JP2589079B2 - 精製グアャク脂の製造方法 - Google Patents
精製グアャク脂の製造方法Info
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- JP2589079B2 JP2589079B2 JP62056164A JP5616487A JP2589079B2 JP 2589079 B2 JP2589079 B2 JP 2589079B2 JP 62056164 A JP62056164 A JP 62056164A JP 5616487 A JP5616487 A JP 5616487A JP 2589079 B2 JP2589079 B2 JP 2589079B2
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、体液中のブドウ糖ならびに潜血の検出を目
的とする診断薬の呈色指示薬として好適な精製グアヤク
脂の製造方法に関する。
的とする診断薬の呈色指示薬として好適な精製グアヤク
脂の製造方法に関する。
体液中のブドウ糖ならびに潜血の検出を目的とする診
断薬では呈色指示薬としてグアヤク脂を用いている。ブ
ドウ糖或いは潜血を含有する体液と診断薬とが接触する
ことにより、グアヤク脂が酸化を受けて青色に呈色する
ことを利用して、体液中のブドウ糖或いは潜血を半定量
的に検出することが可能である。通常用いられるグアヤ
ク脂は天然グアヤク脂であり、熱帯性樹ユソウ木の心材
より採取されるため、α−グアヤコン酸、及びβ−グア
ヤコン酸，グアイアレチン酸，グアヤク酸，レゼン，ゴ
ム質，精油など有効成分以外に複数の不純物を含有し、
かつ有効成分ならびに不純物の組成は一定でない。
断薬では呈色指示薬としてグアヤク脂を用いている。ブ
ドウ糖或いは潜血を含有する体液と診断薬とが接触する
ことにより、グアヤク脂が酸化を受けて青色に呈色する
ことを利用して、体液中のブドウ糖或いは潜血を半定量
的に検出することが可能である。通常用いられるグアヤ
ク脂は天然グアヤク脂であり、熱帯性樹ユソウ木の心材
より採取されるため、α−グアヤコン酸、及びβ−グア
ヤコン酸，グアイアレチン酸，グアヤク酸，レゼン，ゴ
ム質，精油など有効成分以外に複数の不純物を含有し、
かつ有効成分ならびに不純物の組成は一定でない。
呈色指示薬として天然グアヤク脂を用いた体液中のブ
ドウ糖ならびに潜血の検出を目的とする診断薬では、天
然グアヤク脂に含有される不純物のために診断時の呈色
が不鮮明であること及び診断薬の保存安定性が不良であ
ることが問題となっている。
ドウ糖ならびに潜血の検出を目的とする診断薬では、天
然グアヤク脂に含有される不純物のために診断時の呈色
が不鮮明であること及び診断薬の保存安定性が不良であ
ることが問題となっている。
本発明は、体液中のブドウ糖、ならびに潜血の検出を
目的とする診断薬の呈色指示薬として好適な、不純物を
少なくし、実質的に有効成分のみを含有する精製グアヤ
ク脂の製造方法を提供することを目的とする。また、本
発明においては、カラムを再利用できるものとし、生産
経費の低減を計ることを目的とする。
目的とする診断薬の呈色指示薬として好適な、不純物を
少なくし、実質的に有効成分のみを含有する精製グアヤ
ク脂の製造方法を提供することを目的とする。また、本
発明においては、カラムを再利用できるものとし、生産
経費の低減を計ることを目的とする。
本発明は、天然グアヤク脂をアルキル化珪酸ゲルで低
級アルコールを用いてカラムクロマトグラフィー処理に
より分離して得られ、ペルオキシダーゼ及び過酸化水素
との反応後に測定して600nmにおける比吸光係数▲Ｅ1%
1cm▼が200以上であり、かつRF値0.45（トルエン／ジオ
キサン／氷酢酸＝90/25/10混合物）を有する精製グアヤ
ク脂を得る方法に係る。
級アルコールを用いてカラムクロマトグラフィー処理に
より分離して得られ、ペルオキシダーゼ及び過酸化水素
との反応後に測定して600nmにおける比吸光係数▲Ｅ1%
1cm▼が200以上であり、かつRF値0.45（トルエン／ジオ
キサン／氷酢酸＝90/25/10混合物）を有する精製グアヤ
ク脂を得る方法に係る。
本発明のグアヤク脂は、例えば天然グアヤク脂をアセ
トンに溶解し、トルエンを添加することによって生成し
た沈澱を除去し、濾液を蒸発乾固して得られる粗精製グ
アヤク脂を低級アルコールに溶解する。この溶液をアル
キル化珪酸ゲルを充填したカラムに通して分離し、得ら
れた上記のフラクションを捕集して、捕集した溶液から
分離回収することによって精製グアヤク脂を製造する。
トンに溶解し、トルエンを添加することによって生成し
た沈澱を除去し、濾液を蒸発乾固して得られる粗精製グ
アヤク脂を低級アルコールに溶解する。この溶液をアル
キル化珪酸ゲルを充填したカラムに通して分離し、得ら
れた上記のフラクションを捕集して、捕集した溶液から
分離回収することによって精製グアヤク脂を製造する。
本発明に用いるアルキル化珪酸ゲルとしては、破砕状
および／又は球状シリカゲルの表面のシラノールとアル
キル（またはアリール）クロロシランとの反応で得られ
たものを使用する。具体的にはオクタデシルシラン，オ
クチルシラン，トリメチルシラン等が挙げられる。本発
明のこのような逆相用シリカゲルの具体例としては、ト
リメチルクロロシランで処理したC1シリカゲル，オクチ
ルシランにて処理したC8シリカゲル，オタタデシルシラ
ンにて処理したC18シリカゲル（何れも東京化成工業
（株）製）等が挙げられる。本発明に用いる分離液であ
る低級アルコールとしては、メタノール，エタノール，
及びその混合物が好ましい。
および／又は球状シリカゲルの表面のシラノールとアル
キル（またはアリール）クロロシランとの反応で得られ
たものを使用する。具体的にはオクタデシルシラン，オ
クチルシラン，トリメチルシラン等が挙げられる。本発
明のこのような逆相用シリカゲルの具体例としては、ト
リメチルクロロシランで処理したC1シリカゲル，オクチ
ルシランにて処理したC8シリカゲル，オタタデシルシラ
ンにて処理したC18シリカゲル（何れも東京化成工業
（株）製）等が挙げられる。本発明に用いる分離液であ
る低級アルコールとしては、メタノール，エタノール，
及びその混合物が好ましい。
本発明によって得られる精製グアヤク脂は、体液中の
ブドウ糖，並びに潜血の検出を目的とする検査紙の呈色
指示薬として好適なものである。
ブドウ糖，並びに潜血の検出を目的とする検査紙の呈色
指示薬として好適なものである。
体液検査体は公知の種々の方法によって製造される
が、例えば呈色指示薬の他の糖酸化酵素，ペルオキシダ
ーゼ，湿潤剤，感度調節剤，安定剤,pH緩衝剤，結合剤
及び吸水性粉末等を非水溶剤中に溶解或いは分散してブ
ドウ糖検出用インキ組成物を調製し、基材上に塗布する
ことによって得られる。
が、例えば呈色指示薬の他の糖酸化酵素，ペルオキシダ
ーゼ，湿潤剤，感度調節剤，安定剤,pH緩衝剤，結合剤
及び吸水性粉末等を非水溶剤中に溶解或いは分散してブ
ドウ糖検出用インキ組成物を調製し、基材上に塗布する
ことによって得られる。
体液中のブドウ糖は、グルコースオキシダーゼ等のブ
ドウ糖酸化酵素の作用により、空気中の酸素と反応して
最終的にグルコン酸と過酸化水素に酸化される。生成し
た過酸化水素は、ペルオキシダーゼの作用により発生期
の酸素を産生し、この酸素は直ちにグアヤク脂と反応し
て該指示薬を発生色させる。この発色の程度により、体
液中のブドウ糖の有無並びにその量が半定量的に決定さ
れる。
ドウ糖酸化酵素の作用により、空気中の酸素と反応して
最終的にグルコン酸と過酸化水素に酸化される。生成し
た過酸化水素は、ペルオキシダーゼの作用により発生期
の酸素を産生し、この酸素は直ちにグアヤク脂と反応し
て該指示薬を発生色させる。この発色の程度により、体
液中のブドウ糖の有無並びにその量が半定量的に決定さ
れる。
以下に本発明を実施例によって説明する。
精製グアヤク脂の製造 天然グアヤク脂100gをアセトン150mlに溶解し、撹拌
下にトルエン1.5を滴加し、沈澱物質（約20g）を吸引
濾過した。濾液を真空中で濃縮，乾燥し、得られた残渣
（約70g）にメタノール／エタノール（4:1）混合液100m
lを加え、超音波処理で溶解した。この溶液を、予めメ
タノール／エタノール（4:1）混合液で平衡化したオク
タデシルシラン処理珪酸ゲル（C18シリカゲル，東京化
成工業（株）製）のカラム（直径8cm,高さ70cm）に添加
し、メタノール／エタノール（4:1）混合液で分離，溶
出した。一回100mlづつ分取し、各フラクションについ
て薄層クロマトグラフィーで検査後、所望するフラクシ
ョンを集め、100mlに濃縮した。この溶液をｎ−ヘキサ
ン２に加え再結晶させることにより、精製グアヤク脂
約17gを得た。
下にトルエン1.5を滴加し、沈澱物質（約20g）を吸引
濾過した。濾液を真空中で濃縮，乾燥し、得られた残渣
（約70g）にメタノール／エタノール（4:1）混合液100m
lを加え、超音波処理で溶解した。この溶液を、予めメ
タノール／エタノール（4:1）混合液で平衡化したオク
タデシルシラン処理珪酸ゲル（C18シリカゲル，東京化
成工業（株）製）のカラム（直径8cm,高さ70cm）に添加
し、メタノール／エタノール（4:1）混合液で分離，溶
出した。一回100mlづつ分取し、各フラクションについ
て薄層クロマトグラフィーで検査後、所望するフラクシ
ョンを集め、100mlに濃縮した。この溶液をｎ−ヘキサ
ン２に加え再結晶させることにより、精製グアヤク脂
約17gを得た。
精製グアヤク脂の確認 得られた精製グアヤク脂を珪酸ゲル調製板上にトルエ
ン／ジオキサン／氷酢酸（90/25/10）混合液で展開さ
せ、ペルオキシダーゼ−H2O2水溶液を噴霧することによ
り、青色に呈色させたところ、RF値0.45を得た。
ン／ジオキサン／氷酢酸（90/25/10）混合液で展開さ
せ、ペルオキシダーゼ−H2O2水溶液を噴霧することによ
り、青色に呈色させたところ、RF値0.45を得た。
10％H2O2水溶液2ml,エタノール4ml,西洋わざびペルオ
キシダーゼ50mgを蒸溜水で9.9mlに調製し、得られた精
製グアヤク脂2mgをエタノール20mlに溶解した溶液0.1ml
を加える。速やかに混合した溶液を30秒後に1cmのキュ
ベット中600nmで透過率を測定したところ、比吸光係数
▲Ｅ1% 1cm▼250を得た。
キシダーゼ50mgを蒸溜水で9.9mlに調製し、得られた精
製グアヤク脂2mgをエタノール20mlに溶解した溶液0.1ml
を加える。速やかに混合した溶液を30秒後に1cmのキュ
ベット中600nmで透過率を測定したところ、比吸光係数
▲Ｅ1% 1cm▼250を得た。
ブドウ糖検出用検査体の製造ならびに性能評価 下記組成のブドウ糖検出用インキ組成物をホモミキサ
ーで微細分散させた後、スクリーン印刷により、厚さ30
0μの白色ポリスチレンシートに一辺が5mmの四角形とな
るように印刷した。用いたスクリーン版は80メッシュ，
レジスト及びスクリーン紗の厚さの合計は130μであっ
た。
ーで微細分散させた後、スクリーン印刷により、厚さ30
0μの白色ポリスチレンシートに一辺が5mmの四角形とな
るように印刷した。用いたスクリーン版は80メッシュ，
レジスト及びスクリーン紗の厚さの合計は130μであっ
た。
ブドウ糖検出用インキ組成物 ブドウ糖酸化酵素（東洋紡製;Grade II） 3.6 重量部 ペルオキシダーゼ（東洋紡製;Grade III） 2.4 重量部 精製グアヤク脂 4.8 重量部 ソルビタンモノラウレート（花王石鹸製；商品名、スパ
ン20） 7.2 重量部 Ｌ−アスコルビルステアレート 0.48重量部 クエン酸 2.8 重量部 クエン酸ナトリウム 11.0 重量部 ポリビニルピロリドン（BASF製；商品名，コリドン90）
12.6 重量部 ポリビニルブチラール（積水化学製；商品名，エスレッ
クBX−１） 2.25重量部 セルロース微粉末（旭化成製；商品名，アビセルSF）17
1 重量部 ｎ−アミルアルコール 228 重量部 ブチルセロソルブアセテート 33.5 重量部 得られた印刷物を60℃で40分間乾燥後、スティック状
に裁断してブドウ糖検出用検査体を得た。
ン20） 7.2 重量部 Ｌ−アスコルビルステアレート 0.48重量部 クエン酸 2.8 重量部 クエン酸ナトリウム 11.0 重量部 ポリビニルピロリドン（BASF製；商品名，コリドン90）
12.6 重量部 ポリビニルブチラール（積水化学製；商品名，エスレッ
クBX−１） 2.25重量部 セルロース微粉末（旭化成製；商品名，アビセルSF）17
1 重量部 ｎ−アミルアルコール 228 重量部 ブチルセロソルブアセテート 33.5 重量部 得られた印刷物を60℃で40分間乾燥後、スティック状
に裁断してブドウ糖検出用検査体を得た。
正常尿及び正常尿にβ−Ｄ−グルコースを50mg/dl,10
0mg/dl,250mg/dl,500mg/dl,及び2000mg/dlの濃度になる
ように溶解したものを検体として用い、スティックを浸
漬後直ちに取出して１分間静置し、検査試薬部の色調を
観察した。検査試薬部の呈色は均一且つ鮮明であり、呈
色濃度は検体中のブドウ糖濃度の増加に伴って段階的に
高くなり、上記の範囲内で検体内のブドウ糖濃度を明確
に判別可能であった。呈色した検査体を室温で５分間静
置しても色調の変化は認められなかった。
0mg/dl,250mg/dl,500mg/dl,及び2000mg/dlの濃度になる
ように溶解したものを検体として用い、スティックを浸
漬後直ちに取出して１分間静置し、検査試薬部の色調を
観察した。検査試薬部の呈色は均一且つ鮮明であり、呈
色濃度は検体中のブドウ糖濃度の増加に伴って段階的に
高くなり、上記の範囲内で検体内のブドウ糖濃度を明確
に判別可能であった。呈色した検査体を室温で５分間静
置しても色調の変化は認められなかった。
得られた検査体をガラス容器中に密封し、40℃で12ケ
月間保存した後、上記と同様にして試験を行ったとこ
ろ、検査試薬部の呈色は保存前と同様に均一，鮮明，且
つ安定であり、検体中のブドウ糖濃度も保存前と同様に
明確に判別可能であった。
月間保存した後、上記と同様にして試験を行ったとこ
ろ、検査試薬部の呈色は保存前と同様に均一，鮮明，且
つ安定であり、検体中のブドウ糖濃度も保存前と同様に
明確に判別可能であった。
ブドウ糖検出用検査体の製造ならびに性能評価 実施例に示した精製グアヤク脂のかわりに天然グアヤ
ク脂を用いる以外は、実施例と同様にしてブドウ糖検出
用検査体を得た。
ク脂を用いる以外は、実施例と同様にしてブドウ糖検出
用検査体を得た。
正常尿及び正常尿にβ−Ｄ−グルコースを50mg/dl,10
0mg/dl,250mg/dl,500mg/dl,及び2000mg/dlの濃度になる
ように溶解したものを検体として用い、スティックを浸
漬後直ちに取出して１分間静置し、検査試薬部の色調を
観察した。検査試薬部の呈色は実施例と比較して不鮮明
かつ不均一であった。呈色濃度は検体中のブドウ糖濃度
の増加に伴って段階的に高くなり、上記の範囲内で検体
中のブドウ糖をある程度判別可能であった。また、得ら
れた検査体をガラス容器中に密封し、40℃で６ケ月保存
した後、上記と同様にして試験を行ったところ、保存前
と比較して検査試薬部の呈色は不均一且つ不鮮明とな
り、検体中のブドウ糖濃度の判別も困難であった。
0mg/dl,250mg/dl,500mg/dl,及び2000mg/dlの濃度になる
ように溶解したものを検体として用い、スティックを浸
漬後直ちに取出して１分間静置し、検査試薬部の色調を
観察した。検査試薬部の呈色は実施例と比較して不鮮明
かつ不均一であった。呈色濃度は検体中のブドウ糖濃度
の増加に伴って段階的に高くなり、上記の範囲内で検体
中のブドウ糖をある程度判別可能であった。また、得ら
れた検査体をガラス容器中に密封し、40℃で６ケ月保存
した後、上記と同様にして試験を行ったところ、保存前
と比較して検査試薬部の呈色は不均一且つ不鮮明とな
り、検体中のブドウ糖濃度の判別も困難であった。
本発明によれば、実質的に有効成分のみを含有する精
製グアヤク脂が得られる。呈色指示薬として本発明の製
造方法で得られる精製グアヤク脂を用いた体液中のブド
ウ糖、ならびに潜血の検出を目的とする診断薬では、実
質的に不純物を含有しないために、診断時の呈色が鮮明
であり、かつ診断薬の保存安定性が良好である。
製グアヤク脂が得られる。呈色指示薬として本発明の製
造方法で得られる精製グアヤク脂を用いた体液中のブド
ウ糖、ならびに潜血の検出を目的とする診断薬では、実
質的に不純物を含有しないために、診断時の呈色が鮮明
であり、かつ診断薬の保存安定性が良好である。
本発明においては逆相分配クロマトグラフィーを使用
し、移動相として安価なエタノール，メタノールを使用
し、しかもカラムの再利用が可能であるので経済的に精
製を行うことができる。
し、移動相として安価なエタノール，メタノールを使用
し、しかもカラムの再利用が可能であるので経済的に精
製を行うことができる。
Claims (1)
- 【請求項１】粗精製した天然グアヤク脂を低級アルコー
ルを用いて、アルキル化珪酸ゲルを充填したカラムに通
してカラムクロマトグラフィーにより分離し、RF値0.45
（トルエン／ジオキサン／氷酢酸＝90/25/10混合物）を
有するフラクションを捕集し、かつ捕集した溶液から分
離回収することを特徴とする精製グアヤク脂の製造方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62056164A JP2589079B2 (ja) | 1987-03-11 | 1987-03-11 | 精製グアャク脂の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62056164A JP2589079B2 (ja) | 1987-03-11 | 1987-03-11 | 精製グアャク脂の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63223095A JPS63223095A (ja) | 1988-09-16 |
| JP2589079B2 true JP2589079B2 (ja) | 1997-03-12 |
Family
ID=13019451
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62056164A Expired - Lifetime JP2589079B2 (ja) | 1987-03-11 | 1987-03-11 | 精製グアャク脂の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2589079B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63223096A (ja) * | 1987-03-11 | 1988-09-16 | 大日本印刷株式会社 | 精製グアヤク脂ならびにその製造方法 |
| JP2660558B2 (ja) * | 1988-08-17 | 1997-10-08 | 大日本印刷株式会社 | 精製グアヤク脂およびその製造法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2716061C2 (de) * | 1977-04-09 | 1982-03-25 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Guajaconsäure A, Verfahren zu ihrer Herstellung und die Verwendung dieser Substanz als diagnostische Mittel |
| JPS63223096A (ja) * | 1987-03-11 | 1988-09-16 | 大日本印刷株式会社 | 精製グアヤク脂ならびにその製造方法 |
-
1987
- 1987-03-11 JP JP62056164A patent/JP2589079B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63223095A (ja) | 1988-09-16 |
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