HU208840B - Process for crosslinking collagens with diphenyl phosphoryl azide - Google Patents

Process for crosslinking collagens with diphenyl phosphoryl azide Download PDF

Info

Publication number
HU208840B
HU208840B HU903751A HU375190A HU208840B HU 208840 B HU208840 B HU 208840B HU 903751 A HU903751 A HU 903751A HU 375190 A HU375190 A HU 375190A HU 208840 B HU208840 B HU 208840B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
collagen
dppa
crosslinking
linking
cross
Prior art date
Application number
HU903751A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT60753A (en
HU903751D0 (en
Inventor
Herve Petite
Philippe Menasche
Alain Huc
Original Assignee
Coletica
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Coletica filed Critical Coletica
Publication of HU903751D0 publication Critical patent/HU903751D0/hu
Publication of HUT60753A publication Critical patent/HUT60753A/hu
Publication of HU208840B publication Critical patent/HU208840B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3687—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the use of chemical agents in the treatment, e.g. specific enzymes, detergents, capping agents, crosslinkers, anticalcification agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/24—Collagen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
    • C08H1/06—Macromolecular products derived from proteins derived from horn, hoofs, hair, skin or leather
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2310/00—Prostheses classified in A61F2/28 or A61F2/30 - A61F2/44 being constructed from or coated with a particular material
    • A61F2310/00005—The prosthesis being constructed from a particular material
    • A61F2310/00365—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/40—Preparation and treatment of biological tissue for implantation, e.g. decellularisation, cross-linking

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Processes Of Treating Macromolecular Substances (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás kollagénnek difenil-foszforil-aziddal való térhálósítására.
Ismert, hogy a kollagén az élő szervezetben lévő fehérjék egyharmadát alkotja. Mivel a kollagén kismértékben vált ki immunitást, hatása van a sejtek fejlődésére, és jók a mechanikai tulajdonságai, kifejezetten előnyös alkalmazásuk bioanyagok nyersanyagaként. Ha azonban a kollagént beültetik, többé-kevésbé gyorsan degradálódik a bevitel módjától (oldat, szivacs, film vagy natív szövet), annak helyétől vagy az állat fajtájától függően. A kollagén degradációja bizonyos esetekben kívánatos (sebkötések), más esetekben nem kedvező (szívbillentyűk, műerek stb.).
A kollagén degradációja normális folyamat, amely része a megújított összekötő szövetek növekedésének és fejlődésének. Ugyancsak integrális része a gyógyulási folyamatnak. A kollagén degradációját bizonyos enzimek, különösen a kollagenázok okozzák, amelyek a semleges pH-jú natív kollagén kiindulási támadásáért felelősek. Ezek három peptidláncot egyidejűleg hasítanak. A hasítás a GLY-LEU és a GLY-ILE részeknél megy végbe. Feltételezhető, azonban, hogy az ilyen degredáció során számos enzim, így a sztromelizin, a zselatináz együttes hatása érvényesül.
A kollagének bioanyagként való alkalmazásának nagy előnye, hogy az adott felhasználástól függően a kollagén biodegradálhatósága változtatható. A biodegradálhafóságot legalább két hányban lehet befolyásolni, az egyik esetben enzim inhibitorokkal (így a-2markoglobulinnal vagy β-1-antikollagenázzal), vagy pedig kémiai térhálósító kötések létrehozásával a kollagén molekulában. Legszélesebb körben a második módszert használják, mivel sokkal hatásosabb az enzimek általi degradációval szembeni ellenállás tekintetében. A térhálósító kötéseket létre lehet hozni fizikai úton, amelynek előnye, hogy a szövetbe nem kerül be kémiai anyag, de ez a módszer kevésbé hatásos, vagy létre lehet hozni a térhálósító kötéseket kémiai úton, amely hatásosabb, de a szövetben térhálósítószer nyomok maradnak vissza. A legszélesebb körben alkalmazott térhálósítószer a glutáraldehid (a továbbiakban GTA-nak rövidítjük), amely azonban nem kedvező módon oldatban polimerizál. Ez az oka annak, hogy a kollagén térhálósítása során GTA-polimerek keletkeznek, amelyek idővel a GTA-monomerekből kisózódnak (ez utóbbiak 10-25 ppm-nél nagyobb koncentrációban fitotoxikus hatásúak), és a környező szövetekbe kerülnek, ugyanakkor a kollagén a felhasználás célját szolgáló biológiai tulajdonságai egy részét elveszti.
A glutáraldehid alkalmazásának az elkerülése céljából a 8710317 számú francia szabadalmi leírás szerint olyan eljárást javasolnak kollagén térhálósítására, amely szerint azidcsoportokat visznek be a kollagén oldalláncok karboxil-csoportjaira. Az említett szabadalmi leírás szerint a térhálósítást úgy folytatják le, hogy a kollagén karboxilcsoportjait észteresítik, majd az észtert ezt követően hidraziddá, majd acil-aziddá alakítják. Ezt követően az acil-azidot lúgos közegben a kollagén oldalláncán lévő aminocsoportokkal reagáltatják, és így alakítják ki a peptidkötéseket. Az említett eljárás hátránya, hogy a kollagén térhálósítása hosszú időt vesz igénybe, amely 8 nap és ipari méretekben ez nem jól alkalmazható.
Találmányunk céljául tűztük ki a térhálósítási eljárás egyszerűsítését a kapott végtermékbe térhálósítószer bevitele nélkül, olyan térhálósítási fokú kolagén előállításával egyidejűleg, mint azt a 8710317 számú francia szabadalmi leírás leírja.
Találmányunk szerint ezt az új feladatot kollagén térhálósítására olyan eljárással oldjuk meg, amely egyszerűbb, ugyanakkor a végtermékbe nem kerül térhálósítószer, és a kollagén olyan térhálósodási fokkal rendelkezik, amely az ismert, különösen a 8710317 számú francia szabadalmi leírás szerinti eljárásban kapott termékkel azonos.
A találmányunk célja olyan új eljárás kidolgozása is, amellyel a térhálósítási idő lényegesen csökkenthető.
A találmányunk szerint a kitűzött feladatot rendkívül egyszerűen és reprodukálható módon oldjuk meg olyan eljárásnak az alkalmazásával, amelynek a paraméterei tetszés szerint változtathatók, a kitűzött feladatnak megfelelő térhálósítási fokú kollagén előállítása útján.
Találmányunk tárgya tehát eljárás kollagén térhálósítására, amely szerint acil-azid csoportokkal amid-kötéseket hozunk létre, az eljárásban a kollagént difenilfoszforil-aziddal (DPPA) reagáltatjuk nemvizes oldószerben, és adott esetben a feleslegben lévő difenilfoszforil-azidot mosással eltávolítjuk.
A DPPA-t már használták térhálósításra például aminosavaknál és lineáris peptideknél, amelyek azonban a találmányunk szerint használt kollagéntől nagymértékben különböznek, mivel nem térhálós vegyületek [007 0 021 számú európai szabadalmi leírás és J. Peptide Protein Rés. 22, 374-380 (1983)].
Találmányunk egyik előnyös megvalósítási módja szerint a DPPA-val végbemenő reakciót nemvizes oldószerben, például dimetil-formamidban, acetonban folytatjuk le. A nemvizes oldószer előnyösen dimetilformamid (DMF).
A DPPA koncentrációja előnyösen 0,0125-1,50 térfogat%, különösen előnyösen 0,25-0,7 térfogat%.
A találmányunk előnyös megvalósítási módja szerint a DPPA-val lefolytatott reakciót inkubálással folytatjuk le, ahol az inkubálási hőmérséklet 0-10 °C, előnyösen mintegy 4 °C, és az inkubálási idő néhány órától egy napig terjed, előnyösen mintegy 1 nap.
Előnyösen a találmányunk szerint a kollagénnek DPPA-val való reagáltatását követően legalább egyszer átöblítjük az anyagot a DPPA eltávolítására, majd az acil-azid-csoportokat tartalmazó kollagént borát-puffer oldatba visszük.
Egy előnyös megvalósítási mód szerint az acilazid-csoportot tartalmazó kollagént borát-pufferben inkubáljuk, előnyösen mintegy 0 és 10 °C közötti hőmérsékleten, különösen mintegy 4 °C hőmérsékleten, néhány órától mintegy 1 napig terjedő ideig, előnyösen mintegy 1 napig.
HU 208 840 Β
Az alkalmazott borát-puffer pH-értéke előnyösen mintegy 8,9.
Egy további előnyös megvalósítási mód szerint a kiindulási anyagként alkalmazott kollagént a DPPA-val gél, film vagy semleges szövet formájában, így szívburok vagy ér transzplantátum formájában reagáltatjuk.
A DPPA-val történő kollagén térhálósításának a reakciómechanizmusa nem teljesen ismert, de valószínű, hogy a reakció a DPPA-val karbonsavakon létrehozott amidkötés kialakításához hasonlóan megy végbe, ezt az 1. ábrán mutatjuk be. Megfigyeltük, hogy a karboxil-anion (a), amely a kollagén peptidlánc aszparaginsav vagy glutaminsav karboxilcsoportjából származik, reakcióba lép a DPPA foszforatomjával (b), és így lényegében pentakovalens foszfor-vegyület (c) keletkezik. Ezután a foszforatomon lévő azidcsoport a karboxilcsoport szénatomja irányába vibrál, és így egy belső nukleofíl szubsztitúciós típusú átrendeződés megy végbe.
Végül a kialakult acil-azid a kollagén peptidláncának lizin és hidrolizin laterális aminocsoportjával reagál, és így alakul ki az amid típusú kötés.
Azt tapasztaltuk, hogy a találmányunk szerinti eljárással meglepő módon egyszerűen térhálósító a kollagén, az eljárás nem költséges, és viszonylag rövid térhálósítási idő szükséges, ami műszaki szempontból lényeges előnyt jelent, és az eddig ismert eljárásokkal szemben fontos tényező.
A következőkben találmányunkat a nem korlátozó példákkal mutatjuk be.
Az ábrák
Az 1. ábra a kollagén térhálósítási reakció feltételezett reakciómechanizmusát mutatja difenil-foszforilazidnak a kollagén karboxilcsoportjaival való reakciója során.
A 2. ábra a kollagén százalékos térhálósodásának az előrehaladtát (ordináta) mutatja (ezt RTP-vel jelöljük), amelyet a kollagén denaturálódási hőmérsékletéből (TP) határozunk meg borjú szívburkon a DPPA koncentráció [abszcissza, LÓG (DPPAxlOOO)] függvényében.
A 3. ábra kollagén film térhálósodási százalékának (ordináta) a kialakulását (RTP) mutatja a DPPA koncentráció [abszcissza, LÓG (DPPAxlOOO)] függvényében.
1. példa
Borjú szívburok térhálósítása DPPA-val
a) A kiindulási anyag előállítása
Borjú szívburkot gyűjtünk össze a vágóhídról az állatok levágását követő 1 óránál rövidebb idő alatt. A szívburokról eltávolítjuk a zsírt, majd 0,9%-os nátrium-klorid-oldattal mossuk. Lyukvágóval 1 cm2-es pelletekre vágjuk.
b) A szívburok térhálósítása
A reakciót a következők szerint folytatjuk le:
Négy szívburok pelletet átöblítünk 10 ml tiszta DMF-fel 5 percig, így a szövetet vízmentesítjük, majd 24 órán át 4 °C hőmérsékleten, 10 ml, 0,75% DPPA-t tartalmazó dimetil-formamid-oldatban (a koncentrációkat térfogat/térfogatban fejezzük ki) inkubáljuk. A szövetekből a DPPA-t 10 ml dimetil-formamiddal történő átöblítéssel eltávolítjuk. Ezután a dimetil-formamidot 10 ml 8,9 pH-értékű borát-pufferrel történő átöblítéssel elimináljuk (nátrium-tetraborát 0,04 mól, bórsav 0,04 mól). A kapott szöveteket ezután egy éjszakán át 8,9 pH-értékű borát-pufferben inkubáljuk. A szöveteket ezután például 70 °C hőmérsékleten etanolban tároljuk.
2. példa
Kollagén film térhálósítása DPPA-val
a) A kiindulási anyag előállítása
Borjúbőrből gélt készítünk, majd mossuk és lenyírjuk, majd mész és szulfid elegyével kezeljük. A kapott bőrt semlegesítjük, majd a sókat kétszer vízzel történő mosással elimináljuk. Az így kapott bőrt őröljük,
7,8 pH-értékű foszfát-pufferrel (kálium-dihidrogénfoszfát 0,78 g/1 és dinátrium-monohidrogén-foszfát
21,7 g/1) mossuk. A foszfátot ezután két egymást követő ioncserélt vízzel történő mosással távolítjuk el. Az őrölt anyagot ezután 10%-os ecetsav-oldattal megsavanyítjuk, az ecetsav mennyisége a kollagénre számítva 5%. Az őrölt anyagot ezután homogén pasztává gyúrjuk. A kapott pasztát hígítjuk 0,7% kolagén-koncentrációjú gél eléréséig. A gélt ezután kis teflon formába helyezzük, és hagyjuk bepárolódni. A kapott filmet lyukvágóval 1 cm2-es pelletekké aprítjuk.
b) A film térhálósítása
A reakciót a következők szerint folytatjuk le:
Négy 1 cm2 felületű film pelletet 24 órán át 4 °C hőmérsékleten inkubálunk 10 ml, 0,25% DPPA-t tartalmazó dimetil-formamid-oldatban (a koncentrációkat térfogat/térfogatban fejezzük ki). Ezután a DPPA-t eltávolítjuk a filmből 10 ml dimetil-formamiddal történő átöblítéssel. Ezután a dimetil-formamidot távolítjuk el 10 ml 8,9 pH-értékű borát-pufferrel (nátrium-tetraborát 0,04 mól, bórsav 0,04 mól) való átöblítéssel. Ezt követően a filmet egy éjszakán át 8,9 pH-értékű borát-pufferben inkubáljuk. A vizet szűrőpapírral eltávolítjuk, és a filmeket levegőn szárítjuk. Ezután sterilizálhatjuk a filmeket például gamma-sugárzással.
Hasonló módon állíthatók elő szivacsok, csövek, kollagén rudak térhálósított formában.
3. példa
A) A DPPA koncentráció hatása borjú szívburok térhálósítására
Először a DPPA koncentrációjának a szívburok térhálósodási fokára való hatását vizsgáljuk. E célból a szívburkot DPPA-oldatban inkubáljuk különböző DPPA koncentrációk esetén, amelyek 0,0125 és 1,5 térfogat% közöttiek.
A kollagén térhálósodási fokát letapogató kalorimetriás analízissel határozzuk meg. Ennek során a hőmérsékletet lineárisan emeljük, és mérjük a mintának és a referenciaanyagnak az azonos hőmérsékleten történő tartásához szükséges energia közötti különbséget. Amikor a kollagén denaturálódik, hőabszorpciós csúcs jelenik meg a rekorderen. Ily módon meghatározzuk a
HU 208 840 Β kiindulási denaturálódási hőmérsékletet (TD), a denaturálódási hőmérséklet csúcsát (TP) és a végső denaturálódási hőmérsékletet (TF).
A kollagén térhálósodási százalékát, (R), a következők szerint számítjuk:
(TX-TI) (TM-TI) xlOO
A képletben következő jelöléseket alkalmazzuk:
TM: kollagének DPPA-val való térhálósításához szükséges maximális denaturálódási hőmérséklet; jelen esetben ez megfelel 0,75% DPPA koncentrációnál kapott DPPA értéknek ([DPPA]).
TI: a nem kezelt szöveten kapott denaturálódási hőmérséklet.
TX: DPPA-val X koncentrációban kezelt szöveten kapott denaturálódási hőmérséklet.
R: TP-ből, a denaturálódási csúcshőmérsékletből számított térhálósodási százalék, ezt RTP-vel jelöljük.
Az RTP-nek a log[DPPA]xl000) függvényében mért változását a 2. ábrán mutatjuk be. Az RTP változása a lóg ([DPPAjxlOOO) függvényében 0,0125% és 0,50% között lineáris, 0,5-0,75% értékeknél a térhálósodás maximumot ér el, és a DPPA-koncentrációtól függetlenül állandó értéken marad.
Ha a 0,75, illetve 0,5 DPPA koncentrációval elért denaturálódási hőmérsékleteket összehasonlítjuk a 8710317 számú francia szabadalmi leírás szerint kapott értékekkel, és a 0,6% GTA felhasználásával kapott értékekkel (ismert szívbillentyű kezelési eljárás), azt tapasztaljuk, hogy ezek az értékek lényegesen nem különböznek (I. táblázat).
B) A DPPA-koncentráció hatása kollagén film térhálósodására
A DPPA koncentráció hatását vizsgáljuk kollagén film térhálósodási fokára. E célból a filmet különböző koncentrációjú DPPA-oldatokban inkubáljuk, az alkalmazott koncentrációk 0,0125% és 1,0% (térfogat/térfogat) között változnak.
Az RTP-nek a log([DPPA]xl000) függvényében való változását (3. ábra) a borjú szívburok vizsgálatánál leírt módon számítjuk. Azt tapasztaltuk, hogy 0,0125% és 0,10% között az RTP-nek a log([DPPA]xl000) függvényében való változása lineáris. Maximális térhálósodást érünk el 0,25-0,5% DPPA-koncentrációknál.
Ha a 0,15, illetve 0,5% DPPA-val elért denaturálódási hőmérsékletet összehasonlítjuk a 8710317 számú francia szabadalmi leírás szerint kapott adattal, illetve a
0,6% GTA felhasználásával (szokásos szívbillentyű kezelési eljárás) kapott adattal, azt tapasztaljuk, hogy ezek az értékek nem különböznek lényegesen (I. táblázat).
C) DPPA-adagolás a szívburok térhálósítása után Abból a célból, hogy megállapítsuk, mi történik a
DPPA-val a térhálósítást követően, foszfort adagolunk.
Először a foszfort a DPPA-val kezelt anyaghoz ad10 juk különböző koncentrációkban öblítés nélkül. A kezelt anyagot egyszerűen szárítjuk 110 °C hőmérsékletű szárítószekrényben. A foszforadagolást plazma emiszsziós spektrometriás úton végezzük perklórsav- és salétromsav-oldattal (kétharmad/egyharmad térfogat/tér15 fogat) történő kezelést követően. Az eredményeket a száraz szövet tömegére számítva százalék foszforban adjuk meg. Ezeket az eredményeket a II. táblázat tartalmazza.
Másik esetben a foszfort a DPPA-val kezelt anyag20 hoz adjuk 0,5 és 1% koncentrációban a szövetnek vagy csak borát-pufferrel, vagy dimetil-formamiddal, majd borát-pufferrel való öblítését követően. Az eredményeket a III. táblázat tartalmazza.
/. táblázat
A 8710317 számú francia szabadalmi leírás szerint acil-aziddal, illetve DPPA-val kezelt, illetve nem kezelt borjú szívburok, illetve GTA-val kezelt kollagén film denaturálódási hőmérsékletének az összehasonlítása
Denaturálódási hőmérséklet C
TD TP TF
Friss szívburok 64,30 67,30 81,30
GTA-val kezelt szívburok 0,6% 82 85,30 93,80
Aziddal kezelt szívburok 78 81,40 89,10
DPPA-val kezelt szívburok 0,5% 78,50 81,40 91,70
DPPA-val kezelt szívburok 0,75% 79,20 82 89,90
Kezeletlen film 39,15 49,12 66,10
GTA-val kezelt film 0,6% 71,10 79,10 86,40
Aziddal kezelt film 65,50 74,40 83
DPPA-val kezelt film 0,25% 69,90 72,70 80,50
DPPA-val kezelt film 0,50% 70,30 72,60 79,20
II. táblázat
Visszamaradó foszfortartalom százalékos mennyisége közvetlenül a szívburoknak DPPA-val 0-1,5%-os koncentrációban történő kezelését követően. A DPPA-val történő kezelés után öblítést nem végzünk.
[DPPA]% 0,00 0,25 0,50 0,75 1,00 1,50
foszfor% 0,l±0,0 1,0+0,1 1,4+0,2 1,7+0,2 1,7+0,2 2,2+0,1
HU 208 840 Β
III. táblázat
Visszamaradó foszfortartalom a szívburoknak 1,0, illetve 0,5% koncentrációban DPPA-val történő kezelését követően. A foszfortartalmat a szövetnek háromszor boráttal 0,5% koncentrációban történő öblítése után határozzuk meg, és ez az érték nem különbözik attól az értéktől, amelyet akkor kapunk, ha a szövetet DMF-ben inkubáljuk térhálósítószer alkalmazása nélkül (II. táblázat)
DPPA koncentráció DMF-es öblítés nincs 3 borátos öblítés 3 DMF-es öblítés 3 borátos öblítés 5 DMF-es öblítés 3 borátos öblítés 8 DMF-es öblítés 3 borátos öblítés
1,0% 0,22±0,02 0,23±0,06 0,17±0,03 0,18±0,01
0,5% 0,09±0,06 0,04±0,05 0,09+0,03 0,1+0,06
A táblázat adataiból látható, hogy 0,5% DPPA koncentráció esetén a visszamaradó foszfor csak háromszori borát-pufferrel történő átöblítési után azonos a DMF-ben térhálósítószer nélkül kapott értékkel (0,09%, illetve 0,1%).
Az adatok azt mutatják, hogy a térhálósítás után a szövetben nem marad vissza térhálósítószer. A találmányunk szerinti eljárással tehát a 8710317 számú francia szabadalmi leírásban ismertetett eljáráshoz hasonlóan a kollagén térhálósítható visszamaradó térhálósítószer-tartalom nélkül, ugyanakkor a találmányunk szerinti eljárás ipari méretekben könnyebben megvalósítható.

Claims (8)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás kollagén térhálósítására acil-azid-csoportokkal végzett amidkötések kialakítása útján, azzal jellemezve, hogy a kollagént difenil-foszforil-aziddal reagáltatjuk nemvizes oldószerben, és adott esetben a feleslegben lévő difenil-foszforil-azidot mosással eltávolítjuk.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy nemvizes oldószerként dimetil-formamidot alkalmazunk.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a difenil-foszforil-azidot 0,0125% és 1,5% (térfogat), előnyösen 0,25 és 0,70% közötti mennyiségben alkalmazzuk.
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a reakciót 0 és 10 °C közötti, előnyösen 4 °C hőmérsékleten, előnyösen néhány órától mintegy 1 napig terjedő ideig, előnyösen 1 napig történő inkubálással folytatjuk le.
  5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a difenil-foszforil-aziddal lefolytatott reakció után legalább egyszer öblítést végzünk a difenil-foszforil-azid eltávolítására, majd az acil-azid-csoportot tartalmazó kollagént borát-pufferoldatba visszük.
  6. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az inkubálást 0 °C és 10 °C közötti, előnyösen 4 °C hőmérsékleten folytatjuk le borát-pufferben.
  7. 7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 8,9 pH-értékű borát-puffert alkalmazunk.
  8. 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kollagént gél, film, vagy természetes szövet, így szívburok formájában alkalmazzuk.
HU903751A 1989-04-12 1990-04-10 Process for crosslinking collagens with diphenyl phosphoryl azide HU208840B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR8904846A FR2645870B1 (fr) 1989-04-12 1989-04-12 Procede de reticulation du collagene par le diphenylphosphorylazide, collagene reticule ainsi obtenu et biomateriaux a base de collagene ainsi reticules

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU903751D0 HU903751D0 (en) 1991-12-30
HUT60753A HUT60753A (en) 1992-10-28
HU208840B true HU208840B (en) 1994-01-28

Family

ID=9380649

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU903751A HU208840B (en) 1989-04-12 1990-04-10 Process for crosslinking collagens with diphenyl phosphoryl azide

Country Status (17)

Country Link
US (1) US5264551A (hu)
EP (1) EP0466829B1 (hu)
JP (1) JPH07103239B2 (hu)
KR (1) KR0160309B1 (hu)
AT (1) ATE140709T1 (hu)
AU (1) AU5531690A (hu)
BR (1) BR9007287A (hu)
CA (1) CA2051426C (hu)
DE (1) DE69027925T2 (hu)
ES (1) ES2092507T3 (hu)
FI (1) FI914798A0 (hu)
FR (1) FR2645870B1 (hu)
HU (1) HU208840B (hu)
MC (1) MC2187A1 (hu)
NO (1) NO177502C (hu)
RU (1) RU2061000C1 (hu)
WO (1) WO1990012055A2 (hu)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5660692A (en) * 1988-02-24 1997-08-26 Cedars-Sinai Medical Center Method of crosslinking amino acid-containing polymers using photoactivatable chemical crosslinkers
FR2675048B1 (fr) * 1991-04-12 1995-06-23 Coletica Utilisation de collagene reticule par un agent de reticulation pour la fabrication de fils de collagene destines a constituer un implant pour le comblement de tissus mous et implant ainsi obtenu.
US5314874A (en) * 1991-04-19 1994-05-24 Koken Co., Ltd. Intracorporeally injectable composition for implanting highly concentrated cross-linked atelocollagen
FR2679778B1 (fr) * 1991-08-02 1995-07-07 Coletica Utilisation de collagene reticule par un agent de reticulation pour la fabrication d'une membrane suturable, biocompatible, a resorption lente, ainsi qu'une telle membrane.
GB9215002D0 (en) * 1992-07-15 1992-08-26 Univ Singapore Method of fixing biological tissue
US5741319A (en) * 1995-01-27 1998-04-21 Medtronic, Inc. Biocompatible medical lead
US20020015724A1 (en) * 1998-08-10 2002-02-07 Chunlin Yang Collagen type i and type iii hemostatic compositions for use as a vascular sealant and wound dressing
US6375672B1 (en) 1999-03-22 2002-04-23 Board Of Trustees Of Michigan State University Method for controlling the chemical and heat induced responses of collagenous materials
FR2801313A1 (fr) 1999-05-19 2001-05-25 Coletica Produit collagenique contenant du collagene d'origine marine a faible odeur et de preference a proprietes mecaniques ameliorees, ainsi que son utilisation sous forme de compositions ou de produits cosmetiques ou pharmaceutiques
US6385491B1 (en) * 1999-10-04 2002-05-07 Medtronic, Inc. Temporary medical electrical lead having biodegradable electrode mounting pad loaded with therapeutic drug
WO2001092322A1 (fr) * 2000-05-26 2001-12-06 Coletica Utilisation de collagene d'origine aquatique pour la realisation de supports destines a l'ingenierie tissulaire, et supports et biomateriaux obtenus
US6790454B1 (en) 2000-05-26 2004-09-14 Coletica Processes for the preparation of novel collagen-based supports for tissue engineering, and biomaterials obtained
FR2809412A1 (fr) 2000-05-26 2001-11-30 Coletica Utilisation de collagene d'origine aquatique pour la realisation de supports destines a l'ingenierie tissulaire, et supports et biomateriaux obtenus
FR2809314B1 (fr) * 2000-05-26 2005-11-18 Coletica Utilisation de collagene d'origine aquatique pour la realisation de supports destines a l'ingenierie tissulaire, et supports et biomateriaux obtenus
US6974679B2 (en) * 2000-05-26 2005-12-13 Coletica Support with collagen base for tissue engineering and manufacture of biomaterials
ATE430593T1 (de) * 2003-10-28 2009-05-15 Medtronic Inc Verfahren zur herstellung von vernetzten materialien und bioprothetischen vorrichtungen
US20070092494A1 (en) * 2005-10-26 2007-04-26 Biomet Manufacturing Corp. Composition for wound healing using lyophilized skin or skin-derived collagen

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS4881838A (hu) * 1972-02-15 1973-11-01
US4374060A (en) * 1981-07-15 1983-02-15 Merck & Co., Inc. Process for the preparation of cyclic hexapeptide
US4755593A (en) * 1985-07-24 1988-07-05 Lauren Mark D Novel biomaterial of cross-linked peritoneal tissue
FR2617855B1 (fr) * 1987-07-08 1992-02-21 Bioetica Sa Procede de reticulation du collagene par introduction de groupes azides ainsi que les tissus et biomateriaux obtenus par mise en oeuvre du procede

Also Published As

Publication number Publication date
DE69027925D1 (de) 1996-08-29
EP0466829A1 (fr) 1992-01-22
KR920701314A (ko) 1992-08-11
NO177502B (no) 1995-06-19
CA2051426A1 (en) 1990-10-13
FI914798A0 (fi) 1991-10-11
WO1990012055A2 (fr) 1990-10-18
US5264551A (en) 1993-11-23
FR2645870A1 (fr) 1990-10-19
DE69027925T2 (de) 1996-12-19
NO914012L (no) 1991-12-10
ATE140709T1 (de) 1996-08-15
AU5531690A (en) 1990-11-05
HUT60753A (en) 1992-10-28
JPH07103239B2 (ja) 1995-11-08
FR2645870B1 (fr) 1993-01-22
EP0466829B1 (fr) 1996-07-24
RU2061000C1 (ru) 1996-05-27
KR0160309B1 (ko) 1999-01-15
BR9007287A (pt) 1992-03-03
MC2187A1 (fr) 1992-09-16
ES2092507T3 (es) 1996-12-01
HU903751D0 (en) 1991-12-30
NO914012D0 (no) 1991-10-11
JPH04504586A (ja) 1992-08-13
CA2051426C (en) 2000-07-25
WO1990012055A3 (fr) 1990-11-15
NO177502C (no) 1995-09-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU208840B (en) Process for crosslinking collagens with diphenyl phosphoryl azide
US6322593B1 (en) Method for treating cross-linked biological tissues
US6177514B1 (en) Blocked functional reagants for cross-linking biological tissues
ES2228647T3 (es) Tratamientos anti-calcificacion para biomateriales fijos.
Rault et al. Evaluation of different chemical methods for cros-linking collagen gel, films and sponges
US5332475A (en) Cross-linking collagenous product
JP3772207B2 (ja) 生分解性生体高分子材料、その製造方法、およびこの高分子材料からなる機能性素材
Paul et al. Chemical stabilisation of collagen as a biomimetic
US4958008A (en) Process for crosslinking of collagen by introduction of azide groups as well as tissues and biomaterials obtained by use of the process
JPS6333400A (ja) コラーゲンの架橋を容易にするためのコラーゲン処理方法
CA1067408A (en) Antiseptic compositions
AU2007221270A1 (en) Variably crosslinked tissue
EP0212209B1 (en) A production process of an antithrombogenic and antiadhesive material for medical use
Rudakova et al. Degradation of collagen and its possible applications in medicine
EP0124659A1 (en) Medical material
US20040030386A1 (en) Segmentally demineralized bone implant and method for its manufacture
Antunes et al. Utilisation of oleuropein as a crosslinking agent in collagenic films
EP1066062A1 (en) A method for treating contaminated products and articles
JP2000212286A (ja) 耐温水性ゼラチンゲル
US3345306A (en) Tubing fluid containing an amino acid
CA1166164A (en) Process for the manufacture of sclero protein transplants with increased biological stability
JPH10265590A (ja) 生体吸収性熱処理ゼラチンフィルム
RU2196424C1 (ru) Способ обработки биоматериалов для сердечно-сосудистой хирургии
AU746247B2 (en) A method for treating contaminated products and articles
JPH01230365A (ja) 細胞侵入性医用材料およびその製造法

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee