HU208629B - Process for producing glycosylated protein-based pharmaceutical compositions with tpa-activating effect for treating blood clots - Google Patents

Process for producing glycosylated protein-based pharmaceutical compositions with tpa-activating effect for treating blood clots Download PDF

Info

Publication number
HU208629B
HU208629B HU912739A HU273991A HU208629B HU 208629 B HU208629 B HU 208629B HU 912739 A HU912739 A HU 912739A HU 273991 A HU273991 A HU 273991A HU 208629 B HU208629 B HU 208629B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
acid
amino
mmol
sodium citrate
citrate
Prior art date
Application number
HU912739A
Other languages
English (en)
Inventor
Ulrich Kohnert
Rainer Rudolf
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of HU208629B publication Critical patent/HU208629B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/49—Urokinase; Tissue plasminogen activator
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás véralvadékok kezelésére szolgáló, t-PA-aktivitással rendelkező glükozilezett protein bázisú gyógyszerkészítmény előállítására.
A humán szöveti plazminogén aktivátor (t-PA) nagy gyógyászati jelentőséggel bír a véralvadékok feloldásánál, például szívinfarktus esetén. A t-PA a véralvadékok oldására a plazminogén plazminná való aktiválása útján hat. A plazminogén oldja a fibrint, az alvadt vér protein-mátrixának főkomponensét.
A természetes t-PA több funkcionális doménből, F, E, KI, K2 és P, tevődik össze. A P dómén tartalmazza a proteolitikusan aktív centrumot, amely a plazminogén plazminná való hasítását végzi. A t-PA vagy különböző olyan t-PA-muteinek (protein mutánsok) géntechnológiai előállítása, amelyekben az F, E, KI és K2 domének közül egy vagy több deletált, eukarióta vagy prokarióta sejtekben már ismert. A prokariótákból származó t-PA-származékok a természetes t-PA-val ellentétben nem glükozilezett formában szintetizálódnak.
A t-PA-aktivitással rendelkező glükozilezett proteinek csak kis koncentrációban oldódnak a proteinek szolubilizálására szokásosan használt pufferokban; például 50 mmól/1 koncentrációjú nátrium-citrát-oldatban, 50 mmól/1 koncentrációjú foszfátoldatban vagy fiziológiás nátrium-klorid-oldatban. Gyógyászati hatóanyagként való alkalmazásra azonban magasabb, legalább
1,4 MU/ml, előnyösen 1,4 MU/ml-től 10 MU/ml-ig terjedő t-PA-aktivitású proteinoldatok kellenének.
Az EP-A 0217379 számú európai szabadalmi bejelentésből ismert, hogy a t-PA oldhatósága semleges vagy enyhén lúgos arginin-készítményekkel növelhető. Ezen eljárás hátránya azonban a magas koncentrációjú oldatok semleges vagy enyhén lúgos körülmények közötti csekély stabilitása.
A 4 777 043 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismertet egy humán t-PA-t és egy 0,3 mól/1 kloridion-koncentrációjú, gyógyászatilag elfogadható argininiumion-tartalmú puffért tartalmazó gyógyszerkészítményt. Az EP-A 0156169, EP-A 0 303 351 és EP-A 0297294 számú nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentések további lehetőségeket ismertetnek t-PA-aktivitással rendelkező proteinek pufferokban bizonyos aminosavak, ezek sói, származékai és homológjai segítségével való szolubilizálására. A t-PA az EP-A 0123 304 számú nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentés szerint zselatin hozzáadásával, az EP-A 0112 940 számú nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentés szerint albumin hozzáadásával vagy az EP-A 0198 321 számú nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentés szerint egy szacharid poli-szulfátészterének vagy egy szulfatált cukornak a hozzáadásával stabilizálható.
Az EP-A 0297294 sz. bejelentésben az a kitanítás szerepel, hogy a t-PA-hoz legalább két vegyületet kell adni a D- és/vagy L-aminosavak csoportjából. Az EP-A 0228862 és az EP-A 217379 sz. nyomtatványok is arginin alkalmazását ismertetik eltérő kloridion-koncentráció esetén. A találmányunk szerinti megoldásnál azonban nem vesszük figyelembe aminosav adalékként való alkalmazását. Megjegyzendő, hogy az EP-A 0156169 nyomtatványra is érvényes, hogy adalékként L-lizin alkalmazását írják le. Végül az EP-A 211 592ből ismert t-PA-nak egy pufferolt oldatban, pH 3,55,5-nél oldékonyságot javító és stabilizáló szerek távollétében való alkalmazása. Mindezen javasolt megoldásokban közös, hogy nem teszik lehetővé a célul kitűzött aktivitású koncentrációnak - nevezetesen a legalább 1,4 MU/ml - elérését. A PCT/US88/04 402 számú nemzetközi szabadalmi bejelentés közöl egy eljárást a t-PA oldhatóságának növelésére, amelyben egy 5-8 közötti pH-jú vizes oldatot használnak, amely 0,02-0,2 mól/1 koncentrációban egy bázikus aminosavat, főleg arginint tartalmaz 0,02-0,08 ml/mól koncentrációjú citráttal együtt.
Ezek a különböző összetételek azonban nem alkalmasak általánosan minden t-PA tulajdonsággal rendelkező protein esetében. Megállapítottuk, hogy különböző glükozilezett, illetve nem glükozilezett t-PA-variánsok oldhatósági tulajdonságai egymástól erősen eltérők.
A találmány célkitűzése az volt, hogy olyan gyógyszerkészítményeket fejlesszen ki, amelyek 1,4 MU/mlnél magasabb aktivitású, főleg glükozilezett t-PA-t, illetve t-PA-muteineket tartalmaznak, amelyekben a t-PA-nak hosszabb időtartamon keresztül stabilnak kell lennie. Az U egységet a WHO, National Institute fór Biological Standards and Control [lásd H. Lili, ZGIMAL42, 478 -486 (1987)] szerint definiáljuk.
A célkitűzést a találmány szerint egy 4,5-től 9-ig terjedő tartományba eső pH-jú, legalább 1,4 MU/ml aktivitású t-PA hatású glükozilezett proteint tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítási eljárásával oldjuk meg, amelynél a t-PA-aktivitással rendelkező glükozilezett proteint vagy olyan t-PA-mutánst, amelynél az F, E, KI és K2 döfnének közül egy vagy több deletált, citráttal az alábbiak közül legalább eggyel formulázunk:
a) aszkorbinsav
b) EDTA
c) R1 R2N-R-X általános képletű - ahol
X jelentése szulfocsoport, hidrogénatom, aminocsoport vagy hidroxilcsoport;
R jelentése 1-9 szénatomos alkilén-, 3-6 szénatomos cikloalkilén- vagy benzilidén-csoport; és
R1 és R2 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-3 szénatomos alkilcsoportaminovegyületek,
d) guanidino-vajsav
e) dimetil-biguanid
f) 7-amino-heptánsav, 8-amino-oktánsav, 4-(aminometil)-benzoesav, δ-aminó-valeriánsav, gammaamino-vajsav
g) glükóz-amin, fruktóz
h) pirimidin-nukleozidok és pirimidin-nukleotidok
i) almasav, tejsav, fumársav vagy 2-oxo-glutársav.
A citrátionok koncentrációjának egy találmány szerint előállított gyógyszerkészítményben legalább 5 mmól/l-nek, előnyösen 5-100 mmól/l-nek kell lennie; különösen előnyös az 50 mmól/1 citrátion-koncentrá2
HU 208 629 B ció. A pH-értéket az alkalmazott vegyület bázicitásától függően sósavval vagy egy bázissal, például nátriumhidroxiddal vagy kálium-hidroxiddal állítjuk be.
Megfelelőnek bizonyult, ha a lúgos citrátoldat pHját sósavval állítottuk be, azaz ha a készítmény még kloridiont is tartalmazott. Kloridionok jelenlétében a t-PA, illetve t-PA-származékok magas koncentrációjú oldatai lényegesen stabilabbak, mint például foszfátionok jelenlétében. A savas citrátoldatok pH-ját rendszerint nátrium-hidroxiddal állítjuk be.
A találmány szerint előállított készítmények esetében 4,5 és 9 közötti pH-érték a megfelelő, előnyös a 6 pH-érték.
A találmány szerint t-PA-aktivitással rendelkező glükozilezett proteinen eukarióta organizmusokból származó, nem módosított t-PA, valamint az összes glükozilezett t-PA-mutein értendő. A t-PA-muteinekre például Harris [Protein Engineering, 1, 449-458 (1987)] ír le példákat.
A találmány szerint előállított készítmény előnyösen CHO-sejtekből (chinese hamster ovary = kínai hörcsög petefészek) származó, az F, E, KI, K2 és P doménekkel rendelkező natív glükozilezett t-PA-t (előállítás a WO87/02673 nemzetközi közzétételi irat szerint) tartalmaz. Megfelelő azonban az eukariótákból származó összes egyéb t-PA-variáns is.
Egy találmány szerint előállított készítményhez aminovegyületként előnyösen taurint, 4-amino-butanolt, 5-amino-pentanolt, 6-amino-hexanolt, 1,9-diamino-nonánt, 1,8-diamino-oktánt, 1,7-diamino-heptánt, 1,6-diamino-hexánt, 1,5-diamino-pentánt, 1,4-diamino-butánt vagy 1,3-amino-propánt használunk. Taurin és az analóg vegyületek esetében az előnyös koncentráció 0,1-0,5 mól/1, különösen előnyös a 0, ΙΟ,3 mól/1 tartomány. A többi említett vegyületet (az α,ω-diaminokat és α,ω-amino-alkoholokat) előnyösen 10-100 mmól/1 koncentrációban használjuk.
Az almasavat, tejsavat, fumársavat vagy 2-oxo-glutársavat előnyösen 1 mmól/l-től 1000 mmól/l-ig, különösen előnyösen 10 mmól/l-től 500 mmól/l-ig terjedő koncentrációban használjuk.
A guanidino-vajsavat előnyösen 10-200 mmól/1, különösen előnyösen 50-100 mmól/1 koncentrációban használjuk. Dimetil-biguanid esetében a koncentráció 50-400 mmól/1, előnyösen 100-300 mmól/1 lehet.
A 7-amino-heptánsavat, 8-amino-oktánsavat, δamino-valeriánsavat, γ-amino-vajsavat vagy 4-(aminometil)-benzoesavat előnyösen 0,5-20 mmól/1, különösen előnyösen 1-10 mmól/1 koncentrációban használjuk. Ezek az anyagok meglepő módon már kis (10-40szeres) moláris feleslegben kiváló oldhatóságot biztosítanak a glükozilezett t-PA-származékoknak.
A glükóz-amint és fruktózt előnyösen 1-500 mmól/1 koncentrációban, különösen előnyösen 10-300 mmól/1 koncentrációban alkalmazzuk.
Pirimidin-nukleozidként vagy pirimidin-nukleotidként például timidin, citozin és uridin, illetve a megfelelő nukleotidok alkalmazhatók. Ezeket az anyagokat előnyösen 1-300 mmól/1, különösen előnyösen 10-300 mmól/1 koncentrációban használjuk.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy olyan készítmény előállítási eljárása is, amely még egy vagy több aminosavat, főként hisztidint tartalmaz.
A továbbiakban egy sor találmány szerinti különösen előnyös készítményt mutatunk be.
Egy készítmény 50 mmól/16 pH-jú nátrium-citrátot és 0,1-0,3 mól/1 taurint tartalmaz. Előnyös egy 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrátot és 0,2-0,3 mól/1 aszkorbinsavat tartalmazó készítmény is.
Előnyös továbbá egy 50 mmól/1 6 pH-jú nátriumcitrát/sósav puffért és 1-10 mmól/1 7-amino-heptánsavat, 8-amino-oktánsavat, δ-amino-valeriánsavat, γamino-vajsavat vagy 4-(amino-metil)-benzoesavat tartalmazó készítmény is.
Előnyösek továbbá olyan találmány szerint előállított készítmények is, amelyek 50 mmól/1 6,0 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 50-100 mmól/1 guanidino-vajsavat tartalmaznak.
Előnyös egy olyan készítmény is, amely 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrátot és 10-100 mmól/1 EDTA-t tartalmaz. Egy további készítmény 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 100-300 mmól/1 dimetil-biguanidot tartalmaz.
Egy másik további készítmény 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrátot és 10-300 mmól/1 timidint, citozint vagy uridint tartalmaz.
Egy ugyancsak további készítmény 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 10-100 mmól/1
4-amino-butanolt, 5-amino-pentanolt, 6-amino-hexanolt, 1,9-diamino-nonánt, 1,8-diamino-oktánt, 1,7-diamino-heptánt, 1,6-diamino-hexánt, 1,5-diamino-pentánt, 1,4-diamino-butánt vagy 1,3-diamino-propánt tartalmaz.
Egy további készítmény 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 10-300 mmól/1 fruktózt vagy glükóz-amint tartalmaz.
Végül egy készítmény 50 mmól/1 6 pH-jú nátriumcitrátot és 10-500 mmól/1 almasavat, tejsavat, fumársavat vagy 2-oxo-glutársavat tartalmaz.
Több fentebb említett vegyület kombinációit tartalmazó citrátos készítmény is nagyon jó oldhatóságot biztosít t-PA-aktivitással rendelkező glükozilezett proteineknek, főként CHO-sejtekből származó t-PA-nak.
A találmány tárgyát képezi egy hatóanyagként tPA-aktivitással rendelkező glükozilezett proteint a megadott hatóanyagokkal és adott esetben még további, gyógyászatilag elfogadott adalék-, segéd-, hordozóés töltőanyagokkal együtt oldatban vagy liofilizátumként tartalmazó gyógyszerkészítmény is.
A találmány szerinti gyógyszerkészítmények elsősorban injekciós vagy infúziós oldatokként kerülnek alkalmazásra. A felhasználás úgy történhet, hogy egy már elkészített, injektálásra kész oldat áll rendelkezésre, amely a találmány szerinti összetételű. Lehetséges azonban az is, hogy a gyógyszerkészítmények liofilizátumok formájában álljanak rendelkezésre. Ezeket azután önmagukban ismert, injekciós célokra alkalmas szerekkel vagy oldatokkal elegyítve hozzuk felhasználásra kész állapotba. Injekciós közegként előnyösen vizet használunk, amely az injekciós oldatoknál szoká3
HU 208 629 Β sós adalékanyagokat, így stabilizálószereket, oldásközvetítőket, pufferokat és izotóniás adalékokat, például fiziológiás koncentrációjú nátrium-kloridot tartalmaz. Ilyenfajta adalékokként például mannit, tartarát- vagy citrát-pufferok, etanol, komplexképzők, így etilén-diamin-tetraecetsav és ennek nem toxikus sói, valamint viszkozitásszabályzásra szolgáló nagymolekulájú polimerek, így folyékony polietilénoxid említhetők. Az injekciós célokra szolgáló folyékony hordozóknak sterilnek kell lenniök, és előnyösen ampullákba töltve kerülnek forgalomba.
A találmány tárgyát képezi végül a t-PA-aktivitással rendelkező glükozilezett proteinek találmány szerinti gyógyszerkészítmények előállítására való alkalmazása is.
A következő példa a találmány konkrét kivitelezésének szemléltetését hivatott szolgálni:
1. példa
CHO-t-PA oldhatósága
Tisztított CHO-t-PA-t (7,3 pH-jú 0,5 mól/1 koncentrációjú arginin/foszforsav pufferban oldva) egy YM 10-membránon (Amicon) végzett ultraszűréssel koncentrálunk. A koncentrátum 1-1 ml-ét (aktivitás: 6,6 MU/ml) az 1. táblázatban felsorolt pufferokkal szemben dializáljuk. A minták centrifugálása után a tiszta felülúszóban mérjük az enzimaktivitást.
Az enzimaktivitást térfogategységben MU/ml-ben és összaktivitásként MU-ban adjuk meg.
A t-PA-aktivitás mérése szokásos módon egy kromogén szubsztrát hasításával történhet [H. Lili, ZGIMAL 42, 478-486 (1987)]. Ez az U egység az aktivitásnak a WHO, National Institute fór Biological Standards and Control definíciója szerinti egysége.
1. táblázat
Puffer Aktivitás
MU/ml MU
50 mmól/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 0,3 mól/1 taurin 4,60 5,52
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 0,3 mól/1 fruktóz 1,65 1,73
50 mmól/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 0,3 mól/1 aszkorbinsav 4,76 4,76
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmól/14-(amino-metil)-benzoesav 5,58 6,40
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 300 mmól/1 dimetil-biguanid 5,91 6,50
0,05 mól/1 trisz/HCl, pH 7,2 0,02 0,04
50 mmól/1 ammónium-hidrogén-karbonát 0,06 0,09
50 mmól/1 dinátrium-hidrogén-foszfát/foszforsav, pH 6 0,14 0,19
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmól/17-amino-heptánsav 5,07 7,00
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmól/1 δ-amino-valeriánsav 4,00 4,80
Puffer Aktivitás
MU/ml MU
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 10 mmól/1 y-amino-vajsav 3,18 4,13
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmól/11,6-diamino-hexán 5,20 6,30
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmól/15-amino-pentanol 6,00 6,00
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 50 mmól/1 guanidino-vajsav 3,24 3,90
50 mmól/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 50 mmól/1 EDTA 3,42 3,76
50 mmól/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 100 mmól/1 EDTA 5,07 5,8
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 0,3 mól/1 glükóz-amin 3,42 3,76
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 0,1 mól/1 timidin 2,40 2,88
50 mmól/1 Na-citrát/HCl, pH 6 0,79 0,98
50 mmól/1 Na-citrát/NaOH, pH 6 3 mól/1 fumársav 2,97 2,97
SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims (17)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás véralvadékok kezelésére szolgáló, glükozilezett protein bázisú, legalább 1,4 MU/ml t-PA-aktivitású és
    4,5-9 pH-jú gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy a t-PA-aktivitással rendelkező glükozilezett proteint vagy olyan t-PA-mutánst, amelynél az F, E, KI és K2, domének közül egy vagy több deletált, 5-100 mmól/liter citráttal és adott esetben sósavval és az alábbiak közül legalább eggyel formulázunk:
    a) 0,1-1 mól/1 aszkorbinsav
    b) 1-200 mmól/1 etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA)
    c) 0,01-0,5 mól/1 R1 R2N-R-X általános képletű ahol
    X jelentése szulfocsoport, hidrogénatom, aminocsoport vagy hidroxilcsoport,
    R jelentése 1-9 szénatomos alkilén-, 3-6 szénatomos cikloalkilén- vagy benzilidéncsoport, és
    Rl és R2 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-3 szénatomos alkilcsoport aminovegyületek,
    d) 10-200 mmól/1 guanidino-vajsav
    e) 50-400 mmól/1 dimetil-biguanid
    f) 0,5-20 mmól/I 7-amino-heptánsav, 8-amino-oktánsav, 4-(amino-metil)-benzoesav, δ-amino-valeriánsav, gamma-amino-vajsav
    g) 1-500 mmól/1 glükóz-amin, fruktóz,
    h) 1-300 mmól/1 pirimidin-nukleozidok és pirimidinnukleotidok,
    i) 1-1000 mmól/1 almasav, tejsav, fumársav vagy 2oxo-glutársav adott esetben szokásos gyógyszerészeti adalék-, segéd-, és/vagy hordozóanyagokkal együtt.
    HU 208 629 Β
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy aminovegyületként 2-amino-etánszulfonsavat (taurint), 4-amino-butanolt, 5-amino-pentanolt, 6-aminohexanolt, 1,9-diamino-nonánt, 1,8-diamino-oktánt, 1,7diamino-heptánt, 1,6-diamino-hexánt, 1,5-diamino-pentánt, 1,4-diamino-butánt vagy 1,3-diamino-propánt alkalmazunk.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy járulékosan egy vagy több aminosavat is alkalmazunk.
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmó/1 citrát-koncentrációt alkalmazunk.
  5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy még kloridionokat is alkalmazunk.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmól/16 pH-jú nátrium-citrátot és 0,1-1 mól/1, előnyösen 0,2-0,3 mól/1 aszkorbinsavat alkalmazunk.
  7. 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrátot és 1-200 mmól/1, előnyösen 10-100 mmól/1 EDTA-t alkalmazunk.
  8. 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmól/1 6 p H-jú nátrium-citrátot és 0, ΙΟ,5 mól/1, előnyösen 0,1-0,3 mól/1 taurint alkalmazunk.
  9. 9. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 10-100 mmól/1 4-amino-butanolt, 5-amino-pentanolt,
    6-amino-hexanolt, 1,3-diamino-propánt, 1,4-diaminobutánt, 1,5-diamino-pentánt, 1,6-diamino-hexánt, 1,7diamino-heptánt, 1,8-diamino-oktánt vagy 1,9-diaminononánt alkalmazunk.
  10. 10. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 10-200 mmól/1, előnyösen 50-100 mmól/1 guanidinovajsavat alkalmazunk.
  11. 11. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 50-400 mmól/1, előnyösen 100-300 mmól/1 dimetil-biguanidot alkalmazunk.
  12. 12. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 0,5-20 mmól/1, előnyösen 1-10 mmól/1 7-amino-heptánsavat, 8-amino-oktánsavát, δ-amino-valeriánsavat, gamma-amino-vajsavat vagy 4-(amino-metil)-benzoesavat alkalmazunk.
  13. 13. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 1-500 mmól/1, előnyösen 10-300 mmól/1 glükóz-amint vagy ffuktózt alkalmazunk.
  14. 14. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 1-300 mmól/1 timidint, citozint vagy uridint alkalmazunk.
  15. 15. az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és 1-1000 mmól/1, előnyösen 10-500 mmól/1 almasavat, tejsavat, fumársavat vagy 2-oxo-glutársavat alkalmazunk.
  16. 16. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 50 mmól/1 6 pH-jú nátrium-citrát/sósav puffért és az 1. igénypontban az a)—i) csoportokban felsorolt anyagok kombinációját alkalmazzuk.
    7. Az 1-16. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy egy t-PA-aktivitással rendelkező glükozilezett proteint legalább egy, az 1. igénypontban az a)—i) csoportokban felsorolt anyaggal együtt megfelelő gyógyszerészeti adagolási formává elkészítjük.
  17. 18. A17. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy gyógyszerészeti adagolási formaként az alapanyagokat injekciós oldattá vagy liofilizátummá alakítjuk.
HU912739A 1989-12-20 1990-12-19 Process for producing glycosylated protein-based pharmaceutical compositions with tpa-activating effect for treating blood clots HU208629B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3942142A DE3942142A1 (de) 1989-12-20 1989-12-20 Stabilisierung von glykosyliertem t-pa

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU208629B true HU208629B (en) 1993-12-28

Family

ID=6395925

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU912739A HUT60132A (en) 1989-12-20 1990-12-19 Process for producing glycosylated protein-based pharmaceutical composition having t-pa-activation and suitable for treating blood clots
HU912739A HU208629B (en) 1989-12-20 1990-12-19 Process for producing glycosylated protein-based pharmaceutical compositions with tpa-activating effect for treating blood clots

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU912739A HUT60132A (en) 1989-12-20 1990-12-19 Process for producing glycosylated protein-based pharmaceutical composition having t-pa-activation and suitable for treating blood clots

Country Status (9)

Country Link
US (1) US5409699A (hu)
EP (1) EP0458930B1 (hu)
JP (1) JPH0660107B2 (hu)
KR (1) KR920700682A (hu)
AU (1) AU625234B2 (hu)
CA (1) CA2046876A1 (hu)
DE (2) DE3942142A1 (hu)
HU (2) HUT60132A (hu)
WO (1) WO1991008767A1 (hu)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5270198A (en) * 1988-05-20 1993-12-14 Genentech, Inc. DNA molecules encoding variants of tissue plasminogen activators, vectors, and host cells
US5714145A (en) * 1988-09-02 1998-02-03 Genentech, Inc. Tissue plasminogen activator having zymogenic or fibrin specific properties
US5262170A (en) * 1988-09-02 1993-11-16 Genentech, Inc. Tissue plasminogen activator having zymogenic or fibrin specific properties and substituted at amino acid positions 296-299, DNA molecules encoding them, vectors, and host cells
DE3942141A1 (de) * 1989-12-20 1991-06-27 Boehringer Mannheim Gmbh K2p pro-stabilisierung
DE3942145A1 (de) * 1989-12-20 1991-06-27 Boehringer Mannheim Gmbh T-pa-solubilisierung
JP3559559B2 (ja) * 1992-06-03 2004-09-02 ジェネンテク，インコーポレイテッド 向上した治療特性を有する組織プラスミノーゲン活性化因子グリコシル化変異体
US5679344A (en) * 1995-07-20 1997-10-21 Susan K. Williams Glucosamine composition and method
US6527979B2 (en) * 1999-08-27 2003-03-04 Corazon Technologies, Inc. Catheter systems and methods for their use in the treatment of calcified vascular occlusions
CA2403533C (en) * 2000-03-20 2014-12-30 Corazon Technologies, Inc. Methods and systems for enhancing fluid flow through an obstructed vascular site

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0156169B1 (en) * 1984-02-29 1991-12-18 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha An aqueous solution of a tissue plasminogen activator dissolved therein at an increased concentration and a method
PT82429B (pt) * 1985-04-22 1988-03-03 Genentech Inc Novos mutantes do activador de plasmionogenio de tecido humano
BE904831A (fr) * 1985-05-28 1986-11-27 Wellcome Found Composition d'activateur tissulaire du plasminogene.
US4929444A (en) * 1985-05-28 1990-05-29 Burroughs Wellcome Co. Low pH pharmaceutical formulation containing t-PA
ZW14486A1 (en) * 1985-07-29 1986-10-22 Smithkline Beckman Corp Pharmaceutical dosage unit
US4960702A (en) * 1985-09-06 1990-10-02 Codon Methods for recovery of tissue plasminogen activator
JPH0672105B2 (ja) * 1985-10-02 1994-09-14 持田製薬株式会社 血栓溶解剤及びその製法
US4777043A (en) * 1985-12-17 1988-10-11 Genentech, Inc. Stabilized human tissue plasminogen activator compositions
US4927630A (en) * 1986-02-26 1990-05-22 Monsanto Company Tissue plasminogen activator from normal human colon cells
US5132214A (en) * 1986-04-09 1992-07-21 Monsanto Company Large scale production of plasminogen activator from normal human colon cells
JPH0678241B2 (ja) * 1986-04-02 1994-10-05 エーザイ株式会社 ｔＰＡ医薬組成物
US5149533A (en) * 1987-06-04 1992-09-22 Zymogenetics, Inc. Modified t-PA with kringle-/replaced by another kringle
DE3718889A1 (de) * 1987-06-05 1988-12-22 Behringwerke Ag Verfahren zur herstellung einer loesung hoher spezifischer volumenaktivitaet von einem protein mit gewebe-plasminogenaktivator (t-pa)-aktivitaet, loesung, enthaltend protein mit t-pa-aktivitaet und verwendung der loesung in der human- und veterinaermedizin
US4935237A (en) * 1988-03-21 1990-06-19 Genentech, Inc. Processes for the preparation of t-PA mutants
US5100666A (en) * 1987-10-09 1992-03-31 Monsanto Company Modified tissue plasminogen activator K2K2SP
AU4187389A (en) * 1988-08-02 1990-03-05 Invitron Corporation Method for preparing tpa compositions
US5130143A (en) * 1988-11-04 1992-07-14 The Research Foundation Of State University Of New York Use of a low affinity-heparin fraction in conjunction with t-pa for thrombolytic therapy
US4980165A (en) * 1989-01-27 1990-12-25 Genetics Institute, Inc. Pharmaceutical formulations of plasminogen activator proteins

Also Published As

Publication number Publication date
HUT60132A (en) 1992-08-28
JPH0660107B2 (ja) 1994-08-10
CA2046876A1 (en) 1992-06-20
WO1991008767A1 (de) 1991-06-27
AU625234B2 (en) 1992-07-02
AU6914891A (en) 1991-07-18
JPH04506974A (ja) 1992-12-03
KR920700682A (ko) 1992-08-10
US5409699A (en) 1995-04-25
DE59003161D1 (de) 1993-11-25
EP0458930A1 (de) 1991-12-04
HU912739D0 (en) 1992-01-28
DE3942142A1 (de) 1991-06-27
EP0458930B1 (de) 1993-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2739050B2 (ja) 抗血液凝固剤
HU208629B (en) Process for producing glycosylated protein-based pharmaceutical compositions with tpa-activating effect for treating blood clots
US4898826A (en) Method to solubilize tissue plasminogen activator
KR890000103A (ko) 조직 플라스미노겐 활성화제(t-PA) 활성을 갖는 단백질의 고농도 용액의 제조방법, t-PA 활성을 갖는 단백질을 함유하는 용액, 및 인체 및 수의약제에 있어서 용액의 용도
EP0218112B1 (en) Composition containing tissue plasminogen activator
US5352452A (en) Stabilized compositions containing non-glysylated human tissue type plasminogen activator derivative K2P pro
HU208637B (en) Process for producing pharmaceutical compositions containing t-pa activity protein without glycosilyzing
US5366730A (en) Stabilized compositions having human tissue type plasminogen activator enzymatic activity
HU208638B (en) Process for producing pharmaceutical compositions containing t-pa derivative kik2p protein without glycosilyzing applicable for solving blood clot
KR930008908B1 (ko) 조직형 플라스미노겐 활성화제 또는 그의 유도체를 함유하는 혈전용해 조성물
HU208630B (en) Process for producing protein-based pharmaceutical compositions with tpa-activating effect for treating blood clots
JPH04503525A (ja) グリコシル化されていないｔ―ＰＡ誘導体Ｋ１Ｋ２Ｐｐｒｏの製薬学的製剤および医薬品ならびに該製剤の製造方法
JPH05967A (ja) 組織プラスミノーゲンアクチベーター含有製剤組成物

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee