HU184846B - Process for producing homo-citric acid-oligoryboside derivatives - Google Patents

Process for producing homo-citric acid-oligoryboside derivatives Download PDF

Info

Publication number
HU184846B
HU184846B HU81568A HU56881A HU184846B HU 184846 B HU184846 B HU 184846B HU 81568 A HU81568 A HU 81568A HU 56881 A HU56881 A HU 56881A HU 184846 B HU184846 B HU 184846B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
oligoriboside
homocitric acid
streptomyces
agar
strain
Prior art date
Application number
HU81568A
Other languages
English (en)
Inventor
Yoshiro Okami
Kazuhiko Yamada
Masachika Takashio
Original Assignee
Microbial Chem Res Found
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Microbial Chem Res Found filed Critical Microbial Chem Res Found
Publication of HU184846B publication Critical patent/HU184846B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A61K8/606—Nucleosides; Nucleotides; Nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
    • C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Television Signal Processing For Recording (AREA)
  • Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
  • Measuring Pulse, Heart Rate, Blood Pressure Or Blood Flow (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Description

I A találmány tárgya eljárás homocitromsav-o'.igog ribozid és sói előállítására. E származékok fogszúvasog dást gátló hatással rendelkeznek. A homocitromsavI oligoribozid-származék új, szerkezetét az (I) képlet muI tatja. A ribóz oldallánc egyes tagjai közötti glikozid
I kötések mindegyike ribozil-(l-*2)-ribozil vagy riboz.ilI (l->3)-ribozil kötés.
A fenti homocitromsav-oligoribozid Streptomyces
Ι sp., például Streptomyces sp. MF980-CF1 (FERMI P5430) táptalajában termelődik. Deponálási szám ATCC:
31820.
I Ismeretes, hogy kísérletek történtek arra vonatkoI zóan, hogy a fogszúvasodás megelőzésére fogbevonatI gátló készítményeket alkalmazzanak. (J. periodontol.
I 45 177—186 [1974] „Chemotherapy of dental plaque
Ι infections” órai sei. rév. 9 65—106 [1975].) Az ismert készítményeknél azonban kedvezőbb hatást biztosít a találmány szerinti eljárással előállított hatóanyagot tartalmazó készítmény. A találmány szerinti hatóanyag már 20 mikrogramm jelenléte esetében is hatásos. A hatás vizsgálata ismert módon történik. (Tetrahedron letters 1267—1270, 1981, Agrie. bioi. chem 4 6 1457 — 1464 [1982], agric bioi. ebem 4 6 1987-1996 [1982],
j. of antibiotics 3 4 344—345 [1981].)
Előállítása például az alábbi módon történik.
Egy, a Streptomyces genusba tartozó és a találmány l szerinti homocitromsav-oligoribozidot termelő fenti t mikroorganizmust egy szokásosan alkalmazott - szén| és nitrogénforrást, szervetlen ionokat, és adott esetben | szerves mikroelemeket, így vitaminokat és/vagy aminoí savakat tartalmazó - közegben tenyésztünk. A táp| talajban termelődött és felhalmozódott homocitromsav1 oligoribozidot extraháljuk, elkülönítjük és összegyűjtI jük. A tenyészközegben szénforrásként szénhidrátokat, í például glicerint, glükózt, maltózt, szacharózt, laktózt, | keményítőt és dextrint használhatunk. Különösen megs felelő a maltóz vagy a burgonyakeményítő. Nitrogén| forrásként például szójabablisztet, datolyalisztet, gyapotf maglisztet, száraz élesztőt, húsextraktumot, kazeint, ’ kukoricaáztatási lét, nitrát nitrogént és ammónia nitrof gént használhatunk. Különösen előnyös a gyapotrnagΓ liszt vagy a kukoricaáztatási lé. Kívánt esetben a közeghez még magnézium-, mangán-, nátrium-, kálium-, vas-, kalcium-, klór-, foszfát- és/vagy szulfátionokat is adhatunk. A tenyésztést előnyösen aerob úton, levegőztetéssel, keveréssel vagy rázással, valamint 25-30 °C-on való inkubálással végezzük. Bármilyen más inkubálási hőmérséklet is alkalmazható, amennyiben az lehetővé teszi a homocitromsav-oligoribozidot termelő organizmus növekedését. Az inkubálást a táptalajban megfelelő mennyiségű termék felhalmozódásáig folytatjuk. Az inkubálási idő általában 2—7 nap.
A Streptomyces sp. MF980-CF1 (FERM-P5430) olyan mikroorganizmus, amely képes homocitromsavoligoribozid termelésére.
E törzs mikrobiológiai tulajdonságait az alábbiakban ismertetjük. A törzset Laké Kawaguchi környékéről összegyűjtött termőföldből különítettük el.
a) Morfológia
Az agar táptalajon termelt, fejlett MF980-CF1 törzs lineáris vagy spirális szerkezetű légmicéliumokkal rendelkezik, amelyek kissé elágazó, elnyújtott szubsztrát2 miceliumokból állnak ki. Érleléskor a miceliumok tetején 10—50 hengeres spórából (0,8 X 1,8 mikrométer) álló spóralánc képződik. Elektronmikroszkópos vizsgálatok felfedték, hogy a spórák felülete sima, valamint a spóráknak nincs tüskés vagy hajszerű szerkezetük. Flagellum és sporangium nem figyelhető meg. így a törzs a tipikus Streptomyces sp. törzsek közé sorolható.
b) Jellemzők különböző közegekben
1) Szacharóz-nitrát agar (27 °C-os inkubálás):
A sárgás-barna színű, szubsztráton növekedett micélium (2 db jelű extra pasztell színárnyalatú sorozat; színárnyalat a Color Harmony Manual szerint meghatározva) felett fehér (white a) és gyenge légmicélium képződik. A közegben nem képződnek megkülönböztethető diffuzibilis pigmentek.
2) Gliccrin-aszparagin agar (27 °C-os inkubálás):
A szubsztrátumon növekedett micéliumok színe vörösesbarna (5 lg, 5-ös színárnyalat). Fehér légmicéliumok először a telep perifériális részein tűnnek fel, majd fokozatosan beborítják az egész telepet. Nem képződnek meg25 különböztethető oldható pigmentek.
3) Keményítő agar (27 °C-os inkubálás):
Barnás-fehér (5 ba, majdnem szürke sorozatok) légmicéliumok képződnek a narancs színű (4 pe, 4-es színárnyalat) szubsztrátum felett. Nem képződnek meg30 különböztethető oldható pigmentek.
4) Tirozin agar (27 °C-os inkubálás):
A szubsztrátumon növekedett micéliumok színe vörösesbarna (5 lg, 5-ös színárnyalat). A telep perifériális részein fehér színű (white a) légmicéliumok képződnek.
Melanoid pigment képződik.
5) Tápláló agar (27 °C-os inkubálás):
A növekedés gyenge és nincs jellegzetes színe. A légmicéliumok képződése szintén gyenge.
6) Élesztő-maláta agar (27 °C-os inkubálás):
A barna színű szubsztrátum (chm 6 ng, 6-os színárnyalat) felett szürkés-fehér légmicéliumok képződnek, és fokozatosan átszíneződnek bíboros-szürkévé (chm 5 de, majdnem szürke sorozatok). Barnás-melanoid pigment képződik.
7) Zabliszt agar (27 °C-os inkubálás):
A vöröses-narancs színű (chm 5 le, 3-as színárnyalat) szubsztrátumon növekedett micélium felett barnásszürke (chm 13 fe, majdnem szürke sorozat) színű légmicéliumok képződnek. Nem képződik megkülönböz50 tethető oldható pigment.
c) Fiziológiai tulajdonságok
1) A tenyésztés hőmérséklettartománya 14-33 °C.
2) Keményítő agaron a keményítőt hidrolizálja.
3) A lefölözött tejet peptonizálja, de nem koagulálja. θθ 4) Tirozin agarban, élesztő-maláta agarban és élesztőmaláta-vas agarban melanoid pigment képződik.
5) A nitrátot redukálja.
6) A zselatint nem cseppfolyósítja.
184 846
d)A szénforrások hasznosítása (Pridhain és Gottlieb féle közeg)
A d-glükóz, 1-arabinóz, szacharóz, d-xilóz, inozitol, mannitol- d-fraktóz és 1-ramnóz hasznosul, de a raffinóz nem.
A fenti tulajdonságok megmutatják, hogy ez a törzs tipikusan a Streptomyces genusba tartozik és olyan jellemzőkkel rendelkezik, mint például a legmicéliumain spirális szerkezetek képződése és melanoid pigmentek képződése.
Az említett tulajdonságok emlékeztetnek az alábbi fajok tulajdonságaira, de azért az alábbiakban felsorolt különbségek fennállnak.
1) Streptomyces griseoaurantiacus:
Az MF980-CF1 törzs tulajdonságaitól eltérő, hogy nincs melanoid pigment képződés és a szacharóz hasznosítása nagyon gyenge.
2) Streptomyces resistomycifus:
A pigmentképződés hiánya, a raffinóz hasznosítása és a szubsztrátumon növekvő micélium pigmentszínének pH-függése eltér az MF980-CF1 törzsétől.
3) Streptomyces diastochromogenes:
Az élesztő-maláta agaron a pigmentképződés hiánya és a raffinóz hasznosítása eltérést mutat a fajok és az MF980-CF1 törzs között.
4) Streptomyces galbus;
A pigmentképződés glicerin-aszparagin agaron, keményítő agaron és zabliszt agaron, valamint a nagyon gyenge szacharóz- és ramnózhasznosítás eltér az MF980CF1 törzsétől.
5) Streptomyces neyagawaensis:
A pigmentképződés glicerin-aszparagin agaron, keményítő agaron és zabliszt agaron, valamint a raffinóz hasznosítása eltér az MF980-CF1 törzsétől.
6) Streptomyces bottoropensis:
A fajok és az MF980-CF1 törzs eltérést mutatnak a pigmentképződésben glicerin-aszparagin agaron, valamint a raffinóz hasznosításában.
Minthogy a Streptomyces genusban nem ismeretes olyan fajta, amely e törzs tulajdonságait mutatná, ezért arra a következtetésre jutottunk, hogy ez a törzs új.
Ezt a törzset Streptomyces sp. MF980-CFl-nek neveztük el, és FERM-5430 szám alatt letétbe helyeztük (ATCC. 31820) a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry gyűjtőhelyen.
A .Streptomyces sp. többi törzséhez hasonlóan ez a törzs is mesterségesen kiváltott vagy spontán mutációra képes. Mutagénekként például ultraibolya sugárzást, röntgensugárzást és kémiai reagenseket használhatunk. Az így kapott összes, homocitromsav-oligoribozidot termelő mutáns a találmány oltalmi körébe tartozik.
A homocitromsav-oligoribozid a fermentációs táptalajból ismert eljárásokkal nyerhető ki. Ezek az eljárások mindenekelőtt a vegyület savas jellegén alapulnak, cs ennek az. anyagnak a megkötésére legelőnyösebben bázikus anioncscrélőkct használunk.
Anioncserélőkként például Amberlit CG400 vagy CG-4B (Rhom and Haas Co.), Diaion PA316 vagy WA30 (Mitsubishi Chemical Industries) vagy DEAE Sephadex (Pharmacia), valamint egyéb OH, Cl vagy HCO3‘ formára alakított ioncserélők vagy ezek keverékei alkalmazhatók.
Miután az abszorbenst vízzel átmostuk, az abszorbeált homocitromsav-oligoribozidot nátrium-hidroxid, ammóninin-hidrogén-karbonát vagy ásványi sók oldataival eluáljuk. Ily módon jó kitermelés érhető el. Általában nátrium-kloridot (0,1-1 mólos) vagy ammónium-hidrogén-karbonátot (0,1—1 mólos) használunk.
Minthogy a homocitromsav-oligoribozid a kationcserélőkön gyakorlatilag nem abszorbeálódik, a kationcserélők alkalmasak a bázikus szennyeződések eltávolítására.
A homocitromsav-oligoribozid-származékot cellulózon (Aviccl) végzett vékonyrétegkromatográfiás eljárással különíthetjük el. A futtatást egy oldószereleggyel végezzük el, amely n-propanolt és 3 M ammóniumhidroxidot tartalmaz 55 : 45 térfogatarányban (Rf = = 0,65). Ugyanezen az alapon hatékony tisztítás végezhető el cellulóz oszlopkromatográfiás eljárással is, amelyhez hasonló vagy rokon oldószereket használunk.
Az. hogy a homocitromsav-oligoribozidot milyen formában — például szabad formában, nátriuinsó, lítiumsó stb. - nyerjük ki, az alkalmazott oldószerektől függ.
Minthogy a homocitromsav-oligoribozid erősen gátolja a dextiánszachaiázt (EC 2.41.5), felhasználható gyógyszerként. így például fogszúvasodás hatékony megelőzése céljából hozzáadagolható fogpasztához. Ahomocitromsav-oligoribozid-származék adagolható önmagában vagy más hatékony anyagokkal kombinálva is. A fogszúvasodás egy olyan fogbetegség, amelyet a fogzománcnak a fog felületéhez tapadó baktériumok által termelt szerves savak hatására bekövetkező ásványi anyagokban való elszegényedése idéz elő. A baktériumoknak a sima felületeken. így a fogakon való megtapadását elősegíti a ragadós és oldhatatlan dextrán, amelyet az orális Strcptococcusok egy bizonyos csoportjának dextránszacharázai termelnek szacharózból. így tehát a dextránszacharáz gátlása a fogszúvasodás megelőzését jelenti.
A fogszúvasodás megelőzése céljából a homocitromsav-o!igoribozid-származékot adalékanyagként nemcsak fogpasztához, hanem rágógumihoz, italokhoz, édességekhez és egyéb élelmiszerekhez is hozzáadhatjuk.
Az. alábbiakban példákkal mutatjuk be részletesebben a találmányt.
1. példa
Homocitromsav-oligoribozid előálh'tása % maltózt. 1 % kukoricaáztatási lét és 1 % Pharma közeget (Traders Oil Mill Company) (pH = 6,2; 125 ml egy 500 ml-es Sakaguchi lombikban) tartalmazó közeget beoltottunk lejtős agar táptalajon termelt Streptomyces sp. MF980-CFl-gyel (FERM-P5430). Miután a tenyészetet 5 napon át ráztuk 27 °C-on, az egyesített fermentált táptalaj (5 liter) pH-ját nátrium-hidroxiddal 8,0-ra állítottuk be. Ezt követően a fermentált táptalajt hőkezeltük (60 °C-on, 30 percig), majd leszűrtük. A kapott szűrletct (4.5 liter) keresztüláramoltattuk egy Diaion PA316 oszlopon (OH formára alakított; 1,3 liter; Mitsubishi Chemical Industries Co.), majd az oszlopot 10 liter vízzel mostuk.
A megkötött homocitromsav-oligoribozidot 1 M annnóníum-hidrogén-karbonáttal eluáltuk. Az egyesített aktív frakciókat (1 liter; kitermelés 83%) csökkentett nyomáson betoményitettük 80 ml-re.
A koncentrátumot Sephadex G-15 (I liter; Pharcia 3
184 846
ICo.) segítségével gélen szűrtük, melyhez eluensként vizet használtunk. 50 nú-es frakciókat gyűjtöttünk össze. A 11-15. frakciókat találtuk aktívaknak. Az egyesített j aktív frakciókat (kitermelés: 72 %) közvetlenül felvittük ; a DEAE-Sephadex A-25 oszlopra (HCO3 formára alakíJ tott; 400 ml; Pharmacia Co.), majd 0,1 M-tól 0,7 M-ig ί lineárisan növekvő koncentrációjú ammónium-hidrogén karbonát oldattal eluáltuk. Aktív frakciókat körülbelül
0,25 M ammónium-hidrogén-karbonát mellett kaptunk. Az aktív frakciókat egyesítettük (kitermelés: 64%), majd az ammónium-hidrogén-karbonátot csökkentett nyomáson eltávolítottuk. Az így kapott koncentrátumot ezt követően felvittük a DEAE-Sephadex A-25 oszlopra (Cl formára alakított; 200 ml; Pharmacia Co.), majd 0,01 M-tól 0,5 M-ig lineárisan növekvő koncentrációjú nátrium-klorid oldattal eluáltuk.
Aktív frakciókat körülbelül 0,17 M nátrium-klorid koncentrációnál kaptunk (kitermelés: 58%). Az aktív frakciókat egyesítettük, betöményítettük 1 ml-re, majd egy hosszú Scphadcx G-15 oszlop segítségével (30 ml) sómenlcsítettük, melyhez cluenskónt vizet használtunk. A kevert oldószerrel (n-propanol és 3 M ammóniumhidroxid 70: 30 térfogatarányú elegyével) szilikagélen végzett kromatografálás után (Silica AR CC-7, Mallinckrod Co.) fehér kristályokat kaptunk (80 mg;kitermelés: 49 %).
2. példa
A homocitromsav-oligoribozid-nátriumsó tulajdonságai
1. Fehér por; olvadáspont 205-210 °C (bomlással).
2. Vízben oldható; szerves oldószerekben oldhatatlan.
3. A homocitromsav-oligoribozid hidrolízisével ribózokat és homocitromsavat kapunk.
5. Az UV-színképnek nincs maximuma.
6. Fenol/kénsavval és orcinol-hidrokloriddal pozitív színreakciót ad. Ninhidrinnel, Nelson-Somogyi reagenssel és difenil-amin/kénsawal negatív színreakciót ad.
7. A 13C NMR-színkép D2 O-ban az 1. ábrán látható.
8. Az ’H NMR-színkép D2 O-ban a 2. ábrán látható.
9. Az IR-színkép (KBr lemez) a 3. ábrán látható.
Ezek a tények azt jelzik, hogy a találmány szerinti homocitromsav-oligoribozid-származék az előzőkben ismertetett szerkezettel rendelkezik.
3. példa
Dextrán-szacharáz gátlása
A felhasznált dextrán-szacharázt az alábbi módon 20 állítottuk elő. Brain Hcart Infusion húslct (Eikcn Chemical Co.) beoltottunk Streptococcus ATCC 27607 mutánssal, majd egy éjszakán át tenyésztettük 37 °C-on. A tenyészet centrifugálással kapott szupernatáns folyadékát 50 %-osan telített ammónium-szulfáttal kicsaptuk. A ki25 csapott enzimet a szokásos eljárásokkal sómentesítettük és tisztítottuk.
A dextrán-szacharázra kifejtett inhibitorhatást az alábbi módon vizsgáltuk. A szubsztrátum oldat 2,7 ml-ét [0,3 % szacharóz, 0,04 % nátrium-azid, 30 mmól kálium30 klorid, 30 mmól nátrium-klorid, 50 mmól imidazol-HCl puffer (pH = 6,8)], a vizsgálati oldat vagy a kontroll esetén víz 0,3 ml-ét, valamint 50 mikroliter dextránszacharázt összekevertünk.
órás, 37 °C-on végzett inkubálás után vízhez viszo35 nyitva mértük a zavarosságot 600 nm-en. A százalékos gátlást a következő egyenlet szerint számítottuk:
(Kontroll zavarossága)-(Vizsgált oldat zavarossága) Százalékos gátlás = --z-· ---— X 100 (Kontroll zavarossága)
4. Elemanalízis a C22H3iOi9Li3.2H2O összegkép-
letű vegyületre: C[%] H[%]
számított: 40,24 5,33
talált: 40,15 5,31
Ezen anyag egy egysége alatt azt a mennyiséget értjük, 45 amely 50 %-os gátlást idéz elő.
A 4. ábrán a homocitromsav-oligoribozid koncentrációja és a fenti eljárással meghatározott százalékos gátlás közötti összefüggés látható.
184 846
4. példa
Streptococcus mutánsok megkötödésének gátlása
Különböző koncentrációkban szacharózt tartalmazó Heart Infusion húslét (Difco) autoklávba helyeztünk, és aszeptikusán különböző mennyiségű homocitromsavoligoribozid oldatot (szűrt és sterilizált) vagy kontroll gyanánt steril vizet adtunk hozzá (a végső térfogat 3,0 ml; a végső koncentrációk az 1. táblázatban láthatók). Mindegyik kémcsövet beoltottuk 1.10s CFU
Az alábbiakban ismertetjük az ábrák tartalmát.
7. ábra: A találmány szerinti homocitromsav-oligoribozid-nátriumsó 13 C NMR-színképét mutatja.
2. ábra: A találmány szerinti homocitromsav-oligo5 ribozid-nátriumsó 1H NMR-színképét mutatja.
3. ábra: A találmány szerinti homocitromsav-oligoribozid-nátriumsó IR-színképét mutatja.
4. ábra: A homocitromsav-oligoribozid-nátriumsó koncentrációja és a dextránszacharáz aktivitására kifej1θ tett gátlás [%] közötti összefüggést mutatja.
I. táblázat
Homocitromsav- oligoribozid- származék (nátriumsó) koncentrációja [mikrogramm/ml] Szacharóz koncentrációja [%]
0,5 1,0 2,0
Zavarosság (600 nm) Százalékos gátlás Zavarosság (600 nm) Százalékos gátlás Zavarosság (600 nm) Százalékos gátlás
0 0,617 _ 0,595 0,502 —
50 0,510 17 0,340 43 0,333 33
100 0,249 60 0,173 71 0,132 73
Streptococcus ATCC 27607 mutánssal, melyeket egy éjszakán át 37 °C-on termeltünk Brain Heart Infusion húslében (Difco) és 14 órán át levegőtől elzárva inkubáltunk 37 °C-on. A kémcsöveket a vízszinteshez képest 30 °C-os szögben helyeztük el. A nem megtapadt sejteket eltávolítottuk úgy, hogy a táptalajt leöntöttük, és a vizsgálati 35 kémcsövet háromszor 3 ml 50 mM foszfátpufferrel (pH = 6,0) mostuk. A megkötődött táblát (oldhatatlan dextrán és az oldhatatlan dextrán képződése eredményeképp kialakult sejt alakú aggregátumok) mechanikus keveréssel; valamint a felület üvegbottal való kaparásával 40 3 ml fent ismertetett foszfátpufferben szuszpendáltuk.
A szuszpenzió zavarosságát 600 nm-en mértük. Az eredmények az 1. táblázatban láthatók.

Claims (2)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Eljárás az (I) kcpletű homocitromsav-oligoribozidszármaz.ck és e vegyület sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy a homocitromsav-oligoribozid-származékot valamely, a Streptomyces genusba tartozó törzs (deponálási szám: ATCC: 31820) táptalajából fermentáció után különítjük el.
  2. 2. Eljárás fogszúvasodást gátló gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított (I) képletű hatóanyag-származékot vagy ennek sóját a gyógyászatban ismert vivő- és segédanyagokkal elegyítjük, és gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
    4 db ábra
HU81568A 1980-03-08 1981-03-06 Process for producing homo-citric acid-oligoryboside derivatives HU184846B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP55029690A JPS5914477B2 (ja) 1980-03-08 1980-03-08 オリゴ糖誘導体，その製造法及びそれを有効成分とするウ歯予防剤

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU184846B true HU184846B (en) 1984-10-29

Family

ID=12283094

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU81568A HU184846B (en) 1980-03-08 1981-03-06 Process for producing homo-citric acid-oligoryboside derivatives

Country Status (11)

Country Link
US (2) US4376761A (hu)
EP (1) EP0035742B1 (hu)
JP (1) JPS5914477B2 (hu)
AT (1) ATE7700T1 (hu)
DE (1) DE3163814D1 (hu)
DK (1) DK104481A (hu)
ES (1) ES8202363A1 (hu)
FI (1) FI810710L (hu)
GR (1) GR74471B (hu)
HU (1) HU184846B (hu)
NO (1) NO150514C (hu)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4767614A (en) * 1984-02-29 1988-08-30 Wm. Wrigley Jr. Company Modified dextrans in a dental health method deactivating glucosyltransferase enzymes
JPS6470899A (en) * 1987-09-11 1989-03-16 Mitutoyo Corp Remote measuring instrument
US5401723A (en) * 1992-12-02 1995-03-28 Colgate-Palmolive Company Glycoconjugate inhibition of Streptococcus pyrogenes adhesion
AUPP784998A0 (en) * 1998-12-21 1999-01-21 Ghadiminejad, Iraj A low molecular weigh, non-proteinaceous compound that inhibits mitogen induced cytokine production
US20030108846A1 (en) * 2001-12-06 2003-06-12 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Disposable oral hygiene device and methods of making same

Also Published As

Publication number Publication date
US4426447A (en) 1984-01-17
NO150514B (no) 1984-07-23
GR74471B (hu) 1984-06-28
NO810778L (no) 1981-09-09
NO150514C (no) 1984-10-31
ATE7700T1 (de) 1984-06-15
EP0035742A1 (en) 1981-09-16
JPS56125397A (en) 1981-10-01
DK104481A (da) 1981-09-09
ES500197A0 (es) 1982-01-16
FI810710L (fi) 1981-09-09
JPS5914477B2 (ja) 1984-04-04
US4376761A (en) 1983-03-15
ES8202363A1 (es) 1982-01-16
DE3163814D1 (en) 1984-07-05
EP0035742B1 (en) 1984-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0182315B1 (en) Novel antibiotic nk84-0218 pharmaceutical compositions containing it and process for the production of the same
EP0003616A2 (de) Neue Aminozucker-Derivate, ihre Herstellung und Amylase-hemmende Mittel
DE2718782C2 (hu)
JPH0641182A (ja) Ｂｂｍ−２４７８ｂ抗生物質
HU184846B (en) Process for producing homo-citric acid-oligoryboside derivatives
US4517296A (en) Antibiotic acmimycin and its production
US5536660A (en) Streptomyces viridodiastaticus subsp. "Littus" NRRL-21082N capable of producing antibiotics
EP0871638B1 (en) Novel aminooligosaccharide derivative and process for preparing the same
US3987029A (en) Antibacterial antibiotics AM31α, AM31β and AM31γ
US4550159A (en) Anthracycline compounds
US4378348A (en) OA-7653 Substance
GB2042532A (en) Antibiotics c-19393 s2 and 'i
JPS6261037B2 (hu)
US4592999A (en) Process for producing daunomycin
KR950013857B1 (ko) 신규 항생물질 무레이도마이신 a, b, c 및 d 그의 제조 방법 및 치료학적 용도
USRE29903E (en) Antibacterial antibiotics AM31α, AM31β and AM31γ
US4003902A (en) Naphthyridinomycin antibiotics
US4234685A (en) Microbiological methylation of aminoglycosyl-aminoglycosides
CA1178548A (en) Homocitric acid oligoriboside derivative for prevention of dental caries
US5171740A (en) Coumamidine compounds
US4264734A (en) Process for producing antibiotic desacetyl 890A10
DE2805701A1 (de) Das antibiotikum desacetyl 890a tief 10
HU194314B (en) Process for preparing new, alpha-glucosidase inhibiting pseudooligosaccharides
FR2463618A1 (fr) Nouvel antibiotique aminoglycoside et sa production
US4348516A (en) Microbiological methylation of aminoglycosyl-aminoglycosides