HU180211B - Process for preparing a-guaiaconic acid and diagnostic composition containing thereof - Google Patents

Process for preparing a-guaiaconic acid and diagnostic composition containing thereof Download PDF

Info

Publication number
HU180211B
HU180211B HU78BO1710A HUBO001710A HU180211B HU 180211 B HU180211 B HU 180211B HU 78BO1710 A HU78BO1710 A HU 78BO1710A HU BO001710 A HUBO001710 A HU BO001710A HU 180211 B HU180211 B HU 180211B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
hydrogen
hyperoxide
acid
chromogen
toluene
Prior art date
Application number
HU78BO1710A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Werner Guenthlein
Hans Wielinger
Walter Rittersdorf
Wolfgang Werner
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of HU180211B publication Critical patent/HU180211B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
    • G01N33/721—Haemoglobin
    • G01N33/725—Haemoglobin using peroxidative activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/904—Oxidation - reduction indicators

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás az A-gvajakonsav előállítására, továbbá rejtett /okkult/ vér székletben történő kimutatására szolgáló diagnosztikum, amely kromogénként 600 nm-nél legalább ®lcm = fajlagos extinkcióju A-gvajakonsavat tartalmaz. ·
A székletben levő rejtett vér kimutatása az emésztőszervek vérzésekkel kisért megbetegedéseinek diagnózisa szempontjából fontos. A gyomor-bélcsatorna rendszerben fellépő vérzéseket többnyire fekélyek, polipok és különösen daganatok idézik elő. A székletben levő vér kimutatása ezért fontos adalék az emésztőszervek rákos megbetegedéseinek korai felismeréséhez, diagnózisához.
Az ilyen vér kimutatására már régóta alkalmazzák a gvajak-próbát, amelynél a peroxidosan ható véralkotók katalitikus hatását használják ki. E próba során a hidrogén-hiperoxidból szabaddá vált oxigént viszik át egy kromogénra, amely színezékké oxidálódik és igy kimutatja a peroxidosan ható anyag jelenlétét.
A gvajak-próba több módosulatában ismert. A próbát általában a kővetkezőképpen hajtják végre: egy székletszuszpenzióhoz hidrogén-hiperoxidot és alkoholos gvajakgyanta oldatot adnak. Kék szin fellépése vér jelenlétére utal.
Újabban a vér kimutatására a székletben egy g^orsdiagnosztikum is létezik. E módszernél a gvajakgyanta szűrőpapírra van impregnálva. Erre az átitatott szűrőpapírra felkenik a széklet égy mintáját. Előhívás céljából a szűrőpapír hátoldalára hidrogen-hiperoxid alkoholos;oldatát cseppentik. Vér jelentése esetén kék gyűrű alakul ki.
A gvajakgyanta alkalmazása a vér kimutatására a székletben azonban nem problémamentes. A kémcsőprobánál igen gyakran kapnak ugyanis hamisan pozitiv eredményeket, mig a gyorspróbánál a kimutatási határ igen erősen függ a szekletminta más alkotórészeitől. Mindez a gvajakgyanta természetében találja meg magyarázatát.
A gvajakgyantát a Guajacum officináiig és a Guajacum sanctum trópusi fák gesztjéből nyerik és az egy sor alkotót tartalmaz. A hidrogén-hiperoxid hatására peroxidosan ható anyagok, igy a vér és a peroxidáz jelenlétében fellépő elszineződes lényegében két főalkotónak, nevezetesen a furogvajacinnak és a gvajakonsavnak, tehát a sajátosan A-anyagnak nevezett anyagnak tulajdonítható Zv.ö. H. Auterhoff és munkatársainak az Arch. Pharraaz. 299,-.618 /1966/és 302, 545 /1969/ helyein megjelent közleményéve 13- Néhány más ,Tis mennyiségekben jelenlevő és hasonlóképpen oxidálható vegyületen kívül előfordul e gyantában nagyszámú egyéb olyan alkotóanyag ig, amelyek az indikátorreakciot nem befolyásolják, sőt, adott esetben gátolják. Ilyen aryagok sok más mellett például a gvajaretsav, a dihidro-gvajaretsav, a gvajacinsav és a vanillin.
A dolog természetéből következik, hogy egy természetes anyagban az Összes alkotó nem mindig van jelen azonos arányban úgyhogy a természetes eredetű gvajakgyanta minden egyes kinyerési folyamatnál eltérő összetételű. Ezenkívül minden további nélkül belátható, hogy a gvajakgyantás impregnáló műveletnél a keverék nem állandó alkotói elbomolhatnak, aminek folytán ismét csak eltérő összetételű keverék állhat elő.
Az újabban igen nagy jelentőségre szert tett gyorsdiagnosztikumok gyakorlati alkalmazásának egyik fő előfeltétele már most, hogy egzaktak ég mindenkor reprodukálhatóan legyenek előállíthatok.Ez a két előfeltétel azonban az eddig ismertetett gyorsdiagnosztikumok esetében nem állott fenn.
Ezért adva volt a feladat, jól meghatározott és elegendően tiszta vegyszerek felhasználásával a rejtett vérnek a székletben való kimutatására alkalmas olyan gyorsdiagnosztikumot kidolgozni, amely egzakt módon és reprodukálhatóan előállítható és analitikailag vizsgálható, ugyanakkor pedig elegendő mértékben állandó is. /
Kutatásaink során meglepő és előre nem látható módon most azt találtuk, hogy az A-gvajakonsav, tehát a nyers gvajakgyanta főkomponensei egyikének kromogénkent történő felhasználásával olyan gyorsdiagnosztikumot kapunk a rejtett vér meghatározására a székletben, amely rendelkezik a fent említett szükséges tulajdonságokkal, ezenkívül pedig meghatározott kimutatási határa van,
A gvajakgyanta, amint azt a fentiekben már említettük, lényegében két szinképző főalkotóból, a furogvajacinból és ,a gvajakonsavból áll, aholis a furogvajacin szerkezetét a szintézissel egyértelműen tisztázták. A kísérletek most azt mutatták, hogy a furogvajacin mint kromogén gyorsdiagnosztikum céljaira a vér kimutatására a székletben nem használható, minthogy azzal olyan próbapapirok készíthetők, amelyek túl érzékenyek-és ezenkívül túl bomlékonyak is.
A másik főalkotó, a gvajakonsav elkülönítése az irodalom szerint eddig csak preparativ vékonyrétegkromatográfiás utón volt lehetséges,amelynek során e vegyületet csak oly csekély mennyiségekben sikerült előállítani, hogy az kromogénként gyoxadiagnosztikum céljaira gyakorlatilag nem jöhetett szóba.
-2180211
Az irodalomban ugyan ismételten is leírtak kísérleteket nagyobb gvajakonsav mennyiségek elkülönítése céljából, ezek az eredmények azonban kevéssé voltak kielégitőek.
így például J. Küh.1, a braunschweigi Technológiai Főiskolán 1964-ben elkészített disszertációjában /21. lap/ ismertette - többek között - hogy a gvajakongyanta szilikagélen végrehajtott oszlopkronatografiás elválasztása nem lehetséges.Éppen ezert meglepőnek és váratlannak tekinthető, hogy kutatásaink során e műszaki előítélet ellenére azt találtuk, hogy igenis, lehetséges a,természetes gvajakongyantát szilikagélen oszlopkromatográfiás módszerrel felbontani és a gvajakonsavat csaknem tiszta alakban megkapni, úgy hogy az minden további tisztítás nélkül diagnosztikámként használható legyen vérnek a székletben történő meghatározására.
A találmány tárgya ezért mindenekelőtt a peroxidázzal és hidrogén-hiperoxiddal végrehajtott reakció után 600 nm-nél meghatározva ΕΊ __ = legalább 200-as fajlagos extinkcióju, az IR-sávokkal: ^.600 cm1 /m/; 1505 cm” /v.s/; 1260 cm /s;b/; 1200 cm-·1· /s;b/; 1115 cm-'1' /m/; 1025 cm1 /m/, valamint az R^-értékkel ’/toluol/dioxán/jégecet 90:45:10 arányú elegyben/ jellemzett gvajakonsav /amelyet a technika állásától történő elhatárolás érdekében A-gvajakonsavnak nevezünk/ előállítási eljárása, amelyre jellemző, hogy a természetes gvajakgyantát savval előkezelt közömbös szilikagélen, védőgáz alkalmazásával alkalmas eluálószerrel, igy például n-heptán/etil-acetát vágy toluol/aceton eleggyel, oszlopkromatográfiásan bontjuk fel.
Amint azt a fentiekben már említettük, az igy kapott A-gvajakonsav vékonyrétegkromatográfiásan vizsgálva nem egészen egységes, azaz a fényben a peroxidázzal és hidrogén-hiperoxiddal kekre szineződő főalkotokon kívül még szennyeződéseket is tartalmaz, amelyek azonban csekély koncentrációjuk miatt diagnosztikus szerben kromogénként történő alkalmazásuk szempontjából elhanyagolhatók. A találmány szerinti A-gvajakonsav amorf es a fent ismertetett módon az írspektrum sávjai, valamint a fajlagos extinkció és a vékonyrétegkromatogramm Rp-értéke alapján jellemezhető /1. az 1. Példát/.
A termék jellemzésére a fajlagos extinkció azért bizonyult célszerűnek, mert az említett szennyezések, valamint az esetleges oldószermaradékok az olyan szokványos analitikai módszereket, mint amilyenek az UV- es az NMR-spektrum, jelentékeny mértékben zavarják. v
Fajlagos extinkción a 100 ml oldatban jelenlevő lg A-gvajakonsav, valamint a peroxidás és a hidrogén-hiperoxid által előidézett és 1 cm hosszú küvettában 600 nm-nél mért extinkciót értjük /E^cm/«
Az A-gvajakonsav elkülönítésének az 1. példában részletesen ismertetett módszere a találmány szerinti eljárásnak, csupán egy előnyös foganatosítási módját jelenti. A természetes gvajakgyanta kiséroanyagainak aceton-toluol eleggyel végrehajtott kicsapással történő elválasztása természetesen más utón is megvalósítható, igy például etil-alkohol/toluol-elegyes kicsapatással, vagy jégecetes oldással és vizzel 30%-os ecetsavig történő hígítással, valamint a csapadék 1:5 arányú aceton/toluol-elégyben történő felvételével, vagy metilizobutil-ketonos oldással, 13-as pH-ju nátrium-bidroxid/foszfát pufferral végrehajtott extrakcioval. a szerves fázis bepárlásával és toluollal végrehajtott hígítással. Emellett minden további nélkül alkalmazhatunk eluálószerként olyan oldószerelegyeket, mint például a xilol/aceton vagy a metilizobutil-keton/toluol rendszerek, aholis a mennyiségi arányok tág határok köpött változtat-3180211 hatók. Változtatható végül a betáplált gvéjakgyanta és az eluálószer mennyisége is.
Védőgázként előnyösen nitrogént vagy szén-dioxidot használunk.
A találmány tárgya továbbá javított diagnosztikus szer rejtett vérnek az ismert gvajak-próbához hasonló módon történő kimutatására a székletben, amelyben a természetes gvajakgyanta helyett kromogénként a peroxidáz és a hidrogénhiperoxid reakcióját követően 600 nm-nél meghatározva Εη __ legalább 200
X C ul fajlagos extinkcióju A-gvajakonsavat alkalmazzuk.
A kísérletek meglepő módon azt mutatják, hogy az ismert gvajak-próbáéhoz hasonló módon előállított, kromogénként azonban az A-gvajakonsavat tartalmazó próbapapirok a ”mesterséges széklettel** /vér a vízben / éppoly érzékenyen reagáltak, mint a kereskedelemben szokványosán kapható, a tisztitatlan gvajakgyanta alakon előállított próbapapirok. Olyan természetes székletek eseteben viszont, amelyekhez 1-3% vért adtunk, a találmány szerinti próbapapirok pozitív reakciót mutattak, mig a kereskedelmi szokványos próbapapirral kapott eredmények ingadozóak, miközben az érzékenységi határ székletenként 1-7%, sőt ennél nagyobb mértékű vértartalommal is ingadozik.
Amint azt már fent ismertettük, a találmány szerinti A-gvajakonsavat fajlagos extinkciójával jellemezzük. Minthogy a gvajakonsav elkülönítésére szolgáló eljárásoknál az A-gvajakonsav tisztasága a feldolgozásra kerülő gvajakgyantától és a mindenkori eljárási körülményektől függ, igy a kapott A-gvajakonsav fajlagos extinkciója is különböző. Megállapítottuk, hogy azok az A-gvajakonsav készítmények alkalmasak különösen a diagnosztikumok céljaira, amelyeknek fajlagos extinkciója meghaladja a 200-as értéket. A nyers gvajakg/panta fajlagos extinkciójának értéke közelítőleg 100, amely értéket az A-gvajakonsav, a furogvajacin és a többi ismeretlen oxidálható alkotó változó mennyiségei befolyásolnak.
A diagnosztikumban az A-gvajakonsavat 40-250 mg, előnyösen 50-150 mg per 100 ml impregnáló oldat mennyiségben alkalmazzuk, mégpedig 250-es fajlagos extinkció értekkel. Ettől eltérő fajlagos extinkció érték esetén az értékeket megfelelően korrigáljuk.
Az orvosi gyakorlatban és a klinikai laboratóriumi munkában az utóbbi években diagnosztikai segédeszközként egyre inkább teret nyertek az úgynevezett gyorspróbák. Ezek általában szivóképes hordozók, többnyire papírok, amelyeket a kimutatási reakcióhoz szükséges/vegyszerekkel itatnak át és amelyek a vizsgálandó folyadékba történő bemerítés után szinreakciót adnak. A kóros vagy kórokozó testtartalom kimutatását vagy félkvantitativ meghatározását ezekkel gyorsan és biztosan elvégezheti a szakképzet len személyzet, igy az orvosi segédszemélyzet is.
Az ilyen tipusu próbapapirok a tulajdonképpeni reakcióösszetevőn kívül adott esetben egy sor adalékanyagot is tartalmazhatnak, igy például puff ereket, nedvesitőszereket, vastagitószereket, védokollóidokat, komplexképzőket és stabilizálószereket, amelyek a próbában alkalmazott indikátor és a próba alkalmazási céljától függően válhatnak szükségesekké.
A találmány tárgyához tartoznak ezért próbapapirok is rejtett vér kimutatására a székletben, amelyek kromogénként a penoxidáz és a hidrogén-hipercxid reakciója után 600 nm-nél meg-4180211
1% határozva legalább 200-as fajlagos extinkcióju /E^ cm/ A-gvajakonaavat tartalmaz. Annak megakadályozására, hogy az A-gvajakonsawal átitatott papírok a fény és/vagy a levegő hatására kékre szineződjenek, alkalmas stabilizátort is hozzá kell adnunk. Kutatásaink során azt találtuk, hogy az aril-szemikarbazidok csoportjába tartozó, eddig még nem ismert stabilizátorok ezt a kékre színeződést megakadályozzák. Vizsgálataink során kitűnt továbbá, hogy ezen ári1-szemikarbazidők hozzáadása utján bizonyos határok között az érzékenységet is rugalmasan módosíthatjuk.
Az oxidációs indikátorok esetében használható ezen uj stabilizátorokat. valamint alkalmazásukat a 177.174 sz. magyar szabadalmi leírásban ismertetjük. Itt és a fentiekben arilszemikarbazidokon Ar - NH - NH - CO - N^ /1/ általános képletű vegyületeket értünk, ahol az Ar adott esetben 1-4 szénatomos alkil-, alkoxicsoporttal vagy halogénatommal szubsztituált fenil- vagy n^ftil-gyököt jelent.
Az alkil csoportok előnycsen metil- vagy etil-csoportot képviselnek, mig a halogénatotr előnyösen fluor-, klór- vagy brómatom.
Előnyös továbbá, ha a próbapapirokat komlexképzőszerrel is impregnáljuk, abból a célból, hogy a legtöbb papírban jelenlevő fémionokat komplex kötésbe vigyük. E célra különösen alkalmasnak bizonyultak az etilén-diamin-tetraecetsav sói, különösen annak káliumsója, főleg, ha azokat egyidejűleg kiegyenlítőszerekként /pufferekként/ is alkalmazhatjuk.
Minthogy a próbapapirok viszonylag nagy mennyiségű vizoldható anyagtartalmuk következtéoen kivérzésre, kivándorlásra lehetnek hajlamosak, gyakorlatilag célszerűnek találtuk, ha a recepturához vastagitoszert vagy vastagitószereket, igy például metil-cellulózt, zselatint vagy poli/vinil-pirroíidon/-t adunk, amikor is ezek az anyagok védokolloidokként is hathatnak.
Nedvesít őszerekként többek között hosszú szénláncu szerves szulfátokat vagy szulfonátokat alkalmazhatunk.
A találmány szerinti próbapapirok előállításánál úgy járunk el, hogy szivóképes hordozókat, igy például szűrőpapírt, cellulózt vagy müszálbundát olyan oldatokkal itatunk át, amelyek a szükséges alkotókat célszerűen viz és rövidszénláncú alkoholok illetve aceton elegyeiben tartalmazzák, majd az impregnált papírokat szárítjuk.
Eljárhatunk azonban például oly módon, is hogy a vízben oldott komplexképzőszerre1 előimpregnálást végzünk, majd a többi alkotóval szerves oldatokból végzünk utóimpregnálást.
Az ilyen papírok esetében a különböző gyártási adagokból származó egyedek a próbánál egyező eredményeket adnak. Ezzel szemben a tisztitat lan gvajakgyantával impregnált papírok különböző gyártási adagjaiból származó egyedek esetében a dolog természetében rejlő okok következtében az érzékenység tekintetében erős ingadozások észlelhetők.
A szokványos próbapapircsíkokkal ellentétben, a találmány szerinti próbapapirnál nincs valamennyi reakcióösszetevő a hordozóra impregnálva. Stabilitási okokból ugyanis kitűnt, hogy a hidrogén-hiperoxidot csak akkor kell hozzáadnunk, ha'az elszíneződés azonnali kiértékelésére a lehetőség adva van.
A székletben levő rejtett vér·kimutatását ezért a következőképpen hajtjuk végre:
Egy próbapapircsikot - amelynek előállítását a Béldákbanis
-5180211 merte tjük - előszöris a vizsgálandó széklet egy mintájával kenünk be. A minta megszáradása után a hordozó hátoldalát becsepegtetjük hidrogén-hiperoxid alkoholos oldatával, amikor is vér jelenléte esetében kék elszíneződés lép fel.
A találmányt részletesebben az alábbi Példák kapcsán mutatjuk be.
1. Példa
-A-gvajakonsav előállítása
200 g őrölt gvajakgyantát elkeverünk 500 ml acetonnal, · amikor is a gyanta egy csekély hányad kivételével oldatba megy. Az igy kapott oldathoz keverés közben 3 liter·toluolt csepegtetünk. Kb. 30 perc múltán a kivélt csapadékot /kb. 60 g/ leszivatjuk és ezt a maradékot eldobjuk. A szürletet vákuumban bepároljuk, amikor is kb. 160 g sötétbarna, üvegszerü maradékot kapunk. Ezt az anyagot melegítés közben feloldjuk 500 ml menynyiségü, 2:5 arányú n-heptán/etilacetát elegyben,majd az oldatot lehűlés után 8 cm átmérőjű,1,65 m magas /3,1 kg.0,063-0,2 mm szemcsenagyságu szilikagélből készített/ szilikagel oszlopra öntjük.’ Ezt megelőzően a szilikagélt 2 N sósavoldattal vasmentességig, desztillált vizzel pedig semlegességig mossuk és vákuumban szárítjuk. Az elválasztást szén-dioxid vedőgáz alatt, 7t5 liter mennyiségű, 2:5 arányú n-heptán/etil-acetát eleggyel végezzük; összesen 150, egyenként 50 inl mennyiségű frakciót gyűjtünk. A 115-145 frakciókból bepárlás után kb. 16,5 g menynyiségü, beigeszinü, üvegszerü anyagot kapunk, amelyből a 150 ml xilolból végrehajtott átkristályosítás után kb. 12 g menynyiségü A-gvajakonsav keletkezik. Célszerű az egyes frakciókat vékonyrétegkromatográfiásan megvizsgálni, tekintettel arra, hogy bizonyos esetekben előfordulhat a kívánt anyag eluálásának eltolódása.
Vékonyrétegkromatográfia:
A lemezek: 60 F-254 jelzésű, Merck-gyártmányu szilikagel készárulemezek.
A futtatószer: toluol/dioxén/jégecet /90:25:10/;
Permetezőoldatok:
Vizben oldott 0,05% peroxidázzál és 0,5% hidrogén-hipefoxiddal az A-gvajakonsav kékre szineződik.
Vizben oldott 6% formaldehiddel és 26% kénsavval ötperces melegítés után az A-gvajakonsav barnásibolyára, a szennyeződések pedig a pirostól az ibolyáig szineződnek.
A fajlagos extinkció meghatározása:
4,0·mg A-gvajakonsavat feloldunk 400 ml 50%-os vizeá alkoholban.
1,0 ml-t ebből az oldatból,
0,5 ml-t Polivinilpilpirrolidon K 90 3%-os desztillált vizes oldatából,
1,0 ml 0,1 mólos vizes hidrogén-hiperoxid oldatot és
0,1 ml 1%-os torma-peroxidáz /1-2. 10* ü/mg/ desztillált vizes oldatot desztillált vizzel 10 ml térfogatra egészítünk ki.
A jól átkevert oldatot 5-10 perc múltán 1 cm-es küvettában, 600 nm-nél mérjük.
-6180211
A fajlagos extinkció = a mért extinkció x Ί000.
IR-sávok /KBr/: 1600 cm”1 /m/j 1505 cm”1 /v.s./; 1260 cm”1 /s;b/; 1115 cm1/!!!/; 1025 cm”1 /m/; 1200 cm1 /s3b/.
2. példa
Próbapapír készítése rejtett vér kimutatására a székletben Scheleicher et Schüll 597 NF-Ind. minőségű szűrőpapírt impregnálunk az alábbi összetételű oldattal, majd az impregnált papirt 50 °C-on szárítjuk.
Az impregnáló oldat összetétele:
A-gvajakonsav, ET cm = 2?0í θθθ nm_nél 120 mg
1-fenil-szemikarbazid 65 mg
Polyviijilpirrolidon K 25 300 mg
Kálium-EDTA-puffer, pH = 5,5 * 10 ml
Aceton 50 ml
Viz ad 100 ml
+ 10 g EDTA + 4,75 KOH 100 ml vízben.
EDTA = etil-én-diamin-tetraecetsav különböző vizsgálandó egyéntől származó széklethez növekvő mennyiségű vért adunk és a mintákat homogenizáljak, majd a székletmintákból mindenkor szabványosított körülmények között azonos mennyiségeket hordunk fel a próbapapirokra. Szárítás után hátoldalukra 11 ml hidrogén-hiperoxid oldatból és 100 ml etil-alkoholból álló elegyből kivett 2-2 cseppet csepegtetünk.
A negatív és pozitiv reakciók százalékarányát a kereskedelemben kapható szokványos próbapapirral kapott eredményekkel szembeállítva az alábbi táblázatban mutatjuk be:
Hozzáadott A találmány szerinti próba .Kereskedelmi termék
vérmennyiség Neg. reakció Póz.reakció Nfeg.reakció Póz. reakció
1% 25 75 80 20
2% 10 90 72 18
5% 8 92 57 43
4% 0 100 50 50
5% 0 100 40 60
6% 0 100 40 60
A táblázat jól mutatja, hogy a gyakorlati kimutatási határ /ez a kimutatandó anyagnak az a koncentrációja, amelynél 100 esetből 90-ben kapunk pozitiv reakciót/ a találmány szerinti próbapapiroknál 2% vér hozzáadásánál van. A kereskedelmi termék esetében viszont gyakorlati kimutatási határ nem adható meg, amit egyébként a gyártó cég által kiadott tájékoztató leírás is megerősít.
Vizes véroldatok esetében l:5000-es hígítástól kezdve mindkét próbapapir egyformán reagál.
3. példa
Próbapapir készítése rejtett vér kimutatására a székletben mg A-gvajakonsavat - E-. a 300,600 nm-nél etil-alkoholban oldunk. 0
Az igy kapott oldattal Whatman Nr. 1'minőségű szűrőpapírt itatunk át. Az 50 °G hőmérsékleten elvégzett szárítás után olyan próbapapirt kapunk, amelynek tulajdonságai gyakorlatilag teljesen megegyeznek a 2. példa kapcsán leírtakkal.
4» Példa
140 mg A-gvajakonsavat /E7'°__ = 240, 600 nm-nél/ és 70 mg» x c ni az alábbi táblázatban felsoroltak közül választott valamilyen
1-artl-szemikarbazidot feloldunk 100 ml etil-alkoholban. Az igy kapott oldattal impregnálunk olyan Whatman Nr. 1 minőségű szűrőpapírt, amelyet előzetesen etiléndiamin-tetraecetsavból és nátrium-hidroxid oldatból készített 5,5-ös pH-ju kiegyenlitőoldattal ölőimpregnáltunk. Az 50 °C hőmérsékleten végzett szárítás után olyan próbapapirokat kapunk, amelyek tulajdonságai gyakorlatilag teljesen megegyeznek a 2. példában ismertetettekkel.
Az 1-aril-szemikarbazidot az alábbi csoportból választjuk;
1-f eni l-szem:i karbazid l-/o-tolil/-szemikarbazid l-/m-tölil/-szemikarbazid l-/o-metoxi-fenil/-szemikarbazid l-/p-me t oxi-f enil/-s ze mi karba zid l-/m-klór-fenil/-szemikarbazid l-/alfa-naft il/-s ze mikarbazid.

Claims (5)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Eljárás A-gvajakonsav előállítására, amelynek peroxi- dázzal és hidrogén-hiperoxiddal végrehajtott reakció után meghatározott fajlagos extinkciója, 600 nm-nél legalább
    200, IR-sávjai; 1600 cm-1 /in/; 1505 cm-1 /v.s./; 1260 cm1 /s;b/; 1115 cm-1 /m/; 1025 cm1 /m/; 1200 cm-1· /s;b/ és R^-érteke 0,45 /toluol/dioxán/jégecet 90:25:10 arányú eleggyel/, azzal jellemezve, hogy termeszetek gvajakgyantát acetonban oldunk, a toluol hozzáadására kivált csapadékot eltávolítjuk, a szürletet szárazra pároljuk, a maradékot n-heptán/etilacetát vagy toluol/aceton oldószerelegyben oldjuk, az oldatot előkezelt, semleges azilikagélből készített oszlopon n-heptán/etil-acetát vagy toluol/aceton rendszer alkalmazásával oszlopkromatográfiásan szétválasztjuk, a kapott Rf = 0,45 értékű /toluol/dioxán/ jégecet = 90:25:10/ frakciókat összegyűjtjük és a bepárolt maradékot xilolból átkristály ősit juk.
  2. 2. Diagnosztikum rejtett vér kimutatására a székletben, amely hidrogén-hiperoxidot és valamilyen kromogént, valamint adott esetben további segédanyagokat, igy egy vagy több ki- . egyenlitőszerü /puffért/* nedvesitőszert, vastagitószert, védokolloidot, komplexképzőszért és stabilizálószert tartalmaz, azzal jellemezve, hogy az kromogénként olyan A-gvajakonsavat tartalmaz, amelynek peroxidázzal és hidrogén-hiperoxiddal végrehajtott reakció után 600 nm-nél meghatározott fajlagos extinkciója, legalább 200.
  3. 3· A 2. igénypont szerinti diagnosztikum kiviteli, alakja, azzal jellemezve, hogy az a hidrogén-hiperoxidon és a kromogé-8180211 nen kívül stabilizátorként egy vagy több Ar-NH-NH-OO-NE^ általános képletű vegyületet is tartalmaz, amely általános képletben az Ar egy - adott esetben 1-4 szénatomos alkil-, alkoxicsoporttal vagy halogénatommal szubsztituált - fenil- vagy naftilgyököt jelent.
  4. 4. Eljárás rejtett vér kimutatására székletben a hidrogén-hiperoxidnak valamilyen kromogénnel, a vér peroxidosan ható alkotói által katalizált reakciójának alkalmazásával és az elszíneződés önmagában ismert módon történő kiértékelésével, azzal jellemezve, hogy kromogénként olyan A-gvajakonsavat alkalmazunk, amelynek a peroxidázzal és hidrogén-hiperoxiddal végrehajtott reakció után 600 nm-nél meghatározott.fajlagos extinkciója, E^cm legalább 200.
  5. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy a hidrogén-hiperoxid és a kromogén mellett stabilizátorként egy vagy több Ar-NH-NH-C0-NHo általános t dképletű vegyületet, amelyben Ar egy - adott esetben 1-4 szénatomos alkil-, alkoxicsoporttal vagy halogénatommal szubsztituált - fenil- vagy naftilgyököt jelent, is alkalmazunk.
HU78BO1710A 1977-04-09 1978-04-07 Process for preparing a-guaiaconic acid and diagnostic composition containing thereof HU180211B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2716061A DE2716061C2 (de) 1977-04-09 1977-04-09 Guajaconsäure A, Verfahren zu ihrer Herstellung und die Verwendung dieser Substanz als diagnostische Mittel

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU180211B true HU180211B (en) 1983-02-28

Family

ID=6006094

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU78BO1710A HU180211B (en) 1977-04-09 1978-04-07 Process for preparing a-guaiaconic acid and diagnostic composition containing thereof

Country Status (18)

Country Link
US (2) US4219336A (hu)
JP (1) JPS588400B2 (hu)
AR (1) AR216788A1 (hu)
AT (1) AT358743B (hu)
BE (1) BE865700A (hu)
BR (1) BR7802179A (hu)
CA (1) CA1115724A (hu)
CH (1) CH636625A5 (hu)
DD (1) DD135768A5 (hu)
DE (1) DE2716061C2 (hu)
FI (1) FI781014A (hu)
FR (1) FR2386556A1 (hu)
GB (1) GB1571362A (hu)
HU (1) HU180211B (hu)
IT (1) IT1095395B (hu)
NL (1) NL7803721A (hu)
SE (1) SE7803890L (hu)
SU (1) SU854274A3 (hu)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS56117798A (en) * 1980-02-21 1981-09-16 Toyo Jozo Co Ltd Kit for measuring lipoid peroxide
US4526869A (en) * 1980-09-24 1985-07-02 Regents Of The University Of Minnesota Method for quantitatively determining the concentration of hemoglobin in a biological sample
US4956300A (en) * 1982-01-05 1990-09-11 Helena Laboratories Corporation Aid for determining the presence of occult blood, method of making the aid, and method of using the aid
ZA829434B (en) * 1982-01-05 1984-05-30 Hematec Corp Home diagnostic aid and method for determining the presence of occult blood for use by the general public
ZA831268B (en) * 1982-04-30 1984-10-31 Hematec Corp Home diagnostic aid and method for determining the presence of occult blood for use by the general public
PH23572A (en) * 1982-05-28 1989-09-11 Smithkline Diagnostics Inc Specimen test slide for occult blood testing
US4725553A (en) * 1983-09-29 1988-02-16 Helena Laboratories Corporation Test composition for detecting occult blood
US4541987A (en) * 1983-09-29 1985-09-17 Helena Laboratories Corporation Test pad for detecting occult blood
US5702913A (en) * 1983-12-21 1997-12-30 Helena Laboratories Corporation Chromgen-reagent test system
US5273888A (en) * 1984-01-16 1993-12-28 Helena Laboratories Corporation Chemical test kit and method for determining the presence of blood in a specimen and for verifying the effectiveness of the chemicals
US4676950A (en) * 1984-02-03 1987-06-30 Foster Research Corporation Indicator and test device for detecting occult blood
US4615982A (en) * 1984-12-11 1986-10-07 Lawrence Paul J Fecal occult blood test
US4818702A (en) * 1986-06-02 1989-04-04 Litmus Concepts, Inc. Fecal occult blood test reagent
US5219554A (en) * 1986-07-03 1993-06-15 Advanced Magnetics, Inc. Hydrated biodegradable superparamagnetic metal oxides
JPS63223096A (ja) * 1987-03-11 1988-09-16 大日本印刷株式会社 精製グアヤク脂ならびにその製造方法
JP2589079B2 (ja) * 1987-03-11 1997-03-12 大日本印刷株式会社 精製グアャク脂の製造方法
US5081040A (en) * 1987-06-29 1992-01-14 Helena Laboratories Corporation Composition and kit for testing for occult blood in human and animal excretions, fluids, or tissue matrixes
JP2660558B2 (ja) * 1988-08-17 1997-10-08 大日本印刷株式会社 精製グアヤク脂およびその製造法
US5182191A (en) * 1988-10-14 1993-01-26 Pacific Biotech, Inc. Occult blood sampling device and assay
US5217874A (en) * 1989-04-04 1993-06-08 Helena Laboratories Corporation Fecal occult blood test product with positive and negative controls
US5196167A (en) * 1989-04-04 1993-03-23 Helena Laboratories Corporation Fecal occult blood test product with positive and negative controls
AU6955394A (en) * 1993-01-11 1994-08-15 Tsumura & Co. Vascularization inhibitor and novel compound
US5447868A (en) * 1993-09-14 1995-09-05 Propper Manufacturing Co. Inc. Method, reagent and kit for the detection of fecal occult blood
US6309887B1 (en) * 1998-01-27 2001-10-30 Flexsite Diagnostics, Inc. Filter paper treatment for improved diagnostic assays
US7109038B2 (en) * 2002-06-13 2006-09-19 The Johns Hopkins University Occult blood detection in biological samples by laser desorption and matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry for biomedical applications
US7195878B2 (en) * 2004-09-30 2007-03-27 Cryo-Genomics Device and method for fecal testing
US9091682B1 (en) 2014-05-01 2015-07-28 Steven M Hacker Tissue specimen bottle with color indicator in lid verifying and confirming presence of human tissue or blood contained in specimen bottle
US11597961B2 (en) 2019-04-22 2023-03-07 Qualitic Biotechnology LLC Rapid colorimetric diagnostic test for C. difficile
US20240268416A1 (en) * 2023-02-02 2024-08-15 Pmi Nutrition, Llc Animal feed additive compositions and methods of use

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2258673A (en) * 1940-02-07 1941-10-14 Nat Oil Prod Co Process for treating fat-soluble vitamin-containing materials
US2345098A (en) * 1941-07-26 1944-03-28 Nat Oil Prod Co Process of saponifying vitamin-containing fatty material
US2529446A (en) * 1948-07-02 1950-11-07 Swift & Co Gum guaiac treatment
DK153334C (da) * 1974-01-09 1988-11-14 Shionogi & Co Diagnostiske praeparater
JPS5263794A (en) * 1975-11-21 1977-05-26 Shionogi Seiyaku Kk Test piece for latent blood
FI52256C (fi) * 1975-12-08 1977-07-11 Osmo Antero Suovaniemi Laite näytteiden ottamista varten näytteiden kuljettamiseksi ja analys oimiseksi.

Also Published As

Publication number Publication date
AR216788A1 (es) 1980-01-31
US4219336A (en) 1980-08-26
CA1115724A (en) 1982-01-05
JPS53127812A (en) 1978-11-08
CH636625A5 (de) 1983-06-15
FI781014A (fi) 1978-10-10
IT1095395B (it) 1985-08-10
SU854274A3 (ru) 1981-08-07
US4297271A (en) 1981-10-27
FR2386556B1 (hu) 1982-11-05
DE2716061A1 (de) 1978-10-19
BR7802179A (pt) 1978-12-19
IT7822063A0 (it) 1978-04-06
FR2386556A1 (fr) 1978-11-03
BE865700A (fr) 1978-10-05
GB1571362A (en) 1980-07-16
DD135768A5 (de) 1979-05-23
JPS588400B2 (ja) 1983-02-15
ATA248678A (de) 1980-02-15
AT358743B (de) 1980-09-25
DE2716061C2 (de) 1982-03-25
SE7803890L (sv) 1978-10-10
NL7803721A (nl) 1978-10-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU180211B (en) Process for preparing a-guaiaconic acid and diagnostic composition containing thereof
EP1224240B1 (en) 8-(anilino)-1-naphthalenesulfonate analogs and their use in analyte detection assays
EP0012957B1 (de) Diagnostisches Mittel zum Nachweis proteolytischer Enzyme sowie als Chromogene hierfür geeignete Indoxyl- bzw. Thioindoxylester, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung zur Herstellung diagnostischer Mittel
DE4015590A1 (de) Testtraeger zur bestimmung von ionen
EP0039880A1 (de) Mittel zum Nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer Enzyme und dafür als Substrate geeignete Phenoxy-Aminosäure- und Phenoxy-Peptidester, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung zur Herstellung der erfindungsgemässen Mittel
DE3412939A1 (de) Substrate fuer hydrolasen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
CN109608474B (zh) 一种检测酪氨酸酶的化合物及其制备方法和应用
EP0007407B1 (de) Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Leukozyten in Körperflüssigkeiten sowie als Chromogene hierfür geeignete Sulfonphthalein-Ester, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung zur Herstellung diagnostischer Mittel zum Nachweis von Leukozyten in Körperflüssigkeiten
DD235648A5 (de) Verfahren zur herstellung der glyside von resorfinderivaten
EP0423632A1 (de) Hydrolase-Substrate
EP0249103A2 (de) Triarly- und Trihetarylmethanderivate als Redoxindikatoren und deren Verwendung
EP0008428A2 (de) Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Leukozyten in Körperflüssigkeiten sowie als Chromogene hierfür geeignete Azofarbstoff-Ester, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung zur Herstellung diagnostischer Mittel zum Nachweis von Leukozyten in Körperflüssigkeiten
CA1041408A (en) Diagnostic agent for sacaharides
US4754025A (en) Glucosamine derivatives and reagent for assaying N-acetyl-β-D-glucosaminidase using the same as substrate
DE3586999T2 (de) Verfahren zur bestimmung von leucinaminopeptidase (lap).
DE3443415A1 (de) Zusammensetzung zur bestimmung von wasserstoffperoxid
EP0210559B1 (de) N-Acyl-dihydroresorufin-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung zur Bestimmung von Wasserstoffperoxid, peroxidatisch wirkenden Verbindungen oder Peroxidase
EP0465998B1 (de) Neue Beta-Galactosidase-Substrate für den CEDIA
EP0354978B1 (en) Purified guaiacum resin and method for making the same
EP0190299A1 (de) NEUE p-PHENYLENDIAMIN-PEPTIDE UND DIESE ENTHALTENDE REAGENZIEN ZUR BESTIMMUNG VON PROTEASEN DES BLUTGERINNUNGSSYSTEMS
GB2095666A (en) N-acetyl- -d-glucosaminides
EP0230985B1 (de) Neue Gamma-Glutamyl-4-azoanilide, Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen sowie deren Verwendung zur Bestimmung von Gamma-Glutamyltransferase
CA2563026C (en) Method for analyzing n-terminal protein adducts
Henry et al. Studies on the Determination of Bile Pigments: III. Standardization of the Determination of Urobilinogen as Urobilinogen-Aldehyde
JP3357446B2 (ja) フェノチアジン系色源体安定化液体組成物