCT | GCT | GCC | AGG | GCC | AGC | TCC | AGC | CTT | GGC | CAA | 2544 |
| Ser | Arg | Phe | Gly | Ser | Alá | Alá | Alá | Arg | Alá | Ser | Ser | Ser | Leu | Gly | Gin | |
| 835 | 840 | 845 | ||||||||||||||
| GGG | TCT | GGC | TCC | CAG | TTT | GTC | CCC | ACT | GTT | TGC | AAT | GGC | CGT | GAG | GTG | 2592 |
| Gly | Ser | Gly | Ser | Gin | Phe | Val | Pro | Thr | Val | Cys | Asn | Gly | Arg | Glu | Val | |
| 850 | 855 | 860 | ||||||||||||||
| GTG | GAC | TCG | ACA | ACG | TCA | TCG | CTT | TG | 2619 | |||||||
| Val | Asp | Ser | Thr | Thr | Ser | Ser | Leu | |||||||||
| 865 | 870 |
(2) Információ a 2. azonosítószámú szekvenciához (i) Szekvencia jellemző:
(A) Hosszúság: 872 aminosav (B) Típus: aminosav (D) Topológia: lineáris (xi) Szekvencialeírás: 2 azonosító számú szekvencia
| Met 1 | Gly | Ser | Leu Leu Alá Leu Leu Alá Leu Leu Pro Leu Trp Gly | Alá | |||||||||||
| 5 | 10 | 15 | |||||||||||||
| Val | Alá | Glu | Gly | Pro | Alá | Lys | Lys | Val | Leu | Thr | Leu | Glu | Gly | Asp | Leu |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Val | Leu | Gly | Gly | Leu | Phe | Pro | Val | His | Gin | Lys | Gly | Gly | Pro | Alá | Glu |
| 35 | 40 | 45 |
- 52 Asp Cys Gly Pro Val Asn Glu His Arg Gly Ile Gin Arg Leu Glu Alá 50 55 60
Met Leu Phe Alá Leu Asp Arg Ile Asn Arg Asp Pro His Leu Leu Pro
70 75 80
Gly Val Arg Leu Gly Alá His Ile Leu Asp Ser Cys Ser Lys Asp Thr
90 95
His Alá Leu Glu Gin Alá Leu Asp Phe Val Arg Alá Ser Leu Ser Arg 100 105 110
Gly Alá Asp Gly Ser Arg His Ile Cys Pro Asp Gly Ser Tyr Alá Thr 115 120 125
His Gly Asp Alá Pro Thr Alá Ile Thr Gly Val Ile Gly Gly Ser Tyr 130 135 140
Ser Asp Val Ser Ile Gin Val Alá Asn Leu Leu Arg Leu Phe Gin Ile 145 150 155 160 ( Pro Gin Ile Ser Tyr Alá Ser Thr Ser Alá Lys Leu Ser Asp Lys Ser
165 170 175
Arg Tyr Asp Tyr Phe Alá Arg Thr Val Pro Pro Asp Phe Phe Gin Alá 180 185 190
Lys Alá Met Alá Glu Ile Leu Arg Phe Phe Asn Trp Thr Tyr Val Ser 195 200 205
Thr Glu Alá Ser Glu Gly Asp Tyr Gly Glu Thr Gly Ile Glu Alá Phe 210 215 220
Glu Leu Glu Alá Arg Alá Arg Asn Ile Cys Val Alá Thr Ser Glu Lys 225 230 235 240 ·· ··.· ···· .··, « « · · · ’ • ···. .· ··.
Val Gly Arg Alá Met Ser Arg Alá Alá Phe Glu Gly Val Val Arg Alá 245 250 255
Leu Leu Gin Lys Pro Ser Alá Arg Val Alá Val Leu Phe Thr Arg Ser 260 265 270
Glu Asp Alá Arg Glu Leu Leu Alá Alá Ser Gin Arg Leu Asn Alá Ser 275 280 285
Phe Thr Trp Val Alá Ser Asp Gly Trp Gly Alá Leu Glu Ser Val Val 290 295 300
Alá Gly Ser Glu Gly Alá Alá Glu Gly Alá lle Thr He Glu Leu Alá
305 310 315 320
Ser Tyr Pro lle Ser Asp Phe Alá Ser Tyr Phe Gin Ser Leu Asp Pro
325 330 335
Trp Asn Asn Ser Arg Asn Pro Trp Phe Arg Glu Phe Trp Glu Gin Arg 340 345 350
Phe Arg Cys Ser Phe Arg Gin Arg Asp Cys Alá Alá His Ser Leu Arg 355 360 365
Alá Val Pro Phe Glu Gin Glu Ser Lys lle Met Phe Val Val Asn Alá 370 375 380
Val Tyr Alá Met Alá His Alá Leu His Asn Met His Arg Alá Leu Cys
385 390 395 400
Pro Asn Thr Thr Arg Leu Cys Asp Alá Met Arg Pro Val Asn Gly Arg
405 410 415
Arg Leu Tyr Lys Asp Phe Val Leu Asn Val Lys Phe Asp Alá Pro Phe 420 425 430 i
-54Arg Pro Alá Asp Thr 435
Gly Ile Gly Arg Tyr 450
Arg Tyr Arg Tyr Gin 465
Asp Thr Ser Leu Ile 485
Alá Ser Arg Cys Ser 500
Gin Pro Gly Glu Val 515
Glu Tyr Arg Leu Asp 530
Trp Pro Asn Alá Ser 545
Ile Arg Trp Gly Asp 565
Leu Gly Alá Leu Alá 580
Asn Alá Thr Pro Val 595
Leu Leu Gly Gly Val 610
His Asn Glu Val Arg Phe 440
Asn Ile Phe Thr Tyr Leu 455
Lys Val Gly Tyr Trp Alá 470 475
Pro Trp Alá Ser Pro Ser 490
Glu Pro Cys Leu Gin Asn 505
Cys Cys Trp Leu Cys Ile 520
Glu Phe Thr Cys Alá Asp 535
Leu Thr Gly Cys Phe Glu 550 555
Alá Trp Alá Val Gly Pro 570
Thr Leu Phe Val Leu Gly 585
Val Lys Alá Ser Gly Arg 600
Phe Leu Cys Tyr Cys Met 615
Asp Arg Phe Gly Asp 445
Arg Alá Gly Ser Gly 460
Glu Gly Leu Thr Leu 480
Alá Gly Pro Leu Alá 495
Glu Val Lys Ser Val 510
Pro Cys Gin Pro Tyr 525
Cys Gly Leu Gly Tyr 540
Leu Pro Gin Glu Tyr 560
Val Thr Ile Alá Cys 575
Val Phe Val Arg His 590
Glu Leu Cys Tyr Ile 605
Thr Phe Ile Phe Ile 620
- 55 Alá Lys Pro Ser Thr Alá Val Cys Thr Leu Arg Arg Leu Gly Leu Gly
625 630 635 640
Thr Alá Phe Ser Val Cys Tyr Ser Alá Leu Leu Thr Lys Thr Asn Arg '
645 650 655
Ile Alá Arg Ile Phe Gly Gly Alá Arg Glu Gly Alá Gin Arg Pro Arg 660 665 670
Phe Ile Ser Pro Alá Ser Gin Val Alá Ile Cys Leu Alá Leu Ile Ser 675 680 685
Gly Gin Leu Leu Ile Val Val Alá Trp Leu Val Val Glu Alá Pro Gly 690 695 700
Thr Gly Lys Glu Thr Alá Pro Glu Arg Arg Glu Val Val Thr Leu Arg
705 710 715 720
Cys Asn His Arg Asp Alá Ser Met Leu Gly Ser Leu Alá Tyr Asn Val
725 730 735
Leu Leu Ile Alá Leu Cys Thr Leu Tyr Alá Phe Asn Thr Arg Lys Cys 740 745 750
Pro Glu Asn Phe Asn Glu Alá Lys Phe Ile Gly Phe Thr Met Tyr Thr 755 760 765
Thr Cys Ile Ile Trp Leu Alá Leu Leu Pro Ile Phe Tyr Val Thr Ser 770 775 780
Ser Asp Tyr Arg Val Gin Thr Thr Thr Met Cys Val Ser Val Ser Leu
785 790 795 800
Ser Gly Ser Val Val Leu Gly Cys Leu Phe Alá Pro Lys Leu His Ile
805 810 815
56Ile Leu Phe Gin Pro Gin Lys Asn Val Val Ser His Arg Alá Pro Thr 820 825 830
Ser Arg Phe Gly Ser Alá Alá Alá Arg Alá Ser Ser Ser Leu Gly Gin 835 840 845
Gly Ser Gly Ser Gin Phe Val Pro Thr Val Cys Asn Gly Arg Glu Val 850 855 860
Val Asp Ser Thr Thr Ser Ser Leu
865 870
I
-57SZABADALMI IGÉNYPONTOK
Claims (26)
1. Tisztított humán metabotrop glutamát receptor (hmGluR) 2.
2. Egy 1. igénypont szerinti receptor, amelynek aminosavszekvenciája a
2. szekvencia-azonosítószámon megadott.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti receptor egy variánsa.
4. Készítmény, amely egy 1. igénypont szerinti receptort tartalmaz.
5. Eljárás egy 1. igénypont szerinti receptor előállítására, azzal jellemezve, hogy egy alkalmas gazdasejtet in vitro vagy in vivő sokszorozunk.
6. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti receptor felhasználása olyan vegyületnek szkríneléssel történő keresésére, amely ezen receptor aktivitását módosítja.
7. Fúziós protein, amely az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti receptort tartalmaz.
8. Olyan nukleinsavat tartalmazó nukleinsav, amely az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti receptort vagy annak egy fragmentumát kódolja.
9. A 8. igénypont szerinti nukleinsav, amely egy DNS.
10. Egy 9. igénypont szerinti DNS, amelynek nukleotidszekvenciája az
1. azonosítószámon megadott.
11. Nukleinsav-próba, amely a 9. vagy 10. igénypont szerinti DNS-nek legalább 14 egymással szomszédos bázisát vagy azok komplementerét tartalmazza.
12. Eljárás all. igénypont szerinti nukleinsav előállítására.
13. Egy 9. igénypont szerinti DNS, amely egy hibrid vektor.
14. Egy 9. igénypont szerinti DNS-t tartalmazó gazdasejt.
-5815. Egy 14. igénypont szerinti eukarióta gazdasejt, amely egy 1.
igénypont szerinti fehérjét kódoló DNS-t expresszál.
ló. Egy 9. igénypont szerinti DNS-sel transzfektált gazdasejt.
17. Egy 16. igénypont szerinti gazdasejt, amely emlős-sejt.
18. Egy 16. igénypont szerinti gazdasejt felhasználása egy 1. igénypont szerinti receptor aktivitását módosító vegyület szkrínelésére.
19. Eljárás a 14. igénypont szerinti gazdasejt előállítására,
20. A 9. igénypont szerinti DNS-sel komplementer tisztított mRNS.
21. Eljárás az 1. igénypont szerinti hmGluR altípust kódoló DNS azonosítására, azzal jellemezve, hogy humán DNS-t érintkezésbe hozunk egy 11. igénypont szerinti próbával, és azonosítjuk a próbával számottevő mértékben hibridizáló (egy vagy több) DNS-t.
22. Eljárás a hmGluR2-höz kötődő vegyületek azonosítására, azzal jellemezve. hogy kompetitív kötési vizsgálatban egy 1. igénypont szerinti receptorfehérjét alkalmazunk.
23. A hmGluR aktivitását módosító vegyületek azonosítására szolgáló vizsgálat, azzal jellemezve, hogy
-a 15. igénypont szerinti sejteket legalább egy olyan vegyülettel vagy szignállal hozzuk érintkezésbe, amelynek a receptor aktivitását módosító képességét kívánjuk meghatározni, majd
- a sejteket megvizsgáljuk a receptor által közvetített funkcionális válasz eltérése szempontjából.
24. A 23. igénypont szerinti vizsgálat, azzal jellemezve, hogy
-a 15. igénypont szerinti sejteket legalább egy olyan vegyülettel vagy szignállal hozzuk érintkezésbe, amelynek a hmGluR aktivitását módosító képességét kívánjuk meghatározni, majd
-59- megvizsgáljuk a sejteket, hogy történt-e változás egy másodlagos messenger szintjében.
25. Eljárás egy 1. igénypont szerinti hmGluR altípus jelátalakító hatásának módosítására, azzal jellemezve, hogy az altípust érintkezésbe hozzuk legalább egy. a 23. igénypont szerinti vizsgálattal azonosított vegyület hatásos mennyiségével.
26. Egy 23. igénypont szerinti vizsgálattal azonosított agonista, antagonista vagy alloszterikus modulátor.
27. Eljárás egy glutamát agonista vagy a hmGluR2 egy agonista hatású alloszterikus modulátorának kimutatására, azzal jellemezve, hogy (a) egy vegyületet egy válaszúthoz kapcsolt 1. igénypont szerinti hmGluR hatásának teszünk ki olyan körülmények között és annyi ideig, amennyi szükséges ahhoz, hogy a vegyület és a receptor közötti kölcsönhatás és az arra adott válasz az adott válaszúton végigmenjen, és (b) kimutatjuk a válaszút stimulációjának a vizsgált vegyület távollétében mért értékhez képest fellépő növekedését vagy csökkenését, amit a vegyület és a hmGluR2 közötti kölcsönhatás okoz, és ebből megállapítjuk, hogy jelen van-e egy agonista vagy egy alloszterikus modulátor.
28. Eljárás egy glutamát antagonista vagy a hmGluR2 egy antagonista hatású alloszterikus modulátorának azonosítására, azzal jellemezve, hogy (a) egy vegyületet egy ismert glutamát-agonista jelenlétében egy válaszúthoz kapcsolt 1. igénypont szerinti hmGluR hatásának teszünk ki olyan körülmények között és annyi ideig, amennyi szükséges ahhoz, hogy az agonista és a receptor közötti kölcsönhatás és az arra adott válasz az adott válaszúton végigmenjen, és
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9416554A GB9416554D0 (en) | 1994-08-19 | 1994-08-19 | Glutamate receptor |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT76969A true HUT76969A (hu) | 1998-01-28 |
Family
ID=10759939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9701680A HUT76969A (hu) | 1994-08-19 | 1995-07-12 | Glutamát receptor |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0776364A1 (hu) |
| JP (1) | JPH10504198A (hu) |
| AU (1) | AU3110095A (hu) |
| CA (1) | CA2196997A1 (hu) |
| FI (1) | FI970633A (hu) |
| GB (1) | GB9416554D0 (hu) |
| HU (1) | HUT76969A (hu) |
| NO (1) | NO970740L (hu) |
| WO (1) | WO1996006167A1 (hu) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5912122A (en) * | 1993-06-04 | 1999-06-15 | Sibia Neurosciences, Inc. | Nucleic acids encoding and method for detecting nucleic acid encoding human metabotropic glutamate receptor subtype mGluR6 |
| WO1995008627A1 (en) | 1993-09-20 | 1995-03-30 | Ciba-Geigy Ag | Human metabotropic glutamate receptor subtypes (hmr4, hmr6, hmr7) and related dna compounds |
| US6017697A (en) * | 1994-11-14 | 2000-01-25 | Eli Lilly And Company | Excitatory amino acid receptor protein and related nucleic acid compounds |
| WO1999021992A2 (en) * | 1997-10-23 | 1999-05-06 | Ganimed Pharmaceuticals Gmbh | Nucleic acid molecules encoding a glutamate receptor |
| US7262280B1 (en) | 1998-04-03 | 2007-08-28 | Nps Pharmaceuticals, Inc. | G-protein fusion receptors and constructs encoding same |
| GB9807722D0 (en) * | 1998-04-08 | 1998-06-10 | Smithkline Beecham Plc | Novel compounds |
| WO1999060121A1 (en) * | 1998-05-19 | 1999-11-25 | Compugen Ltd. | Metabotropic glutamate receptor-like protein and encoding cdna |
| WO2004024936A2 (en) * | 2002-09-11 | 2004-03-25 | Merck & Co., Inc. | Mutant forms of glutamate receptors mglur2 and mglur3 |
| WO2005076014A1 (en) * | 2004-01-28 | 2005-08-18 | Bayer Healthcare Ag | Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human metabotropic glutamate receptor 2 (mglur2) |
| TWI417095B (zh) | 2006-03-15 | 2013-12-01 | Janssen Pharmaceuticals Inc | １，４-二取代之３-氰基-吡啶酮衍生物及其作為ｍＧｌｕＲ２-受體之正向異位性調節劑之用途 |
| TW200845978A (en) | 2007-03-07 | 2008-12-01 | Janssen Pharmaceutica Nv | 3-cyano-4-(4-tetrahydropyran-phenyl)-pyridin-2-one derivatives |
| TW200900065A (en) | 2007-03-07 | 2009-01-01 | Janssen Pharmaceutica Nv | 3-cyano-4-(4-pyridinyloxy-phenyl)-pyridin-2-one derivatives |
| CN101801951B (zh) | 2007-09-14 | 2013-11-13 | 杨森制药有限公司 | 1’,3’-二取代的-4-苯基-3,4,5,6-四氢-2h,1’h-[1,4’]二吡啶-2’-酮 |
| ES2439291T3 (es) | 2008-09-02 | 2014-01-22 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Derivados de 3-azabiciclo[3.1.0]hexilo como moduladores de receptores de glutamato metabotrópicos |
| US8691813B2 (en) | 2008-11-28 | 2014-04-08 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Indole and benzoxazine derivatives as modulators of metabotropic glutamate receptors |
| ME01573B (me) | 2009-05-12 | 2014-09-20 | Addex Pharma Sa | DERIVATI 1,2,4-TRIAZOLO[4,3-a]PIRIDINA I NJIHOVA UPOTREBA U TRETMANU ILI PREVENCIJI NEUROLOŠKIH I PSIHIJATRIJSKIH POREMEĆAJA |
| MX2011011962A (es) | 2009-05-12 | 2012-02-28 | Janssen Pharmaceuticals Inc | Derivados de 1,2,4-triazolo[4,3-a]piridina y su uso como moduladores alostericos positivos de receptores de glutamato metabotropico (mglur2). |
| MY153913A (en) | 2009-05-12 | 2015-04-15 | Janssen Pharmaceuticals Inc | 7-aryl-1,2,4-triazolo[4,3-a]pyridine derivatives and their use as positive allosteric modulators of mglur2 receptors |
| AU2011328195B2 (en) | 2010-11-08 | 2015-04-02 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | 1,2,4-triazolo[4,3-a]pyridine derivatives and their use as positive allosteric modulators of mGluR2 receptors |
| US9271967B2 (en) | 2010-11-08 | 2016-03-01 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | 1,2,4-triazolo[4,3-a]pyridine derivatives and their use as positive allosteric modulators of mGluR2 receptors |
| JP5852666B2 (ja) | 2010-11-08 | 2016-02-03 | ジヤンセン・フアーマシユーチカルズ・インコーポレーテツド | １，２，４−トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン誘導体およびｍＧｌｕＲ２受容体のポジティブアロステリックモジュレーターとしてのそれらの使用 |
| JO3368B1 (ar) | 2013-06-04 | 2019-03-13 | Janssen Pharmaceutica Nv | مركبات 6، 7- ثاني هيدرو بيرازولو [5،1-a] بيرازين- 4 (5 يد)- اون واستخدامها بصفة منظمات تفارغية سلبية لمستقبلات ميجلور 2 |
| JO3367B1 (ar) | 2013-09-06 | 2019-03-13 | Janssen Pharmaceutica Nv | مركبات 2،1، 4- ثلاثي زولو [3،4-a] بيريدين واستخدامها بصفة منظمات تفارغية موجبة لمستقبلات ميجلور 2 |
| PL3096790T3 (pl) | 2014-01-21 | 2020-01-31 | Janssen Pharmaceutica, N.V. | Kombinacje zawierające pozytywne modulatory allosteryczne lub agonistów ortosterycznych metabotropowego receptora glutaminergicznego podtypu 2 i ich zastosowanie |
| KR20200036063A (ko) | 2014-01-21 | 2020-04-06 | 얀센 파마슈티카 엔.브이. | 대사 조절형 글루탐산 작동성 수용체 제2아형의 양성 알로스테릭 조절제 또는 오르토스테릭 작동제를 포함하는 조합 및 그 용도 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL105587A0 (en) * | 1992-05-08 | 1993-09-22 | Lilly Co Eli | Human metabotropic glutamate receptor and related dna compounds |
| US5521297A (en) * | 1993-06-04 | 1996-05-28 | Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates | Nucleic acids encoding human metabotropic glutamate receptors |
-
1994
- 1994-08-19 GB GB9416554A patent/GB9416554D0/en active Pending
-
1995
- 1995-07-12 HU HU9701680A patent/HUT76969A/hu unknown
- 1995-07-12 AU AU31100/95A patent/AU3110095A/en not_active Abandoned
- 1995-07-12 WO PCT/EP1995/002728 patent/WO1996006167A1/en not_active Application Discontinuation
- 1995-07-12 JP JP8507725A patent/JPH10504198A/ja active Pending
- 1995-07-12 CA CA 2196997 patent/CA2196997A1/en not_active Abandoned
- 1995-07-12 EP EP95926863A patent/EP0776364A1/en not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-02-14 FI FI970633A patent/FI970633A/fi unknown
- 1997-02-18 NO NO970740A patent/NO970740L/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1996006167A1 (en) | 1996-02-29 |
| MX9701267A (es) | 1997-11-29 |
| JPH10504198A (ja) | 1998-04-28 |
| EP0776364A1 (en) | 1997-06-04 |
| GB9416554D0 (en) | 1994-10-12 |
| NO970740D0 (no) | 1997-02-18 |
| FI970633A0 (fi) | 1997-02-14 |
| FI970633A (fi) | 1997-02-14 |
| CA2196997A1 (en) | 1996-02-29 |
| AU3110095A (en) | 1996-03-14 |
| NO970740L (no) | 1997-04-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUT76969A (hu) | Glutamát receptor | |
| AU695641B2 (en) | Human metabotropic glutamate receptor subtypes (HMR4, HMR6, HMR7) and related DNA compounds | |
| JP4446737B2 (ja) | Ｇタンパク質共役型レセプターＣｈｅｍＲ２３の天然リガンドとその使用 | |
| US20030040045A1 (en) | Mammalian sweet taste receptors | |
| JPH08507441A (ja) | ヒト神経細胞性ニコチン性アセチルコリン受容体組成物およびそれらの使用方法 | |
| IL150566A (en) | Nucleic acids and polypeptides and nogo receptor proteins | |
| EP0907731B1 (en) | Metabotropic gaba(b) receptors, receptor-specific ligands and their uses | |
| JPH04506752A (ja) | チロトロピンレセプター活性を有するポリペプチド、このレセプターとポリペプチドとをコードする核酸、そしてこのようなペプチドの利用 | |
| WO2001098526A2 (en) | Receptor fingerprinting, sensory perception, and biosensors of chemical sensants | |
| US6589787B2 (en) | T-type calcium channel variants; compositions thereof; and uses | |
| US6365337B1 (en) | Genes encoding neuronal voltage-gated calcium channel gamma subunits | |
| US6576444B2 (en) | IRAK3 polynucleotides | |
| US7119189B2 (en) | Metabotropic GABA [B] receptors, receptor-specific ligands and their uses | |
| MXPA97001267A (en) | Glutam receiver | |
| EP1673436A2 (en) | Nucleic acid molecules encoding novel human low-voltage activated calcium channel proteins, designated - alpha 1i-1 and alpha 1i-2, encoded proteins and methods of use thereof | |
| ES2372808T3 (es) | Subtipos del receptor metabotrópico de glutamato humano (hmr6) y compuestos de adn relacionados. | |
| WO2004044162A2 (en) | HUMAN ACID-SENSING ION CHANNEL 2b (hASIC2b) | |
| Sutherland | Molecular and Ontogenic Analysis of the Mammalian GABA A Receptor | |
| JPH10117791A (ja) | ヒトｇタンパク質結合受容体ｈｌｙａｚ６１ | |
| JP2000210088A (ja) | 蛋白質ｍａｇｕｉｎ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFD9 | Temporary prot. cancelled due to non-payment of fee |