HU192955B - Process for producing a-21978 ccyclic peptide derivatives acilyzed with alkoxy-benzoyl-group - Google Patents

Process for producing a-21978 ccyclic peptide derivatives acilyzed with alkoxy-benzoyl-group Download PDF

Info

Publication number
HU192955B
HU192955B HU831794A HU179483A HU192955B HU 192955 B HU192955 B HU 192955B HU 831794 A HU831794 A HU 831794A HU 179483 A HU179483 A HU 179483A HU 192955 B HU192955 B HU 192955B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
formula
group
deep
benzoyl
preparation
Prior art date
Application number
HU831794A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Manuel Debono
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of HU192955B publication Critical patent/HU192955B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/045—Actinoplanes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/62—Streptosporangium
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/19—Antibiotic
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/27—Cyclic peptide or cyclic protein

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás antibiotikus tulajdonságokkal rendelkező ciklusos peptidek új származékainak félszintetikus úton való előállítására.
Nagy szükség van új antibiotikumok kifejlesztésére, mivel állandóan fenyeget az a lehetőség, hogy kórokozó mikroorganizmusok antibiotikum-specifikus rezisztens törzsei fognak kifejlődni. Különösen a Gram-pozitiv Staphylococcus és Streptococcus nembe tartozó kórokozók rezisztensek gyakran a szokásosan használt antibiotikumokkal, mint a penicillinnel és eritromicinnel szemben (lásd például W. 0, Faye, Principles of Medicinái Chemistry, 684-686. oldal, 1974).
A találmány szerinti hatékony antibiotikus vegyületeknek találtuk az A-21 978C ciklusos peptidek új származékait és gyógyszerészetileg elfogadható sóikat.
Ezeket az új származékokat úgy állítjuk elő, hogy az A-21 978C magot - melyet a megfelelően védett A-21 978C komplex, vagy az utóbbi megfelelően védett egyedi Co, Ci, C2, Ci, Ct vagy Cs faktorainak dezacilezésével állítottunk elő - a kívánt acilezőszerrel vagy ennek reakcióképes származékával reagáltatjuk.
A talámány szerint az (1) általános képletű alkoxi-benzoilcsoporttal acilezett A-21 978C ciklusos peptidezármazékok - ahol R jelentése a általános képletű szubsztituált benzoilcsoport, melyben R jelentése (a) általános képletű szubsztituált benzolcsoport, melyben R2 8-12 szénatomos alkilcsoportot jelent, és R1 jelentése hidrogénatom vagy 2-8 szénatomos alkoxi-karbonil-csoport, hasznos félszintetikus antibakteriálís hatóanyagok, vagy az ilyen anyagok előállítására felhasználható kőztitermékek.
A leírásban a következő, általánosan ismert rövidítéseket alkalmazzuk:
Alá: alanin
Asp: aszparaginsav
Gly: glicin
Kyn: kinurenin
Orn: ornitin
Ser: szerin
Thr: treonin
Trp: triptofán
3MG: L-treo-3-metil-glutaminsav t-BOC: terc-butoxi-karbonil-csoport Cbz: benzil-oxi-karbonil-csoport DMF: dimetil-formamid
THF: tetrahidrofurán
HPLC: nagyfelbontású folyadékkromatográfia
NMR: mágneses magrezonancia
TLC: vékonyréteg-kromatográfia
UV: ultraibolya
Az A-21 978C antibiotikumok egymással szoros rokonságban álló savas peptid antibiotikumok.
Az A-21 978C antibiotikumokat az itt hivatkozott 4 208 403 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismerteti. A 4 208 403 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint az A-21 978 antibiotikum komplex főkomponense a C faktor, amely maga is szoros kapcsolatban álló faktorok komplexe. Az A-21 978C faktor, melyet A-21 978C komplexnek nevezünk, egyedi Co, Ci, C2, C3, Ci és C5 faktorokat tartalmaz. A Ci, Ci és C3 faktorok a nagyobb faktorok és a Co. Ci, és Cs faktorok a kisebbek. Az A-21 178C faktorok szerkezetét a 2 általános képlet szemlélteti, melyben „3MG L-treo-3-metil-glutaminsavat és RK specifikus zsírsavrészt jelent. A faktorok specifikus RN csoportjai a következők:
A-21 978 C faktor RN rész
Ci 8-metil-dekanoil
C2 10-metil-undekanoil
C3 10-metil-dodekanoil
Co Cio-alkanoil* *
Ci Ci2-alkanoil*
Cs Ci2-alkanoil* *Még nincs azonosítva.
Ha peptid antibiotikumok dezacilezésének problémája merül fel, rendkívül nehéz kideríteni, létezik-e ilyen célra felhasználható alkalmas enzim. Ilyen enzimet találni még nehezebb, ha a szubsztrát antibiotikum ciklusos peptid magot tartalmaz. Mivel az enzimek szubsztrát-specificitása nagyfokú, a szubsztrát peptidrészében és oldalláncában levő különbségek ki fognak hatni a dezacilezési kísérlet kimenetére. Ezenfelül sok mikroorganizmus nagy ' számban termel peptidázoknt, melyek a peptidrész különböző részeit támadják. Ez gyakran a termék kezelhetetlen keverékéhez vezet.
A triptofán alfa-aminocsoportjához kapcsolódó zsirsav-oldallánc dezacilezésére használható enzimek az Actínopíanaceae családba tartozó egyes mikroorganizmusok, előnyösen az Actinopíanes utahensis NRRL 12 052 mikroorganizmus, vagy egy variánsa által termelhetők. A dezacilezés végrehajtása céljából az A-21 978 komplex, az A-21 978C Co, Ci, C2, Ca, Ci és C5 faktorok, a blokkolt A-21 978C komplex és a blokkolt A-21 978C Co, Ci, C3, C4 és C5 faktorok közül kiválasztott ant biotikumokat hozzáadjuk a mikroorganizmuF tenyészetéhez. A „blokkolt A-21 978C faktorok” és a „blokkolt A-21 978C komplex” meghatározás olyan egyedik A-21 978C faktorokra vagy a faktorok keverékeire (komplex) vor átkozik, ahol az amino-védőcsoport az egyedi faktor vagy a faktor-keverék ornitinrésiének delta-aminoc.soportján helyezkedik el. A tenyészetet a szubsztráttal addig inkubáljuk, amíg a dezacileződés teljesen végbemegy. A kapott megfelelő A-21 978C ciklusos pepiidet a fermentléből ismert módon különítjük el.
Az enzimatikus dezacilezéssel kapott ciklusos peptidek és sóik a (3) általános képlettel írhatók le, ahol R’ és R® egymástól függetlenül hidrogénatomot vagy amino-védőcsoportot jelent.
Az A-21 978C komplex vagy az A-21 978C komplex egyes C„, Ci, C2, Cs C< és Cs faktorának acilrészét eltávolítva (3) általános képletű vegyületet kapunk, ahol R° és R’ hidrogénatomot jelent. A dezacilezett molekula az A-21 978C antibiotikum faktorok mindegyikében meglévő közös ciklusos pepiid. Kényelmi okból e vegyületet A-21 978C magnak fogjuk nevezni. E vegyület a (4) képlettel is leírható, melyben „3MG L-treo-3-metil-glutaminsavat jelent.
A (3) általános képletű vegyületeket, melyekben R° és R’ hidrogénatomtól eltérő jelentésű, a megfelelően blokkolt antibiotikus A-21 978C Co, Ci, Ci, Cs, C« és Cs faktorok dezacilezésével állítjuk elő. Kényelmi okokból itt e vegyületeket védett A-21 978C magoknak fogjuk nevezni. E védett vegyületek hasznos kőztitermékek egyes 1 általános képletű peptidek előállításához, azaz olyan vegyületekéhez, melyekben R’ alkoxi-karbonil csoportot jelent.
A (3) általános képletű mag előállításának módszerénél előnyben részesített dezacilezö enzimet, az A. utahesis NRRL 12 052-t a „Nothern Régiónál Research Center, Agricultural Research Culture Collection (NRRL), U. S. Department of Agriculture, 1815 North University St., Peoria, Illinois 61 604, U.S.A. bocsátja a nyilvánosság rendelkezésére NRRL 12 052 nyilvántartási számmal. Az itt leírt, 1. preparálás az A-21 978C mag fermentációs előállítását ismerteti, melynek során szubsztrátként A-21 978C komplexet ós mikroorganizmusként Aclinoplanes utahensis NRRL 12 052-t használunk.
A (3) általános képletű A-21 978C mag előállítására használható egyéb Actinoplanaceae tenyészetek a nyilvánosság részére a Nothern Régiónál Research Laboratory-ból férhetők hozzá, a következő nyilvántartási számokon:
Actinoplanes missouriensis NRRL 12 053
Actinoplanes sp. NRRL 8122
Actinoplenee sp. NRRL 12 065
Streptosporangium roseum var. hol/andensís NRRL 12 064.
Az Actinoplanaceae családon belül valamely adott mikroorganizmus törzs dezacilező hatásosságát a következő eljárással határozzuk meg. Alkalmas táptalajt beoltunk a mikroorganizmussal. A tenyészetet rotációs rázógépen mintegy 28 °C-on 2-3 napig inkubáljuk. Ezután a szubsztrát antibiotikumok egyikél hozzáadjuk a tenyészethez, a fermentációs közeg pH-ját körülbelül 6,5 értéken tartva. A tenyészet aktivitását Micrococcus luteus próbával mutatjuk ki. Az antibiotikus aktivitás csökkenése azt jelenti, hogy a mikroorganizmus termeli a dezaeilezéshez szükséges enzimet. Ezt azonban a következő módszerek valamelyikével kell igazolni: 1) HPLC-elemzés az ép mag jelenlétének kimutatására, vagy 2) alkalmas oldalláncc.al (például lauroíl-, π-dekanoil- vagy n-dodekanoilc.sopoj t) való újraacilezée az aktivitás helyreál10 lítása céljából.
A találmány tárgyát egy A-21 978C mag (3) általános képletű vegyület acilezése útján kapott 1 általános képlettel leírható új vegyületek - ahol R és R1 jelentése a fenti 15 előállítása képezi.
A szakember előtt érthető módon a szubsztituált benzoilcsoport, a -C- funkció
Ó és az OR2 funkció a benzolgyürűn egymáshoz 20 képest orto-, méta- vagy para-orientáltságú lehet. E csoportoknál előnyős a para-orientáció.
Az „alkil csoport megjelölés egyenes vagy elágazó szénhidrogénláncokra vonatko25 zik·
Az „amino-védőcsoport” meghatározás olyan ismert amino-védócsoportot jelöl, amely összeegyeztethető az A-21 978C molekula más funkciós csoportjaival. Előnyösek azok az a nino-védőcsoportok, amelyek az utólag acilt zett vegyületből könnyen eltávolithatók. Alkalmas védőcsoportokra példák találhatók a következő munkában: „Protective Groups in Crganic Synthesis, Theodora W. Green; John k'iley and Sons, New York, 1981, 7. fejezet, különösen előnyös aminovédőcsoport a terc-butoxi-karbonil- és a benzíl-oxi-karbonilc söpört.
Az R2 szubsztituens jelentése számára a találmány szerint előnyben részesített, jellemző 8-12 szénatomos alkilcsoportok a kővetkezők:
(a) -(CHj)nCIh csoport, ahol n jelentése
7-14 közötti egész szám; és
CH3 (b) -(CH2)rCH(OH2)sGH3 csoport, ahol r és s egymástól függetlenül 0-12 közötti egész számot jelent, azzal a kikötéssel, hogy r+s nem lehet nagyobb 12-nél és kevesebb 5-nél.
Az 1 általános képletű vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy egy 3 általános képletű vegyületet acilezünk, amidkötés létrehozására alkalmas ismert eljárások segítségével. Az acilezés általában úgy történik, hogy a kiválasztott vegyületet a kívánt acilcsoportnak (R) megfelelő szubsztituált benzoesav (5 általános képlet) reakcióképes származékával reagáltatjuk (az 5 általános képletben X és RJ a fentebb megadott jelentésű).
Jellemző 5 általános képletű vegyületek a kővetkezők: p-(n-oktil-oxi)-benzoesav, p- (n- decil-oxi) -benzoe sav.
A „reakcióképes származék megjelölés olyan származékra vonatkozik, amely az aci-47 lezőszer karboxil-funkcióját reaktívvá teszi a primer aminocsoporttal való kapcsolódáshoz, hogy a képező amidkötés az acil-oldalláncot a maghoz kösse. A szakember ismeri az alkalmas reakcióképes származékokat, előállításuk módját és primer aminokhoz acilezószerként való felhasználásukat. Előnyös reakcióképes származékok a következők: (a) savhalogenidek (például savklorid); (b) savanhidridek (például alkoxi-hangyasavanhidridek vagy aril-oxi-hangyasavanhidridek), vagy (c) aktív észterek (például 2,4,5-triklór-fenil-észterek, N-hidroxi-benztriazol-észterek vagy N-hidroxi-szukcinimid-észterek). A karboxilfunkció reakcióképessé tételének további módszerei közé tartozik a karbonsav karbonil-diimiddel (például N,N’-diciklohexil-karbodiimÍddel vagy Ν,Ν’-diizopropil-karbodiimiddel) való reagáltatása, amikor is a reakcióképes köztitermék képződik, melyet bomlékonysága miatt nem izolálunk. Ilyen reakció a primer aminnal in situ hajtható végre.
A szakember előtt érthető módon az 1 általános képletű vegyületeket szelektív acilezéssel állítjuk amino-védőcsoportok jelenlétében. Például ha kiindulási anyagként olyan (3) általános képletű vegyületet használunk, ahol R’ és R° hidrogénatomot jelent, az acilezés mind a triptofán alfa-aminocsoportján, mind az ornitin delta-aminocsoportján végbemehet és NTrp,Nom-diacilszármazékok képződnek. Ezért ha a triptofán alfa-aminocsoportján monoacilezett származékot akarunk előállítani, előnyös olyan (3) általános képletű vegyületet acilezni, melyben az ornitin delta-aminocsoportját (R° pozíció) amino-védőcsoport blokkolja. Ilyen kiindulási anyagokat előnyösen úgy kapunk, hogy az A-21 978C faktort ebben a pozícióban blokkoljuk a dezacilezés előtt. A kinurenin aromás aminocsoportja [a (3) általános képlet R’ pozíciója] az A-21 978C mag három aminocsoportja közül a legkevésbé reakcióképes. Ezért az (1) általános képletű vegyület R helyzetének acilezése nem jár általában együtt a kinureninaminocsoport blokkolásával.
Az 1. reakció vázlat az (1) általános képletű vegyületek előállításának általános módszereit körvonalazza. E reakcióvázlatban a következő szimbólumokat használjuk:
f*l - az A-21 978C maradványa
Nt - triptofán alfa-aminocsoportja
No = ornitin delta-aminocsoportja
Nk = kinurenin aromás aminocsoportja
R = (1) általános képlet szubsztitu-
ensei, a meghatározás szerint
Rn = természetes faktoi' acilcsoportja
B = amino-védőcsoport
Acil = acilező művelet
Dezacil = dezacílező művelet
Blokk = acilezés amino-védőcsoport jelenlétében
Deblokk = amino-védőcsoport eltávolítása
Az 1. reakcióvázlatban az A-21 978C ΝτΓΡ-rnonoacilszármazékait a (3) általános képlet szemlélteti.
Az (1) általános képletű vegyületek előnyösen az aktív észter-eljárással állíthatók elő. A kívánt sav-oldallánc 2,4,5-triklór-fenil-észtire a leginkább előnyben részesített acilező reagens. E módszer szerint feles mennyiségű aktív észtert reagáltatunk az (1) általános képletű vegyülettel szobahőmérsékleten, közömbös szerves oldószerben, mint DMF-ban, THF-ban, dietil-éterben vagy diklór-metánban. A reakcióidő nem kritikus, bér előnyös a mintegy 24-120 órás időtartam. A reakciót végrehajtva az oldószert eltávolítjuk és a maradékot kromatográfiával tisztítjuk, így fordított fázisú HPLC-vel szilikagél/C.a fordított, fázisii gyantát használva stacicner fázisként és víz(acetonitril)met.anol elegy ;t oldószerrendszerként.
A 2,4,5-triklór-fenil-észtereket úgy állítjuk elő, hogy az oldallánc-savat (5) általános képlet 2,4,5-triklói—fenollal kezeljük kapcsoló reagens, mint Ν,Ν’-diciklohexil-karbodiinid jelenlétében. Az aktív észterek természetesen más alkalmas eljárással is előállíthatók
Az (5) általános képletű szubsztituált savak és reakcióképes származékaik ismeri vegyiletek, vagy ismert vegyületekböl már ismert eljárásokkal előállíthatók. Az alkoxi-benzoesavak kényelmesen előállíthatók alkalmas Lidroxi-benzoesavakból, megfelelő alkilhalogí nidet a megfelelő hidroxi-benzoesav dinátrivmsójával reagáltatva. A leírt eljárásban kiindt lási anyagként használt hidroxi-benzoesavak és szubsztituált származékaiknak ismert vegyületek, vagy szokványos módszerekkel előállíthatok.
A találmány szerinti A-21 978C ciklusos pepticek baktériumellenes anyagokként használva orálisan vagy parenterálisan alkalmazhatók. A szakember számára érthető, hogy az A-21 978C vegyületet szokásosan gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval vagy TÍgí tóval együtt alkalmazzuk.
A vegyületek intravénásán vagy intramuszk ulárisan mint injekciók alkalmazhatók steril vizes oldat vagy szuszpenzió formájában, melyhez kívánt esetben különböző szokásos, gyógyszerészetileg elfogadható tartósító, pufferező, oldódást elősegítő vagy szuszpendáló szert adhatunk. Egyéb adalékok, nint só, vagy glükóz is alkalmazhatók az obiatok izotóniássá tétele céljából. Az ilyen adalékok aránya és természete ismert a szakember előtt.
Orális használathoz a vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható hordozókkal vagy kötőanyagokkal alkalmazhatók kapszulák, tabletták vagy porok formájában. Az ilyen hordozók vagy kötőanyagok természete és aránya ismert a szakember előtt.
A’. A-21 978C vegyület dózisát számos megfor tolás befolyásolja, mint például a használandó vegyület és a kezelendő fertőzés természete és súlyossága. Az alkalmazandó dózis-tartományokat vagy dózis-egységeket a szakember előtt ismert módon a MIC (minimális gátló koncentráció) és az LDso (hatásos dózis 50%-a) érték, a toxicitási adatok, valamint egyéb, példái farmakokinetikai tényezők, a beteg (gazdaszervezet) és a fertőző mikroorganizmus jellemzői figyelembevételével határozzuk meg.
A találmány teljesebb bemutatására szolgálnak az alábbi példák, anélkül, hogy a találmány hatókörét korlátoznák.
1. Preparálás
A-21 978C mag preparálása
A. Actinoplanes utahensis fermentációja
Ferde agaron Actinoplanes utahensis törzstenyészetet készítünk és tartunk fenn. Ferde agar táptalajként a következők egyikét használjuk:
A táptalaj
Komponensek Mennyiségek
Előfőzött zabliszt 60.0 g
Élesztő 2.5 g
K2HPO4 1.0 g
Czapek-féle ásványi 5.0 ml
törzsoldat*
Agar 25.0 g
Ionmentesített víz 1 literig
Autoklávozás előtt a pH körülbelül 5,9; a
pH-t nátrium-hidroxiddal 7,2-re állítjuk be;
autoklávozás után a pH körülbelül 6,7.
A Czapek-féle ásványi törzsoldat összetétele
a következő:
Alkotórészek Mennyiség
FeSO4.7H2O (2 ml konc. HCl-ban
oldva) 2 g
KC1 100 g
MgSO4.7H2O 100 g
lonmentesített víz 1 literig
B, táptalaj
Alkotórészek Mennyiség
Burgonya-dextrin 5.0 g
Élesztökivonat 0.5 g
Enzimatikus kezain- 5.0 g
-hidrolizátum*
Marhahúskivonat 0.5 g
Glükóz 12.5 g
Kukoricakeményítő 5.0 g
llús-pepton 5.0 g
Melasz 2.5 g
MgSO*.7H2 0.25 g
CaCos 1.0 g
Czapek-féle ásványi 2.0 ml
törzsoldat
Agar 20.0 g
lonmentesített viz 1 literig
’N-Z-Amine A, Humko Sheffield Chemical,
Lyndhurst, NJ.
A ferde agart beoltjuk Actinoplanes
utahensis NRRL 12 052 mikroorganizmussal és
30 ’C-on 8-10 napig inkubáljuk. A ferde
agaron nőtt tenyészet felével beoltjuk a kő-
vetkező összetételű 50 ml vegetatív táptalajt:
Alkotórészek Mennyiség
Előfőzött zabliszt 20.0 g
Szacharóz 20.0 g
Élesztő 2.5 g
Szárított szeszgyári 5.0 g
gabonatörköly*
K2HPO4 1.0 g
Czapek-féle ásványi 5.0 ml
törzsoldat
(onmentesített víz 1 literig
A pH-t nátrium-hidroxiddal 7,4-re állítjuk be; autoklávozás után a pH körülbelül 6,8.
^National Distillers Products Co., 99 Park Ave., New York, N. Y.
A beoltott, vegetatív táptalajt 250 ml-es bőnyakú Erlerimeyer-lonibikban 30 ’C-on mintegy 72 óráig inkubáljuk, 5 cm átmérőjű ív körül percenként 250 forgást végző rázógépen.
A fenti inkubált vegetatív táptalajjal l· özvetlenül beoltunk egy második fokozatú vegetatív táptalajt. Előnyösen félretehetjük későbbi felhasználáshoz, a tenyészetet folyékony nitrogén gőzfázisában tartva. Ilyen tároláshoz a tenyészetet több kis fiolában állítjuk elő a következőképpen: mindegyik fiolába bemérünk 2 ml beoltott vegetatív táptalajt és 2 ml glicerin/laktóz oldatot ÍW. A. Dailey és C. E. Higgins, „Preservation and Storage of Microorganisms in the Gas Phase of Liquid Nitrogén, Cryobiol. 10, 364-367 (í 973)1. Az előállított szuszpenziókat a folyékony nitrogén gőzfázisában tároljuk.
Az így elkészített tárolt szuszpenziót (1 ml) használjuk 50 ml első fokozatú végett tív táptalaj beoltására (melynek összetételét fentebb megadtuk). A beoltott első fokoze tu vegettvtív táptalajt a fentiek szerint inkubáljuk.
Nagyobb térfogatú inokulum előállítása céljából az inkubált első fokozatú vegetatív táptalaj 10 ml-ével beoltunk 400 rnl második fokozatú vegetatív táptalajt, melynek összetétele azonos az első fokozatúéval. A második fokozatú táptalajt 2 literes bőnyakú Erlenm( yer-loinbikban 30 ’C-on 48 óráig inkubál-611 juk 5 cm átmérőjű ív körül percenként 250 forgást végző rázógépen.
Az inkubált, fentebb leírtak szerint előállított második fokozatú vegetatív táptalajjal (80 ml) beoltunk 10 liter steril szaporító táptalajt, melynek összetétele az alábbiak valamelyike:
I. táptalaj
Alkotórészek Mennyiség (g per.l)
Földimogyoróliszt 10.0
Oldható hüs-pepton 5.0
Szacharóz 20.0
KH2PO4 0.5
K3HPO4 1.2
MgSO4.7H2O 0.25
Csapvíz 1 literig.
121 °C-on 45 percig mintegy 110-
-124 kPa nyomáson végzett autoklávozás
után a táptalaj pH-ja körülbelül 6,9,
II. táptalaj
Alkotórészek Mennyiség (g per 1)
Szacharóz 30.0
Pepton 5.0
KjHPO* 1.0
KC1 0.5
MgSO4.7H2O 0.5
FeSO4.7H2O 0.002
Ionmentesitett VÍZ 1 literig.
A pH-t H Cl-val 7,0-re állítjuk be; autó-
klávozás után a pH körülbelül 7,0.
III. táptalaj
Alkotórészek Mennyiség (g per 1)
Glükóz 20.0
NH4CI 3.0
Na2SO4 2.0
ZnCl2 0.019
MgCl2.6H2O 0.304
FeCl3.6H2O 0.062
MnClí4H2O 0.035
CuCl2,2H2O 0.005
CaCOa 6.0
KH2PO4» 0.67
Csapvíz 1 literig.
’Külön sterilizálva és fertőző anyagoktól mentesen hozzáadva.
Végső pH körülbelül 6,6.
A beoltott szaporító táptalaj fermentációját 14 1-es fermentorban mintegy 30 C-on körülbelül 66 óráig folytatjuk. A fermentációs közeget szokásos keverőkkel körülbelül 600 ford/mn sebességgel keverjük és steril levegővel levegőztetjük úgy, hogy az oldott oxigén szintjét 30%-os levegőtelítés felett tartsuk légköri nyomáson.
B. Az 4-21 978C dezac.ilezése
Ai A.utaheneis fermentációját az A. fejezetben leírtak szerint hajtjuk végre ferde A táplilajt és I. szaporító táptalajt használva és a szaporító táptalajt mintegy 67 óráig inkubálva. A fermentációs közeghez nyers A-21 9780 komplexet adunk (100 g) (előállítva a 4 2(8 403 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint).
f z A-21 9780 komplex dezacilezését Micrococt us luteus-szal végzett próba segítségével követjük. A fermentációt teljes dezacileződésig folytatjuk; ezt a M. luteus-szal szemteni aktivitás eltűnése jelzi (körülbelül 24 óra).
C. Az A-21 978C mag izolálása
B. fejezetben leírtak szerint kapott teljes fermentlevet (20 liter) szűrési segédanyaggal (Hyflo Super-Cel, John Manville Corp.) átszűrjük. A micélium eltávolítása után a szűrt levet 1,5 liter HP-20 gyantát (DIAION High Porous Polymer, HP-Series, Mitsubishi Chemical Industries Ltd., Tokyo, Japan) tartalmazó oszlopon bocsátjuk ét. A kapott effluentt elöntjük. Az oszlopot ionmenlesített vízzel (10 liter) mossuk a szűrtlé maradékának eltávolítása céljából. A mosófolyadékot elöntjük. Ezután az oszlopot 10-10 liter térfogatú viz/acetonitril elegyekkel (95:5, 9:1 és 4:1) eluáljuk, 1 literes frakciókat gyűjtve.
Az eluciót papírkromatográfiával ellenőrizzük, n-butanol/piridin/ecetsav/víz (15:10:3:12) oldószerrendszert használva és a vegyületeket UV fluoreszenciával detektálva. E rendszerben az A-21 978C faktorok Rf-értéke körülbelül 0,56 és az A-21 978C mag Rr-értlke körülbelül 0,32. A termék analitikai HPLO-vel is ellenőrizhető, fordított fázisú szilikagél/Cis adszorbenst és 0,1% ammónium-acetátot tartalmazó víz/metanol (3:1) oldószer rendszert használva, a magot UV monitorral 254 nm hullámhossznál detektálva. A magot tartalmazó frakciókat egyesítve, az acetonitrilt vákuumban lepárolva és a maradékot fagyasztással szárítva 40,6 g félig tisztított A-21 978C magot kapunk.
D. Az A-21 978(1 mag tisztítása
A C. fejezetben leírtak szerint kapott félig tisztított magot (15 g) 0,2% ecetsavat és 0,8% piridint tartalmazó 75 ml víz/metanol/ /acetonitril (82:10:8) elegyben oldjuk. Az oldatot 3,33 liter szilikagél/Cis/Quantum LP-I,
-713
Quantum Industries, 341 Káplán Drive, Fairfield, N. J. 07006) töltetet tartalmazó, 4,7x xl92 cm-es oszlopra szivattyúzzuk. Az oszlopot a fenti oldószerrendszerrel eluáljuk. 350 ml-es frakciókat gyűjtünk. Az elválasztást 280 nm hullámhosszon UV-monitorral detektáljuk. A magot tartalmazó frakciókat egyesítve, az oldószereket vákuumban lepárolva és gyorshűtéssel szárítva 5,2 g tisztított A-21 978C magot kapunk.
E. Az A-21 978C mag jellemzői (a) Alak: fehér amorf szilárd anyag, mely rövidhullámú UV fényben fluoreszkál.
(b) Tapasztalati képlet: CcíHeaNnOís (c) Molekulasúly: 1465 (d) Oldhatóság: vízben oldódik (e) Infravörös (IR) abszorpciós spektrum (KBr) maximumok:
3300 (széles), 3042 (gyenge), 2909 (gyenge), 1655 (erős), 1530 (erős), 1451 (gyenge), 1399 (közepes), 1222 (közepes), 1165 (gyenge), 1063 (gyenge) és 858 (közepes - gyenge) cm*1.
(f) UV abszorpciós spektrum (metanolban) maximumai: 223 nm (ε 41,482) és 260 nm (ε 8,687).
(g) Elektrometikus titrálás (66% vizes DMF): 4 titrálható csoport mutatható ki, melyeknek pKa értéke körülbelül 5,2; 6,7; 8,5 és 11,1 (kezdeti pH 6,12).
2. preparálás
Alternatív eljárás az A-21 978C mag előállítására
Az A-21 978C magot az 1. preparálásban leírt módon állítjuk elő, kivéve bizonyos változtatásokat a B. fejezetben. Az A. utahensis tenyészetet először mintegy 48 óráig inkubáljuk; a szubsztrát félig tisztított A-21 978C komplex (50 g); a szubsztrát hozzáadása után az inkubálási idő körülbelül 16 óra. A szűrt levet 3,1 liter HP-20 gyantát tartalmazó oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot 10 térfogat vízzel mossuk, majd víz/ac.etonitril (95:5) eleggyel eluáljuk. Az eluciót az 1. preparálásban leírtak szerint detektáljuk. 24 liter összegyűjtése után az eluenst kicseréljük víz/acetonitril (9:1) elegyre. A magot tartalmazó frakciókat ezzel az oldószerrel eluáljuk. E frakciókat egyesítjük, az acetonitril eltávolítása céljából vákuumban bepároljuk és gyorshűtéssel szárítjuk. 24,3 g félig tisztított A-21 978C magot kapunk.
E félig tisztított magot (24,3 g) vízben (400 ml) oldjuk. Az oldatot 0,2% ecetsavat és 0,8% piridint tartalmazó viz/metanol/acetonitril (8:1:1) eleggyel készült 3,33 liter szilíkagé: (Quantum LP-1) (Cie töltetet tartalmazó, 4,7x192 cm-es acéloszlopra szivattyúzzuk. Az oszlopot a fenti oldószerrel körülbelül 13 750 kPa nyomóson eluáljuk, 350 ml-es frakciókat gj üjtve. Az eluciót 280 nm-nél UV monitorral detektáljuk. A magot tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószereket vákuumban leporoljuk és a maradékot gyorshűtéssel szárítji k. 14 g nagytisztaságú A-21 978C magot kapunk.
3. preparálás
Nom-t-BOC-A-21 978C C2 és Cd faktorok előállítása
A-21 978C C2 és C3 faktorok keverékét (10 g) (előállítva a 4 208 403 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint) vízben (50 ml) oldjuk szonikálás közben .200 mg per ml). Az oldat pH-ját 4,05-ről 9,5-re állítjuk be 5n nátrium-hidroxid-oldat ,3,6 ml) segítségével. Di-tere-butil-dikarbonátot (3,0 ml) adunk hozzá és a reakcióslegyet szobahőmérsékleten 2 óráig keverjük. Az elegy pH-ját 9,5-ön tartjuk 5n nátrium-hidroxid-oldat kézi hozzáadásával (6,5 ml lúghozzáadás 2 óra alatt).
A reakciót időnként szilikagél TLC-vel ellenőrizzük acetonitril/víz (7:3 és 8:2) oldószerrendszert használva és UV fényben detektálva.
Körülbelül 10 perc múlva az oldat gyorsan niegzavarosodik és a lúgfogyasztás emelkedik. 30 perc múlva csökken a zavarosság sebessége és a lúgfogyasztás üteme, a reakció végét jelezve. Ennek ellenére a reakciót még 90 percig folytatjuk a teljes átalakulás biztosítása céljából. 2 órai reagáltatás után a képződött anyagot azonal liofilizálva 12,7 g Norn-t-BOC-A-21 978C C2 ós Cs faktort kapunk.
Hasonló eljárást alkalmazva két 10 g-os és egy 30 g-os reakciót is indítunk. Ezeknél a reakcióidő csak 40 perc. A két 10 g-os kísérletből 11,9 illetve 12,1 g terméket kapunk. A 30 g-os reakció 35,4 g terméket eredményez.
4. preparálás
A 21 978C Noru-t-BOC mag előállítása
A. A. utahensis fermentációja
Az A. utahensis fermentációját az 1. preparálás A. fejezetében leírtak szerint hajtjuk végre, ferde A. táptalajt és I. szaporító táptalujt használva és a szaporító táptalajt mintegy 66 óráig inkubálva.
B. Nom-t-BOC komplex dezacílezése
-815
Az A-21 978C Nom-t-BOC komplexet (1185 g nyers szubsztrát, mely körülbelül 176 g A-21 978C komplexet tartalmaz) hozzáadjuk a fermentációs közeghez. A dezacilezést az 1. preparálás B. fejezetében leírtak szerint hajtjuk végre. IIPLC elemzéssel kimutatva a dezacilezés körülbelül 24 óra alatt teljes.
C. A-21 978C Noro-t-BOC mag izolálása
A B. fejezetben leírtak szerint kapott fermentlevet (100 liter) szűrési segédanyaggal (Hyflo Super-Cel) átszűrjük. A szürletet 7,5 liter gyantát (DIAION) tartalmazó oszlopon bocsátjuk át; az oszlopot vízzel (38 liter) mossuk. Az elúciót szilikagél/Cia HPLC-vel ellenőrizzük 254 nm hullámhosszon UV detektálással. Kevés mag a mosófolyadékkal eluálódik. A magot ezután a következő víz/acetonitril elegyekkel eluáljuk: (95:5) - 40 liter; (9:1) - 40 liter és (85:15) - 100 liter. A magot tartalmazó frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk és gyorshűtéssel szárítjuk. 298,5 g félig tisztított A-21 978C Nom-t-BOC-magot kapunk.
D. Az A-21 9780 Nom-t-BOC mag tisztítása
A C. fejezetben leírtak szerint kapott, félig tisztított A-21 978C Nom-t-BOC magot (30 g) 0,2% ecetsavat és 0,8% piridint tartalmazó víz/acetonitril (9:1) elegyben (75 ml) oldjuk. Az oldatot 3,33 liter szilikagéi (Quantum LP-Í] (Cie töltetet tartalmazó, a fenti oldószerrendszerrel kiegyensúlyozott 4,7x xl92 cm-es acéloszlopra visszük fel. Az oszlopot nyomás alatt 0,2% ecetsavat és 0,8% piridint tartalmazó víz/acetonitril/metanol (80:15:5) eleggyel eluáljuk. 350 ml-es frakciókat gyűjtünk és a terméket 280 nm-nél UV monitorral detektáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószer eltávolítása céljából vákuumban bepároljuk és gyorshűtéssel szárítjuk. 18,4 g tisztított A-21 978C Nom-t-BOC magot kapunk.
Az A-21 978C Nom-t-BOC mag jellemzői a kővetkezők:
(a) Alak: fehér amorf szilárd anyag, amely rövidhullámú UV fényben fluoreszkál (b) Tapasztalati képlet: C67H91N17O27 (c) Molekulasúly: 1565 (d) Oldhatóság: vízben oldódik (e) IR abszorpciós spektrum (KBr) maximumai:
3345 (széles), 3065 (gyenge), 2975 (gyenge), 2936 (gyenge), -1710 (váll), 1660 (erős), 1530 (erős), 1452 (gyenge), 1395 (közepes), 1368 (gyenge), 1341 (gyenge), 1250 (közepes), 1228 (közepes), 1166 (közepes-gyenge) és 1063 (gyenge) cm-1.
(f) UV abszorpciós spektrum maximumai (90% etanolban): 220 nm (e 42,000) és 260 nm (ε 10,600) (gl HPLC retencios idő-6 min, 4,6x x300 mm-es szilikngál/Ois oszlopon, víz/acetonitril/metanol (80:15:5) oldószert (0,2% ainmónium-acélát tartalommal) használva 2 ml/ /min áramlási sebességgel, UV detektálással.
5. preparálás
Az A-21 978C Nom-t-BOC mag alternatív tisztítása
A 4. preparálás C. fejezetében leírtak szerint kapott, félig tisztított A-21 978C Nom-t-BOC magot (10,8 g) vízben oldjuk és 80 ml Amberlite IRA-6'8 gyantát (acetátciklus, Rohm End Hass, Philadelphia, PA) tartalmazó oszlopra visszük fel. Az oszlopot vízzel mossuk és 5 ml/min áramlási sebességgel, egymás útin 0,05n ecetsavoldattal (1080 ml), 0,ln ec.elsax oldattal (840 ml) és 0,2n ecetsavoldattal (3120 ml) eluáljuk, 120 ml-es frakciókat gyűjtve. Az oszlop elúcióját analitikai HPLC-vel s:.ilikagél/Ci8 tölteten, 0,2% ammónium-acetátot tartalmazó víz/acetonitril/metanol (80:15:6) oldószerrendszert használva ellenőrizzül és a terméket 254 nm-nél UV-monitorral detektáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük; az oldat pH-ját piridinnel 5,8-ra állítjuk be; a kapott oldatot vákuumban mintegy 200 ml térfogatra bepároljuk. A koncentrátumhoz vizet adunk és a képződött oldatot a piridin eltávolítása céljából ismét bepároljuk. A maradékból gyorshütéses szárítás utn 3,46 g tisztított A-21 978C Norn-t-3OC magot kapunk.
1. példa
N rp-p-(n-Dodecil-oxi)-benzoil-Nom-t-BOC-A-21978C mag előállítása
2, l,5-Triklór-fenil-p-(n-dodecil-oxi)-benzoátot (0,9 g) és A-21 9780 t-BOC magot (0,9 g) 400 ml vízmentes DMF-ban oldunk és az oldatot szobahőmérsékleten, nitrogénatmoszféra alatt 120 óráig keverjük. Az oldószert csökkentett nyomáson lepároljuk. A maradékot dietil-éter (400 ml) és kloroform (400 ml) elegyével 2 órán át keverjük. A terméket szűréssel elválasztva és szárítva világosbarna port (0,962 g) kapunk. Az anyag egy részét (0,78 g) metanolban (200 ml) oldjuk és preparatív HPLC-bel tisztítjuk, „Prep LC/System 500 egységet (Waters Associates, Inc., Milford, MA) és stacioner tézisként Prep Pak-500/Cis oszlopot. (Watera Associates) használva. Az oszlopot izokra'ikusan eluáljuk víz/metanol/acetonitril (2:1:2) oldószerrendszerrel és 250 ml-es
-917 frakciókat gyűjtünk (1 frakció per min). A kívánt vegyületet a 2-6. frakcióban eluáljuk.
A frakciókét TLC [fordított fázisú szilikagél/Oi&, viz/metanol/acetonitril (3:3:4) eleggyel kifejlesztve, Vun Urk-permetező re- g ágenssel detektálva! alapján egyesítjük. Az. egyesített frakciók bioautográfiája [szilikagél TLC-t, acetonitril/aceton/víz (2:2:1) oldószert és Staphylococcus aureus detektáló mikroorganizmust használva! azt mutatja, hogy a termék egyetlen bioaktív komponensből áll (Rf=0,65). Az eljárással 0,421 g ΝτΓρ-ρ-(η-docecil-oxi)~benzoil-Norn-t-BOC-A—21 978C magot kapunk.
2. példa
NTrp-p-(n-dodecil-oxi)-benzoil-A-21 978C mag előállítása 20
NTrp-p-(n-Dodecil-oxi)-benzoil-Noni-t-BOC-A-21 978C magot (230 mg) 2% anizolt tartalmazó 5 ml trifluor-ecetsavban oldunk és 5 percig 0 °C-on keverjük. Az oldat bepárlá- 25 sa után kapott olajat Et20~val (100 ml) eldörzsötjük. A szilárd anyagot elkülönítjük, levegőn szárítjuk és vízben (10 ml) felveszsz ik. Az oldat pH-ját 3,25-ről piridinnel 7-re állítjuk be. A képződött oldatot liofilizálva 179 mg feliéi- amorf Niri.-p-(n-dodecil-oxi)-benzoil-A-21 9780 magot kapunk. Szilikagél TLC-n acetonitril/aceton/víz (2:2:1) oldószerrendszert használva és Van Urk-permetező reagenssel detektálva a vegyület Rf-értéke 0,71.
3. példa
Az (1) általános képletű vegyületek antibakteriális hatékonysága in vitro mutatható ki. Jellemző 1 általános képletű vegyületek anlibakteriális próbájának eredményeit - melyekhez agarlemezen végzett standard karót g-diffúziós eljárással jutottunk - az I. táblázatban közöljük. Az I. táblázatban az aktivitást a megfigyelt gátlási zónák méretével (átmérő mm-ben) fejezzük ki, melyekben a vizsgálandó vegyület a mikroorganizmus növekedését gátolja,
I. táblázat általános képletű vegyületek antibakteriális aktivitása agarlemezen diffúziós próbával meghatározva
Gátlási zóna mérete (mm)a
Staphylococcus Bacillus Micrococcus B. subtilis
Vegyület aureus subtilis luteus
R R1 ATCC 67381’ ATCC 6633 ATCC 9341 ATCC 6633b
p-(n-dodecil-oxi)-benzoil H 20 13 18 20
p— (n-dodecil-oxi)-benzoil t-BOC 20 10 15 22
aA vegyületeket vízben szuszpendáljuk 1 mg/ml koncentrációban; egy 7 mm-es korongot
bemártunk a szuszpenzióba, majd az agar felületére helyezzük; inkubálás 24-48*‘ 25-37 °C bPor-tápagaron (minimál nutrient agar) tenyésztve
Jellemző (1) általános képletű vegyületek antibakteriális próbájának eredményeit standard agar-hígításos próbát alkalmazva a II. táblázatban foglaljuk össze. A II. táblázatban az aktivitást a minimális gátló koncentrációval (MIC) mérjük, vagyis azzal a legkisebb koncentrációval, amelynél a vizsgálandó vegyület gátolja a mikroorganizmusok növekedését.
II. táblázat
NTip-p-(n-Dodedi]-oxi)-benzoil-A-21 978C anlibiotikus aktivitása
Kísrérleti mikroorganizmus
MIC értékek3
Staphylococcus aureus XI.1 1 θθ Staphylococcus aureus V41b 1
-1019
II. táblázat
NTrp-p-(n-Dodedil-oxi)-benzoiI-A-21 9780 antibiolikus aktivitása
Kisrérleti mik- MIC roorganizmus értekek’
S ta p h y lococcu s Staphylococcus S taphylococcus
S taph yloc.occu s
Streptococcus Streptococcus S Lreptococcus Streptococcus aureus X4()()<: aureus S13E epidermidis EPI1 epidermidis
EPI2 pyogenes C203 pneumoniae Park I D X66 csoport 9960 csoport
0.25
0.015
A jellemző (1) általános képletű A-21 978C ciklusos peptid in vivő mikróbnellenes aktivitást mutat kísérletes baktériumos fertőzésekkel szemben. Ha a vizsgálandó ve5 gyület két dózisát alkalmazzuk jellemző mik — roorgani'.musokkal fertőzött egereknek, a megfigyelt aktivitást EDso éltekként fejezzük ki íhatáros dózis mg/kg-ban, amely a kísérleti állatik 50%-át megvédi: lásd Warren Wick jq és munkatársai, J. Bacteriol. 81, 233-235 (1961)1. ó kapott EDsü értékeket a III. táblázatban t intetjük fel.
’MIC: mcg/ml-ben bPenicillin-rezÍ8ztenB törzs ’Meticillin-reziszténs törzs
III. táblázat
NTrp-p-(n-Dodecil-oxi)-benzoil-A-21-978C in vivő aktivitása (1) általános képletű vegyület3
EDso értékek1*
Stajihyloc.occus aureus
Streptococcus pyogenes
N-rrp-p-(n-Dodecil-oxi)- benzoil
Szubkután
3.35
Szubkután Orális
0.31 >200 JR>=H 6mg/kg x 2
Egereknek intravénásán adva és LDso formájában kifejezve az NTrp-p-(n-dodecil-oxi)-benzoil-A-21 978C heveny mérgezőképessége 67,6 mg/kg.

Claims (3)

1. Eljárás (1) általános képletű alkoxi-benzoil-csoporttal ac.ilezett A-21 978C ciklusos peptidszármazékok - ahol
R jelentése (a) általános képletű szubsztituált benzoilcsoport, melyben
R2 8-12 szénatomos alkilcsoportot jelent, és R1 jelentése hidrogénatom vagy 2-8 szénatomos alkoxi-karbonil-csoport előállítására, azzal jellemezve, hogy a (3) általános képletű A-21 978C magot vagy megfelelően megvédett származékát - ahol R’ és R° egymástól függetlenül hidrogénatomot vagy a peptidkémiában szokásos amino-védőcsoportot jelent - (5) általános képletű acilezőszerrel - ahol R2 jelentése a fenti - vagy reakcióképes származékával reagáltatjuk, és kívánt esetben a jelenlevő védőcsoportokat lehasítjuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan
40 (1) általínos képletű vegyületek előállítására, ahol R az 1. igénypontban megadott R2 10-12 szénatomos alkilcsoportot jelent és R* az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy olyan (3) és (5) általános képletű anyaid gokból indulunk ki, ahol R2 a fenti és Π’, R° és R az 1. igénypontban megadott.
3. A 2. igénypont szerinti eljárás olyan (1) általínos képletű vegyületek előállítására, ahol R az 1. igénypontban megadott, R2 jelentése dodecil-csoport, R1 az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy olyan (3) és (5) általános képletű anyagokból indulunk ki, ahol R2 a fenti és R’, R° és R az 1. igénypontban megadott.
55 4. A 2. igénypont szerinti eljárás olyan (1) általínos képletű vegyületek előállítására, ahol R íz 1. igénypontban megadott, R2-Ojelentése p-(n-dodecil-oxi)-csoport és R1 az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, θθ hogy olyan (3) és (5) általános képletű vegyületekbő] indulunk ki, ahol R' és R° és R az 1. igénypontban megadott, és R2 a fenti.
HU831794A 1982-05-21 1983-05-20 Process for producing a-21978 ccyclic peptide derivatives acilyzed with alkoxy-benzoyl-group HU192955B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/380,498 US4399067A (en) 1982-05-21 1982-05-21 Derivatives of A-21978C cyclic peptides

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU192955B true HU192955B (en) 1987-08-28

Family

ID=23501401

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU831794A HU192955B (en) 1982-05-21 1983-05-20 Process for producing a-21978 ccyclic peptide derivatives acilyzed with alkoxy-benzoyl-group

Country Status (15)

Country Link
US (1) US4399067A (hu)
KR (1) KR860002185B1 (hu)
AT (1) AT380022B (hu)
CA (1) CA1215043A (hu)
DD (1) DD209810A5 (hu)
DK (1) DK220983A (hu)
EG (1) EG16042A (hu)
ES (1) ES8407012A1 (hu)
FI (1) FI831746L (hu)
GR (1) GR79259B (hu)
HU (1) HU192955B (hu)
PH (1) PH21382A (hu)
PL (1) PL242096A1 (hu)
PT (1) PT76701B (hu)
RO (1) RO86721B (hu)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ZA883887B (en) * 1987-06-10 1990-02-28 Lilly Co Eli Chromatographic purification process
US4977083A (en) * 1988-04-11 1990-12-11 Eli Lilly And Company Processes for preparing A54145 compounds
US5140101A (en) * 1990-11-21 1992-08-18 Bristol-Myers Squibb Company Antiviral antibiotic BU-4344V
US5256548A (en) * 1990-11-21 1993-10-26 Bristol-Myers Squibb Company Antiviral antibiotic BU-4344V
KR20020063228A (ko) * 1999-12-15 2002-08-01 큐비스트 파마슈티컬즈 인코포레이티드 항균제로서 리포펩티드
KR20020063230A (ko) * 1999-12-15 2002-08-01 큐비스트 파마슈티컬즈 인코포레이티드 항균제로서의 신규한 리포펩티드
EP2295444A3 (en) * 1999-12-15 2011-03-23 Cubist Pharmaceutical Inc. Lipopeptides as antibacterial agents
EP1932853A1 (en) 2001-08-06 2008-06-18 Cubist Pharmaceutical Inc. Novel depsipeptides and process for preparing same
AU2002353775A1 (en) 2001-08-06 2003-03-10 Cubist Pharmaceuticals, Inc. Lipopeptide stereoisomers, methods for preparing same, and useful intermediates
US20060004185A1 (en) * 2004-07-01 2006-01-05 Leese Richard A Peptide antibiotics and peptide intermediates for their prepartion
CA2747965C (en) * 2008-12-22 2017-06-27 Cubist Pharmaceuticals, Inc. Novel antibacterial agents for the treatment of gram positive infections
WO2010075416A1 (en) * 2008-12-23 2010-07-01 Biosource Pharm, Inc. Antibiotic compositions for the treatment of gram negative infections
US8415307B1 (en) 2010-06-23 2013-04-09 Biosource Pharm, Inc. Antibiotic compositions for the treatment of gram negative infections
US11174288B2 (en) 2016-12-06 2021-11-16 Northeastern University Heparin-binding cationic peptide self-assembling peptide amphiphiles useful against drug-resistant bacteria

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3150059A (en) * 1962-12-26 1964-09-22 Lilly Co Eli Penicillin deacylation via actinoplanaceae fermentation
US4208403A (en) * 1978-10-16 1980-06-17 Eli Lilly And Company A-21978 Antibiotics and process for their production
US4293486A (en) * 1979-12-13 1981-10-06 Eli Lilly And Company Derivatives of S31794/F-1 nucleus
US4293489A (en) * 1979-12-13 1981-10-06 Eli Lilly And Company Derivatives of A-30912A nucleus
US4289692A (en) * 1979-12-13 1981-09-15 Eli Lilly And Company Derivatives of A-30912D nucleus
US4293484A (en) * 1979-12-13 1981-10-06 Eli Lilly And Company Derivatives of A-30912H nucleus
US4297277A (en) * 1979-12-13 1981-10-27 Eli Lilly And Company Derivatives of A-30912B nucleus
US4293482A (en) * 1979-12-13 1981-10-06 Eli Lilly And Company A-30912A Nucleus

Also Published As

Publication number Publication date
ES522561A0 (es) 1984-09-01
RO86721A (ro) 1985-04-17
AT380022B (de) 1986-03-25
PT76701B (en) 1986-03-27
CA1215043A (en) 1986-12-09
DD209810A5 (de) 1984-05-23
US4399067A (en) 1983-08-16
ES8407012A1 (es) 1984-09-01
FI831746A0 (fi) 1983-05-18
PL242096A1 (en) 1984-07-02
RO86721B (ro) 1985-05-01
KR860002185B1 (ko) 1986-12-24
GR79259B (hu) 1984-10-22
EG16042A (en) 1986-12-30
PT76701A (en) 1983-06-01
PH21382A (en) 1987-10-15
KR840005076A (ko) 1984-11-03
ATA178383A (de) 1985-08-15
DK220983D0 (da) 1983-05-18
DK220983A (da) 1983-11-22
FI831746L (fi) 1983-11-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4537717A (en) Derivatives of A-21978C cyclic peptides
US4482487A (en) A-21978C cyclic peptides
US4524135A (en) A-21978C cyclic peptides
USRE32310E (en) Derivatives of A-21978C cyclic peptides
HU192955B (en) Process for producing a-21978 ccyclic peptide derivatives acilyzed with alkoxy-benzoyl-group
USRE32311E (en) Derivatives of A-21978C cyclic peptides
US5039789A (en) A54145 cyclic peptides
US4946941A (en) Novel glycopeptide antibiotics
NZ509306A (en) Nocathiacin antibiotics
US5028590A (en) Derivatives of A54145 cyclic peptides
EP0095295B1 (en) Cyclic peptide derivatives
EP0031221A1 (en) Cyclic peptide nuclei
EP1285928B1 (en) Antibiotics tripropeptins and process for producing the same
US4396543A (en) Derivatives of A-21978C cyclic peptides
JPH0213392A (ja) ペプチド抗生物質
PL195995B1 (pl) Wankoresmycyna, sposób jej wytwarzania, organizm Amycolatopsis z gatunku HIL-006734, zastosowanie wankoresmycyny oraz środek farmaceutyczny
US5451570A (en) Antibiotic, balhimycin, a process for its production and its use as pharmaceutical
US7018996B2 (en) Antibiotics AW998A, AW998B, AW998C and AW998D
US5891851A (en) Antibiotic, feglymycin, processes for its preparation and its use
JPH0430400B2 (hu)
CA1200777A (en) A-21978c cyclic peptide derivatives and their production
EP1109820A1 (en) Nocathiacin antibiotic derivatives prepared by microbial biotransformation
KR860002194B1 (ko) A-21978c 사이클릭 펩타이드 유도체의 제조방법
US20010018450A1 (en) Amycomycin, a process for its production and its use as a pharmaceutical
MXPA98008484A (en) New lantibiotic related with actagardine, procedure for its preparation and employment of the mi