HU203352B

HU203352B - Nematocidal, acaricidal and pesticidal compositions comprising new macrolide compounds and process for producing macrolide compounds and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient

Info

Publication number: HU203352B
Application number: HU884654A
Authority: HU
Inventors: Michael V J Ramsay; Edward P Tiley; Derek R Sutherland
Original assignee: American Cyanamid Co
Priority date: 1987-09-11
Filing date: 1988-09-09
Publication date: 1991-07-29
Also published as: CA1329592C; GB8721377D0; DE3851190D1; ATE110384T1; AU2208488A; AU621061B2; BR8804668A; DK505088A; HUT48253A; EP0307225A3; DK505088D0; ES2058297T3; ZA886743B; PT88463B; EP0307225A2; EP0307225B1; DD274225A5; PT88463A; KR890005120A; DE3851190T2

Description

A találmány tárgya eljárás új parazitaellenes vegyületek és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására, valamint az új hatóanyagokat tartalmazó nematocid és akarocid készítmények.

A 2 166 436A számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban az S541 antibiotikum termelését ismertetik, amely egy új Streptomyces faj fermentálásának termékeként nyerhető.

Azt találtuk, hogy a vegyületeknek egy új köre, amely az S541 antibiotikumból kémiai módosításokkal állítható elő, parazitaellenes hatású és/vagy más aktív vegyületek előállításának köztitermékeként alkalmazható.

A találmány tárgya egyrészt az (I) általános képletú vegyületek és bázikus sóik előállítása. Az (I) általános képletben

R¹ jelentése metil-, etil- vagy izopropilcsoport,

R² jelentése piridil-, tienil- vagy mono-nitro-fenilcsoporttal helyettesített 1-4 szénatomos alkilcsoport és az =NOR² csoport E konfigurációjú.

Az (I) általános képletű vegyületekben R¹ előnyös jelentése izopropilcsoport.

R² előnyös jelentése az (I) általános képletű vegyületekben p-nitro-benzil- vagy tienil-metil-csoport.

Különösen előnyösek azok a (I) általános képletű vegyületek, amelyekben R² jelentése p-nitro-benzilcsoport.

Különösen fontos az az (I) általános képletű vegyűlet, amelyben R¹ jelentése izopropilcsoport és R^J jelentése p-nitro-benzil-csoport.

Amint azt az előzőekben már említettük, a találmány szerint előállítót vegyületek parazitaellenes hatású anyagokként és/vagy más aktív vegyületek előállításának köztitermékeiként használhatók. Ha a találmány szerint előállított vegyületeket köztitermékekként alkalmazzuk, az 5-helyzetű hidroxilcsoport védett. Ezek a vegyületek az oltalmi körön kívül esnek. Megjegyezzük, hogy az ilyen csoportoknak a lehető legkevesebb további funkciós hellyel szabad csak rendelkezniük, hogy a további reagálás lehetőségét elkerüljük, továbbá ezekből a csoportokból a hidroxilcsoportnak szelektíven regenerálhatónak kell lennie. A védett hidroxilcsoportok jól ismertek, ezekre példák például a Theodora W. Greene: „Protective Groups in Organic Synthesis” (Wiley-Interscience, New York, 1981) és J.F.W. McOmie: „Protective Groups in Organic Chemistry” (Plenum Press, London, 1973) szakirodalmi helyeken találhatók. Az -OR³ képletű védett hidroxilcsoportok közé tartoznak például a fenoxi-acetoxi-csoport, a szilil-oxi-acetoxi-csoport, így a trimetil-szilil-oxi-acetoxi- és a terc-butil-dimetil-szilil-oxiacetoxi-csoport és a szilil-oxi-csoportok, például a trimetil- szilil-oxi- és a terc-butil-dimetil-szilil-oxi-csoport. Köztitermékekként általában az ilyen csoportokkal bíró találmány szerint előállított vegyületeket alkalmazzuk. Más csoportok, például az acetoxicsoport is szolgálhatnak a hidroxilcsoportok védőcsoportjául, de a végtermékben is jelen lehetnek.

A találmány szerint előállított vegyületek parazitaellenes aktivitással bírnak, például antihelmintikus aktivitásúak, hatásosak például nematódák ellen, különösen endoparazita és ektoparazita ellenes ektivitásuk jelentős.

A fentieknek megfelelően a találmány szerint előállított vegyületek állatok és ember endoparazitás és/vagy ektoparazitás fertőzéseinek kezelésére alkalmasak.

Az ektoparaziták és az endoparaziták embert és számos állatot fertőznek meg, különösen elterjedtek a tenyészállatok között, például sertések, juhok, marhák, kecskék és szárnyasok (pl. csirkék és pulykák), lovak, nyulak, vadon és fogságban élő madarak körében, valamint háziállatok, például kutyák, macskák, tengerimalacok, verseny-egerek és hörcsögök körében. Az állatállomány parazitás fertőzése, amely anémiához, alultápláltsághoz és súlyvesztéshez vezet, világszerte a gazdasági veszteségek egyik fő okozója. Állatok és/vagy emberek körében endoparazitás fertőzést okozó nemzetségek például az Ancylostoma, Ascaridia, Ascaris, Aspicularis, Brugia, Bunostomum, Capillaria, Chabertia, Cooperia, Dictyocaulus, Dirofilaria, Dracunculus, Enterobius, Haemonchus, Heterakis, Loa, Necator, Nematodirus, Nematospiroides (Heligomoroides), Nippostrongylus, Oesophagostomum, Onchocerca, Ostertatia, Oxyuris, Parascaris, Strongylus, Strongyloides, Syphacia, Toxascaris, Toxocara, Trichonema, Trichostrongylus, Trichinella, Trichuris, Triodontophorus, Uncinaria és a Wuchereria nemzetségek.

Az állatokat és/vagy az embert megfertőző ektoparaziták közé tartoznak például az ízeltlábú ektoparaziták, így például a csípő rovarok, a húslégy, a bolhák, a tetvek, az atkák, a szívó rovarok, a kullancsok, továbbá más kétszámyú rovarok. Az állatoknál és/vagy embernél ektoparazitás fertőzést okozó nemzetségek például az Ambylomma, Boophilus, Chorioptes, Culliphore, Demodex, Damalinia, Dermatobia, Gastropilus, Haematobia, Haematopinus, Haemophysalis, Hyaloma, Hypoderma, Ixodes, Linognatus, Lucilia, Melophagus, Oestrus, Otobius, Otodectes, Psorergates, Psoroptes, Rhipicephalus, Sarcoptes, Stomosys és a Tabanus nemzetség.

Azt találtuk, hogy a találmány szerint előállított vegyületek mind in vitro, mind in vivő hatásosak az endoparaziták és az ektoparaziták egész sora ellen. A találmány szerint előállított vegyületek antibiotikus aktivitása kimutatható például szabadon élő nematódák, így caenorhabiditis elegáns ellen kifejtett aktivitásuk révén. Közelebbről, azt találtuk, hogy a találmány szerint előállított vegyületek in vivő hatásosak parazita nematódák ellen, például Nematospiroides dubius-szal szemben.

A találmány szerint előállított vegyületek alkalmasak még atkák és nematódák mezőgazdaságban, kertészetben, erdőgazdaságban, közegészségügyben vagy tárolt termékek esetén való pusztítására is. Eredményesen kezelhetők a növényi terményeken, például gabonaféléken (így búzán, árpán, kukoricán és rizsen),

HU 203 352 Β gyapoton, dohányon, zöldségféléken (pl. szóján), gyümölcsökön (pl. almán, szólón és citrusféléken), valamint gyökémövényeken (pl. cukorrépán és burgonyán) előforduló gyümölcsatkák és a levéltetvek, például az Aphis fabae, Aulacorthum circumflexum, Myzus persicae, Nephotettix cincticeps, Nilparvata lugens, Panonychus ulmi, Phorodon humuli, Phyllocopotruta oleivora, Tetranychus urticae és a Trialeuroides nemzetség tagjai; a nematódák, például az Aphelencoides, dobodéra, Heterodera, Meloidogyne és a Panagrellus nemzetség tagjai,

A találmány tárgya a fentieknek megfelelően a parazitaellenes szerként alkalmazható (I) általános képletű vegyületek előállítása. Ezek a vegyületek különösen állatok és ember endoparazitás, ektoparazitás és/vagy gombás fertőzéseinek kezelésére, a mezőgazdaságban, kertészetben és erdőgazdaságban atkák és nematódák pusztítására használhatók.

A találmány szerint előállított vegyületek bármely állatgyógyászati vagy humán gyógyászati célra alkalmas formára formálhatók, ennek megfelelőén a találmány oltalmi körébe tartozik a humán gyógyászati vagy állatgyógyászati célra szolgáló gyógyászati készítmények előállítása is. Ezek a készítmények szokásos módon, egy vagy több megfelelő hordozó- és/vagy egyéb segédanyag alkalmazásával állíthatók elő. A találmány szerint előállított készítmények közül különösen azok fontosak, amelyek parenterális adagolásra (beleértve az intramammális adagolást), orális, rektális vagy helyi adagolásra, implantátumként való felhasználásra, fülbe vagy orrba alkalmazva vagy húgy-ivarszervi úton való alkalmazásra szolgálnak.

A találmány szerint előállított vegyületek állatgyógyászati és humán gyógyászati célra is formálhatók injekciós készítményekké, kiszerelhetők egységdózis formájában ampullákba vagy más egységdózis-tartályokba vagy több-dózisú tartályokba, kívánt esetben ezek a készítmények tartósítószereket is tartalmazhatnak. Az injekciós készítmények lehetnek szuszpenziók, oldatok vagy emulziók, tartalmazhatnak olajos vagy vizes hordozóanyagokat és tartalmazhatnak még formálást elősegítő anyagokat, például szuszpendálószereket, stabilizálószereket, oldódást elősegítőés/vagy diszpergálószereket. Más megoldás szerint a hatóanyag lehet steril por formájú, amelyet alkalmazás előtt megfelelő hordozóanyaggal, pl. steril, pirogénmentes vízzel rekunstituálnak. Az olajos hordozóanyagok közé tartoznak a polihidroxi-alkoholok, ezek észterei, például a glicerin- észterek, zsírsavak, növényi olajok, például földimogyoróolaj vagy gyapotmagolaj, ásványi olajok, például folyékony paraffin és etil-oleát, valamint más hasonló vegyületek. Alkalmazhatók más hordozóanyagok is, például propilén-glikol.

Az állatgyógyászati felhasználásra szánt készítmények formálhatók intramammális készítményekké is, ezek lehetnek elnyújtott hatásúak vagy gyorsan felszabaduló készítmények és lehetnek steril oldatok vagy szuszpenziók vizes vagy olajos hordozóanyagban, és a készítmények adott esetben tartalmazhatnak sűrítővagy szuszpendálószereket, például lágy vagy kemény paraffinokat, méhviaszt, 12-hidroxi-sztearint, hidrogénezett ricinusolajat, alumínium-sztearátokat vagy glicerin- monosztearátot. A szokásos nemionos, kationos vagy anionos felületaktív szerek a készítményekben alkalmazhatók önmagukban vagy kombinációkban.

A találmány szerint előállított hatóanyagok állatgyógyászati vagy humán gyógyászati célra is formálhatók orális adagolásra alkalmas készítményekké, például oldatokká, szuszpenziókká vagy szirupokká, vagy száraz porokká, amelyek vízzel vagy más alkalmas hordozóanyaggal használat előtt felvehetők, adott esetben ezek a készítmények tartalmazhatnak ízesítő- és színezőanyagokat is. Szilárd készítmények, például tabletták, kapszulák, pasztillák, pilulák, nagy pilulák, porok, pépek, granulátumok, golyók vagy premix készítmények is alkalmazhatók. Az orális alkalmazásra szolgáló szilárd vagy folyékony készítmények a gyógyszerkészítésben ismert módon állíthatók elő. Ezek a készítmények tartalmazhatnak egy vagy több gyógyászati célra alkalmas hordozó- és egyéb segédanyagot, amely lehet szilárd vagy folyékony. A gyógyászati célra alkalmas hordozóanyagok közé tartoznak például szilárd dózisformák esetén a kötőanyagok, például az előzselatinizált kukoricakeményítő, a poli(vinil- pirrolidon) vagy a hidroxi-propil-metil-cellulóz; a töltőanyagok, például a laktóz, mikrokristályos cellulóz vagy kalcium-foszfát; a csúszást elősegítő szerek, például a magnézium-sztearát, talkum vagy szilícium-dioxid; a szétesést elősegítő szerek, pl. a burgonyakeményítő vagy a nátrium-keményítő-glikolát; valamint nedvesítőszerek, például nátrium-lauril-szulfát. A tabletták ismert eljárással bevonattal is elláthatók.

Folyékony dózisfonnák készítése esetén alkalmazható, gyógyászati szempontból megfelelő adalékanyagok például a szuszpendálószerek, például a szorbitszirup, a metil-cellulóz vagy a hidrogénezett ehető zsírok; az emulgeálószerek, például a lecitin vagy az akácmézga; a nemvizes hordozóanyagok, például a mandulaolaj, olaj-észterek vagy etil-alkohol; a tartósítószerek, például a metil- vagy propil-p-hidroxi-benzoátok vagy a szorbinsav; valamint a stabilizáló- és az oldódást elősegítő szerek.

Az orális adagolásra szolgáló pépek szakember számára ismert módon formálhatók. Az ezek készítésére használható, gyógyászati szempontból megfelelő adalékanyagok közé tartoznak például a szuszpendálóvagy gélesítőszerek, például az alumínium- disztearát vagy a hidrogénezett ricinusolaj; a diszpergálószerek, például a poliszorbátok; a nemvizes hordozóanyagok, például a földimogyoróolaj és az olaj-észterek; stabilizálószerek és oldódást elősegítő szerek. A találmány szerint előállított vegyületek állatgyógyászati adagolása úgy is megoldható, hogy ezeket az állat napi szilárd vagy folyékony étrendjébe, például a napi tápba vagy ivóvízbe keverjük.

A találmány szerint előállított vegyületek állatgyógyászatban adagolhatók orálisan folyékony készítmények, például oldatok, szuszpenziók vagy diszperziók formájában, amelyek a hatóanyagot és gyógyászati

HU 203 352 Β célra alkalmas hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokat tartalmaznak.

Formálhatók továbbá a találmány szerint előállított vegyületek kúpokká is, amelyek a humán- vagy állatgyógyászatban szokásos kúp alapanyagokat tartalmazzák, valamint formálhatók pesszáriumokká, például szokásos pesszárium alapanyagot tartalmazó készítményekké.

Formálhatók a találmány szerint előállított vegyületek helyi alkalmazásra szolgáló készítményekké állatgyógyászati vagy humán célú felhasználásra, így készíthetők kenőcsök, krémek, lemosó oldatok, samponok, porok, pesszáriumok, permetek, merítőfürdők, aeroszolok, cseppek (például szembe vagy orrba adagolható cseppek), továbbá leöntő készítmények. A kenőcsök és krémek formálhatók például vizes vagy olajos alapon, megfelelő sűrítő- és/vagy gélesítőszerek alkalmazásával. A szem kezelésére szolgáló kenőcsöket steril körülmények között sterilezett komponensekből állítjuk elő. A leöntésre szolgáló készítményeket formálhatjuk állatgyógyászati alkalmazásra például szerves oldószereket tartalmazó olajokban, amelyek adott esetben formálási segédanyagokat, például stabilizálószereket és oldódást elősegítő szereket tartalmaznak. A lemosószer készítményeket vizes vagy olajos alapon formálhatjuk, és ezek általában egy vagy több emulgeálószert, stabilizálószert, diszpergálószert, szuszpendálószert, sűrítőanyagot vagy színezéket tartalmaznak.

Porok formálhatók megfelelő por-alapanyaggal. Cseppek formálhatók vizes vagy nemvizes alapon, tartalmazhatnak a cseppek még egy vagy több diszpergálószert, stabilizálószert, oldódást elősegítő szert vagy szuszpendálószert. Tartalmazhatnak továbbá a csepp-készítmények konzerválószereket is.

Inhalációs úton való helyi alkalmazásra a találmány szerint előállított vegyületeket mind állatgyógyászati, mind humán gyógyászati célra aeroszolos permetekké formáljuk vagy inszulfátorba szereljük ki.

A találmány szerint előállított vegyületek más, gyógyászatilag aktív anyagokkal kombinálva is alkalmazhatók. A találmány szerint előállított vegyűletekből alkalmazott teljes napi dózis mind állatgyógyászati, mind humán gyógyászati felhasználás esetén célszerűen 1-2000 pg/testtömeg kg, előnyösen 501000 pg/testtömeg kg, ez az adag napi 1-4 alkalomra elosztva adagolható.

A találmány szerint előállított vegyületek bármely célszerű módon kertészeti vagy mezőgazdasági felhasználásra alkalmas készítményekké formálhatók, így a találmány oltalmi körébe tartoznak a kertészeti vagy mezőgazdasági felhasználásra alkalmas készítmények is. Az ilyen készítmények lehetnek szárazak vagy folyékonyak, például finom porok, beleértve ebbe a finom port vagy koncentrátumot; porok, köztük az oldható vagy nedvesíthető porok; granulátumok, beleértve a mikrogranulátumokat és a diszpergálhatő granulátumokat; pelletek, folyékony készítmények, emulziók, például híg emulziók vagy emulgeálható koncentrátumok, merítő fürdők, például győkér-merítő fürdő és vetőmag-merítő fürdő, vetőmag öntetek, vetőmag pel4 lek, olajkoncentrátumok, olajoldatok, injekciós készítmények, például gyökérinjekciók, permetek, füstök és ködök.

Ezek a készítmények általában a hatóanyagot megfelelő hordozó- vagy hígítóanyaggal elegyítve tartalmazzák. A hordozóanyagok lehetnek folyékonyak vagy szilárdak, céljuk a hatóanyag alkalmazásának elősegítése azáltal, hogy elősegítik annak az alkalmazás helyén való diszpergálását vagy olyan készítmény kialakítását teszik lehetővé, amelyet a felhasználó alkalmazás előtt diszpergálhatő készítménnyé alakíthat. Az ilyen készítmények szakember számára jól ismertek, ismert eljárásokkal előállíthatók, például a hatóanyagoknak a hordozó- vagy hígítóanyaggal, például szilárd hordozóanyaggal, oldószerrel vagy felületaktív anyaggal való elegyítése és/vagy őrlése révén létrehozhatók.

A finom por, granulátum és por-készítmények formálásához felhasználható megfelelő szilárd hordozóanyagok közé tartoznak például a természetes ásványi töltőanyagok, így a kovaföld, a talkum, a kaolinit, a montmorillonit, a pirofillit vagy az attapulgit. Kívánt esetben a készítmények tartalmazhatnak erősen diszpergált kovasavat vagy erősen diszpergált abszorbens polimereket. Az alkalmazható granulált abszorptív hordozóanyagok közé tartoznak a porózus hordozóanyagok, például a habkő, az aprított tégla, a szepiolit vagy a bentonit, vagy a nemporózus anyagok, például a kalcit vagy a homok. A megfelelő, használható előre granulált anyagok lehetnek szervesek vagy szervetlenek, ezek közé tartoznak például a dolomit és az aprított növényi maradékok.

Hordozó- vagy hígítóanyagokként alkalmazható megfelelő oldószerek például az aromás szénhidrogének, az alifás szénhidrogének, az alkoholok és glikolok vagy ezek éterei, észterek, ketonok, savamidok, erősen poláris oldószerek, adott esetben epoxidált növényi olajok és a víz.

A szokásos nemionos, kationos vagy anionos felületaktív szerek, például az etoxilált alkil-fenolok és alkoholok, az alkil-benzol- szulfonsavak, lignoszulfonsavak vagy szulfoborostyánkősavak alkálifém- vagy alkáliföldfém-sói vagy a polimer fenolok szulfonátjai, amelyek jó emulgeáló, diszpergáló és/vagy nedvesítő tulajdonságokkal bírnak, ugyancsak alkalmazhatók a készítményekben önmagukban vagy kombinációik formájában.

Kívánt esetben tartalmazhatnak a készítmények stabilizálószereket, összesülést gátló szereket, habzásgátló szereket, viszkozitás-szabályzókat, kötőanyagokat, tapadást elősegítő szereket, fotostabilizátorokat, műtrágyákat, táplálkozást fokozó anyagokat vagy más hatóanyagokat is. A találmány szerint előállított vegyületek formálhatók más inszekticidekkel, akaricidekkel és nematocidekkel elegyítve is.

A készítményekben a hatóanyag koncentrációja 0,01 és 80 tömeg% közötti, előnyösen 0,01 és 40 tömeg% közötti.

A készítmények kereskedelmi forgalomba általában koncentrált formában kerülnek, amely koncentrátumot

HU 203 352 Β felhasználás előtt megfelelően, például 0,001-0,0001 tömeg% koncentrációra meg kell hígítani.

A találmány tárgyát képezi egyrészt az (I) általános képletű vegyületek előállítása egy (II) általános képletű vegyüietnek - a képletben R¹ jelentése az előzőekben megadott - egy H2NOR² általános képletű vegyülettel - R² az előzőekben megadott - való reagáltatásával.

A reagáltatást célszerűen -20 és +100 ’C közötti, például -10 és +50 *C közötti hőmérsékleten megfelelő oldószerben hajtjuk végre. A H2NOR² reagenst célszerűen sója formájában, például savaddiciós sóként, így hidrogén-klorid-só formájában alkalmazzuk. Ha ilyen sót alkalmazunk, a reagáltatást végezhetjük savmegkötő anyag jelenlétében.

Az alkalmazható oldószerek közé tartoznak az alkoholok, például a metanol vagy az etanol, az amidok, például az N,N-dimetil-formaniid, az N,N-dimetil-acetamid vagy a hexametil-foszforamid, az éterek, például a gyűrűs éterek, így a tetrahidrofurán vagy a dioxán, valamint az aciklusos éterek, így a dimetoxi-etán vagy dietil-éter, a nitrilek, például az acetonitril, a szulfonok, például a szulfolán és a szénhidrogének, például a halogénezett szénhidrogének, így a metilén-klorid, valamint az ilyen oldószerek közül kettőnek vagy többnek az elegyei. Segédoldószerként víz is alkalmazható.

Ha vizes közeget alkalmazunk, a reagáltatást célszerűen pufferolás mellett, megfelelő sav, bázis vagy puffer alkalmazásával végezzük.

A megfelelő savak közé tartoznak az ásványi savak, így a hidrogén-klorid vagy a kénsav és a karbonsavak, például az ecetsav. Megfelelő bázisok például az alkálifém-karbonátok és -hidrogén-karbonátok, például a nátrium-hidrogén-karbonát, a hidroxidok, például a nátrium-hidroxid és az alkálifém- karboxilátok, például a nátrium-acetát. Megfelelő puffer például a nátrium-acetát/ecetsav puffer.

A (Π) általános képletű vegyületek és védett 5-hidroxil- származékaik előállíthatók a (III) általános képletű vegyületek oxidálásával - a képletben R¹ jelentése az előzőekben megadott és az 5-helyzetű hidroxilcsoport adott esetben védett -, majd kívánt esetben az olyan kapott (II) általános képletű vegyületről, amelyben az 5-helyzetű hidroxilcsoport védett, a védőcsoport eltávolításával.

A reagáltatást olyan oxidálószerrel végezzük, amely egy szekunder hidroxilcsoportnak oxocsoporttá való alakítására alkalmas, miközben egy (Π) általános képletű vegyűlet keletkezik.

A megfelelő oxidálószerek közé tartoznak a kinonok víz jelenlétében, például a 2,3-diklór-5,6-diciano1,4-benzokinon vagy a 2,3,5,6-tetraklór-l,4-benzokinon; a króm(VI)-vegyület oxidálószerek, például a piridínium-dikromát vagy a króm-trioxid piridinben; a mangán(IV)-vegyület oxidálószerek, például a mangán-dioxid diklór-metánban; valamely N-halogénszukcinimid, például N-klór-szukcinimid vagy Nbróm-szukcinimid; a dialkil- szulfoxidok, például a dimetil-szulfoxid, valamely aktiválószer, például

Ν,Ν’-diciklohexil-karbodiimid vagy acil-halogenid, például oxalil-klorid jelenlétében; valamint piridinkén-trioxid komplex.

A reagáltatást célszerűen megfelelő oldószerben végezzük, amely lehet például keton, például aceton; éter, például dietil-éter, dioxán vagy tetrahidrofurán; szénhidrogén, például hexán; halogénezett szénhidrogének, például kloroform vagy metilén- klorid; észter, például etil-acetát vagy helyettesített amid, például dimetil-formamid. Ezen oldószerek elegyei is alkalmazhatók önmagukban vagy vízzel elegyítve. Az oldószer megválasztása az átalakításhoz alkalmazott oxidálószer megválasztásán múlik.

A reagáltatást általában -80 ’C és +50 'C közötti hőmérsékleten végezzük.

Az (I) általános képletű savak sóit szokásos eljárásokkal állítjuk elő, például a savat egy bázissal reagáltatjuk vagy egy sót egy másik sóvá alakítunk.

A (ΙΠ) általános képiéül vegyületek, az S541 jelölésű antibiotikum köztitermékei, a 2 166 436A számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban ismertetett fermentációs és izolálási eljárással állíthatók elő.

Azt a (ΙΠ) általános képletű S541 antibiotikum köztiterméket, amelyben R¹ jelentése izopropilcsoport a továbbiakban A faktor névvel jelöljük.

A továbbiakban a találmány szerinti eljárást példákban mutatjuk be.

1. Referenciapélda

5-Acetoxi-A faktor előállítása

3,0 g A faktor 20 ml piridinben készült oldatához -5 'C hőmérsékleten hozzáadunk 8 ml ecetsavanhidridet, és a kapott oldatot 3 °C hőmérsékleten 20 órán át állni hagyjuk. Ezután az oldathoz 100 ml benzolt adunk, majd vákuumban bepároljuk. A kapott olajat szilícium-dioxidon kromatografáljuk, eluensként diklór-metán és aceton 40:1 arányú elegyét alkalmazzuk, így 2,06 g 5-acetoxi-A faktort nyerünk, amely 10% 5,23-diacetoxi-A faktort tartalmaz. A vegyületeket fordított fázisú preparatív nagynyomású vékonyréteg-kromatográfiás eljárással elkülönítjük. így 79%-os hozammal nyerjük a cím szerinti terméket.

X^fEtOH) 244,5 nm (EE| 462), 8(CDC1₃) többek között 2,14 (s, 3H), m/z többek között 654, 594 és 576.

2. Referenciapélda

S-Acetoxi-23-keto-A faktor előállítása

1,96 ml oxalil-klorid 25 ml száraz diklór-metánban készült oldatához -70 ’C hőmérsékleten nitrogéngázatmoszférában hozzácsepegtetjük 3,19 ml dimetilszulfoxid 15 ml száraz diklór-metánban készült oldatát, majd hozzácsepegtetünk 30 ml száraz diklór-metánban oldott 4,91 g, az 1. referenciapélda szerint előállított terméket. A kapott oldatot -70 ‘C hőmérsékleten 1,5 órán át keverjük, majd hozzácsepegtetjük

12,6 ml trietil-amin 40 ml száraz diklór-metánban készült oldatát. A reakcióelegyet 1,25 órán át hűtés nélkül keverjük, majd 500 ml hideg víz és 500 ml éter elegyébe öntjük. A vizes fázist kétszer 200 ml éterrel

HU 203 352 Β extraháljuk, az egyesített szerves fázisokat négyszer 200 ml vízzel, majd 500 ml nátrium-klorid-oldattal mossuk, szárítjuk, majd bepároljuk. Az így kapott habot szilícium-dioxidon kromtografáljuk, eluensként diklór-metán és aceton 50:1 arányú elegyét alkalmazzuk. így 3,4 g cím szerinti vegyületet nyerünk.

8(CDC1₃) többek között 3,33 (m, IH), 3,49 (m, IH), 3,70 (dlO, IH) és 5,52 (d5 IH), m/z többek között 652, 634, 609, 591, 574, 482, 263, 235 és 151.

3. Referenciapélda

23-Keto-A faktor előállítása

276 mg, a 2. referenciapélda szerint előállított terméket 5 ml metanolban oldunk és 0 ’C hőmérsékleten hozzácsepegtetjük 0,42 ml n-nátrium-hidroxid 1,0 ml metanolban készült oldatát. Az oldatot 5 ’C hőmérsékleten 5 órán át állni hagyjuk, majd hideg vízbe öntjük. Az elegyet éterrel és etil-acetáttal extraháljuk, a szerves fázisokat egyesítjük, nátrium-klorid oldattal mossuk, szárítjuk, majd bepároljuk. A visszamaradó szilárd anyagot preparatív vékonyréteg-kromatográfiás eljárással tisztítjuk, kifejlesztőszerként diklór-metán és aceton 10:1 arányú elegyét alkalmazzuk. így 140 mg cím szerinti vegyületet nyerünk.

6(CDC1₃) többek között 3,28 (m, IH), 3,48 (m, IH), 3,70 (dlO, IH) és 4,28 (tr7, IH), m/z többek között 592, 549, 482, 370, 263, 235 és 151.

4. Referenciapélda

5-Acetoxi-23[E]-hidroxi-imino-A faktor előállítása

A cím szerinti vegyületet a 2. referenciapélda szerint előállított terméknek hidroxil-amin-hidrogén-kloriddal való reagáltatásával állítjuk elő, a reagáltatást a következőkben ismertetendő 1. példa szerint végezzük. A nyersterméket kromatográfiás eljárással tisztítjuk Merck Kieselgel 60-on (0,037-0,062 mm), eluensként etil-acetát és acetonitril 4:1 arányú elegyét alkalmazzuk. Ily módon a cím szerinti vegyületet színtelen hab formájában nyerjük.

5(CDC1₃) többek között 8,12 (s, IH), 5,5-5,6 (m, 2H), 3,42 (dl5, IH), 2,16 (s, 3H).

5. Referenciapélda

23[E]-Benzil-oxi-imino-A faktor előállítása

203 mg, a 3. referenciapélda szerint előállított terméket 20 ml metanolban oldunk, és az oldathoz hozzáadunk 151 mg nátrium- acetátot és 306 mg benziloxi-amin-hidrogén-kloridot. Az oldatot 20 ’C hőmérsékleten 3 órán át keverjük, mintegy 7 ml-re pároljuk be, majd 40 ml etil-acetáttal meghígítjuk, és 0,5 n hidrogén- kloriddal, majd vízzel mossuk. A szerves fázist elkülönítjük, szárítjuk, majd besűrítjük. így 228 mg piszkosfehér habot nyerünk, amelyet 80 ml térfogatú Merck Kieselgel 60-on (0,037-0,062 mm) kromatografálva tisztítunk. Eluensként hexán és etil-acetát 3:2 arányú elegyét alkalmazzuk.

(a$+119’ (c-l,21, CHCI₃), k™ (EtOH) 244 nm (ε 29 500), (CHBr₃) 3540, 3450 (OH), 1704 (C-O) és 990 cm·¹ (C-O),8(CDC1₃) többek között 7,27,4 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,29 (t6, IH), 3,96 (d, IH)

3,41 (dl4, IH), 0,99 (d6, 3H), 0,96 (d6, 3H), 0,89 (dó, 3H).

Az 1-3. példák termékeit az 5. referenciapéldában leírthoz hasonló módon állítjuk elő a 3. referenciapélda termékéből és a megfelelő oxim-hidrogén-kloridból.

1. példa

23[E]-4-piridil-metoxi-imino-A faktor előállítása

4-piridil-metoxi-amin-hidrogén-klorid alkalmazásával a cím szerinti vegyületet fehér hab formájában nyerjük.

(a$+106° (c-0,93, CHCb), (EtOH) 244 nm (ε 30 400), Vm« (CHBr₃) 3540, 3460 (OH), 1710 (C-O) és 994 cm’¹ (C-O), ö(CDCb) többek között 8,52 (d6,2H), 7,25 (d6, 2H), 5,20, 5,11 (ABq 15, 2H), 4,30 (d6, IH), 3,96 (d6, IH), 3,47 (dl4, IH), 1,00 (d6, 3H), 0,96 (d6, 3H), 0,84 (d6, 3H).

2. példa

23[E]-2-tienil-metoxi-imino-A faktor előállítása

2-Tienil-metoxi-amin-hidrogén-klorid alkalmazásával a cím szerinti vegyületet fehér hab formájában nyerjük.

(a$+121° (c-l,36, CHCb), (EtOH) 245 nm (ε 34 900), v_m„ (CHBr₃) 3540, 3460 (OH), 1708 (C-O) és 992 cm'¹ (C-O), δ (CDCb) többek között 7,26 (d5, IH), 7,03 (d3, IH), 6,96 (dd3, H), 5,21 (s, 2H), 4,28 (t7, IH), 3,96 (d6, IH), 3,30 (dl4, IH), 0,99 (d6, 3H), 0,96 (d6, 3H), 0,94 (d6, 3H).

3. példa

23[E]-4-nitro-benzil-oxi-imino-A faktor előállítása

4-nitro-benzil-oxi-amin-hidrogén-klorid alkalmazásával a cím szerinti vegyületet fehér hab formájában nyerjük.

(a$+89’ (c-0,99, CHCb), (EtOH) 245 nm (ε

600) v_m„ (CHBr₃) 3460 (OH), 1708 (C-O), 1518, 1340 (NO₂), 990 (C-O), δ (CDCb) többek között 8,18 (d9, 2H), 7,48 (d9, 2H), 5,1-5,3 (m, 3H), 4,30 (t6, IH), 3,46 (dl4, IH).

4. példa

23[E]-4-nitro-benzil-oxi-imino-A faktor előállítása

237 mg 23-keto-A faktort, 190 mg nátrium-acetátot és 187 mg 4- nitro-benzil-oxi-amin-hidrogén-kloridot 40 ml metanolban oldunk és az oldatot 20 ’C hőmérsékleten 24 órán át keverjük, majd további 110 mg 4-nitro-benzil-oxi-amin-hidrogén-kloridot adunk hozzá. Az oldatot 3 napon át 20 ’C hőmérsékleten tartjuk, majd mintegy 5 ml-re sűrítjük be, 50 ml etil-acetáttal meghígítjuk és 0,5 n hidrogén-kloriddal, vízzel, majd nátrium-klorid oldattal mossuk. A szerves fázist szárítjuk, bepároljuk és a kapott nyersterméket 150 ml Merck Kieselgel 60-on (0,037-0,062 mm) kromatografálva tisztítjuk. Az oszlopot hexán és etil-acetát 2:1 arányú elegyével eluáljuk. így 73%-os hozammal nyerjük a cím szerinti vegyületet fehér hab formájában.

HU 203 352 Β (α$+89° (c-0,99, CHC1₃), λ™ (EtOH) 245 nm (ε 34 600), ν.», (CHBrj) (cm¹) 3540, 3460 (OH), 1708 (C-O), 1518, 1340 (NOj), 990 (C-O), δ (CDCb) többek között 8,18 (d9, 2H), 7,48 (d9, 2H), 5,1-5,3 (m, 3H), 4,30 (t6, ÍH), 3,46 (dl4, ÍH). 5

A kővetkezőkben formálási példákat ismertetünk. A „hatóanyag” megjelölésen a 4. példa szerint előállított vegyületet értjük.

Többdózisú parenterális injekciós készítmény készítése

1. példa

2,0 0,1-3,0 tömeg/térf.%

2,0

1.0

16,0 térf.%

100,0 ml-re kiegészítésül

Tömeg/térf.% Tartomány Hatóanyag 2,0 0,1-6,0 tömeg/térf.% benzil-alkohol 1,0 poliszorbát 80 10,0 glicerin-formai* 50,0 víz (injekciós minőségű) 100,0 ml-re kiegészítésül * a glicerin-formai glicerin és formaldehid kondenzációjának gyűrűs reakcióterméke

4. példa

Tömeg/térf.% Tartomány

Hatóanyag nemionos felületaktív szer (pl. Synperonic PE F68*) benzil-alkohol Miglyol 840** víz (injekciós minőségű) * ICI védjegy ** Dynamit Nobel védjegy

A hatóanyagot Miglyol 840-ben oldjuk. Feloldjuk a nemionos felületaktív szert és a benzil-alkoholt a víz nagy részében. Emulziót készítünk az olajos oldatnak a vizes oldathoz való adagolásával, miközben ismert módon homogenizáljuk az elegyet Az elegy térfogatát a kívánt értékre kiegészítjük, sterilezzük, és aszeptikusán kiszereljük.

A hatóanyagot a poliszorbát 80-ban és a glicerinformáiban oldjuk. Hozzáadjuk a benzil-alkoholt, és az elegy térfogatát injekciós minőségű vízzel a kívánt értékre egészítjük ki. A készítményt ismert módon sterilezzük, például sterilre szűrjük vagy autoklávban melegítve sterilezzük, és aszeptikusán szereljük ki.

2. példa

Tömeg/térf.% Tartomány Hatóanyag 4,0 0,1-7,5 tömeg/térf.% benzil-alkohol 2,0 glicerin-triacetát 30,0 propilénglikol 100,0 ml-re kiegészítésül

A hatóanyagot a benzil-alkoholban és a glicerin-triacetátban oldjuk, hozzáadjuk a propilénglikolt, ezzel az oldat térfogatát a kívánt értékre kiegészítve. A készítményt ismert eljárással sterilezzük, például sterilre szűrjük, és aszeptikusán szereljük ki.

3. példa

Tömeg/térf.% Tartomány Hatóanyag 2,0 0,1-7,5 tömeg/térf. % etanol 36,0 térf.% nemionos felületaktív szer (pl. Synperonic PE

L44*) 10,0 propilénglikol 100,0 ml-re kiegészítésül * ICI védjegy

A hatóanyagot az etanolban és a felületaktív szerben oldjuk, és az oldat térfogatát a kívánt értékre propilénglikollal kiegészítjük. A készítményt ismert módon sterilezzük, például sterilre szűrjük és aszeptikusán szereljük ki.

Aeroszolos permet készítése

Tömeg% Tartomány

Hatóanyag 0,1 0,01-2,0 tömeg% triklór-etán 29,9 triklór-fluor-metán 35,0 diklór-difluor-metán 35,0

A hatóanyagot a triklór-etánnal elegyítjük és aeroszol-tartályba töltjük. Az anyag fölötti üres teret a gáznemű hajtóanyaggal átöblítjük és a szelepet a megfelelő helyzetbe hozzuk. A szükséges mennyiségű folyékony hajtóanyagokat nyomás alatt a szelepen át betöltjük a tartályba. Felhelyezzük a működtető szerkezetet és a porvédő sapkát.

Tabletták készítése

Nedves granulálási eljárás mg

Hatóanyag	250,0
magnézium-sztearát	4,5
kukoricakeményítő	22,5
nátrium-keményítő-glikolát	9,0
nátrium-lauril-szulfát	4,5
mikrokristályos cellulóz	450l«g

tabletta magtömegre kiegészítésül

A hatóanyaghoz annyi 10%-os keményítőpépet adunk, hogy granulálásra alkalmas nedves masszát nyerjünk. Elkészítjük a granulátumokat, tálcás vagy fluidizált-ágyas szárítón szárítjuk, majd szitáljuk, majd hozzáadjuk a további alkotőanyagokat és az elegyet tablettává préseljük. Kívánt esetben a tablettamagokat filmbevonattal láthatjuk el hidroxi-propil-metil-cellulóz vagy más hasonló fílmképző anyag alkalmazásával, amelyet vizes vagy nemvizes oldószerrendszerben alkalmazunk. Használhatunk formálást elősegítő szert vagy megfelelő színezéket is a filmbevonat készítésére szolgáló oldatban.

HU 203 352 Β

Kis- és háziállatok kezelésére szolgáló állatgyógyászati tablettakészítmény előállítása Száraz granulálási eljárás mg

Hatóanyag 50,0 5 magnézium-sztearát 7,5 mikrokristályos cellulóz 75,0 mg tabletta magtömegre kiegészítésül

A hatóanyagot a magnézium-sztearáttal és a mikro- 10 kristályos cellulózzal elegyítjük. Az elegyet hengerekké préseljük. A hengereket rotációs granulátoron átengedve aprítjuk, így szabadon folyó granulátumokat nyerünk. Ezeket a granulátumokat tablettákká préseljük. A tablettamagot kívánt esetben az előzőekben is- 15 mertetett módon filmbevonattal is elláthatjuk.

Állatgyógyászati célra szolgáló intramammális injekciós készítmények előállítása

Tömeg% 20

Hatóanyag 1,0 poliszorbát 60 3,0 fehér méhviasz 6,0 földimogyoróolaj 90,0

A földimogyoróolajat, a fehér méhviaszt és a poli- 25 szorbát 60-at keverés mellett 160 °C hőmérsékletre melegítjük és az elegy hőmérsékletét 2 órán át ezen az értéken tartjuk. Az elegyet ezután keverés mellett szobahőmérsékletre hűtjük, aszeptikus körülmények között hozzáadjuk a hatóanyagot és nagy fordulatszá- 30 mú keverővei díszpergáljuk az elegyben. A készítményt kolloidmalmon átengedve finomítjuk, majd aszeptikusán steril műanyag fecskendőkbe töltjük.

A hatóanyag lassú felszabadulását biztosító állat- 35 gyógyászati pilulák előállítása

Tömeg% Tartomány Hatóanyag 1,0 0,25-2 tömeg% kolloid szilícium-dioxid 2,0 40 mikrokristályos cellulóz 100,0 g-ra

A hatóanyagot a kolloidális szilicium-dioxiddal és a mikrokristályos cellulózzal a hatóanyagnak a hordozóanyagban való megfelelő eloszlását biztosító eljá- 45 rással elegyítjük. A hatóanyagot egy, a 373 890A számú európai szabadalomban leírt, a lassú felszabadulást biztosító eszközbe visszük be, így olyan készítményt kapunk, amelyből a hatóanyag egyenletesen vagy impulzusszerűen szabadul fel. 50

A hatóanyagot a poliszorbát 85-ben, benzil-alkoholban és propilénglikolban oldjuk. Hozzáadjuk a víz egy részét és az oldat pH-értékét foszfát-pufferrel szükséges esetben 6,0-6,5 közé állítjuk. Az elegyet vízzel a kívánt térfogatra egészítjük ki, majd folyadéktartó edényekbe töltjük.

Orális adagolásra szolgáló állatgyógyászati pép készítése

Tömeg% 4,0 2,5 3,0 5,0

Tartomány 1-20 tömeg%

Hatóanyag szacharin-nátrium poliszorbát 85 alumínium-disztearát frakcionált kókuszdióolaj 100,0 g-ra Az alumínium-disztearátot a frakcionált kókuszdióolajban és a poliszorbát 85-ben melegítés mellett diszpergáljuk. Az elegyet szobahőmérsékletre hűtjük és az olajos hordozóanyagban a szacharin-nátriumot diszpergáljuk. Ezután ebben az elegyben díszpergáljuk a hatóanyagot, és a készítményt műanyag fecskendőkbe töltjük.

Tápba keverten adagolható granulumok készítése állatgyógyászati célra

Tömeg% Tartomány Hatóanyag 2,5 0,05-5 tömeg% kalcium-szulfát-hemihidrát 100,0 g-ra

A hatóanyagot a kalcium-szulfáttal elegyítjük. Nedves granulálási eljárással granulátumokat készítünk az elegyből. A granulátumokat tálcás vagy fluidizáltágyas eljárással szárítjuk, majd megfelelő tartályba töltjük.

Állatgyógyászati leöntő készítmény előállítása Tömeg/térf.% Tartomány

Hatóanyag 2,0 0,1-30 tömeg% dimetil-szulfoxid 10,0 metil-izobutil-keton 30,0 propilénglikol (és pigment) 100,0 ml-re A hatóanyagot a dimetil-szulfoxidban és a metilizobutil-ketonban oldjuk. Hozzáadjuk a pigmentet és az elegy térfogatát propilénglikollal a kívánt értékre egészítjük ki, majd az elegyet a leöntésre szolgáló tartályokba töltjük.

Emulgeálható koncentrátum készítése

	Hatóanyag	50 g
Orális adagolásra szolgáló folyékony állatgyógyá-		anionos emulgeálószer	40 g
szati készítmények előállítása		(pl. fenil-szulfonát CALX)
	Tömeg/térf.% Tartomány		nemionos emulgeálószer	60 g
Hatóanyag	0,35 0,01-2 tőmeg/térf.%	55	(pl. Synperonic NP13)*
poliszorbát 85	5,0		aromás oldószer	1 1-re
benzil-alkohol	3,0		(pl. Solvesso 100)
propilénglikol	30,0		♦ ICI védjegy
foszfát-puffer	pH 6,0-6,5	í	Minden hatóanyagot elegyítünk és	az elegyet oldó-
víz	100,0 ml-re	60.	dásig keverjük.

HU

Granulátumok készítése (a) hatóanyag 50 g fa-gyanta 40 g gipsz granulumok (0,25-0,75 mm) 1 kg-ra (pl. Agsorb 100A) (b) Hatóanyag 50 g

Synperonic NP13* 40 g gipsz granulumok 1 kg-ra (0,25-0,75 mm) * ICI védjegy

Egy illékony oldószerben, például metilén-klorodban minden összetevőt feloldunk és az oldatot keverőkben forgatott granulátumokra öntjük, majd a készítményt az oldószer eltávolítására szárítjuk.

A következőkben a találmány szerint előállított vegyületek biológiai hatását mutatjuk be.

Az alábbi vizsgálati eljárásokat alkalmaztuk.

Egér szkríneléses vizsgálat

18-20 g testömegtf nőstény egereket (Manor White Swiss) 20 N. dubius lárvával fertőzünk be.

A lárvákkal való befertőzést követően három hét múlva az egereket orálisan, gyomorszondán át a vizsgálandó vegyület egyszeri dózisával kezeljük. A kezdeti vizsgálati dózis 1000 mg/kg. A vegyületeket Vortex keverőben üveggyöngyök alkalmazásával pontjuk, majd 0,2%-os agarban oldjuk vagy szuszpendáljuk. Az oldatból vagy szuszpenzióból 0,5 ml-t adunk be orálisan egy-egy egérnek.

A kezelést követő harmadik napon az egereket leöljük és felboncoljuk, az egyenként 4 egérből álló kezelt csoportok állataiban talált átlagos N. dubius számot statisztikusan a 20 kezeletlen állatból álló kontrollcsoportban talált átlagos N. dubius számhoz hasonlítjuk.

Caenorhabditis elegáns elleni hatás szkrínelése

A vizsgálandó vegyületekből 300 ppm-es oldatot készítünk vizes acetonban. Az egyes vegyületek oldatából 25 μΐ-es alikvot részt 96 lyukú lemezre viszünk. Az oldószert elpárologtatjuk és a lemezt a vizsgálathoz való alkalmazás előtt egy hétig tároljuk.

A mikrotiter-lemez egy-egy lyukába 50 pl, mintegy 25 kifejlett C. elegáns tartalmú oldatot adunk.

A lemezeket szobahőmérsékleten tároljuk, és 4 és 24 óra múlva leolvassuk. Ha a 24 óra elteltével teljes mortalitást észlelünk, a vegyűletet további vizsgálatra érdemesnek tartjuk, és in vivő rágcsáló-modellben folytatjuk a vizsgálatot. Ha a teljes mortalitásnál kisebb aktivitást észlelünk, a vegyűletet aktívként jelöljük meg, de az ilyen vegyületek érdeklődésre nem tarthatnak számot. Ha hatást nem észlelünk, a vegyűletet inaktívnak nyilvánítjuk.

Psoroptes cuniculi - száraz szűrőpapír teszt

Anyagok

Polisztirolból készült eldobható Petri csészék, 35· 100 mm, Falcon 1008

Szűrőpapír, Whatman 934-AH, üveg mikroszál 3,7 és 3,5 cm

352 B

Aceton, reagens minőségű

Vazelin mm-es szilárd üveggyöngyök

Különféle pipetták

Nagy kerámia lemezek vagy ezek megfelelői

Nyúl donorból gyűjtött fül-atka

Módszerek

A vizsgálandó hatóanyagok előkészítése

A vizsgálatot megelőző napon vagy a vizsgálat reggelén a hatóanyagokat acetonban feloldjuk, és a kívánt koncentrációra hígítjuk. A koncentrációkat úgy számítjuk, hogy 400 μΐ oldat tartalmazza az egy szűrőpapírra felvinni kívánt mennyiséget. Az oldatból 400 pl-t pipettázunk egy 3,7 cm átmérőjű felső és egy 3,5 cm-es átmérőjű alsó szűrőpapír korongra, és ezeket kerámia lemezre helyezzük száradni. Megjegyezük, hogy ezt a műveletet fülke alatt végezzük. A szűrőpapír egyik oldala sima, a másik durva. A hatóanyagot a durva oldalra visszük, ezt az oldalt száradáskor felfelé helyezzük el. A korongokat száradás után durva felükkel egymásra borítva Petri csészébe helyezzük egymástól egy 3 mm-es üveggyönggyel elválasztva. A csészéket - amennyiben előző nap készítettük el - éjszakán át szobahőmérsékleten tartjuk. 0,01, 0,1 és 1,0 pg/cm² CL 301 423-t alkalmazunk minden vizsgálatban standardként.

Atkák összegyűjtése és adagolása

A vizsgálat reggelén fertőzött nyulak füléből atkákat tartalmazó varat gyűjtünk. Ezt az anyagot nagy Petri csészébe helyezzük megvilágított nagyító alá. Az atkák kimásznak a varból, és boncolótű hegyén vagy finom csipesz egyik ágának végén könnyen ősszegyűjthetők. Az egyes Petri csészékben lévő felső szűrőpapírt eltávolítjuk, az alsó szűrőpapírra 12 atkát helyezünk, majd a felsőt visszahelyezzük. A Petri csésze fedelének visszahelyezése előtt a csésze peremét vazelinnel bekenjük, hogy az atkáknak a csészéből való menekülését megakadályozzuk.

A vizsgálatokat általában dózisonként 4 párhuzamos mintán végezzük, amelyek közül kettőt 4 óra, kettőt 24 óra elteltével értékelünk az atkák megszámolásával.

Az atkáknak a Petri csészébe a fenti módon történő behelyezését követően a párhuzamos mintákat egy tálcára helyezzük, majd a tálcát néhány nedves törölközővel együtt műanyag zacskóba tesszük, és szobahőmérsékleten tároljuk.

A kezelt atkák értékelését az alábbi módon végezzük

1) A csészét óvatosan kinyitjuk, a felső szűrőpapírt eltávolítjuk, és megőrizzük.

2) Az alső szűrőpapírra puha ceruzával kis, mintegy 1/2 cm átmérőjű kört rajzolunk.

3) Eldobható pipettával enyhén megnedvesítjük a kör körüli felületet.

4) A csészében lévő minden atkát a körön belülre viszünk. Gondosan ellenőrizzük a csésze fedelét a felső szűrőpapírt és az alsó szűrőpapír alatti részeket.

5) Megszámoljuk a körön belüli atkák számát, és a számot feljegyezzük.

HU 203 352 Β

6) A csészére a fedelet visszahelyezzük, és a csészét félretesszük.

7) Legalább 15 perc elteltével megszámoljuk a körön belül maradt atkákat (ezek az elpusztult atkák).

8) Kiszámítjuk, és feljegyezzük az élő atkák számát.

9) Az elpusztult atkák százalékos mennyiségét az alábbi képlet alapján számítjuk ki:

Elpusztult atkák száma θθ Ossz atkkák száma

10) A mortalitás értékelésére az elpusztult atkák százalékos mennyiségét az Abbot képlet szerint korrigáljuk.

Ha a vegyületeket random módon (véletlenszerűen) 5 szkríneljük, a fenti eljárásban a vegyületek nagyobb számának levizsgálása érdekében az alábbi változtatásokat eszközölhetjük.

1) A párhuzamos minták számát kettőre csökkentjük, és mindkettőt csak 24 óra elteltével értékeljük.

2) A standardot csak egy koncentrációban alkalmazzuk.

A vizsgálatok eredményét a következő táblázatban ismertetjük.

Olyan (I) általános képletű vegyületek biológiai hatásának vizsgálata, amelyekben R¹ jelentése izopropilcsoport

	Caenorhabditis elegáns minimális letális	Nematospiroides dubius % csökkenés	Psoroptes cunicula % aktivitás
Vegyület R²	koncentráció (pg/ml)	s.c. (10 mg/kg) p.o. (2 mg/kg) 1	0,1	0,01 pg/em²
(1)* Me	0,005	91 94 100	97	58
(2)** p-nitro-benzil	0,020	98 97
(3)*** 2-tienil-metil	0,010	100	95	87

(1) *: Az R² helyettesítőként metilcsoportot tartalmazó vegyület, az önmaga is igen aktív referenciavegyület.

(2) **: A 3. példa szerint előállított vegyület.

(3) ***: A 2. példa szerint előállított vegyület.

C. elegáns - Szabadon élő nematóda

N. dubius - Endoparaziták szkrínelésére szokásosan alkalmazott egér-parazita P. cunicula - Ektoparaziták szkrínelésére használt nyúl-fül-atka szűrőpapíron tenyésztve

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás az (I) általános képletű vegyületek előállítására - a képletben

R¹ jelentése metil-, etil- vagy izopropilcsoport,

R² jelentése piridil-, tienil- vagy mono-nitro-fenilcsoporttál helyettesített 1-4 szénatomos alkilcsoport, és az =NOR² csoport E konfigurációjú -, azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletű ve- 45 gyületet egy H2NOR² általános képletű reagenssel vagy sójával reagáltatunk - R' és R² jelentése a tárgyi körben megadott.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, amelyekben R¹ jelen- 50 tése izopropilcsoport, azzal jellemezve, hogy a megfelelően helyettesített reagenseket alkalmazzuk.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, amelyekben

R² jelentése p-nitro-benzil- vagy tienil-metil-csoport, 55 azzal jellemezve, hogy a megfelelően helyettesített reagenseket alkalmazzuk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, amelyekben R¹ jelentése izopropilcsoport és R² jelentése p-nitro-benzil- 60 csoport, azzal jellemezve, hogy a megfelelően helyettesített reagenseket alkalmazzuk.
5. Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy legalább egy, az 1. igénypont szerint előállított (I) általános képletű hatóanyagot - a helyettesítők jelentése az 1. igénypontban megadott gyógyászati célra alkalmas hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal elegyítve gyógyászati készítménnyé alakítunk.
6. Az 5. igénypont szerinti eljárás állatgyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy legalább egy, az 1. igénypont szerint előállított (I) általános képletű vegyületet - a helyettesítők jelentése az 1. igénypontban megadott - állatgyógyászati célra alkalmas hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal összekeverve állatgyógyászati készítménnyé alakítunk.
7. Nematocid és akaricid készítmények, azzal jellemezve, hogy legalább egy (I) általános képletű hatóanyagot tartalmaznak 0,01-80 tömeg% mennyiségben - a helyettesítők jelentése az 1. igénypontban megadott - egy vagy több hordozóanyaggal, előnyösen aromás oldószerrel vagy gipsszel, és kívánt esetben emulgeálószerrel, előnyösen polimer fenolok szulfátjaival elegyítve.