HU217082B - Humán neurotrofin-3 alkalmazása anyagcserével kapcsolatos csontbetegségek kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására - Google Patents
Humán neurotrofin-3 alkalmazása anyagcserével kapcsolatos csontbetegségek kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására Download PDFInfo
- Publication number
- HU217082B HU217082B HU9502202A HU9502202A HU217082B HU 217082 B HU217082 B HU 217082B HU 9502202 A HU9502202 A HU 9502202A HU 9502202 A HU9502202 A HU 9502202A HU 217082 B HU217082 B HU 217082B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- cells
- mc3t3
- bone
- osteopathiae
- proliferation
- Prior art date
Links
- 101000634196 Homo sapiens Neurotrophin-3 Proteins 0.000 title claims description 4
- 102000057714 human NTF3 Human genes 0.000 title claims description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 title abstract 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 14
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 claims 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 102100034396 Trypsin-3 Human genes 0.000 abstract 1
- 101710119642 Trypsin-3 Proteins 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 40
- 102000004230 Neurotrophin 3 Human genes 0.000 description 25
- 108090000742 Neurotrophin 3 Proteins 0.000 description 25
- 229940032018 neurotrophin 3 Drugs 0.000 description 24
- 102000047459 trkC Receptor Human genes 0.000 description 12
- 108010064892 trkC Receptor Proteins 0.000 description 12
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 9
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 8
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 8
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 7
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 7
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 6
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 4
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 3
- 101100222854 Bacillus subtilis (strain 168) czcO gene Proteins 0.000 description 3
- 101100537961 Methanosarcina mazei (strain ATCC BAA-159 / DSM 3647 / Goe1 / Go1 / JCM 11833 / OCM 88) trkA2 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 3
- 230000004097 bone metabolism Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 101150025395 trkA gene Proteins 0.000 description 3
- 101150113435 trkA1 gene Proteins 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 2
- 101100127166 Escherichia coli (strain K12) kefB gene Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000010478 bone regeneration Effects 0.000 description 2
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 2
- 230000009460 calcium influx Effects 0.000 description 2
- 238000002737 cell proliferation kit Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005701 Calcium-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010045403 Calcium-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000015225 Connective Tissue Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010039419 Connective Tissue Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 101000979001 Homo sapiens Methionine aminopeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000969087 Homo sapiens Microtubule-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000996663 Homo sapiens Neurotrophin-4 Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010020004 Microtubule-Associated Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009664 Microtubule-Associated Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100021118 Microtubule-associated protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000906034 Orthops Species 0.000 description 1
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 1
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 1
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 229950004398 broxuridine Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003185 calcium uptake Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000005465 channeling Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000003271 compound fluorescence assay Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 201000010934 exostosis Diseases 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000003269 fluorescent indicator Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 201000010930 hyperostosis Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- DZNKOAWEHDKBEP-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[6-[bis(2-methoxy-2-oxoethyl)amino]-5-[2-[2-[bis(2-methoxy-2-oxoethyl)amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-1-benzofuran-2-yl]-1,3-oxazole-5-carboxylate Chemical compound COC(=O)CN(CC(=O)OC)C1=CC=C(C)C=C1OCCOC(C(=C1)N(CC(=O)OC)CC(=O)OC)=CC2=C1OC(C=1OC(=CN=1)C(=O)OC)=C2 DZNKOAWEHDKBEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000001582 osteoblastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 208000005368 osteomalacia Diseases 0.000 description 1
- 208000002865 osteopetrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/185—Nerve growth factor [NGF]; Brain derived neurotrophic factor [BDNF]; Ciliary neurotrophic factor [CNTF]; Glial derived neurotrophic factor [GDNF]; Neurotrophins, e.g. NT-3
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Psychology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
A találmány tárgya hűmán neűrőtrőfin–3 alkalmazása anyagcsere eredetűcsőntbetegségek, tővábbá csőnttörések kezelésére és megelőzésérealkalmas gyógyszerkészítmények előállítására. ŕ
Description
A találmány tárgya humán neurotrofin-3 alkalmazása anyagcsere eredetű csontbetegségek, továbbá csonttörések kezelésére és megelőzésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására.
A csontokban a régi csontoknak újakkal való helyettesítésénél korlátozott mértékben csontképződés és csontfelszívódás megy vége, aminek következtében a csontváz tartószerkezet jellege biztosítva van. A csontok ezenkívül képesek arra is, hogy különféle mechanikai megterhelésekre és az ásványi anyagok egyensúlyában bekövetkező változásokra gyorsan reagáljanak. A csontok megújulási folyamata főleg a csontreszorbciós típusú sejtek kapcsolódásán alapul, ezek közül említjük meg az osteoclast típusú sejteket és az elcsontosodásban részt vevő sejteket, mint az osteoblastokat. Újabban szerzett ismereteink alapján úgy tűnik, hogy az osteoblastok nemcsak az elcsontosodásban játszanak szerepet, hanem ellenőrzik a csont megújulási jelenségénél végbemenő sejtláncreakciót, ami szoros kapcsolatban áll a differenciálódással és az osteoblast sejtek (csontlebontó sejtek) aktiválásával [Inoue, T., Mebio, Special Version 2-7. oldal (1990)].
Az anyagcsere eredetű csontbetegségek közül megemlítjük az osteoporosist, a Paget-féle megbetegedést, az osteomalaciát, hyperostosist, osteopetrosist és így tovább. Elsősorban az osteoporosis megbetegedés esetei gyakoriak, a menopauza utáni korban lévők nők és az idős korúaknak több mint a fele szenved e betegségben, így a betegség diagnózisa és tényleges kezelése igen kívánatos.
Az anyagcsere eredetű csontbetegségek olyan anyagcsere-rendellenességek kíséretében mennek végbe, amelyek jellemzők a csontban lévő sejtekre és csontszövetekre. Ezen anyagcsere-rendellenességek esetében annak megállapítása, hogyan lehet elkülöníteni és azonosítani azt a faktort, amely specifikusan a csont anyagcseréjével áll kapcsolatban, jelentős előrehaladást biztosítana. A feltalálók részletes vizsgálatokat végeztek annak megállapítására, hogy a csont anyagcseréjét milyen speciális faktorok befolyásolják.
A találmány szerinti megoldás kidolgozása során a feltalálók egy osteoblast sejtvonallal kísérleteztek, amely a meszesedésnél játszik szerepet, majd azonosították e sejtvonal által termelt fehéijét.
A feltalálók által bemutatott NT-3 (neurotrofin-3) jelzésű anyag egy fehérje, amelyet Hohn A. és munkatársai, valamint Maisonpierre P. C. és munkatársai fedeztek fel, ezen fehérje képes arra, hogy az idegnövekedést elősegítse. Az NT-3 jelzésű fehérje 119 aminosavalcsoport-dimeregységből áll, ahol az N-terminálison Tyr és a C-terminálison Thr szerepel. A NT-3 beszerezhető a Pepro Tech Inc. (Amerikai Egyesült Államok, Rocky Hill, NH 08533, katalógusszám 450-03) cégnél. A fentiekben hivatkozott irodalmi helyen az NT-3-t kódoló gént ismertetik; az NT-3 előállítható az irodalomban leírt módszerek segítségével. Az idegnövekedést elősegítő faktorok közül ezideig 4 vált ismeretessé, ezek közül az egyik az NT-3. Az NT-3 mellett ismert az idegsejt-növekedést serkentő faktor (NGF), az agyból származó neurotrofin faktor (BDNF) és a humán neurotrofin-4. A BDNF funkciója az, hogy az AChE pozitív neuronok számát növelje hippocampus-tartalmú táprendszerben, az NT-3 funkciója, hogy a kalciumot megkötő fehérje pozitív neuronok számát növelje (Calbinin) [Ip. N. Y. és munkatársai: J. Neurosci 13. kötet 3394-3405. oldal, (1993)]. Ezenkívül ismeretes, hogy az NT-3 jelenléte növeli az idegtaréjban lévő prekurzor sejtek proliferációját (szaporodását) [Kalcheim, C. és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci., Amerikai Egyesült Államok, 89. kötet, 1671-1665 (1992)].
Másrészt ismeretes, hogy az NGF család receptorai a trk családhoz tartoznak; trkA, trkB, trkC az irodalomból ismertek [Snider, W. D.: Cell, 77. kötet, 627-638, (1994)]. Az NGF-ről, BDNF-rőI és NT-3-ról ismeretes, hogy jól kötődnek a trkA-hoz, trkB-hez és trkC-hez. A trk egy proto-onkogén, amely a vastagbél rákos megbetegedésénél képződik és tirozin kináz típusú receptorszekezettel rendelkezik, beleértve a C-terminális oldal felének tirozin kináz területét. Ezen tirozin kináz terület aminosavszekvenciája nagy homológiát mutat egyéb tirozin kináz típusú receptorokéval. A tirozin kináz hatására, így például a trkA, amely az NGF receptora, tirozin foszforilezésnek kitett NGF-re reagál és tirozin kináz hatást mutat. Ezen tirozin kináz révén az MAP2-t [mikrotubulussal kapcsolatos fehéije 2, Boulton, T. G. és munkatársai: Cell., 65. kötet, 663-675 (1991)] és a foszfolipáz C-t tirozin foszforilezésnek vetjük alá, ennek nyomán kalciumion beáramlása következik be. Ezen jelátvitel segítségével proliferációjelek továbbítására kerül sor [Ikeuchi T. és munkatársai: Experimental Medicine, 10. kötet 126-131. oldal (1992)]. A tirozin kináz típusú receptor, mint például a trkC és a ligandumok révén tirozin kináz aktiválódik és jelátvitel iniciálódik. A ligandumok és receptorok kötése révén aktivált Ca2+csatomát „receptort működtető Ca2+-csatornának” is nevezzük. Ezen folyamatot különféle sejtekben, mint például limfocitákban és simaizomsejtekben ellenőrizték [Kuno, M. Experimental Medicine, 7. kötet, 73-78. oldal, (1989)].
Azt tapasztalták, hogy az egerek osteoblastszerű sejtvonalában az MC3T3-E1 az ΝΤ-3-ban lévő mRNS-t expresszálja és a mRNS mennyisége növelhető oly módon, hogyha a MC3T3-E1 sejteket TGF-P-val kezelik. [Nakanishi és munkatársai: Biochem. Biophys. Rés. Commun. 198. kötet, 891-897. oldal (1994)]. Az MC3T3-E1 olyan sejtvonal, amelyet Kodama H. és munkatársai definiáltak és amely a meszesedést segíti elő; ezen anyagot az újszülött egerek koponya-tetőrészéről különítjük el [Jpn. J. OralBiol. 23. kötet, 899-901. oldal (1981), megjelent a General Catalogban, RIKEN GENE BANK, 1. szám, 1995. április]. Azonban nem jelentek meg olyan közlemények, amelyekben arról írtak volna, hogy az NT-3 mint osteoblastproliferációt elősegítő faktor működne.
A fibroblast proliferációs hatású kötőszövet növekedési faktorral (FGF) kapcsolatban ismertették, hogy stimulálja az MC3T3-E1 sejtek szaporodását [Tremollieres, F. Ann Endocrinol, 55, 95-102 (1994)]. Továbbá az FGF patkányok törött hosszú csontjánál helyi2
HU 217 082 Β lég több injekcióban vagy fibrinhordozóban beadva megnöveli a csontforradás méretét és mechanikai szilárdságát [Jingushi, S. és munkatársai: J. Orthop Rés., 8, 364-371 (1990) és Kawaguchi, H. és munkatársai: Endocrinology, 135, 774-781 (1994)]. A prosztaglandin E2-ról (PGE2) ismert, hogy hatására mind az ép, mind az eltávolított petefészkű ostopeniás patkányok csontjai megnőnek [Ke HZ és munkatársai: Boné, 23, 249-55 (1998)]. Ezenkívül a PGE2 stimulálja a 45Ca2+ áramlását az MC3T3-E1 sejtekben [Tokuda, H. és munkatársai: Cell Signal, 4, 261-6 (1992)].
A találmány tárgyát olyan készítmények képezik, amelyek alkalmasak az anyagcsere eredetű csontbetegségek és/vagy csonttörések kezelésére, a találmány szerinti készítmények gyógyászatilag megfelelő segéd- és vivőanyagot, valamint humán neurotrofin-3-t (NT-3) tartalmaznak.
A trkC elektroforetikus görbéjét az 1. ábra mutatja be.
A találmány kidolgozása során észleltük, hogy az MC3T3-E1 sejtek trkC-t expresszálnak polimeráz láncreakcióban (PCR) [Erich H. A. Stochton Press Co. (1989)]. Ezen ismereteket figyelembe véve, valamint az, hogy a trkC a NT-3 receptora, a feltalálók arra a következtésre jutottak, hogy MC3T3-E1 sejtek ΝΤ-3-at választanak ki és magát az ΝΤ-3-t proliferációra késztetik. Ezenkívül a feltalálók észlelték, hogy az MC3T3-E1 sejtek proliferációja fokozódik, valamint a kalciumionoknak a sejtbe való beépülése növekszik, amennyiben ΝΤ-3-t adunk MC3T3-E1 tartalmú sejttenyészetekhez, és arra a következtésre jutottak, hogy az NT-3 osteoblast proliferatív faktorként viselkedik.
Az MC3T3-E1 sejtek proliferációs válaszát a sejtproliferáció vizsgálati szettel (készlettel) ellenőrizzük [Amershem Co., RPN20 és RPN210]. Az MC3T3-E1 sejteket 96 nyílású mikrotiter lemezekre vagy tenyészlemezekre inokuláljuk, az inokuláláshoz 0,5xl05 sejt/ml koncentrációjú szuszpenziót használunk. Az inokulációt követő 4. nap után a tenyészetekhez ΝΤ-3-t [Pepro Tech. Inc., Rocky Hill, NH 08553, Amerikai Egyesült Államok] adunk különféle koncentrációban (0,2-100 ng/ml), ezek után a szaporodást a következő napon Amersham Co.-féle vizsgálati szettel ellenőrizzük. Az eredmények azt mutatták, hogy ΝΤ-3-mal stimulálni lehetett az MC3T3-E1 sejtek szaporodását. Az MC3T3-E1 sejteknek azon képességét, hogy NT-3 hatásának kitéve arra reagáljanak, megerősítették a fluoreszcenciavizsgálatok is, amelyhez kalciumra érzékeny, fluoreszkáló indikátort alkalmaztunk. A sejteket 20-100 ng/ml ΝΤ-3-nak kitéve a sejtmembránon keresztül kalciumion beáramlása volt észlelhető. Ezen túlmenően az NT-3 hatásának kitett MC3T3-E1 sejtek inkorporálódását mérni lehetett fluoreszcenciás intenzitásvizsgálatok segítségével, amelyekhez kalciumra érzékeny fluoreszkáló szert alkalmaztunk [Grynkiewicz G. és munkatársai: J. Bioi. Chem., 260. kötet, 3440-3450. oldal (1985)]. Következtésképpen megállapítható volt, hogy a trkC-hez kapcsolódó NT-3 az MC3T3-E1 sejtek proliferációját idézi elő autokrin mechanizmus alapján.
Fentiek alapján a feltalálók megállapították, hogy az NT-3 mint osteoblast-proliferációs faktor működik. Minthogy az osteoblast-proliferációs faktor a csontok anyagcseréjében egy igen jelentős szerepet játszik, a találmány szerinti megoldás szerinti NT-3 az anyagcsere eredetű csontbetegségek és különösen csonttörések esetében a megelőzésre alkalmas szer.
A találmány szerinti gyógyászati készítményt adhatjuk előnyösen intravénás vagy intramuszkuláris úton. A vénába adott infúziós cseppek, valamint a hagyományos intravénás injekció beadása a kezelés egy lehetséges módját képezik.
A találmány szerinti gyógyászati készítményt különféle módon készíthetjük el, azonban előnyös a folyékony készítmények használata. Injekció előállításánál például az ΝΤ-3-at por formájában alkalmazzuk. A vizes oldathoz emellett egy vagy két vízben oldható komponenst adunk, mint például mannitot, cukrot, tejcukrot, maltózt, glükózt vagy fruktózt; így vizes oldatot készítünk, majd ezt üvegcsékbe vagy ampullákba töltjük, lefagyasztjuk, szárítjuk, lezárjuk, így injekciós célra alkalmas készítményt kapunk.
A felnőtt beteg napi dózisértéke függ a beteg korától, testtömegétől, a beadás módjától, a szimptómáktól, és így tovább, általában e peptidszármazékokból naponta 1-500 mg-ot adunk.
A találmány szerinti NT-3 adagolásával elősegítjük az MC3T3-E1 sejtek szaporodását és a kalcium beépülését. így ezen anyag eredményesen alkalmazható az anyagcsere eredetű csontbetegségek megelőzésére, különösen a csontképződéssel kapcsolatos csonttörések kezelésére.
A találmány szerinti megoldást a korlátozás szándéka nélkül az alábbi példákban ismertetjük.
PÉLDÁK
1. példa — trkC kimutatása
MC3T3-E1 osteoblast sejteket inokulálunk 0,5 χ 105 sejt/ml sűrűségben. A sejteket táptalajban tenyésztjük, a képződött sejteket a 2., 6., 10., 13., 15. és 28. napon kinyerjük. Az összes RNS-t guanidin-izotiocianát és fenol segítségével elkülönítjük.
Pontosan 0,2 mg RNS-t reverz transzkripció segítségével egyláncú cDNS-sé alakítunk; a művelethez oligo d(T)-t és Parkin Elmer, Inc./Takara Shuzo-féle készletet használunk, majd a kapott, egy láncból álló cDNS-t szaporítjuk, ehhez 0,5 mmol szintetikus primer oligonukleotidokat [(Applied Biosystems, Inc.): trkf, lásd SEQ ID No.: 1, trkr, lásd a SEQ ID No.: 2-t és trkr 2-t, lásd a SEQ ID No.: 3-at] használunk, e hivatkozott megjelölések a szekvencialistában találhatók. A trk cDNS tirozin kináz tartományának szaporítására primer trkf-t és trkr-t alkalmaztunk, a művelethez Astec PC800-t (Astec Inc.) használtunk, a kiegészített oldatot 50-szeresére hígítjuk, majd a PCR terméket ismét primer trkf-fel és trkr2-vel kiegészítjük. Az így kapott mintát agarózgél elektroforézisnek vetjük alá, ekkor 362 bázispárt tartalmazó DNSfragmentet tudunk kimutatni, mint trkC sávot, lásd az 1. ábrát.
HU 217 082 Β aktivitás értéke 1,0 az esetben, ha a koncentráció ng/ml.
A géllel ezt a sávot levágjuk, a DNS-t extraháljuk, ehhez Takara-féle szűrőkészletet használunk (Takara Suptec 01 és 02, Takara Shuzo K. K..). Ezután a DNSfragmentet kisimítjuk, majd Pharmacia-féle klónozó készlettel foszforilezzük, defoszforilezett pUC18 vektorba helyezzük (Sambrok és munkatársai: Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press Co., (1989)]. A plazmidot JM109 jelzésű Escherichia coli törzsbe transzformáljuk. A tenyészetet elkülönítve és tovább szaporítva a plazmidot extraháljuk, ehhez Pharmacia Flexible Prep készletet használunk. A plazmidot felhasználva a DNS nukleinsav-szekvenciát didezoxi módszerrel határozzuk meg [Sanger, F. és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. 74. kötet 5463-5487. oldal (1977)]. Az egértől származó trkC fragmens (amelyet e példa szerint határozunk meg SEQ ID No.: 4), valamint a patkányoktól és sertésektől vett trkC közötti különbséget összehasonlítva [ez utóbbit Merlio, J. P. és munkatársai ismertetik: Neuroscience, 51. kötet 513-532. oldal (1992) és Lamballe, F. és munkatársai: Cell., 66. kötet, 967-979. oldal (1991)] a különböző nukleinsavbázisok 19 és 29-nek adódtak, a különböző aminosavmaradékok 1 és 0-nak bizonyultak.
2. példa - NT-3 végzett MC3T3-E1 sejt proliferációjának vizsgálata
Az MC3T3-E1 sejtek proliferációs válaszát a megfelelő sejtproliferáció-vizsgálati készlettel ellenőrizzük (Amersham Co., RPN20 és RPN210). MC3T3-E1 sejteket inokulálunk tenyészlemezekre vagy 96 nyílású mikrotiter lapokra, a sejtsűrűség 0,5 χ 105 sejt/ml. 4 nappal az inokulációt követően különféle koncentrációban (0,2-100 ng/ml) ΝΤ-3-at [Pepro Tech Inc., Rocky Hill, NH 08553, Amerikai Egyesült Államok, katalógusszám: 450-03] adunk a tenyészetekhez, majd a proliferációt a következő napon Amersham Co. vizsgálati készletével ellenőrizzük. A vizsgálati készletben a sejtek DNS-ében bróm-dezoxi-uridin BrdU van inkorporálva. Ezt egerektől vett anti BrdU antitesthez kötjük, a BrdU-t peroxidáz hatás alapján mutatjuk ki, e műveletekhez antiegér antitestet használunk, amely a peroxidázzal konjugált antitestet megköti. Az eredményeket az 1. táblázatban foglaljuk össze. A táblázatban szereplő relatív
1. táblázat
| koncentráció (ng/ml) | 0 | 0,2 | 1 | 5 | 20 | 100 |
| NT-3 | 1,0 | 1,07 | 1,14 | 1,34 | 1,63 | 1,44 |
3. példa - a kalcium inkorporálódásának vizsgálata
1,5 ml MC3T3-E1 sejtet inokulálunk 25 mm átmérőjű tenyészlapokra, ahol a sejtsűrűség 7,5 χ 104 sejt/ml, a szuszpenzió készítéséhez 5% borjúembrió-tartalmú szérumot adunk (α-MEN, Gibco Co.), amely különféle koncentrációban ΝΤ-3-t tartalmaz. Az inokulációt követő egy nap eltelte után a lemezt kétszer mossuk, ehhez PBS-t, 5 mM Fura-2AM-t (Dojin Co.) használunk HEPES bufferben oldva (132 mM NaCl, 35 mM KC1, 0,5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 9,5 mM HEPES, 5 mm glükóz, pH: 7,4), majd az elegyet 30 percig szobahőmérsékleten tartjuk. A sejteket mossuk, majd az abszorpciót 340 nm/380 nm értéknél mérjük; a relatív arány 1 az esetben, ha a kezeléshez 0,05 ng/ml ΝΤ-3-t használunk. Az eredményeket a 2. táblázat foglalja össze.
2. táblázat
| NT-3 (ng/ml) | 0,05 | 0,2 | 1,0 | 5,0 | 20 |
| NT-3 | 1 | 1 | 1,13 | 1,25 | 1,69 |
Az adatok azt igazolják, amennyiben ΝΤ-3-at adunk a tenyészethez, kalciuminkorporálódás következik be. Feltételezésünk szerint a trkC - amely egy receptor - jelet továbbít, amely a Ca2+-rendszert aktiválja, és ez eredményezi a kalciumfelvételt.
Claims (1)
- SZABADALMI IGÉNYPONT1. Humán neurotrofm-3 alkalmazása osteoblast-proliferáció hiánya okozta csontbetegségek megelőzésére vagy gyógyítására használható gyógyszer előállítására.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20125794A JP3738281B2 (ja) | 1994-07-22 | 1994-07-22 | 新規な骨芽細胞増殖因子 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9502202D0 HU9502202D0 (en) | 1995-09-28 |
| HUT73185A HUT73185A (en) | 1996-06-28 |
| HU217082B true HU217082B (hu) | 1999-11-29 |
Family
ID=16437950
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9502202A HU217082B (hu) | 1994-07-22 | 1995-07-21 | Humán neurotrofin-3 alkalmazása anyagcserével kapcsolatos csontbetegségek kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6080720A (hu) |
| EP (1) | EP0704219B1 (hu) |
| JP (1) | JP3738281B2 (hu) |
| KR (1) | KR100361717B1 (hu) |
| AT (1) | ATE206930T1 (hu) |
| AU (1) | AU693567B2 (hu) |
| CA (1) | CA2154403A1 (hu) |
| DE (1) | DE69523250T2 (hu) |
| DK (1) | DK0704219T3 (hu) |
| ES (1) | ES2161809T3 (hu) |
| FI (1) | FI953514A (hu) |
| HU (1) | HU217082B (hu) |
| NO (1) | NO952912L (hu) |
| PT (1) | PT704219E (hu) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2787208C (en) * | 2010-01-15 | 2017-06-06 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Use of vanadium compounds to accelerate bone healing |
| US9144633B2 (en) | 2010-12-10 | 2015-09-29 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Implantable devices coated with insulin-mimetic vanadium compounds and methods thereof |
| US20140322292A1 (en) | 2010-12-10 | 2014-10-30 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Insulin-mimetics as therapeutic adjuncts for bone regeneration |
| US9931348B2 (en) | 2011-07-06 | 2018-04-03 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Vanadium compounds as therapeutic adjuncts for cartilage injury and repair |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GR1000980B (el) * | 1989-08-30 | 1993-03-31 | Max Planck Gesellschaft | Νευροτροφινη-3,ενας νεος neυροτροφικος παραγοντας που σχετιζεται με τον παραγοντα αναπτυξης νευρων και τον νευροτροφικο παραγοντα που προερχεται απο τον εγκεφαλο. |
| WO1995030434A1 (en) * | 1994-05-06 | 1995-11-16 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods based on the role of neurotrophin 3 in female reproduction |
-
1994
- 1994-07-22 JP JP20125794A patent/JP3738281B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-07-18 PT PT95111224T patent/PT704219E/pt unknown
- 1995-07-18 DE DE69523250T patent/DE69523250T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-18 ES ES95111224T patent/ES2161809T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-07-18 DK DK95111224T patent/DK0704219T3/da active
- 1995-07-18 AT AT95111224T patent/ATE206930T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-07-18 EP EP95111224A patent/EP0704219B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-07-20 AU AU27105/95A patent/AU693567B2/en not_active Ceased
- 1995-07-20 FI FI953514A patent/FI953514A/fi not_active IP Right Cessation
- 1995-07-21 US US08/505,539 patent/US6080720A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-21 NO NO952912A patent/NO952912L/no not_active Application Discontinuation
- 1995-07-21 HU HU9502202A patent/HU217082B/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-07-21 CA CA002154403A patent/CA2154403A1/en not_active Abandoned
- 1995-07-21 KR KR1019950021475A patent/KR100361717B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0704219T3 (da) | 2002-02-04 |
| DE69523250T2 (de) | 2002-07-04 |
| EP0704219B1 (en) | 2001-10-17 |
| ES2161809T3 (es) | 2001-12-16 |
| FI953514A0 (fi) | 1995-07-20 |
| EP0704219A2 (en) | 1996-04-03 |
| PT704219E (pt) | 2002-03-28 |
| HU9502202D0 (en) | 1995-09-28 |
| NO952912L (no) | 1996-01-23 |
| DE69523250D1 (de) | 2001-11-22 |
| HUT73185A (en) | 1996-06-28 |
| JP3738281B2 (ja) | 2006-01-25 |
| KR100361717B1 (ko) | 2003-07-07 |
| EP0704219A3 (en) | 1997-12-10 |
| NO952912D0 (no) | 1995-07-21 |
| KR960003741A (ko) | 1996-02-23 |
| CA2154403A1 (en) | 1996-01-23 |
| FI953514A (fi) | 1996-01-23 |
| ATE206930T1 (de) | 2001-11-15 |
| AU693567B2 (en) | 1998-07-02 |
| AU2710595A (en) | 1996-02-01 |
| US6080720A (en) | 2000-06-27 |
| JPH0834744A (ja) | 1996-02-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9605073B2 (en) | Modulation of activity of neurotrophins | |
| US8101571B2 (en) | Treatment methods using NGF variants | |
| TW200800250A (en) | Protein formulation for promoting hard tissue formation | |
| HU217082B (hu) | Humán neurotrofin-3 alkalmazása anyagcserével kapcsolatos csontbetegségek kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására | |
| US20040266691A1 (en) | Methods and use of motoneuronotrophic factor | |
| JP2002506000A (ja) | モルフォゲン活性の増強 | |
| US7132397B1 (en) | Bone morphogenetic protein antagonist based on the mature protein | |
| US6171584B1 (en) | Method of treatment with growth/differentiation factors of the TGF-β family | |
| Vantini | The pharmacological potential of neurotrophins: a perspective | |
| US6569419B2 (en) | Methods for promoting production of myelin by Schwann cells | |
| CA2286558A1 (en) | Ngf variants | |
| US5726148A (en) | Method of treating metabolic bone diseases with an IL-1 receptor | |
| AU763488B2 (en) | Methods for maintaining or restoring tissue-appropriate phenotype of soft tissue cells | |
| Carri et al. | Choroid coat extract and ciliary neurotrophic factor strongly promote neurite outgrowth in the embryonic chick retina | |
| US6809175B1 (en) | Cadherin derived growth factor and its use | |
| Wang et al. | Effects of a peptide analogue of the amphiphilic domain of the common neurotrophin receptor on nerve growth factor‐mediated motility of human neuroblastoma cells | |
| US20230000955A1 (en) | Thrombomodulin functional domains for use in promoting osteoblast functions and bone healing | |
| Bürvenich et al. | Calcitonin gene-related peptide promotes differentiation, but not survival, of rat mesencephalic dopaminergic neurons in vitro | |
| US7048919B2 (en) | Osteoclast secreted chemokine and uses thereof | |
| WO1995033058A1 (fr) | Codage genique pour le recepteur modifie de la proteine morphogenetique osseuse | |
| CA2385887A1 (en) | Compositions and therapeutic methods using morphogenic proteins, hormones and hormone receptors | |
| Buj-Bello | Neurotrophic actions of GDNF and neurturin in the developing avian nervous system and cloning and expression of their receptors | |
| Bani Hammad | Mechanisms controlling the cell body response to axon injury in dorsal root ganglion neurons |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |