HUT52168A - Process for preparing monoclonal antibody capable of recognizing specifically n-glycolyl-type gm under 2 and antibody-producing hybridome - Google Patents
Process for preparing monoclonal antibody capable of recognizing specifically n-glycolyl-type gm under 2 and antibody-producing hybridome Download PDFInfo
- Publication number
- HUT52168A HUT52168A HU895917A HU591789A HUT52168A HU T52168 A HUT52168 A HU T52168A HU 895917 A HU895917 A HU 895917A HU 591789 A HU591789 A HU 591789A HU T52168 A HUT52168 A HU T52168A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- cells
- glycolyl
- cell line
- type
- mouse
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Elsőbbsége: 1988. 1 1 . 26. (289689,'1988) Japán
A találmány tárgya egy olyan monoklonális antitest, amely az N-glikolil tipusu GM2~re specifikus és egy hibridóma-sejtvonal, amely az N-glikolil tipusu GM2~re specifikus monoklonális antitestet termeli. A hibridoma-sejtvonal újszülött korban csecsemőmirigy-irtott és szintetikus N-glikolil tipusu GM^-mal immunizált állatok sejtjeinek mieloma-sejtekkel történő fuzionáltatásával hozható létre. Ά- mono— klonál-is antitest alkalmas a rákkal· kapcsolatos glikolipidek k imxrtatésára-^U-SAésimmun-festése s vékony réteg-kroma tográf iás módszerekben-alkalmazva, igy a hibridoma-sejtvonal által termelt monoklonális antitest a-g ember-L-vagy-állat-iszövelek-ben—jelen lévő H-D~anti~gén~~kimutatására használható-.-Has znál haté—továbbá-af f initás-krema togr áfiás-el jár Ásókban—ahoz zá kötődni képes-antigének tisztitására-is^-Ezenkivül - ha a monoklónál is antite stet radioaktív-izotóppal jelöljük —alkalmazható—tumorok kimutatására, vagy tűmet ok elhelyezkedésének pontos megállapítására^ nagy a<3agba~rr~pedig-daganatosbetegségek kejzeíásóre-. A monoklonális antitest bármilyen hatóanyaghoz is kapcsolható, hog-v^fOko~2Fza--a zokiiak. a daganat se j tekre^Jkl·fe^teertt hatasátT~A~íR©nekXöftá±l^_ájítTtest~~alkatmas mindazon barjOkban -kezeléere vagydiagnoszti zál á sra , amelyekben a spe c ifák-crs—arrbigén-neg tál álhat ó,—igy- emberben és álla tokban pl·. az egérben.
KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNY
S.SG & K.
Budapesti N'emzatközi Ügyvédi és tSiSb.sílyjani hxxia
IC* xspes.í, Caiaráház u 10. ϊ\.Λώη. 153-3233, 131-4800
Sy//f3 s425/x
50.583/BE /v'É<4- *
Eljárás N-glikolil-tipusu GM2~t specifikusan felismerni képes monoklonális antitest és az antitestet termelő hibridóma előállítására
MECT Corporation, Tokió, Japán
Feltalálók: HINO Akihiro, Tokorozawa, Saitama,
KANNAGI Reiji, Kyoto,
SUDA Isao, Kaitama,
NUMATA Masaaki, Saitama,
SHIBAYAMA Shohei, Saitama,
SUGIMOTO Mamoru, Tokió,
TOMITA Kenkichi, Tokió,
OGAWA Tomoya, Tokió, Japán
A bejelentés napja: 1989. 11. 25.
Elsőbbsége: 1988. 11. 26. (289689/1988) Japán
A találmány tárgya egy olyan monoklonális antitest, amely specifikusan felismeri az N-glikolil tipusu GL^-t, egy uj hibridoma-sejtvonal, amely ilyen antitestet termel, és egy eljárás az ilyan hibridoma-sejtvonal létrehozására.
Az emlősök sejtjeinek glikolipidjei a szfingoglikolipidek csoportjába tartoznak és egy ceramid részből (ami a szfingozinból - egy hosszú láncú amino-alkoholból - és a hozzá savamid kötéssel kapcsolódó zsírsavból áll) és egy • · · szénhidrát részből áll. Az utóbbi glükózból, galaktózból, N-acetil-glükózaminból, N-acetil-galaktózaminból és sziálsavból épülhet fel, és glikozid kötésen keresztül kapcsolódik a ceramidhoz.
A szfingóiipidek a sejtmembrán külső rétegében helyezkednek el, és a legújabb vizsgálatok szerint fontos szerepet töltenek be az un. határfelületi funkciókban, mint pl. receptor funkciók és más sejtek felismerése, de részt vesznek a sejtek külső hatásokra adott válaszainak kiváltásában, igy a differenciálódásban, a szaporodás kontroljában (rosszindulatú elfajulás) és számos más funkcióban is.
A glikolipidek közül az N-glikolil tipusu GM2 a H-H antigének egyikeként ismeretes és számos betegség, igy pl. a reumás izületgyulladás és rák esetén a betegek szérumában megtalálható.
A monoklonális antitestek szigorúan specifikusak egy-egy antigénre, igy lehetővé teszik az antigén igen érzékeny kimutatását. Ha van egy olyan monoklonális antitest, amely az N-glikolil tipusu Gh^-re specifikus, úgy elvárható, hogy ez an antitest a fent említett betegségek szerodiagnosztizálására vagy a betegek immunológiai kezelésére alkalmas lesz. A fentiek miatt fontosnak látszott egy, az N-glikolil tipusu GM2~re specifikus monoklonális antitest előállításának kidolgozása .
A találmány tárgya tehát egy olyan monoklonális antitest, amely specifikus az N-glikolil tipusu GM2~re.
A találmány tárgya továbbá egy olyan hibridoma-sejtvonal, amely az N-glikolil tipusu GM2~re specifikus monoklonális antitestet termeli.
A találmány tárgya végül egy eljárás az N-glikolil tipusu GM2~re specifikus monoklonális antitestet termelő hibridoma-sejtvonal létrehozására.
A fent leirt tárgykörben végzett kutatásaink során azt találtuk, hogy a kívánt tulajdonságú monoklonális antitest előállításához egy szintetikus glikolipidet, az N-glikolil tipusu GM^-t célszerű antigénként alkalmazni.
Ennek megfelelően a találmány szerint előállítottunk egy olyan monoklonális antitestet, amely specifikus az N-glikolil tipusu GM2~re. Létrehoztunk továbbá egy hibridoma-sejtvonalat, amely az N-glikolil tipusu GM2~re specifikus antitestet termeli. Végül kidolgoztunk egy eljárást, amellyel az N-glikolil tipusu GM2~re specifikus monoklonális antitestet termelő hibridoma-sejtvonal létrehozható, és amelynek lényege, hogy újszülött korban csecsemőmirigy-irtott és szintetikus N-glikolil tipusu GM2~vel immunizált állatok B-sejtjeit (A) mieloma-sejtekkel (B) fuzionáltatjuk.
Az ábrák rövid magyarázata:
1. ábra. A találmány szerinti monoklonális antitest specifi- citása különböző glikolipidekkel szemben enzim-kapcsolt antitest módszerrel vizsgálva.
2. ábra és 3. ábra. A találmány szerinti monoklonális anti- test spéciiicitása vékonyréteg-kromatogramon immunfestéssel vizsgálva.
A monoklonális antitestet, a hibridoma-sejtvonalat és létrehozásának eljárását az alábbiakban részletesen is bemutatjuk.
A találmány szerinti antitestet termelő hibridoma-sejtvonal Koehler és Milstein módszerével hozható létre egy antigénnel immunizált állat B-sejtjeinek (B-limfocitájának) és egy mieloma-sejtnek a fúziójával. A találmányban az antigén egy szintetikus glikolipid, az N-glikolil tipusu GM^ , amelynek szerkezete a következő:
Gál - ^1-4 - Glc - βΐ-1 - Cer
I
NeuGcx
Az említett antigénnel bármilyen állat, különösen nyúl, ember, egér vagy patkány immunizálható, de előnyös az egér és különösen előnyös a Balb/c egértörzs használata. Igen előnyösen használhatók azok a Balb/c egerek, amelyeknek csecsemőmirigyét újszülött korban eltávolították (NTX-egerek). Az NTX-egerek csecsemőmirigyét sebészi utón távolitják el pár nappal születésük után. Az immunizált NTX-egerek B-sejtjei (előnyösen lépsejtjei) antitestet termelnek. A mieloma-sejtek is nyerhetők nyulból, emberből, egérből vagy patkányból, de előnyös az egérből, még előnyösebb a Balb/c egértörzsből származó sejtvonal (Sp 2/0) használata. Ezek a mieloma-sejtek a B-sejtekkel, különösen a lépsejtekkel fuzionáltathatók.
Ismeretes, hogy az antitestek olyan fehérjék, amelyek az • · ·
- 5 általuk antigénnek felismert molekulákkal kapcsolódni képesek, a monoklonális antitestek pedig olyan antitestek, amelyeket egy egyetlen sejtből származó sejtvonal klón termel. Ebből következik, hogy a monoklonális antitestek csak egyetlen antigén felismerésére képesek.
A találmány szerinti monoklonális antitest specifikus az N-glikolil tipusu GM2~re, amely a H-D antigének egyike. Az N-glikolil tipusu GM2 egy sziálsavat tartalmazó szfingoglikolipid, amelynek szerkezete a következő:
GalNAc - /j1-4 - Gál - ^1-4 Glc - β1-1 - Cer
I
NeuGc o< 2
Ismeretes egy sor, sziálavat tartalmazó glikolipid, amelyek szerkezete igen hasonló az N-glikolil tipusu GM--höz (GM-, GM-, N-Gc GM.,, GD'/'V'és GM.) , de a találmány szerinti δ 3 j 1 a. ι monoklonális antitest ezek egyikét sem képes felismerni.
Az Ouchterloni-féle immundiffúziós technikával vizsgálva a találmány szerinti monoklonális antitest egy M osztályú immunoglobulin (IgM).
A találmány szerinti hibridoma-sejtvonal a következő módon hozható létre.
Az immunizálás érdekében a szintetikus glikolipidet (az N-glikolil GM^-t) egy állatba, előnyösen egérbe injekciózzuk. Az injiciálás történhet intraperitoneálisan, szubkután vagy intravénásán; előnyös az intraperitoneális adagolás. Az immunizálás elősegítésére komplett vagy inkomplett Freund-
-adjuvánst adhatunk, amely elölt tuberkulózis- vagy Salmonella-baktóriumokat vagy a kettő keverékét, előnyösen Salmonella minesota baktériumokat tartalmaz olajban, emulgeálószerrel eloszlatva.
Az antigén és az adjuváns előnyösen egy olyan oldat alakjában használható, amelynek oldószere valamilyen élettanilag elfogadható sóoldat, például foszfáttal pufferolt sóoldat.
A fent leirt módon immunizált egerek B-sejtjeit izolálás után a mieloma-sejtekkel fuzionáltatjuk. A fúzió elősegítésére különböző vegyületek, pl. polietilén-glikol vagy a HVJ használhatók; előnyös a polietilén-glikol alkalmazása.
A létrejött hibridoma-sejtek elkülönítésére előnyös a HAT-tápfolyadék használata, amelyben a nem fuzionált mieloma-sejtek nem szaporodnak tovább. A létrejött hibridoma-sejtek elkülönítésére a metilcellulózos, a lágy agarózos vagy a korlátolt higitási technikát alkalmaztuk.
A hibridoma-sejtvonalak antitest-termelő képességét bármely szokványos módon mérhetjük a legalkalmasabb sejtvonal kiválasztása érdekében. Az igy kiválasztott sejtvonalat megőrizzük.
A találmány szerinti monoklonális antitest a rákkal kapcsolatos glikolipidek kimutatására használható, pl. ELISA-ban vagy vékonyréteg-kromatogrammon immunfestéssel, igy alkalmas egy H-D antigén kimutatására emberi vagy állati szöve tekből .
• ·
A találmány szerinti monoklonális antitest használható továbbá affinitás-kromatográfiás eljárásokban a hozzá kötődni képes antigének tisztítására. Ha radioaktív izotóppal jelöljük az antitestet, úgy felhasználható tumorok kimutatására vagy azok elhelyezkedésének pontos meghatározására, mig nagy adagban alkalmazva a daganatos megbetegedések kezelésére is használható. Az antitest bármilyen hatóanyaghoz is kapcsolható, hogy fokozza a hatóanyagok rákos sejtekre kifejtett hatását.
A találmány tárgyát a következő p_-éldán mutatjuk be megjegyezve, hogy a találmány tárgya nem korlátozódik a példára.
Példa
A) A minták előállítása
1) Az N-glikolil tipusu GM-, előállítása
A vegyület előállítása a CArbohydrate Research 174, 73-85 (1988) leírás alapján történt.
2) Az antigén-oldat előállítása
210 /ig fenti módon előállított szinteteikus glikolipidet és 820 ecetsavval elöl Salmonella minesota R 595 baktériumot 5 ml 50°C-os desztillált vízzel összekevertünk. A keveréket liofilizáltuk és fagyasztva tároltuk. Felhasználás előtt az antigént foszfáttal pufferőit sóoldatban (a továbbiakban PBS) oldottuk fel.
3) Kísérleti állatok
Kísérleti állatként Balb/c egértörzsből sebészi utón • · · · · • · r-r-v ♦ · · • ♦ · · előállított NTX-egereket használtunk, azaz olyan egyéves nőstény állatokat, amelyek csecsemőmirigyét 3 napos korban eltávolították.
4) Tápfolyadékok
GIT-tápfolyadék: a Wako Junyaku Co. gyártmánya.
HAT-tápfolyadék: 0,0388 g timidint és 0,1361 g hipoxantint oldottunk 100 ml desztillált vízben enyhe melegítés mellett. Ezt a százszoros kncentrációju (A) törzsoldatot -20°C-on tároltuk. Ugyanígy 0,0176 g aminopterint oldottunk 100 ml desztillált vízben kevés IN nátrium-hidroxid oldat hozzáadásával, majd az oldatot tízszeresre hgiitottuk GIT-tápfolyadékkal. Az igy kapott százszoros koncentrációjú (B) törzsoldatot fénytől védve, -20°C-on tároltuk. A HAT-tápfolyadékot a GIT-tápfolvadékból úgy állítottuk elő, hogy felhasználás előtt mind az (A), mind a (B) törzsoldatból 1/100 térfogatrészt adtunk hozzá. A HT-tápfolyadékot szintén a GIT-tápfofolyadékból készítettük 1/100 térfogatrész (A) törzsoldat hozzáadásával.
B) A hibridoma-sejtvonal létrehozása
1) Az immunizálás
Az NTX-egereket intraperitoneális injekciózás utján immunizáltuk a fent említett antigén oldattal az alábbi immunizálási menetrend szerint (a mennyiségek a szintetikus glikolipidre vonatkoznak) : 5 /ig kezdőadag, majd 10 /ig 4 nap, 15 pg 7 nap, 20 /ig 11 nap és 20 pg 21 nap múlva. A 24. napon az egereket elpusztitve lépüket kimetszettük, és sejtszuszpenziót készítettünk belőle.
2) A sejtfúzió
Az említett lépsejteket az Sp 2/0 mieloma-sejtekkel Koehler és Milstein módszerével fuzionáltattuk. Ebben az
7 esetben 10 lépsejtet kevertünk össze 10 mieloma-sejttel 50% polietilén-glikolt (PEG 6000) tartalmazó GIT-tápfolyadékban.
3) A hibridoma-sejtek kiválasztása és kitenyésztése
A fúzió után a fuzionált sejteket HAP-tápfolyadékban 5% CO2 jelenlétében, 37°C-on neveltük tovább. 14 nappal a fúzió után ELISA-vizsgálattal - antigénként a szintetikus glikolipidet és egérmájból előállított N-glikolil tipusu Gí^-t (NeuGc GM2) használva - egyetlen antitest-termelő sejtvonalat találtunk, amit a korlátolt higitásos módszerrel tovább klónozva nyertük a kívánt hibridoma-sejtvonalat. A sejtvonalat az Amerikai Tipustörzs Gyűjteményben (ATCC) HB 9816 szám alatt helyeztük letétbe.
C) A monoklonális antitest reaktivitása a glikolipiddel
1) ELISA
A glikolipidet foszfatidil-kolinnal és koleszterinnel együtt adszorbeáltattuk a vizsgáló lemezek (Flow Laboratories) lyukainak falához: 5 ^ig/ml foszfatidil-kolint, 2,5 /ig/ml koleszterin és o,5 /íg/ml glikolipidet tartalmazó etilalkoholos oldatból 50 ;ul-t adagoltunk a lyukakba és az oldószert elpárologtattuk. A lyukakba ezután 200 ul, 5% marha-szérum-albumint (BSA) tartalmazó PBS oldatot pipettáztunk, és a lemezeket 3 órán át állni hagytuk szobahőmérsékleten. Az oldat feleslegét a lemezekből kiráztuk és 0,5% BSA-tartalmu PBS-oldattal ismételten átmostuk a lyukakat. Ezután antitestként 50 /11 hibridoma-tápfolyadékot pipettáztunk a lyukakba és a lemezt egy órán át hagytuk állni szobahőmérsékleten, majd a felesleget kiráztuk, és a lemezt a fenti módon átmostuk. Ugyanígy jártunk el a reagens antitest oldatával is, aminek eltávolítása és a lemezek újbóli mosása után 50 /11 előhivó-oldatot mértünk a lyukakba. Az előhívás 10 percig folyt szobahőmérsékleten, majd a reakciót 50 /11 2 N kénsavval leállítottuk és a szinintenzitást 500 nm-nél fotométerrel mértük. Az előhívó oldat összetétele: 0,4 mg/ml o-feniléndiamin és 0,006% hidrogén-peroxid citrát-foszfát pufferben (pH=5,0) oldva. A reagens kecske anti-egér IgG és M volt torma-peroxidázzal kapcsolva. Az eredmény az 1. ábrán látható.
A kísérletben antigénként a NeuGc Gl·^, NeuGc GM^, NeuAc GM2 és NeuAc GM3 glikolipideket használtuk. A NeuGc Gl^-t Balb/c egerek májából állítottuk elő, a NeuGc GM^-t szintetizáltuk, a NeuAc Gl^ és NeuAc GM^ a Funakoshi Co. terméke volt. Az eredmény szintén az 1. ábrán látható.
Az ábrából jól kitűnik, hogy a kiválasztott hibridomasejtvonal tápfolyadéka erős reakciót ad a NeuGc Gk^-vel, de nem reagál NeuGc GM^-mal, a NeuAc Gt^-vel és a NeuAc GM^-mal, holott ezek szoros szerkezeti hasonlóságot mutatnak a NeuGc Gl^vel. A ksiérletet elvégeztük a következő glikolipidekkel - mint antigénekkel - is: NeuAc GM1, NeuAc GD1 és NeuAc GDlb (mindhárom a Funakoshi-tól), CDH, CTG és paraglobozid (mindhárom
Ο csoportú vörösvértest-membránból előállítva), azialo-GM^ (GM1~ből készítve) és azialo-GM2 (GM2-ből készítve). A hibridoma-tenyészet tápfolyadéka azonban egyikkel sem adott reakciót.
A fenti eredmények alapján megállapítható, hogy a kiválasztott hibridoma-sejtvonal által termelt antitest a NeuGc GM2~re specifikus.
2) Vékonyréteg-kromatográfia immunfestéssel
A Baker Co. HPRC tipusu lemezeire kloroform:metanol=
2:1 oldatban felcseppentettük a glikolipidet, majd a lemezt kloroform:metanol:0,5%-os kalcium-klorid oldat = 55:45:10 elegyben megfuttattuk és szárítás után 5%-os borjú szérumalbumin (továbbiakban BSA) oldatban áztattuk egy éjszakán át 4°C-on. 0,5% BSA-t tartalmazó PBS-oldatban való mosás után a lemezt a kiválasztott hibridoma-sejtvonal tápfolyadékában áztattuk egy órán át szobahőmérsékleten, újra mostuk, majd a reagens antitest (nyúl antiegér IgM) megfelelő oldatában áztattuk ugyanannyi ideig. Újabb mosás után I-dal jelölt protein A oldatba helyeztük a lemezt, majd egy óra múlva háromszor mostuk és autoradiográfiával kiértékeltük.
Az eredmények a 2. ábrán láthatók (2 a: orcinol-festés, b: immun-festés). A kísérletben használt glikolipidek a következők voltak:
1. sáv: a 0 csoportú vörösvértest-membránból származó savas glikolipid ····
| 2. | sáv: | NeuGc | gm2 | 1 Mg |
| 3. | sáv: | NeuGc | GM2 | 3 pg |
| 4. | sáv: | NeuGc | gm2 | io /«g |
| 5. | sáv: | NeuAc | GM2 | 2 /jg |
| 6. | sáv: | NeuAc | gm2 | io pg |
Az eredményből látható, hogy az antitest kizárólag a NeuGc GM2~vel reagál.
A 3. ábrán az e sávban a Balb/c egerek májából előállított savas glikolipid látható, aminek fő alkotórésze a NeuGc GM2. A marha vörösvértest-membránból származó savas glikolipid f sáv pedig valószínűleg N-glikolil tipusu sziálsavat tartalmaz. Jól látható, hogy az antitest csak a NeuGc vel c sáv és az egérmáj savas glikolipidjével e sáv reagált.
A 3. ábrán látható vegyületek ugyanazon sávban felülről
| lefelé: | |||
| a. | sáv: | azialo-GM2, azialo-GM^, NeuAc GM^ | |
| b. | sáv: | NeuAc | GM3, NeuAc GM2 |
| c. | sáv: | NeuGc | GM3, NeuGc GM2 |
| d. | sáv: | CDH ( | felső két esik), CTH, paraglobozid, |
| GD, , | GD., | ||
| la | lb | ||
| e. | sáv: | a Balb/c egér májából előálitott savas glikolipid | |
| f. | sáv: | marha | vörösvértest-membránból származó savas |
| glikolipid |
A fentiek alapján biztonsággal megállapítható, hogy a kiválasztott hibridoma-sejtvonal tápfolyadéka specifikusan reagál a NeuGc GM2~vel.
• · · · • · ···· ·· ·
Megállapítható továbbá, hogy a találmány szerinti hibridoma-sejtvonal az N-glikolil tipusu GM£-re specifikus monoklonális antitestet termel.
Szabadalmi igénypontok
Claims (19)
1. Egy monoklonális antitest, amely az N-glikolil tipusu GN^-re specifikus.
2. Az 1. igénypont szerinti monoklonális antitest, azzal jellemezve, hogy immundiffúzióval (Ouchterlony-eljárás) vizsgálva az IgM immunfehérje-osztályba tartozik.
3. Egy hibridoma-sejtvonal, amely az N-glikolil tipusu GlY^-re specifikus antitestet termel.
4. A 3. igénypont szerinti hibridoma-sejtvonal, azzal jellemezve, hogy Balb/c egerek lépének B-sejtjeiből és Balb/c egerekből származó Sp 2/0 jelzésű mieloma-sejtekből fúzióval lett létrehozva.
5. A 3. igénypont szerinti hibridoma-sejtvonal, azzal jellemezve, hogy az ATCC-nál HB 9816 szám alatt letétbe van helyezve.
6. Eljárás az N-glikolil tipusu GM2~re specifikus monoklonális antitestet termelő hibridoma-sejtvonal létrehozására, azzal jellemezve, hogy egy újszülött korban csecsemőmirigy-irtott és szintetikus N-glikolil tipusu GM^-mal immunizált állat B-sejtjeit mieloma-sejtekkel fuzionáltatjuk.
7. A 6. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az állat újszülött korban csecsemőmirigy-irtott Balb/c egér.
8. A 7. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az állat az NTX egér, amelynek csecsemőmirigyét újszülött korban távolították el.
9. A 8. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a B-sejtek az újszülött korban csecsemőmirigy-irtott NTX egér lápéból származnak.
10. A 6. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a mieloma-sejtek a Balb/c egértörzsből származnak.
11. A 10. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a mieloma-sejtek a Balb/c egértörzsből származó Sp 2/0 sejtvonal sejtjei.
12. A 6. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a B-sejtek az újszülött korban csecsemőmirigy-irtott NTX egerek lépsejtjei és a mieloma-sejtek a Balb/c egértörzsből származó Sp 2/0 sejtvonal sejtjei.
13. A 12. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az NTX egereket a szintetikus N-glikolil tipusu GM^ intraperitoneális injekciózásával immunizáljuk.
14. A 13. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a szintetikus N-glikolil tipusu GM3~t adjuvánssal együtt adagoljuk.
15. A 14. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az adjuváns foszfát-pufferrel kiegészített fiziológiás sóoldatban oldott, elölt Salmonella minesota baktérium.
16. A 12. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a sejtfúziót polietilén-glikollal segítjük elő.
17. A 12. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a fúzió után a sejteket HAT-tápfolyadékban neveljük tovább, ami elősegíti a létrejött hibridoma-sejtek szaporodását, de gátolja a nem fuzionált mieloma-sejtekét.
18. A 17. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a hibridoma-sejteket metilcellulózos, lágy agarózos vagy korlátolt higitási módszerrel klónozzuk tovább.
19. A 12. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a fúzió után a sejteket HAT-tápfolyadékban neveljük tovább a hibridoma-sejtek kiválasztása érdekében, majd a hibridoma-sejteket metilcellulózos, lágy agarózos vagy korlátolt higitási módszerrel klónozzuk tovább.
A meghatalmazott «·'· ·« ··«·
KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNY
52168-
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63289689A JPH02135098A (ja) | 1988-11-16 | 1988-11-16 | Ｎ−グリコリル型ｇｍ↓２を認識するモノクローナル抗体及びそれを産生するハイブリドーマ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU895917D0 HU895917D0 (en) | 1990-02-28 |
| HUT52168A true HUT52168A (en) | 1990-06-28 |
Family
ID=17746472
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU895917A HUT52168A (en) | 1988-11-16 | 1989-11-15 | Process for preparing monoclonal antibody capable of recognizing specifically n-glycolyl-type gm under 2 and antibody-producing hybridome |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0369425A1 (hu) |
| JP (1) | JPH02135098A (hu) |
| AU (1) | AU627518B2 (hu) |
| CA (1) | CA2003110A1 (hu) |
| HU (1) | HUT52168A (hu) |
| IL (1) | IL92312A0 (hu) |
| NO (1) | NO894555L (hu) |
| NZ (1) | NZ231399A (hu) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3150991B2 (ja) * | 1991-04-10 | 2001-03-26 | 協和醗酵工業株式会社 | ハイブリドーマの製造法 |
| US6693176B1 (en) | 1999-07-23 | 2004-02-17 | University Of Massachusetts | Antitumor antibodies, proteins, and uses thereof |
| WO2003049704A2 (en) | 2001-12-11 | 2003-06-19 | University Of Massachusetts | Antibodies to treat cancer |
| US20040115204A1 (en) | 2002-12-11 | 2004-06-17 | Fanger Gary R. | Antibodies to treat cancer |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63270699A (ja) * | 1987-04-28 | 1988-11-08 | Konica Corp | モノクロ−ナル抗体 |
-
1988
- 1988-11-16 JP JP63289689A patent/JPH02135098A/ja active Pending
-
1989
- 1989-11-14 AU AU44654/89A patent/AU627518B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-11-15 IL IL92312A patent/IL92312A0/xx unknown
- 1989-11-15 HU HU895917A patent/HUT52168A/hu unknown
- 1989-11-15 NZ NZ231399A patent/NZ231399A/en unknown
- 1989-11-15 EP EP89121138A patent/EP0369425A1/en not_active Withdrawn
- 1989-11-15 NO NO89894555A patent/NO894555L/no unknown
- 1989-11-16 CA CA002003110A patent/CA2003110A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0369425A1 (en) | 1990-05-23 |
| JPH02135098A (ja) | 1990-05-23 |
| CA2003110A1 (en) | 1990-05-16 |
| HU895917D0 (en) | 1990-02-28 |
| IL92312A0 (en) | 1990-07-26 |
| NO894555D0 (no) | 1989-11-15 |
| NO894555L (no) | 1990-05-18 |
| NZ231399A (en) | 1992-02-25 |
| AU4465489A (en) | 1990-05-24 |
| AU627518B2 (en) | 1992-08-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nemazee | Immune complexes can trigger specific, T cell-dependent, autoanti-IgG antibody production in mice. | |
| US4965198A (en) | Monoclonal antibody and method of manufacturing hybridoma producing the same | |
| US5240833A (en) | Method for the production of monoclonal antibodies directed to tumor-associated gangliosides and fucogangliosides | |
| US5894018A (en) | Vaccine composition comprising autologous epidermal growth factor or a fragment or a derivative thereof having anti-tumor activity and use thereof in the therapy of malignant diseases | |
| EP0678744B1 (en) | Method for detecting urinary tumor associated antigens | |
| JPH02500004A (ja) | 非還元・非酵素的糖鎖形成蛋白に対するモノクローナル抗体 | |
| EP0381310A1 (en) | Monoclonal antibodies directed to tumor-associated gangliosides and fucogangliosides and method for production thereof | |
| JP3066741B2 (ja) | 癌細胞の増殖及び複製を抑制するための組成物 | |
| EP0657175B1 (en) | Vaccine comprising human autologous epidermal growth factor and use thereof | |
| US5331093A (en) | Anti-focosylceramide monoclonal antibody | |
| Umeda et al. | The occurrence of anti-3-fucosyllactosamine antibodies and their cross-reactive idiotopes in preimmune and immune mouse sera. | |
| HUT52168A (en) | Process for preparing monoclonal antibody capable of recognizing specifically n-glycolyl-type gm under 2 and antibody-producing hybridome | |
| KR960014441B1 (ko) | 알파 2-3 결합을 인지하는 단일클론성 항체 | |
| US5854007A (en) | Process for producing GM1 specific antibodies | |
| JP2006115716A (ja) | 抗ｃ反応性タンパク質モノクローナル抗体産生細胞ライン、その作製方法、およびそれにより産生されたモノクローナル抗体 | |
| Todome et al. | Detection of antibodies against streptococcal peptidoglycan and the peptide subunit (synthetic tetra-D-alanyl-bovine serum albumin complex) in rheumatic-diseases | |
| EP0211368B1 (en) | Monoclonal anti-asialo GM1 antibody | |
| JP2614822B2 (ja) | 抗体産生ハイブリドーマの作製方法 | |
| JPH03206894A (ja) | 新規抗イディオタイプモノクローナル抗体 | |
| Kiessig et al. | A solid‐phase enzyme immunoassay for the detection of tetanus toxin using human and murine monoclonal antibodies | |
| JP2004532261A (ja) | ポリクローナル免疫グロブリンの使用 | |
| JPH01211499A (ja) | 非天然型ｇｄ↓３を認識するモノクローナル抗体 | |
| CZ131497A3 (en) | Method of immunological detection of natural antibodies | |
| KIESSIC | er zyxwvutsrqponmlkji | |
| Chersi et al. | Partial Characterization of anti-H LA Class II Antibodies Isolated by Aid of Sepharose-Peptide Immunoadsorbents |