HU176636B

HU176636B - Eljárás N4 acil-1β-D-arabinofuranozil-citozin-foszfát-származékok előállítására

Info

Publication number: HU176636B
Authority: HU
Inventors: Torao Ishida; Minoru Akiyama; Yoshio Sakurai; Shigeru Tsukagoshi
Original assignee: Asahi Chemical Ind
Priority date: 1974-10-15
Filing date: 1975-10-14
Publication date: 1981-04-28
Also published as: JPS5337871B2; JPS5148682A

Description

A találmány tárgya eljárás új, nagy stabilitású, vízoldható, leukémia-ellenes hatóanyagként használható specifikus N⁴-acil-10-D-arabinofuranozií-citozin-5’-foszfátok és bázisokkal alkotott sóik előállítására.

A citozin-arabinozid egyike a leghatásosabb ismert antileukémiás szereknek. Mivel azonban biológiai félideje — elsősorban gyors kiválasztódása és metaholizmusa miatt, — igen rövid, bonyolult adagolási módszerek szükségesek ahhoz, hogy a gyógyszer a betegeknél megfeleló'en hasson. Ezenfelül, minthogy a dezoxi-citidin-dezamináz hatására könynyen átalakul leukémia-ellenes hatást nem mutató uracil-arabinoziddá, a gyógyszer hatástalan marad magas dezamináz-aktivitással rendelkező betegeknél.

A 2,2’anhidrocitozin-arabinozid a dezamináz-enzimmel szemben ellenállóbb citozm-arabinozíd-származék, Míg a vegyületnek magának nincs antileukémiás hatása, a szervezetben fokozatosan antileukémiás hatású citozin-arabinoziddá hidrolizál. A 2,2’-anhidrocitozin-arabinozid kiválasztása azonban olyan gyors, hogy a vegyület nagy része kiválasztódik, mielőtt a hatásos citozin-arabinoziddá átalakulna. Az anhidro-származék biológiai félideje ugyanolyan rövid, mint a citozin-arabinozidé, így egérnél gyógyszerként használva nagy napi mennyiségekben (például 700mg/kg) kell adagolni kielégítő hatás elérése érdekében.

Hatásosabb leukémia ellenes szerek felfedezése céljából korábban különböző vizsgálatokat végeztünk. L—1210 egérleukémiával megfertőzött egerek élettartamát meghosszabítani képes anyagokat sze5 lektáltunk a „Drugs Research + Development Department of the National Cancer Institute of the United States” emberi daganafgátló és leukémiaellenes szerek kiszűrésére kidolgozott módszerével (világszerte végzett vizsgálatok adatai bizonyítják. 10 hogy az L-1210 egérleukémiával szemben hatásos gyógyszerek azok, amelyek a legnagyobb valószínűséggel hatásosan használhatók emberi leukémia ke zelésére) és eredményképpen azt találtuk, hogy a, N⁴-aciI-citozin-arabinozid - ahol az acilcsoport 15 egyenes láncú telített vagy telítetlen alifás, legalább 14 szénatomos acilcsoport — hosszabb biológiai félidővel rendelkezik, mint a citozin-arabinozid és a 2,2’-anhidrocitozin-arabinozid.

A citozin-arabinozid acilszármazéka. melyben az 20 acilcsoport alifás vagy aromás, 12-nél kevesebb szénatomot tartalmazó acilcsoport, közel azonos yagy csak valamivel gyengébb antileukémiás hatású, mint a citozin-arabinozid, de az olyan acilszármazék, ahol az acilcsoport legalább 1.4 szénatomos 25 alifás acilcsoport, sokkal hosszabb biológiai félidővel rendelkezik és nagyobb stabilitást mutat, mint citozin-arabinozid és a 2,2'-anhidrocitozín-arabinozid.

így az acilszármazék egy vagy kétszeri alkalma30 zása jelentősen fokozza az L-1210 leukémiával megfertőzött egerek élettartamát. Mégis a megfelelően oleofil és az L-1210 leukémiával megfertőzött egerekre nézve hatásos N⁴-acil-citozin-arabinozid hátránya, hogy vízben nem oldódik.

Másfelől ismeretesek a citozin-arabmozid foszforsav-észterei és ciklusos foszforsav-észterei. A citozin-arabinozid foszforsav-észtereinek antileukémiás hatása azonban kisebb fokú a citozin-arabinozidénál. A citozm-arabinozid ciklusos foszfoisav-észtereinek vírusölő hatékonysága azonos a citozin-arabinozidéval vagy annál nagyobb is lehet, de az L—1210 egérleukémiával szembeni hatása sokkal gyengébb.

Az N⁴-acil-citozin-arabinozid 5’-foszforsav-észterei is ismertek, melyekben a 4-helyzetű aminocsoport acilcsoportja 1-12 szénatomszámú. Ilyenek a 3’,5’-ciklusos foszforsav-észterek, ahol a 4 helyzetű aminocsoport acilcsoportja 1-8 szénatomós. Mégis az acilszármazék olyan foszforsav-észterei, melyekben az acilcsoport 1-12 szénatómszámú és az acilszármazék olyan ciklusos foszforsav-észterei, melyekben az acilcsoport 1-18 szénatómszámú, nem rendelkeznek antileukémiás hatással, bár az utóbbiak vírusölő hatásúak lehetnek. Ezen felül az acilszármazék ciklusos foszforsav-észtere - összehasonlítva az acilszerármazék foszforsav-észterével - nagymértékben hidrofób és vízben oldhatatlan.

Ezért a találmány tárgya vízoldható, nagy stabilitású antileukémiás hatású szerek és ezek szintetizálásához közbenső termékek előállítása.

Közelebbről, a találmány tárgya vízben jól oldódó, igen stabil, antileukémiás hatású N⁴-acil-l-0-D-arabinofuranozil-citozin-5’- foszfát-származékok előállítása.

Azt találtuk, hogy az 1 általános képletű új N⁴ -acil-l-0-D- arabinofuranozil-citozin-5’-foszfát-származékok és bázisokkal alkotott sóik vízben oldhatók, egereknél nagyfokú antileukémiás hatékonyságot mutatnak, és igen stabilak. Ezen I általános képeletŰ vegyületekben

R 14-22 szénatomszámú alkanoil- vagy alkenoilcsoport vagy arachidoil-csoport.

Az R csoportok közül az oleofil acilcsoportok a legelőnyösebbek antileukémiás hatékonyságuk miatt. Az ilyen nagyfokú antileukémiás aktivitást mutató acilcsoportokra példa a palnútoil-, margaroil-, sztearoil-, nonadekanoil-, arachidoil-, heneikazanoil- és behenoilcsoport. E csoportok közül legelőnyösebb a behenoilcsoport, mivel mérgező hatása igen csekély.

Az I általános képletű vegyületek hatásosak lehetnek vírusokkal vagy szolid (tömör állományú) daganatokkal szemben, és az L-1210 leukémiával megfertőzött egerek életét jelentősen meghosszabbítják.

A találmány szerinti I általános képletű vegyületek vízoldhatóságának fokozása céljából a vegyületeket előnyösen mono- vagy dinátriumsók alakjában adagoljuk.

Az I általános képletű vegyületet úgy állítjuk elő, hogy valamely II általános képletű N⁴-acil-j3D-arabinofuranozil-citozint - ahol R a fenti foszforigtri)kloriddal és/vagy tri(l-4 szénatomos)-alkíl-foszfáttal reagáltatunk (előnyösen 1-10 mól foszfátozó reagens/mól II általános képletű vegyület) előnyösen atmoszférikus nyomáson, 0—30 °C-on, 5 perctől 4 óráig terjedő ideig, primer alifás alkohol és valamely tercier amin jelenlétében.

A kiindulóanyagként használt II általános képletű N⁴-acil-l-/3-D-arabinofuranozil-citozinokat úgy állítjuk elő, hogy az ismert 1-0-D-arabinofuranozil-citozint megfelelő acilezőszerrel reagáltatjuk a 18 482/75 számú japán szabadalmi leírás szerint.

Az 5’-helyzetű hidroxilcsoport szelektív foszfátozását valamely alifás egyértékű alkohol és tercier szerves amin jelenlétében, atmoszférikus nyomáson, 0-30°C-on, 5 perctől 4 óráig hajijuk végre. Alkoholként például metanolt, etanolt, 1-propanolt, propargil-alkoholt, allil-alkoholt, n-butanolt, tercier szerves aminként például piridint, trietil-amint, trimetil-amint, tri-n-propil-amint, tri-n-butil-amint, tri-n-oktil-amint, tripropargil-amint használhatunk. A nyerstermék és a reagensek előnyös aránya a következő:

a nyerstermék: foszfátozószer: tercier szerves amin mólaránya 0,8-1 :2:1:1. Ha az arány eltér a fenti értéktől, a tennék kitermelése csökken. Oldószereket nem feltétlenül használunk, elegendő a foszforil-(tri)klorid, az alkohol és a tercier szerves amin jelenléte.

A foszfátozási reakció hőmérsékletére nincs különösebb kikötés, de általában előnyben részesítjük az alacsonyabb hőmérsékleteket (szobahőmérséklettől 0°C-ig). Bár a foszfátozó rfeagens a reakcióban oldószerként is szolgálhat, mégis különösen előnyös erősen poláris szerves oldószert használnunk. Ilyen szerves oldószer például a piridin, dioxán, acetonitril, aceton, metanol, tetrahidiofurán, stb. Különösen előnyben részesítjük a piridin használatát, mivel ez megköti a reakcióban képződő hidrogén-kloridot.

A foszfátozó reakció lefolyása vékonyrétegkromatográfiával követhető (szilikagél és kloroform) metanol például 1:1 mólarányú elegye). A reakció befejezettnek tekinthető, amikor a kiindulóanyag vékonyrétegkromatográfiával már nem mutatható ki.

A reakció végbemenetele után a foszfátozószert 100—500 mól vízzel (1 mól foszfátozó reagensre számítva) vagy alkohollal, mint metanollal elbontjuk, légköri nyomáson, 0-5 °C-on, 5 perctől 20 óráig. A reakcióban és az elbontáskor képződött hidrogén-kloridot ekvivalens mennyiségű (a képződött hidrogén-kloridra számított mennyiségű) gyenge lúggal, mint nátrium-hidrogén-karbonáttal, kálium-hidrogén-karbonáttal, stb. semlegesíthetjük W· köri nyomáson, 0-5 °C-on, + -5. percig, de a semlegesítés nem mindig szükséges.

A nyers reakciótermék kicsapóctttta foszfátozószer elbontása és - ha a hidrogén-kloridot semlegesíteni kell - a. képződött hidrogénklorid semlegesítése folyamán. Ha a reakciótermék nem csapódik ki, a reakcióelegyhez még vizet adunk, vagy a reakcióelegyet csökkentett nyomáson (0,1-0,5 atm), 25-30 °C-on bepároljuk. A képződött csapadék szűréssel vagy centrifugálással a szokásos módon kinyerhető.

A kapott nyers reakcióterméket oszlopkromatográfiával [szilikagél és 1000 térfogat kloroform/metanol elegy a reakciótermék-súlyegységre vonatkozóan] vagy átkristályosítással [10-20 térfogat dioxán/víz elegy, etanol, stb. a nyerstermék súlyegységére vonatkozóan] tisztíthatjuk.

A reakciótermék elemzését ultraibolya és infravörös abszorpciós spektruma, mágneses magrezonancia spektruma és elemi analízise útján végezzük el. Az ultraibolya abszorpciós spektrum az N⁴-acil-citozin-rész jelenlétét és az infravörös abszorpciós spektrum az N⁴-acil-amid és a foszfát-észter abszorpcióját mutatja ki. Az 5’-foszfátcsoport jelenléte a mágneses magrezonancia spektrum útján mutatható ki annak a ténynek köszönhetően, hogy a kiindulóanyag 5’-metiléncsoportjának mágneses erőtéreltolása mintegy 0,5 ppm-mel alacsonyabb.

A fentiek szerint előállított I általános képletű vegyület foszfátcsoportja bázissal sót képez ami a találmány szerinti vegyületet vízoldhatóvá teszi és ezzel farmakológiai hasznosíthatósága növekszik. Közelebbről az I általános képletű vegyület könynyen átalakítható nem mérgező fémsókká, így nátrium-, kálium-, kalcium- vagy alumíniumsóvá, npm mérgező ammóniumsóvá, vagy nem mérgező szubsztituált ammóniumsókká, mint trialkil-amin, prokain, dibenzil-amin, N-benzil-jS-fenetil-amin, N,N ’-dibenzil-etilén-diamin, dehidroabietil-amin, N-kisszénatomszámú alkil-piperidin, arginin, lizin, kolin stb. sóivá.

Az I általános képletű vegyület nem toxikus sóit úgy állítjuk elő, hogy az I általános képletű vegyületet a fém, ammónium, vagy amin ekvimolekulárís mennyiségű hidrogén-karbonátjával, hidroxidjával vagy savaddíciós sójával reagáltatjuk vizes oldószerben, majd az oldószert eltávolítjuk.

Az I általános képletű vegyület említett fémsói, ammóniumsói és szubsztituált ammóniumsói vízben oldhatók.

így a találmány szerinti I általános képletű vegyület vizes oldatához szükség esetén izotóniás közeget,, fájdalomcsillapító, baktériumölő szert és/vagy gombásodásgátló anyagot adva a találmány szerinti I általános képletű vegyület injiciálásra alkalmas vizes készítményét állíthatjuk elő, amely például intravénás, szubkután, intramuszkuláris, intraperitoneális vagy intramedulláris injekció útján adagolható.

A találmányt részletesebben ismertetjük néhány, a találmány oltalmi körét n«® korlátozó példával. Más megjelölés hiányában a műveleteket légköri nyomáson hajtjuk végre.

1. példa

Jeges hűtés közben, egymás után 0,97 ml piridin,t és 0,49 ml metanolt adunk 2,20 ml foszforil-(tri)klorid 10 ml dioxánnal készült oldatához, majd a fenti hőmérsékleten 3,30 g N⁴-sztearofl-l-0-D-arabimrfuranozil-citozhrt adunk az oldathoz és az elegyít 4 óráig keverjük. A reakciőelegyet keverés közben 6g nátrium-hidrogén-karbonátot tartalmazó 100 ni jeges vízhez adjuk, és a képződött csapadékot centrifugálással (15 perc, 3000 fordulat/perc) tömörítjük. A csapadékot 100 ml vízhez adjuk, az elegyet keverjük és a csapadékot ismét centrifugálással összegyűjtjük. Ezt a műveletet még háromszor megismételjük, a kapott csapadékot leszűrjük, vízzel mossuk és vákuumban megszárítjuk.

⁵ A szilárd maradékot metanolból átkristályosítva

3,01 g N⁴-sztearoil-l-/3-D-arabinofuranozil-citozin-5’-foszfátot kapunk fehér amorf anyag alakjában.

_Q Elemi analízis a C^H^OgNsP képlet alapján:

számított: C =54,99% H =8,21%,

N = 7,13%, talált: C =54,16%, H =8,42%, ₅ N = 7,08%. '

UV abszorpciós spektrum (metanol)

A_max = 248 τημ és 299 τημ .

NMR-spektrum (prridin-d^s): S0,86, 1,0-2,0 j [-(<%)» _s-], 2,61 (-COCH_S), 4,4-5,1 [cukorgyűrű proton (cp)], 6,90 (l’-CH), 7,60 (5-CH),

8,61 (6—CH) ppm'.

Olvadáspont: 215—218 °C-(bomlás), f .

A termék egy . részét (50 mg) £ nü yizés ammó..nta es 10 nff metanol elégychez adjuk,' és 1,68 g iKhriUmiridrogén^karbbnát hozzáadása után az elegyet élénken keverjük, amíg homogén kolloid oldat képződik. Az elegyet liofilizálva 1,14 g fehér szilárd N⁴ -sztearoil-l-j3-D-árbinofuranozil-citozin-5’j -foszfát-mononátriumsót kapunk.

A fenti vegyületet alkálifémsó formájában állíthatjuk elő, ha a fenti eljárásban víz és etanol helyett csak vizet használunk, például 1,10 g N⁴-sztearoil-l-j3-D-arabinofuranozil-citozin-5’-íószfátat _; 200 ml vízben szuszpendálunk és 0,16 g. nátem»-hídrogén-karbonátot adva a szuszpenzióhoz 30 percig 60 °C-on keverjük. Az oldatot leszűrve és liofití¹zálva 118 g fehér, szilárd N⁴-sztearoil-l-Ő-D-arabinofuranozil-citozin-5’- foszfát-mononátriumsót kapunk, r' '

Elemi analízis a C₂7H4₇0gN₃PNa képlet alapján:

számított: C = 52,93%, H = 7,73%,

N = 6,86%, talált: C = 52,24%, H = 7,56%,

N = 6,33%

W abszorpciós spektrum (víz): A_max = 247 és 299 mp .

0,168 g nátrium-hidrogén-karbonát helyett

3,487 g 50%-os, vizes kolinoldatot vagy 0,122 g etanol-amint használva 1,2 g N⁴-sztearoil-í^-D-arabinofuranozil-citozin-monokolin-, illetve 1,15 g •etanol-amin-sót kapunk.

Hasonló módon 1,10 g N⁴-uztearoil-l-/3-D-arabtnofutanozil-citozin- 5’-foszfátot 70 ni víz és 36 ml etanol elegyéfeea szuszpendálunk» majd 0,336 g nátrium-lridrogén-karbonát hozzáadása után az. elegyet 50 °C-on 3 óráig élénken keverve homogén kolloid oldatot kapunk. Az oldatot liofilizálva 1,18 g fehér, szilárd N⁴-sztearoil-l-ú-D-aarabmoftirai3toal-citozta-S’-foszfát-dinátriumsót állítunk

Elemi analízis a C₂TH₄₆O₉N₃PNa₂ képlet alapján:

számított: C =51,18%, H =7,32%,

N = 6,63%, talált: C =51,29%, H =7,11%,

N = 6,40%.

UV abszorpciós spektrum (víz): k_max = 246 és 299 mg . ¹⁰

2. példa

Az 1. példában leírt eljárást követjük, de 15 N⁴-sztearoil-l-j3-D- arabinofuranozil-citozin helyett egyéb N⁴-acil-l-0-D-arabinofuranozil-citozint használunk. A következő 5'-foszfátokat állítjuk elő:

N⁴-Palmitoil-1 -β-D arabinofuranozil-citozin-5’-foszfát. 20

Elemi analízis a C_2SH₄₄0₉N₃P képlet alapján:

számított: C =53,46%, H =7,90%,

N = 7,48%, talált: C =53,22%, H =7,99%, 25

N = 7,39%.

NMR-spektrum(piridin-d^s): Ő0,88(CH₃), 1,0-2,0 [-(CH₂)i₃—I, 2,64 (-COCH₂-), 4,5-5,2 (cp), 7,02 (l’-CH), 7,72 (5-CH), 8,70 (6-CH) ppm. 30 UV abszorpciós spektrum (metanol) X_max=248 és 299 mg .

N⁴ -Margaroii-1 -3-D-arabinofuranozil-citozin-5’-foszfát.

Elemi analízis a C₂ β H_{4 6} O₉ N ₃ P képlet alapján: 35 számított: C =54,25%, H =8,06%,

N = 7,30%, talált: C =54,01%, H =8,11%,

N = 7,18%. 40

NMR-spektrum (piridin-d⁵): δ 0,87 (-CH₃), 1,0-2,0 [-(CH₂)₁₄-]₅ 2,62 (-COCH₂-), 4,3-5,2 (cp), 7,01 (l’-CH), 7,68 (5-CH), 8,68 (6-CH) ppm. 45

UV abszorpciós spektrum (metanol): X_max = 248 és 299 mg.

N⁴-01eoil-l-ű-D-arabinofuranozil-citozin-5’-foszfát.

Elemi analízis a C₂₇H,₆O,N₃P képlet alapján: 50 számított: C =55,18%, H = 7.89%.

N -- 7,15%, talált: C = 54,93%, H = 7,94%,

N = 7,12%. . 55

UV abszorpciós spektrum (metanol): X_max = 248 és 299 mg.

NMR-spektrum (piridin-d⁵ ): δ 0,90 (- CH₃ ), 1,2- 2,5 60 [-(CH₂)i3-j, 2,65 (-COCH₂), 4,2-5,1 (cp), 5,30 (—CH=CH—), 7,01 (l’-CH), 7,68 (5-CH), 8,69 (6-CH) ppm.

N⁴ -Adamantoil-l-í?-D-arabinofuranozil-citozin-5 ’-fosz fát. 65

Elemi analízis a C_2oH₂₈O₉N₃P képlet alapján:

számított: C =49,49%, H =5,81%,

N = 8,66%, talált: C =49,29%, H=5,87%,

N = 8,53%.

NMR-spektrum (piridin-d⁵): δ 1,7-2,0 (adamantoil), 4,2-5,2 (cp), 6,88 (l’-CH), 7,68 (5-CH), 8,71 (6-CH) ppm.

UV abszorpciós spektrum (metanol): X_max = 248 és 301 mg.

N⁴ -Pe n tadekanoil-1 -ú-D-arabinofuranozil-citozin-5’-foszfát.

Molekulasúly: 547.

Elemi analízis a C₂₄H₄₂O₉N₃P képlet alapján:

számított: C = 52,63%, H = 7,68%,

N = 7,68%, talált: C =52,60%, H =7,65%,

N = 7,65%.

UV abszorpciós spektrum: X_max = 248 és 299 mg. N⁴-Behenoil-l-j3-D-arabinofuranozil-cnozin-5’-foszfát Molekulasúly: 645.

Elemi analízis a C_3JH₅₆O₉N₃P képlet alapján:

számított: C = 57,65%, H = 8,68%,

N = 6,51%, talált: C = 57,62%, H = 8,66%

N = 6,54%.

NMR-spektrum (piridin-d⁵): δ 0,90(-CH₃), 1,0-2,0 [-(CH₂)₁₉-], 2,65 (-COCH₂-), 4,4-5,2 (cp), 6,85 (Γ-CH), 7,60 (5-CH), 8,58 (6-CH) ppm.

UV abszorpciós spektrum: X_max = 248 és 299 mg. N⁴ -M i r i s ztoil-1 -β-D-arab inofuranozil -citozin-5 '-foszfát.

Molekulasúly: 533.

Elemi analízis a C₂₃H₄₀C₉N₃P képlet alapján:

számított:

talált:

C =51,76%, N = 7,88%, C =51,32%, N = 7,55%.

H = 7,50%, H =7,68%,

NMR-spektrum (piridin-d⁵): δ 0,88 (-CH₃),

1,0-2,0 |-(CH₂),], 2,68 (-C0CH₂-), 4,2-5,2 (cp), 7,00 (l’-CH), 7,74 (5-CH), 8,70 (6-CH), ppm.

UV abszorpciós spektrum: X_max = 249 és 299 mg.

N ⁴ - El a idoil-1 -f3-D-arabinofuranozil-citozin-5'-foszfát. N⁴ -Linoleoil-1 -d-Darabinofnranozil-citozin-5’-faerfát. Molekulasúly: 585.

Elemi analízis a C₂₇N₄₄O₉N₅P képlet alapján:

számított: C = 55,36%, H = 7,52%,

N = 7,20%, talált: C =55,38%, H=7,52%,

N = 7,15%.

UV abszorpciós spektrum: X_max = 248 és 299 mg.

N⁴ -Lin olenoil-1 -j3-D-arabinofuranozil-citozin-5 ’-foszfat. Molekulasúly: 583.

Elemi analízis a C₂ 7 H₄₂O9N₃P képlet alapján:

számított: C =55,55%, H =7,20%,

N = 7,20%, talált: C = 55,57%, H = 7,21%,

N = 7,20%.

UV abszorpciós spektrum: Á_max = 248 és 299 ιημ. N ⁴ - P al m i 1 ol e o i 1 -1 -f? - D -arabinofuranozil-citozin-5 -foszfát. Molekulasúly: 559.

Elemi analízis a C_2SH₄₂O₉N₃P képlet alapján:

számított: C = 53,64%, H=7,51%,

N = 7,51%, talált: C = 53,65%, H = 7,50%,

N = 7,50%.

UV abszmpciós spektrum: X_m;lx = 248 és 299 πιμ.

N ⁴ - A r a c í i i d ο n oi 1 -1 -0-D-arab inofuranozil-citozin-5 -foszfát. Molekulasúly: 609.

Elemi analízis C₂ 9 H₄₄0₉N₃P képlet alapján:

számított: C =57,12%, H=7.22%,

N = 6,90%, talált: C =57,10% H=7,24%,

N = 6,91%.

UV abszorpciós spektrum· A_max = 248 és 299 mg. 10 3. példa

Oldhatósági próba:

A fenti példákban a termékeket fehér, szilárd 15 alakban kapjuk.

A találmány szerinti N⁴-acil-i-j3-D-arabinofuranozil-citozin- 5’-foszfát monoalkálifém- és dialkálifémsója vízben jobban oldódik, mint a kiindulási N -acil-l-(3-D-arabinofuranozil-citozin, a következő' táblázat tanúsága szerint:

1. táblázat (Vízoldhatóság)

	N⁴-acil-Ara-C	N⁴-acil-5’-PNa	N⁴-adl-5’-PNa₂
N⁴ -Sztearoil	< 0,01 mg/ml	>10 mg/ml	> 50 mg/ml
N⁴-Palmitoil	0,01 mg/ml	> 30 mg/ml	>150 mg/ml
N⁴ -Margaroil	> 0,01 mg/ml	>10 mg/ml	> 50 mg/ml
N⁴-Montanoil	0,01 mg/ml	1 mg/ml	> 5 mg/ml
N⁴-Oleoil	0,05 mg/ml	> 50 mg/ml	>250 mg/ml
N⁴-Adamantoil	0,01 mg/ml	2 mg/ml	> 10 mg/ml

Az 1. táblázatban -Ara-C jelentése ,,-l-/?-D-arabinofuranozil-citozin” és -5’-PNa₂ jelentése „-1-/3-D-arabinofuranozil-citozin-5’-foszfát-mononátriumsó”, illetve „-l-0-D-arabinofuranozil-citozin-5’-foszfát-di- 45 nátriumsó”.

Mint a fenti táblázatból látható, a montanoilszármazék és az adamantoilszármazék foszforsav-észtere rosszabbul oldódik vízben, mint a 14—22 szénato- 50 mos acilszármazékok foszforsav-észterei.

4. példa

Biológiai próba:

Az új vegyületek, azaz a találmány szerint előállított N⁴ -acil-l-0-D-arabinofuranozil-citozin-foszfát-mononátriumsók daganatellenes hatásának kipróbá- 60 lása céljából CDF-1 törzsű hím egerek több csoportját (1 csoport.= 3 egér) intraperitoneálisan L—1210 leukémiával oltunk be [100 000 sejt egerenként] és a beoltás után 2 nap és 6 nap múlva a vizsgált vegyületet fiziológiás konyhasó-oldatban old- 65 va intraperitoneális úton beadjuk az egereknek 100, 200 vagy 400 mg/kg mennyiségben, összehasonlításképpen L—1210 leukémiával megfertőzött egereket tesztanyagot nem tartalmazó fiziológiás konyhasó-oldattal is kezelünk.

A vizsgált anyag daganatellenes hatását a túlélési ráta, a T/C (%) hányados alapján állapítjuk meg (T = „treated” vagyis kezelt, C = „controll” vagyis kezeletlen állat), azaz a tesztanyaggal kezelt csoportok átlagos túlélési idejének 100-szorosát elosztjuk a tesztanyaggal nem kezelt kontroll csoport átlagos túlélési idejével.

A fenti biológiai próbát a következő anyagokkal is végrehajtjuk:

Ι-β-D-arabinofuranozil-citozin, l-B-D-arabinofuianozil-citozin-5’-foszfát,

N⁴-kis szénatomszámú acil-l-^-D-arabinofuranozil-citozin (ahol a kis szénatoinszámú acilcsoport 2—12 szénatomos egyenes láncú zsírsavból származó acilcsoport),

N⁴-kis szénatomszámú acil-l-0-D-arabinofuranozIl-citozin-5’-foszfát-mononátriumsó (ahol a kis szén5 atomszámú acilcsoport 2-12 szénatomos egyenes láncú zsírsavból származó acilcsoport),

N⁴-nagy szénatomszSmú acil-l-^-D-arabinofuranozil-citozin (ahol a nagy szénatomszámú acilcsoport legalább 14 szénatomos egyenes láncú zsírsavból származó acilcsoport).

Az eredményeket a következő táblázat ismerteti:

2. táblázat

(N⁴-acilcsop.)	N⁴-acü-Ara-C-foszfát	N⁴-acil-5’-PNa
100 (mg/kg)	T/C (%) 100 (mg/kg)	100 (mg/kg)	100 (mg/kg)	T/C (%) 100 (mg/kg)	100 (mg/kg)
Kis szénatomszámú adl:
Acetil	125	125	125	101	99	99
Propionil	131	131	135	99	100	101
Butiril	131	131	139	105	102	100
Valeril	133	171	191	101	99	101
Kaprod	125	133	150	103	105	101
Kaprilil	123	127	163	103	101	99
Kapni	159	188	>284	103	102	96
Lauroil	177	272	>296	110	115	115
Nagy szénatomszámú acil:
Mirisztoil	206	127	90	>219	>261	93
Bentadekanoil	302	287	91	>302	>287	86
Palmitoil	>346	83	78	>349	>342	98
Margaroil	>397	188	99	> 395	>382	101
Sztearoil	>274	123	111	>363	> 338	104
NonadekanoiI	382	216	134	385	232	102
Arachidoil	313	128	105	320	130	106
Behenoil	313	260	256	316	280	270
Oleoil	261	135	94	270	156	103
Linoleoil	268	140	112	275	145	120
Arachidonoil	269	137	114	274	148	115
Ara-C	127	136	164	—	-
Ara-C-5’-foszfát	-	-	-	119	131	143
A 2. táblázatban	Ara-C jelentése	β-D-arabino-	1 -0-D-arabinofuranozil-citozin-5 ’-foszfát.	N⁴-acil-Ara-

furanozil-citozin, és Ara—C-5’-foszfát jelentése 65 C jelentése N⁴-acil-l-/3-D-arabinofuranozil-citozin és

N⁴-acil-Ara-C-5’-PNa jelentése N⁴-acil-1-0-D-arabinofuranozil-citozin-5’- foszfát-mononátriumsó.

A fenti táblázatban bemutatott eredményekből a következő következtetések vonhatók le:

1. A találmány szerinti N⁴ -nagyszénatomszámú acil-1 -/3-D-arabinofuranozil-citozin-5 foszfát-mononátriumsók (ahol a nagyszénatomszámú acilcsoport legalább 14 szénatomos, egyenes láncú zsírsavból származó acilcsoport) leukémia-ellenes hatás azonos vagy nagyobb a megfelelő N⁴-nagyszénatomszámú acil-1 -/3-D-arabinofuranozil-citozinokénál.

2. Az 59709/73 számú japán szabadalmi leírásban foglaltak értelmében, az N⁴-kisszénatomszámú acil-1 -β-D-arabinofuranozil-citozinok leukémiaellenes hatása gyengébb az N⁴-nagyszénatomszámú acil-1^3-D-arabinofuranozil-citozinokénál, de az N⁴-kisszénatomszámú, acil-1 -β -D-arabinofuranozil-5 ’-foszfát-mononátriumsók, melyek az N⁴-kisszénatomszámú acil-l-ő-D-arabinofuranozil-citozinok 5’-foszfát-származékai leukémia ellenes hatása gyengébb a megfelelő N⁴-kisszénatomszámú acil-l-/?-D-arabinofuranozil-citozinokénál.

3. Az l-j3-D-arabinofuranozil-5’-foszfát leukémia ellenes hatása gyengébb az Ι-β-D-arabinofuranozil-citozinénál.

4. Az N⁴-sztearoil-l-/3-D-arabinofuranozil-citozin foszfátszármazékai közül az N⁴-sztearoil-l-/3-D-arabinofuranozil-citozin-5’-foszfát leukémia ellenes hatása a legerősebb.

Az N⁴-nagyszénatomszámú acil-1-/3-D-arabinofuranozil-citozin-5’-foszfátok kiváló leukémia ellenes hatása teljesen váratlan volt.

Mint említettük, az N⁴-nagyszénatomszámú acil5 -1-0-D-arabinofuranozil-citozinok vizoldható származékait sikerült előállítanunk, amelyek az L-1210 egérleukémiával szemben kitűnő antileukémiás hatást fejtenek ki.

Bár a találmányt részletesen, specifikus kivitelű li formáira hivatkozva írtuk le, a szakember előtt nyilvánvaló, hogy benne különböző változtatások és módosítások eszközölhetők a találmány szellemétől és oltalmi körétől való eltérés nélkül.

Claims

¹⁵ Szabadalmi igénypont:

Eljárás I általános képletű N⁴-acil-l-/3-D-arabinofuranozil-citozin- 5’-foszfát-származékok és ezek bázisokkal alkotott nemtoxikus sóinak előállítására,

20 melyekben

R 14—22 szénatomszámú alkanoil- vagy alkenoilcsoport vagy arachidoil-csoport, azzal jellemezve, hogy valamely II általános képletű 25 N⁴-acil-l-/J-D-arabinofuranozil-citozint - ahol R jelentése a fenti - foszforil-(tri)-kloriddal és/vagy valamely tri-(l— 4 szénatomosj-alkilfoszfáttal reagáltatunk, primer alifás alkohol és valamely tercier amin jelenlétében, és kívánt esetben egy kelet30 kezeit szabad vegyületet valamely bázissal reagáltatunk.